本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?01080036807.0、申請(qǐng)日為2010年6月17日、發(fā)明名稱為“用于在對(duì)象中調(diào)節(jié)smn2剪接的組合物和方法”的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)，原申請(qǐng)為國(guó)際申請(qǐng)?zhí)枮閜ct/us2010/039077的國(guó)家階段申請(qǐng)，該國(guó)際申請(qǐng)要求申請(qǐng)日為2009年6月17日，申請(qǐng)?zhí)枮?1/218,031的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)。序列表本申請(qǐng)連同電子形式的序列表一起提交。提交的序列表是命名為20100617_core0086woseq.txt的文件，該文件于2010年6月17日創(chuàng)建，5kb大小。序列表的電子形式中的信息通過引用全文并入本申請(qǐng)。
背景技術(shù)：
：新合成的真核mrna分子，稱為初級(jí)轉(zhuǎn)錄物或mrna前體，在翻譯前被加工。mrna前體的加工包括添加5’甲基化帽和在轉(zhuǎn)錄物的3’末端加上約200-250個(gè)堿基的poly(a)尾。從mrna前體到mrna的加工經(jīng)常還包括mrna前體的剪接，其發(fā)生在90-95％哺乳動(dòng)物mrna的成熟過程中。內(nèi)含子(或插入序列)是mrna前體中的某些區(qū)域，其不包含在成熟mrna的編碼序列中。外顯子是初級(jí)轉(zhuǎn)錄物的某些區(qū)域，其仍保留在成熟mrna中。外顯子被剪接在一起，以形成成熟的mrna序列。剪接結(jié)點(diǎn)也被稱作剪接點(diǎn)，其中結(jié)點(diǎn)的5′端通常稱作“5′剪接位點(diǎn)”或“剪接供體位點(diǎn)”，而3′端則稱作“3′剪接位點(diǎn)”或“剪接受體位點(diǎn)”。在剪接過程中，上游外顯子的3’末端與下游外顯子的5’末端連接。這樣，未剪接的mrna前體在內(nèi)含子的5’末端具有一個(gè)外顯子/內(nèi)含子結(jié)點(diǎn)，且在內(nèi)含子的3’末端具有一個(gè)內(nèi)含子/外顯子結(jié)點(diǎn)。將內(nèi)含子除去后，在成熟mrna的有時(shí)被稱作外顯子/外顯子結(jié)點(diǎn)或邊界的地方，外顯子是連續(xù)的。隱蔽剪接位點(diǎn)在通常情況下很少使用，但當(dāng)通常的剪接位點(diǎn)被阻斷或無法利用時(shí)可以使用?？勺兗艚颖欢x為將不同組合的外顯子剪接在一起，通?？梢詮膯蝹€(gè)基因得到多種mrna轉(zhuǎn)錄物。點(diǎn)突變可導(dǎo)致mrna前體加工異常，高達(dá)50％的人類遺傳病是由這樣的點(diǎn)突變導(dǎo)致的。此類點(diǎn)突變可以破壞目前使用的剪接位點(diǎn)，或者可以創(chuàng)造出新的剪接位點(diǎn)，導(dǎo)致產(chǎn)生的mrna轉(zhuǎn)錄物包含不同組合的外顯子或出現(xiàn)外顯子缺失。點(diǎn)突變還能導(dǎo)致隱蔽剪接位點(diǎn)的激活或破壞調(diào)控順式元件(即剪接增強(qiáng)子或沉默子)(cartegnietal.，nat.rev.genet.，2002，3，285-298；drawczaketal.，hum.genet.，1992，90，41-54)。將反義寡核苷酸已被用于靶向作用于那些在某些遺傳病中導(dǎo)致異常剪接的突變，以重新剪接并獲得所需的剪接產(chǎn)物(kole，actabiochimicapolonica，1997，44，231-238)。反義化合物還可用于改變天然存在的可變剪接變體的比率，如bcl-xmrna前體的長(zhǎng)型或短型(美國(guó)專利6,172,216；美國(guó)專利6,214,986；tayloretal.，nat.biotechnol.1999，17，1097-1100)，或用于強(qiáng)行跳過包含提前終止的密碼子的特定外顯子(wiltonetal.，neuromuscul.disord.，1999，9，330-338)。美國(guó)專利5,627,274和wo94/26887公開了組合物和方法，其使用不激活rnaseh的反義寡核苷酸，來對(duì)抗包含突變的mrna前體分子的異常剪接。近端型脊髓性肌萎縮癥(sma)是一種遺傳性的、神經(jīng)退行性病變，其特征為脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的喪失。sma是一種發(fā)病較早的常染色體隱性遺傳病，是目前導(dǎo)致嬰兒死亡的首要原因。sma在不同患者中的嚴(yán)重性不同，因此將其分成三類。i型sma是最嚴(yán)重的形式，患者在出生時(shí)或出生后6個(gè)月內(nèi)發(fā)病，一般在2歲以內(nèi)死亡。患有i型sma的兒童無法坐下或行走。ii型sma是中間形式，患者能夠坐下，但不能站立或行走。患者患有iii型sma的，即該疾病的慢性形式，一般在出生后18個(gè)月后發(fā)展成sma(lefebvreetal.，hum.mol.genet.，1998，7，1531-1536)。導(dǎo)致sma的分子機(jī)制是運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因1(smn1)的兩個(gè)拷貝均缺失，smn1也稱為smn端粒，這種蛋白是一種多蛋白復(fù)合物的一部分，該多蛋白復(fù)合物被認(rèn)為參與小核糖核酸蛋白snrnp生物合成和循環(huán)。在染色體5q13的復(fù)制區(qū)存在一個(gè)基本相同的基因smn2，也稱為smn著絲粒，其調(diào)節(jié)疾病的嚴(yán)重程度。正常smn1基因的表達(dá)僅導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因(smn)蛋白的表達(dá)。盡管smn1和smn2都能夠編碼相同的蛋白，但smn2在其外顯子7的+6位含有翻譯沉默突變，會(huì)導(dǎo)致在smn2轉(zhuǎn)錄物中外顯子7的包含不足。這樣，smn2主要形成為被截短的版本，缺乏外顯子7，其不穩(wěn)定且無活性(cartegniandkrainer，nat.genet.，2002，30，377-384)。smn2基因表達(dá)產(chǎn)生約10-20％的smn蛋白和80-90％不穩(wěn)定/非功能性的smnδ7蛋白。smn蛋白在剪接體裝配過程中的作用已被驗(yàn)證，且其還可以介導(dǎo)mrna在神經(jīng)元的軸突和神經(jīng)末梢間的轉(zhuǎn)運(yùn)。反義技術(shù)可有效調(diào)節(jié)一種或多種特定基因產(chǎn)物，包括可變剪接產(chǎn)物的表達(dá)，且其在多種治療、診斷和研究應(yīng)用上具有獨(dú)特的作用。反義技術(shù)的原理為，反義化合物可與靶核酸雜交，通過多種反義機(jī)制之一調(diào)節(jié)基因表達(dá)的活性，例如轉(zhuǎn)錄、剪接或翻譯。反義化合物的序列特異性使其成為一種極具吸引力的工具，用于靶點(diǎn)驗(yàn)證和基因功能化，以及作為治療手段用于選擇性調(diào)節(jié)疾病相關(guān)基因的表達(dá)。本領(lǐng)域已知某些與smn2互補(bǔ)的反義化合物，參見例如，wo2007/002390；us61/168,885；huaetal.，americanj.ofhumangenetics(april2008)82，1-15；singhetal.，rnabio.6：3，1-10(2009)。與本領(lǐng)域已知的此類化合物和方法相比，本文所公開的某些反義化合物和方法具有所需的特性。已有專利描述了被設(shè)計(jì)用于調(diào)節(jié)smn2剪接的嵌合肽核酸分子(wo02/38738；cartegniandkrainer，nat.struct.biol.，2003，10，120-125)。發(fā)明概述在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了方法，其包括向?qū)ο蠼o藥包含反義寡核苷酸的反義化合物，該反義化合物互補(bǔ)于人smn2mrna前體的編碼核酸的內(nèi)含子7，其中反義化合物給藥至腦脊液(csf)中。在某些實(shí)施方式中，所述給藥是至鞘內(nèi)空隙。在某些實(shí)施方式中，所述給藥是至腦內(nèi)的腦脊液。在某些實(shí)施方式中，所述給藥包含推注注射。在某些實(shí)施方式中，所述給藥包含利用遞送泵輸注。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥劑量為0.01至10毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，劑量為0.01至10毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，劑量為0.01至5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，劑量為0.05至1毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，劑量為0.01至0.5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，劑量為0.05至0.5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，每日給藥所述劑量。在某些實(shí)施方式中，每周給藥所述劑量。在某些實(shí)施方式中，連續(xù)給藥反義化合物，且所述劑量是每日給藥的劑量。在某些實(shí)施方式中，該方法包含在誘導(dǎo)期給藥至少一個(gè)誘導(dǎo)劑量以及在維持期給藥至少一個(gè)維持劑量。在某些實(shí)施方式中，誘導(dǎo)劑量為0.05至5.0毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，維持劑量為0.01至1.0毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，誘導(dǎo)期的持續(xù)時(shí)間為至少1周。在某些實(shí)施方式中，維持期的持續(xù)時(shí)間為至少1周。在某些實(shí)施方式中，各個(gè)誘導(dǎo)劑量和各個(gè)維持劑量均包含單次注射。在某些實(shí)施方式中，各個(gè)誘導(dǎo)劑量和各個(gè)維持劑量均獨(dú)立地包含兩次或更多注射。在某些實(shí)施方式中，在至少1周的治療期內(nèi)，給藥反義化合物至少兩次。在某些實(shí)施方式中，治療期為至少一個(gè)月。在某些實(shí)施方式中，治療期為至少2個(gè)月。在某些實(shí)施方式中，治療期為至少4個(gè)月。在某些實(shí)施方式中，通過一次或更多推注注射給藥誘導(dǎo)劑量，以及通過輸液泵給藥維持劑量。在某些實(shí)施方式中，該方法包含評(píng)估反義化合物的耐受性和/或有效性。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)出現(xiàn)反義化合物給藥不耐受的指征時(shí)，降低反義化合物的給藥劑量或給藥頻率。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)出現(xiàn)反義化合物給藥有效的指征后，維持或降低反義化合物的給藥劑量或給藥頻率。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)出現(xiàn)反義化合物給藥無效的指征后，增加反義化合物的給藥劑量。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)出現(xiàn)反義化合物給藥有效的指征后，降低反義化合物的給藥頻率。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)出現(xiàn)反義化合物給藥無效的指征后，增加反義化合物的給藥頻率。在某些實(shí)施方式中，該方法包括將反義化合物與至少一種其他療法聯(lián)合給藥。在某些實(shí)施方式中，反義化合物與至少一種其他療法同時(shí)聯(lián)合給藥。在某些實(shí)施方式中，在至少一種其他療法給藥前，給藥反義化合物。在某些實(shí)施方式中，在至少一種其他療法給藥之后，給藥反義化合物。在某些實(shí)施方式中，所述至少一種其他療法包括，給藥丙戊酸、利魯唑、羥基脲和丁酸鹽中的一種或更多種。在某些實(shí)施方式中，所述至少一種其他療法包括給藥曲古霉素-a。在某些實(shí)施方式中，至少一種其他療法包括給藥干細(xì)胞。在某些實(shí)施方式中，至少一種其他療法為基因治療。在某些實(shí)施方式中，基因治療給藥至csf以及反義化合物給藥至全身。在某些實(shí)施方式中，基因治療給藥至csf，以及反義化合物給藥至全身和csf。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療方案，其中初始時(shí)給藥反義化合物至csf和全身，隨后給藥基因治療至csf，并將反義化合物給藥至全身。在某些此類實(shí)施方式中，在初始治療時(shí)對(duì)象為嬰兒。在某些此類實(shí)施方式中，對(duì)象為2歲以下。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象的年齡足以接受基因治療以前，將反義化合物給藥至對(duì)象的中樞神經(jīng)系統(tǒng)。在某些此類實(shí)施方式中，反義化合物自始自終全身給藥。在某些實(shí)施方式中，反義化合物的給藥濃度為約0.01mg/ml、約0.05mg/ml、約0.1mg/ml、約0.5mg/ml、約1mg/ml、約5mg/ml、約10mg/ml、約50mg/ml或約100mg/ml。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中，smn2mrna對(duì)外顯子7的包含增加。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中，smn2多肽對(duì)外顯子7氨基酸的包含增加。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加smn2mrna對(duì)外顯子7的包含的方法，包括向?qū)ο蠼o藥含有反義寡核苷酸的反義化合物，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人smn2編碼核酸的內(nèi)含子7，進(jìn)而在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加smn2mrna對(duì)外顯子7的包含。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加smn2多肽對(duì)外顯子7氨基酸的包含的方法，包括向?qū)ο蠼o藥含有反義寡核苷酸的反義化合物，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人smn2編碼核酸的內(nèi)含子7，進(jìn)而在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加smn2多肽對(duì)外顯子7氨基酸的包含。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象患有sma。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象患有i型sma。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象患有ii型sma。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象患有iii型sma。在某些實(shí)施方式中，在子宮內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在血腦屏障完全形成前進(jìn)行所述第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象出生1周內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象出生1個(gè)月內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象出生3個(gè)月內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象出生6個(gè)月內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象1至2歲時(shí)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象1至15歲時(shí)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象15歲以上時(shí)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象為哺乳動(dòng)物。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象為人。在某些實(shí)施方式中，該方法包括識(shí)別患有sma的對(duì)象。在某些實(shí)施方式中，通過測(cè)定對(duì)象一塊或更多塊肌肉的電活性來識(shí)別所述對(duì)象。在某些實(shí)施方式中，通過遺傳檢測(cè)以確定對(duì)象的smn1基因中是否具有突變來識(shí)別所述對(duì)象。在某些實(shí)施方式中，通過肌肉組織活檢來識(shí)別所述對(duì)象。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥使得含有外顯子7的smn2mrna的量增加至少10％。在某些實(shí)施方式中，含有外顯子7的smn2mrna的量增加至少20％。在某些實(shí)施方式中，含有外顯子7的smn2mrna的量增加至少50％。在某些實(shí)施方式中，含有外顯子7的smn2mrna的量增加至少70％。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥使得含有外顯子7氨基酸的smn2多肽的量增加至少10％。在某些實(shí)施方式中，含有外顯子7氨基酸的smn2多肽的量增加至少20％。在某些實(shí)施方式中，含有外顯子7氨基酸的smn2多肽的量增加至少50％。在某些實(shí)施方式中，含有外顯子7氨基酸的smn2多肽的量增加至少70％。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥能在所述對(duì)象中減輕sma的至少一種癥狀。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥使得在所述對(duì)象中的運(yùn)動(dòng)功能改善。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥使得在所述對(duì)象的運(yùn)動(dòng)功能喪失被推遲或減少。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥使得呼吸功能改善。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥使得生存率改善。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸的至少一個(gè)核苷包含修飾的糖配基。在某些實(shí)施方式中，至少一種修飾的糖配基包含2’-甲氧乙基糖配基。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸的各核苷基本上均包含修飾的糖配基。在某些實(shí)施方式中，包含修飾糖配基的核苷均包含相同的糖修飾。在某些實(shí)施方式中，其中各修飾的糖配基均包含2’-甲氧乙基糖配基。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸的各核苷均包含修飾的糖配基。在某些實(shí)施方式中，核苷均包含相同的糖配基。在某些實(shí)施方式中，各修飾的糖配基均包含2’-甲氧乙基糖配基。在某些實(shí)施方式中，至少一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，各核苷間連接均為硫代磷酸酯核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸由10至25個(gè)連接的核苷組成。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸由12至22個(gè)連接的核苷組成。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸由15至20個(gè)連接的核苷組成。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸由18個(gè)連接的核苷組成。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸與人smn2的編碼核酸具有至少90％的互補(bǔ)性。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸與人smn2的編碼核酸完全互補(bǔ)。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序列包含seqidno：1的核堿基序列中至少10個(gè)連續(xù)核堿基。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序列包含seqidno：1的核堿基序列中至少15個(gè)連續(xù)核堿基。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序列包含seqidno：1的核堿基序列。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序列由seqidno：1的核堿基序列組成。在某些實(shí)施方式中，反義化合物包含綴合基團(tuán)或末端基團(tuán)。在某些實(shí)施方式中，反義化合物由反義寡核苷酸組成。在某些實(shí)施方式中，反義化合物也可以全身給藥。在某些實(shí)施方式中，全身給藥是通過靜脈或腹腔注射。