本發(fā)明涉及一種抗輻射的藥物，具體涉及一種用于抗輻射的熊果酸山藥多糖組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
輻射用于治療腫瘤在臨床上已經(jīng)使用幾十年，目前臨床上所用的輻射是由60co產(chǎn)生的γ-射線，這種射線是一種高能射線。中醫(yī)認(rèn)為經(jīng)這種高能射線照射后，會使患者機體產(chǎn)生陰虛癥狀?，F(xiàn)在醫(yī)學(xué)者認(rèn)為經(jīng)這種高能射線照射后會使患者的白細(xì)胞降低，人體的造血系統(tǒng)會受到損傷，細(xì)胞的dna會受到破壞。臨床上的pt-ct、腫瘤的輻射治療都會對人體造成不同程度的傷害。
目前市場上具有抗輻射的產(chǎn)品有茶葉、黑芝麻、螺旋藻、大蒜、人參等等，這些產(chǎn)品都是原植物，對于小劑量的放療用量輻射具有抗輻射作用，但是對于治療腫瘤的大劑量放療用量輻射沒有明顯作用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種生物利用度高又具有抗輻射的藥物。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所設(shè)計的用于抗輻射的熊果酸山藥多糖組合物，它由原料山藥多糖、熊果酸、磷脂、乳糖和木糖醇混合而成，所述山藥多糖、熊果酸、磷脂、乳糖和木糖醇的重量比為(1～100):(10～100):500:1000:1000。
進一步地，所述山藥多糖、熊果酸、磷脂、乳糖和木糖醇的重量比為(1～50):(10～50):500:1000:1000。
上述用于抗輻射的熊果酸山藥多糖組合物的制備方法，包括以下步驟：
1)將熊果酸和磷脂混合，加入乙醇，制得熊果酸磷脂乙醇溶液；
2)向步驟1)制得的熊果酸磷脂乙醇溶液中依次加入山藥多糖、木糖醇和乳糖并不斷攪拌，使各組分混合均勻，得到混合物a；
3)將步驟2)制得的混合物a烘干、粉碎，即得到本發(fā)明產(chǎn)品。
進一步地，所述山藥多糖為市售產(chǎn)品或者自制產(chǎn)品中的一種。
更進一步地，所述山藥多糖的制備方法包括以下步驟：
1)將山藥水煎、過濾、收集濾液，重復(fù)2～4次，合并濾液；
2)將步驟1)收集的濾液減壓濃縮，加入乙醇，提取2～4次，合并提取液，再將提取液減壓濃縮，并干燥即得到山藥多糖粉；
再進一步地，所述熊果酸的制備方法包括以下步驟：
1)將枇杷葉水煎、過濾、收集濾餅，重復(fù)2～4次，合并濾餅；
2)向步驟1)收集的濾餅中加入乙醇，加熱回流，過濾，收集提取液，重復(fù)2～4次，合并乙醇提取液；
3)將步驟2)得到的乙醇提取液減壓蒸餾，回收乙醇溶劑，得到乙醇浸膏i；
4)向步驟3)制得的乙醇浸膏i中加入石油醚除雜，重復(fù)2～4次，收集乙醇浸膏ii；
5)向步驟4)得到的乙醇浸膏ii中加入乙醇，并加熱、萃取，得到熊果酸。
還進一步地，所述山藥多糖粉的制備工藝中，水煎時間為1.5～3h，水煎溫度為70～85℃。
還進一步地，所述熊果酸的制備工藝中，水煎時間為1.5～3h，水煎溫度為70～85℃。
還進一步地，所述熊果酸的制備工藝中，萃取溫度為75～85℃，萃取時間為4～6h。
還進一步地，各步驟中所述乙醇均為無水乙醇。
本發(fā)明的優(yōu)點在于：將熊果酸制成納米脂質(zhì)體，從而提高熊果酸的口服生物利用度；另外，山藥多糖具有健脾、潤肺、補腎的功效，將熊果酸與山藥多糖結(jié)合，具有更好的抗輻射作用。
