本發(fā)明涉及南沙參皂苷的制備方法和新用途，特別涉及南沙參皂苷在制備用于治療肺動(dòng)脈高壓的藥物中的作用，屬于中醫(yī)藥領(lǐng)域范疇。
背景技術(shù)：
：肺動(dòng)脈高壓(pulmonaryarterialhypertension，pah)是以肺血管阻力和肺動(dòng)脈壓力進(jìn)行性升高為特點(diǎn)的一種病理生理狀態(tài)，其主要特征是由肺小動(dòng)脈收縮、血管增生與重構(gòu)而引起肺血管阻力進(jìn)行性升高，進(jìn)而引起右室負(fù)荷過重，導(dǎo)致右心室肥厚，最終可致患者死于右心衰竭。其血流動(dòng)力學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)為：海平面靜息狀態(tài)下，右心導(dǎo)管檢測肺動(dòng)脈平均壓≥25mmhg。pah危害大、病死率高。pah產(chǎn)生機(jī)制尚未完全清楚，目前認(rèn)為其發(fā)生機(jī)制同改變一氧化氮信號(hào)通路信號(hào)分子、肺血管炎癥損傷以及氧化-抗氧化系統(tǒng)平衡失衡等作用有關(guān)。目前pah的靶向治療藥物主要有3類，包括前列環(huán)素類似物、內(nèi)皮素受體拮抗劑(endothelinreceptorantagonists，era)和磷酸二酯酶5（phosphodiesterase，pde-5）抑制劑，其應(yīng)用可明顯改善患者的生存時(shí)間和生存狀況。三類靶向藥物在pah的治療地位毋庸質(zhì)疑，但總體來說，pah的藥物治療效果未能讓人滿意，仍然有很多pah患者因右心衰竭而死亡；或者接受正規(guī)治療后仍有嚴(yán)重的癥狀，難以提高生活質(zhì)量，且pah靶向治療藥物多為進(jìn)口藥物，價(jià)格昂貴，未列入基本醫(yī)療保險(xiǎn)藥品目錄，且肝臟毒性作用明顯，而長期聯(lián)合服藥又是pah患者必須面對(duì)的問題。因此，發(fā)揮中醫(yī)藥優(yōu)勢，尋找安全、經(jīng)濟(jì)的治療pah的中藥，對(duì)改善pah患者的預(yù)后和提高其生活質(zhì)量具有重要意義。南沙參為桔?？浦参镙喨~沙參或沙參的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》：“味苦微寒，主血積驚氣、除寒熱、補(bǔ)中益肺氣、久服利人”，是清肺養(yǎng)陰、祛痰鎮(zhèn)咳的常用中草藥之一。現(xiàn)代研究證明，南沙參含有多糖、β-谷甾醇及其衍生物、三萜、磷脂等多種成分，并具有祛痰、強(qiáng)心、抗真菌、免疫調(diào)節(jié)、抗輻射、抗衰老、清除自由基、保肝等多種藥理作用，其開發(fā)應(yīng)用很有前景。發(fā)明人通過研究發(fā)現(xiàn)南沙參皂苷可用于防治肺動(dòng)脈高壓及肺動(dòng)脈高壓引起的心血管疾病。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供可用于防治肺動(dòng)脈高壓的南沙參皂苷的制備方法，以及按本發(fā)明技術(shù)方案制備的南沙參皂苷在用于防治肺動(dòng)脈高壓藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的南沙參皂苷，可通過以下方法制備：南沙參藥材，洗凈，切碎，用5～75%（v/v）的乙醇溶液熱回流提取1～3次，每次提取時(shí)間一般為1～3h，每次溶劑體積用量為藥材重量的5～15倍，合并提取液，減壓濃縮，加水稀釋，加到已處理好的大孔吸附樹脂上，先后以水、25～95%（v/v）的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得。所用的乙醇洗脫液濃度優(yōu)選35～55%（v/v）。大孔吸附樹脂優(yōu)選hpd100型或d101型。所制備的南沙參皂苷適用于制備口服制劑，如膠囊劑、片劑、茶劑、顆粒劑等。具體方法是將有效量的南沙參皂苷與醫(yī)藥上可接受的賦形劑或/和添加劑配合，制成適合于人體使用的不同劑型的藥物。