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一種從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法

文檔序號:10488463閱讀:515來源:國知局
一種從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法,屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明中分離純化甜蕎殼所含的黃酮物質(zhì)的主要工藝過程為:樣品預(yù)處理、甜蕎殼總黃酮的提取、大孔樹脂對甜蕎殼黃酮的粗分離、聚酰胺樹脂以及Sephadex LH?20葡聚糖凝膠對甜蕎殼黃酮的進(jìn)一步純化等過程得到的六種黃酮單體物質(zhì),即牡荊素、異牡荊素、金絲桃苷、葒草素、異葒草素以及蘆丁。本發(fā)明工藝以甜蕎殼這種農(nóng)業(yè)副產(chǎn)品為原料,分離純化得到六種富含藥用價(jià)值的黃酮單體物質(zhì),純度可達(dá)99.5%,大大提高了甜蕎麥這類農(nóng)產(chǎn)品的綜合利用率。
【專利說明】
_種從甜蕎殼中提取分禹黃酮單體物質(zhì)的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蕎麥又名三角麥、烏麥,屬于寥科雙子葉植物,適合在低溫環(huán)境下生長,起源于我國,廣泛種植于亞洲,中歐,北美等地。蕎麥主要分為甜蕎和苦蕎兩個(gè)種類,甜蕎已經(jīng)作為人們餐桌上食物的重要組成部分,長期食用可為人們的身體健康帶來益處。收獲的甜蕎籽粒一般通過機(jī)械分離可成殼(17-20% )、麩(10-24% )和粉(55-70% )三部分,我們平時(shí)食用的大部分是甜蕎的粉,而甜蕎殼作為蕎麥加工的副產(chǎn)物,除部分被埋入土壤用作肥料,或用來制作枕頭芯外,大部分被作為加工廢料棄去。研究發(fā)現(xiàn),甜蕎殼中含有豐富的黃酮類物質(zhì),若能充分利用甜蕎殼這一副產(chǎn)品,將會(huì)大大減少資源浪費(fèi),為牡荊素、異牡荊素、金絲桃苷、葒草素、異葒草素以及蘆丁這六種物質(zhì)的獲取提供新的途徑。
[0003]牡荊素、異牡荊素、金絲桃苷、葒草素、異葒草素以及蘆丁是常見的具有較強(qiáng)生理活性功能的黃酮類化合物。牡荊素和異牡荊素均表現(xiàn)出較強(qiáng)的藥用功能,早前的研究發(fā)現(xiàn)牡荊素具有很強(qiáng)的降血壓和抗炎功能,在隨后的研究中又逐步發(fā)現(xiàn)牡荊素對心肌缺氧和再養(yǎng)合損傷方面均有保護(hù)作用,對潰瘍性結(jié)腸炎也表現(xiàn)出很好的治療作用;據(jù)報(bào)道,葒草素和異葒草素具有清熱解毒、清除DPPH自由基的作用,亦具有抗凝血和抗菌、抗甲狀腺的作用;金絲桃苷除具有防止細(xì)胞、皮質(zhì)神經(jīng)元損傷和人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV-304氧化損傷等作用外,也具有非常強(qiáng)的清除氧化自由基的能力,目前已應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域。