具體實施方式
下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細(xì)描述，山藥多糖為市售產(chǎn)品或者自制產(chǎn)品中的一種，為了節(jié)約成本，本實施例中山藥多糖采用自制產(chǎn)品，但并不局限于此。
實施例1：
1)將山藥切碎，加入2倍蒸餾水并加熱至70℃，水煎1.5h后，過濾，收集濾液，重復(fù)提取3次，合并濾液；將濾液減壓濃縮，再加入濃縮液體積1倍的無水乙醇提取濃縮液，收集提取液，重復(fù)3次，合并提取液，再將提取液減壓濃縮，并干燥即得到山藥多糖粉，備用；
2)將枇杷葉切碎，加入3倍蒸餾水并加熱至70℃，水煎1.5h后，過濾，收集濾餅，重復(fù)提取3次，合并濾餅；向收集的濾餅中加入無水乙醇，加熱回流，過濾，收集提取液，重復(fù)3次，合并提取液；將提取液減壓回收乙醇溶劑，得到乙醇浸膏(i)；再加入乙醇浸膏(i)體積2倍的石油醚除去雜質(zhì)，重復(fù)3次，收集乙醇浸膏(ii)；再加入無水乙醇萃取，萃取溫度為75℃，萃取時間為4h，重復(fù)3次，得到熊果酸；
3)取上述制備好的10mg熊果酸和500mg磷脂溶于無水乙醇中，并超聲處理2h；在攪拌條件下，依次加入1mg山藥多糖、1000mg木糖醇和1000mg乳糖，不斷攪拌使各組分混合均勻，減壓蒸餾除去無水乙醇得到混合物a，將混合物a烘干、粉碎、分裝，即得到本發(fā)明成品。
實施例2：
1)將山藥切碎，加入3倍蒸餾水并加熱至75℃，水煎2h后，過濾，收集濾液，重復(fù)提取2次，合并濾液；將濾液減壓濃縮，再加入濃縮液體積2倍的無水乙醇提取濃縮液，收集提取液，重復(fù)2次，合并提取液，再將提取液減壓濃縮，并干燥即得到山藥多糖粉，備用；
2)將枇杷葉切碎，加入2倍蒸餾水并加熱至75℃，水煎2h后，過濾，收集濾餅，重復(fù)提取2次，合并濾餅；向收集的濾餅中加入無水乙醇，加熱回流，過濾，收集提取液，重復(fù)2次，合并提取液；將提取液減壓回收乙醇溶劑，得到乙醇浸膏(i)；再加入乙醇浸膏(i)體積3倍的石油醚除去雜質(zhì)，重復(fù)2次，收集乙醇浸膏(ii)；再加入無水乙醇萃取，萃取溫度為80℃，萃取時間為5h，重復(fù)3次，得到熊果酸；
3)取上述制備好的10mg熊果酸和500mg磷脂溶于無水乙醇中，并超聲處理1.5h；在攪拌條件下，依次加入10mg山藥多糖、1000mg木糖醇和1000mg乳糖，不斷攪拌使各組分混合均勻，減壓蒸餾除去無水乙醇得到混合物a，將混合物a烘干、粉碎、分裝，即得到本發(fā)明成品。
實施例3：
1)將山藥切碎，加入4倍蒸餾水并加熱至80℃，水煎2.5h后，過濾，收集濾液，重復(fù)提取4次，合并濾液；將濾液減壓濃縮，再加入濃縮液體積3倍的無水乙醇提取濃縮液，收集提取液，重復(fù)4次，合并提取液，再將提取液減壓濃縮，并干燥即得到山藥多糖粉，備用；
2)將枇杷葉切碎，加入3倍蒸餾水并加熱至80℃，水煎2.5h后，過濾，收集濾餅，重復(fù)提取4次，合并濾餅；向收集的濾餅中加入無水乙醇，加熱回流，過濾，收集提取液，重復(fù)3次，合并提取液；將提取液減壓回收乙醇溶劑，得到乙醇浸膏(i)；再加入乙醇浸膏(i)體積4倍的石油醚除去雜質(zhì)，重復(fù)4次，收集乙醇浸膏(ii)；再加入無水乙醇萃取，萃取溫度為85℃，萃取時間為6h，重復(fù)4次，得到熊果酸；