在某些實(shí)施方式中，全身給藥和給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng)同時(shí)進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，全身給藥和給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng)在不同時(shí)間進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了將反義化合物全身給藥，可以單獨(dú)進(jìn)行，或者與遞送至csf聯(lián)合進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，將藥物組合物全身給藥。在某些實(shí)施方式中，將藥物組合物皮下給藥。在某些實(shí)施方式中，將藥物組合物靜脈給藥。在某些實(shí)施方式中，將藥物組合物肌內(nèi)注射給藥。在某些實(shí)施方式中，將藥物組合物直接給藥至csf(例如，it和/或icv注射和/或輸注)并且全身給藥。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了方法，包括向?qū)ο蠼o藥至少一劑量的反義化合物，所述對(duì)象具有與sma相關(guān)的至少一種癥狀，所述反義化合物包含由15至20個(gè)連接的核苷組成的寡核苷酸，并且具有核堿基序列，所述核堿基序列的全長(zhǎng)與seqidno.7的核堿基序列具有100％互補(bǔ)性，且其中各核苷均為2’-moe修飾的核苷；且其中至少一劑量在0.1mg/kg至5mg/kg之間且給藥至csf。在某些此類實(shí)施方式中，所述劑量在0.5mg/kg至2mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，至少一劑量通過推注注射給藥。在某些此類實(shí)施方式中，所述劑量通過鞘內(nèi)推注注射給藥。在某些實(shí)施方式中，至少再給藥一次。在某些此類實(shí)施方式中，在第一次給藥至少2周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少4周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少8周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少12周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少16周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少20周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥時(shí)，對(duì)象在2歲以下。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在2至15歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在15至30歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象為30歲以上。在某些實(shí)施方式中，與sma相關(guān)的至少一種癥狀減輕，其進(jìn)展減慢。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸為isis396443。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了方法，包括向?qū)ο蠼o藥至少一劑量的反義化合物，所述對(duì)象具有與sma相關(guān)的至少一種癥狀，所述反義化合物包含由15至20個(gè)連接的核苷組成的寡核苷酸，并且具有核堿基序列，所述核堿基序列的全長(zhǎng)與seqidno.7的核堿基序列具有100％互補(bǔ)性，且其中各核苷均為2’-moe修飾的核苷；且其中至少一劑量為全身給藥。在某些此類實(shí)施方式中，所述至少一劑量通過推注注射給藥。在某些此類實(shí)施方式中，所述劑量通過皮下推注注射給藥。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量為0.5mg/kg至50mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量為1mg/kg至10mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量為1mg/kg至5mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量為0.5mg/kg至1mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，至少再給藥一次。在某些此類實(shí)施方式中，在第一次給藥至少2周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少4周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少8周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少12周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少16周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少20周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，第一次給藥時(shí)對(duì)象在2歲以下。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在2至15歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在15至30歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象為30歲以上。在某些實(shí)施方式中，與sma相關(guān)的至少一種癥狀減輕，其進(jìn)展減慢。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸為isis396443。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了方法，包括將至少一劑量的反義化合物向?qū)ο蠼o藥至csf以及至少一劑量全身給藥，所述對(duì)象具有與sma相關(guān)的至少一種癥狀，所述反義化合物包含由15至20個(gè)連接的核苷組成的寡核苷酸，并且具有核堿基序列，所述核堿基序列的全長(zhǎng)與seqidno.7的核堿基序列具有100％互補(bǔ)性，且其中各核苷均為2’-moe修飾的核苷。在某些此類實(shí)施方式中，csf給藥的劑量為0.1mg/kg至5mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，全身給藥的劑量為0.5mg/kg至50mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，至少一次csf給藥通過推注注射給藥。在某些此類實(shí)施方式中，至少一次csf給藥通過鞘內(nèi)推注注射給藥。在某些實(shí)施方式中，至少一次全身給藥通過推注注射給藥。在某些此類實(shí)施方式中，至少一次全身給藥通過皮下注射給藥。在某些實(shí)施方式中，csf給藥和全身給藥同時(shí)進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，csf給藥和全身給藥在不同的時(shí)間進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，第一次給藥時(shí)對(duì)象在2歲以下。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在2至15歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在15至30歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象為30歲以上。在某些實(shí)施方式中，與sma相關(guān)的至少一種癥狀減輕，其進(jìn)展減慢。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸為isis396443。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了方法，包括向?qū)ο蠼o藥至少一全身給藥劑量的反義化合物，所述對(duì)象具有與sma相關(guān)的至少一種癥狀，所述反義化合物包含由15至20個(gè)連接的核苷組成的寡核苷酸，并且具有核堿基序列，所述核堿基序列的全長(zhǎng)與seqidno.7的核堿基序列具有100％互補(bǔ)性，且其中各核苷均為2’-moe修飾的核苷；以及至少一劑量的基因治療劑。在某些實(shí)施方式中，全身給藥劑量為0.5mg/kg至50mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，至少一次全身給藥通過推注注射給藥。在某些此類實(shí)施方式中，至少一次全身給藥通過皮下注射給藥。在某些實(shí)施方式中，全身給藥和基因治療劑給藥在同時(shí)進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，全身給藥和基因治療劑給藥在不同的時(shí)間進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，基因治療劑給藥至csf。在某些此類實(shí)施方式中，基因治療劑通過鞘內(nèi)注射和/或輸注給藥。在某些此類實(shí)施方式中，基因治療劑通過腦室內(nèi)注射和/或輸注給藥。在某些實(shí)施方式中，第一次給藥時(shí)對(duì)象在2歲以下。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在2至15歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在15至30歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象為30歲以上。在某些實(shí)施方式中，與sma相關(guān)的至少一種癥狀減輕，其進(jìn)展減慢。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸為isis396443。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供方法，包括選擇具有至少一種與sma相關(guān)的癥狀的對(duì)象，并按照上文所述的任意方法給藥反義化合物。在某些此類實(shí)施方式中，在給藥后評(píng)估sma的至少一種癥狀。在某些此類實(shí)施方式中，sma的至少一種癥狀被改善。在某些此類實(shí)施方式中，與未給藥反義化合物的對(duì)象相比，sma的至少一種癥狀未出現(xiàn)進(jìn)展或進(jìn)展更為緩慢。在某些此類實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包含反義寡核苷酸的反義化合物，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人smn2編碼核酸的內(nèi)含子7，所述反義化合物用于上文所述的任意方法。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種此類化合物，用于治療與存活運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元1(smn1)相關(guān)的疾病或病癥。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包含反義寡核苷酸的反義化合物用于在藥物生產(chǎn)中的用途，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人smn2編碼核酸的內(nèi)含子7，所述藥物用于上文所述的任意方法。在某些實(shí)施方式中，該藥物用于治療與存活運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元1(smn1)相關(guān)的疾病或病癥。附圖的簡(jiǎn)要說明圖1顯示了實(shí)施例4所述研究中作用持續(xù)時(shí)間的結(jié)果，其中評(píng)估了在7天治療結(jié)束后0、2、4、6和8周時(shí)(x-軸)smn2中外顯子7的百分率(y-軸)。第“0”周樣品收集自治療結(jié)束后1天。con表示生理鹽水治療組小鼠。在0至6個(gè)月的不同時(shí)間點(diǎn)接受生理鹽水治療的對(duì)照小鼠之間的百分率不存在差異。圖2顯示了實(shí)施例4所述研究中作用持續(xù)時(shí)間的結(jié)果，其中評(píng)估了在7天治療結(jié)束后0、0.5、1、2、5和6個(gè)月時(shí)smn2中外顯子7的百分率。第“0”周樣品收集自治療結(jié)束后1天。con表示生理鹽水治療組小鼠。在0至6個(gè)月的不同時(shí)間點(diǎn)接受生理鹽水治療的對(duì)照小鼠之間的百分率不存在差異。圖3顯示了實(shí)施例6所述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，檢測(cè)isis396443胚胎給藥對(duì)臺(tái)灣品系sma小鼠尾長(zhǎng)的影響。圖3a為首次實(shí)驗(yàn)和圖3b為重復(fù)實(shí)驗(yàn)，對(duì)不同濃度的反義化合物進(jìn)行檢測(cè)，其中還包括正常小鼠的數(shù)據(jù)作為對(duì)照。圖4顯示了實(shí)施例7所述western印跡的結(jié)果。y軸為包含外顯子7的不同樣品的smn百分率。圖5和6顯示了實(shí)施例7所述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。向sma小鼠(臺(tái)灣品系)給藥反義化合物或?qū)φ展押塑账岷髮?duì)其進(jìn)行的若干項(xiàng)評(píng)估。圖7顯示了實(shí)施例7所述實(shí)驗(yàn)的生存曲線。圖8顯示了如實(shí)施例7所述，用反義化合物或?qū)φ展押塑账崽幚砗?，?duì)脊髓不同部分運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)量進(jìn)行評(píng)估的結(jié)果。圖9顯示了如實(shí)施例7所述，經(jīng)反義處理的動(dòng)物中，對(duì)全長(zhǎng)smnrna(包括外顯子7)進(jìn)行評(píng)估的結(jié)果。圖10顯示了實(shí)施例7所述實(shí)驗(yàn)的生存曲線，其中動(dòng)物為(1)未治療；(2)在出生時(shí)(第p0天)給藥單劑量反義化合物；或(3)在p0時(shí)第一次給藥和在第21天(p21)時(shí)第二次給藥。圖11顯示了實(shí)施例7所述實(shí)驗(yàn)的生存曲線，對(duì)接受第二次給藥的動(dòng)物與僅接受第一次給藥的動(dòng)物進(jìn)行比較。圖12顯示了實(shí)施例9所述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，對(duì)猴鞘內(nèi)輸注給藥反義化合物，并評(píng)估96小時(shí)后不同組織中化合物的濃度。圖13顯示了實(shí)施例12所述實(shí)驗(yàn)的生存曲線，向患有嚴(yán)重sma的小鼠皮下注射給藥不同劑量的反義化合物。發(fā)明詳述應(yīng)當(dāng)理解，前述一般性說明和下文的詳細(xì)說明僅為示例和解釋性的，并非限制本發(fā)明所要求的權(quán)利。除非另外特別指明，本發(fā)明中單數(shù)的使用包括復(fù)數(shù)。如本發(fā)明中使用的，除非另有指明，使用的“或”是指“和/或”。另外，術(shù)語“包括”以及諸如“包含”和“含有”的使用為非限制性的。另外，除非另外特別指明，諸如“元件”或“組分”等術(shù)語涵蓋包括一個(gè)單元的元件和組分以及包括超過一個(gè)亞單元的元件和組分。本發(fā)明使用的章節(jié)標(biāo)題僅為了組織性目的，不應(yīng)解釋為限制所描述的主題。本申請(qǐng)中引用的所有文件或部分文件，包括但不限于專利、專利申請(qǐng)、論文、書籍以及專題論文等，在此明確地通過參考全文并入，用于任何目的。i.定義除非提供特殊定義，本發(fā)明所使用的術(shù)語與分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)以及醫(yī)用化學(xué)和藥物化學(xué)相關(guān)的術(shù)語及程序和技術(shù)均為本領(lǐng)域熟知和通用。標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)可用于化學(xué)合成和化學(xué)分析。某些此類的技術(shù)和程序可以在下列文獻(xiàn)中找到，例如“carbohydratemodificationsinantisenseresearch”editedbysangviandcook，americanchemicalsociety，washingtond.c.，1994；“remington′spharmaceuticalsciences”，mackpublishingco.，easton，pa.，18thedition，1990；和“antisensedrugtechnology，principles，strategies，andapplications”editedbystanleyt.crooke，crcpress，bocaraton，florida；以及sambrooketal.，“molecularcloning，alaboratorymanual，”2ndedition，coldspringharborlaboratorypress，1989，其出于任何目的通過引用全文并入。在允許的情況下，本文通篇公開內(nèi)容中所引用的所有專利、申請(qǐng)、公開的申請(qǐng)和其他出版物以及其他數(shù)據(jù)均通過引用全文并入本文。除非另有說明，下列術(shù)語具有以下含義：“核苷”指包含雜環(huán)堿基配基和糖配基的化合物。核苷包括，但不限于，天然存在的核苷、修飾核苷，以及具有模擬堿基和/或糖基的核苷。核苷可以被任意種類的取代基所修飾?！疤桥浠敝柑烊换蛐揎椀奶腔蛱翘娲铩！疤烊坏奶恰敝竏na(2’-h)或rna(2’-oh)的呋喃核糖配基。“修飾的糖”指呋喃核糖配基，其包含天然糖取代基以外的至少一個(gè)取代基?！疤翘娲铩敝赋秽颂且酝?、能夠替代核苷中的糖的結(jié)構(gòu)。糖替代物的例子包括，但不限于，開環(huán)系統(tǒng)、6元環(huán)、氧被取代的糖，例如氧被硫或氮取代。例如，糖替代物包括，但不限于嗎啉基取代和含4’-硫的糖?！昂藟A基”指核苷的雜環(huán)堿基部分。核堿基可以是天然存在的也可以是被修飾的。在某些實(shí)施方式中，核堿基可以包含能夠與另一個(gè)核酸的核堿基形成氫鍵的任意原子或基團(tuán)。“核苷酸”指包含磷酸酯連接基團(tuán)的核苷。在本申請(qǐng)中，核苷包括核苷酸。“修飾的核苷”指一種核苷，與天然存在的rna或dna核苷相比，其含有至少一種修飾。此類修飾可以位于糖配基中和/或位于核堿基中?！半p環(huán)核苷”或“bna”指一種核苷，其中所述核苷的糖配基包含一種橋，連接糖環(huán)中的兩個(gè)碳原子，以形成雙環(huán)糖配基。“4’-2’雙環(huán)核苷”指包含呋喃環(huán)的雙環(huán)核苷，所述呋喃環(huán)含有一種橋，連接呋喃環(huán)上的兩個(gè)碳原子，將糖環(huán)的2’位碳原子和4’位碳原子連接。“2’-修飾”或“2’-取代”指包含糖的核苷，所述糖在2’位含有除h或oh以外的取代基。“2’-ome”或“2’-och3”或“2’-o-甲基”均指包含糖的核苷，所述糖在糖環(huán)的2’位具有-och3基團(tuán)?！癿oe”或“2’-moe”或“2’-och2ch2och3”或“2’-o-甲氧乙基”均指包含糖的核苷，所述糖在糖環(huán)的2’位具有-och2ch2och3基團(tuán)?！肮押塑账帷敝赴鄠€(gè)連接的核苷的化合物。在某些實(shí)施方式中，多個(gè)核苷中的一個(gè)或更多個(gè)被修飾。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸包含一個(gè)或更多個(gè)核糖核苷酸(rna)和/或脫氧核糖核苷酸(dna)。“寡核苷”指核苷間連接均不含磷原子的寡核苷酸。在本申請(qǐng)中，寡核苷酸包括寡核苷。“修飾的寡核苷酸”指一種寡核苷酸，其包含至少一個(gè)修飾的核苷和/或至少一個(gè)修飾的核苷間連接?！昂塑臻g連接”指寡核苷酸的相鄰核苷之間的共價(jià)連接?！疤烊淮嬖诘暮塑臻g連接”指3′至5′的磷酸二酯鍵。“修飾的核苷間連接”指除天然存在的核苷間連接以外的任意核苷間連接?！肮丫刍衔铩敝赴押塑账岬幕衔铩Ｔ谀承?shí)施方式中，寡聚化合物由寡核苷酸組成。在某些實(shí)施方式中，寡聚化合物進(jìn)一步包含一個(gè)或多個(gè)綴合和/或末端基團(tuán)?！胺戳x化合物”指一種寡聚化合物，其至少有一部分是至少部分互補(bǔ)于其所雜交的靶核酸，其中此類雜交產(chǎn)生至少一種反義活性?！胺戳x寡核苷酸”指一種反義化合物，其中所述寡聚化合物由寡核苷酸組成?！胺戳x活性”指因反義化合物與其靶核酸雜交所獲得的任何可檢測(cè)和/或可測(cè)定的效應(yīng)。在某些實(shí)施方式中，這樣的反義活性是核酸或蛋白的量增加或減少。在某些實(shí)施方式中，這樣的反義活性是核酸或蛋白的剪接變體比率的改變。在某些實(shí)施方式中，這樣的反義活性是細(xì)胞和/或?qū)ο蟮谋硇透淖?。反義活性的“檢測(cè)”或“測(cè)定”可以是直接的或間接的。例如，在某些實(shí)施方式中，通過檢測(cè)和/或測(cè)定靶核酸或蛋白的量，或靶核酸或蛋白的剪接變體的相對(duì)量對(duì)反義活性進(jìn)行評(píng)估。在某些實(shí)施方式中，通過觀察細(xì)胞或動(dòng)物的表型改變情況對(duì)反義活性進(jìn)行檢測(cè)。術(shù)語“檢測(cè)”和“測(cè)定”與任何活性、應(yīng)答或效應(yīng)相關(guān)時(shí)，是指為檢測(cè)或測(cè)定進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。此類檢測(cè)和/或測(cè)定可以包括零值。因此，即使為檢測(cè)或測(cè)定而進(jìn)行的試驗(yàn)得到的結(jié)果為無活性(零活性)，然而檢測(cè)或測(cè)定活性的步驟已經(jīng)進(jìn)行?！鞍泻怂帷敝溉我夂怂岱肿?，其表達(dá)、量或活性能夠被反義化合物所調(diào)節(jié)?！鞍衜rna”指預(yù)先選定的編碼某蛋白的rna分子。