[0004]目前,我國國內(nèi)對于提取蕎麥中所含活性物質(zhì)的研究應(yīng)用,一方面,大都是針對苦蕎麥而言;另一方面,所提取的活性物質(zhì)也大都為蘆丁或總黃酮混合物。對于蕎麥殼,尤其是甜蕎殼中活性物質(zhì)提取的研究應(yīng)用還處于空白階段,本發(fā)明工藝具有廣闊的市場前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法,以農(nóng)作物甜蕎麥的副產(chǎn)品甜蕎殼為原料,通過石油醚去油處理后,采用丙酮溶解蒸干,甲醇再溶解的方法得到總黃酮提取物,再經(jīng)大孔樹脂粗分離,聚酰胺樹脂梯度洗脫,加上紫外檢測器檢查觀察,進(jìn)一步純化的方法,獲得了純度較高的黃酮單體物質(zhì),以解決上述現(xiàn)有技術(shù)不足的問題。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0007]本發(fā)明中一種從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法,具體包括如下步驟:
[0008](I)樣品預(yù)處理:將甜蕎殼在粉碎機(jī)中粉碎5-lOs,過80目篩,已過篩的部分以石油醚(40?60°C)為溶劑,用索氏提油裝置經(jīng)Sh抽提將甜蕎殼粉末脫油,并在室溫下晾干除去溶劑后放入冰箱備用;
[0009](2)總黃酮的提取:取上述除油甜蕎殼,以丙酮按料液比1:15,在25°C條件下震蕩提取2h,重復(fù)提取兩次,抽濾,合并上清液,得到甜蕎殼黃酮類物質(zhì)粗提取液,濃縮待用;
[0010](3)黃酮的粗分離:將大孔樹脂裝柱,然后將甜蕎殼黃酮類物質(zhì)粗提取液用大孔樹脂進(jìn)行吸附后,依次用水、甲醇和丙酮作為洗脫劑,使用恒流栗以0.8mL/min進(jìn)行洗脫,收集甜蕎殼粗黃酮分離餾分,濃縮待用;
[0011](4)純化:
[0012]A:將聚酰胺樹脂裝柱,然后將上述甜蕎殼粗黃酮分離餾分濃縮液用聚酰胺樹脂吸附后,依次用水和不同濃度梯度的甲醇溶液作為洗脫劑進(jìn)行洗脫,收集得到牡荊素、異牡荊素和金絲桃苷三種目標(biāo)洗脫餾分,同時(shí)收集含有蘆丁、葒草素以及蘆丁、異葒草素餾分并濃縮;
[0013]B:將Sephadex LH-20葡聚糖凝膠裝柱,然后將上述蘆丁、異葒草素液濃縮上樣于葡聚糖凝膠柱中,依次用不同濃度梯度甲醇進(jìn)行洗脫,洗脫速度為0.6mL/min,收集蘆丁、葒草素兩種目標(biāo)洗脫餾分;
[0014]C:將Sephadex LH-20葡萄糖凝膠重新裝柱,然后將上述異蘆丁、葒草素濃縮液上樣于葡聚糖凝膠柱中,依次用不同濃度梯度甲醇進(jìn)行洗脫,洗脫速度為0.6mL/min,收集蘆丁、異葒草素兩種目標(biāo)洗脫餾分;
[0015](5)將含有牡荊素、異牡荊素、金絲桃苷、葒草素、異葒草素以及蘆丁的六種餾分分別干燥后即得到六種黃酮單體。
[0016]優(yōu)選地,步驟(3)所述洗脫劑對應(yīng)量分別為:水2倍柱體積,60%甲醇2.5倍柱體積,70%丙酮2.5倍柱體積。
[0017]優(yōu)選地,步驟(3)所述的收集甜蕎殼粗黃酮分離餾分是指棄去前2.5倍柱體積的流出液以及后1.5倍柱體積流出液的中間部分。
[0018]優(yōu)選地,步驟(4)所述的A中水及不同濃度梯度的甲醇對應(yīng)量為:水1.5倍柱體積,1 %甲醇3.5倍柱體積,30 %甲醇3.5柱體積,50 %甲醇4倍柱體積,60 %甲醇3.5倍柱體積,80 %甲醇4.5倍柱體積,95 %甲醇2.5倍柱體積。
[0019]優(yōu)選地,步驟(4)所述的A中三種目標(biāo)洗脫餾分別指:異牡荊素餾分:60%甲醇洗脫時(shí),棄去前2.5倍柱體積流出液后,流出的I倍柱體積流出液;牡荊素餾分:80%甲醇洗脫時(shí),棄去前0.35倍柱體積流出液后,流出的0.3倍柱體積流出液;金絲桃苷餾分:80 %甲醇洗脫時(shí)的最后0.8倍柱體積流出液,以及95 %甲醇洗脫時(shí)前0.3倍柱體積流出液。