3)取上述制備好的50mg熊果酸和500mg磷脂溶于無水乙醇中，并超聲處理2h；在攪拌條件下，依次加入10mg山藥多糖、1000mg木糖醇和1000mg乳糖，不斷攪拌使各組分混合均勻，減壓蒸餾除去無水乙醇得到混合物a，將混合物a烘干、粉碎、分裝，即得到本發(fā)明成品。
實施例4：
1)將山藥切碎，加入4倍蒸餾水并加熱至85℃，水煎3h后，過濾，收集濾液，重復(fù)提取4次，合并濾液；將濾液減壓濃縮，再加入濃縮液體積4倍的無水乙醇提取濃縮液，收集提取液，重復(fù)4次，合并提取液，再將提取液減壓濃縮，并干燥即得到山藥多糖粉，備用；
2)將枇杷葉切碎，加入3倍蒸餾水并加熱至85℃，水煎3h后，過濾，收集濾餅，重復(fù)提取4次，合并濾餅；向收集的濾餅中加入無水乙醇，加熱回流，過濾，收集提取液，重復(fù)4次，合并提取液；將提取液減壓回收乙醇溶劑，得到乙醇浸膏(i)；再加入乙醇浸膏(i)體積5倍的石油醚除去雜質(zhì)，重復(fù)3次，收集乙醇浸膏(ii)；再加入無水乙醇萃取，萃取溫度為80℃，萃取時間為5h，重復(fù)3次，得到熊果酸；
3)取上述制備好的50mg熊果酸和500mg磷脂溶于無水乙醇中，并超聲處理2h；在攪拌條件下，依次加入50mg山藥多糖、1000mg木糖醇和1000mg乳糖，不斷攪拌使各組分混合均勻，減壓蒸餾除去無水乙醇得到混合物a，將混合物a烘干、粉碎、分裝，即得到本發(fā)明成品。
實施例5：
1)將山藥切碎，加入5倍蒸餾水并加熱至80℃，水煎2h后，過濾，收集濾液，重復(fù)提取2次，合并濾液；將濾液減壓濃縮，再加入濃縮液體積3倍的無水乙醇提取濃縮液，收集提取液，重復(fù)2次，合并提取液，再將提取液減壓濃縮，并干燥即得到山藥多糖粉，備用；
2)將枇杷葉切碎，加入3倍蒸餾水并加熱至80℃，水煎2h后，過濾，收集濾餅，重復(fù)提取2次，合并濾餅；向收集的濾餅中加入無水乙醇，加熱回流，過濾，收集提取液，重復(fù)2次，合并提取液；將提取液減壓回收乙醇溶劑，得到乙醇浸膏(i)；再加入乙醇浸膏(i)體積6倍的石油醚除去雜質(zhì)，重復(fù)2次，收集乙醇浸膏(ii)；再加入無水乙醇萃取，萃取溫度為80℃，萃取時間為5h，重復(fù)3次，得到熊果酸；
3)取上述制備好的80mg熊果酸和500mg磷脂溶于無水乙醇中，并超聲處理2h；在攪拌條件下，依次加入100mg山藥多糖、1000mg木糖醇和1000mg乳糖，不斷攪拌使各組分混合均勻，減壓蒸餾除去無水乙醇得到混合物a，將混合物a烘干、粉碎、分裝，即得到本發(fā)明成品。
實施例6：
1)將山藥切碎，加入3倍蒸餾水并加熱至70℃，水煎2h后，過濾，收集濾液，重復(fù)提取3次，合并濾液；將濾液減壓濃縮，再加入濃縮液體積4倍的無水乙醇提取濃縮液，收集提取液，重復(fù)3次，合并提取液，再將提取液減壓濃縮，并干燥即得到山藥多糖粉，備用；
2)將枇杷葉切碎，加入3倍蒸餾水并加熱至70℃，水煎2h后，過濾，收集濾餅，重復(fù)提取3次，合并濾餅；向收集的濾餅中加入無水乙醇，加熱回流，過濾，收集提取液，重復(fù)3次，合并提取液；將提取液減壓回收乙醇溶劑，得到乙醇浸膏(i)；再加入乙醇浸膏(i)體積7倍的石油醚除去雜質(zhì)，重復(fù)3次，收集乙醇浸膏(ii)；再加入無水乙醇萃取，萃取溫度為80℃，萃取時間為5h，重復(fù)3次，得到熊果酸；
