相關(guān)申請的交叉參考

本申請涉及并依據(jù)35u.s.c.119要求2014年6月13日提交的美國臨時申請?zhí)?2/012,116的優(yōu)先權(quán)益。該臨時申請的內(nèi)容以引用的方式整體并入本文中。

領(lǐng)域

本文提供了使用fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑治療如癌癥等病理病癥的組合療法。

背景

癌癥一直是人類健康的最致命威脅之一。在美國，每年有近一百三十萬新增癌癥患者，而且癌癥是繼心臟病之后第二大導(dǎo)致死亡的原因，每4例死亡中就有近1例。舉例來說，乳癌是癌癥的第二常見形式并且在引起美國婦女死亡的癌癥中排名第二。另據(jù)預(yù)測，癌癥在5年內(nèi)可能超過心血管疾病成為排名第一的死亡原因。實體腫瘤是這些死亡病例中大部分的原因。盡管在某些癌癥的醫(yī)學(xué)治療方面已經(jīng)取得顯著進(jìn)步，但在過去20年里，所有癌癥的總體5年存活率僅提高約10％。癌癥或惡性腫瘤會轉(zhuǎn)移并以一種不受控制的方式迅速生長，使得及時檢測和治療相當(dāng)困難。

蛋白質(zhì)激酶(pk)是癌癥治療的標(biāo)靶。其是通過從atp轉(zhuǎn)移末端(γ)磷酸酯催化在蛋白質(zhì)的酪氨酸、絲氨酸和蘇氨酸殘基上的羥基磷酸化的酶。通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑，這些酶調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化及增殖，即，細(xì)胞壽命的實際上所有方面不管怎樣均取決于pk活性(hardie，g.和hanks，s.(1995)theproteinkinasefactsbook.iandii，academicpress，sandiego，ca)。另外，異常pk活性與一系列病癥有關(guān)，從如牛皮癬等相對不危及生命的疾病到如成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(腦癌)等致命性疾病。蛋白質(zhì)激酶是治療性調(diào)節(jié)的一類重要標(biāo)靶(cohen，p.(2002)naturerev.drugdiscovery1：309)。

mek是使erk1和erk2上活化所需的酪氨酸和蘇氨酸磷酸化的雙特異性激酶。兩個相關(guān)基因編碼mek1和mek2，二者在與erk的結(jié)合方面不同。her3是能夠被神經(jīng)調(diào)節(jié)因子和ntak結(jié)合和活化的受體酪氨酸激酶。egfr是一種跨膜糖蛋白，并且是表皮生長因子家族成員的受體。

raf抑制劑也被用于靶向如惡性黑素瘤等帶有b-rafv600e突變的癌癥；不過，其臨床成果由于獲得性抗性而受到抑制。

然而，即使raf和pk抑制劑被證實可有效治療某些癌癥，但相對較快的獲得針對癌癥藥物的抗性仍是成功癌癥療法的一大阻礙。在闡明此類藥物抗性的分子基礎(chǔ)方面所作的努力披露了多種機(jī)制，包括藥物流出、標(biāo)靶的藥物結(jié)合缺陷性突變體的獲得、替代性存活路徑的接合、表觀遺傳變化。另外，特定癌癥對當(dāng)前治療(例如raf和pk抑制劑)反應(yīng)的程度不同。

因此，需要能成功解決癌細(xì)胞群內(nèi)的異質(zhì)性以及癌細(xì)胞對藥物治療的抗性的發(fā)生的新穎治療方法。

概述

已經(jīng)確定，通過抑制mek可以改善在體外和體內(nèi)抑制癌細(xì)胞生長方面的作用。人們發(fā)現(xiàn)，例如，gdc-0973(即，克比替尼(cobimetinib))或gdc-0623，或其藥學(xué)上可接受的鹽，可以用于治療性治療過度增生性病癥。不過，不同的過度增生性病癥(例如癌癥)對于如克比替尼等mek抑制劑具有不同敏感性。因此，需要改善對mek抑制劑的敏感性以治療性治療過度增生性病癥。如本文所描述，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑與mek拮抗劑的組合治療可用于治療過度增生性病癥，如癌癥。在某些實施方案中，施用這些組合可以提供協(xié)同作用。

確切地說，本文提供治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向所述個體伴隨施用(a)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)mek拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek拮抗劑的敏感期和/或延遲癌癥對mek拮抗劑的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效增加包括mek拮抗劑的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek拮抗劑而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效使功效增加。在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek拮抗劑而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek拮抗劑的敏感性。

本文還提供了處理個體的癌細(xì)胞的方法，其中所述癌細(xì)胞對用mek拮抗劑進(jìn)行的治療具有抗性，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和有效量的mek拮抗劑。此外，本文還提供了治療個體的對mek拮抗劑具有抗性的癌癥的方法，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和有效量的mek拮抗劑。

本文提供了增加對mek拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和有效量的mek拮抗劑。

本文還提供了增加包括mek拮抗劑的癌癥治療在個體中的功效的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。

本文提供了治療個體的癌癥的方法，其中癌癥治療包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑，其中相較于包括施用有效量的mek拮抗劑而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，該癌癥治療具有較高功效。

此外，本文提供了延遲和/或防止個體的癌癥對mek拮抗劑產(chǎn)生抗性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。

本文提供了治療對mek拮抗劑產(chǎn)生抗性的可能性較高的癌癥個體的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。

另外，本文提供了增加癌癥個體對mek拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。

本文還提供了延長癌癥個體對mek拮抗劑的敏感期的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。

本文提供了延長癌癥個體對egfr拮抗劑的反應(yīng)持續(xù)時間的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗體抑制劑、小分子抑制劑、結(jié)合多肽抑制劑和/或多聚核苷酸拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是結(jié)合多肽抑制劑。在一些實施方案中，結(jié)合多肽抑制劑包含fgfr細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域連接至fc結(jié)構(gòu)域的區(qū)域(例如，fgfr細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域連接至免疫球蛋白鉸鏈和fc結(jié)構(gòu)域的區(qū)域)。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr4信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是小分子。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗體。

在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr1b、fgfr1c、fgf1、fgf2、fgf3、fgf4、fgf5、fgf6及fgf10。在一些實施方案中，所述小分子是n-[2-[[4-(二乙基氨基)丁基]氨基]-6-(3，5-二甲氧基苯基)吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-基]-n′-(1，1-二甲基乙基)-脲或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實施方案中，該小分子是bgj398(novartis)、azd4547(astrazeneca)和/或ff284(chugai/debiopharm(debio1347)。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgf2抗體。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr1抗體。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr1-iiib抗體。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr1-iiic抗體。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是能夠結(jié)合超過一個fgfr多肽的抗fgfr抗體。

在所述方法中任一種的一些實施方案中，mek拮抗劑是mek1拮抗劑。在所述方法中任一種的一些實施方案中，mek拮抗劑是mek2拮抗劑。在所述方法中任一種的一些實施方案中，met拮抗劑是mek1和mek2拮抗劑。

在某些實施方案中，mek拮抗劑是gdc-0973(即，克比替尼)或gdc-0623，或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實施方案中，mek拮抗劑是克比替尼。

mek拮抗劑與fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑可以同時施用。mek拮抗劑與fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑可以依序施用。在一些實施方案中，mek拮抗劑是在fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑之前施用。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是在mek拮抗劑之前施用。

在一些實施方案中，已經(jīng)顯示患者的癌癥表達(dá)mek生物標(biāo)記物。在一些實施方案中，已經(jīng)顯示患者的癌癥表達(dá)mek1生物標(biāo)記物。在一些實施方案中，已經(jīng)顯示患者的癌癥表達(dá)mek2生物標(biāo)記物。在一些實施方案中，已經(jīng)顯示患者的癌癥表達(dá)mek1和mek2生物標(biāo)記物。

在一些實施方案中，已經(jīng)顯示患者的癌癥表達(dá)b-raf生物標(biāo)記物。b-raf生物標(biāo)記物可以是突變體b-raf。突變體b-raf是組成性活化的b-raf。在一些實施方案中，突變體b-raf是b-rafv600。b-rafv600可以是b-rafv600e。突變體b-raf的非限制性示例性列表是：b-rafv600k(gtg＞aag)、v600r(gtg＞agg)、v600e(gtg＞gaa)和/或v600d(gtg＞gat)。在一些實施方案中，檢測突變體b-raf多肽。在一些實施方案中，檢測突變體b-raf核酸。“v600e”是指b-raf(t＞a)中在第1799位核苷酸處引起b-raf的第600位氨基酸處的谷氨酰胺被纈胺酸取代的突變。根據(jù)先前的編號系統(tǒng)(kumar等人，clin.cancerres.9：3362-3368，2003)，“v600e”又稱“v599e”(1796t＞a)。

在一些實施方案中，已經(jīng)顯示患者的癌癥表達(dá)mek和b-raf生物標(biāo)記物。

在特定實施方案中，本文提供了治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)pi3k拮抗劑和(b)mek拮抗劑。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek拮抗劑的敏感期和/或延遲癌癥對mek拮抗劑的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效增加包括mek拮抗劑的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pi3k拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效使功效增加。在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pi3k拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek拮抗劑的敏感性。

在特定實施方案中，本文還提供了處理個體的癌細(xì)胞的方法，其中所述癌細(xì)胞對用mek拮抗劑進(jìn)行的治療具有抗性，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek拮抗劑。此外，本文還提供了治療個體的對mek拮抗劑具有抗性的癌癥的方法，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了增加對mek拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向所述個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加包括mek拮抗劑的癌癥治療在個體中的功效的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pi3k拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。

本文提供了治療個體的癌癥的方法，其中癌癥治療包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑，其中相較于包括施用有效量的mek拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，該癌癥治療具有較高功效。

在特定實施方案中，本文提供了延遲和/或防止個體的癌癥對mek拮抗劑產(chǎn)生抗性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療對mek拮抗劑產(chǎn)生抗性的可能性較高的癌癥個體的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加癌癥個體對mek拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek拮抗劑的敏感期的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek拮抗劑的反應(yīng)持續(xù)時間的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)pi3k拮抗劑和(b)mek1拮抗劑。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和mek1拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek1拮抗劑的敏感期和/或延遲癌癥對mek1拮抗劑的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和mek1拮抗劑各自的量有效增加包括mek1拮抗劑的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek1拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pi3k拮抗劑和mek1拮抗劑各自的量有效使功效增加。在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek1拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pi3k拮抗劑和mek1拮抗劑各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和mek1拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek1拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek1拮抗劑的敏感性。

在特定實施方案中，本文還提供了處理個體的癌細(xì)胞的方法，其中所述癌細(xì)胞對用mek1拮抗劑進(jìn)行的治療具有抗性，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek1拮抗劑。此外，本文還提供了治療個體的對mek1拮抗劑具有抗性的癌癥的方法，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek1拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了增加對mek1拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek1拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向所述個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek1拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加包括mek1拮抗劑的癌癥治療在個體中的功效的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pi3k拮抗劑和(b)有效量的mek1拮抗劑。

本文提供了治療個體的癌癥的方法，其中癌癥治療包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek1拮抗劑和(b)有效量的mek1拮抗劑，其中相較于包括施用有效量的mek1拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，該癌癥治療具有較高功效。

在特定實施方案中，本文提供了延遲和/或防止個體的癌癥對mek1拮抗劑產(chǎn)生抗性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek1拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療對mek1拮抗劑產(chǎn)生抗性的可能性較高的癌癥個體的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek1拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加癌癥個體對mek1拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek1拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek1拮抗劑的敏感期的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek1拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek1拮抗劑的反應(yīng)持續(xù)時間的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek1拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)pi3k拮抗劑和(b)mek2拮抗劑。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和mek2拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek2拮抗劑的敏感期和/或延遲癌癥對mek2拮抗劑的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和mek2拮抗劑各自的量有效增加包括mek2拮抗劑的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek2拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pi3k拮抗劑和mek2拮抗劑各自的量有效使功效增加。在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek2拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pi3k拮抗劑和mek2拮抗劑各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和mek2拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek2拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek2拮抗劑的敏感性。

在特定實施方案中，本文還提供了處理個體的癌細(xì)胞的方法，其中所述癌細(xì)胞對用mek2拮抗劑進(jìn)行的治療具有抗性，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek2拮抗劑。此外，本文還提供了治療個體的對mek2拮抗劑具有抗性的癌癥的方法，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek2拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了增加對mek2拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek2拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向所述個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek2拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加包括mek2拮抗劑的癌癥治療在個體中的功效的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pi3k拮抗劑和(b)有效量的mek2拮抗劑。

本文提供了治療個體的癌癥的方法，其中癌癥治療包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek2拮抗劑和(b)有效量的mek2拮抗劑，其中相較于包括施用有效量的mek2拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，該癌癥治療具有較高功效。

在特定實施方案中，本文提供了延遲和/或防止個體的癌癥對mek2拮抗劑產(chǎn)生抗性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek2拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療對mek2拮抗劑產(chǎn)生抗性的可能性較高的癌癥個體的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek2拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加癌癥個體對mek2拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek2拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek2拮抗劑的敏感期的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek2拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek2拮抗劑的反應(yīng)持續(xù)時間的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek2拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)pi3k拮抗劑和(b)mek1/2拮抗劑。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和mek1/2拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek1/2拮抗劑的敏感期和/或延遲癌癥對mek1/2拮抗劑的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和mek1/2拮抗劑各自的量有效增加包括mek1/2拮抗劑的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek1/2拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pi3k拮抗劑和mek1/2拮抗劑各自的量有效使功效增加。在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek1/2拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pi3k拮抗劑和mek1/2拮抗劑各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和mek1/2拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek1/2拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek1/2拮抗劑的敏感性。

在特定實施方案中，本文還提供了處理個體的癌細(xì)胞的方法，其中所述癌細(xì)胞對用mek1/2拮抗劑進(jìn)行的治療具有抗性，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek1/2拮抗劑。此外，本文還提供了治療個體的對mek1/2拮抗劑具有抗性的癌癥的方法，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek1/2拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了增加對mek1/2拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek1/2拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向所述個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek1/2拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加包括mek1/2拮抗劑的癌癥治療在個體中的功效的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pi3k拮抗劑和(b)有效量的mek1/2拮抗劑。

本文提供了治療個體的癌癥的方法，其中癌癥治療包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek1/2拮抗劑和(b)有效量的mek1/2拮抗劑，其中相較于包括施用有效量的mek1/2拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，該癌癥治療具有較高功效。

在特定實施方案中，本文提供了延遲和/或防止個體的癌癥對mek1/2拮抗劑產(chǎn)生抗性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek1/2拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療對mek1/2拮抗劑產(chǎn)生抗性的可能性較高的癌癥個體的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek1/2拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加癌癥個體對mek1/2拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek1/2拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek1/2拮抗劑的敏感期的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek1/2拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek1/2拮抗劑的反應(yīng)持續(xù)時間的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的mek1/2拮抗劑和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)pi3k拮抗劑和(b)克比替尼。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和克比替尼各自的量有效增加癌癥對克比替尼的敏感期和/或延遲癌癥對克比替尼的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和克比替尼各自的量有效增加包括克比替尼的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量克比替尼而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pi3k拮抗劑和克比替尼各自的量有效使功效增加。在一些實施方案中，相較于包括施用有效量克比替尼而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pi3k拮抗劑和克比替尼各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑和克比替尼各自的量有效增加癌癥對克比替尼的敏感性和/或恢復(fù)對克比替尼的敏感性。

在特定實施方案中，本文還提供了處理個體的癌細(xì)胞的方法，其中所述癌細(xì)胞對用克比替尼進(jìn)行的治療具有抗性，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的克比替尼。此外，本文還提供了治療個體的對克比替尼具有抗性的癌癥的方法，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的克比替尼。

在特定實施方案中，本文提供了增加對克比替尼的敏感性和/或恢復(fù)對克比替尼的敏感性的方法，所述方法包括向所述個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的克比替尼。

在特定實施方案中，本文還提供了增加包括克比替尼的癌癥治療在個體中的功效的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pi3k拮抗劑和(b)有效量的克比替尼。

本文提供了治療個體的癌癥的方法，其中癌癥治療包括向個體伴隨施用(a)有效量的克比替尼和(b)有效量的克比替尼，其中相較于包括施用有效量的克比替尼而不施用(不存在)pi3k拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，該癌癥治療具有較高功效。

在特定實施方案中，本文提供了延遲和/或防止個體的癌癥對克比替尼產(chǎn)生抗性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的克比替尼和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療對克比替尼產(chǎn)生抗性的可能性較高的癌癥個體的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的克比替尼和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加癌癥個體對克比替尼的敏感性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的克比替尼和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對克比替尼的敏感期的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的克比替尼和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對克比替尼的反應(yīng)持續(xù)時間的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的克比替尼和(b)有效量的pi3k拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)fgfr拮抗劑和(b)mek1拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr拮抗劑和mek1拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek1拮抗劑的敏感期和/或延遲癌癥對mek1拮抗劑的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，fgfr拮抗劑和mek1拮抗劑各自的量有效增加包括mek1拮抗劑的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek1拮抗劑而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，fgfr拮抗劑和mek1拮抗劑各自的量有效使功效增加。在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek1拮抗劑而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，fgfr拮抗劑和mek1拮抗劑各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，fgfr拮抗劑和mek1拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek1拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek1拮抗劑的敏感性。

在特定實施方案中，本文還提供了處理個體的癌細(xì)胞的方法，其中所述癌細(xì)胞對用mek1拮抗劑進(jìn)行的治療具有抗性，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr拮抗劑和有效量的mek1拮抗劑。此外，本文還提供了治療個體的對mek1拮抗劑具有抗性的癌癥的方法，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr拮抗劑和有效量的mek1拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了增加對mek1拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek1拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向所述個體施用有效量的fgfr拮抗劑和有效量的mek1拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加包括mek1拮抗劑的癌癥治療在個體中的功效的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr拮抗劑和(b)有效量的mek1拮抗劑。

本文提供了治療個體的癌癥的方法，其中癌癥治療包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek1拮抗劑，其中相較于包括施用有效量的mek1拮抗劑而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，該癌癥治療具有較高功效。

在特定實施方案中，本文提供了延遲和/或防止個體的癌癥對mek1拮抗劑產(chǎn)生抗性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek1拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療對mek1拮抗劑產(chǎn)生抗性的可能性較高的癌癥個體的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek1拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加癌癥個體對mek1拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek1拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek1拮抗劑的敏感期的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek1拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek1拮抗劑的反應(yīng)持續(xù)時間的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek1拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)fgfr拮抗劑和(b)mek2拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr拮抗劑和mek2拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek2拮抗劑的敏感期和/或延遲癌癥對mek2拮抗劑的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，fgfr拮抗劑和mek2拮抗劑各自的量有效增加包括mek2拮抗劑的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek2拮抗劑而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，fgfr拮抗劑和mek2拮抗劑各自的量有效使功效增加。在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek2拮抗劑而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，fgfr拮抗劑和mek2拮抗劑各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，fgfr拮抗劑和mek2拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek2拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek2拮抗劑的敏感性。