“靶mrna前體”指預(yù)先選定的未被完全加工成mrna的rna轉(zhuǎn)錄物。值得注意的是，mrna前體包括一個(gè)或多個(gè)內(nèi)含子?！鞍械鞍住敝赣砂泻怂峋幋a的蛋白?！罢{(diào)節(jié)”指對(duì)功能或活性的干擾。在某些實(shí)施方式中，調(diào)節(jié)指增加基因表達(dá)。在某些實(shí)施方式中，調(diào)節(jié)指降低基因表達(dá)?！氨磉_(dá)”指任意功能和步驟，通過這樣的功能和步驟將基因編碼的信息轉(zhuǎn)化成細(xì)胞內(nèi)存在或操控的結(jié)構(gòu)。“核堿基序列”指連續(xù)核堿基從5’至3’方向的順序，其與任意糖、連接和/或核堿基修飾無關(guān)?！斑B續(xù)核堿基”指在核酸中彼此直接相鄰的核堿基?！昂藟A基的互補(bǔ)性”指兩個(gè)核堿基通過氫鍵形成非共價(jià)配對(duì)的能力?！盎パa(bǔ)的”是指第一核酸在嚴(yán)格的雜交條件下能夠與第二核酸雜交。例如，如果在嚴(yán)格的雜交條件下，反義化合物能夠與靶核酸雜交，則反義化合物與其靶核酸是互補(bǔ)的?！巴耆パa(bǔ)的”是指第一核酸的各個(gè)核堿基均能夠與第二核酸中各個(gè)相應(yīng)連續(xù)位點(diǎn)的核堿基配對(duì)。反義化合物的“互補(bǔ)性百分率”是指，反義化合物中與靶核酸的等長(zhǎng)部分互補(bǔ)的核堿基的百分率?；パa(bǔ)性百分率的計(jì)算方法為，將反義寡核苷酸中與靶核酸相應(yīng)連續(xù)位點(diǎn)的核堿基互補(bǔ)的核堿基的數(shù)目除以反義化合物的總長(zhǎng)?！巴恍园俜致省笔侵傅谝缓怂嶂信c第二核酸相應(yīng)位點(diǎn)具有相同核堿基的核堿基數(shù)目除以第一核酸中的核堿基總數(shù)。“雜交”指通過核堿基互補(bǔ)性進(jìn)行的互補(bǔ)核酸的退火?！板e(cuò)配”指第一核酸的核堿基無法與第二核酸相應(yīng)位點(diǎn)的核堿基進(jìn)行配對(duì)?！巴坏暮藟A基序列”指具有相同的核堿基序列，其與核苷的任何化學(xué)修飾無關(guān)?！安煌揎棥被颉安煌男揎棥敝负塑栈蚝塑臻g連接之間具有不同的核苷修飾或核苷間連接，包括無修飾。因此，例如，moe核苷和未修飾的dna核苷之間為“不同的修飾”，雖然dna核苷是未修飾的。同樣的，dna與rna之間為“不同的修飾”，即使它們均為天然存在的未修飾核苷。除包含不同的核堿基以外其他都相同的核苷不屬于不同的修飾，除非另有說明。例如，包含2’-ome修飾糖和腺嘌呤核堿基的核苷與包含2’-ome修飾糖和胸腺嘧啶堿基的核苷之間不屬于不同的修飾?！跋嗤揎棥敝赶嗷ブg相同的核苷和核苷間連接(包括未修飾的核苷和核苷間連接)。因此，例如，兩個(gè)未修飾的dna核苷具有“相同修飾”，即使dna核苷是未修飾的?！靶揎楊愋汀被蚝塑盏摹邦愋汀笔侵负塑盏男揎?，包括修飾的和未修飾的核苷。相應(yīng)地，除另有說明外，“具有第一修飾類型的核苷”可以是未修飾核苷。寡核苷酸的“分離區(qū)域”是指寡核苷酸的一部分，其中該區(qū)域內(nèi)的核苷和核苷間連接均包含相同的修飾：并且與其相鄰的任意部分的核苷和/或核苷間連接包含至少一種不同的修飾。“基序”指寡核苷酸中修飾和/或未修飾核堿基、糖和/或核苷間連接的樣式?！巴耆揎椀墓押塑账帷敝父骱藟A基、各糖、和/或各核苷間連接均被修飾?！熬恍揎椀墓押塑账帷敝冈谛揎椀墓押塑账嶂懈骱藟A基、各糖、和/或各核苷間連接均具有相同修飾?！敖惶娴幕颉敝腹押塑账峄蚱湟徊糠郑哂兄辽偎膫€(gè)修飾核苷的分離區(qū)域，其樣式為(ab)nam，其中a表示具有第一種修飾類型的核苷區(qū)域；b表示具有不同修飾類型的核苷區(qū)域；n為2-15；且m為0或1。因此，在某些實(shí)施方式中，交替的基序包括4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20或更多的交替區(qū)域。在某些實(shí)施方式中，各a區(qū)域和各b區(qū)域均獨(dú)立地包含1-4個(gè)核苷?！皩?duì)象”指入選進(jìn)行處理或治療的人或非人動(dòng)物?！靶枨髮?duì)象”指經(jīng)鑒定需要治療或處理的對(duì)象。在某些此類實(shí)施方式中，對(duì)象具有一種或多種指征，表明患有sma或正處于sma發(fā)展過程中?！敖o藥”指向?qū)ο筇峁┧幬锘蚪M合物，包括，但不限于，由專業(yè)醫(yī)師給藥和自我給藥?！澳c道外給藥”指通過注射或輸注給藥。腸道外給藥包括，但不限于，皮下給藥、靜脈給藥或肌內(nèi)給藥?！叭斫o藥”指對(duì)除目標(biāo)活性部位以外的區(qū)域給藥。全身給藥的例子為皮下給藥和靜脈給藥，以及腹腔給藥?！捌は陆o藥”指在皮膚之下給藥?！办o脈給藥”指給藥至靜脈?！澳X脊液”或“csf”指充滿腦和脊髓內(nèi)空間的液體?！敖o藥至腦脊液”指將物質(zhì)直接遞送至csf的任意給藥方法?！澳X室內(nèi)”或“icv”指給藥至大腦的腦室系統(tǒng)(ventricular)?！扒蕛?nèi)”或“it”指給藥至蛛網(wǎng)膜下腔的csf，蛛網(wǎng)膜覆蓋于腦和脊髓之上。通過脊髓的鞘進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔進(jìn)行it注射，將藥物試劑注射入脊髓周圍的鞘?！罢T導(dǎo)期”指一段給藥期，在此期間開始給藥，并且活性藥物在靶組織中達(dá)到穩(wěn)態(tài)濃度。例如，誘導(dǎo)期是指反義寡核苷酸在肝臟中達(dá)到穩(wěn)態(tài)濃度前的給藥期?！熬S持期”指藥物在靶組織中達(dá)到穩(wěn)態(tài)濃度以后的給藥期?！俺掷m(xù)時(shí)間”指活性或事件持續(xù)的時(shí)間。例如，誘導(dǎo)期的持續(xù)時(shí)間是指采用誘導(dǎo)劑量給藥的時(shí)間?！熬S持劑量”是指在維持期內(nèi)進(jìn)行單次給藥的劑量。在本申請(qǐng)中，“誘導(dǎo)劑量”指在誘導(dǎo)期內(nèi)進(jìn)行單次給藥的劑量?！奥?lián)合給藥”指向?qū)ο蠼o藥兩種或更多種藥物。兩種或更多種藥物可以在一個(gè)藥物組合物中，或可以在不同的藥物組合物中。所述兩種或多種藥物的每一種可以通過相同或不同的途徑給藥。聯(lián)合給藥包括平行或順序給藥?！疤幚怼敝讣膊〉闹委煼椒?。在某些實(shí)施方式中，處理包括，但不限于手術(shù)處理、化學(xué)處理、和物理干預(yù)，如輔助呼吸、插導(dǎo)管、以及出于增強(qiáng)體質(zhì)目的的物理處理?！爸委煛敝甘褂靡环N或多種特定的程序，用于治愈或改善疾病。在某些實(shí)施方式中，特定的程序?yàn)榻o藥一種或多種藥物?！案纳啤敝笢p輕疾病或狀態(tài)的至少一種指征的嚴(yán)重性。在某些實(shí)施方式中，改善包括延遲或減緩疾病或狀態(tài)的一種或更多種指征的進(jìn)程。指征的嚴(yán)重性可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)的主觀或客觀檢測(cè)方法確定?！白柚拱l(fā)病”指阻止處于疾病或狀態(tài)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)中的對(duì)象發(fā)展出疾病或狀態(tài)。在某些實(shí)施方式中，處于疾病或狀態(tài)風(fēng)險(xiǎn)中的對(duì)象接受的治療與已經(jīng)患有疾病或狀態(tài)的對(duì)象接受的治療類似。“延遲發(fā)病”指延遲處于疾病或狀態(tài)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)中的對(duì)象發(fā)展出疾病或狀態(tài)。“減慢進(jìn)展”指與疾病或狀態(tài)相關(guān)的至少一種癥狀的嚴(yán)重性的惡化速度減慢?！巴怙@子7氨基酸”指與smnrna的外顯子7對(duì)應(yīng)的smn蛋白部分。在剪接過程中外顯子7未被排除時(shí)，smnrna表達(dá)的smn蛋白中存在有外顯子7氨基酸?！皊mn蛋白”指正常全長(zhǎng)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白。smn可以由smn1基因或smn2基因表達(dá)，前提是成熟mrna中存在外顯子7，且smn蛋白中存在外顯子7氨基酸?！皠┝俊敝冈趩未谓o藥中或在一段特定時(shí)間內(nèi)提供的藥物的特定量。在某些實(shí)施方式中，可以通過兩次或更多推注注射、片劑或注射給藥劑量。例如，在某些實(shí)施方式中，在希望皮下或鞘內(nèi)或icv給藥時(shí)，希望的劑量所需要的體積難以通過單次注射來調(diào)節(jié)。在此類實(shí)施方式中，可以使用兩次或更多注射以達(dá)到希望的劑量。在連續(xù)輸注裝置中，可以將劑量表示為在單位時(shí)間內(nèi)遞送的藥物的量?！皠┝繂挝弧敝柑峁┧幬锏男问健Ｔ谀承?shí)施方式中，劑量單位為含有凍干寡核苷酸的小管。在某些實(shí)施方式中，劑量單位指含有復(fù)溶寡核苷酸的小管。“治療有效量”指向動(dòng)物提供治療效果的藥物的量?！八幬锝M合物”指適合給藥于個(gè)體的包含藥物的物質(zhì)混合物。例如，藥物組合物可以包含修飾寡核苷酸和無菌水溶液?！翱山邮艿陌踩浴敝父弊饔玫臉邮皆谂R床可以接受的限度內(nèi)?！案弊饔谩敝钢委煂?dǎo)致的除所需效應(yīng)以外的生理應(yīng)答。1.某些修飾的寡核苷酸在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包括包含反義寡核苷酸的方法和組合物，與由天然存在的寡聚體形成的寡核苷酸相比，如dna或rna，所述反義寡核苷酸具有一種或多種修飾。此類修飾的反義寡核苷酸可以具有一種或多種優(yōu)選的性質(zhì)。某些此類修飾改變反義寡核苷酸的反義活性，例如增加反義寡核苷酸與其靶核酸的親和性、增強(qiáng)其對(duì)一種或多種核酸酶的抗性、和/或改變寡核苷酸的藥代動(dòng)力學(xué)或組織分布性質(zhì)。在某些實(shí)施方式中，此類修飾的反義寡核苷酸包含一種或多種修飾的核苷和/或一種或多種修飾的核苷連接和/或一種或多種綴合基團(tuán)。a.某些修飾的核苷在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸包含一種或多種修飾的核苷。此類修飾的核苷可以包括修飾的糖和/或修飾的核堿基。在某些實(shí)施方式中，在寡核苷酸中摻入此類修飾核苷可以使得修飾的寡核苷酸對(duì)靶核酸具有更高的親和性和/或更強(qiáng)的穩(wěn)定性，包括但不限于，對(duì)核酸酶降解具有更高的抗性、和/或具有改進(jìn)的毒性和/或攝取特性。i.某些核堿基核苷中天然存在的堿基部分為雜環(huán)堿基，一般為嘌呤和嘧啶。除“未修飾”的或“天然”的核堿基如嘌呤核堿基腺嘌呤(a)和鳥嘌呤(g)，以及嘧啶核堿基胸腺嘧啶(t)、胞嘧啶(c)和尿嘧啶(u)以外，在本發(fā)明所述的化合物中還可以摻入本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的多種修飾的核堿基或核堿基模擬物。在某些實(shí)施方式中，修飾的核堿基為結(jié)構(gòu)與母體核堿基非常類似的核堿基，例如7-脫氮雜嘌呤、5-甲基胞嘧啶、或g-夾鉗。在某些實(shí)施方式中，核堿基模擬物包括更加復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，例如三環(huán)吩噁嗪核堿基模擬物。上文所述的修飾核堿基的制備方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。ii.某些修飾的糖和糖替代物本發(fā)明的反義寡核苷酸可以任選地含有一種或更多種核苷，其與天然糖相比，其中的糖配基被修飾。包含此類糖修飾核苷的寡核苷酸可以具有增強(qiáng)的核酸酶穩(wěn)定性、具有增強(qiáng)的結(jié)合親和性或某些其他有益的生物學(xué)性質(zhì)。此類修飾包括但不限于，添加其他取代基團(tuán)、將非成對(duì)環(huán)原子橋接以形成雙環(huán)核酸(bna)、將核糖環(huán)中的氧原子用s、n(r)或c(r1)(r)2(r＝h、c1-c12烷基或保護(hù)基團(tuán))以及這些組合取代，例如2′-f-5′-甲基取代核苷(其他公開的5′，2′-雙取代核苷參見公開于8/21/08的pct國(guó)際申請(qǐng)wo2008/101157)，或者將核糖環(huán)中的氧原子用s取代并進(jìn)一步在2′-位進(jìn)行取代(參見公開的美國(guó)專利申請(qǐng)us2005-0130923，公開日2005年6月16日)，或者在bna的5′-取代(參見pct國(guó)際申請(qǐng)wo2007/134181，公開日11/22/07，其中l(wèi)na被例如5′-甲基或5′-乙烯基基團(tuán)取代)。具有修飾糖配基的核苷的例子包括但不限于包含5′-乙烯基、5′-甲基(r或s)、4′-s、2′-f、2′-och3和2′-o(ch2)2och3取代基團(tuán)的核苷。2’位的取代基還可以選自烯丙基、氨基、疊氮基、硫代、o-烯丙基、o-c1-c10烷基、ocf3、o(ch2)2sch3、o(ch2)2-o-n(rm)(rn)、和o-ch2-c(＝o)-n(rm)(rn)，其中各rm和rn獨(dú)立地為h或取代或非取代的c1-c10烷基。雙環(huán)核酸(bna)的例子包括但不限于在4′和2′核糖環(huán)原子之間具有橋接的核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明所述的反義化合物包括一種或多種bna核苷，其中橋接包括下式之一：4′-β-d-(ch2)-o-2′(β-d-lna)；4′-(ch2)-s-2′；4’-α-l-(ch2)-o-2’(α-l-lna)；4’-(ch2)2-o-2’(ena)；4’-c(ch3)2-o-2’(參見pct/us2008/068922)；4’-ch(ch3)-o-2’和4’-c-h(ch2och3)-o-2’(參見美國(guó)專利7,399,845，2008年7月15日授權(quán))；4’-ch2-n(och3)-2’(參見pct/us2008/064591)；4’-ch2-o-n(ch3)-2’(參見公開的美國(guó)專利申請(qǐng)us2004-0171570，2004年9月2日公開)；4’-ch2-n(r)-o-2’(參見美國(guó)專利7,427,672，2008年9月23日授權(quán))；4’-ch2-c(ch3)-2’和4’-ch2-c(＝ch2)-2’(參見pct/us2008/066154)；以及其中r獨(dú)立地為h、c1-c12烷基、或保護(hù)基團(tuán)。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包含修飾糖配基的修飾核苷，其中所述修飾糖配基不是雙環(huán)糖配基。某些此類修飾的核苷是已知的。在某些實(shí)施方式中，核苷的糖環(huán)可以在任意位置被修飾。可以在本發(fā)明中使用的糖修飾的例子包括，但不限于，含有選自下述糖取代基團(tuán)的化合物：oh、f、o-烷基、s-烷基、n-烷基或o-烷基-o-烷基，其中的烷基、烯基和炔基可以是取代或非取代的c1至c10烷基或c2至c10烯基和炔基。在某些此類實(shí)施方式中，此類取代基在糖的2’位。在某些實(shí)施方式中，修飾核苷在糖的2’位具有取代基。在某些實(shí)施方式中，這樣的取代基選自：鹵素(包括，但不限于f)、烯丙基、氨基、疊氮基、硫代、o-烯丙基、o-c1-c10烷基、-ocf3、o-(ch2)2-o-ch3、2′-o(ch2)2sch3、o-(ch2)2-o-n(rm)(rn)、或o-ch2-c(＝o)-n(rm)(rn)，其中各rm和rn獨(dú)立地為h或取代或非取代的c1-c10烷基。在某些實(shí)施方式中，適用于本發(fā)明的修飾核苷為：2-甲氧乙氧基、2’-o-甲基(2’-o-ch3)、2’-氟代(2’-f)。在某些實(shí)施方式中，修飾核苷在2′-位具有的取代基選自：o[(ch2)no]mch3、o(ch2)nnh2、o(ch2)nch3、o(ch2)nonh2、och2c(＝o)n(h)ch3、和o(ch2)non[(ch2)nch3]2，其中n和m為1至約10。其他2′-糖取代基團(tuán)包括：c1至c10烷基、取代烷基、烯基、炔基、烷芳基、芳烷基、o-烷芳基或o-芳烷基、sh、sch3、ocn、cl、br、cn、cf3、ocf3、soch3、so2ch3、ono2、no2、n3、nh2、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷芳基、氨烷基氨基、聚烷氨基、取代甲硅烷基、rna剪切基團(tuán)、報(bào)告基團(tuán)、插入劑、用于改善藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的基團(tuán)或用于改善寡聚化合物藥效學(xué)性質(zhì)的基團(tuán)、以及具有類似性質(zhì)的其他取代基。在某些實(shí)施方式中，修飾核苷包含2’-moe側(cè)鏈(bakeretal.，j.biol.chem.，1997，272，11944-12000)。已有報(bào)道，此類2′-moe取代比未修飾的核苷和其他修飾核苷，如2’-o-甲基、o-丙基、和o-氨基丙基具有更好的結(jié)合親和性。具有2′-moe取代的寡核苷酸還可以作為基因表達(dá)的反義抑制劑，其特性有望在體內(nèi)使用(martin，p.，helv.chim.acta，1995，78，486-504；altmannetal.，chimia，1996，50，168-176；altmannetal.，biochem.soc.trans.，1996，24，630-637；以及altmannetal.，nucleosidesnucleotides，1997，16，917-926)。在某些實(shí)施方式中，2′-糖取代基團(tuán)可以位于阿拉伯糖(上)位或核糖(下)位。在某些此類實(shí)施方式中，2′-阿拉伯糖修飾為2′-f阿拉伯糖(fana)。類似的修飾還可以位于糖的其他位置，特別是在3′末端核苷或2′-5′連接的寡核苷酸的糖的3′位，以及在5′末端核苷酸的5′位。在某些實(shí)施方式中，適用于本發(fā)明的核苷具有糖替代物如環(huán)丁基，以替代呋喃核糖基糖。教導(dǎo)制備此類修飾糖結(jié)構(gòu)的美國(guó)專利的例子包括，但不限于，美國(guó)專利4,981,957；5,118,800；5,319,080；5,359,044；5,393,878；5,446,137；5,466,786；5,514,785；5,519,134；5,567,811；5,576,427；5,591,722；5,597,909；5,610,300；5,627,053；5,639,873；5,646,265；5,658,873；5,670,633；5,792,747；和5,700,920，每一篇都通過引用全文參考并入。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供在糖的2’-位具有修飾的核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供在糖的5’-位具有修飾的核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了在糖的2’-位和5’-位都具有修飾的核苷。在某些實(shí)施方式中，修飾的核苷可以用于摻入寡核苷酸。在某些實(shí)施方式中，修飾的核苷摻入到位于寡核苷酸5’-末端的寡核苷。b.某些核苷間連接本發(fā)明的反義寡核苷酸可以任選地含有一種或更多種修飾的核苷間連接。根據(jù)存在或不存在磷原子，將連接基團(tuán)定義為兩個(gè)主要的分類。具有代表性的含磷連接包括，但不限于，磷酸二酯(p＝o)、磷酸三酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯、和硫代磷酸酯(p＝s)。具有代表性的不含磷的連接基團(tuán)包括，但不限于，亞甲基甲基亞胺基(-ch2-n(ch3)-o-ch2-)、硫代二酯(-o-c(o)-s-)、硫羰氨基甲酸酯(-o-c(o)(nh)-s-)；硅氧烷(-o-si(h)2-o-)；以及n，n′-二甲肼(-ch2-n(ch3)-n(ch3)-)。將具有非磷連接基團(tuán)的寡核苷酸稱為寡核苷。與天然磷酸二酯鍵相比，修飾的連接可以改變，通常為增加，寡核苷酸對(duì)核酸酶的抗性。在某些實(shí)施方式中，具有手性原子的連接可以被制備為外消旋混合物，或制備為單獨(dú)的對(duì)映異構(gòu)體。具有代表性的手性連接包括，但不限于，烷基膦酸酯和硫代磷酸酯。含磷和非含磷連接的制備方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。本文所述的反義寡核苷酸含有一個(gè)或更多個(gè)不對(duì)稱的中心，因此產(chǎn)生了對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體和依據(jù)絕對(duì)立體化學(xué)可以被定義為(r)或(s)的其他立體異構(gòu)構(gòu)型，如糖端基異構(gòu)體，或可以被定義為(d)或(l)的其他立體異構(gòu)構(gòu)型，如氨基酸等。本文的反義化合物中可包括所有此類可能的異構(gòu)體，及其外消旋體以及光學(xué)純形式。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有至少一個(gè)修飾的核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有至少兩個(gè)修飾的核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有至少3個(gè)修飾的核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有至少10個(gè)修飾的核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸的各核苷間連接均為修飾的核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，此類修飾的核苷間連接為硫代磷酸酯連接。c.長(zhǎng)度在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的反義寡核苷酸具有任意多種范圍的長(zhǎng)度。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的反義化合物或反義寡核苷酸包含x-y連接的核苷或者由x-y連接的核苷組成，其中x和y均獨(dú)立地選自8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、和50；其中x＜y。