本發(fā)明所述的南沙參皂苷在用于防治肺動(dòng)脈高壓藥物中的應(yīng)用，其特征為口服，每日服用劑量為100~500mg。本發(fā)明所治療的肺動(dòng)脈高壓為特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓、遺傳性肺動(dòng)脈高壓、藥物和毒物相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓、危險(xiǎn)因素或疾病相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓、肺靜脈閉塞病和(或)肺毛細(xì)血管瘤樣病所致的肺動(dòng)脈高壓、新生兒持續(xù)性肺動(dòng)脈高壓中的任意一種或幾種病癥。本發(fā)明所治療的遺傳性肺動(dòng)脈高壓為bmpr2、alkl、eng、smad9、cav1、kcnk3中一個(gè)或過個(gè)基因突變導(dǎo)致的肺動(dòng)脈高壓。本發(fā)明所治療的危險(xiǎn)因素或疾病相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓，所述危險(xiǎn)因素或疾病為結(jié)締組織病、hiv感染、門靜脈高壓、遺傳性心臟病、血吸蟲病、慢性溶血性貧血等一種或多種因素。具體實(shí)施方式下面通過具體實(shí)施例對(duì)該發(fā)明作進(jìn)一步的描述。實(shí)施例1：防治肺動(dòng)脈高壓的南沙參皂苷制備方法：取南沙參藥材500g，洗凈、切碎，加入50%乙醇熱回流3次，每次回流2h，每次溶劑用量5l，合并提取液，減壓濃縮，加水?dāng)嚢柘♂?，加到已處理好?kghpd100型大孔吸附樹脂柱上，先用水洗至收集液無色，再用50%乙醇洗脫至無色或很淺，合并50%乙醇洗脫液濃縮干燥，得南沙參皂苷。實(shí)施例2：南沙參皂苷對(duì)肺葉切除聯(lián)合野百合堿引起sd大鼠肺動(dòng)脈壓高壓的影響2.1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：sd大鼠，3月齡，雄性，200±20g，48只2.2實(shí)驗(yàn)藥物及器材：南沙參皂苷、野百合堿（購自sigma公司）、水合氯醛、烏拉坦、壓力換能器和powerlab生理信息采集與處理系統(tǒng)2.3采用肺葉切除聯(lián)合野百合堿（mct）注射建立重度pah模型：大鼠稱體重，12%烏拉坦經(jīng)腹腔注射（8ml/kg）麻醉后，16g動(dòng)靜脈留置針行氣管插管，連接harvard呼吸機(jī)(潮氣量2ml；頻率，80次/分；peep1.0cmh20。左側(cè)第四肋間進(jìn)胸，結(jié)扎并切除左側(cè)肺葉，大鼠肺葉為左側(cè)1葉，右側(cè)4葉，關(guān)胸。手術(shù)結(jié)束后脫離呼吸機(jī)，保暖、持續(xù)吸氧4小時(shí)。繼續(xù)飼養(yǎng)1周后，按60mg/kg單次腹腔注射mct，mct注射1周后開始給藥，給藥4周?？瞻讓?duì)照組：假手術(shù)+生理鹽水（等體積i.p.）1次+給予生理鹽水（i.g）模型組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+給予等體積生理鹽水（i.g）南沙參皂苷低劑量組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+給予受試藥（30mg/kg/d，i.g）南沙參皂苷中劑量組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+受試藥（60mg/kg/d，i.g）南沙參皂苷高劑量組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+給予受試藥（120mg/kg/d，i.g）陽性藥組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+給予西地那非（7.5mg/kg/d）2.4血流動(dòng)力學(xué)測量和右心室肥厚檢測：mct注射后第4周，測量大鼠平均肺動(dòng)脈壓。