在特定實施方案中，本文還提供了處理個體的癌細(xì)胞的方法，其中所述癌細(xì)胞對用mek2拮抗劑進(jìn)行的治療具有抗性，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr拮抗劑和有效量的mek2拮抗劑。此外，本文還提供了治療個體的對mek2拮抗劑具有抗性的癌癥的方法，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr拮抗劑和有效量的mek2拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了增加對mek2拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek2拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向所述個體施用有效量的fgfr拮抗劑和有效量的mek2拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加包括mek2拮抗劑的癌癥治療在個體中的功效的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr拮抗劑和(b)有效量的mek2拮抗劑。

本文提供了治療個體的癌癥的方法，其中癌癥治療包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek2拮抗劑，其中相較于包括施用有效量的mek2拮抗劑而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，該癌癥治療具有較高功效。

在特定實施方案中，本文提供了延遲和/或防止個體的癌癥對mek2拮抗劑產(chǎn)生抗性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek2拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療對mek2拮抗劑產(chǎn)生抗性的可能性較高的癌癥個體的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek2拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加癌癥個體對mek2拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek2拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek2拮抗劑的敏感期的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek2拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek2拮抗劑的反應(yīng)持續(xù)時間的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek2拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)fgfr拮抗劑和(b)mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)。在一些實施方案中，fgfr拮抗劑和mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)各自的量有效增加癌癥對mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)的敏感期和/或延遲癌癥對mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，fgfr拮抗劑和mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)各自的量有效增加包括mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，fgfr拮抗劑和mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)各自的量有效使功效增加。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，fgfr拮抗劑和mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，fgfr拮抗劑和mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)各自的量有效增加癌癥對mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)的敏感性和/或恢復(fù)對mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)的敏感性。

在特定實施方案中，本文還提供了處理個體的癌細(xì)胞的方法，其中所述癌細(xì)胞對用mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)進(jìn)行的治療具有抗性，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr拮抗劑和有效量的mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)。此外，本文還提供了治療對mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)具有抗性的個體癌癥的方法，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr拮抗劑和有效量的mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)。

在特定實施方案中，本文還提供了增加對mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)的敏感性和/或恢復(fù)對mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)的敏感性的方法，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr拮抗劑和有效量的mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)。

在特定實施方案中，本文還提供了增加個體對包含mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)的癌癥治療的功效的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr拮抗劑和(b)有效量的mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)。

本文提供了治療個體的癌癥的方法，其中癌癥治療包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)，其中相較于包括施用有效量的mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，該癌癥治療具有較高功效。

在特定實施方案中，本文還提供了延遲和/或防止個體的癌癥對mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)產(chǎn)生抗性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)。

在特定實施方案中，本文還提供了治療對mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)產(chǎn)生抗性的可能性較高的癌癥個體的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr拮抗劑和(b)有效量的mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)。

在特定實施方案中，本文還提供了增加癌癥個體對mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)的敏感性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)的敏感期的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)的反應(yīng)持續(xù)時間的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek1/2拮抗劑(即，mek1和mek2的抑制劑)。

在特定實施方案中，本文提供了治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)fgfr拮抗劑和(b)克比替尼。在一些實施方案中，fgfr拮抗劑和克比替尼各自的量有效增加癌癥對克比替尼的敏感期和/或延遲癌癥對克比替尼的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，fgfr拮抗劑和克比替尼各自的量有效增加包括克比替尼的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量克比替尼而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，fgfr拮抗劑和克比替尼各自的量有效使功效增加。在一些實施方案中，相較于包括施用有效量克比替尼而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，fgfr拮抗劑和克比替尼各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，fgfr拮抗劑和克比替尼各自的量有效增加癌癥對克比替尼的敏感性和/或恢復(fù)對克比替尼的敏感性。

在特定實施方案中，本文還提供了處理個體的癌細(xì)胞的方法，其中所述癌細(xì)胞對用克比替尼進(jìn)行的治療具有抗性，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr拮抗劑和有效量的克比替尼。此外，本文還提供了治療個體的對克比替尼具有抗性的癌癥的方法，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr拮抗劑和有效量的克比替尼。

在特定實施方案中，本文提供了增加對克比替尼的敏感性和/或恢復(fù)對克比替尼的敏感性的方法，所述方法包括向所述個體施用有效量的fgfr拮抗劑和有效量的克比替尼。

在特定實施方案中，本文還提供了增加包括克比替尼的癌癥治療在個體中的功效的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr拮抗劑和(b)有效量的克比替尼。

本文提供了治療個體的癌癥的方法，其中癌癥治療包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的克比替尼，其中相較于包括施用有效量的克比替尼而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，該癌癥治療具有較高功效。

在特定實施方案中，本文提供了延遲和/或防止個體的癌癥對克比替尼產(chǎn)生抗性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的克比替尼。

在特定實施方案中，本文提供了治療對克比替尼產(chǎn)生抗性的可能性較高的癌癥個體的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的克比替尼。

在特定實施方案中，本文還提供了增加癌癥個體對克比替尼的敏感性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的克比替尼。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對克比替尼的敏感期的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的克比替尼。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對克比替尼的反應(yīng)持續(xù)時間的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的克比替尼拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)pi3k拮抗劑、(b)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及(c)mek拮抗劑。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑、fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及mek拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek拮抗劑的敏感期和/或延遲癌癥對mek拮抗劑的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑、fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及mek拮抗劑各自的量有效增加包括mek拮抗劑的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑和/或fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pi3k拮抗劑、fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及mek拮抗劑各自的量有效使功效增加。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑和/或fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pi3k拮抗劑、fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及mek拮抗劑各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，pi3k拮抗劑、fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及mek拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek拮抗劑的敏感性。

在特定實施方案中，本文還提供了處理個體的癌細(xì)胞的方法，其中所述癌細(xì)胞對用mek拮抗劑進(jìn)行的治療具有抗性，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑、fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及mek拮抗劑。此外，本文還提供了治療個體的對mek拮抗劑具有抗性的癌癥的方法，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑、fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及mek拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了增加對mek拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向所述個體施用有效量的pi3k拮抗劑、fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及mek拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加包括mek2拮抗劑的癌癥治療在個體中的功效的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pi3k拮抗劑、(b)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及(c)有效量的mek拮抗劑。

本文提供了治療個體的癌癥的方法，其中癌癥治療包括向個體伴隨施用(a)有效量的pi3k拮抗劑、(b)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及(c)有效量的mek拮抗劑，其中相較于包括施用有效量的mek拮抗劑而不施用(不存在)pi3k拮抗劑和/或fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，該癌癥治療具有較高功效。

在特定實施方案中，本文提供了延遲和/或防止個體的癌癥對mek拮抗劑產(chǎn)生抗性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pi3k拮抗劑、(b)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及(c)有效量的mek拮抗劑。

在特定實施方案中，本文提供了治療對mek拮抗劑產(chǎn)生抗性的可能性較高的癌癥個體的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pi3k拮抗劑、(b)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及(c)有效量的mek拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了增加癌癥個體對mek拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pi3k拮抗劑、(b)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及(c)有效量的mek拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek拮抗劑的敏感期的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pi3k拮抗劑、(b)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及(c)有效量的mek拮抗劑。

在特定實施方案中，本文還提供了延長癌癥個體對mek拮抗劑的反應(yīng)持續(xù)時間的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pi3k拮抗劑、(b)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及(c)有效量的mek拮抗劑。

在以上實施的方法中的任一種中，mek抑制劑是mek1、mek2或mek1/2抑制劑(即，mek1和mek2的抑制劑)。在以上實施的方法中的任一種中，mek抑制劑是gdc-0793(克比替尼)。在以上實施的方法中的任一種中，pi3k抑制劑是gdc-0032。在以上實施的方法中的任一種中，fgfr信號傳導(dǎo)抑制劑是泛抑制劑(例如bgj398)或fgf1特異性拮抗劑。

在一些實施方案中，所述方法包括施用第三或第四化學(xué)治療劑。在某些實施方案中，該第三或第四化學(xué)治療劑是b-raf拮抗劑。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑是以下一種或多種：索拉非尼(sorafenib)、plx4720、plx-3603、gsk2118436、gdc-0879、n-(3-(5-(4-氯苯基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-羰基)-2，4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺、威羅非尼(vemurafenib)、gsk2118436、raf265(novartis)、xl281、arq736、bay73-4506。在其它實施方案中，b-raf拮抗劑是威羅非尼。在其它實施方案中，b-raf拮抗劑是gsk2118436。b-raf拮抗劑可以對b-rafv600e具有選擇性。在這些方法中任一種的具體實施方案中，b-raf拮抗劑是威羅非尼(daiichisankyo)。

在這些方法中任一種的具體實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗體抑制劑、小分子抑制劑、結(jié)合多肽抑制劑和/或多聚核苷酸拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是結(jié)合多肽抑制劑。在一些實施方案中，結(jié)合多肽抑制劑包含fgfr細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域連接至fc結(jié)構(gòu)域的區(qū)域(例如，fgfr細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域連接至免疫球蛋白鉸鏈和fc結(jié)構(gòu)域的區(qū)域)。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是小分子。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗體。

在具體實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfrb、fgfrc、fgf1、fgf2、fgf3、fgf4、fgf5、fgf6及fgf10。在一些實施方案中，小分子是n-[2-[[4-(二乙基氨基)丁基]氨基]-6-(3，5-二甲氧基苯基)吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-基]-n′-(1，1-二甲基乙基)-脲或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實施方案中，該小分子是bgj398(novartis)、azd4547(astrazeneca)和/或ff284(chugai/debiopharm(debio1347))。

在具體實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr抗體。

在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑僅結(jié)合至和/或抑制fgfr。

在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr-iiib抗體。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr-iiic抗體。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是能夠結(jié)合超過一個fgfr多肽的抗fgfr抗體。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是特異性結(jié)合fgfr并且不結(jié)合任何其它fgfr多肽的抗fgfr抗體。

mek拮抗劑、可選的第三或第四化學(xué)治療劑，以及fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑可以同時施用。mek拮抗劑、可選的第三或第四化學(xué)治療劑，以及fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑可以依序施用。在一些實施方案中，mek拮抗劑是在fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑之前施用。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是在mek拮抗劑之前施用。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，癌癥是肺癌。在一些實施方案中，癌癥是nsclc。在一些實施方案中，癌癥是乳癌。在一些實施方案中，癌癥是her2+乳癌。在一些實施方案中，癌癥經(jīng)歷上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)型。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，癌癥是肺癌。在一些實施方案中，癌癥是nsclc。在一些實施方案中，肺癌是乳癌。在一些實施方案中，肺癌是her2+乳癌。在一些實施方案中，癌癥經(jīng)歷上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)型。

附圖簡述

圖1a-d.|由腫瘤細(xì)胞和/或腫瘤微環(huán)境分泌的因子通過活化細(xì)胞表面受體而引起藥物抗性。a，在十個黑素瘤細(xì)胞系內(nèi)分泌的一組447個因子揭露fgf、hgf、nrg1及egf引起對b-raf和mek拮抗劑的抗性。b，如黑素瘤細(xì)胞系中所示，fgf2、hgf及nrg1最廣泛地并且有效地保護(hù)腫瘤細(xì)胞免受針對b-raf拮抗劑和mek拮抗劑的抗性影響(r＝50-100％保護(hù)率；pr＝25-50％保護(hù)率)。c，靶向met、fgfr及erbb受體的小分子抑制劑顯示，配體介導(dǎo)的抗性對同源受體具有特異性。d，促進(jìn)針對plx4032的抗性的分泌的生長因子再活化mapk和pi3k路徑。在plx4032存在下，在624個mel細(xì)胞中顯示fgf2對mapk的活化、hgf對mapk及akt的活化以及nrg1和sgf對akt的活化。用5μmplx4032處理24小時，并且用50ng.mlfgf2、hgf、nrgb1或scf處理10分鐘。

圖2a-d.|b-raf下游mek/erk的再活化是b-raf突變體黑素瘤中抗性的核心機(jī)制。a，如免疫印跡所示，fgf2介導(dǎo)的抗性是mapk信號傳導(dǎo)所需的。如免疫印跡中所指示，mapk信號傳導(dǎo)再活化是rtk介導(dǎo)的抗性的共同特征，其中fgf2介導(dǎo)的保護(hù)作用在plx4032(威羅非尼)存在下活化mek和erk。b，顯示raf1(c-raf)活化的免疫印跡表明，添加raf家族成員可以介導(dǎo)mapk再活化。c，利用合成致死性化學(xué)篩選鑒別12種獲得性抗性黑素瘤細(xì)胞系中介導(dǎo)對plx4032的抗性的信號傳導(dǎo)路徑。表中顯示了當(dāng)用mek抑制劑和erk抑制劑共同處理時對plx4032的敏感性的變化，表明b-raf下游路徑的再活化。d，圖2c中所示的對特定細(xì)胞系進(jìn)行的合成致死性化學(xué)篩選的實例。

圖3a-c.|獨立于mapk和pi3k的促存活機(jī)制促進(jìn)b-raf突變體黑素瘤的藥物抗性。a和b，小分子篩選鑒別出colo800和uacc-62細(xì)胞中的src家族活化。另外，通過抑制pi3k信號傳導(dǎo)使展現(xiàn)src依賴性抗性的細(xì)胞系再敏化。c，鑒別出抗細(xì)胞凋亡路徑的成員bcl-xl和bcl-2。如圖所示獲得對plx4032的抗性的g-361細(xì)胞對bcl-xl和bcl-2抑制劑具有抗性，但對plx4032和meki(gdc-0973)具有抗性的g-361細(xì)胞系變體對bcl-xl和bcl-2抑制劑敏感。

圖4a-c.|lox-imvi通過fgfr介導(dǎo)的機(jī)制而對plx4032產(chǎn)生抗性。a，經(jīng)顯示lox-imvivemr(威羅非尼抗性細(xì)胞系)依賴fgfr活性。b，對fgfr抑制劑產(chǎn)生抗性的lox-imvivemr細(xì)胞變得依賴egfr活性。b和c，對fgfr和egfr抑制劑產(chǎn)生抗性的lox-imvivemr細(xì)胞顯示在met和mek抑制劑存在下再敏化，同時分泌的hgf增加。

圖5a-c.|對10個黑素瘤細(xì)胞系和10個乳癌細(xì)胞系進(jìn)行篩選以測定fgf信號傳導(dǎo)在藥物抗性中的作用。a和b，在黑素瘤和乳癌細(xì)胞系中觀察到穩(wěn)健的z評分。c，fgf受體、其亞家族及其配體的概述。

圖6a-b.|fgf2使關(guān)鍵信號傳導(dǎo)路徑再活化以促進(jìn)抗性并且刺激下游信號傳導(dǎo)的持續(xù)活化。a，暴露于fgf2達(dá)10分鐘的細(xì)胞與未暴露的細(xì)胞的免疫印跡的比較。b，暴露于fgf2達(dá)24小時的細(xì)胞與未暴露于fgf2的細(xì)胞的免疫印跡的比較。

圖7a-c.|fgf分泌的因子介導(dǎo)黑素瘤細(xì)胞系中信號傳導(dǎo)的動力學(xué)。a，將細(xì)胞系用plx4032(威羅非尼)處理4小時并用fgf處理10分鐘。b，將624mel細(xì)胞系用plx4032處理24小時并用fgf處理24小時。c，將928mel細(xì)胞系用plx4032處理24小時并用fgf處理24小時。

圖8a-b.|fgfr靶向有效阻斷fgf2保護(hù)作用。a，下游路徑的有效阻斷通常不能克服fgf2的保護(hù)作用。b，用拉帕替尼(lapatinib)、meki、smi及fgf-2處理的au565細(xì)胞的免疫印跡(在hcc1954和uacc-893細(xì)胞系中也觀察到類似結(jié)果)。

圖9a-b.|獲得性抗性的其它機(jī)制包括對erk/mek抑制劑敏感(a)及對erk/mek抑制劑不敏感(b)。

圖10a-b.|在獲得性藥物抗性模型中明顯可見分泌因子介導(dǎo)的抗性機(jī)制。a，單藥耐藥性細(xì)胞系的表。b，由抗性篩選預(yù)測的抗性機(jī)制的連續(xù)獲得的證據(jù)。

圖11.|在chl-1黑素瘤細(xì)胞上進(jìn)行藥物篩選。將細(xì)胞用dmso(對照)、gdc-0973(即，克比替尼)、gdc-0032(pi3k-α抑制劑)、bfj-398(泛fgfr抑制劑)、gdc-0973和gdc-0032，或gdc-0973和bgj-398處理。結(jié)果顯示組合治療gdc-0973/gdc-0032和gdc-0973/bgj398的增加的功效。

圖12.|在hs839.t黑素瘤細(xì)胞上進(jìn)行的藥物篩選。將細(xì)胞用dmso(對照)、gdc-0973(即，克比替尼)、gdc-0032(pi3k-α抑制劑)、bfj-398(泛fgfr抑制劑)、gdc-0973和gdc-0032，或gdc-0973和bgj-398處理。結(jié)果顯示組合治療gdc-0973/gdc-0032和gdc-0973/bgj398的增加的功效。

圖13.|在hs895.t正常皮膚成纖維細(xì)胞上進(jìn)行的藥物篩選。將細(xì)胞用dmso(對照)、gdc-0973(即，克比替尼)、gdc-0032(pi3k-α抑制劑)、bfj-398(泛fgfr抑制劑)、gdc-0973和gdc-0032，或gdc-0973和bgj-398處理。結(jié)果顯示組合治療gdc-0973/gdc-0032和gdc-0973/bgj398的增加的功效。

圖14.|單藥抗性skmel24vemr(對威羅非尼具有抗性的skmel24細(xì)胞)用威羅非尼(即，plx4032)、bgj398和/或克比替尼(即，gdc-0973)處理。接著對細(xì)胞進(jìn)行加工并且通過western印跡法檢測fgfr1、pakt、pmek、perk、parp、pbad、bim及β肌動蛋白(對照)檢測。