3)取上述制備好的100mg熊果酸和500mg磷脂溶于無水乙醇中，并超聲處理2h；在攪拌條件下，依次加入100mg山藥多糖、1000mg木糖醇和1000mg乳糖，不斷攪拌使各組分混合均勻，減壓蒸餾除去無水乙醇得到混合物a，將混合物a烘干、粉碎、分裝，即得到本發(fā)明成品。
實施例7：
1)將山藥切碎，加入1倍蒸餾水并加熱至70℃，水煎2h后，過濾，收集濾液，重復(fù)提取3次，合并濾液；將濾液減壓濃縮，再加入濃縮液體積2倍的無水乙醇提取濃縮液，收集提取液，重復(fù)3次，合并提取液，再將提取液減壓濃縮，并干燥即得到山藥多糖粉，備用；
2)將枇杷葉切碎，加入3倍蒸餾水并加熱至80℃，水煎3h后，過濾，收集濾餅，重復(fù)提取3次，合并濾餅；向收集的濾餅中加入無水乙醇，加熱回流，過濾，收集提取液，重復(fù)3次，合并提取液；將提取液減壓回收乙醇溶劑，得到乙醇浸膏(i)；再加入乙醇浸膏(i)體積4倍的石油醚除去雜質(zhì)，重復(fù)3次，收集乙醇浸膏(ii)；再加入無水乙醇萃取，萃取溫度為80℃，萃取時間為5h，重復(fù)3次，得到熊果酸；
3)取上述制備好的10mg熊果酸和500mg磷脂溶于無水乙醇中，并超聲處理2h；在攪拌條件下，依次加入100mg山藥多糖、1000mg木糖醇和1000mg乳糖，不斷攪拌使各組分混合均勻，減壓蒸餾除去無水乙醇得到混合物a，將混合物a烘干、粉碎、分裝，即得到本發(fā)明成品。
實驗例1
1、材料與方法
1.1材料與儀器：
儀器：高效液相色譜儀、電子分析天平、ph計、超聲清洗器、離心機、渦旋混合器、吹干器；
材料：熊果酸、本發(fā)明產(chǎn)品、熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品、乙酸乙醋、甲醇、乙腈。
1.2實驗動物：12只健康成年家兔，雌雄不拘，體重2.5士0.03kg，給藥前禁食24h，但可喂水；給藥時，將家兔的身體和四肢固定，頭部仰起，用木質(zhì)開口器從家兔側(cè)面門牙后部輕壓入家兔嘴中，使其無法閉合，將橡膠軟管經(jīng)開口器沿家兔食管插入，用注射器快速將藥物溶液從橡膠軟管注入家兔胃部。
1.3血漿樣品分析方法：
①色譜條件：選用4.6×250mm的c18柱、流動相為乙腈:磷酸緩沖液(ph＝3.5)＝80:20(每500ml流動相中含9mmol的γ環(huán)糊精)、檢測波長210nm、流速1ml/min，內(nèi)標(biāo)法計算血漿中熊果酸含量，內(nèi)標(biāo)物為齊墩果酸。
②樣品處理方法：精取待測血漿500μ1→加入內(nèi)標(biāo)溶液30μ1→加入乙酸乙酯5ml渦旋混合3min→離心(3000rpm)l0min→精取乙酸乙酯層4ml于另一離心管→50℃加熱條件下，氮氣吹干→殘渣用200μl甲醇溶解→離心(10000rpm)5min→取上清40μl進樣。
1.4給藥方法：將12只健康家兔隨機分成2組，隨機編號，每組6只，于實驗前一天上午八點開始禁食，次日上午八點空腹采血作為空白對照，隨即給予受試制劑—本發(fā)明產(chǎn)品及熊果酸混懸液，所給劑量相當(dāng)于含有熊果酸20mg。為避免飲食、飲水對藥物在機體內(nèi)代謝的影響，在給藥后4小時內(nèi)禁止飲食，2小時內(nèi)禁止飲水。給藥后0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，10，12，15，24h分別從家兔耳緣靜脈取血，將滴出的血樣收集于肝素管中，3000rpm離心10min后，取上清液于-15℃保存，3天內(nèi)完成熊果酸血藥濃度的測定。