例如，在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的反義化合物或反義寡核苷酸包含下述核苷或由下述核苷組成：8-9、8-10、8-11、8-12、8-13、8-14、8-15、8-16、8-17、8-18、8-19、8-20、8-21、8-22、8-23、8-24、8-25、8-26、8-27、8-28、8-29、8-30、9-10、9-11、9-12、9-13、9-14、9-15、9-16、9-17、9-18、9-19、9-20、9-21、9-22、9-23、9-24、9-25、9-26、9-27、9-28、9-29、9-30、10-11、10-12、10-13、10-14、10-15、10-16、10-17、10-18、10-19、10-20、10-21、10-22、10-23、10-24、10-25、10-26、10-27、10-28、10-29、10-30、11-12、11-13、11-14、11-15、11-16、11-17、11-18、11-19、11-20、11-21、11-22、11-23、11-24、11-25、11-26、11-27、11-28、11-29、11-30、12-13、12-14、12-15、12-16、12-17、12-18、12-19、12-20、12-21、12-22、12-23、12-24、12-25、12-26、12-27、12-28、12-29、12-30、13-14、13-15、13-16、13-17、13-18、13-19、13-20、13-21、13-22、13-23、13-24、13-25、13-26、13-27、13-28、13-29、13-30、14-15、14-16、14-17、14-18、14-19、14-20、14-21、14-22、14-23、14-24、14-25、14-26、14-27、14-28、14-29、14-30、15-16、15-17、15-18、15-19、15-20、15-21、15-22、15-23、15-24、15-25、15-26、15-27、15-28、15-29、15-30、16-17、16-18、16-19、16-20、16-21、16-22、16-23、16-24、16-25、16-26、16-27、16-28、16-29、16-30、17-18、17-19、17-20、17-21、17-22、17-23、17-24、17-25、17-26、17-27、17-28、17-29、17-30、18-19、18-20、18-21、18-22、18-23、18-24、18-25、18-26、18-27、18-28、18-29、18-30、19-20、19-21、19-22、19-23、19-24、19-25、19-26、19-29、19-28、19-29、19-30、20-21、20-22、20-23、20-24、20-25、20-26、20-27、20-28、20-29、20-30、21-22、21-23、21-24、21-25、21-26、21-27、21-28、21-29、21-30、22-23、22-24、22-25、22-26、22-27、22-28、22-29、22-30、23-24、23-25、23-26、23-27、23-28、23-29、23-30、24-25、24-26、24-27、24-28、24-29、24-30、25-26、25-27、25-28、25-29、25-30、26-27、26-28、26-29、26-30、27-28、27-29、27-30、28-29、28-30、或29-30個(gè)連接的核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物或反義寡核苷酸的長(zhǎng)度為15個(gè)核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物或反義寡核苷酸的長(zhǎng)度為16個(gè)核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物或反義寡核苷酸的長(zhǎng)度為17個(gè)核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物或反義寡核苷酸的長(zhǎng)度為18個(gè)核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物或反義寡核苷酸的長(zhǎng)度為19個(gè)核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物或反義寡核苷酸的長(zhǎng)度為20個(gè)核苷。d.某些寡核苷酸基序在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有的化學(xué)修飾的亞基沿著其長(zhǎng)度以特定方向排列。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義寡核苷酸是完全修飾的。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物是均一修飾的。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物是均一修飾的且各核苷包含2’-moe糖配基。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義寡核苷酸是均一修飾的且各核苷包含2’-ome糖配基。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義寡核苷酸是均一修飾的且各核苷包含嗎啉取代糖配基。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的寡核苷酸包含交替的基序。在某些此類實(shí)施方式中，交替的修飾類型選自2’-moe、2’-f、雙環(huán)糖修飾核苷、和dna(未修飾的2’-脫氧)。在某些此類實(shí)施方式中，各交替的區(qū)域包含單一核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的寡核苷酸包含一個(gè)或更多個(gè)第一類型核苷區(qū)和一個(gè)或更多個(gè)第二類型核苷區(qū)。在某些實(shí)施方式中，在交替的基序中，一個(gè)或多個(gè)交替的區(qū)域包括某類型的多于一個(gè)的核苷。例如，本發(fā)明的寡聚化合物可以包含下述核苷基序中任一種的一個(gè)或更多個(gè)區(qū)域：nu1nu1nu2nu2nu1nu1；nu1nu2nu2nu1nu2nu2；nu1nu1nu2nu1nu1nu2；nu1nu2nu2nu1nu2nu1nu1nu2nu2；nu1nu2nu1nu2nu1nu1；nu1nu1nu2nu1nu2nu1nu2；nu1nu2nu1nu2nu1nu1；nu1nu2nu2nu1nu1nu2nu2nu1nu2nu1nu2nu1nu1；nu2nu1nu2nu2nu1nu1nu2nu2nu1nu2nu1nu2nu1nu1；或nu1nu2nu1nu2nu2nu1nu1nu2nu2nu1nu2nu1nu2nu1nu1；其中nu1為第一類型的核苷且nu2為第二類型的核苷。在某些實(shí)施方式中，nu1和nu2中的一個(gè)為2’-moe核苷且nu1和nu2中的另一個(gè)選自：2’-ome修飾的核苷、bna和未修飾的dna或rna核苷。2.寡聚化合物在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供寡聚化合物。在某些實(shí)施方式中，寡聚化合物僅包含寡核苷酸。在某些實(shí)施方式中，寡聚化合物包含寡核苷酸和一種或更多種綴合和/或末端基團(tuán)。在上文所討論的具有任意化學(xué)基序的寡核苷酸中可以插入此類綴合和/或末端基團(tuán)。因此，例如，包含具有交替核苷區(qū)域的寡核苷酸的寡聚化合物可以包含末端基團(tuán)。a.某些綴合基團(tuán)在某些實(shí)施方式中，通過連接一個(gè)或更多個(gè)綴合基團(tuán)對(duì)本發(fā)明的寡核苷酸進(jìn)行修飾。一般而言，綴合基團(tuán)可修飾與之連接的寡聚化合物的一種或多種性質(zhì)，包括但不限于，藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)、穩(wěn)定性、結(jié)合、吸收、細(xì)胞分布、細(xì)胞攝取、電荷和清除率。綴合基團(tuán)在化學(xué)領(lǐng)域被常規(guī)使用，且與母體化合物直接連接，或通過任選的綴合連接配基或綴合連接基團(tuán)相連接，母體化合物例如寡聚化合物，如寡核苷酸。綴合基團(tuán)包括但不限于，插入劑、報(bào)告分子、聚胺、聚酰胺、聚乙二醇、硫醚、聚醚、膽固醇、硫代膽固醇、膽酸配基、葉酸酯、脂質(zhì)、磷脂、生物素、吩嗪、菲啶、蒽醌、金剛烷胺、吖啶、熒光素、羅丹明、香豆素和染料。某些綴合基團(tuán)此前已被描述，例如：膽固醇配基(letsingeretal.，proc.natl.acad.sci.usa，1989，86，6553-6556)、膽酸(manoharanetal.，bioorg.med.chem.let.，1994，4，1053-1060)、硫醚，例如，己基-s-三硫醇(manoharanetal.，ann.n.y.acad.sci.，1992，660，306-309；manoharanetal.，bioorg.med.chem.let.，1993，3，2765-2770)、硫代膽固醇(oberhauseretal.，nucl.acidsres.，1992，20，533-538)、脂肪鏈，例如，十二烷基二醇或十一烷基殘基(saison-behmoarasetal.，emboj.，1991，10，1111-1118；kabanovetal.，febslett.，1990，259，327-330；svinarchuketal.，biochimie，1993，75，49-54)、磷脂，例如，雙十六烷基-rac-甘油或三乙基-銨1，2-雙-o-十六烷基-rac-甘油-3-h-膦酸酯(manoharanetal.，tetrahedronlett.，1995，36，3651-3654；sheaetal.，nucl.acidsres.，1990，18，3777-3783)、聚胺或聚乙二醇鏈(manoharanetal.，nucleosides&nucleotides，1995，14，969-973)、金剛烷胺乙酸(manoharanetal.，tetrahedronlett.，1995，36，3651-3654)、棕櫚酰配基(mishraetal.，biochim.biophys.acta，1995，1264，229-237)、或十八胺或己基氨基-羰基-羥膽固醇配基(crookeetal.，j.pharmacol.exp.ther.，1996，277，923-937)。在某些實(shí)施方式中，綴合基團(tuán)包含活性藥物，例如，阿司匹林、華法林、保泰松、布洛芬、舒洛芬、芬布芬、酮洛芬、(s)-(+)-吡喃洛芬、卡洛芬、丹肌氨酸、2，3，5-三碘苯甲酸、氟芬那酸、亞葉酸、苯并噻二嗪、氯噻嗪、二氮雜卓、吲哚美辛、巴比妥酸鹽、頭孢菌素、磺胺類藥物、抗糖尿病藥、抗菌劑或抗生素。寡核苷酸-藥物綴合物及其制備方法參見美國(guó)專利申請(qǐng)09/334,130。教導(dǎo)寡核苷酸綴合物制備方法的具有代表性的美國(guó)專利包括，但不限于，美國(guó)專利：4,828,979；4,948,882；5,218,105；5,525,465；5,541,313；5,545,730；5,552,538；5,578,717，5,580,731；5,580,731；5,591,584；5,109,124；5,118,802；5,138,045；5,414,077；5,486,603；5,512,439；5,578,718；5,608,046；4,587,044；4,605,735；4,667,025；4,762,779；4,789,737；4,824,941；4,835,263；4,876,335；4,904,582；4,958,013；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,245,022；5,254,469；5,258,506；5,262,536；5,272,250；5,292,873；5,317,098；5,371,241，5,391,723；5,416,203，5,451,463；5,510,475；5,512,667；5,514,785；5,565,552；5,567,810；5,574,142；5,585,481；5,587,371；5,595,726；5,597,696；5,599,923；5,599,928和5,688,941。綴合基團(tuán)可以連接于寡核苷酸的任一個(gè)或兩個(gè)末端(末端綴合基團(tuán))和/或任意內(nèi)部位點(diǎn)。b.末端基團(tuán)在某些實(shí)施方式中，寡聚化合物的一個(gè)或兩個(gè)末端包含末端基團(tuán)。在某些實(shí)施方式中，末端基團(tuán)可以包含上文所述的任意綴合基團(tuán)。在某些實(shí)施方式中，末端基團(tuán)可以包含附加的核苷和/或反向無堿基核苷。在某些實(shí)施方式中，末端基團(tuán)為穩(wěn)定基團(tuán)。在某些實(shí)施方式中，寡聚化合物包含一種或更多種末端穩(wěn)定基團(tuán)，其能夠增強(qiáng)諸如核酸酶穩(wěn)定性等特性。穩(wěn)定基團(tuán)包括帽結(jié)構(gòu)。本文使用的術(shù)語“帽結(jié)構(gòu)”或“末端帽配基”是指可以連接到寡聚化合物的一個(gè)或兩個(gè)末端的化學(xué)修飾。某些此類末端修飾可以保護(hù)具有末端核酸配基的寡聚化合物不受外切核酸酶的降解，且可以幫助其在細(xì)胞內(nèi)的遞送和/或定位。帽可以存在于5′-末端(5′-帽)或3′-末端(3′-帽)或可以存在于兩個(gè)末端(更詳細(xì)的內(nèi)容參見wincottetal.，國(guó)際pct公開號(hào)wo97/26270；beaucageandtyer，1993，tetrahedron49，1925；美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)us2005/0020525；以及wo03/004602)。在某些實(shí)施方式中，將一個(gè)或更多個(gè)附加的核苷加入寡聚化合物的寡核苷酸的一個(gè)或兩個(gè)末端。此類附加的末端核苷在本文中稱為末端基團(tuán)核苷。在雙鏈化合物中，此類末端基團(tuán)核苷是末端(3’和/或5’)突出。在雙鏈反義化合物中，此類末端基團(tuán)核苷可以與靶核酸互補(bǔ)或不互補(bǔ)。在某些實(shí)施方式中，末端基團(tuán)為非核苷末端基團(tuán)。此類非末端基團(tuán)可以為除核苷以外的任意末端基團(tuán)。c.寡聚化合物基序在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的寡聚化合物包含基序：t1-(nu1)n1-(nu2)n2-(nu1)n3-(nu2)n4-(nu1)n5-t2，其中：nu1，為第一類型的核苷；nu2，為第二類型的核苷；每一個(gè)n1和n5均獨(dú)立地為0至3；n2與n4之和在10至25之間；n3為0至5；以及每一個(gè)t1和t2均獨(dú)立地為h、羥基保護(hù)基團(tuán)，任選地連接的綴合基團(tuán)或加帽基團(tuán)。在此類實(shí)施方式中，n2和n4之和為13或14；n1為2；n3為2或3；以及n5為2。在某些此類實(shí)施方式中，本發(fā)明的寡聚化合物包含選自表a的基序。表a旨在說明，而并非是對(duì)本發(fā)明進(jìn)行限制。表a描述的寡聚化合物均包含20個(gè)核苷。通過對(duì)n1-n5中的一個(gè)或多個(gè)選擇不同數(shù)量的核苷，可以很容易地設(shè)計(jì)包含或多或少核苷的寡聚化合物。在某些實(shí)施方式中，nu1和nu2均選自如下：2’-moe、2’-ome、dna、和雙環(huán)核苷。3.反義的在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的寡聚化合物為反義化合物。相應(yīng)地，在此類實(shí)施方式中，寡聚化合物與靶核酸雜交，導(dǎo)致產(chǎn)生反義活性。a.雜交在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供與靶核酸特異性雜交的反義化合物，在特異性結(jié)合所需的條件下，即進(jìn)行體內(nèi)檢測(cè)或治療時(shí)的生理?xiàng)l件，以及進(jìn)行體外檢測(cè)時(shí)的檢測(cè)條件，其互補(bǔ)性程度足以避免反義化合物與非靶核酸序列發(fā)生非特異性結(jié)合。因此，“嚴(yán)格雜交條件”或“嚴(yán)格條件”指反義化合物與靶序列雜交，而與其他序列雜交最少時(shí)的條件。嚴(yán)格條件具有序列依賴性，且在不同條件下有所不同，反義寡核苷酸與靶序列雜交的“嚴(yán)格條件”取決于反義寡核苷酸的性質(zhì)和成分，以及用來對(duì)其進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)方法。本領(lǐng)域公知，與未修飾化合物相比，摻入核苷酸親和性修飾可以允許更多數(shù)量的錯(cuò)配。類似地，某些核堿基序列與其他核堿基序列相比可以耐受更多的錯(cuò)配。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠確定寡核苷酸之間、或反義寡核苷酸與靶核酸之間適宜數(shù)量的錯(cuò)配，如通過確定熔點(diǎn)(tm)來確定。tm或δtm的計(jì)算方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。例如，freieretal.(nucleicacidsresearch，1997，25，22：4429-4443)描述的技術(shù)教導(dǎo)本領(lǐng)域技術(shù)人員評(píng)估核苷酸的修飾對(duì)rna：dna雙螺旋熔點(diǎn)的提升能力。b.mrna前體的加工在某些實(shí)施方式中，本文提供的反義化合物與mrna前體互補(bǔ)。在某些實(shí)施方式中，此類反義化合物改變mrna前體的剪接。在某些此類實(shí)施方式中，與靶mrna前體對(duì)應(yīng)的成熟mrna的一種變體與該成熟mrna的另一種變體的比率被改變。在某些此類實(shí)施方式中，由靶mrna前體表達(dá)的蛋白的一種變體與該蛋白的另一種變體的比率被改變。某些可以用于改變mrna前體剪接的寡聚化合物和核堿基序列的例子可以見于us6,210,892；us5,627,274；us5,665,593；5,916,808；us5,976,879；us2006/0172962；us2007/002390；us2005/0074801；us2007/0105807；us2005/0054836；wo2007/090073；wo2007/047913，huaetal.，plosbiol5(4)：e73；vickersetal.，j.immunol.2006mar15；176(6)：3652-61；以及huaetal.，americanj.ofhumangenetics(2008年4月)82，1-15，以上的每一篇都通過全文參考并入，用于任何目的。在某些實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的基序?qū)Ω淖兗艚拥姆戳x序列進(jìn)行修飾。反義技術(shù)是用于調(diào)節(jié)一種或多種特定基因產(chǎn)物表達(dá)的有效方法，且其在多種治療、診斷和研究應(yīng)用上具有獨(dú)特的作用。通過反義作用機(jī)制，包括基于靶點(diǎn)占據(jù)的反義機(jī)制，本文提供的反義化合物可用于調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。在一方面，本文提供的反義化合物調(diào)節(jié)靶基因的剪接。此類調(diào)節(jié)包括促進(jìn)或抑制外顯子的包含。本文進(jìn)一步提供了一些反義化合物，其靶向作用于mrna前體分子中存在的順式剪接調(diào)節(jié)元件，包括外顯子剪接增強(qiáng)子、外顯子剪接沉默子、內(nèi)含子剪接增強(qiáng)子和內(nèi)含子剪接沉默子。順式剪接調(diào)節(jié)元件的破壞被認(rèn)為可以改變剪接位點(diǎn)的選擇，其可以導(dǎo)致剪接產(chǎn)物組成的改變。真核mrna前體的加工是一個(gè)復(fù)雜的過程，其需要多種信號(hào)和蛋白因子，以實(shí)現(xiàn)適宜的mrna剪接。剪接體對(duì)外顯子的定義不僅僅需要定義內(nèi)含子-外顯子邊界的標(biāo)準(zhǔn)剪接信號(hào)。一種此類附加信號(hào)是順式作用調(diào)節(jié)增強(qiáng)子和沉默子序列。經(jīng)鑒定，外顯子剪接增強(qiáng)子(ese)、外顯子剪接沉默子(ess)、內(nèi)含子剪接增強(qiáng)子(ise)和內(nèi)含子剪接沉默子(iss)可以抑制或增強(qiáng)剪接供體位點(diǎn)或剪接受體位點(diǎn)的使用，取決于其位點(diǎn)和作用模式(yeoetal.2004，proc.natl.acad.sci.美國(guó)a.101(44)：15700-15705)。特定蛋白(反式因子)與這些調(diào)節(jié)序列的結(jié)合支配剪接過程，促進(jìn)或抑制特定剪接位點(diǎn)的使用，從而調(diào)節(jié)剪接產(chǎn)物的比率(scamborovaetal.2004，mol.cell.biol.24(5)：1855-1869；hovhannisyanandcarstens，2005，mol.cell.biol.25(1)：250-263；minovitskyetal.2005，nucleicacidsres.33(2)：714-724)。4.藥物組合物在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包含一種或多種反義化合物的藥物組合物。在某些實(shí)施方式中，此類藥物組合物包含無菌鹽水溶液和一種或多種反義化合物。在某些實(shí)施方式中，此類藥物組合物由無菌鹽水溶液和一種或多種反義化合物組成。在某些實(shí)施方式中，可以將反義化合物與藥學(xué)上可接受的活性和/或惰性物質(zhì)混合，用于制備藥物組合物或制劑。用于藥物組合物制劑的組合物和方法取決于多種標(biāo)準(zhǔn)，包括但不限于，給藥途徑、疾病程度或給藥劑量。在某些實(shí)施方式中，可以通過將此類寡聚化合物與適宜的藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體進(jìn)行組合，從而將反義化合物用于藥物組合物中。藥學(xué)上可接受的稀釋劑包括磷酸鹽緩沖液(pbs)。pbs是一種稀釋劑，適用于經(jīng)腸道外遞送的組合物。相應(yīng)地，在某些實(shí)施方式中，在本文所述的方法中使用的藥物組合物包含反義化合物和藥學(xué)上可接受的稀釋劑。在某些實(shí)施方式中，藥學(xué)上可接受的稀釋劑為pbs。含有反義化合物的藥物組合物包含任意藥學(xué)上可接受鹽、酯、或此類酯的鹽。