圖15a-d.|產(chǎn)生針對威羅非尼和克比替尼具有雙藥抗性的細(xì)胞系(“g361rr”)并進(jìn)行blc2/xl抑制劑篩選，由此顯示g361rr細(xì)胞對blc-2/xl抑制劑更敏感。a，對未用威羅非尼處理的g361細(xì)胞(親本細(xì)胞，非威羅非尼或克比替尼抗性)、未用威羅非尼處理的g361vemr細(xì)胞(對威羅非尼具有單藥抗性的g361細(xì)胞)及在bcl-xl抑制劑存在下用威羅非尼處理的g361vemr細(xì)胞進(jìn)行活力研究。b，對未用威羅非尼或mek抑制劑處理的g361細(xì)胞、未用威羅非尼或mek抑制劑處理的g361rr細(xì)胞及在bcl-xl抑制劑存在下用威羅非尼和mek抑制劑處理的g361rr細(xì)胞進(jìn)行活力研究。c，對未用威羅非尼處理的g361細(xì)胞(親本細(xì)胞，非威羅非尼或克比替尼抗性)、未用威羅非尼處理的g361vemr細(xì)胞(對威羅非尼具有單藥抗性的g361細(xì)胞)及在bcl-xl/bcl-2抑制劑存在下用威羅非尼處理的g361vemr細(xì)胞進(jìn)行活力研究。d，對未用威羅非尼或mek抑制劑處理的g361細(xì)胞、未用威羅非尼或mek抑制劑處理的g361rr細(xì)胞及在bcl-xl/bcl-2抑制劑存在下用威羅非尼和mek抑制劑處理的g361rr細(xì)胞進(jìn)行活力研究。

詳細(xì)說明

i.定義

所關(guān)注多肽的“拮抗劑”(與“抑制劑”可互換使用)是干擾所關(guān)注多肽的活化或功能，例如，部分或完全阻斷、抑制或中和由所關(guān)注多肽介導(dǎo)的生物活性的一種藥劑。舉例來說，多肽x的拮抗劑可以指部分或完全阻斷、抑制或中和由多肽x介導(dǎo)的生物活性的任何分子。抑制劑的實例包括抗體；配體抗體；小分子拮抗劑；反義和抑制性rna(例如shrna)分子。優(yōu)選抑制劑是結(jié)合至所關(guān)注多肽的抗體或小分子。在一個特定實施方案中，抑制劑對所關(guān)注多肽的結(jié)合親和力(解離常數(shù))是約1,000nm或更低。在另一實施方案中，抑制劑對所關(guān)注多肽的結(jié)合親和力是約100nm或更低。在另一實施方案中，抑制劑對所關(guān)注多肽的結(jié)合親和力是約50nm或更低。在一個特定實施方案中，抑制劑共價結(jié)合至所關(guān)注多肽。在一個特定實施方案中，抑制劑抑制所關(guān)注多肽的信號傳導(dǎo)，并且ic50是1,000nm或更低。在另一實施方案中，抑制劑抑制所關(guān)注多肽的信號傳導(dǎo)，并且ic50是500nm或更低。在另一實施方案中，抑制劑抑制所關(guān)注多肽的信號傳導(dǎo)，并且ic50是50nm或更低。在某些實施方案中，拮抗劑將所關(guān)注多肽的表達(dá)水平或生物活性降低或抑制至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高。在一些實施方案中，所關(guān)注多肽是fgfr受體(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)或fgf(例如fgf1-23)。在一些實施方案中，所關(guān)注多肽是egfr。

除非另作指示，否則如本文所使用，術(shù)語“多肽”是指來自任何脊椎動物來源，包括哺乳動物，如靈長類動物(例如人類)及嚙齒動物(例如小鼠和大鼠)的任何天然多肽。該術(shù)語涵蓋“全長”未加工的多肽以及由在細(xì)胞中加工得到的任何多肽形式。該術(shù)語還涵蓋該多肽的天然存在的變體，例如剪接變體或等位基因變體。

“多聚核苷酸”或“核酸”在本文中可互換使用，指的是任何長度的核苷酸的聚合物，并且包括dna和rna。核苷酸可以是脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修飾的核苷酸或堿基，和/或其類似物，或者可以通過dna或rna聚合酶，或通過合成反應(yīng)并入聚合物中的任何底物。多聚核苷酸可以包含修飾的核苷酸，如甲基化核苷酸及其類似物。如果存在，則對核苷酸結(jié)構(gòu)的修飾可以在聚合物組裝之前或之后進(jìn)行。核苷酸序列可以間雜有非核苷酸組分。多聚核苷酸可以在合成后，如通過偶聯(lián)標(biāo)記進(jìn)一步進(jìn)行修飾。其它類型的修飾包括例如，“加帽”；一個或多個天然存在的核苷酸被類似物取代；核苷酸間修飾，如例如具有不帶電荷的鍵聯(lián)(例如甲基膦酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)的修飾和具有帶電荷的鍵聯(lián)(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的修飾；含有側(cè)接部分，如例如蛋白質(zhì)(例如核酸酶、毒素、抗體、信號肽、聚l-賴氨酸等)等的修飾；具有插入劑(例如吖啶、補(bǔ)骨脂素等)的修飾；含有螯合劑(例如金屬、放射性金屬、硼、氧化性金屬等)的修飾；含有烷化劑的修飾；具有修飾的鍵聯(lián)(例如α異頭核酸等)的修飾；以及多聚核苷酸的未修飾形式。另外，最初存在于糖中的任何羥基都可以例如被膦酸酯基、磷酸酯基置換；被標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基保護(hù)；或經(jīng)過活化以與另外的核苷酸形成另外的鍵聯(lián)；或者可以偶聯(lián)至固體或半固體支撐物。5′和3′末端oh可以被磷酸化或者被胺或具有1至20個碳原子的有機(jī)加帽基團(tuán)部分取代。其它羥基也可以被衍生為標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基。多聚核苷酸也可以含有本領(lǐng)域中一般已知的核糖或脫氧核糖的類似物形式，包括例如，2′-o-甲基-、2′-o-烯丙基、2′-氟-或2′-疊氮基-核糖、碳環(huán)糖類似物、α-異頭碳糖、差向異構(gòu)糖(如阿拉伯糖、木糖或來蘇糖)、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、無環(huán)類似物，及無堿基核苷類似物，如甲基核糖苷。一個或多個磷酸二酯鍵可以被替代性連接基團(tuán)置換。這些替代性連接基團(tuán)包括但不限于其中磷酸酯被p(o)s(“硫代磷酸酯”)、p(s)s(“二硫代磷酸酯”)、(o)nr2(“氨基磷酸酯”)、p(o)r、p(o)or′、co或ch2(“甲縮醛”)置換的實施方案，其中每個r或r′獨立地是h或者任選含有醚(-o-)鍵聯(lián)、芳基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或芳烷基的被取代或未被取代的烷基(1-20個c)。多聚核苷酸中的所有鍵聯(lián)未必是相同的。前述說明適用于本文提到的所有多聚核苷酸，包括rna和dna。

術(shù)語“小分子”是指分子量為約2000道爾頓或更低，優(yōu)選為約500道爾頓或更低的任何分子。

“分離”的抗體是與其自然環(huán)境的組分分離的抗體。在一些實施方案中，如由例如電泳法(例如sds-page、等電聚焦(ief)、毛細(xì)管電泳)或色譜法(例如離子交換或逆相hplc)所測，定抗體被純化至大于95％或99％純度。關(guān)于評估抗體純度的方法的綜述，參看例如flatman等人，j.chromatogr.b848：79-87(2007)。

術(shù)語“抗體”在本文中是以最廣泛意義使用并且涵蓋各種抗體結(jié)構(gòu)，包括但不限于，單克隆抗體、多克隆抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展現(xiàn)所希望的抗原結(jié)合活性即可。

術(shù)語抗所關(guān)注多肽的抗體和“結(jié)合至所關(guān)注多肽的抗體”是指這樣一種抗體，該抗體能夠以足夠親和力結(jié)合所關(guān)注多肽，使得該抗體可用作靶向所關(guān)注多肽的診斷劑和/或治療劑。在一個實施方案中，如例如由放射免疫分析(ria)所測量，抗所關(guān)注多肽的抗體與不相關(guān)的非所關(guān)注多肽的蛋白質(zhì)的結(jié)合程度比該抗體與所關(guān)注多肽的結(jié)合低約10％。在某些實施方案中，結(jié)合至所關(guān)注多肽的抗體的解離常數(shù)(kd)≤1μm，≤100nm，≤10nm，≤1nm，≤0.1nm，≤0.01nm，或≤0.001nm(例如，10^-8m或更低，例如10^-8m至10^-13m，例如10^-9m至10^-13m)。在某些實施方案中，抗所關(guān)注多肽的抗體結(jié)合至在來自不同物種的所關(guān)注多肽間都保留的所關(guān)注多肽的表位。在一些實施方案中，所關(guān)注多肽是fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)或fgf(例如fgf1-23)。在一些實施方案中，所關(guān)注多肽是egfr。

“阻斷抗體”或“拮抗劑抗體”是抑制或降低所結(jié)合的抗原的生物活性的抗體。優(yōu)選的阻斷抗體或拮抗劑抗體基本上或完全抑制抗原的生物活性。

“親和力”是指一個分子(例如抗體)的單一結(jié)合位點與其結(jié)合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用的總和的強(qiáng)度。除非另作指示，否則如本文所使用，“結(jié)合親和力”是指反映結(jié)合對成員(例如抗體與抗原)之間的1∶1相互作用的固有結(jié)合親和力。分子x對其搭配物y的親和力一般可以由解離常數(shù)(kd)表示?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域中已知的常用方法(包括本文所述的方法)測量親和力。用于測量結(jié)合親和力的具體說明性和示例性實施方案描述于下文中。

“抗體片段”是指不為完整抗體的分子，其包含完整抗體中結(jié)合完整抗體所結(jié)合的抗原的一部分?？贵w片段的實例包括但不限于，fv、fab、fab′、fab′-sh、f(ab′)2、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體分子(例如scfv)及由抗體片段形成的多特異性抗體。

與參照抗體“結(jié)合至相同表位的抗體”是指在競爭分析中將參照抗體與其抗原的結(jié)合阻斷50％或更高的抗體，而反之，參照抗體在競爭分析中將該抗體與其抗原的結(jié)合阻斷50％或更高。

術(shù)語“嵌合”抗體是指重鏈和/或輕鏈的一部分衍生自一種特定來源或物種，而該重鏈和/或輕鏈的其余部分衍生自不同來源或物種的抗體。

術(shù)語“全長抗體”、“完整抗體”及“完全抗體”在本文中可互換使用，意指結(jié)構(gòu)基本上類似于天然抗體結(jié)構(gòu)或具有含fc區(qū)的重鏈的抗體。

如本文所使用，術(shù)語“單克隆抗體”是指由基本上同源的抗體群獲得的抗體，即，構(gòu)成該群的個別抗體除例如含有天然存在的突變或在單克隆抗體產(chǎn)生期間產(chǎn)生的可能變體抗體外為相同的和/或結(jié)合相同表位，此類變體一般以極少量存在。與典型地包括針對不同抗原決定基(表位)的不同抗體的多克隆抗體制劑相對，單克隆抗體制劑的每一單克隆抗體是針對抗原上的單一抗原決定基。因此，修飾語“單克隆”指示抗體是從基本上均質(zhì)的抗體群獲得的性質(zhì)，并且不應(yīng)解釋為需要通過任何特定方法產(chǎn)生該抗體。舉例來說，根據(jù)本發(fā)明使用的單克隆抗體可以通過多種技術(shù)制造，包括但不限于，雜交瘤法、重組dna法、噬菌體展示法，及利用含有人類免疫球蛋白基因座的全部或一部分的轉(zhuǎn)基因動物的方法，用于制造單克隆抗體的此類方法及其它示例性方法。

“人類抗體”是具有的氨基酸序列對應(yīng)于由人類或人類細(xì)胞產(chǎn)生或來源于利用人類抗體譜系或其它人類抗體編碼序列的非人類來源的抗體的氨基酸序列的抗體。該人類抗體定義特別排除了包含非人類抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。

“人源化”抗體是指包含來自非人類hvr的氨基酸殘基以及來自人類fr的氨基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施方案中，人源化抗體將包含基本上所有的至少一個并且典型地兩個可變結(jié)構(gòu)域，其中所有或基本上所有hvr(例如cdr)與非人類抗體的hvr對應(yīng)并且所有或基本上所有fr對應(yīng)于人類抗體的fr。人源化抗體可以任選包含來源于人類抗體的抗體恒定區(qū)的至少一部分?？贵w(例如非人類抗體)的“人源化形式”是指經(jīng)歷人源化的抗體。

“免疫偶聯(lián)物”是結(jié)合至一個或多個異源分子(包括但不限于細(xì)胞毒性劑)的抗體。

“plx4032”與“威羅非尼”在本文中可互換使用并且是指n-(3-{[5-(4-氯苯基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]羰基}-2，4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺。

“b-raf活化”是指b-raf激酶的活化或磷酸化。一般來說，b-raf活化引起信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。

除非另作指示，否則如本文所使用，術(shù)語“b-raf”是指任何天然或變體(無論是天然還是合成的)b-raf多肽。術(shù)語“野生型b-raf”一般是指包含天然存在的b-raf蛋白的氨基酸序列的多肽。

如本文所使用，術(shù)語“b-raf變體”是指在天然b-raf序列中包括一個或多個氨基酸突變的b-raf多肽。任選地，該一個或多個氨基酸突變包括氨基酸取代。

“b-raf拮抗劑”(可互換地稱為“b-raf抑制劑”)是干擾b-raf活化或功能的一種藥劑。在一個特定實施方案中，b-raf抑制劑對b-raf的結(jié)合親和力(解離常數(shù))是約1,000nm或更低。在另一實施方案中，b-raf抑制劑對b-raf的結(jié)合親和力是約100nm或更低。在另一實施方案中，b-raf抑制劑對b-raf的結(jié)合親和力是約50nm或更低。在另一實施方案中，b-raf抑制劑對b-raf的結(jié)合親和力是約10nm或更低。在另一實施方案中，b-raf抑制劑對b-raf的結(jié)合親和力是約1nm或更低。在一個特定實施方案中，b-raf抑制劑抑制b-raf信號傳導(dǎo)，并且ic50是1,000nm或更低。在另一實施方案中，b-raf抑制劑抑制b-raf信號傳導(dǎo)，并且ic50是500nm或更低。在另一實施方案中，b-raf抑制劑抑制b-raf信號傳導(dǎo)，并且ic50是50nm或更低。在另一實施方案中，b-raf抑制劑抑制b-raf信號傳導(dǎo)，并且ic50是10nm或更低。在另一實施方案中，b-raf抑制劑抑制b-raf信號傳導(dǎo)，并且ic50是1nm或更低。

“v600e”是指b-raf基因中引起b-raf的第600位氨基酸處的谷氨酰胺被纈胺酸取代的突變。根據(jù)先前的編號系統(tǒng)(kumar等人，clin.cancerres.9：3362-3368，2003)，“v600e”又稱“v599e”。

“mek抑制劑”或“mek拮抗劑”是干擾mek活化和/或功能的藥劑。

術(shù)語“克比替尼”與“gdc-0973”在本文中可互換使用并且指化合物[3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘-苯基氨基)-苯基]-((s)-3-羥基-3-哌啶-2-基-氮雜環(huán)丁烷-1-基)-甲酮及其藥學(xué)上可接受的鹽。

本文所使用的術(shù)語“組成性”或“組成性地”當(dāng)例如用于受體激酶活性時是指受體不依賴于配體或其它活化分子的存在的連續(xù)信號傳導(dǎo)活性。取決于受體的性質(zhì)，活性可以全部是組成性的，或者受體的活性可以通過結(jié)合其它分子(例如配體)進(jìn)一步活化。引起受體活化的細(xì)胞事件是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員眾所周知的。舉例來說，活化可以包括低聚反應(yīng)(例如二聚反應(yīng)、三聚反應(yīng)等)得到更高級的受體復(fù)合物。復(fù)合物可以包含單一種類的蛋白質(zhì)，即，同聚復(fù)合物。或者，復(fù)合物可以包含至少兩種不同的蛋白質(zhì)種類，即，異聚復(fù)合物。復(fù)合物的形成可以例如由細(xì)胞表面上正常或突變形式的受體的過表達(dá)引起。復(fù)合物的形成還可以由受體中一種或多種特定突變引起。

“個體反應(yīng)”或“反應(yīng)”可以使用指示對個體的益處的任何終點評估，包括但不限于，(1)在某種程度上抑制疾病的進(jìn)展(例如癌癥進(jìn)展)，包括減慢和完全停滯；(2)減小腫瘤大??；(3)抑制(即，減少、減慢或完全停止)鄰近周圍器官和/或組織中癌細(xì)胞的浸潤；(4)抑制(即，減少、減慢或完全停止)轉(zhuǎn)移；(5)在某種程度上緩解與疾病或病癥(例如癌癥)有關(guān)的一個或多個癥狀；(6)增加無進(jìn)展存活期；和/或(9)降低在治療后指定時間點的死亡率。

如本文所使用，術(shù)語“基本上相同”表示兩個數(shù)字值之間的相似度足夠高，使得本領(lǐng)域技術(shù)人員在由所述值(例如kd值或表達(dá))度量的生物特征的上下文內(nèi)認(rèn)為這兩個值之間的差異極小或無生物和/或統(tǒng)計學(xué)顯著性。取決于參考/比較值，所述兩個值之間的差異例如小于約50％，小于約40％，小于約30％，小于約20％，和/或小于約10％。

如本文所使用，術(shù)語“基本上不同”表示兩個數(shù)字值之間的差異程度足夠高，使得本領(lǐng)域技術(shù)人員在由所述值(例如kd值)度量的生物特征的上下文內(nèi)認(rèn)為這兩個值之間的差具有統(tǒng)計學(xué)顯著性。取決于參考/比較分子的值，所述兩個值之間的差異例如大于約10％，大于約20％，大于約30％，大于約40％，和/或大于約50％。

物質(zhì)/分子，例如藥物組合物的“有效量”是指在必需劑量下持續(xù)必需時間有效實現(xiàn)所希望的治療或預(yù)防結(jié)果的量。

物質(zhì)/分子的“治療有效量”可以根據(jù)多種因素而變化，如疾病狀態(tài)；個體的年齡、性別及體重；以及該物質(zhì)/分子在個體中引起期望的反應(yīng)的能力。治療有效量還是物質(zhì)/分子的治療有益作用超過任何有毒或有害作用的量?！邦A(yù)防有效量”是指在必需劑量下持續(xù)必需時間段有效實現(xiàn)所希望的預(yù)防結(jié)果的量。典型地但非必需地，由于預(yù)防劑量是在疾病之前或疾病早期用于受試者，故預(yù)防有效量將低于治療有效量。

術(shù)語“藥物配制物”是指呈某種形式以允許所含活性成分的生物活性有效并且不含對打算施用該配制物的受試者有不可接受的毒性的額外組分的制劑。

“藥學(xué)上可接受的載劑”是指藥物配制物中除活性成分以外的對受試者無毒的成分。藥學(xué)上可接受的載劑包括但不限于，緩沖劑、賦形劑、穩(wěn)定劑或防腐劑。