1.5統(tǒng)計學(xué)處理：達峰時間tmax(h)及峰值濃度cmax(μg/ml)取實測值，用藥-時曲線尾部幾個時間點的血藥濃度(c)取對數(shù)后對時間(t)進行回歸，采用梯形法計算藥-時曲線下面積auc。
2、實驗結(jié)果
表1受試家兔灌胃本發(fā)明產(chǎn)品后血藥濃度(μg/ml)-時間數(shù)據(jù)：
表2受試家兔單劑量灌胃后的藥動學(xué)參數(shù)對比
從表1～2可以看出，熊果酸在水中的溶解度較低，影響了熊果酸在體內(nèi)的吸收，將熊果酸制成脂質(zhì)體后，可以顯著提高熊果酸的生物利用度，由表2可見，本發(fā)明產(chǎn)品與熊果酸相比，相對生物度為405％。
實驗例2
1、材料與方法
1.1受試物：
試驗組：本發(fā)明產(chǎn)品成人推薦量(以熊果酸的含量計算)為每日150mg，按成人60kg體重計，即為2.5mg/kg.bw。溶劑為蒸餾水。
對照組：熊果酸，對照組所含的有效成分和使用量與本發(fā)明產(chǎn)品組相同。
主要儀器：電子天平、顯微鏡、722分光光度計、微量冷凍離心機等；
主要試劑：鹽酸、giemsa染液、甲醇、小牛血清、sod試劑盒(南京建成生物工程研究所)、乙醇、三氯甲烷等；
統(tǒng)計方法：計量資料采用方差分析和q檢驗，計數(shù)資料采用卡方檢驗(sas8.1)。
1.2實驗動物：昆明種小鼠，雄性，體重18～22g，合格證號為醫(yī)動字19-006號。
1.3試驗方法：
1.3.1白細(xì)胞計數(shù)實驗：50只小鼠編號后采血計數(shù)白細(xì)胞，再按白細(xì)胞水平，并參考體重分為4個劑量組和1個輻射對照組，每組10只。三個劑量組分別按人體推薦攝入量(2.5mg/kg.bw)的10倍、20倍即25mg/kg.bw、50mg/kg.bw給予受試物，輻射對照組給予蒸餾水。各組小鼠灌胃容量均為0.20ml/kg.bw，連續(xù)灌胃30天后，接受60co-y射線5.0gy的照射。輻射后各組動物繼續(xù)給予受試物或?qū)φ瘴?，并分別于照射后3天和14天再次采血計數(shù)白細(xì)胞，以觀察白細(xì)胞的變化。
1.3.2小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗：50只動物按體重隨機分為4個劑量組和1個輻射對照組，每組10只。劑量組和對照組的劑量設(shè)置及灌胃容量同試驗方法1.3.1。各組小鼠連續(xù)灌胃30天后，接受60co-y射線5.0gy的照射。輻照后各組動物繼續(xù)給予受試物或?qū)φ瘴铮⒂谡丈浜?天頸椎脫臼處死，取胸骨骨髓涂片，甲醇固定，giemsa染液染色，顯微鏡下計數(shù)每片1000個嗜多染紅細(xì)胞中的微核細(xì)胞數(shù)，并計算微核率和抑制率。
1.3.3紅細(xì)胞sod活性試驗：50只動物按體重隨機分為4個劑量組和1個輻射對照組，每組10只。劑量組和對照組的劑量設(shè)置及灌胃容量同試驗方法1.3.1。各組小鼠連續(xù)灌胃30天后，接受60co-y射線7.0gy的照射。輻照后各組動物繼續(xù)給予受試物或?qū)φ瘴铮⒂谳椪蘸?天采血，測定血紅蛋白含量和紅細(xì)胞sod活性。