[0020]優(yōu)選地,步驟(4)所述的A中含有葒草素、蘆丁以及異葒草素、蘆丁餾分指:80%甲醇洗脫時(shí),收集完牡荊素餾分后流出的I倍柱體積流出液為異葒草素、蘆丁餾分餾分,之后再流出的1.5倍柱體積流出液為葒草素、蘆丁餾分。
[0021]優(yōu)選地,步驟(4)所述B中不同濃度梯度甲醇分別指:10%甲醇9倍柱體積,30%甲醇3.5倍柱體積。
[0022]優(yōu)選地,步驟(4)所述B中蘆丁、異葒草素兩種目標(biāo)洗脫餾分分別指:蘆丁餾分:10%甲醇洗脫時(shí),前5.5倍柱體積流出液;異葒草素餾分:30%甲醇洗脫時(shí),棄去前2倍柱體積流出液后,流出的1.5倍柱體積流出液。
[0023]優(yōu)選地,步驟(4)所述C中不同濃度梯度甲醇分別指:10%甲醇5.5倍柱體積,30%甲醇7倍柱體積。
[0024]優(yōu)選地,步驟(4)所述C中蘆丁、葒草素兩種目標(biāo)洗脫餾分分別指:蘆丁餾分:10%甲醇洗脫時(shí)的所有流出液以及30%甲醇洗脫時(shí)前5倍柱體積流出液;葒草素餾分:30%甲醇洗脫時(shí),除去蘆丁餾分流出液外剩下的2倍流出液。
[0025]本發(fā)明的有益效果在于,本發(fā)明工藝以甜蕎殼這種農(nóng)業(yè)副產(chǎn)品為原料,分離純化得到六種富含藥用價(jià)值的黃酮單體物質(zhì),純度可達(dá)99.5%,大大提高了甜蕎麥這類農(nóng)產(chǎn)品的綜合利用率。
【附圖說明】
[0026]附圖1為本發(fā)明工藝的流程圖;
[0027]附圖2為牡荊素餾分鑒定的HPLC圖;
[0028]附圖3為異牡荊素餾分鑒定的HPLC圖;
[0029]附圖4為金絲桃苷餾分鑒定的HPLC圖;
[0030]附圖5為葒草素餾分鑒定的HPLC圖;
[0031 ]附圖6為異葒草素餾分鑒定的HPLC圖;
[0032]附圖7為蘆丁餾分鑒定的HPLC圖;
[0033]附圖8為鑒定出的牡荊素一級、二級質(zhì)譜圖及對應(yīng)結(jié)構(gòu)式;
[0034]附圖9為鑒定出的牡荊素對應(yīng)的1HNMR;
[0035]附圖10為鑒定出的異牡荊素一級、二級質(zhì)譜圖及對應(yīng)結(jié)構(gòu)式;
[0036]附圖11為鑒定出的異牡荊素對應(yīng)的1HNMR;
[0037]附圖12為鑒定出的金絲桃苷一級、二級質(zhì)譜圖及對應(yīng)結(jié)構(gòu)式;
[0038]附圖13為鑒定出的金絲桃苷對應(yīng)的1HNMR;
[0039]附圖14為鑒定出的葒草素一級、二級質(zhì)譜圖及對應(yīng)結(jié)構(gòu)式;
[0040]附圖15為鑒定出的葒草素對應(yīng)的1HNMR;
[0041]附圖16為鑒定出的異葒草素一級、二級質(zhì)譜圖及對應(yīng)結(jié)構(gòu)式;
[0042]附圖17為鑒定出的異葒草素對應(yīng)的1HNMR;
[0043]附圖18為鑒定出的蘆丁一級、二級質(zhì)譜圖及對應(yīng)結(jié)構(gòu)式。
【具體實(shí)施方式】
[0044]結(jié)合以下具體實(shí)例對本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述,所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明,并非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0045]本發(fā)明實(shí)施例中采用的甜芥麥殼原料購自內(nèi)蒙古。