如本文所使用，短語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指一種化合物的藥學(xué)上可接受的有機(jī)或無機(jī)鹽。

如本文所使用，“治療(treatment)”(及其語法變化形式，如“治療(treat)”或“治療(treating)”)是指試圖改變所治療的個體的自然病程的臨床干預(yù)，并且可以出于預(yù)防目的而進(jìn)行或在臨床病理學(xué)病程中進(jìn)行。所希望的治療作用包括但不限于，預(yù)防疾病發(fā)生或復(fù)發(fā)、緩解癥狀、減少疾病的任何直接或間接病理后果、預(yù)防轉(zhuǎn)移、降低疾病進(jìn)展速率、改善或減輕疾病狀態(tài)，及緩和或改善預(yù)后。在一些實施方案中，本發(fā)明抗體被用于延遲疾病的發(fā)生或減慢疾病進(jìn)展。

“鉑類藥劑”是含鉑的化學(xué)治療劑，例如卡鉑、順鉑及奧沙利鉑。

術(shù)語“細(xì)胞毒性劑”或“化學(xué)治療劑”是可用于治療癌癥的生物(例如大分子)或化學(xué)(例如小分子)化合物，不管作用機(jī)制如何。如本文所使用，該術(shù)語是指抑制或防止細(xì)胞功能及/或引起細(xì)胞死亡或破壞的物質(zhì)。該術(shù)語意圖包括放射性同位素(例如at²¹¹、i¹³¹、i¹²⁵、y⁹⁰、re¹⁸⁶、re¹⁸⁸、sm¹⁵³、bi²¹²、p³²、pb²¹²，及l(fā)u放射性同位素)；化學(xué)治療劑或藥物(例如甲氨蝶呤、阿霉素、長春花生物堿(長春新堿、長春堿、依托泊苷)、多柔比星、美法侖、絲裂霉素c、苯丁酸氮芥、道諾霉素或其它嵌入劑)；生長抑制劑；酶及其片段，如核分解酶；抗生素；及毒素，如細(xì)菌、真菌、植物或動物來源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或變體；及下文公開的各種抗腫瘤劑或抗癌劑。其它細(xì)胞毒性劑描述于下文。殺腫瘤劑引起腫瘤細(xì)胞的破壞。

“個體”或“受試者”是哺乳動物。哺乳動物包括但不限于，馴養(yǎng)動物(例如牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及非人類靈長類動物，如猴)、兔及嚙齒動物(例如小鼠和大鼠)。在某些實施方案中，個體或受試者是人類。

術(shù)語“癌癥”和“癌”是指或描述哺乳動物中典型地以不受調(diào)控的細(xì)胞生長為特征的生理病況。此定義中包括良性和惡性癌癥。“早期癌癥”或“早期腫瘤”意指非侵襲性或非轉(zhuǎn)移性，或者被歸類為0期、i期或ii期癌癥的癌癥。癌癥的實例包括但不限于，癌瘤、淋巴瘤、母細(xì)胞瘤(包括髓母細(xì)胞瘤和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤)、肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜細(xì)胞肉瘤)、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(包括類癌腫瘤、促胃液素瘤及胰島細(xì)胞癌)、間皮瘤、許旺氏細(xì)胞瘤(schwannoma)(包括聽神經(jīng)瘤)、脊膜瘤、腺癌、黑素瘤，及白血病或淋巴組織惡性疾病。此類癌癥的更具體的實例包括黑素瘤、結(jié)腸直腸癌、甲狀腺癌(例如乳頭狀甲狀腺癌)、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)、腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃癌或胃癌(gastricorstomachcancer)(包括胃腸癌)、胰腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細(xì)胞瘤、乳癌(包括轉(zhuǎn)移性乳癌)、結(jié)腸癌、直腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌、睪丸癌、食道癌、膽道腫瘤以及頭頸癌。在一些實施方案中，癌癥是黑素瘤；結(jié)腸直腸癌；甲狀腺癌，例如乳頭狀甲狀腺癌；或卵巢癌。

術(shù)語“伴隨”在本文中用于指兩種或更多種治療劑的施用是在足夠接近的時間內(nèi)進(jìn)行，在此情況下，其個別治療作用在時間上重疊。因此，并行施用包括在中斷一種或多種藥劑的施用之后施用一種或多種其它藥劑的給藥方案。在一些實施方案中，伴隨施用是并行地、依序地和/或同時地。

“減少或抑制”意指能夠引起20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高百分比的總體降低。減少或抑制可以指所治療病癥的癥狀、轉(zhuǎn)移的存在或大小，或原發(fā)腫瘤的大小。

術(shù)語“藥品說明書”用于指示市售治療產(chǎn)品包裝中慣常包括的說明，其含有關(guān)于適應(yīng)癥、用法、劑量、施用、組合療法、禁忌癥的信息和/或關(guān)于使用這些治療產(chǎn)品的注意事項。

“制造品”是包含至少一種試劑，例如用于治療疾病或病癥(例如癌癥)的藥物，或用于特異性檢測本文所描述的生物標(biāo)記物的探針的任何制品(例如包裝或容器)或試劑盒。在某些實施方案中，該制品或試劑盒是作為一個單元宣傳、經(jīng)銷或銷售以用于執(zhí)行本文所描述的方法。

本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，本文中提到“約”一個值或參數(shù)包括(并且描述)針對該值或參數(shù)本身的實施方案。舉例來說，提到“約x”的說明包括說明“x”。

應(yīng)了解，本文所描述的本發(fā)明的方面和實施方案包括“由這些方面和實施方案組成”和/或“基本上由這些方面和實施方案組成”。除非另外指示，否則如本文所使用，單數(shù)形式“一個(種)”和“所述”包括復(fù)數(shù)形式的參考物。

ii.方法及用途

本文提供了利用fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和mek拮抗劑的方法。本文提供了利用mek拮抗劑和pik3拮抗劑的方法。本文提供了利用mek拮抗劑、fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及pik3抑制劑的方法。本文提供了利用mek拮抗劑和b-raf拮抗劑的方法。本文提供了利用mek拮抗劑、b-raf拮抗劑及fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的方法。

確切地說，本文提供治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向所述個體伴隨施用(a)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)mek拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek拮抗劑的敏感期和/或延遲癌癥對mek拮抗劑的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效增加包括mek拮抗劑的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek拮抗劑而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效使功效增加。在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek拮抗劑而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek拮抗劑的敏感性。

確切地說，本文提供了治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)pik3拮抗劑和(b)mek拮抗劑。在一些實施方案中，pik3拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek拮抗劑的敏感期和/或延遲癌癥對mek拮抗劑的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，pik3拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效增加包括mek拮抗劑的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek拮抗劑而不施用(不存在)pik3拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pik3拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效使功效增加。在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek拮抗劑而不施用(不存在)pik3拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pik3拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，pik3拮抗劑和mek拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek拮抗劑的敏感性。

確切地說，本文提供了治療個體的癌癥的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)pik3拮抗劑、(b)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及(c)mek拮抗劑。在一些實施方案中，pik3拮抗劑及fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek拮抗劑的敏感期和/或延遲癌癥對mek拮抗劑的抗性的發(fā)生。在一些實施方案中，pik3拮抗劑及fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑各自的量有效增加包括mek拮抗劑的癌癥治療的功效。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek拮抗劑而不施用(不存在)pik3拮抗劑和/或fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pik3拮抗劑、fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及mek拮抗劑各自的量有效使功效增加。舉例來說，在一些實施方案中，相較于包括施用有效量mek拮抗劑而不施用(不存在)pik3拮抗劑和/或fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，pik3拮抗劑、fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及mek拮抗劑各自的量有效使反應(yīng)增加(例如完全反應(yīng))。在一些實施方案中，pik3拮抗劑、fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及mek拮抗劑各自的量有效增加癌癥對mek拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek拮抗劑的敏感性。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr1b、fgfr1c、fgf1、fgf2、fgf3、fgf4、fgf5、fgf6及fgf10。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek1抑制劑。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是mek1/2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是gdc-0973(克比替尼)。在某些實施方案中，pik3拮抗劑是gdc-0032。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑是以下一種或多種：威羅非尼(即，plx4032)、索拉非尼、plx4720、plx-3603、gsk2118436、gdc-0879、n-(3-(5-(4-氯苯基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-羰基)-2，4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺、gsk2118436、raf265(novartis)、xl281、arq736、bay73-4506。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑可以對b-rafv600e具有選擇性。在一些實施方案中，b-raf拮抗劑是威羅非尼(即，plx4032)。

本文提供了處理個體的癌細(xì)胞的方法，其中所述癌細(xì)胞對用mek拮抗劑和/或b-raf拮抗劑進(jìn)行的治療具有抗性，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和有效量的mek拮抗劑。本文提供了處理個體的癌細(xì)胞的方法，其中所述癌細(xì)胞對用mek拮抗劑和/或b-raf拮抗劑進(jìn)行的治療具有抗性，所述方法包括向個體施用有效量的pik3拮抗劑和有效量的mek拮抗劑。本文還提供了治療個體的對mek拮抗劑和/或b-raf拮抗劑具有抗性的癌癥的方法，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和有效量的mek拮抗劑。本文提供了治療個體的對mek拮抗劑和/或b-raf拮抗劑具有抗性的癌癥的方法，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr1b、fgfr1c、fgf1、fgf2、fgf3、fgf4、fgf5、fgf6及fgf10。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek1抑制劑。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是mek1/2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是gdc-0973(克比替尼)。在某些實施方案中，pik3拮抗劑是gdc-0032。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑是以下一種或多種：威羅非尼(即，plx4032)、索拉非尼、plx4720、pl-3603、gsk2118436、gdc-0879、n-(3-(5-(4-氯苯基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-羰基)-2，4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺、gsk2118436、raf265(novartis)、xl281、arq736、bay73-4506。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑可以對b-rafv600e具有選擇性。在一些實施方案中，b-raf拮抗劑是威羅非尼(即，plx4032)。

本文還提供了增加對mek拮抗劑和/或b-raf拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek拮抗劑和/或b-raf拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向個體施用有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和有效量的mek拮抗劑。本文還提供了增加對mek拮抗劑和/或b-raf拮抗劑的敏感性和/或恢復(fù)對mek拮抗劑和/或b-raf拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向個體施用有效量的pi3k拮抗劑和有效量的mek拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr1b、fgfr1c、fgf1、fgf2、fgf3、fgf4、fgf5、fgf6及fgf10。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek1抑制劑。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是mek1/2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是gdc-0973(克比替尼)。在某些實施方案中，pik3拮抗劑是gdc-0032。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑是以下一種或多種：威羅非尼(即，plx4032)、索拉非尼、plx4720、pl-3603、gsk2118436、gdc-0879、n-(3-(5-(4-氯苯基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-羰基)-2，4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺、gsk2118436、raf265(novartis)、xl281、arq736、bay73-4506。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑可以對b-rafv600e具有選擇性。在一些實施方案中，b-raf拮抗劑是威羅非尼(即，plx4032)。

本文提供了增加包括mek拮抗劑和/或b-raf拮抗劑的癌癥治療在個體中的功效的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。另外，本文提供了增加包括mek拮抗劑和/或b-raf拮抗劑的癌癥治療在個體中的功效的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pik3拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr1b、fgfr1c、fgf1、fgf2、fgf3、fgf4、fgf5、fgf6及fgf10。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek1抑制劑。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是mek1/2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是gdc-0973(克比替尼)。在某些實施方案中，pik3拮抗劑是gdc-0032。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑是以下一種或多種：威羅非尼(即，plx4032)、索拉非尼、plx4720、pl-3603、gsk2118436、gdc-0879、n-(3-(5-(4-氯苯基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-羰基)-2，4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺、gsk2118436、raf265(novartis)、xl281、arq736、bay73-4506。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑可以對b-rafv600e具有選擇性。在一些實施方案中，b-raf拮抗劑是威羅非尼(即，plx4032)。

本文提供了治療個體的癌癥，其中癌癥治療包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑和/或b-raf拮抗劑，其中相較于包括施用有效量的mek拮抗劑而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和/或b-raf拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，該癌癥治療具有較高功效。此外，本文提供了延遲和/或防止個體的癌癥對mek拮抗劑產(chǎn)生抗性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。

本文提供了治療個體的癌癥的方法，其中癌癥治療包括向個體伴隨施用(a)有效量的pik3拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑和/或b-raf拮抗劑和/或有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑，其中相較于包括施用有效量的mek拮抗劑而不施用(不存在)fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和/或b-raf拮抗劑和/或pik3拮抗劑的標(biāo)準(zhǔn)治療，該癌癥治療具有較高功效。此外，本文還提供了延遲和/或防止個體的癌癥對mek拮抗劑產(chǎn)生抗性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pik3拮抗劑及(b)有效量的mek拮抗劑和/或有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和/或有效量的b-raf拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr1b、fgfr1c、fgf1、fgf2、fgf3、fgf4、fgf5、fgf6及fgf10。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek1抑制劑。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是mek1/2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是gdc-0973(克比替尼)。在某些實施方案中，pik3拮抗劑是gdc-0032。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑是以下一種或多種：威羅非尼(即，plx4032)、索拉非尼、plx4720、pl-3603、gsk2118436、gdc-0879、n-(3-(5-(4-氯苯基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-羰基)-2，4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺、gsk2118436、raf265(novartis)、xl281、arq736、bay73-4506。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑可以對b-rafv600e具有選擇性。在一些實施方案中，b-raf拮抗劑是威羅非尼(即，plx4032)。

本文提供了治療對mek拮抗劑產(chǎn)生抗性的可能性較高的癌癥個體的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)mek拮抗劑和(b)有效量的b-raf拮抗劑和/或fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑。本文提供了治療對mek拮抗劑產(chǎn)生抗性的可能性較高的癌癥個體的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)mek拮抗劑和(b)有效量的pik3拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr1b、fgfr1c、fgf1、fgf2、fgf3、fgf4、fgf5、fgf6及fgf10。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek1抑制劑。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是mek1/2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是gdc-0973(克比替尼)。在某些實施方案中，pik3拮抗劑是gdc-0032。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑是以下一種或多種：威羅非尼(即，plx4032)、索拉非尼、plx4720、pl-3603、gsk2118436、gdc-0879、n-(3-(5-(4-氯苯基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-羰基)-2，4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺、gsk2118436、raf265(novartis)、xl281、arq736、bay73-4506。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑可以對b-rafv600e具有選擇性。在一些實施方案中，b-raf拮抗劑是威羅非尼(即，plx4032)。

另外，本文提供了增加癌癥個體對mek拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。本文提供了增加癌癥個體對mek拮抗劑的敏感性的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pik3拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。此外，本文還提供了延長癌癥個體對mek拮抗劑的敏感期的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。此外，本文還提供了延長癌癥個體對mek拮抗劑的敏感期的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pik3拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。在某些實施方案中，這些方法還可以包括b-raf拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr1b、fgfr1c、fgf1、fgf2、fgf3、fgf4、fgf5、fgf6及fgf10。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek1抑制劑。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是mek1/2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是gdc-0973(克比替尼)。在某些實施方案中，pik3拮抗劑是gdc-0032。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑是以下一種或多種：威羅非尼(即，plx4032)、索拉非尼、plx4720、plx-3603、gsk2118436、gdc-0879、n-(3-(5-(4-氯苯基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-羰基)-2，4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺、gsk2118436、raf265(novartis)、xl281、arq736、bay73-4506。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑可以對b-rafv600e具有選擇性。在一些實施方案中，b-raf拮抗劑是威羅非尼(即，plx4032)。

本文還提供了延長患有癌癥的個體對mek拮抗劑的反應(yīng)持續(xù)時間的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。本文還提供了延長患有癌癥的個體對mek拮抗劑的反應(yīng)持續(xù)時間的方法，所述方法包括向個體伴隨施用(a)有效量的pi3k拮抗劑和(b)有效量的mek拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr1b、fgfr1c、fgf1、fgf2、fgf3、fgf4、fgf5、fgf6及fgf10。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek1抑制劑。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是mek1/2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是gdc-0973(克比替尼)。在某些實施方案中，pik3拮抗劑是gdc-0032。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑是以下一種或多種：威羅非尼(即，plx4032)、索拉非尼、plx4720、pl-3603、gsk2118436、gdc-0879、n-(3-(5-(4-氯苯基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-羰基)-2，4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺、gsk2118436、raf265(novartis)、xl281、arq736、bay73-4506。在某些實施方案中，b-raf拮抗劑可以對b-rafv600e具有選擇性。在一些實施方案中，b-raf拮抗劑是威羅非尼(即，plx4032)。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗體抑制劑、小分子抑制劑、結(jié)合多肽抑制劑和/或多聚核苷酸拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是結(jié)合多肽抑制劑。在一些實施方案中，結(jié)合多肽抑制劑包含fgfr細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域連接至fc的區(qū)域(例如fp-1039(fiveprime))。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr4信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是小分子。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗體。

在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr1b、fgfr1c、fgf1、fgf2、fgf3、fgf4、fgf5、fgf6及fgf10。在一些實施方案中，所述小分子是n-[2-[[4-(二乙基氨基)丁基]氨基]-6-(3，5-二甲氧基苯基)吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-基]-n′-(1，1-二甲基乙基)-脲或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實施方案中，該小分子是bgj398(novartis)、azd4547(astrazeneca)和/或ff284(chugai/debiopharm(debio1347)。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgf2抗體。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr1抗體。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr1-iiib抗體。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr1-iiic抗體。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是能夠結(jié)合超過一個fgfr多肽的抗fgfr抗體。

如本文所使用，對療法具有抗性的癌癥包括對該療法不起反應(yīng)和/或?qū)υ摨煼óa(chǎn)生顯著反應(yīng)(例如部分反應(yīng)和/或完全反應(yīng))的能力較弱的癌癥?？剐钥梢允窃谥委煼椒ㄟ^程中產(chǎn)生的獲得性抗性。在一些實施方案中，獲得性藥物抗性是短暫和/或可逆的藥物耐受性。對一種療法的短暫和/或可逆的藥物耐受性包括藥物抗性能夠在治療方法中斷后重新獲得對該療法的敏感性的情形。在一些實施方案中，獲得性抗性是持久的抗性。對一種療法的持久抗性包括賦予藥物抗性的遺傳變化。

如本文所使用，對療法具有敏感性的癌癥包括對該療法起反應(yīng)和/或能夠?qū)υ摨煼óa(chǎn)生顯著反應(yīng)(例如部分反應(yīng)和/或完全反應(yīng))的癌癥。