1.3.4血清溶血素試驗：50只動物按體重隨機分為4個劑量組和1個輻射對照組，每組10只。劑量組和對照組的劑量設(shè)置及灌胃容量同試驗方法1.3.1。各組小鼠連續(xù)灌胃30天后，接受60co-y射線2.0gy的照射。輻照后各組動物繼續(xù)給予受試物或?qū)φ瘴?，并于輻照?天采血，測定血清的半數(shù)溶血值(hc50)。
2、試驗結(jié)果
2.1本發(fā)明產(chǎn)品對白細(xì)胞計數(shù)試驗小鼠輻照前后體重的影響：
表3白細(xì)胞計數(shù)試驗期間小鼠體重的變化
由上表3可見，試驗期間各組小鼠的體重均有所增長，但各組間沒有顯著性差異，表明本發(fā)明產(chǎn)品組與熊果酸組對小鼠體重及生長速度都沒有明顯影響。
2.2本發(fā)明產(chǎn)品脂質(zhì)體對輻照后小鼠白細(xì)胞計數(shù)的影響：
表4本發(fā)明產(chǎn)品對輻照后小鼠白細(xì)胞計數(shù)的影響
注：*標(biāo)示與輻射對照組相比，有顯著性差異(p＜0.05)。
由上表4可見，輻照前各組小鼠白細(xì)胞計數(shù)沒有明顯差異，輻照后小鼠白細(xì)胞數(shù)顯著下降，但隨著時間的延長逐漸回升。輻照后3天各劑量組白細(xì)胞數(shù)高于同期對照組，但沒有統(tǒng)計學(xué)差異；輻照后14天本發(fā)明產(chǎn)品10倍、20倍劑量組顯著高于同期對照。熊果酸的10倍劑量組與對照組相比沒有明顯差異，20倍劑量組與對照組相比有明顯差異。該結(jié)果表明本發(fā)明產(chǎn)品有明顯促進輻照后小鼠白細(xì)胞回升的作用，其效果優(yōu)于熊果酸組。
2.3本發(fā)明產(chǎn)品對輻照后小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率的影響：
表5本發(fā)明產(chǎn)品對輻照小鼠微核率的影響
注：**標(biāo)示與輻射對照組相比，有極顯著性差異(p＜0.01)。
由上表5可見，給與本發(fā)明產(chǎn)品顆粒后，輻照小鼠的微核率有明顯下降，其中二個劑量組小鼠微核率與輻射對照組相比均有極顯著性差異，熊果酸的二個劑量組，只有高劑量組與輻射對照組相比有極顯著性差異，低劑量組沒有顯著性差異。表明本發(fā)明產(chǎn)品具有降低輻照小鼠胸骨骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率的作用。其效果優(yōu)于熊果酸組。
2.4本發(fā)明產(chǎn)品對輻照小鼠紅細(xì)胞sod活性的影響：
表6本發(fā)明產(chǎn)品對輻照小鼠紅細(xì)胞sod活性的影響
注：*分別表示與輻射對照組相比，有顯著性(p＜0.05)差異
由上表6可見，給予本發(fā)明產(chǎn)品后，劑量組小鼠紅細(xì)胞sod活性高于輻射對照組，其中10倍、20倍兩劑量組與輻射對照組相比有顯著性差異，表明本發(fā)明產(chǎn)品具有升高輻照小鼠紅細(xì)胞sod活性的作用。熊果酸組二個劑量組對輻照小鼠紅細(xì)胞sod活性的沒有作用。
2.5本發(fā)明產(chǎn)品對輻照小鼠血清溶血素水平的影響：
表7本發(fā)明產(chǎn)品對輻照小鼠血清溶血素水平(hc50)的影響
注：**分別表示與輻射對照組相比，有極顯著性(p＜0.01)差異
由上表7可見，給予本發(fā)明產(chǎn)品后，10倍、20倍二個劑量組小鼠血清溶血素水平極顯著高于輻射對照組，表明本發(fā)明產(chǎn)品具有升高輻照小鼠血清溶血素水平的作用。熊果酸組的二個劑量組與輻射對照組相比沒有顯著性差異。