[0046]實(shí)施例1:
[0047](I)樣品預(yù)處理:將甜蕎殼在粉碎機(jī)中粉碎5-lOs,過80目篩,已過篩的部分以石油醚(40?60°C)為溶劑,用索氏提油裝置經(jīng)Sh抽提將甜蕎殼粉末脫油,并在室溫下晾干除去溶劑后放入冰箱備用。
[0048](2)總黃酮提取:取10g除油甜蕎殼,用70 %的丙酮/水(V/V = 70/30),按料液比1:15,在25°C條件下震蕩提取2h,重復(fù)提取兩次,抽濾,合并上清液,得到甜蕎黃酮類物質(zhì)粗提取液,濃縮待用。
[0049](3)黃酮粗分離:取300cm3大孔樹脂裝柱好后,打開活塞使柱中液面下降至接近大孔樹脂最上端,將甜蕎殼黃酮粗提液緩慢加入大孔樹脂層析柱中,使大孔樹脂對黃酮物質(zhì)進(jìn)行吸附,吸附完畢后,將液面重新加到高于大孔樹脂7cm左右。分別用水600mL、60%甲醇750mL和70 %丙酮750mL做為洗脫劑,使用恒流栗以0.8mL/min進(jìn)行洗脫,收集60%甲醇洗脫的150-750ml流出液(棄去前600ml水和60%甲醇的流出液)以及70%丙酮洗脫的0-300ml洗脫液(棄去后70 %丙酮的450ml的流出液),合并濃縮。
[0050](4)純化:
[0051]A:將聚酰胺樹脂裝柱,然后將上述甜蕎殼粗黃酮分離餾分濃縮液用聚酰胺樹脂吸附后,分別用450mL水,1050mL 10% 甲醇,1050mL 30% 甲醇,1200mL 50% 甲醇,1050mL60%甲醇,1350mL 80%甲醇和750mL 95%甲醇進(jìn)行洗脫。收集60%甲醇洗脫時(shí)的750-1050mL流出液(后300ml的流出液)為異牡荊素餾分;收集80 %甲醇洗脫時(shí)的105_195mL流出液為牡荊素餾分;收集80%甲醇洗脫時(shí)的195-495ml流出液為蘆丁、異葒草素餾分;收集80 %甲醇洗脫時(shí)的495-945ml流出液為蘆丁、葒草素餾分;收集80 %甲醇洗脫時(shí)的1110-1350mL流出液以及95%甲醇洗脫時(shí)的0-90mL流出液為金絲桃苷餾分。將蘆丁、異葒草素餾分和蘆丁、葒草素餾分濃縮待用。
[0052]B:將Sephadex LH-20葡聚糖凝膠裝柱,然后將上述蘆丁、異葒草素液濃縮上樣于葡聚糖凝膠柱中,依次用2700ml 10%甲醇、1050ml 30%甲醇進(jìn)行洗脫,洗脫速度為0.6mL/min,收集10 %甲醇洗脫時(shí)的0-1650ml流出液為蘆丁餾分,收集30 %甲醇洗脫時(shí)600_1050ml流出液為異葒草素餾分。
[0053]Cd^Sephadex LH-20葡萄糖凝膠重新裝柱,然后將上述異蘆丁、葒草素濃縮液上樣于葡聚糖凝膠柱中,依次用1650ml 10%甲醇、2100ml30%甲醇進(jìn)行洗脫,洗脫速度為
0.6mL/min,收集10 %甲醇洗脫時(shí)所有流出液以及30%甲醇洗脫時(shí)的0_1500ml為蘆丁餾分,收集30 %甲醇洗脫時(shí)的1500-2100ml流出液為葒草素餾分。
[0054](5)將含有牡荊素、異牡荊素、金絲桃苷、葒草素、異葒草素以及蘆丁的六種餾分分別干燥后即得到六種黃酮單體。