在某些實(shí)施方式中，含有反義化合物的藥物組合物包含一種或多種寡核苷酸，當(dāng)所述寡核苷酸給藥于動(dòng)物，包括人時(shí)，可以(直接地或間接地)提供生物學(xué)活性代謝產(chǎn)物或其殘留物。相應(yīng)地，例如，本發(fā)明還提供反義化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，前藥、此類前藥的藥學(xué)上可接受的鹽，以及其他生物等效物。適宜的藥學(xué)上可接受的鹽包括，但不限于，鈉鹽和鉀鹽。前藥可以在寡聚化合物的一個(gè)或兩個(gè)末端添加有其他核苷，其在體內(nèi)可以被內(nèi)源性的核酸酶所剪切，以形成具有活性的反義寡聚化合物。在多種方法中，已將基于脂質(zhì)的載體用于核酸治療。例如，在一種方法中，將核酸加入到由陽離子脂質(zhì)和中性脂質(zhì)混合形成的脂質(zhì)體或脂復(fù)合體中。在另外一種方法中，在不存在中性脂質(zhì)的情況下，dna與單一或多聚陽離子脂質(zhì)形成復(fù)合物。某些制備方法參見akincetal.，naturebiotechnology26，561-569(2008年5月1日)，其全文通過引用參考并入。5.向?qū)ο蠼o藥在某些實(shí)施方式中，向?qū)ο蠼o藥包含一種或多種反義化合物的藥物組合物。在某些實(shí)施方式中，此類藥物組合物通過注射給藥。在某些實(shí)施方式中，此類藥物組合物通過輸注給藥。在某些實(shí)施方式中，通過注射或輸注將藥物組合物給藥至csf。在某些此類實(shí)施方式中，將藥物組合物直接注射或輸注至脊柱。在某些實(shí)施方式中，通過注射或輸注將藥物組合物給藥至腦。在某些實(shí)施方式中，通過鞘內(nèi)注射或輸注給藥藥物組合物，而不是給藥至脊髓組織本身。不受理論的限制，在某些實(shí)施方式中，反義化合物釋放進(jìn)入csf周圍，并且可以滲透進(jìn)入脊髓實(shí)質(zhì)。鞘內(nèi)遞送的另外一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，鞘內(nèi)途徑模擬了在人體內(nèi)已常規(guī)使用的腰椎穿刺給藥(即，脊椎穿刺)。在某些實(shí)施方式中，藥物組合物通過腦室內(nèi)(icv)注射或輸注給藥。當(dāng)向腦室內(nèi)或腦室遞送含有一種或多種反義化合物的藥物組合物時(shí)，可以在任意一個(gè)或多個(gè)腦室內(nèi)進(jìn)行，其中充滿了腦脊液(csf)。csf是一種充滿了腦室的透明液體，其存在于蛛網(wǎng)膜下腔的空隙，以及在腦和脊髓的周圍。csf由脈絡(luò)膜叢產(chǎn)生，并通過滲出或組織液交換方式從腦轉(zhuǎn)移至腦室。脈絡(luò)膜叢是位于腦室外側(cè)底部和第三和第四腦室頂部的結(jié)構(gòu)夾層。某些研究表明，這些結(jié)構(gòu)每天能夠產(chǎn)生400-600cc液體，其與每日四次填充中樞神經(jīng)系統(tǒng)的量一致。在成年人中，經(jīng)計(jì)算該液體的體積為125至150ml(4-5oz)。csf持續(xù)形成、循環(huán)和吸收。某些研究表明，每日可以產(chǎn)生約430至450ml(約2杯)csf。某些計(jì)算估計(jì)，在成人中的產(chǎn)生量約為0.35ml每分鐘，在嬰兒中約為0.15每分鐘。大多數(shù)的csf由腦室外側(cè)的脈絡(luò)膜叢產(chǎn)生。其通過monro孔流入第三腦室，加入第三腦室中產(chǎn)生的產(chǎn)物，并通過sylvius導(dǎo)水管繼續(xù)進(jìn)入第四腦室。在第四腦室中產(chǎn)生更多的csf，隨后這種液體通過magendie和luschka孔進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔。隨后其在整個(gè)腦內(nèi)循環(huán)，下至脊髓，上至大腦半球。csf通過蛛網(wǎng)膜絨毛和顱內(nèi)血管竇排入血液。在某些實(shí)施方式中，此類藥物組合物通過全身給藥。在某些實(shí)施方式中，藥物組合物通過皮下給藥。在某些實(shí)施方式中，藥物組合物通過靜脈給藥。在某些實(shí)施方式中，藥物組合物通過肌內(nèi)注射給藥。在某些實(shí)施方式中，藥物組合物直接給藥至csf(例如，it和/或icv注射和/或輸注)以及全身。在某些實(shí)施方式中，通過全身給藥的反義化合物進(jìn)入神經(jīng)元。在某些實(shí)施方式中，全身給藥反義化合物可以穿透血腦屏障，特別是在血腦屏障沒有完全形成的年輕對(duì)象中(例如，在子宮內(nèi)的對(duì)象和/或新生對(duì)象)。在某些實(shí)施方式中，通過全身給藥的反義化合物的一定量可以被神經(jīng)細(xì)胞攝取，甚至在血腦屏障已經(jīng)完全形成的對(duì)象中。例如，反義化合物可以進(jìn)入位于神經(jīng)肌接頭處或其附近的神經(jīng)元中(逆行攝取)。在某些實(shí)施方式中，此類逆行攝取導(dǎo)致在神經(jīng)元中發(fā)揮反義活性，包括但不限于，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，并且通過在神經(jīng)元中發(fā)揮反義活性而提供治療效果。在某些實(shí)施方式中，全身給藥通過在神經(jīng)元以外的細(xì)胞和/或組織中發(fā)揮反義活性而提供治療效果。雖然有證據(jù)表明正常神經(jīng)元功能需要神經(jīng)元中有功能性smn，但在其他細(xì)胞和組織中功能性smn減少所帶來的結(jié)果尚未明確定性。在某些實(shí)施方式中，在非神經(jīng)元細(xì)胞中發(fā)揮反義活性使得smn功能在這些非神經(jīng)元細(xì)胞中得以恢復(fù)，其可以帶來治療效果。在某些實(shí)施方式中，非神經(jīng)元細(xì)胞的smn功能改善能夠改善神經(jīng)元細(xì)胞的功能，而不管神經(jīng)元中的smn功能是否改善。例如，在某些實(shí)施方式中，全身給藥本發(fā)明的藥物組合物可以使其在肌肉細(xì)胞中發(fā)揮反義活性。在肌肉細(xì)胞中的此類反義活性可以對(duì)與該肌肉細(xì)胞相關(guān)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元或?qū)ι窠?jīng)元整體帶來效果。在此類實(shí)施方式中，恢復(fù)了smn功能的肌肉細(xì)胞可以提供某種因子，其能夠改善神經(jīng)元的存活和/或功能。在某些實(shí)施方式中，此類反義活性不依賴于神經(jīng)元內(nèi)反義化合物發(fā)揮反義活性所帶來的益處。在某些實(shí)施方式中，全身給藥本發(fā)明的藥物組合物將在其他非神經(jīng)元細(xì)胞中發(fā)揮反義活性，包括與神經(jīng)元無直接關(guān)聯(lián)的細(xì)胞。在非神經(jīng)元細(xì)胞中的此類反義活性可以改善神經(jīng)元的功能。例如，在非神經(jīng)元細(xì)胞(例如，肝細(xì)胞)中的反義活性可以使細(xì)胞產(chǎn)生能夠改善神經(jīng)元功能的因子。注意：由于“反義活性”包括直接和間接活性，因此即使反義化合物未進(jìn)入神經(jīng)系統(tǒng)，其對(duì)神經(jīng)元功能的效果也稱為“反義活性”。在某些實(shí)施方式中，藥物組合物的全身給藥所帶來的治療效果不依賴于其在神經(jīng)元內(nèi)的直接或間接反義活性。通常，出現(xiàn)sma后，神經(jīng)元功能減弱，結(jié)果將產(chǎn)生明顯的癥狀。其他細(xì)胞中的smn活性減弱可能產(chǎn)生其他癥狀。由于神經(jīng)元功能減弱導(dǎo)致的癥狀相對(duì)嚴(yán)重，可能掩蓋某些此類癥狀。在某些實(shí)施方式中，全身給藥使得非神經(jīng)元細(xì)胞中的smn功能恢復(fù)或改善。在某些此類實(shí)施方式中，此類恢復(fù)或改善的非神經(jīng)元細(xì)胞的smn功能可以帶來治療效果。例如，在某些例子中，患有sma的對(duì)象生長(zhǎng)緩慢。此類生長(zhǎng)緩慢可能不是神經(jīng)元細(xì)胞功能減弱的結(jié)果。事實(shí)上，生長(zhǎng)緩慢可能與其他器官中的細(xì)胞功能損傷有關(guān)，如垂體，和/或可能是整個(gè)機(jī)體細(xì)胞smn缺陷的結(jié)果。在此類實(shí)施方式中，全身給藥的結(jié)果可以改善垂體細(xì)胞和/或其他細(xì)胞的smn活性，進(jìn)而改善生長(zhǎng)情況。在某些例子中，給藥至csf使足量神經(jīng)元的功能得以恢復(fù)，以延長(zhǎng)對(duì)象的生命，但是由于對(duì)象的生命延長(zhǎng)了，一種或多種此前未知的癥狀突然出現(xiàn)，因?yàn)閷?duì)象通常在這些癥狀出現(xiàn)以前已經(jīng)死亡。某些此類突然出現(xiàn)的癥狀可能是致命的。在某些實(shí)施方式中，通過全身給藥治療突然出現(xiàn)的癥狀。在不考慮作用機(jī)制的情況下，在某些實(shí)施方式中，sma的多種癥狀均可以通過全身給藥治療，這些癥狀包括但不限于，此前被與神經(jīng)元功能損傷相關(guān)的更加嚴(yán)重的癥狀所掩蓋的癥狀。在某些實(shí)施方式中，全身給藥本發(fā)明的藥物組合物使得肌肉細(xì)胞中的smn活性增加。在某些實(shí)施方式中，肌肉細(xì)胞中此類smn活性的改善可以提供治療效果。已有報(bào)道表明，僅有在肌肉中改善smn活性還不足以提供治療效果(例如，gravrilina，etal.，hummolgenet200817(8)：1063-1075)。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供能夠在肌肉中改善smn功能并提供治療效果的方法。在某些例子中，在其他細(xì)胞中(單獨(dú)或與肌肉細(xì)胞一起)的smn功能的改善產(chǎn)生了該治療效果。在某些實(shí)施方式中，僅改善肌肉中的smn功能就可以提供治療效果。在某些實(shí)施方式中，全身給藥使得存活情況改善。6.脊髓性肌萎縮癥(sma)sma是一種以脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元退化為特征的遺傳病。sma的病因?yàn)閟mn1基因的兩個(gè)功能性拷貝純合性缺失。但是，smn2基因具有編碼與smn1相同蛋白的能力，這樣就可以克服sma患者的遺傳缺陷。在smn2外顯子7的+6位含有一個(gè)翻譯沉默突變(c→t)，其導(dǎo)致smn2轉(zhuǎn)錄物中的外顯子7不能被有效包含。因此，smn2的主要形式缺乏外顯子7，其不穩(wěn)定且沒有活性。因此，能夠調(diào)節(jié)smn2剪接以使得含有外顯子7的smn2轉(zhuǎn)錄物百分率增加的治療化合物，將可以用于治療sma。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供與編碼smn2的mrna前體互補(bǔ)的反義化合物。在某些此類實(shí)施方式中，反義化合物改變smn2的剪接。某些用于改變smn2剪接的序列和區(qū)域可以參見pct/us06/024469，其全文通過引用參考并入，用于任何目的。在某些實(shí)施方式中，具有本文所述任意基序的寡聚化合物具有與smn2的內(nèi)含子7互補(bǔ)的核堿基序列。在非限制性的下表中列出了某些此類核堿基序列的例子。序列長(zhǎng)度seqidtgctggcagacttac153cataatgctggcaga154tcataatgctggcag155ttcataatgctggca156tttcataatgctggc152attcactttcataatgctgg207tcactttcataatgctgg181ctttcataatgctgg158tcataatgctgg129actttcataatgctg1510ttcataatgctg1211cactttcataatgct1512tttcataatgct1213tcactttcataatgc1514ctttcataatgc1215ttcactttcataatg1516actttcataatg1217attcactttcataat1518cactttcataat1219gattcactttcataa1520tcactttcataa1221ttcactttcata1222attcactttcat1223agtaagattcacttt1524本發(fā)明的反義化合物可以用于調(diào)節(jié)對(duì)象如人中smn2的表達(dá)。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象患有脊髓性肌萎縮癥。在某些此類對(duì)象中，smn1基因缺失或不足以產(chǎn)生足量的功能性smn蛋白。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物可以有效調(diào)節(jié)smn2的剪接，使得在smn2mrna中，并且最終在包含外顯子7對(duì)應(yīng)的氨基酸的smn2蛋白中，外顯子7的包含增加。此類替代smn2蛋白與野生型smn蛋白類似。能夠有效調(diào)節(jié)smn2mrna的表達(dá)或其所表達(dá)的蛋白產(chǎn)物的本發(fā)明反義化合物，被認(rèn)為是活性反義化合物。對(duì)smn2表達(dá)的調(diào)節(jié)可以在體液中檢測(cè)，體液可以含有或不含細(xì)胞，或在動(dòng)物的組織、器官中檢測(cè)。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知獲取供分析用的樣本的方法，樣本例如體液(例如，唾液、血清、csf)、組織(例如，活檢)、或器官，以及制備供分析用樣本的方法。rna和蛋白水平分析采用的方法已在上文中進(jìn)行了討論，且其均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。通過本領(lǐng)域公知的常規(guī)臨床方法，從用本發(fā)明一種或多種化合物接觸的動(dòng)物收集上文所述的液體、組織或器官，檢測(cè)其中與靶基因表達(dá)相關(guān)的生物標(biāo)記物，進(jìn)而評(píng)估治療效果。還包括了用有效量的本發(fā)明所述一種或更多種反義化合物或組合物接觸體液、器官或組織的方法。體液、器官或組織可以與一種或更多種本發(fā)明的化合物接觸，使得體液、器官或組織的細(xì)胞中smn2的表達(dá)被調(diào)節(jié)。可以利用本領(lǐng)域的常規(guī)方法，監(jiān)測(cè)反義化合物或組合物對(duì)靶核酸或其產(chǎn)物的調(diào)節(jié)作用，從而確定有效量。本發(fā)明還提供了如本文所述的反義化合物，以用于如本文所述的任意方法。例如，本發(fā)明提供了包含與編碼人smn2的核酸互補(bǔ)的反義化合物，用于治療與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白(smn)相關(guān)的疾病或狀態(tài)，如脊髓性肌萎縮癥(sma)。作為進(jìn)一步的例子，本發(fā)明提供了包含反義寡核苷酸的反義化合物，所述反義寡核苷酸與編碼人smn2的核酸互補(bǔ)，通過將反義化合物直接給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)或csf，用于治療與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白(smn)相關(guān)的疾病或狀態(tài)。本發(fā)明還提供了如本文所述的反義化合物用于生產(chǎn)藥物的用途，所述藥物用于如本文所述任意方法。例如，本發(fā)明提供了包含反義寡核苷酸的反義化合物用于生產(chǎn)藥物的用途，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于編碼人smn2的核酸，所述藥物用于治療與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白(smn)相關(guān)疾病或狀態(tài)，如脊髓性肌萎縮癥(sma)。作為進(jìn)一步的例子，本發(fā)明提供了包含反義寡核苷酸的反義化合物用于生產(chǎn)藥物的用途，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于編碼人smn2的核酸，通過將所述藥物直接給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)或csf，所述藥物用于治療與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白(smn)相關(guān)疾病或狀態(tài)。在某些實(shí)施方式中，具有本文所述任意基序的寡聚化合物具有與smn2的外顯子7互補(bǔ)的核堿基序列。在某些實(shí)施方式中，具有本文所述任意基序的寡聚化合物具有與smn2的內(nèi)含子6互補(bǔ)的核堿基序列。在某些實(shí)施方式中，反義化合物包含反義寡核苷酸，所述反義寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序列包含以下序列：tcactttcataatgctgg(seqidno：1)中的至少10個(gè)核堿基。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有包括此序列中至少11個(gè)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有包括此序列中至少12個(gè)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有包括此序列中至少13個(gè)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有包括此序列中至少14個(gè)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有包括此序列中至少15個(gè)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有包括此序列中至少16個(gè)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有包括此序列中至少17個(gè)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有包括此序列的核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有由此序列的核堿基組成的核堿基序列。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸由10-18個(gè)連接的核苷組成，且具有的核堿基序列與序列：tcactttcataatgctgg(seqidno：1)的等長(zhǎng)部分具有100％同一性。7.某些對(duì)象在某些實(shí)施方式中，對(duì)象具有一個(gè)或多個(gè)sma指征。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象的一塊或多塊肌肉的電活性下降。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象具有突變的smn1基因。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象的smn1基因缺失或無法產(chǎn)生功能性的smn蛋白。在某些實(shí)施方式中，通過遺傳檢測(cè)診斷對(duì)象。在某些實(shí)施方式中，通過肌肉組織活檢識(shí)別對(duì)象。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象不能坐直。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象不能站立或行走。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象的呼吸和/或進(jìn)食需要幫助。在某些實(shí)施方式中，通過肌肉電生理檢測(cè)和/或肌肉組織活檢識(shí)別對(duì)象。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象患有i型sma。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象患有ii型sma。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象患有iii型sma。在某些實(shí)施方式中，診斷在子宮中的對(duì)象患有sma。在某些實(shí)施方式中，診斷出生一周內(nèi)的對(duì)象患有sma。在某些實(shí)施方式中，診斷出生一個(gè)月內(nèi)的對(duì)象患有sma。在某些實(shí)施方式中，診斷年齡為3個(gè)月的對(duì)象患有sma。在某些實(shí)施方式中，診斷年齡為6個(gè)月的對(duì)象患有sma。在某些實(shí)施方式中，診斷年齡為1歲的對(duì)象患有sma。在某些實(shí)施方式中，診斷年齡為1至2歲的對(duì)象患有sma。在某些實(shí)施方式中，診斷年齡為1至15歲的對(duì)象患有sma。在某些實(shí)施方式中，診斷年齡為15歲以上的對(duì)象患有sma。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物的第一次給藥在子宮內(nèi)。在某些此類實(shí)施方式中，第一次給藥于血腦屏障發(fā)育完全以前。在某些實(shí)施方式中，第一次給藥為向處于子宮內(nèi)的對(duì)象全身給藥。在某些實(shí)施方式中，第一次給藥為血腦屏障形成后向子宮內(nèi)給藥。在某些實(shí)施方式中，第一次給藥為向csf給藥。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對(duì)象的年齡小于一周時(shí)完成本發(fā)明藥物組合物的第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對(duì)象的年齡小于一個(gè)月時(shí)完成本發(fā)明藥物組合物的第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對(duì)象的年齡小于3個(gè)月時(shí)完成本發(fā)明藥物組合物的第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對(duì)象的年齡小于6個(gè)月時(shí)完成本發(fā)明藥物組合物的第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對(duì)象的年齡小于一歲時(shí)完成本發(fā)明藥物組合物的第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對(duì)象的年齡小于2歲時(shí)完成本發(fā)明藥物組合物的第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對(duì)象的年齡小于15歲時(shí)完成本發(fā)明藥物組合物的第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對(duì)象的年齡大于15歲時(shí)完成本發(fā)明藥物組合物的第一次給藥。