3、結(jié)論
本發(fā)明產(chǎn)品人體每天推薦攝入量(以熊果酸含量計算)為150mg/d，即2.5mg/kg.bw。試驗中按人體推薦攝入量的10倍、20倍(分別為25、50mg/kg.bw)給予受試物，并設(shè)置輻射對照組。結(jié)果表明：
(1)輻照后14天本發(fā)明產(chǎn)品10倍、20倍兩個劑量組白細(xì)胞數(shù)顯著高于同期輻射對照組；熊果酸的10倍劑量組與對照組相比沒有明顯差異，20倍劑量組與對照組相比有顯著差異；
(2)本發(fā)明產(chǎn)品二個劑量組小鼠微核率與輻射對照組相比均明顯下降，且差異有極顯著性；熊果酸的二個劑量組，只有高劑量組與輻射對照組相比有極顯著性差異，低劑量組沒有顯著性差異；
(3)本發(fā)明產(chǎn)品10倍、20倍兩個劑量組小鼠紅細(xì)胞sod活性均顯著高于輻射對照組；熊果酸二個劑量組對輻照小鼠紅細(xì)胞sod活性的沒有作用；
(4)本發(fā)明產(chǎn)品10倍、20倍二個劑量組小鼠血清溶血素水平極顯著高于輻射對照組。熊果酸組的二個劑量組與輻射對照組相比沒有顯著性差異。
本發(fā)明產(chǎn)品對60co-y射線一次性高劑量照射后，有顯著升高小鼠白細(xì)胞數(shù)、降低骨髓細(xì)胞嗜多染紅細(xì)胞微核率、升高紅細(xì)胞sod活性和血清溶血素水平的作用。其作用明顯優(yōu)于熊果酸。
實驗例3
本發(fā)明產(chǎn)品中熊果酸含量的測定：
色譜條件：選用甲醇：水(90:10，v/v)作為流動相，用三乙胺(每10ml水中加入0.06ml三乙胺)和冰醋酸作緩沖液調(diào)節(jié)ph至6.5。選用c18柱(4.6×250mm，5μm)作為含量測定的色譜柱，選用210nm作為檢測波長。
測定方法：精密稱取熊果酸對照品，用流動相溶解，并配制成約30μg/ml的溶液，作為外標(biāo)溶液。取本品5袋，倒出內(nèi)容物，混勻，取約相當(dāng)于30mg熊果酸的樣品，精密稱定，用50％甲醇溶解至100ml，過濾，精密吸取濾液1ml至10ml容量瓶，用流動相定容，作為樣品溶液。分別取外標(biāo)溶液和樣品溶液20μl注入hplc中，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算本品中熊果酸的含量為0.05％。
實驗例4
本發(fā)明產(chǎn)品包封率的測定：
取本品5袋，倒出內(nèi)容物，混勻，取約相當(dāng)于30mg熊果酸的樣品，加水至約100ml。取5ml至離心管中，70000rpm離心2小時，取1ml上清液置于10ml容量瓶中，用流動相定容。另取1ml未離心的原液置于10ml容量瓶，流動相定容。按照含量測定項下的色譜條件，取20μl待測樣注入hplc中，記錄色譜圖，按以下公式計算包封率：
包封率＝(總藥量-游離藥量)/總藥量×100％＝(原液主峰面積-上清液主峰面積)/原液主峰面積×100％。
采用hplc測得本發(fā)明產(chǎn)品的包封率為94％，表明該處方工藝穩(wěn)定。
實施例5
本發(fā)明產(chǎn)品粒子大小的測定：
取本發(fā)明產(chǎn)品一袋，加水約200ml溶解，采用電子顯微鏡或激光粒度儀測定本發(fā)明產(chǎn)品的粒徑大小和粒度分布。
本發(fā)明產(chǎn)品的粒徑為266nm。