[0055]如圖1為本發(fā)明工藝的流程圖,圖2至圖7分別為本實(shí)例中收集到的六種黃酮單體餾分的HPLC圖,圖8至圖18為部分單體的一級、二級質(zhì)譜圖、對應(yīng)結(jié)構(gòu)式及1H NMR譜。其中,由圖2中可看出,經(jīng)過提純的牡荊素經(jīng)HPLC在320nm和280nm下檢測均僅含有一個(gè)物質(zhì),根據(jù)該峰所對應(yīng)的負(fù)離子模式下的質(zhì)譜、二級質(zhì)譜碎片峰(圖8)及1H NMR(圖9)解析可知,該物質(zhì)為牡荊素;由圖3中可看出,在在320nm和280nm下經(jīng)過提純的經(jīng)過提純的異牡荊素經(jīng)HPLC檢測僅僅含有一個(gè)物質(zhì),經(jīng)質(zhì)譜、二級質(zhì)譜(圖10)及其1H匪R(圖11)檢測可確認(rèn)其結(jié)構(gòu)為異牡荊素;由圖4中可看出金絲桃苷經(jīng)HPLC檢測僅含有一個(gè)物質(zhì),其對應(yīng)的質(zhì)譜(圖12)及其1H匪R(圖13)可對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確認(rèn);由圖5中可看出,經(jīng)過提純的葒草素經(jīng)HPLC檢測僅僅含有一個(gè)物質(zhì),由其對應(yīng)的質(zhì)譜(圖14)及1HNMR(圖15)可確認(rèn)其為葒草素;由圖6中可看出,經(jīng)過提純的異葒草素經(jīng)HPLC檢測僅僅含有一個(gè)物質(zhì),由其對應(yīng)的質(zhì)譜(圖16)及1HNMR(圖17)可確認(rèn)其為異葒草素即異葒草素;由圖7可看出,經(jīng)過提純的蘆丁僅含有微量雜質(zhì),主要物質(zhì)峰為蘆丁。本實(shí)例分離純化得到六種富含藥用價(jià)值的黃酮單體物質(zhì),每種單體純度可達(dá)99.5 %,大大提高了甜蕎麥這類農(nóng)產(chǎn)品的綜合利用率。
[0056]實(shí)施例2:
[0057](I)樣品預(yù)處理:將甜蕎殼在粉碎機(jī)中粉碎5-lOs,過80目篩,已過篩的部分以石油醚(40?60°C)為溶劑,用索氏提油裝置經(jīng)Sh抽提將甜蕎殼粉末脫油,并在室溫下晾干除去溶劑后放入冰箱備用。
[0058](2)總黃酮提取:取200g除油甜蕎殼,用70 %的丙酮/水(V/V = 70/30),按料液比1:15,在25°C條件下震蕩提取2h,重復(fù)提取兩次,抽濾,合并上清液,得到甜蕎黃酮類物質(zhì)粗提取液,濃縮待用。
[0059](3)黃酮粗分離:取600m3大孔樹脂裝柱好后,打開活塞使柱中液面下降至接近大孔樹脂最上端,將甜蕎殼黃酮粗提液緩慢加入大孔樹脂層析柱中,使大孔樹脂對黃酮物質(zhì)進(jìn)行吸附,吸附完畢后,將液面重新加到高于大孔樹脂7cm左右。分別用水1200mL、60%甲醇1500mL和70%丙酮1500mL做為洗脫劑,使用恒流栗以0.8mL/min進(jìn)行洗脫,收集60%甲醇洗脫的300-1500ml流出液以及70 %丙酮洗脫的0_600ml洗脫液,合并濃縮。
[0060](4)純化:
[0061]A:將聚酰胺樹脂裝柱,然后將上述甜蕎殼粗黃酮分離餾分濃縮液用聚酰胺樹脂吸附后,分別用 900mL 水,2100mL 10% 甲醇,2100mL 30% 甲醇,2400mL 50% 甲醇,2100mL60 %甲醇,2700mL 80 %甲醇和1500mL 95 %甲醇進(jìn)行洗脫。收集60 %甲醇洗脫時(shí)的1500-2100mL流出液為異牡荊素餾分;收集80%甲醇洗脫時(shí)的210_390mL流出液為牡荊素餾分;收集80 %甲醇洗脫時(shí)的390-990ml流出液為蘆丁、異葒草素餾分;收集80 %甲醇洗脫時(shí)的990-1890ml流出液為蘆丁、葒草素餾分;收集80%甲醇洗脫時(shí)的2220-2700mL流出液以及95%甲醇洗脫時(shí)的O-1SOmL流出液為金絲桃苷餾分。將蘆丁、異葒草素餾分和蘆丁、葒草素餾分濃縮待用。