測定或評估對一種療法的抗性的獲得和/或?qū)σ环N療法的敏感性的維持的方法是本領(lǐng)域中已知的并且描述于實施例中?？剐垣@得和/或敏感性維持的變化，如耐藥性，可以如實施例和sharma等人中所描述，通過檢驗?zāi)退幹甑纳L來評估?？剐垣@得和/或敏感性維持的變化，如持久抗性和/或長期抗性株，可以如實施例和sharma等人中所描述，通過檢驗長期耐藥株的生長來評估。在一些實施方案中，抗性可以通過ic50、ec50變化或者耐藥株和/或長期耐藥株中腫瘤生長的減少來指示。在一些實施方案中，該變化高于約50％、100％和/或200％中任一種。此外，抗性獲得和/或敏感性維持的變化可以在體內(nèi)，例如通過評估對療法的反應(yīng)、反應(yīng)持續(xù)時間和/或進(jìn)展時間，例如部分反應(yīng)及完全反應(yīng)來評估?？剐垣@得和/或敏感性維持的變化可以基于個體群對療法的反應(yīng)、反應(yīng)持續(xù)時間和/或進(jìn)展時間的變化，例如部分反應(yīng)和完全反應(yīng)的數(shù)量。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，癌癥是實體腫瘤癌癥。在一些實施方案中，癌癥是肺癌(例如非小細(xì)胞肺癌(nsclc))。在一些實施方案中，癌癥是乳癌(例如her2陽性乳癌)。在一些實施方案中，癌癥是黑素瘤。在一些實施方案中，癌癥是上皮組織的癌癥。在一些實施方案中，癌癥是腺癌。當(dāng)開始包括fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和b-raf拮抗劑的治療方法時，本文所描述的任何組合療法中的癌癥可以對僅包括b-raf拮抗劑的治療方法敏感(敏感的實例包括但不限于，對該方法起反應(yīng)和/或能夠針對該方法產(chǎn)生顯著反應(yīng)(例如部分反應(yīng)和/或完全反應(yīng)))。當(dāng)開始包括fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和b-raf拮抗劑的治療方法時，本文所描述的任何組合療法中的癌癥可以對僅包括b-raf拮抗劑的治療方法不具有抗性(抗性的實例包括但不限于，對該方法不起反應(yīng)和/或針對該方法產(chǎn)生顯著反應(yīng)(例如部分反應(yīng)和/或完全反應(yīng))的能力較弱和/或不能針對該方法產(chǎn)生顯著反應(yīng))。在一些實施方案中，癌癥經(jīng)歷上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)型(emt)。在一些實施方案中，通過檢驗上皮相關(guān)蛋白質(zhì)/rna(例如e-鈣粘附蛋白)和/或間充質(zhì)相關(guān)蛋白/rna(例如波形蛋白)的表達(dá)來檢測emt。在一些實施方案中，癌癥具有野生型b-raf(即，該癌癥在b-raf中不合突變)。在一些實施方案中，癌癥在b-raf中具有突變。在一些實施方案中，突變體b-raf是組成性活化的b-raf。在一些實施方案中，突變體b-raf是b-rafv600。在一些實施方案中，b-rafv600是b-rafv600e。在一些實施方案中，突變體b-raf是以下一種或多種：b-rafv600k(gtg＞aag)、v600r(gtg＞agg)、v600e(gtg＞gaa)和/或v600d(gtg＞gat)。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，根據(jù)以上實施方案中任一種的個體可以是人類。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，以上所描述的組合療法涵蓋組合施用(其中兩種或超過兩種治療劑包括在同一或獨立配制物中)及分開施用，在此情形中，本發(fā)明拮抗劑的施用可以在該另外的治療劑和/或佐劑施用之前、同時、依序、并行和/或之后發(fā)生。在一些實施方案中，組合療法另外包含放射療法和/或另外的治療劑。

fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑、mek拮抗劑、pik3拮抗劑及b-raf拮抗劑可以通過任何適合方式施用，包括口服、腸胃外、肺內(nèi)及鼻內(nèi)，并且必要時，用于局部治療，即病灶內(nèi)施用。腸胃外輸注包括肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下施用。部分取決于施用是短暫的還是長期的，可以通過任何適合途徑，例如通過注射，如靜脈內(nèi)或皮下注射給藥。本文涵蓋多種給藥時程，包括但不限于，單次施用或在多個時間點多次施用、推注及脈沖輸注。

本文所描述的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑(例如抗體、結(jié)合多肽和/或小分子)、mek拮抗劑、pik3拮抗劑及b-raf拮抗劑可以按符合良好醫(yī)學(xué)實踐的方式配制、給藥及施用。在此情形中考慮的因素包括所治療的特定病癥、所治療的特定哺乳動物、個別患者的臨床狀況、病癥的起因、藥劑的遞送部位、施用方法、施用時程及從業(yè)醫(yī)生已知的其它因素。fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑(例如抗體、結(jié)合多肽和/或小分子)、mek拮抗劑、pik3拮抗劑及b-raf拮抗劑未必，但任選與常用于預(yù)防或治療所討論的病癥的一種或多種藥劑一起配制。此類其它藥劑的有效量取決于配制物中存在的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑(例如抗體、結(jié)合多肽和/或小分子)、mek拮抗劑、pik3拮抗劑和/或b-raf拮抗劑的量、病癥或治療的類型及以上論述的其它因素。這些藥劑一般以相同劑量并且利用本文中所述的施用途徑使用，或以本文中所述劑量的約1％至99％使用，或憑經(jīng)驗/臨床上確定為適當(dāng)?shù)娜魏蝿┝考叭魏瓮緩绞褂谩?/p>

為了預(yù)防或治療疾病，本文所描述的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑(例如抗體、結(jié)合多肽和/或小分子)、mek拮抗劑、pik3拮抗劑及b-raf拮抗劑的適當(dāng)劑量(當(dāng)單獨或與一種或多種其它另外的治療劑組合使用時)將取決于有待治療的疾病的類型；該疾病的嚴(yán)重程度和過程；施用fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑(例如抗體、結(jié)合多肽和/或小分子)、mek拮抗劑、pik3拮抗劑及b-raf拮抗劑是預(yù)防還是治療目的；先前療法；患者的臨床病史及對fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑(例如抗體、結(jié)合多肽和/或小分子)、mek拮抗劑、pik3拮抗劑及b-raf拮抗劑的反應(yīng)；以及主治醫(yī)師的判斷。fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑(例如抗體、結(jié)合多肽和/或小分子)、mek拮抗劑、pik3拮抗劑及b-raf拮抗劑適合一次性或經(jīng)一系列治療施用給患者。對于歷經(jīng)數(shù)天或更長時間的重復(fù)施用，取決于病狀，治療一般會持續(xù)直至發(fā)生疾病癥狀的所希望的抑制為止。這些劑量可以間歇地施用，例如隔周或隔三周(例如，以使得患者接受約二至約二十或例如約六次劑量的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑及b-raf拮抗劑)。最初可以施用較高負(fù)荷劑量，隨后施用一次或多次較低劑量。示例性給藥方案包括施用。不過，其它給藥方案可以是有用的。此療法的進(jìn)展易于通過常規(guī)技術(shù)和分析監(jiān)測。

應(yīng)了解，上述配制物或治療方法中的任一種可以使用免疫偶聯(lián)物作為fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑(例如抗體、結(jié)合多肽和/或小分子)、mek拮抗劑、pik3拮抗劑及b-raf拮抗劑進(jìn)行。

iii.治療性組合物

本文提供了包含fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑(例如抗體、結(jié)合多肽和/或小分子)、mek拮抗劑、pik3拮抗劑及b-raf拮抗劑的組合。在具體實施方案中，本文提供了包含fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑(例如抗體、結(jié)合多肽和/或小分子)和mek拮抗劑的組合。在具體實施方案中，本文提供了包含mek拮抗劑和pik3拮抗劑的組合。在具體實施方案中，本文提供了包含fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑(例如抗體、結(jié)合多肽和/或小分子)、mek拮抗劑及b-raf拮抗劑的組合。在某些實施方案中，該組合增加單獨施用的靶向治療劑的功效。在某些實施方案中，該組合延遲和/或防止癌癥對靶向治療劑的抗性的發(fā)生。在某些實施方案中，該組合延長癌癥個體對靶向治療劑的敏感期。

本文提供了可用于本文所描述的組合治療方法中的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和mek拮抗劑。本文提供了可用于本文所描述的組合治療方法中的pik3拮抗劑和mek拮抗劑。本文提供的本文所描述的組合中的任一種可以另外包含b-raf拮抗劑。

在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和/或mek拮抗劑和/或pik3拮抗劑和/或b-raf拮抗劑是抗體、結(jié)合多肽、結(jié)合小分子和/或多聚核苷酸。

各種fgfr和fgf的氨基酸序列是本領(lǐng)域中已知的并且是公開可得的。參見例如，fgfr1(例如uniprotkb/swiss-protp11362-1、p11362-2、p11362-3、p11362-4、p11362-5、p11362-6、p11362-7、p11362-8、p11362-9、p11362-10、p11362-11、p11362-12、p11362-13、p11362-14、p11362-15、p11362-16、p11362-17、p11362-18、p11362-19、p11362-20和/或p11362-21)、fgfr2(例如uniprotkb/swiss-protp21802-1(即fgfr2-iiic)、p21802-2、p21802-3(即fgfr2-iiib)、p21802-4、p21802-5、p21802-6、p21802-7、p21802-8、p21802-9、p21802-10、p21802-11、p21802-12、p21802-13、p21802-14、p21802-15、p21802-16、p21802-17、p21802-18、p21802-19、p21802-20、p21802-21、p21802-22和/或p21802-23)、fgfr3(例如uniprotkb/swiss-protp22607-1(即fgfr3-iiic)、p22607-2(即fgfr3-iiib)、p22607-3和/或p22607-4)、fgfr4(例如uniprotkb/swiss-protp22455-1和/或p22455-2)、fgf1(例如uniprotkb/swiss-protp05230-1和/或p05230-2)、fgf2(例如uniprotkb/swiss-protp09038-1、p09038-2、p09038-3和/或p09038-4)、fgf3(例如uniprotkb/swiss-protp11487)、fgf4(例如uniprotkb/swiss-protp08620)、fgf5(例如uniprotkb/swiss-protp12034-1和/或p12034-2)、fgf6(例如uniprotkb/swiss-prot10767)、fgf7(例如uniprotkb/swiss-protp21781)、fgf8(例如uniprotkb/swiss-protp55075-1、p55075-2、p55075-3和/或p55075-4)、fgf9(例如uniprotkb/swiss-protp31371)、fgf10(例如uniprotkb/swiss-proto15520)、fgf11(例如uniprotkb/swiss-protq92914)、fgf12(例如uniprotkb/swiss-protp61328-1和/或p61328-2)、fgf13(例如uniprotkb/swiss-protq92913-1、q92913-2、q92913-3、q92913-4和/或q92913-5)、fgf14(例如uniprotkb/swiss-protq92915-1和/或q92915-2)、fgf16(例如uniprotkb/swiss-proto43320)、fgf17(例如uniprotkb/swiss-proto60258-1和/或o60258-2)、fgf18(例如uniprotkb/swiss-proto76093)、fgf19(例如uniprotkb/swiss-proto95750)、fgf20(例如uniprotkb/swiss-protq9np95)、fgf21(例如uniprotkb/swiss-protq9nsa1)、fgf22(例如uniprotkb/swiss-protq9hct0)和/或fgf23(例如uniprotkb/swiss-protq9gzv9)。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗體抑制劑、小分子抑制劑、結(jié)合多肽抑制劑和/或多聚核苷酸拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是結(jié)合多肽抑制劑。在一些實施方案中，結(jié)合多肽抑制劑包含fgfr細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域連接至fc的區(qū)域。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是小分子。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗體。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr1-iiib、fgfr1-iiic、fgf1、fgf2、fgf3、fgf4、fgf5、fgf6及fgf10。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制fgfr1(例如fgfr1-iiib和/或fgfr1-iiic)。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制fgf2。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制fgf5。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是結(jié)合多肽。在一些實施方案中，該結(jié)合多肽是包含fgfr1多肽細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域和融合搭配物的fgfr1融合蛋白。在一些實施方案中，fgfr1是fgfr1-iiib。在一些實施方案中，fgfr1是fgfr1-iiib。在一些實施方案中，該細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域包含fgfr1-iiic的氨基酸22至360或22至592。在一些實施方案中，fgfr1融合蛋白是us7678890(以引用的方式整體并入本文中)中所描述的蛋白質(zhì)。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗體。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgf2抗體。在一些實施方案中，融合搭配物是fc多肽。在一些實施方案中，該抗體是例如us20090304707(以引用的方式整體并入本文中)中所描述的fgf2抗體，例如由雜交瘤pta-8864產(chǎn)生的抗體和/或其人源化抗體。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr1抗體。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr1-iiib抗體。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr1-iiic抗體。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是能夠結(jié)合超過一個fgfr多肽的抗fgfr1抗體。

在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是小分子。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是n-[2-[[4-(二乙基氨基)丁基]氨基]-6-(3，5-二甲氧基苯基)吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-基]-n′-(1，1-二甲基乙基)-脲或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是bgj398(novartis，即，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲和/或其藥學(xué)上可接受的鹽；目錄號872511-34-7)。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是azd4547(astrazeneca；即n-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1h-吡唑-3-基)-4-((3s，5r)-3，5-二甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺和/或其藥學(xué)上可接受的鹽)。在一些實施方案中，fgfr1信號傳導(dǎo)拮抗劑是ff284(chugai/debiopharm(debio1347))。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr2-iiib、fgfr2-iiic、fgf1、fgf2、fgf3、fgf4、fgf6、fgf7、fgf9、fgf10、fgf17、fgf18及fgf22。在一些實施方案中，fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制fgfr2(例如fgfr2-iiib和/或fgfr2-iiic)。在一些實施方案中，fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制fgf2。在一些實施方案中，fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制fgf9。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑是結(jié)合多肽。在一些實施方案中，該結(jié)合多肽是包含fgfr2多肽細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域和融合搭配物的fgfr2融合蛋白。實例包括但不限于wo2008/065543和wo2007/014123中所描述的那些，所述文獻(xiàn)以引用的方式整體并入本文中。在一些實施方案中，fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr2抗體。在一些實施方案中，fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr2-iiib抗體。在一些實施方案中，fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr2-iiic抗體。在一些實施方案中，fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑是能夠結(jié)合超過一個fgfr多肽的抗fgfr2抗體。fgfr2抗體的實例是本領(lǐng)域中已知的并且包括但不限于，us8,101,723、us8,101,721、wo2001/79266、wo2007/144893及wo2010/054265中所描述的抗體，上述專利以引用的方式整體并入本文中。

在一些實施方案中，fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑是小分子。在一些實施方案中，fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑是bgj398(novartis，即，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲和/或其藥學(xué)上可接受的鹽；目錄號872511-34-7)。在一些實施方案中，fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑是azd4547(astrazeneca；即n-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1h-吡唑-3-基)-4-((3s，5r)-3，5-二甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺和/或其藥學(xué)上可接受的鹽)。在一些實施方案中，fgfr2信號傳導(dǎo)拮抗劑是ff284(chugai/debiopharm(debio1347))。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr3-iiib、fgfr3-iiic、fgf1、fgf2、fgf4、fgf8、fgf9、fgf17、fgf18及fgf23。在一些實施方案中，fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制fgfr3(例如fgfr3-iiib和/或fgfr3-iiic)。在一些實施方案中，fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制fgf2。在一些實施方案中，fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制fgf9。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑是結(jié)合多肽。在一些實施方案中，該結(jié)合多肽是包含fgfr3多肽細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域和融合搭配物的fgfr3融合蛋白。在一些實施方案中，fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr3抗體。在一些實施方案中，fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr3-iiib抗體。在一些實施方案中，fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr3-iiic抗體。在一些實施方案中，fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑是能夠結(jié)合超過一個fgfr多肽的抗fgfr3抗體。fgfr3抗體的實例是本領(lǐng)域中已知的并且包括但不限于，us8,101,721、wo2010/111367、wo2001/79266、wo2002/102854、wo2002/10972、wo2007/144893、wo2010/002862和/或wo2010/048026中所描述的抗體，上述專利以引用的方式整體并入本文中。

在一些實施方案中，fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑是小分子。在一些實施方案中，fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑是bgj398(novartis，即，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲和/或其藥學(xué)上可接受的鹽；目錄號872511-34-7)。在一些實施方案中，fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑是azd4547(astrazeneca；即n-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1h-吡唑-3-基)-4-((3s，5r)-3，5-二甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺和/或其藥學(xué)上可接受的鹽)。在一些實施方案中，fgfr3信號傳導(dǎo)拮抗劑是ff284(chugai/debiopharm(debio1347))。在所述方法中任一種的一些實施方案中，fgfr3拮抗劑是布利尼布(brivanib)、多韋替尼(dovitinib)(tki-258)和/或hm-80871a。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑是fgfr4信號傳導(dǎo)拮抗劑。在一些實施方案中，fgfr4信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制以下一種或多種：fgfr4-iiib、fgfr4-iiic、fgf1、fgf2、fgf4、fgf6、fgf8、fgf9、fgf16、fgf17、fgf18及fgf19。在一些實施方案中，fgfr4信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制fgfr4(例如fgfr4-iiib和/或fgfr4-iiic)。在一些實施方案中，fgfr4信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制fgf2。在一些實施方案中，fgfr4信號傳導(dǎo)拮抗劑結(jié)合至和/或抑制fgf9。

在這些方法中任一種的一些實施方案中，fgfr4信號傳導(dǎo)拮抗劑是結(jié)合多肽。在一些實施方案中，該結(jié)合多肽是包含fgfr4多肽細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域和融合搭配物的fgfr4融合蛋白。在一些實施方案中，fgfr4信號傳導(dǎo)拮抗劑是抗fgfr4抗體。在一些實施方案中，fgfr4信號傳導(dǎo)拮抗劑是能夠結(jié)合超過一個fgfr多肽的抗fgfr4抗體。fgfr4抗體的實例是本領(lǐng)域中已知的并且包括但不限于，wo2008/052796和wo2005/037235中所描述的抗體，上述專利以引用的方式整體并入本文中。

在一些實施方案中，fgfr4信號傳導(dǎo)拮抗劑是小分子。在一些實施方案中，弱fgfr4信號傳導(dǎo)拮抗劑是bgj398(novartis，即，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基脲和/或其藥學(xué)上可接受的鹽；目錄號872511-34-7)。在一些實施方案中，弱fgfr4拮抗劑是azd4547(astrazeneca；即n-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1h-吡唑-3-基)-4-((3s，5r)-3，5-二甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺和/或其藥學(xué)上可接受的鹽)。在一些實施方案中，弱fgfr4拮抗劑是ff284(chugai/debiopharm(debio1347))。