8.某些劑量在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供給藥劑量和頻率。在某些實(shí)施方式中，藥物組合物通過推注給藥。在某些此類實(shí)施方式中，推注給藥的劑量為0.01至25毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些此類實(shí)施方式中，推注給藥的劑量為0.01至10毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些此類實(shí)施方式中，所述劑量為0.05至5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些此類實(shí)施方式中，所述劑量為0.1至2毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些此類實(shí)施方式中，所述劑量為0.5至1毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，此類劑量每月給藥兩次。在某些實(shí)施方式中，此類劑量每月給藥一次。在某些實(shí)施方式中，此類劑量每2個(gè)月給藥一次。在某些實(shí)施方式中，此類劑量每6個(gè)月給藥一次。在某些實(shí)施方式中，此類劑量通過推注給藥至csf。在某些實(shí)施方式中，此類劑量通過鞘內(nèi)推注給藥。在某些實(shí)施方式中，此類劑量通過全身推注注射(例如，皮下、肌內(nèi)或靜脈注射)。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象接受向csf的推注注射和全身推注注射。在此類實(shí)施方式中，各次csf推注和全身推注的劑量可以相同或不同。在某些實(shí)施方式中，csf和全身給藥的頻率不同。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的給藥方案包含至少一次鞘內(nèi)推注注射和至少一次皮下推注注射。在某些實(shí)施方式中，通過連續(xù)輸注給藥藥物組合物。此類連續(xù)輸注可以通過輸液泵完成，其將藥物組合物遞送至csf。在某些實(shí)施方式中，此類輸液泵遞送藥物組合物至it或icv。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量為每日0.05至25毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量為每日0.1至10毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量為每日0.5至10毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量為每日0.5至5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量為每日1至5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的給藥方案包含輸注至cns和至少一次全身推注注射。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的給藥方案包括輸注至cns和至少一次皮下推注注射。在某些實(shí)施方式中，對(duì)劑量進(jìn)行調(diào)整，無論是推注還是輸注，使得反義化合物的濃度達(dá)到或維持在0.1至100毫克每克cns組織。在某些實(shí)施方式中，對(duì)劑量進(jìn)行調(diào)整，無論是推注還是輸注，使得反義化合物的濃度達(dá)到或維持在1至10毫克每克cns組織。在某些實(shí)施方式中，對(duì)劑量進(jìn)行調(diào)整，無論是推注還是輸注，使得反義化合物的濃度達(dá)到或維持在0.1至1毫克每克cns組織。在某些實(shí)施方式中，向?qū)ο蟮慕o藥分為誘導(dǎo)期和維持期。在某些此類實(shí)施方式中，在誘導(dǎo)期的給藥劑量高于在維持期的給藥劑量。在某些實(shí)施方式中，在誘導(dǎo)期的給藥劑量低于在維持期的給藥劑量。在某些實(shí)施方式中，誘導(dǎo)期通過推注注射完成，維持期通過連續(xù)輸注完成。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供反義化合物的全身給藥，以單用的方式進(jìn)行或與遞送至csf聯(lián)用。在某些實(shí)施方式中，全身給藥的劑量為0.1mg/kg至200mg/kg。在某些實(shí)施方式中，全身給藥的劑量為0.1mg/kg至100mg/kg。在某些實(shí)施方式中，全身給藥的劑量為0.5mg/kg至100mg/kg。在某些實(shí)施方式中，全身給藥的劑量為1mg/kg至100mg/kg。在某些實(shí)施方式中，全身給藥的劑量為1mg/kg至50mg/kg。在某些實(shí)施方式中，全身給藥的劑量為1mg/kg至25mg/kg。在某些實(shí)施方式中，全身給藥的劑量為0.1mg/kg至25mg/kg。在某些實(shí)施方式中，全身給藥的劑量為0.1mg/kg至10mg/kg。在某些實(shí)施方式中，全身給藥的劑量為1mg/kg至10mg/kg。在某些實(shí)施方式中，全身給藥的劑量為1mg/kg至5mg/kg。在某些實(shí)施方式中包含全身和csf遞送，獨(dú)立地確定這兩種途徑的劑量。a.計(jì)算適宜的人用劑量在某些實(shí)施方式中，所述對(duì)象是人。在某些實(shí)施方式中，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)，例如本文所描述的那些，計(jì)算或估計(jì)人用劑量。在某些實(shí)施方式中，通過猴和/或小鼠實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)，例如本文所描述的那些，計(jì)算或估計(jì)人用劑量。在某些實(shí)施方式中，通過小鼠實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)，例如本文所描述的那些，計(jì)算或估計(jì)人用劑量。在某些實(shí)施方式中，可以采用小鼠藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，結(jié)合腦重和/或腦脊液(csf)更新速度，計(jì)算適宜的人用劑量。例如，小鼠腦重約0.4g，其約占體重的2％。對(duì)人而言，平均腦重為1.5kg，其約占體重的2.5％。在某些實(shí)施方式中，給藥至csf使得部分化合物通過腦組織的攝取和隨后的代謝而被消除。利用人與小鼠腦重量的比率作為換算因子，可以計(jì)算通過腦組織的消除和清除估計(jì)值。此外，可以使用csf更新速度，估計(jì)化合物從csf中消除到血液中的情況。小鼠csf的更新速度為每日約10-12次(以0.325μl/min的速度產(chǎn)生0.04ml)。人csf的更新速度為每日約4次(以350-400μl/min的速度產(chǎn)生100-160ml)。可以依據(jù)腦重量的消除換算，和/或csf的更新?lián)Q算，確定清除率以及給藥劑量。外推得到的人csf清除率可以用于估算近似于小鼠給藥劑量的人用等同劑量。這樣，依據(jù)腦重量和csf更新速度，可以估計(jì)出考慮了組織代謝差異的人用劑量。用于計(jì)算和估算的此類方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。作為非限制性的例子，在某些實(shí)施方式中，可以由期望的小鼠劑量估算出人用等同劑量，通過將mg/kg的小鼠劑量乘以約0.25至約1.25的因子，該因子取決于特定化合物的已確定的清除率和消除值。因此，例如，在某些實(shí)施方式中，與20g小鼠的0.01mg給藥劑量相等同的人用劑量范圍為，對(duì)70kg人的約8.75mg至約43.75mg的總劑量。同樣地，在某些實(shí)施方式中，與4g新生小鼠的0.01mg給藥劑量相等同的人用劑量范圍為，對(duì)3kg新生兒的約1.9mg至約9.4mg的總劑量。這些例子僅用于說明本領(lǐng)域技術(shù)人員是如何確定適宜的人用劑量的，其并非旨在限制本發(fā)明。在某些實(shí)施方式中，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)，如本文所描述的那些，來計(jì)算或估算全身遞送(不論是單用或是與csf遞送聯(lián)用)的人用劑量。通常，用于全身給藥的適宜的人用劑量(以mg/kg計(jì))為動(dòng)物用有效劑量的0.1至10倍。因此，僅作為舉例，對(duì)2g新生小鼠皮下給藥50μg，其劑量為25mg/kg。預(yù)計(jì)在人體內(nèi)的相應(yīng)劑量為2.5mg/kg至250mg/kg。對(duì)于3千克重的嬰兒而言，相應(yīng)的劑量為7.5mg至750mg。對(duì)于25kg重的兒童而言，相應(yīng)劑量為62.5mg至6250mg。9.治療方案在某些實(shí)施方式中，對(duì)上述給藥劑量、給藥頻率、給藥途徑、誘導(dǎo)期和維持期、以及第一次給藥時(shí)間進(jìn)行組合，以提供對(duì)患有sma對(duì)象的給藥方案?？梢詫?duì)此類給藥方案進(jìn)行選擇和調(diào)整，以改善sma的一種或多種癥狀和/或減輕或避免藥物組合物的給藥所導(dǎo)致的毒性或副作用。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在子宮內(nèi)或?yàn)樾律鷥骸Ｔ诖祟悓?shí)施方式中，藥物組合物的給藥，特別是通過連續(xù)輸注給藥，存在特定挑戰(zhàn)。因此，在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對(duì)象在子宮內(nèi)或年齡非常小時(shí)，本發(fā)明通過推注給藥的方式提供藥物組合物的給藥，此后當(dāng)對(duì)象年齡更大且安放植入的輸液泵更為現(xiàn)實(shí)時(shí)，通過這種泵連續(xù)輸注給藥。進(jìn)一步地，在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對(duì)象長(zhǎng)大后，增加絕對(duì)劑量，以獲得相同或相近的劑量：體重比率。下表旨在舉例說明治療方案，而并非意在限制本領(lǐng)域技術(shù)人員容易想到的可能存在的治療組合。*注釋：方案3的第4次給藥期為連續(xù)csf輸注與周期性全身給藥聯(lián)用的例子。這些治療方案旨在舉例，并非意在限制本發(fā)明。在某些實(shí)施方式中，給藥方案包含全身給藥，單用或與給藥至csf聯(lián)用(例如方案3，見上文)。下表對(duì)此類方案進(jìn)一步舉例。這些治療方案旨在舉例，并非意在限制本發(fā)明。根據(jù)本申請(qǐng)的內(nèi)容，并基于多種因素，如狀態(tài)的嚴(yán)重程度以及對(duì)象的總體健康狀況和年齡等，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠選擇給藥劑量和遞送方式的適宜組合。10.聯(lián)合給藥在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物與至少一種用于治療sma和/或用于治療一種或多種與sma相關(guān)癥狀的其他藥物組合物聯(lián)合給藥。在某些實(shí)施方式中，此類其他藥物組合物選自曲古霉素-a丙戊酸、利魯唑、羥基脲以及丁酸鹽或丁酸鹽衍生物。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物與曲古霉素-a聯(lián)合給藥。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物與喹唑啉衍生物聯(lián)合給藥，例如在thurmond，etal.，j.medchem.2008，51，449-469中所描述。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物與至少一種其他藥物組合物在相同時(shí)間聯(lián)合給藥。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物與至少一種其他藥物組合物在不同時(shí)間聯(lián)合給藥。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物與基因治療劑聯(lián)合給藥。在某些此類實(shí)施方式中，基因治療劑給藥至csf，且本發(fā)明的藥物組合物全身給藥。在某些此類實(shí)施方式中，基因治療劑給藥至csf，且本發(fā)明的藥物組合物給藥至csf和全身給藥。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物和基因治療劑在相同時(shí)間聯(lián)合給藥。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物和基因治療劑在不同的時(shí)間聯(lián)合給藥。已報(bào)道了用于sma治療的某些基因治療方法(例如，coadyetal.，plosone20083(10)：e3468；passinietal.，jclininvest2010apr1，120(4)：1253-64)。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物與至少一種用于sma的其他療法聯(lián)合給藥。在某些實(shí)施方式中，此類用于sma的其他療法為手術(shù)。在某些實(shí)施方式中，此類其他療法為物理治療，包括但不限于，對(duì)呼吸所必須的肌肉進(jìn)行力量增強(qiáng)的鍛煉，如咳嗽治療。在某些實(shí)施方式中，其他治療為物理介入，如飼喂管或呼吸輔助設(shè)備。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物與一種或多種藥物組合物聯(lián)合給藥，所述藥物組合物能夠降低本發(fā)明藥物組合物的不希望的副作用。11.表型效應(yīng)在某些實(shí)施方式中，給藥至少一種本發(fā)明的藥物組合物使得對(duì)象的表型改變。在某些實(shí)施方式中，此類表型改變包括，但不限于：包含外顯子7的smnmrna的絕對(duì)量增加；包含外顯子7的smnmrna與缺乏外顯子7的smnmrna的比率升高；包含外顯子7的smn蛋白的絕對(duì)量增加；包含外顯子7的smn蛋白與缺乏外顯子7的smn蛋白的比率升高；肌肉力量改善，至少一塊肌肉的電活性改善；呼吸改善；體重增加；以及存活。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元檢測(cè)到至少一種表型改變。在某些實(shí)施方式中，給藥至少一種本發(fā)明的藥物組合物使得對(duì)象能夠端坐、站立和/或行走。在某些實(shí)施方式中，給藥至少一種本發(fā)明藥物組合物使得對(duì)象在沒有幫助的情況下能夠進(jìn)食、飲水和/或呼吸。在某些實(shí)施方式中，通過對(duì)肌肉進(jìn)行電生理評(píng)估評(píng)價(jià)治療效果。在某些實(shí)施方式中，給藥本發(fā)明的藥物組合物改善sma的至少一種癥狀且具有較少或沒有炎癥作用。在某些此類實(shí)施方式中，通過治療后未出現(xiàn)aifl水平的顯著增加，來確定未出現(xiàn)炎癥作用。在某些實(shí)施方式中，給藥至少一種本發(fā)明藥物組合物能延遲sma的至少一種癥狀的出現(xiàn)。在某些實(shí)施方式中，給藥至少一種本發(fā)明藥物組合物能延緩sma的至少一種癥狀的進(jìn)展。在某些實(shí)施方式中，給藥至少一種本發(fā)明藥物組合物能降低sma至少一種癥狀的嚴(yán)重程度。在某些實(shí)施方式中，給藥至少一種本發(fā)明藥物組合物使得產(chǎn)生不期望出現(xiàn)的副作用。在某些實(shí)施方式中，識(shí)別出治療方案，使得癥狀獲得所需的改善，且避免不期望出現(xiàn)的副作用。12.劑量單位在某些實(shí)施方式中，將本發(fā)明的藥物組合物制成用于給藥的劑量單位。某些此類劑量單位的濃度選自0.01mg至100mg。在某些此類實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物所包含的反義化合物的劑量選自0.01mg、0.1mg、0.5mg、1mg、5mg、10mg、20mg、25mg、50mg、75mg、100mg、150mg、和200mg。在某些實(shí)施方式中，藥物組合物所包含的寡核苷酸的劑量選自0.1mg、03mg、1mg、5mg、10mg、25mg、和50mg。13.試劑盒在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的試劑盒包含至少一種藥物組合物。在某些實(shí)施方式中，此類試劑盒進(jìn)一步包含一種遞送工具，例如注射器或輸液泵。本發(fā)明還提供了以下實(shí)施方式：實(shí)施方式1.一種方法，包括向?qū)ο蠼o藥包含反義寡核苷酸的反義化合物，該反義寡核苷酸互補(bǔ)于人smn2mrna前體的編碼核酸的內(nèi)含子7，其中所述反義化合物給藥至腦脊液。2.根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中所述給藥是至鞘內(nèi)空隙。3.根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中所述給藥是至腦內(nèi)的腦脊液。4.根據(jù)實(shí)施方式1-3任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述給藥包含推注注射。5.根據(jù)實(shí)施方式1-3任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述給藥包含利用遞送泵輸注。6.根據(jù)實(shí)施方式1-5任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義化合物給藥的劑量為0.01至10毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。7.根據(jù)實(shí)施方式6所述的方法，其中所述給藥劑量為0.01至10毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。8.根據(jù)實(shí)施方式6所述的方法，其中所述給藥劑量為0.01至5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。9.根據(jù)實(shí)施方式6所述的方法，其中所述給藥劑量為0.05至1毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。10.根據(jù)實(shí)施方式6所述的方法，其中所述給藥劑量為0.01至0.5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。11.根據(jù)實(shí)施方式6所述的方法，其中所述給藥劑量為0.05至0.5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。12.根據(jù)實(shí)施方式6-11任意一項(xiàng)所述的方法，其中每日給藥所述劑量。13.根據(jù)實(shí)施方式6-11任意一項(xiàng)所述的方法，其中每周給藥所述劑量。14.根據(jù)實(shí)施方式6-11任意一項(xiàng)所述的方法，其中連續(xù)給藥所述反義化合物，且其中所述劑量是每日給藥的劑量。15.根據(jù)實(shí)施方式1-13任意一項(xiàng)所述的方法，包括在誘導(dǎo)期給藥至少一個(gè)誘導(dǎo)劑量，且在維持期給藥至少一個(gè)維持劑量。16.根據(jù)實(shí)施方式15所述的方法，其中所述誘導(dǎo)劑量為0.05至5.0毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。17.根據(jù)實(shí)施方式15或16所述的方法，其中所述維持劑量為0.01至1.0毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。18.根據(jù)實(shí)施方式15-17任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述誘導(dǎo)期的持續(xù)時(shí)間為至少1周。19.根據(jù)實(shí)施方式15-18任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述維持期的持續(xù)時(shí)間為至少1周。20.根據(jù)實(shí)施方式15-19任意一項(xiàng)所述的方法，其中各誘導(dǎo)劑量和各維持劑量均包含單次注射。21.根據(jù)實(shí)施方式15-19任意一項(xiàng)所述的方法，其中各誘導(dǎo)劑量和各維持劑量均獨(dú)立地包含兩次或更多注射。22.根據(jù)實(shí)施方式1-21任意一項(xiàng)所述的方法，其中在至少1周的治療期內(nèi)，給藥所述反義化合物至少2次。23.根據(jù)實(shí)施方式22所述的方法，其中所述治療期為至少一個(gè)月。24.根據(jù)實(shí)施方式22所述的方法，其中所述治療期為至少2個(gè)月。25.根據(jù)實(shí)施方式22所述的方法，其中所述治療期為至少4個(gè)月。26.根據(jù)實(shí)施方式15-25任意一項(xiàng)所述的方法，其中通過一次或更多推注注射給藥所述誘導(dǎo)劑量，和通過輸注泵給藥所述維持劑量。27.根據(jù)實(shí)施方式1-26任意一項(xiàng)所述的方法，包括評(píng)估反義化合物的所述耐受性和/或有效性。28.根據(jù)實(shí)施方式1-27任意一項(xiàng)所述的方法，其中當(dāng)出現(xiàn)所述反義化合物給藥不耐受的指征時(shí)，降低反義化合物的給藥劑量或頻率。29.根據(jù)實(shí)施方式1-28任意一項(xiàng)所述的方法，其中當(dāng)出現(xiàn)所述反義化合物給藥有效的指征時(shí)，維持或降低反義化合物的給藥劑量或頻率。30.根據(jù)實(shí)施方式1-29任意一項(xiàng)所述的方法，其中當(dāng)出現(xiàn)所述反義化合物給藥無效的指征時(shí)，增加反義化合物的劑量。