大鼠以10%水合氯醛(3ml/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉后，從右頸外靜脈插管至肺動(dòng)脈干，接壓力換能器和powerlab生理信息采集與處理系統(tǒng)(adinstruments)，當(dāng)置入導(dǎo)管進(jìn)入右心室穩(wěn)定后記錄其右室收縮壓（rvsp），監(jiān)護(hù)儀出現(xiàn)肺動(dòng)脈波形時(shí)，待其穩(wěn)定后記錄平均肺動(dòng)脈壓(mpap)。測完rvsp后，完整切下大鼠心臟，沿房室交界處剪去左右心房及大血管，分離右心室(rv)和左心室+室間隔(lv+s)，用濾紙吸干水分后稱質(zhì)量，計(jì)算rv/(lv+s)值即右心室肥厚指數(shù)(rvhi)。2.5統(tǒng)計(jì)分析：應(yīng)用spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)均以mean±s.e表示，組間比較采用單因素方差分析。p<0.05為差異有顯著性意義。2.6實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.6.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡情況：本實(shí)驗(yàn)共用sd大鼠48只，死亡4只，mct組死亡2只，南沙參低劑量死亡1只，南沙參高劑量死亡1只，大鼠死亡前表現(xiàn)為呼吸困難、口鼻發(fā)紺。2.6.2南沙參皂苷對(duì)pah大鼠rvsp的結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組與各給藥組均有顯著性差異(p<0.001)；與模型組比較，南沙參皂苷中劑量(p<0.01)和高劑量(p<0.05)、西地那非組(p<0.01)能顯著降低rvsp，且呈劑量依賴性；與陽性藥比較，南沙參皂苷各組對(duì)pah大鼠rvsp的降低效果沒有顯著性差異。2.6.3南沙參皂苷對(duì)pah大鼠mpap的結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組與各給藥組均有顯著性差異(p<0.001)；與模型組比較，南沙參皂苷中劑量(p<0.01)和高劑量(p<0.01)、西地那非(p<0.01)組能顯著降低mpap；與陽性藥比較，南沙參皂苷各組對(duì)pah大鼠mpap的降低效果沒有顯著性差異。2.6.4南沙參皂苷對(duì)pah大鼠rvhi的結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組與各給藥組均有顯著性差異(p<0.001)；與模型組比較，南沙參皂苷中劑量(p<0.05)和高劑量(p<0.05)能顯著降低rvhi；與陽性藥比較，南沙參皂苷中劑量組對(duì)pah大鼠rvhi的降低效果更好（見表1）。表1.南沙參皂苷對(duì)pah大鼠rvsp、mpap、rvhi的影響組別nrvsp(mmhg)mpap(mmhg)rvhi(%)空白對(duì)照組820.73±0.3213.07±0.2722.33±0.42模型組643.23±0.79###34.62±0.92###52.17±1.19###南沙參皂苷低劑量組740.17±1.83###32.18±1.64###48.94±1.17###南沙參皂苷中劑量組836.79±0.95**###26.94±0.93**###45.17±1.35*###南沙參皂苷高劑量組738.77±2.18*##27.28±1.56**###46.83±0.95*###西地那非組836.54±1.09**###26.23±1.07**###48.33±1.85###注：與正常組比較##p﹤0.01，###p﹤0.001；與模型組比較*p﹤0.05，**p﹤0.01結(jié)論：以上結(jié)果說明，南沙參皂苷對(duì)肺葉切除聯(lián)合野百合堿引起sd大鼠肺動(dòng)脈壓高壓的平均肺動(dòng)脈壓(mpap)、右室收縮壓（rvsp），右心室肥厚指數(shù)(rvhi)有明顯減輕作用。南沙參皂苷具有防治pah的作用。當(dāng)前第1頁12