[0062]B:將Sephadex LH-20葡聚糖凝膠裝柱,然后將上述蘆丁、異葒草素液濃縮上樣于葡聚糖凝膠柱中,依次用5400ml 10 %甲醇、2100ml 30 %甲醇進(jìn)行洗脫,洗脫速度為0.6mL/min,收集10%甲醇洗脫時(shí)的0-3300ml流出液為蘆丁餾分,收集30%甲醇洗脫時(shí)1200-2100ml流出液為異葒草素餾分。
[0063]Cd^Sephadex LH-20葡萄糖凝膠重新裝柱,然后將上述異蘆丁、葒草素濃縮液上樣于葡聚糖凝膠柱中,依次用3300ml 10%甲醇、4200ml30%甲醇進(jìn)行洗脫,洗脫速度為
0.6mL/min,收集10 %甲醇洗脫時(shí)所有流出液以及30%甲醇洗脫時(shí)的0_3000ml為蘆丁餾分,收集30 %甲醇洗脫時(shí)的3000-4200ml流出液為葒草素餾分。
[0064](5)將含有牡荊素、異牡荊素、金絲桃苷、葒草素、異葒草素以及蘆丁的六種餾分分別干燥后即得到六種黃酮單體。
[0065]實(shí)施例3:
[0066](I)樣品預(yù)處理:將甜蕎殼在粉碎機(jī)中粉碎5-lOs,過80目篩,已過篩的部分以石油醚(40?60°C)為溶劑,用索氏提油裝置經(jīng)Sh抽提將甜蕎殼粉末脫油,并在室溫下晾干除去溶劑后放入冰箱備用。
[0067](2)總黃酮提取:取300g除油甜蕎殼,用70 %的丙酮/水(V/V = 70/30),按料液比1:15,在25°C條件下震蕩提取2h,重復(fù)提取兩次,抽濾,合并上清液,得到甜蕎黃酮類物質(zhì)粗提取液,濃縮待用。
[0068](3)黃酮粗分離:取900m3大孔樹脂裝柱好后,打開活塞使柱中液面下降至接近大孔樹脂最上端,將甜蕎殼黃酮粗提液緩慢加入大孔樹脂層析柱中,使大孔樹脂對黃酮物質(zhì)進(jìn)行吸附,吸附完畢后,將液面重新加到高于大孔樹脂7cm左右。分別用水1800mL、60%甲醇2250mL和70%丙酮2250mL做為洗脫劑,使用恒流栗以0.8mL/min進(jìn)行洗脫,收集60%甲醇洗脫的450-2250ml流出液以及70%丙酮洗脫的0-900ml洗脫液,合并濃縮。
[0069](4)純化:
[0070]A:將聚酰胺樹脂裝柱,然后將上述甜蕎殼粗黃酮分離餾分濃縮液用聚酰胺樹脂吸附后,分別用 1350mL水,3150mL 10% 甲醇,3150mL 30% 甲醇,3600mL 50% 甲醇,3150mL60 %甲醇,4050mL 80 %甲醇和2250mL 95 %甲醇進(jìn)行洗脫。收集60 %甲醇洗脫時(shí)的2250-3150mL流出液為異牡荊素餾分;收集80%甲醇洗脫時(shí)的315_585mL流出液為牡荊素餾分;收集80%甲醇洗脫時(shí)的585-1485ml流出液為蘆丁、異葒草素餾分;收集80%甲醇洗脫時(shí)的1485-2835ml流出液為蘆丁、葒草素餾分;收集80%甲醇洗脫時(shí)的3330-4050mL流出液以及95%甲醇洗脫時(shí)的0-270mL流出液為金絲桃苷餾分。將蘆丁、異葒草素餾分和蘆丁、葒草素餾分濃縮待用。