31.根據(jù)實(shí)施方式1-30任意一項(xiàng)所述的方法，其中當(dāng)出現(xiàn)所述反義化合物給藥有效的指征時(shí)，降低反義化合物的給藥頻率。32.根據(jù)實(shí)施方式1-31任意一項(xiàng)所述的方法，其中當(dāng)出現(xiàn)所述反義化合物給藥無效的指征時(shí)，增加反義化合物的給藥頻率。33.根據(jù)上述實(shí)施方式任意一項(xiàng)所述的方法，包括將所述反義化合物與至少一種其他療法聯(lián)合給藥。34.根據(jù)實(shí)施方式33所述的方法，其中將所述反義化合物與至少一種其他療法同時(shí)聯(lián)合給藥。35.根據(jù)實(shí)施方式34所述的方法，其中在至少一種其他治療給藥前，給藥所述反義化合物。36.根據(jù)實(shí)施方式34所述的方法，其中在至少一種其他治療給藥后，給藥所述反義化合物。37.根據(jù)實(shí)施方式33-36任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述至少一種其他治療包括，給藥丙戊酸、利魯唑、羥基脲和丁酸鹽中的一種或更多種。38.根據(jù)實(shí)施方式33-37任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述至少一種其他治療包括給藥曲古霉素-a。39.根據(jù)實(shí)施方式33-38任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述至少一種其他治療包括給藥干細(xì)胞。40.根據(jù)實(shí)施方式33-39任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述至少一種其他治療為基因治療。41.根據(jù)上述實(shí)施方式任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義化合物的給藥濃度為約0.01mg/ml、約0.05mg/ml、約0.1mg/ml、約0.5mg/ml、約1mg/ml、約5mg/ml、約10mg/ml、約50mg/ml、或約100mg/ml。42.根據(jù)實(shí)施方式1-41任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中，smn2mrna對(duì)外顯子7的包含增加。43.根據(jù)實(shí)施方式1-42任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中，smn2多肽對(duì)外顯子7的氨基酸的包含增加。44.一種在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加smn2mrna對(duì)外顯子7的包含的方法，包括向?qū)ο蠼o藥含有反義寡核苷酸的反義化合物，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人smn2編碼核酸的內(nèi)含子7，進(jìn)而在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加smn2mrna對(duì)外顯子7的包含。45.一種在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加smn2多肽對(duì)外顯子7氨基酸的包含的方法，包括向?qū)ο蠼o藥含有反義寡核苷酸的反義化合物，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人smn2編碼核酸的內(nèi)含子7，進(jìn)而在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加smn2多肽對(duì)外顯子7氨基酸的包含。46.根據(jù)實(shí)施方式1-45任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述對(duì)象患有sma。47.根據(jù)實(shí)施方式1-45任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述對(duì)象患有i型sma。48.根據(jù)實(shí)施方式1-45任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述對(duì)象患有ii型sma。49.根據(jù)實(shí)施方式1-45任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述對(duì)象患有iii型sma。50.根據(jù)實(shí)施方式1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在子宮內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。51.根據(jù)實(shí)施方式50所述的方法，其中在血腦屏障完全形成前進(jìn)行所述第一次給藥。52.根據(jù)實(shí)施方式1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象出生1周內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。53.根據(jù)實(shí)施方式1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象出生1個(gè)月內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。54.根據(jù)實(shí)施方式1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象出生3個(gè)月內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。55.根據(jù)實(shí)施方式1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象出生6個(gè)月內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。56.根據(jù)實(shí)施方式1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象1至2歲時(shí)進(jìn)行第一次給藥。57.根據(jù)實(shí)施方式1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象1至15歲時(shí)進(jìn)行第一次給藥。58.根據(jù)實(shí)施方式1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象15歲以上時(shí)進(jìn)行第一次給藥。59.根據(jù)實(shí)施方式1-58任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物。60.根據(jù)實(shí)施方式59所述的方法，其中所述對(duì)象是人。61.根據(jù)實(shí)施方式1-60任意一項(xiàng)所述的方法，包括識(shí)別患有sma的對(duì)象。62.根據(jù)實(shí)施方式61所述的方法，其中通過測(cè)定對(duì)象一塊或更多塊肌肉的電活性來識(shí)別所述對(duì)象。63.根據(jù)實(shí)施方式61所述的方法，其中通過遺傳檢測(cè)以確定對(duì)象的smn1基因中是否具有突變來識(shí)別所述對(duì)象。64.根據(jù)實(shí)施方式61所述的方法，其中通過肌肉組織活檢來識(shí)別所述對(duì)象。65.根據(jù)實(shí)施方式42所述的方法，其中所述反義化合物的給藥使得含有外顯子7的smn2mrna的量增加至少10％。66.根據(jù)實(shí)施方式65所述的方法，其中含有外顯子7的smn2mrna的量增加至少20％。67.根據(jù)實(shí)施方式65所述的方法，其中含有外顯子7的smn2mrna的量增加至少50％。68.根據(jù)實(shí)施方式65所述的方法，其中含有外顯子7的smn2mrna的量增加至少70％。69.根據(jù)實(shí)施方式43所述的方法，其中所述反義化合物的給藥使得含有外顯子7氨基酸的smn2多肽的量增加至少10％。70.根據(jù)實(shí)施方式69所述的方法，其中含有外顯子7氨基酸的smn2多肽的量增加至少20％。71.根據(jù)實(shí)施方式69所述的方法，其中含有外顯子7氨基酸的smn2多肽的量增加至少50％。72.根據(jù)實(shí)施方式69所述的方法，其中含有外顯子7氨基酸的smn2多肽的量增加至少70％。73.根據(jù)實(shí)施方式1-72任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義化合物的給藥能在所述對(duì)象中減輕sma的至少一種癥狀。74.根據(jù)實(shí)施方式73所述的方法，其中所述反義化合物的給藥使得在所述對(duì)象中的運(yùn)動(dòng)功能改善。75.根據(jù)實(shí)施方式73所述的方法，其中所述反義化合物的給藥使得在所述對(duì)象中運(yùn)動(dòng)功能喪失被推遲或減少。76.根據(jù)實(shí)施方式73所述的方法，其中所述反義化合物的給藥使得呼吸功能改善。77.根據(jù)實(shí)施方式73所述的方法，其中所述反義化合物的給藥使得生存期改善。78.根據(jù)實(shí)施方式1-77任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸的至少一個(gè)核苷包含修飾的糖配基。79.根據(jù)實(shí)施方式78所述的方法，其中所述至少一個(gè)修飾的糖配基包含2’-甲氧乙基糖配基。80.根據(jù)實(shí)施方式1-79任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸的各核苷基本上均包含修飾的糖配基。81.根據(jù)實(shí)施方式80所述的方法，其中所述包含修飾糖配基的核苷均包含相同的糖修飾。82.根據(jù)實(shí)施方式81所述的方法，其中各修飾的糖配基均包含2’-甲氧乙基糖配基。83.根據(jù)實(shí)施方式1-79任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸的各核苷均包含修飾的糖配基。84.根據(jù)實(shí)施方式83所述的方法，其中所述核苷均包含相同的糖修飾。85.根據(jù)實(shí)施方式84所述的方法，其中各修飾的糖配基均包含2’-甲氧乙基糖配基。86.根據(jù)實(shí)施方式1-85任意一項(xiàng)所述的方法，其中至少一個(gè)核苷間連接是硫代磷酸酯核苷間連接。87.根據(jù)實(shí)施方式86所述的方法，其中各核苷間連接均為硫代磷酸酯核苷間連接。88.根據(jù)實(shí)施方式1-87任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸由10至25個(gè)連接的核苷組成。89.根據(jù)實(shí)施方式1-87任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸由12至22個(gè)連接的核苷組成。90.根據(jù)實(shí)施方式1-87任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸由15至20個(gè)連接的核苷組成。91.根據(jù)實(shí)施方式1-87任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸由18個(gè)連接的核苷組成。92.根據(jù)實(shí)施方式1-91任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸與人smn2的編碼核酸具有至少90％的互補(bǔ)性。93.根據(jù)實(shí)施方式92所述的方法，其中所述反義寡核苷酸與人smn2的編碼核酸具有完全的互補(bǔ)性。94.根據(jù)實(shí)施方式1-93任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序列包含seqidno：1的核堿基序列中的至少10個(gè)連續(xù)核堿基。95.根據(jù)實(shí)施方式94所述的方法，其中所述寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序列包含seqidno：1的核堿基序列中至少15個(gè)連續(xù)核堿基。96.根據(jù)實(shí)施方式94所述的方法，其中所述寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序列包含seqidno：1的核堿基序列。97.根據(jù)實(shí)施方式94所述的方法，其中所述寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序列由seqidno：1的核堿基序列組成。98.根據(jù)實(shí)施方式1-97任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義化合物包含綴合基團(tuán)或末端基團(tuán)。99.根據(jù)實(shí)施方式1-97任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義化合物由反義寡核苷酸組成。100.根據(jù)實(shí)施方式1-99任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義化合物還可以全身給藥。101.根據(jù)實(shí)施方式100所述的方法，其中所述全身給藥是通過靜脈或腹腔注射。102.根據(jù)實(shí)施方式100或101所述的方法，其中所述全身給藥和給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng)同時(shí)進(jìn)行。103.根據(jù)實(shí)施方式100或101所述的方法，其中所述全身給藥和給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng)在不同時(shí)間進(jìn)行。104.一種包含反義寡核苷酸的反義化合物，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人smn2編碼核酸的內(nèi)含子7，所述反義化合物用于實(shí)施方式1-103任意一項(xiàng)所述的方法。105.根據(jù)實(shí)施方式104所述的反義化合物，所述反義化合物用于治療與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因1(smn1)有關(guān)的疾病或狀態(tài)。106.一種包含反義寡核苷酸的反義化合物用于生產(chǎn)藥物的用途，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人smn2編碼核酸的內(nèi)含子7，所述藥物用于前述任意實(shí)施方式所述的方法。107.根據(jù)實(shí)施方式106所述的用途，其中該藥物用于治療與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因1(smn1)有關(guān)的疾病或狀態(tài)。非限制性公開和通過引用并入盡管已經(jīng)根據(jù)一些實(shí)施方式專門描述了本發(fā)明所述的一些化合物、組合物以及方法，下列實(shí)施例僅用以描述本發(fā)明所述化合物且非旨在對(duì)其限制。本申請(qǐng)中所引用的各參考文獻(xiàn)、genbank登錄號(hào)等等均通過引用整體并入。盡管在本文件所附的序列表中按照要求將各序列標(biāo)注為“rna”或“dna”，但實(shí)際上，可以采用任意組合的化學(xué)修飾對(duì)這些序列進(jìn)行修飾。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解，用如“rna”或“dna”這樣的命名來描述修飾的寡核苷酸，在某些例子中是專斷的。例如，包含含有2’-oh糖配基和胸腺嘧啶堿基的核苷的寡核苷酸可以被稱為具有修飾糖基的dna(將天然dna的2’-h修飾為2’-oh)或具有修飾堿基的rna(將天然rna的尿嘧啶修飾為胸腺嘧啶(甲基尿嘧啶))。因此，本申請(qǐng)?zhí)峁┑暮怂嵝蛄?，包括但不限于序列表中列出的序列，意在包括含有天然或修飾rna和/或dna的任意組合的核酸，包括但不限于具有修飾核堿基的此類核酸。作為進(jìn)一步舉例且非限制，具有核堿基序列“atcgatcg”的寡聚化合物包括具有此類核堿基序列的任意寡聚化合物，無論其是修飾或未修飾，包括但不限于，包含rna堿基的此類化合物，例如具有序列“aucgaucg”的，以及具有某些dna堿基和某些rna堿基的，如“aucgatcg”，以及具有其他修飾堿基的寡聚化合物，如“atmecgaucg”，其中mec表示5-位包含甲基的胞嘧啶堿基。實(shí)施例1-靶向作用于smn2的反義化合物采用此前報(bào)道的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)合成下述寡核苷酸。參考編號(hào)#序列長(zhǎng)度化學(xué)seqidisis396443tcactttcataatgctgg18全長(zhǎng)2’-moe；全長(zhǎng)ps1isis396449tttcataatgctggc15全長(zhǎng)2’-moe；全長(zhǎng)ps2ps＝硫代磷酸酯核苷間連接實(shí)施例2-smn-/-smn轉(zhuǎn)基因小鼠在適宜的動(dòng)物模型中可以對(duì)上文所述的反義化合物的治療作用和安全性進(jìn)行檢測(cè)。例如，與人類疾病的表現(xiàn)極其接近的動(dòng)物模型包括特定疾病的自發(fā)發(fā)生率較高或被誘導(dǎo)成發(fā)生率較高的動(dòng)物品系。特別地，sma的動(dòng)物模型是已知的。如上文所闡述的，sma是常染色體退行性神經(jīng)肌肉病變，其分子機(jī)制為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因1(smn1)的純合性缺失。在人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了與smn1基因基本相同的拷貝，稱為smn2，其能夠調(diào)節(jié)疾病的嚴(yán)重程度。與人類不同，小鼠具有一個(gè)與smn1等同的單基因(smm)。該基因的純合性缺失對(duì)胚胎是致命的，且導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡，提示smn基因產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞的存活和功能是必要的。在缺乏smn的小鼠中引入2個(gè)拷貝的smn2，可以挽救其對(duì)胚胎的致命性，得到具有sma表型的小鼠(monanietal.，hum.mol.genet.(2000)9：333-339)。高拷貝數(shù)的smn2可以挽救小鼠，因?yàn)檫\(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中產(chǎn)生了充足的smn蛋白。還可以參見hsieh-li，etal.，nat.genet.(2000)24：66-70，其報(bào)道了表達(dá)人smn2的轉(zhuǎn)基因小鼠品系的生產(chǎn)。特別地，在smn-/-的背景下引入了smn2的轉(zhuǎn)基因小鼠在脊髓和骨骼肌中顯示出的病理學(xué)改變與sma患者接近。這些小鼠病理變化的嚴(yán)重程度與含有外顯子7編碼區(qū)域的smn蛋白的量相關(guān)。缺乏一個(gè)smn拷貝的雜合小鼠稱為smn-/+，其是sma嚴(yán)重程度較低型，iii型的模型。sma表型的嚴(yán)重程度與小鼠中的人smn2拷貝數(shù)相關(guān)。“臺(tái)灣”品系具有人smn2的4個(gè)拷貝，這種小鼠具有中度至重度sma表型，與i型或ii型接近。δ-7小鼠(smn-/-，hsmn2+/+，smnδ7+/+)也缺乏小鼠smn且表達(dá)人smn2。δ-7小鼠具有更為嚴(yán)重的表型，其在出生后較短時(shí)間內(nèi)死亡，一般約為出生后15-20天。實(shí)施例3-在smn-/-smn2(臺(tái)灣品系)中用反義化合物在體內(nèi)進(jìn)行全身給藥對(duì)臺(tái)灣小鼠通過腹腔注射，給藥生理鹽水，或35mg/kgisis396443，或錯(cuò)配反義寡核苷酸對(duì)照，每日一次，連續(xù)5天，并在2天后即第7天處死小鼠。收集肝臟和腎臟，通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)分離rna。通過rt-pcr觀察含有或不含外顯子7的smn2。與給藥生理鹽水和錯(cuò)配對(duì)照的動(dòng)物相比，給藥isis396443使得來自腎臟和肝臟的smn2中，對(duì)外顯子7的包含大量增加。實(shí)施例4-在smn-/-smn2(臺(tái)灣品系)中用反義化合物在體內(nèi)進(jìn)行腦室內(nèi)(icv)給藥對(duì)臺(tái)灣小鼠通過icv注射，給藥生理鹽水或150μgisis396443，每日一次，連續(xù)7天。在第8天處死小鼠，從腦和脊髓中提取rna。rt-pcr分析顯示，給藥isis396443的動(dòng)物的腦和脊髓樣品中，smn2對(duì)外顯子7的包含大量增加。這些結(jié)果提示，使用靶向作用于smn的反義寡核苷酸進(jìn)行icv給藥，可以挽救sma狀態(tài)，因?yàn)閷?duì)外顯子7的排除與sma的表型相關(guān)。劑量-應(yīng)答對(duì)臺(tái)灣小鼠通過icv注射生理鹽水或10、50、100或150μg的isis396443(每個(gè)治療組5只小鼠)，每日一次，連續(xù)7天，并在第8天將動(dòng)物處死。分離rna，使用rt-pcr進(jìn)行分析。10μg治療組顯示出中等程度的對(duì)外顯子7的包含。50μg、100μg和150μg組均顯示出大量的對(duì)外顯子7的包含。應(yīng)答持續(xù)時(shí)間為確定效應(yīng)持續(xù)時(shí)間，對(duì)24只小鼠通過icv注射50μg的isis396443，每日一次，連續(xù)7天。在末次給藥時(shí)(0時(shí)刻)處死四只小鼠，在末次給藥后1周、2周、4周和8周分別處死四只小鼠。通過rt-pcr檢測(cè)顯示，所有治療小鼠均顯示大量的對(duì)外顯子7的包含，在第8周時(shí)的效果與其他組之間不存在差異，如圖1所示：這些結(jié)果提示，通過icv，每天給藥50μg的isis396443，連續(xù)7天，能夠在治療后至少8周有效。