示例性fgfr拮抗劑是本領(lǐng)域中已知的并且包括但不限于，us5288855、us6344546、wo94/21813、us20070274981、wo2005/066211、wo2011/068893、us5229501、us6656728、us7678890、wo95/021258、us6921763、us6713474、us6610688、us6297238、us20130053376、us20130039855、us2013004492、us20120316137、us20120251538、us20120195851、us20110129524、us20110053932、us20050227921、ep1761505、wo2012/125124、wo2012/123585、wo2011/099576、wo2011/035922、wo2009148928、wo2008/149521、wo2005/079390、wo2003/080064、wo2008/075068(特別是實施例80)、wo2005/080330，上述專利以引用的方式整體并入本文中。

在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑可以是fgfr/fgf特異性抑制劑，例如fgfr1特異性抑制劑。在一些實施方案中，該抑制劑可以是雙重抑制劑或泛抑制劑，其中fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑抑制fgfr/fgf及一種或多種其它標(biāo)靶多肽和/或一種或多種fgfr/fgf。

在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek1抑制劑。在某些實施方案中，mek拮抗劑是mek2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是mek1/2抑制劑。在某些實施方案中，mek抑制劑是gdc-0973(克比替尼)。在某些實施方案中，pik3拮抗劑是gdc-0032。

此處還提供可用于本文所描述的方法中的b-raf拮抗劑。

示例性b-raf拮抗劑包括本領(lǐng)域中已知的那些，例如威羅非尼(又稱和plx4032)、索拉非尼、plx4720、plx-3603、gsk2118436、gdc-0879、n-(3-(5-(4-氯苯基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-羰基)-2，4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺，以及wo2007/002325、wo2007/002433、wo2009111278、wo2009111279、wo2009111277、wo2009111280及美國專利號7,491,829中所描述的那些。其它b-raf拮抗劑包括gsk2118436、raf265(novartis)、xl281、arq736、bay73-4506。在一些實施方案中，b-raf拮抗劑是選擇性b-raf拮抗劑。在一些實施方案中，b-raf拮抗劑是選擇性b-rafv600拮抗劑。在一些實施方案中，b-raf拮抗劑是選擇性b-rafv600e拮抗劑。在一些實施方案中，b-rafv600是b-rafv600e、b-rafv600k和/或v600d。在一些實施方案中，b-rafv600是b-rafv600r。

b-raf拮抗劑可以是小分子抑制劑。小分子抑制劑優(yōu)選是除本文所定義的多肽或抗體外的結(jié)合，優(yōu)選特異性結(jié)合至b-raf的有機(jī)分子。在一些實施方案中，b-raf拮抗劑是激酶抑制劑。在一些實施方案中，b-raf拮抗劑是抗體、肽、肽模擬物、適體或多聚核苷酸。

可用于所述方法中的抗b-raf抗體包括以足夠親和力特異性結(jié)合至b-raf并且可以降低或抑制b-raf活性的任何抗體。所選抗體通常對b-raf具有足夠強(qiáng)的親和力，例如，該抗體可以按介于100nm-1pm之間的kd值結(jié)合人類b-raf。抗體親和力可以例如通過基于表面等離子體共振的分析(如pct申請公布號wo2005/012359中所描述的biacore分析)、酶聯(lián)免疫吸附劑分析(elisa)及競爭分析(例如ria)測定。

在一些實施方案中，b-raf拮抗劑可以是b-raf特異性抑制劑。在一些實施方案中，該抑制劑可以是雙重抑制劑或泛抑制劑，其中b-raf拮抗劑抑制b-raf及一種或多種其它標(biāo)靶多肽。

a.抗體

本文提供了結(jié)合至所關(guān)注多肽，如fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)、fgf(例如fgf1-23)、mek1、mek2、mek1/2、pik3和/或b-raf的用于本文所描述的方法中的分離的抗體。在以上任一實施方案中，抗體是人源化的。另外，根據(jù)以上實施方案中任一個的抗體是單克隆抗體，包括嵌合抗體、人源化抗體或人類抗體。在一個實施方案中，該抗體是抗體片段，例如fv、fab、fab′、scfv、雙抗體或f(ab′)2片段。在另一實施方案中，該抗體是全長抗體，例如“完整igg1”抗體，或如本文所定義的其它抗體類別或同種型。

在另一方面，根據(jù)以上任一實施方案的抗體可以并入如以下部分中所述的任何特征之一或其組合：

1.抗體親和力

在某些實施方案中，本文提供的抗體的解離常數(shù)(kd)≤1μm，≤100nm，≤10nm，≤1nm，≤0.1nm，≤0.01nm，或≤0.001nm(例如，10^-8m或更低，例如10^-8m至10^-13m，例如10^-9m至10^-13m)。在一個實施方案中，kd是通過放射性標(biāo)記抗原結(jié)合分析(ria)測量。在一個實施方案中，ria是以所關(guān)注抗體的fab型式及其抗原進(jìn)行。舉例來說，通過在未標(biāo)記抗原滴定系列存在下使fab與最小濃度的(¹²⁵i)標(biāo)記抗原平衡，接著用涂布抗fab抗體的板捕捉經(jīng)結(jié)合抗原來測量fab對抗原的溶液結(jié)合親和力(參看例如，chen等人，j.mol.biol.293：865-881(1999))。為建立分析條件，用含5μg/ml捕捉抗fab抗體(cappellabs)的50mm碳酸鈉(ph9.6)將多孔板(thermoscientific)涂布過夜，隨后在室溫(約23℃)下用含2％(w/v)牛血清白蛋白的pbs阻斷二至五小時。在非吸附板(nunc#269620)中，將100pm或26pm[¹²⁵i]-抗原與所關(guān)注fab的連續(xù)稀釋液混合(例如按照presta等人，cancerres.57：4593-4599(1997)中的抗vegf抗體fab-12的評估)。接著培育所關(guān)注fab過夜；不過，培育可以持續(xù)更長時間(例如約65小時)以確保達(dá)到平衡。此后，在室溫下將混合物轉(zhuǎn)移至捕捉板中進(jìn)行培育(例如1小時)。接著移除溶液并用含0.1％聚山梨醇酯20(tween-)的pbs將板洗滌八次。當(dāng)板干燥時，添加150μl/孔的閃爍體(microscint-20^tm；packard)，并在topcount^tmγ計數(shù)器(packard)上對板計數(shù)十分鐘。選擇提供小于或等于20％最大結(jié)合的每一fab的濃度用于競爭性結(jié)合分析。

根據(jù)另一實施方案，使用表面等離子體共振分析測量kd。舉例來說，在25℃下，用固定抗原cm5芯片，在約10個反應(yīng)單元(ru)下，使用-2000或-3000(biacore，inc.，piscataway，nj)進(jìn)行分析。在一個實施方案中，根據(jù)供應(yīng)商的說明，用n-乙基-n′-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(edc)及n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)使羧甲基化的葡聚糖生物傳感器芯片(cm5，biacore，inc.)活化。用10mm乙酸鈉(ph4.8)將抗原稀釋至5μg/ml(約0.2μm)，隨后以5μl/分鐘流速注射以達(dá)到約10個反應(yīng)單元(ru)的偶合蛋白。在注射抗原之后，注射1m乙醇胺以阻斷未反應(yīng)組。對于動力學(xué)測量，在25℃下，以約25μl/min的流速將fab的兩倍稀釋液(0.78nm至500nm)注入含0.05％聚山梨醇酯20(tween-20^tm)表面活性劑的pbs(pbst)中。使用簡單的一對一朗繆爾結(jié)合模型(one-to-onelangmuirbindingmodel)(評價軟件3.2版)，通過同時擬合締合和解離傳感圖譜來計算締合速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(shù)(kd)是以koff/kon比率計算。參見例如，chen等人，j.mol.biol.293：865-881(1999)。如果以上表面等離子體共振分析測定締合速率超過106m-1s-1，則該締合速率可以通過使用熒光猝滅技術(shù)測定，該技術(shù)以分光計，如裝備停流儀的分光光度計(avivinstruments)或帶有攪拌比色杯的8000系列slm-aminco^tm分光光度計測量在25℃下，在遞增濃度的抗原存在下含20nm抗-抗原抗體(fab形式)的pbs(ph7.2)的熒光發(fā)射強(qiáng)度的增加或降低(激發(fā)＝295nm；發(fā)射＝340nm；16nm帶通)。

2.抗體片段

在某些實施方案中，本文提供的抗體是抗體片段?？贵w片段包括但不限于，fab、fab′、fab′-sh、f(ab′)2、fv及scfv片段，以及下文所述的其它片段。關(guān)于某些抗體片段的綜述，參見hudson等人，nat.med.9：129-134(2003)。關(guān)于scfv片段的綜述，參見例如，pluckthün，thepharmacologyofmonoclonalantibodies，第113卷，rosenburg和moore編，(springer-verlag，newyork)，第269-315頁(1994)；另參見wo93/16185；及美國專利號5,571,894和5,587,458。關(guān)于包含救助受體結(jié)合表位殘基并具有較高體內(nèi)半衰期的fab和f(ab′)2片段的論述，參見美國專利號5,869,046。

雙抗體是具有兩個抗原結(jié)合位點的抗體片段，其可以是二價或雙特異性的。參見例如，ep404,097；wo1993/01161；hudson等人，nat.med.9：129-134(2003)；及hollinger等人，proc.natl.acad.sci.usa90：6444-6448(1993)。三功能抗體和四功能抗體也描述于hudson等人，nat.med.9：129-134(2003)。

單結(jié)構(gòu)域抗體是包含抗體的所有或一部分重鏈可變結(jié)構(gòu)域或所有或一部分輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗體片段。在某些實施方案中，單結(jié)構(gòu)域抗體是人類單結(jié)構(gòu)域抗體(domantis，inc.，waltham，ma；參見例如，美國專利號6,248,516)。

抗體片段可以通過各種技術(shù)制備，包括但不限于，完整抗體的蛋白水解消化以及通過重組宿主細(xì)胞(例如大腸桿菌或噬菌體)產(chǎn)生，如本文中所述。

3.嵌合抗體和人源化抗體

在某些實施方案中，本文提供的抗體是嵌合抗體。某些嵌合抗體描述于例如美國專利號4,816,567；及morrison等人，proc.natl.acad.sci.usa，81：6851-6855(1984))中。在一個實施例中，嵌合抗體包含非人類可變區(qū)(例如來源于小鼠、大鼠、倉鼠、兔或如猴等非人類靈長類動物的可變區(qū))及人類恒定區(qū)。在另一實施例中，嵌合抗體是“類別轉(zhuǎn)換”抗體，其中類別或子類已由親本抗體的類別或子類改變。嵌合抗體包括其抗原結(jié)合片段。

在某些實施方案中，嵌合抗體是人源化抗體。典型地，對非人類抗體進(jìn)行人源化以降低對人類的免疫原性，同時保留親本非人類抗體的特異性和親和力。一般來說，人源化抗體包含一個或多個可變結(jié)構(gòu)域，其中hvr(例如cdr)(或其部分)來源于非人類抗體，并且fr(或其部分)來源于人類抗體序列。人源化抗體任選將另包含至少一部分人類恒定區(qū)。在一些實施方案中，人源化抗體中的一些fr殘基被來自非人類抗體(例如得到hvr殘基的抗體)的相應(yīng)殘基取代，例如以恢復(fù)或改善抗體特異性或親和力。

人源化抗體及其制備方法綜述于例如almagro和fransson，front.biosci.13：1619-1633(2008)中，并且進(jìn)一步描述于例如riechmann等人，nature332：323-329(1988)；queen等人，proc.nat’lacad.sci.usa86：10029-10033(1989)；美國專利號5,821,337、7,527,791、6,982,321及7,087,409；kashmiri等人，methods36：25-34(2005)(描述了特異性決定區(qū)(sdr)移植)；padlan，mol.immunol.28：489-498(1991)(描述了“表面重塑”)；dall’acqua等人，methods36：43-60(2005)(描述了“fr改組”)；及osbourn等人，methods36：61-68(2005)及klimka等人，br.j.cancer，83：252-260(2000)(描述了用于fr改組的“導(dǎo)引選擇”法)。

可以用于人源化的人類構(gòu)架區(qū)包括但不限于：使用“最佳擬合”法選擇的構(gòu)架區(qū)(參見例如，sims等人，j.immunol.151：2296(1993))；來源于具有特定亞組的輕鏈或重鏈可變區(qū)的人類抗體的共同序列的構(gòu)架區(qū)(參見例如，carter等人，proc.natl.acad.sci.usa，89：4285(1992)；及presta等人，j.immunol.，151：2623(1993))；及人類成熟(體細(xì)胞突變)構(gòu)架區(qū)或人類生殖系構(gòu)架區(qū)(參見例如，almagro和fransson，front.biosci.13：1619-1633(2008))；及來源于篩選fr文庫的構(gòu)架區(qū)(參見例如，baca等人，j.biol.chem.272：10678-10684(1997)及rosok等人，j.biol.chem.271：22611-22618(1996))。

4.人類抗體

在某些實施方案中，本文提供的抗體是人類抗體。人類抗體可以使用本領(lǐng)域中已知的不同技術(shù)產(chǎn)生。人類抗體大體上描述于vandijk及vandewinkel，curr.opin.pharmacol.5：368-74(2001)，及l(fā)onberg，curr.opin.immunol.20：450-459(2008)中。

人類抗體可以通過向轉(zhuǎn)基因動物施用免疫原來制備，該轉(zhuǎn)基因動物經(jīng)過修飾以響應(yīng)于抗原攻擊而產(chǎn)生完整人類抗體或具有人類可變區(qū)的完整抗體。此類動物典型地含有置換內(nèi)源性免疫球蛋白基因座或存在于染色體外或隨機(jī)整合至動物染色體中的全部或一部分人類免疫球蛋白基因座。在這些轉(zhuǎn)基因小鼠中，內(nèi)源性免疫球蛋白基因座一般是不活化的。關(guān)于由轉(zhuǎn)基因動物獲得人類抗體的方法的綜述，參見lonberg，nat.biotech.23：1117-1125(2005)。另參見例如，美國專利號6,075,181和6,150,584，該案描述了xenomouse^tm技術(shù)；美國專利號5,770,429，該案描述了技術(shù)；美國專利號7,041,870號，該案描述了k-m技術(shù)；及美國專利申請公布號us2007/0061900，該案描述了技術(shù)。來自由這些動物產(chǎn)生的完整抗體的人類可變區(qū)可以例如通過與不同人類恒定區(qū)組合來進(jìn)一步修飾。

人類抗體還可以通過基于雜交瘤的方法制備。已描述用于產(chǎn)生人類單株抗體的人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細(xì)胞系。(參見例如，kozborj.immunol.，133：3001(1984)；brodeur等人，monoclonalantibodyproductiontechniquesandapplications，第51-63頁(marceldekker，inc.，newyork，1987)；及boemer等人，j.immunol.，147：86(1991)。)經(jīng)由人類b細(xì)胞雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的人類抗體也描述于li等人，proc.natl.acad.sci.usa，103：3557-3562(2006)中。其它方法包括例如描述于美國專利號7,189,826(描述了由雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生單克隆人類igm抗體)及ni，xiandaimianyixue，26(4)：265-268(2006)(描述了人類-人類雜交瘤)中的方法。人類雜交瘤技術(shù)(三源雜交瘤技術(shù))另描述于vollmers和brandlein，hist.&histopath.，20(3)：927-937(2005)，以及vollmers和brandlein，methodsfindexp.clin.pharmacol.，27(3)：185-91(2005)中。

人類抗體還可以通過分離選自人類來源的噬菌體呈現(xiàn)文庫的fv克隆可變結(jié)構(gòu)域序列來產(chǎn)生。這些可變結(jié)構(gòu)域序列接著可以與所希望的人類恒定結(jié)構(gòu)域組合。下文描述自抗體文庫選擇人類抗體的技術(shù)。

5.來源于文庫的抗體

抗體可以通過篩選組合文庫中具有一種或多種所希望活性的抗體來分離。舉例來說，本領(lǐng)域中已知用于產(chǎn)生噬菌體呈現(xiàn)文庫及篩選這些文庫中具有所希望的結(jié)合特征的抗體的多種方法。這些方法綜述于例如hoogenboom等人，methodsmol.biol.178：1-37(o’brien等人編，humanpress，totowa，nj，2001)中并且進(jìn)一步描述于例如mccafferty等人，nature348：552-554；clackson等人，nature352：624-628(1991)；marks等人，j.mol.biol.222：581-597(1992)；marks和bradbury，methodsmol.biol.248：161-175(lo編，humanpress，totowa，nj，2003)；sidhu等人，j.mol.biol.338(2)：299-310(2004)；lee等人，j.mol.biol.340(5)：1073-1093(2004)；fellouse，proc.natl.acad.sci.usa101(34)：12467-12472(2004)；及l(fā)ee等人，j.immunol.methods284(1-2)：119-132(2004)中。

在某些噬菌體呈現(xiàn)方法中，通過聚合酶鏈反應(yīng)(pcr)分別克隆vh和vl基因的譜系并在噬菌體文庫中隨機(jī)重組，接著可以如winter等人，ann.rev.immunol.，12：433-455(1994)中所述篩選抗原結(jié)合噬菌體。噬菌體典型地以單鏈fv(scfv)片段或fab片段形式呈現(xiàn)抗體片段。來自經(jīng)免疫來源的文庫提供抗免疫原的高親和力抗體而無需構(gòu)建雜交瘤。作為替代，可以對天然譜系(例如，來自人類)進(jìn)行克隆以提供針對多種非自身抗原和自身抗原的單一抗體來源，而無需進(jìn)行任何免疫接種，如griffiths等人，emboj，12：725-734(1993)中所述。最后，如hoogenboom和winter，j.mol.biol.，227：381-388(1992)所述，也可以通過自干細(xì)胞克隆未重排的v基因區(qū)段并使用含有隨機(jī)序列的pcr引物編碼高度可變的cdr3區(qū)，并且完成體外重排來合成產(chǎn)生天然文庫。描述人類抗體噬菌體文庫的專利公布包括例如：美國專利號5,750,373，以及美國專利公布號2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936及2009/0002360。

自人類抗體文庫分離的抗體或抗體片段在本文中被認(rèn)為人類抗體或人類抗體片段。

6.多特異性抗體

在某些實施方案中，本文提供的抗體是多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體是對至少兩個不同位點具有結(jié)合特異性的單克隆抗體。在某些實施方案中，結(jié)合特異性之一是針對所關(guān)注多肽，如fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)、fgf(例如fgf1-23)、mek1、mek2、mek1/2、pik3和/或b-raf并且另一個是針對任何其它抗原。在某些實施方案中，雙特異性抗體可以結(jié)合至所關(guān)注多肽的兩個不同表位，如fgfr/fgf和/或b-raf，或fgfr/fgf和/或mek1，或fgfr/fgf和/或mek2，或fgfr/fgf和/或mek1/2，或pik3和/或mek1，或pik3和/或mek2，或pik3和/或mek1/2。雙特異性抗體還可以用于將細(xì)胞毒性劑定位于表達(dá)所關(guān)注多肽，如fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)、fgf(例如fgf1-23)、mek1、mek2、mek1/2、pik3和/或b-raf的細(xì)胞。雙特異性抗體可以制備成全長抗體或抗體片段。