[0071]B:將Sephadex LH-20葡聚糖凝膠裝柱,然后將上述蘆丁、異葒草素液濃縮上樣于葡聚糖凝膠柱中,依次用8100ml 10%甲醇、3150ml 30%甲醇進(jìn)行洗脫,洗脫速度為0.6mL/min,收集10 %甲醇洗脫時(shí)的0-4950ml流出液為蘆丁餾分,收集30 %甲醇洗脫時(shí)1800-3150ml流出液為異葒草素餾分。
[0072]C:將Sephadex LH-20葡萄糖凝膠重新裝柱,然后將上述異蘆丁、葒草素濃縮液上樣于葡聚糖凝膠柱中,依次用4950ml 10%甲醇、6300ml30%甲醇進(jìn)行洗脫,洗脫速度為
0.6mL/min,收集10 %甲醇洗脫時(shí)所有流出液以及30%甲醇洗脫時(shí)的0_4500ml為蘆丁餾分,收集30 %甲醇洗脫時(shí)的4500-6300ml流出液為葒草素餾分。
[0073](5)將含有牡荊素、異牡荊素、金絲桃苷、葒草素、異葒草素以及蘆丁的六種餾分分別干燥后即得到六種黃酮單體。
[0074]本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解,本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制,上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理,在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下,本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn),這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法,其特征在于,具體包括如下步驟: (1)樣品預(yù)處理:將甜蕎殼在粉碎機(jī)中粉碎5-10S,過80目篩,已過篩的部分以石油醚(40?60°C)為溶劑,用索氏提油裝置經(jīng)Sh抽提將甜蕎殼粉末脫油,并在室溫下晾干除去溶劑后放入冰箱備用; (2)總黃酮的提取:取上述除油甜蕎殼,以丙酮按料液比1:15,在25°C條件下震蕩提取2h,重復(fù)提取兩次,抽濾,合并上清液,得到甜蕎殼黃酮類物質(zhì)粗提取液,濃縮待用; (3)黃酮的粗分離:將大孔樹脂裝柱,然后將甜蕎殼黃酮類物質(zhì)粗提取液用大孔樹脂進(jìn)行吸附后,依次用水、甲醇和丙酮作為洗脫劑,使用恒流栗以0.8mL/min進(jìn)行洗脫,收集甜蕎殼粗黃酮分離餾分,濃縮待用; (4)純化: A:將聚酰胺樹脂裝柱,然后將上述甜蕎殼粗黃酮分離餾分濃縮液用聚酰胺樹脂吸附后,依次用水和不同濃度梯度的甲醇溶液作為洗脫劑進(jìn)行洗脫,收集得到牡荊素、異牡荊素和金絲桃苷三種目標(biāo)洗脫餾分,同時(shí)收集含有蘆丁、葒草素以及蘆丁、異葒草素餾分并濃縮; B:將Sephadex LH-20葡聚糖凝膠裝柱,然后將上述蘆丁、異葒草素液濃縮上樣于葡聚糖凝膠柱中,依次用不同濃度梯度甲醇進(jìn)行洗脫,洗脫速度為0.6mL/min,收集蘆丁、葒草素兩種目標(biāo)洗脫餾分; C:將Sephadex LH-20葡萄糖凝膠重新裝柱,然后將上述異蘆丁、葒草素濃縮液上樣于葡聚糖凝膠柱中,依次用不同濃度梯度甲醇進(jìn)行洗脫,洗脫速度為0.6mL/min,收集蘆丁、異葒草素兩種目標(biāo)洗脫餾分; (5)將含有牡荊素、異牡荊素、金絲桃苷、葒草素、異葒草素以及蘆丁的六種餾分分別干燥后即得到六種黃酮單體。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法,其特征在于,步驟(3)所述洗脫劑對應(yīng)量分別為:水2倍柱體積,60 %甲醇2.5倍柱體積,70 %丙酮2.5倍柱體積。