重復(fù)實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)更長(zhǎng)的時(shí)間點(diǎn)。對(duì)iii型小鼠通過icv輸注，以50μg/天給藥isis396443，連續(xù)7天。在為期7天的輸注期結(jié)束后的0、0.5、1、2、4、和6個(gè)月處死小鼠。從脊髓中收集rna，采用northern印跡進(jìn)行分析。如下圖所示，isis396443輸注的效應(yīng)可以在輸注后持續(xù)6個(gè)月，如圖2所示。針對(duì)這種長(zhǎng)效作用存在若干種可能的解釋。其可能反映出isis396443的穩(wěn)定性、修正后的smn蛋白的穩(wěn)定性和/或給藥劑量足夠高，使得化合物即使通過代謝而減少，其剩余劑量仍持續(xù)提供效果。因此，這些數(shù)據(jù)可以支持采用更低的給藥劑量和給藥頻率。實(shí)施例5-通過連續(xù)腦室內(nèi)(icv)輸注進(jìn)行反義化合物給藥采用微型滲透泵(azlet滲透泵，cupertino，ca，usa)，在帶有人smn2轉(zhuǎn)基因的成年iii型smn+/-或smn-/-sma小鼠(臺(tái)灣品系)中，將isis396443通過右側(cè)腦室遞送至腦脊液(csf)中。劑量依賴性研究揭示，在腦室內(nèi)(icv)輸注isis396443可以使脊髓中smn2對(duì)外顯子7的包含增至～90％，而經(jīng)生理鹽水治療的小鼠為～10％。western印跡和免疫組化分析顯示，脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中人轉(zhuǎn)基因smn蛋白的水平表現(xiàn)出穩(wěn)健的增加。這些結(jié)果提示，通過cns輸注給藥反義寡核苷酸isis396443，可以挽救sma狀態(tài)，因?yàn)閷?duì)外顯子7的排除與sma的表型相關(guān)。實(shí)施例6-胚胎給藥在妊娠第15天(e15)，對(duì)胚胎臺(tái)灣小鼠通過單次icv注射20μg或10μg的isis396443。在出生后第7天(p7)處死動(dòng)物。從腰椎脊髓中分離rna，使用rt-pcr進(jìn)行分析。單次胚胎給藥isis396443，得到大量的對(duì)外顯子7的包含。這些結(jié)果提示，在子宮內(nèi)使用反義寡核苷酸isis396443治療，可以挽救sma狀態(tài)，因?yàn)閷?duì)外顯子7的排除與sma的表型相關(guān)。重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)并在第11周處死動(dòng)物。未治療的臺(tái)灣小鼠出現(xiàn)壞死的尾部，其隨時(shí)間的推移而變短。單次胚胎注射給藥20μg的isis396443，可以明顯推遲尾部降解的發(fā)生，如圖3a所示。這些結(jié)果提示，采用靶向作用于smn的反義寡核苷酸進(jìn)行胚胎治療，能夠推遲sma發(fā)病。這些結(jié)果在另外一項(xiàng)研究中得到確證，其采用相同條件，但檢測(cè)時(shí)采用的劑量為20μg和10μg的isis396443，且該研究包括正常小鼠作為對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3b。實(shí)施例7-在δ-7小鼠模型中進(jìn)行的體內(nèi)給藥將雜合子(smn+/-、hsmn2+/+、smnδ7+/+)繁育配子進(jìn)行交配，并于出生當(dāng)日(p0)對(duì)新生幼仔給藥isis396443(18-mer，seqidno.1)、isis396449(15-mer，seqidno.2)、isis387954(20-mer，seqidno.7)或亂序?qū)φ誥so(isis439273；18-mer)。通過雙側(cè)注射，向小鼠大腦外側(cè)的腦室給藥總共8μg的劑量(每個(gè)外側(cè)腦室4μg)。全部注射均使用已描述過的極細(xì)拉制玻璃微量吸管針進(jìn)行(passinietal，j.virol.(2001)75：12382-12392)。注射后，通過剪去幼仔的足趾和鑒定其基因型(leetal.，hum.mol.genet.(2005)14：845-857)，以識(shí)別sma(smn-/-、hsmn2+/+、smnδ7+/+)、雜合子和野生型(smn+/+、hsmn2+/+、smnδ7+/+)小鼠。將整窩淘汰至剩余7只幼仔，以控制存活窩的規(guī)模。某些窩未進(jìn)行注射，以作為未治療的對(duì)照組。在sma小鼠中，在注射后14天檢測(cè)到脊髓中廣泛分布有18-mer，包括脊髓的胸段、腰段和頸段。此外，采用chat進(jìn)行的共定位研究確證了，在脊髓中isis396443靶向作用的大量細(xì)胞為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。在未經(jīng)治療的對(duì)照小鼠中未檢測(cè)到該信號(hào)。在第14天進(jìn)行western印跡分析的結(jié)果顯示，在腦和脊髓中smn的量為野生型水平的40-60％，而未經(jīng)治療的sma對(duì)照為10％。在給藥亂序aso的對(duì)照小鼠中，未檢測(cè)到高于背景值的信號(hào)。western印跡的結(jié)果參見圖4。與未經(jīng)治療的sma小鼠或給藥亂序aso的sma小鼠相比，給藥smaaso的sma小鼠還表現(xiàn)出體重、移動(dòng)功能(翻正反射和抓握力)和協(xié)調(diào)性(后肢張開)的顯著增加，不管aso的長(zhǎng)度如何。與未經(jīng)治療的sma小鼠相比，給藥亂序aso的sma小鼠的體重、移動(dòng)功能(翻正反射和抓握力)和協(xié)調(diào)性未出現(xiàn)顯著增加。結(jié)果參見圖5和圖6。重要的是，給藥aso的sma小鼠，不管aso的長(zhǎng)度如何，其平均生存期顯著增加，如圖7所示。與未經(jīng)治療的sma對(duì)照(16.0天)相比，自出生時(shí)起的生存期為31.5(15-mer)、27.0(18-mer)和28.0(20-mer)天。而與之相反的是，對(duì)sma小鼠給藥18-mer的亂序?qū)φ蘸?，不能改善其生存期。這些結(jié)果表明，采用靶向作用于smn的反義寡核苷酸進(jìn)行治療，可以延長(zhǎng)患有sma對(duì)象的壽命。如圖8所示，smaaso還可以增加脊髓中運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞的計(jì)數(shù)。采用rt-pcr對(duì)smnrna進(jìn)行檢測(cè)。與未經(jīng)治療的sma小鼠相比，給藥smaaso的動(dòng)物中smnrna水平增加。圖9顯示了給藥20-meraso的小鼠與未經(jīng)治療sma小鼠的比較結(jié)果。為確定給藥第二個(gè)劑量是否能夠進(jìn)一步延長(zhǎng)生存期，在第21天時(shí)以額外的20μg劑量重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見圖10。上面的圖顯示第0天時(shí)第一個(gè)8μg劑量的作用。在p21天時(shí)，對(duì)一半的治療小鼠進(jìn)行第二次治療。圖11顯示了第二次治療的作用與僅接受第一次治療小鼠的比較結(jié)果。該結(jié)果顯示，使用反義寡核苷酸進(jìn)行第二次icv治療能夠進(jìn)一步延長(zhǎng)存活期。實(shí)施例8-在smaiii型小鼠中的活性在sma小鼠模型中，對(duì)兩種反義化合物和一種對(duì)照化合物進(jìn)行檢測(cè)?；衔锶缦卤硭?。在臺(tái)灣品系sma小鼠中檢測(cè)的化合物臺(tái)灣品系的smaiii型小鼠來自杰克遜實(shí)驗(yàn)室(barharbor，maine)。這些小鼠缺乏小鼠smn，并且是人smn2的純合子(msmn-/-；hsmn2+/+)。對(duì)這些小鼠的描述參見hsieh-lihm，etal.，naturegenet.24，66-702000。每天對(duì)小鼠給藥3、10、30、或100μg的isis396443或isis449220，或每天給藥30或100μg對(duì)照化合物isis439272，溶于磷酸鹽緩沖液(pbs)中。對(duì)照小鼠僅給藥pbs(劑量為0)。全部治療藥物均采用azlet1007d滲透泵進(jìn)行腦室內(nèi)(icv)輸注給藥。各劑量均設(shè)置5只動(dòng)物，但是，isis449220的最高劑量組中有兩只小鼠在研究完成前死亡。在第9天處死動(dòng)物(末次給藥后兩天)，收集各只動(dòng)物的腦和脊髓腰段。對(duì)各樣品進(jìn)行實(shí)時(shí)pcr檢測(cè)，以確定包含外顯子7((+)外顯子7)的人smn2的量，和缺乏外顯子7((-)外顯子7)的人smn2的量。同時(shí)還通過實(shí)時(shí)pcr檢測(cè)，確定同種異體移植物炎癥因子(aif1)和甘油醛-3-磷酸脫氫酶(gadph)的表達(dá)水平。利用gadph水平對(duì)(+)外顯子7和(-)外顯子7的表達(dá)水平進(jìn)行歸一化處理。隨后用這些歸一化的表達(dá)水平除以給藥pbs的對(duì)照小鼠經(jīng)gadph歸一化的水平。在下表17中報(bào)告了得到的對(duì)照值的倍數(shù)。數(shù)據(jù)表示為各組中全部五只小鼠的對(duì)照值倍數(shù)的平均值，但isis449220最高劑量組除外，其表示3只存活小鼠的值。isis396443給藥導(dǎo)致外顯子7的包含顯著增加。在10μg/天劑量下，isis396443使得在腦內(nèi)保留了外顯子7的smn2幾乎是未經(jīng)治療的對(duì)照的2倍(1.8倍)，在脊髓腰段為高于2倍。在sma小鼠中反義化合物改變剪接的能力*該劑量下的數(shù)據(jù)僅來自3只小鼠將同種異體移植物炎癥因子(aif1)的表達(dá)量作為炎癥指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。將所有樣品以(gadph)歸一化后，用各治療組的aif1比率除以pbs對(duì)照的值。即使在最高劑量水平，isis396443也未使aif1增加。isis449220使腦和腰段脊髓的aif1增加。表18中的數(shù)據(jù)表示各組全部五只小鼠的對(duì)照值倍數(shù)的平均值，但isis449220最高劑量組除外，其表示3只存活小鼠的值。在sma小鼠中反義化合物的毒性*該劑量下的數(shù)據(jù)僅來自3只小鼠實(shí)施例9-對(duì)猴給藥使用短尾猴評(píng)估isis395443在不同劑量和給藥途徑下的分布。對(duì)2只猴給藥isis395443。通過icv輸注對(duì)一只猴給藥3mg的劑量，通過it輸注對(duì)另外一只猴給藥3mg的劑量。兩次輸注的遞送時(shí)間均為24小時(shí)。在輸注期結(jié)束96小時(shí)后，處死猴并收集其組織。檢測(cè)脊髓頸段、胸段和腰段樣品中isis396443的濃度。結(jié)果匯總于下表。由于短尾猴約為3kg，因此該給藥劑量約為1mg/kg。為進(jìn)一步評(píng)估isis39644的分布，將二十六只猴如下表所示分為六組。各組的輸注速率均為100μl/小時(shí)。所有猴均接受溶于生理鹽水的總劑量為3mg的isis39644，但第1組除外，其僅使用生理鹽水。輸注結(jié)束后5天處死猴并收集組織。采用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)評(píng)估猴組織樣本中isis39644的濃度。結(jié)果匯總于圖12的圖表中。還采用組織學(xué)方法對(duì)樣本進(jìn)行評(píng)估。組織學(xué)檢測(cè)并未顯示出治療存在任何不良反應(yīng)，且確證了isis396443的存在。沒有證據(jù)顯示purkinje細(xì)胞減少。與慢速輸注相比，快速輸注似乎具有更多的isis396443。這些結(jié)果提示，在某些實(shí)施方式中可以優(yōu)選更快的輸注速率或推注注射。由于推注給藥與輸注相比具有某些實(shí)際的優(yōu)點(diǎn)，因此在某些實(shí)施方式中優(yōu)選通過該方法給藥至csf。在某些實(shí)施方式中，給藥至csf的優(yōu)選方法為通過推注it注射。實(shí)施例10-嚴(yán)重sma小鼠模型的產(chǎn)生和icv治療已產(chǎn)生出具有嚴(yán)重sma表型(ssma小鼠)的小鼠。純合性ssma小鼠攜帶2個(gè)拷貝的人smn2且無小鼠smn。其平均壽命約為10天。此外，sma小鼠更小，且具有更短的尾部。雜合子攜帶小鼠smn且發(fā)育正常。為研究在這些ssma小鼠中反義化合物的效應(yīng)，在p1天通過icv注射給藥20μg的isis396443。治療使得平均生存期由9.9天(給藥生理鹽水的對(duì)照)增至16.7天。rt-pcr分析結(jié)果顯示，在治療組小鼠的組織中，全長(zhǎng)smnrna的量增加。實(shí)施例11-isis396443全身給藥將ssma小鼠和健康雜合對(duì)照小鼠按照如下方式分組，以研究通過推注icv注射和/或推注皮下注射(sc)時(shí)，isis396443的效應(yīng)：第1組-icv+sc在p1或p2(出生后第1天或第2天)進(jìn)行一次20μg的icv注射；在p0和p3之間遞送兩次50μg/g的皮下注射。第2組-sc+sc在p0和p3之間遞送兩次50μg/g的sc注射；在p5和p6之間遞送一次50μg/g的皮下注射；在p9和p10之間遞送一次50μg/g的皮下注射。第3組-sc在p0和p3之間遞送兩次50μg/g的sc注射。第4組-sma生理鹽水對(duì)照在p1或p2進(jìn)行一次生理鹽水的icv注射；在p0和p3之間遞送兩次生理鹽水皮下注射。第5組-雜合子對(duì)照在p1或p2進(jìn)行一次20μg的icv注射；在雜合小鼠的p0和p3之間遞送兩次50μg/g的皮下注射。各組均包含14至22只小鼠。各組中各只小鼠的存活期(以天計(jì))參見下表。在撰寫本專利申請(qǐng)時(shí)，本研究中的很多小鼠仍然存活。因此，以“＞”表示的值是指已經(jīng)存活了這些天數(shù)且仍存活的小鼠。實(shí)施例12-sc給藥的劑量應(yīng)答通過下述給藥組，評(píng)估ssma小鼠在接受不同劑量皮下給藥isis396443時(shí)的存活期。第1組-sc400(劑量范圍為80mg/kg至180mg/kg)在p0至p3之間通過兩次sc注射向每只小鼠遞送總劑量400μg，第一個(gè)劑量是在p0或p1時(shí)的150μg(體積為3μl)，第二個(gè)劑量是在p2或p3時(shí)遞送的250μg(體積為5μl)。第2組-sc200(劑量范圍為40mg/kg至90mg/kg)在p0至p3之間通過兩次sc注射向每只小鼠遞送200μg的總劑量，第一個(gè)劑量在p0-p1時(shí)的75μg(體積為1.5μl)，第二個(gè)劑量是在p2或p3時(shí)遞送的125μg(體積為2.5μl)。第3組-sc100(劑量范圍為20mg/kg至45mg/kg)在p0至p3之間通過兩次sc注射向每只小鼠遞送100μg的總劑量，第一個(gè)劑量是在p0或p1時(shí)的40μg(體積為2μl)，第二個(gè)劑量是在p2或p3時(shí)遞送的60μg(體積為3μl)。第4組-sma生理鹽水(陰性對(duì)照)在p0和p3之間通過兩次sc注射生理鹽水，第一個(gè)劑量是在p0或p1(體積為5μl)，第二個(gè)劑量在p2或p3時(shí)遞送(體積為5μl)。第5組-雜合子對(duì)照(陽性對(duì)照)未接受任何治療的小鼠。各組均包含14至26只小鼠。各組中各只小鼠的存活期(以天計(jì))參見下表。在撰寫本專利申請(qǐng)時(shí)，本研究中的很多小鼠仍然存活。因此，以“＞”表示的值是指已經(jīng)存活了這些天數(shù)且仍存活的小鼠。實(shí)施例13-icv輸注對(duì)比icv推注比較了對(duì)腦室內(nèi)推注注射(icv推注)給藥與連續(xù)腦室內(nèi)輸注(icv輸注)給藥。對(duì)iii型sma轉(zhuǎn)基因小鼠給藥isis387954。對(duì)icv輸注小鼠給藥，總劑量為0(pbs對(duì)照)、87.5μg、175μg、350μg、或700μg，輸注7天，并于2天后處死動(dòng)物。通過單次icv注射，對(duì)icv推注小鼠給藥相同的總劑量，0(pbs對(duì)照)、87.5μg、175μg、350μg、或700μg，并于9天后處死動(dòng)物。各組均有5只小鼠。收集腰段脊髓的rna，并采用實(shí)時(shí)pcr進(jìn)行分析。使用生理鹽水對(duì)照對(duì)內(nèi)含子7的包含進(jìn)行歸一化處理。結(jié)果匯總于下表。在此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，與icv輸注7天進(jìn)行的遞送相比，通過icv推注遞送相同的劑量可獲得更高的活性。還通過實(shí)時(shí)pcr檢測(cè)，確定同種異體移植物炎癥因子(aif1)的表達(dá)水平，以便對(duì)炎癥進(jìn)行評(píng)估。經(jīng)治療小鼠的樣本與對(duì)照小鼠的樣本相比，均不存在顯著差異。實(shí)施例14-icv推注的劑量應(yīng)答在附加劑量下對(duì)腦室內(nèi)推注給藥進(jìn)行檢測(cè)。通過單次推注icv注射，對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠給藥0、10.9μg、21.9μg、43.4μg、87.5μg、或175μg的isis387954，并在9天后處死小鼠，如實(shí)施例13所述。收集腦和腰段脊髓樣本。制備rna并采用rt-pcr，分析內(nèi)含子7的包含的變化和aif1的變化。與對(duì)照相比，沒有樣本顯示出aif1改變。內(nèi)含子7的包含的結(jié)果匯總于下表。ed50在22μg左右。序列表<110>比奧根ma公司冷泉港實(shí)驗(yàn)室c.frankbennettgenehungfrankrigoadrianr.kraineryiminhuamarcopassinilamyashihabuddinsengh.chengkatherinew.klinger<120>用于在對(duì)象中調(diào)節(jié)smn2剪接的組合物和方法<130>core0086wo<150>61/218,031<151>2009-06-17<160>24<170>供windows使用的fastseq4.0版<210>1<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>1tcactttcataatgctgg18<210>2<211>15<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>2tttcataatgctggc15<210>3<211>15<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>3tgctggcagacttac15<210>4<211>15<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>4cataatgctggcaga15<210>5<211>15<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>5tcataatgctggcag15<210>6<211>15<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>6ttcataatgctggca15<210>7<211>20<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>7attcactttcataatgctgg20<210>8<211>15<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>8ctttcataatgctgg15<210>9<211>12<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>9tcataatgctgg12<210>10<211>15<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>10actttcataatgctg15<210>11<211>12<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>11ttcataatgctg12<210>12<211>15<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>12cactttcataatgct15<210>13<211>12<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>13tttcataatgct12<210>14<211>15<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>14tcactttcataatgc15<210>15<211>12<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>15ctttcataatgc12<210>16<211>15<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>16ttcactttcataatg15<210>17<211>12<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>17actttcataatg12<210>18<211>15<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>18attcactttcataat15<210>19<211>12<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>19cactttcataat12<210>20<211>15<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>20gattcactttcataa15<210>21<211>12<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>21tcactttcataa12<210>22<211>12<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>22ttcactttcata12<210>23<211>12<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>23attcactttcat12<210>24<211>15<212>dna<213>人工序列<220><223>合成寡核苷酸<400>24agtaagattcacttt15當(dāng)前第1頁12