用于制備多特異性抗體的技術(shù)包括但不限于，具有不同特異性的兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對的重組共表達(dá)(參見milstein和cuello，nature305：537(1983))、wo93/08829及traunecker等人，emboj.10：3655(1991))；及“杵臼技術(shù)(knob-in-hole)”工程改造(參見例如，美國專利號5,731,168)。多特異性抗體也可以通過以下方式制備：工程改造靜電牽引作用以制備抗體fc雜二聚體分子(wo2009/089004a1)；使兩種或更多種抗體或片段交聯(lián)(參見例如，美國專利號4,676,980，及brennan等人，science，229：81(1985))；使用亮胺酸拉鏈制造雙特異性抗體(參見例如，kostelny等人，j.immunol.，148(5)：1547-1553(1992))；使用“雙抗體”技術(shù)制備雙特異性抗體片段(參見例如，hollinger等人，proc.natl.acad.sci.usa，90：6444-6448(1993))；及使用單鏈fv(sfv)二聚體(參見例如，gruber等人，j.immunol.，152：5368(1994))；及制備三特異性抗體，如例如tutt等人，j.immunol.147：60(1991)中所述。

本文還包括了具有三個或更多個抗原結(jié)合位點的工程改造的抗體，包括“octopus抗體”(參見例如us2006/0025576a1)。

本文中的抗體或片段還包括“雙效fab”或“daf”，其包含了結(jié)合至所關(guān)注多肽，如fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)、fgf(例如fgf1-23)、mek1、mek2、mek1/2、pik3和/或b-raf，以及另一不同抗原(參見例如us2008/0069820)，包括但不限于，fgfr、mek1、mek2、mek1/2、pik3和/或b-raf的抗原結(jié)合位點。

7.抗體變體

a)糖基化變體

在某些實施方案中，對本文提供的抗體進(jìn)行改變以增加或減小抗體糖基化的程度。在抗體上添加或缺失糖基化位點可以通過改變氨基酸序列以產(chǎn)生或去除一個或多個糖基化位點便利地達(dá)成。

在抗體包含fc區(qū)的情況下，可以改變與其連接的碳水化合物。由哺乳動物細(xì)胞產(chǎn)生的天然抗體典型地包含分支的雙觸角(biantennary)寡糖，其一般通過n-鍵聯(lián)連接至fc區(qū)ch2結(jié)構(gòu)域的asn297。參見例如，wright等人，tibtech15：26-32(1997)。寡糖可以包括各種碳水化合物，例如甘露糖、n-乙?；咸前?glcnac)、半乳糖及唾液酸，以及連接至雙觸角寡糖結(jié)構(gòu)的“主干”中的glcnac的巖藻糖。在一些實施方案中，可以對本發(fā)明抗體中的寡糖進(jìn)行修飾以產(chǎn)生具有某些改善的特性的抗體變體。

在一個實施方案中，提供具有缺乏與fc區(qū)連接(直接或間接)的海藻糖的碳水化合物結(jié)構(gòu)的抗體變體。舉例來說，此抗體中海藻糖的量可以是1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。如例如wo2008/077546中所述，通過相對于與asn297連接的所有糖結(jié)構(gòu)(例如復(fù)合、雜交及高甘露糖結(jié)構(gòu))的總和計算asn297處糖鏈內(nèi)海藻糖的平均量來測定海藻糖的量(如通過maldi-tof質(zhì)譜測量)。asn297是指大致位于fc區(qū)中297位(fc區(qū)殘基的eu編號)處的天冬酰胺殘基；然而，歸因于抗體中的微小序列變化，asn297也可能位于297的上游或下游約±3個氨基酸處，即，介于位置294與300之間。這些海藻糖基化變體可以具有改善的adcc功能。參見例如，美國專利公布號us2003/0157108(presta，l.)；us2004/0093621(kyowahakkokogyoco.，ltd)。涉及“去海藻糖基化”或“缺乏海藻糖”的抗體變體的公布的實例包括：us2003/0157108；wo2000/61739；wo2001/29246；us2003/0115614；us2002/0164328；us2004/0093621；us2004/0132140；us2004/0110704；us2004/0110282；us2004/0109865；wo2003/085119；wo2003/084570；wo2005/035586；wo2005/035778；wo2005/053742；wo2002/031140；okazaki等人，j.mol.biol.336”1239-1249(2004)；yamane-ohnuki等人，biotech.bioeng.87：614(2004)。能夠產(chǎn)生去海藻糖化抗體的細(xì)胞系的實例包括缺乏蛋白質(zhì)海藻糖化的lec13cho細(xì)胞(ripka等人，arch.biochem.biophys.249：533-545(1986)；presta，l的美國專利申請?zhí)杣s2003/0157108a1；及adams等人的wo2004/056312a1，尤其實施例11)；及基因敲除細(xì)胞系，如α-1，6-海藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因fut8基因敲除的cho細(xì)胞(參見例如，yamane-ohnuki等人，biotech.bioeng.87：614(2004)；kanda，y.等人，biotechnol.bioeng.，94(4)：680-688(2006)；及wo2003/085107)。

另外提供了具有對分的寡糖的抗體變體，例如其中連接至抗體fc區(qū)的雙觸角寡糖經(jīng)glcnac對分。此類抗體變體可以具有減少的海藻糖化和/或改善的adcc功能。此類抗體變體的實例描述于例如wo2003/011878(jean-mairet等人)、美國專利號6,602,684(umana等人)及us2005/0123546(umana等人)中。還提供了寡糖中至少1個半乳糖殘基連接至fc區(qū)的抗體變體。此類抗體變體可以具有改善的cdc功能。此類抗體變體描述于例如wo1997/30087(patel等人)；wo1998/58964(raju，s.)；及wo1999/22764(raju，s.)中。

b)fc區(qū)變體

在某些實施方案中，可以將一個或多個氨基酸修飾引入本文提供的抗體的fc區(qū)中，由此產(chǎn)生fc區(qū)變體。fc區(qū)變體可以包含在一個或多個氨基酸位置處包含氨基酸修飾(例如取代)的人類fc區(qū)序列(例如人類igg1、igg2、igg3或igg4fc區(qū))。

在某些實施方案中，本發(fā)明涵蓋具有一些但非所有效應(yīng)功能的抗體變體，此使其成為合乎應(yīng)用需要的候選物，在這些應(yīng)用中，抗體在體內(nèi)的半衰期很重要，而某些效應(yīng)功能(如補(bǔ)體和adcc)是不必要或有害的。可以進(jìn)行體外和/或體內(nèi)細(xì)胞毒性分析以確定cdc和/或adcc活性的降低/衰竭。舉例來說可以進(jìn)行fc受體(fcr)結(jié)合分析，以確?？贵w缺乏fcγr結(jié)合能力(由此可能缺乏adcc活性)，但保留fcrn結(jié)合能力。介導(dǎo)adcc的原代細(xì)胞nk細(xì)胞僅表達(dá)fc(riii，而單核細(xì)胞表達(dá)fc(ri、fc(rii及fc(riii。fcr在造血細(xì)胞上的表達(dá)概括于ravetch和kinet，annu.rev.immunol.9：457-492(1991)第464頁的表3中。用于評估所關(guān)注分子的adcc活性的非限制性實施例描述于美國專利號5,500,362(參見例如，hellstrom，i.等人，proc.nat’lacad.sci.usa83：7059-7063(1986))及hellstrom，i等人，proc.nat’lacad.sci.usa82：1499-1502(1985)；5,821,337(參見bruggemann，m.等人，j.exp.med.166：1351-1361(1987))中。或者，可以使用非放射性分析方法(參見例如，有關(guān)流式細(xì)胞術(shù)的acti^tm非放射性細(xì)胞毒性分析(celltechnology，inc.mountainview，ca)；及cytotox非放射性細(xì)胞毒性分析(promega，madison，wi))。適用于這些分析的效應(yīng)細(xì)胞包括末梢血液單核細(xì)胞(pbmc)及自然殺手(nk)細(xì)胞。替代地或另外，可以在體內(nèi)，例如在動物模型，如在clynes等人，proc.nat′lacad.sci.usa95：652-656(1998)中公開的動物模型中，評估所關(guān)注分子的adcc活性。還可以進(jìn)行c1q結(jié)合分析以確定抗體無法與c1q結(jié)合并因此缺乏cdc活性。參見例如，wo2006/029879和wo2005/100402中的c1q和c3c結(jié)合elisa。為了評估補(bǔ)體活化，可以進(jìn)行cdc分析(參見例如，gazzano-santoro等人，j.immunol.methods202：163(1996)；cragg，m.s.等人，blood101：1045-1052(2003)；及cragg，m.s.及m.j.glennie，blood103：2738-2743(2004))。也可以使用本領(lǐng)域中已知的方法測定fcrn結(jié)合及體內(nèi)清除率/半衰期(參見例如，petkova，s.b.等人，int′l.immunol.18(12)：1759-1769(2006))。

效應(yīng)功能降低的抗體的非限制性實例包括fc區(qū)殘基238、265、269、270、297、327及329中的一個或多個具有取代的抗體(美國專利號6,737,056)。這些fc突變體包括在氨基酸位置265、269、270、297及327中的兩個或更多個處具有取代的fc突變體，包括殘基265和297取代為丙氨酸的所謂“dana”fc突變體(美國專利號7,332,581)。

與fcr的結(jié)合得到改善或減弱的某些抗體變體已有描述。(參見例如，美國專利號6,737,056；wo2004/056312；及shields等人，j.biol.chem.9(2)：6591-6604(2001)。)在某些實施方案中，抗體變體包含具有改善adcc的一個或多個氨基酸取代(例如fc區(qū)位置298、333和/或334(殘基的eu編號)處的取代)的fc區(qū)。在一些實施方案中，在fc區(qū)中進(jìn)行改變，引起c1q結(jié)合和/或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(cdc)改變(即，改善或削弱)，例如，如美國專利號6,194,551、wo99/51642及idusogie等人，j.immunol.164：4178-4184(2000)中所述。

在us2005/0014934a1(hinton等人)中描述了半衰期增加并且與新生兒fc受體(fcrn)的結(jié)合得到改善的抗體，fcrn負(fù)責(zé)將母體igg轉(zhuǎn)移至胎兒中(guyer等人，j.immunol.117：587(1976)及kim等人，j.immunol.24：249(1994))。這些抗體包含的fc區(qū)具有改善fc區(qū)與fcrn的結(jié)合的一個或多個取代。這些fc變體包括在以下fc區(qū)殘基中的一個或多個處具有取代的fc變體：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如fc區(qū)殘基434的取代(美國專利號7,371,826)。關(guān)于fc區(qū)變體的其它實例，另參見duncan&winternature322：738-40(1988)；美國專利號5,648,260；美國專利號5,624,821；及wo94/29351。

c)半胱氨酸工程改造的抗體變體

在某些實施方案中，可能需要例如通過使用thiomab^tm技術(shù)產(chǎn)生半胱氨酸工程改造的抗體，在此技術(shù)中，抗體的一個或多個殘基被半胱氨酸殘基取代。在特定實施方案中，被取代的殘基存在于抗體的可達(dá)位點處。通過用半胱氨酸取代這些殘基，反應(yīng)性硫醇基由此定位于抗體的可達(dá)位點處并且可以用于將抗體與其它部分(如藥物部分或連接子-藥物部分)結(jié)合以產(chǎn)生如本文中進(jìn)一步描述的免疫偶聯(lián)物。在某些實施方案中，以下任一個或多個殘基可以被半胱氨酸取代：輕鏈的v205(kabat編號)重鏈的a118(eu編號)；及重鏈fc區(qū)的s400(eu編號)。如美國專利號7,521,541和美國專利公布號20110301334(整體并入本文中)中所描述，其它抗體可以被設(shè)計成具有半胱氨酸取代。半胱氨酸工程改造的抗體可以如例如美國專利號7,521,541中所述來產(chǎn)生。

b.免疫偶聯(lián)物

本文另外提供免疫偶聯(lián)物，所述免疫偶聯(lián)物包含結(jié)合所關(guān)注多肽，如fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)、fgf(例如fgf1-23)、mek1、mek2、mek1/2、pik3或b-raf的抗體與一種或多種細(xì)胞毒性劑，如化學(xué)治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如蛋白質(zhì)毒素；細(xì)菌、真菌、植物或動物來源的酶活性毒素；或其片段)或用于本文所描述的方法中的放射性同位素的偶聯(lián)物。

在一個實施方案中，免疫偶聯(lián)物是抗體-藥物偶聯(lián)物(adc)，其中抗體與一種或多種藥物偶聯(lián)，包括但不限于，類美登素(maytansinoid)(參見美國專利號5,208,020、5,416,064，及歐洲專利ep0425235b1)；奧里斯他汀(auristatin)，如單甲基奧里斯他汀藥物部分de和df(mmae和mmaf)(參見美國專利號5,635,483以及5,780,588和7,498,298)；多拉斯他汀(dolastatin)；卡奇霉素(calicheamicin)或其衍生物(參見美國專利號5,712,374、5,714,586、5,739,116、5,767,285、5,770,701、5,770,710、5,773,001及5,877,296；hinman等人，cancerres.53：3336-3342(1993)；及l(fā)ode等人，cancerres.58：2925-2928(1998))；蒽環(huán)霉素(anthracycline)，如道諾霉素(daunomycin)或多柔比星(doxorubicin)(參見kratz等人，currentmed.chem.13：477-523(2006)；jeffrey等人，bioorganic&med.chem.letters16：358-362(2006)；torgov等人，bioconj.chem.16：717-721(2005)；nagy等人，proc.natl.acad.sci.usa97：829-834(2000)；dubowchik等人，bioorg.&med.chem.letters12：1529-1532(2002)；king等人，j.med.chem.45：4336-4343(2002)；及美國專利號6,630,579)；甲氨蝶呤；長春地辛；紫杉烷，如多西他賽(docetaxel)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、拉羅他賽(larotaxel)、特西紫杉醇(tesetaxel)及奧他紫杉醇(ortataxel)；單端孢烯(trichothecene)；及cc1065。

在另一實施方案中，免疫偶聯(lián)物包含如本文所述的抗體與酶活性毒素或其片段的偶聯(lián)物，包括但不限于，白喉(diphtheria)a鏈、白喉毒素的非結(jié)合活性片段、外毒素(exotoxin)a鏈(來自綠膿桿菌(pseudomonasaeruginosa))、篦麻毒素a鏈、相思子毒素(abrin)a鏈、莫迪素(modeccin)a鏈、α-帚曲菌素(alpha-sarcin)、油桐(aleuritesfordii)蛋白、石竹素(dianthin)蛋白、洋商陸(phytolacaamericana)蛋白(papi、papii及pap-s)、苦瓜(momordicacharantia)抑制劑、麻瘋樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、肥皂草(sapaonariaofficinalis)抑制劑、白樹素(gelonin)、有絲分裂素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、伊諾霉素(enomycin)及霉菌毒素(tricothecene)。

在另一實施方案中，免疫偶聯(lián)物包含如本文所述的抗體與放射性原子偶聯(lián)形成的放射性偶聯(lián)物。多種放射性同位素可用于制造放射性偶聯(lián)物。實例包括at²¹¹、i¹³¹、i¹²⁵、y⁹⁰、re¹⁸⁶、re¹⁸⁸、sm¹⁵³、bi²¹²、p³²、pb²¹²及l(fā)u的放射性同位素。當(dāng)使用放射性偶聯(lián)物進(jìn)行檢測時，其可以包含用于閃爍攝影研究的放射性原子，例如tc^99m或i¹²³；用于核磁共振(nmr)成像(又稱為磁共振成像，mri)的自旋標(biāo)記，如碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。

抗體與細(xì)胞毒性劑可以使用多種雙官能蛋白質(zhì)偶合劑進(jìn)行偶聯(lián)，這些雙官能蛋白質(zhì)偶合劑如n-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(spdp)、琥珀酰亞胺基-4-(n-順丁烯二酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-1-甲酸酯(smcc)、亞氨基硫雜環(huán)戊烷(it)、酰亞胺酯的雙官能衍生物(如二亞氨代己二酸二甲酯鹽酸鹽(dimethyladipimidatehcl))、活性酯(如二琥珀酰亞胺基辛二酸酯)、醛(如戊二醛)、雙疊氮基化合物(如雙(對疊氮基苯甲?；?己二胺)、雙重氮衍生物(如雙(對重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二異氰酸酯(如2，6-二異氰酸甲苯酯)及雙活性氟化合物(如1，5-二氟-2，4-二硝基苯)。舉例來說，蓖麻毒素免疫毒素可以如vitetta等人，science，238：1098(1987)中所述來制備。碳-14標(biāo)記的1-異硫氰氧基苯甲基-3-甲基二亞乙基三胺五乙酸(mx-dtpa)是用于偶聯(lián)放射性核苷酸與抗體的一種示例性螯合劑。參見wo94/11026。連接子可以是有助于細(xì)胞毒性藥物在細(xì)胞中釋放的“可裂解連接子”。舉例來說，可以使用酸不穩(wěn)定性連接子、肽酶敏感性連接子、光不穩(wěn)定性連接子、二甲基連接子或含二硫鍵的連接子(chari等人，cancerres.52：127-131(1992)；美國專利號5,208,020)。