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法,其特征在于,步驟(3)所述的收集甜蕎殼粗黃酮分離餾分是指棄去前2.5倍柱體積的流出液以及后1.5倍柱體積流出液的中間部分。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法,其特征在于,步驟(4)所述的A中水及不同濃度梯度的甲醇對應(yīng)量為:水1.5倍柱體積,10%甲醇3.5倍柱體積,30 %甲醇3.5柱體積,50 %甲醇4倍柱體積,60 %甲醇3.5倍柱體積,80 %甲醇4.5倍柱體積,95 %甲醇2.5倍柱體積。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法,其特征在于,步驟(4)所述的A中三種目標(biāo)洗脫餾分別指:異牡荊素餾分:60%甲醇洗脫時(shí),棄去前2.5倍柱體積流出液后,流出的I倍柱體積流出液;牡荊素餾分:80%甲醇洗脫時(shí),棄去前0.35倍柱體積流出液后,流出的0.3倍柱體積流出液;金絲桃苷餾分:80%甲醇洗脫時(shí)的最后0.8倍柱體積流出液,以及95%甲醇洗脫時(shí)前0.3倍柱體積流出液。6.據(jù)權(quán)利要求5所述的從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法,其特征在于,步驟(4)所述的A中含有葒草素、蘆丁以及異葒草素、蘆丁餾分指:80%甲醇洗脫時(shí),收集完牡荊素餾分后流出的I倍柱體積流出液為異葒草素、蘆丁餾分餾分,之后再流出的1.5倍柱體積流出液為葒草素、蘆丁餾分。7.據(jù)權(quán)利要求6所述的從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法,其特征在于,步驟(4)所述B中不同濃度梯度甲醇分別指:10%甲醇9倍柱體積,30%甲醇3.5倍柱體積。8.據(jù)權(quán)利要求7所述的從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法,其特征在于,步驟(4)所述B中蘆丁、異葒草素兩種目標(biāo)洗脫餾分分別指:蘆丁餾分:10%甲醇洗脫時(shí),前5.5倍柱體積流出液;異葒草素餾分:30 %甲醇洗脫時(shí),棄去前2倍柱體積流出液后,流出的1.5倍柱體積流出液。9.據(jù)權(quán)利要求8所述的從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法,其特征在于,步驟(4)所述C中不同濃度梯度甲醇分別指:10%甲醇5.5倍柱體積,30%甲醇7倍柱體積。10.據(jù)權(quán)利要求9所述的從甜蕎殼中提取分離黃酮單體物質(zhì)的方法,其特征在于,步驟(4)所述C中蘆丁、葒草素兩種目標(biāo)洗脫餾分分別指:蘆丁餾分:10%甲醇洗脫時(shí)的所有流出液以及30 %甲醇洗脫時(shí)前5倍柱體積流出液;葒草素餾分:30 %甲醇洗脫時(shí),除去蘆丁餾分流出液外剩下的2倍流出液。
【文檔編號】C07D407/04GK105859701SQ201610316090
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年5月13日
【發(fā)明人】劉琴, 張薇娜, 劉慶慶, 張珂嘉
【申請人】南京財(cái)經(jīng)大學(xué)
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