本文中的免疫偶聯(lián)物或adc清楚地涵蓋但不限于，以交聯(lián)劑制備的偶聯(lián)物，包括但不限于，bmps、emcs、gmbs、hbvs、lc-smcc、mbs、mpbh、sbap、sia、siab、smcc、smpb、smph、磺基-emcs、磺基-gmbs、磺基-kmus、磺基-mbs、磺基-siab、磺基-smcc及磺基-smpb，以及svsb(琥珀酰亞胺基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)，這些是可商購的(例如，購自piercebiotechnology，inc.，rockford，il.，u.s.a)。

c.結(jié)合多肽

還提供了用于本文所描述的方法中的結(jié)合多肽，所述結(jié)合多肽結(jié)合至，優(yōu)選特異性結(jié)合至fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)、fgf(例如fgf1-23)、mek1、mek2、mek1/2、pik3和/或b-raf的多肽。在一些實施方案中，結(jié)合多肽是fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)拮抗劑、mek1拮抗劑、mek2拮抗劑、mek1/2拮抗劑、pik3拮抗劑和/或b-raf拮抗劑。結(jié)合多肽可以使用已知的多肽合成方法以化學(xué)方式合成，或者可以使用重組技術(shù)制備并純化。結(jié)合多肽通常是至少約5個氨基酸長度，或者至少約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100個氨基酸長度或更長，其中此類結(jié)合多肽能夠結(jié)合至，優(yōu)選特異性結(jié)合至如本文所描述的標(biāo)靶，例如fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)、fgf(例如fgf1-23)、mek1、mek2、mek1/2、pik3或b-raf。結(jié)合多肽可以使用眾所周知的技術(shù)鑒別，無需過度實驗。就這一點來說，應(yīng)注意，用于篩選能夠特異性結(jié)合至多肽標(biāo)靶的結(jié)合多肽的多肽文庫的技術(shù)是本領(lǐng)域中眾所周知的(參見例如，美國專利號5,556,762、5,750,373、4,708,871、4,833,092、5,223,409、5,403,484、5,571,689、5,663,143；pct公布號wo84/03506和wo84/03564；geysen等人，proc.natl.acad.sci.u.s.a.，81：3998-4002(1984)；geysen等人，proc.natl.acad.sci.u.s.a.，82：178-182(1985)；geysen等人，syntheticpeptidesasantigens，130-149(1986)；geysen等人，j.immunol.meth.，102：259-274(1987)；schoofs等人，j.immunol.，140：611-616(1988)，cwirla，s.e.等人(1990)proc.natl.acad.sci.usa，87：6378；lowman，h.b.等人(1991)biochemistry，30：10832；clackson，t.等人(1991)nature，352：624；marks，j.d.等人(1991)，j.mol.biol.，222：581；kang，a.s.等人(1991)proc.natl.acad.sci.usa，88：8363；及smith，g.p.(1991)currentopin.biotechnol.，2：668)。

產(chǎn)生多肽文庫及篩選這些文庫的方法另公開于美國專利號5,723,286、5,432,018、5,580,717、5,427,908、5,498,530、5,770,434、5,734,018、5,698,426、5,763,192及5,723,323中。

d.結(jié)合小分子

本文提供了用于本文所描述的方法中的用作fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)、fgf(例如fgf1-23)、mek1、mek2、mek1/2、pik3和/或b-raf的小分子拮抗劑的結(jié)合小分子。

結(jié)合小分子優(yōu)選是結(jié)合至，優(yōu)選特異性結(jié)合至fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)、fgf(例如fgf1-23)、mek1、mek2、mek1/2、pik3和/或b-raf的除本文所定義的結(jié)合多肽或抗體外的有機(jī)小分子。結(jié)合有機(jī)小分子可以使用已知方法鑒別及化學(xué)合成(參見例如，pct公布號wo00/00823和wo00/39585)。結(jié)合有機(jī)小分子的尺寸通常小于約2000道爾頓，或者尺寸小于約1500、750、500、250或200道爾頓，其中能夠結(jié)合至，優(yōu)選特異性結(jié)合至本文所描述的多肽的此類有機(jī)小分子可以使用眾所周知的技術(shù)鑒別，無需過度實驗。就這一點來說，應(yīng)注意，用于篩選能夠結(jié)合至所關(guān)注多肽的分子的有機(jī)小分子文庫的技術(shù)是本領(lǐng)域中眾所周知的(參見例如，pct公布號wo00/00823和wo00/39585)。結(jié)合有機(jī)小分子可以是例如醛、酮、肟、腙、縮氨基脲、卡巴肼、伯胺、仲胺、叔胺、n-取代的肼、酰肼、醇、醚、硫醇、硫醚、二硫化物、羧酸、酯、酰胺、脲、氨基甲酸酯、碳酸酯、縮酮、硫代縮酮、縮醛、硫代縮醛、芳基鹵化物、芳基磺酸酯、烷基鹵化物、烷基磺酸酯、芳香族化合物、雜環(huán)化合物、苯胺、烯烴、炔烴、二醇、氨基醇、噁唑烷、噁唑啉、噻唑烷、噻唑啉、烯胺、磺酰胺、環(huán)氧化物、氮丙啶、異氰酸酯、磺酰氯、重氮化合物、酰氯等。

e.拮抗劑多聚核苷酸

本文還提供了用于本文所描述的方法中的多聚核苷酸拮抗劑。該多聚核苷酸可以是反義核酸和/或核糖酶。所述反義核酸包含與所關(guān)注基因，如fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)、fgf(例如fgf1-23)、mek1、mek2、mek1/2、pik3和/或b-raf基因的rna轉(zhuǎn)錄物的至少一部分互補(bǔ)的序列。不過，不需要但優(yōu)選絕對互補(bǔ)性。

本文提到的“與rna的至少一部分互補(bǔ)的”序列意指具有足夠互補(bǔ)性以致能夠與該rna雜交形成穩(wěn)定雙鏈體的序列；在雙鏈反義核酸的情況下，因此可以測試雙鏈體dna的單一鏈，或可以分析三鏈體的形成。雜交能力將取決于互補(bǔ)程度及反義核酸的長度。一般來說，雜交核酸越大，則其可能含有的與rna的堿基錯配越多，并且仍形成穩(wěn)定雙鏈體(或視情況，三鏈體)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用測定雜交復(fù)合物的熔點的標(biāo)準(zhǔn)程序來確定錯配的耐受程度。

與信使的5′端，例如5′不翻譯序列直至并且包括aug起始密碼子互補(bǔ)的多聚核苷酸應(yīng)當(dāng)在抑制翻譯方面最有效。然而，已經(jīng)顯示與mrna的3′不翻譯序列互補(bǔ)的序列也可有效抑制mrna的翻譯。大體上參見wagner，r.，1994，nature372：333-335。因此，與基因的5′-或3′-非翻譯、非編碼區(qū)互補(bǔ)的寡聚核苷酸可以用于反義方法中以抑制內(nèi)源mrna的翻譯。與mrna的5′不翻譯區(qū)互補(bǔ)的多聚核苷酸應(yīng)包括aug起始密碼子互補(bǔ)序列。與mrna編碼區(qū)互補(bǔ)的反義多聚核苷酸是不太有效的翻譯抑制劑，但可以根據(jù)本發(fā)明使用。無論是否設(shè)計成與mrna的5′、3′-或編碼區(qū)雜交，反義核酸都應(yīng)當(dāng)至少六個核苷酸長度，并且優(yōu)選是長度為6至約50個核苷酸的寡聚核苷酸。在特定方面，該寡聚核苷酸是至少10個核苷酸、至少17個核苷酸、至少25個核苷酸或至少50個核苷酸。

f.抗體和結(jié)合多肽變體

在某些實施方案中，涵蓋本文提供的抗體和/或結(jié)合多肽的氨基酸序列變體。舉例來說，可能希望改善抗體和/或結(jié)合多肽的結(jié)合親和力和/或其它生物特性。抗體和/或結(jié)合多肽的氨基酸序列變體可以通過將適當(dāng)修飾引入編碼該抗體和/或結(jié)合多肽的核苷酸序列中或通過肽合成進(jìn)行制備。這些修飾包括例如在抗體和/或結(jié)合多肽的氨基酸序列內(nèi)進(jìn)行殘基的缺失和/或插入和/或取代?？梢赃M(jìn)行缺失、插入及取代的任何組合以獲得最終構(gòu)建體，只要最終構(gòu)建體具有所希望的特征，例如抗原結(jié)合。

在某些實施方案中，提供具有一個或多個氨基酸取代的抗體變體和/或結(jié)合多肽變體。用于進(jìn)行取代誘變的所關(guān)注位點包括hvr和fr。保守取代顯示于表1中的標(biāo)題“優(yōu)選的取代”之下。更多顯著改變提供于表1中“示例性取代”的標(biāo)題下，并且如以下參照氨基酸側(cè)鏈類別進(jìn)一步描述。可以將氨基酸取代引入所關(guān)注抗體和/或結(jié)合多肽中并且篩選具有所希望活性，例如保留/改善的抗原結(jié)合、降低的免疫原性或改善的adcc或cdc的產(chǎn)物。

表1

氨基酸可以根據(jù)常見側(cè)鏈特性進(jìn)行分組：

(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；

(2)中性親水性：cys、ser、thr、asn、gln；

(3)酸性：asp、glu；

(4)堿性：his、lys、arg；

(5)影響鏈取向的殘基：gly、pro；

(6)芳香族：trp、tyr、phe。

非保守性取代將需要將這些類別之一的成員換成另一類別。

g.抗體和結(jié)合多肽衍生物

在某些實施方案中，本文提供的抗體和/或結(jié)合多肽可以進(jìn)一步修飾成含有本領(lǐng)域中已知并且易于獲得的其它非蛋白質(zhì)部分。適于使抗體和/或結(jié)合多肽衍生化的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性實例包括但不限于，聚乙二醇(peg)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1，3-二氧戊環(huán)、聚-1，3，6-三噁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或無規(guī)共聚物)及葡聚糖或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛因其于水中的穩(wěn)定性而可能在制造時具有優(yōu)勢。聚合物可以具有任何分子量，并且可以是分支或未分支的。附接至抗體和/或結(jié)合多肽的聚合物的數(shù)目可能變化，并且如果附接一種以上聚合物，則其可以是相同或不同分子。一般來說，用于衍生化的聚合物的數(shù)目和/或類型可以基于以下考慮來確定：包括但不限于，待改善抗體和/或結(jié)合多肽的特殊特性或功能，抗體衍生物和/或結(jié)合多肽衍生物是否將在指定條件下用于療法等。

在另一實施方案中，提供了抗體和/或結(jié)合多肽與可以通過曝露于輻射進(jìn)行選擇性加熱的非蛋白部分的偶聯(lián)物。在一個實施方案中，該非蛋白質(zhì)部分是碳納米管(kam等人，proc.natl.acad.sci.usa102：11600-11605(2005))。此輻射可以具有任何波長，并且包括但不限于，不損傷普通細(xì)胞但能將非蛋白質(zhì)部分加熱至殺死在抗體和/或結(jié)合多肽-非蛋白質(zhì)部分附近的細(xì)胞的溫度的波長。

iv.篩選和/或鑒別具有所希望的功能的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑的方法

以上描述了用于本文所描述的方法中的所關(guān)注多肽，如fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)、fgf(例如fgf1-23)、mek1、mek2、mek1/2、pik3和/或b-raf的其它拮抗劑，包括抗體、結(jié)合多肽和/或小分子。其它拮抗劑，如本文提供的抗體、結(jié)合多肽和/或結(jié)合小分子的可以通過本領(lǐng)域中已知的各種分析針對其物理/化學(xué)特性和/或生物活性進(jìn)行鑒別、篩選或表征。

在某些實施方案中，包括含fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)多肽的原子座標(biāo)的記憶的計算機(jī)系統(tǒng)可用作合理鑒別作為fgfr信號傳導(dǎo)配體結(jié)合位點的化合物的模型。此類化合物可以例如從頭設(shè)計，或通過修飾已知化合物進(jìn)行設(shè)計。在其它情況下，可以通過測試已知化合物以確定該化合物是否與fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)的分子模型“對接”來鑒別結(jié)合化合物。此類對接方法是本領(lǐng)域中大體上眾所周知的。

fgfr信號傳導(dǎo)晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)可以與計算機(jī)建模技術(shù)結(jié)合使用，通過分析晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)來開發(fā)各種fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)-結(jié)合化合物的結(jié)合模型。位點模型以位點表面的三維形態(tài)以及包括范德華接觸(vanderwaals)、靜電相互作用及氫鍵結(jié)機(jī)會在內(nèi)的因素進(jìn)行表征。然后，使用計算機(jī)模擬技術(shù)定位被設(shè)計成與模型位點相互作用的官能團(tuán)的相互作用位置，包括但不限于，質(zhì)子、羥基、胺基、二價陽離子、芳香族和脂肪族官能團(tuán)、酰胺基團(tuán)、醇基等。這些基團(tuán)可以被設(shè)計進(jìn)藥效團(tuán)或候選化合物中，不過候選化合物將特異性結(jié)合至該位點。因此，藥效團(tuán)設(shè)計涉及考慮在藥效團(tuán)范圍內(nèi)的候選化合物通過任一種或全部可用類型的化學(xué)相互作用，包括氫鍵結(jié)、范德華、靜電相互作用及共價相互作用與位點相互作用的能力，不過大體上說，藥效團(tuán)通過非共價機(jī)制與位點相互作用。

除使用計算機(jī)建模技術(shù)實際合成外，還可以分析藥效團(tuán)或候選化合物結(jié)合至fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)多肽的能力。只有計算機(jī)模型指示以足夠結(jié)合能(在一個實施例中，結(jié)合能對應(yīng)于與標(biāo)靶的解離常數(shù)，為約10^-2m或更窄)結(jié)合標(biāo)靶(例如fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)多肽結(jié)合位點)的候選化合物才能被合成，并使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知和/或本文描述的酶分析法測試其結(jié)合至fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)多肽及抑制fgfr信號傳導(dǎo)(如果適用)酶功能的能力。因此，計算評價步驟避免了不可能以適當(dāng)親和力結(jié)合fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)多肽的化合物的不必要的合成。

fgfr信號傳導(dǎo)藥效團(tuán)或候選化合物可以借助于一系列步驟，以計算方式評價和設(shè)計，在這些步驟中，針對與fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)多肽上個別結(jié)合標(biāo)靶位點締合的能力篩選并選擇化學(xué)實體。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用若干方法之一針對與fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)多肽，并且更確切地說，與fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)多肽上標(biāo)靶位點締合的能力篩選化學(xué)實體或片段。該方法可以通過例如基于fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)多肽坐標(biāo)，或一小組本領(lǐng)域中已知的坐標(biāo)，在計算機(jī)屏幕上目測檢查標(biāo)靶位點開始。

為了選擇誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡的拮抗劑，可以相對于參照物評估膜完整性的喪失，這一點是由例如碘丙啶(pi)、臺盼藍(lán)或7aad攝入所指示。pi攝入分析可以在無補(bǔ)體和免疫效應(yīng)細(xì)胞存在下進(jìn)行。將腫瘤細(xì)胞與單獨培養(yǎng)基或含有適當(dāng)組合療法的培養(yǎng)基一起培育。細(xì)胞培育3天時間。在每次處理之后，洗滌細(xì)胞并將其等分至帶35mm濾網(wǎng)的12×75管中(每管1ml，每個處理組3管)以去除細(xì)胞團(tuán)。然后，管中添加pi(10μg/ml)。使用流式細(xì)胞儀和cellquest軟件(bectondickinson)分析樣品。如通過pi攝入所測定，相較于單獨培養(yǎng)基和/或單藥療法誘導(dǎo)統(tǒng)計學(xué)顯著水平的細(xì)胞死亡的拮抗劑可以被選擇作為細(xì)胞死亡誘導(dǎo)性抗體、結(jié)合多肽或結(jié)合小分子。

在這些篩選和/或鑒別方法中的任一種的一些實施方案中，fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)的候選拮抗劑是抗體、結(jié)合多肽、結(jié)合小分子或多聚核苷酸。在一些實施方案中，fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)的拮抗劑是抗體。在一些實施方案中，fgfr(例如fgfr1、fgfr2、fgfr3和/或fgfr4)和/或fgf(例如fgf1-23)的拮抗劑是小分子。

v.藥物配制物

如本文所述的mek拮抗劑和/或fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑、pik3拮抗劑和/或b-raf拮抗劑的藥物配制物是通過將具有所希望純度的此類抗體與一種或多種可選的藥學(xué)上可接受的載劑(remington′spharmaceuticalsciences第16版，osol，a.編(1980))混合來制備，這些配制物呈凍干配制物或水溶液形式。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和/或mek拮抗劑是結(jié)合小分子、抗體、結(jié)合多肽和/或多聚核苷酸。在一些實施方案中，mek拮抗劑和/或b-raf拮抗劑是結(jié)合小分子、抗體、結(jié)合多肽和/或多聚核苷酸。在一些實施方案中，mek拮抗劑和/或pik3拮抗劑是結(jié)合小分子、抗體、結(jié)合多肽和/或多聚核苷酸。藥學(xué)上可接受的載劑在所用劑量和濃度下一般對接受者無毒，并且包括但不限于：緩沖劑，如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其它有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑(如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥季銨；氯化苯甲烴銨；芐索氯銨；苯酚；丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷酯，如對羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(少于約10個殘基)多肽；蛋白質(zhì)，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、雙糖及其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，如edta；糖，如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽平衡離子，如鈉；金屬絡(luò)合物(例如zn-蛋白質(zhì)絡(luò)合物)；和/或非離子型表面活性劑，如聚乙二醇(peg)。本文中的示例性藥學(xué)上可接受的載劑包括間質(zhì)性藥物分散劑，如可溶性中性活性透明質(zhì)酸酶糖蛋白(shasegp)，例如人可溶性ph-20透明質(zhì)酸酶糖蛋白，如rhuph20(baxterinternational，inc.)。某些示例性shasegp及使用方法，包括rhuph20，描述于美國專利公布號2005/0260186和2006/0104968中。在一個方面，shasegp與一個或多個另外的葡萄糖胺聚糖酶(glycosaminoglycanase)(如硫酸軟骨素酶)組合。

示例性凍干配制物描述于美國專利號6,267,958中。水性抗體配制物包括美國專利號6,171,586和wo2006/044908中描述的那些，后一種配制物包括組氨酸-乙酸鹽緩沖液。

視所治療的特定適應(yīng)癥的需要，本文中的配制物還可以含有超過一種活性成分，優(yōu)選具有不會相互不利地影響的互補(bǔ)活性的那些。這些活性成分適合以有效實現(xiàn)預(yù)定目的的量組合存在。

可以例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合將活性成分覆埋在所制備的微囊中，例如分別覆埋在膠狀藥物遞送系統(tǒng)(例如脂質(zhì)體、白蛋白微球體、微乳液、納米粒子及納米膠囊)中或在巨乳液中的羥甲基纖維素或明膠微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊。這些技術(shù)公開于remington’spharmaceuticalsciences，第16版，osol，a.編(1980)中。

可以制備持續(xù)釋放制劑。持續(xù)釋放制劑的適合實例包括含有fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑和b-raf拮抗劑的固體疏水聚合物的半滲透性基質(zhì)，這些基質(zhì)呈成形物品，例如薄膜或微囊的形式。

將用于體內(nèi)施用的配制物一般是無菌的。可以易于例如通過無菌過濾膜過濾實現(xiàn)滅菌。

vi.制品

在本發(fā)明的另一方面，提供一種含有可用于治療、預(yù)防和/或診斷上文所描述的病癥的物質(zhì)的制品。該制品包含容器及在該容器上或與該容器相關(guān)聯(lián)的標(biāo)簽或藥品說明書。適合容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、iv溶液袋等。這些容器可以由如玻璃或塑膠等多種材料形成。該容器容納組合物自身或組合物與有效治療、預(yù)防和/或診斷病狀的另一組合物的組合，并且可以具有無菌接取口(例如，該容器可以是具有可由皮下注射針刺穿的塞子的靜脈內(nèi)溶液袋或小瓶)。該組合物中的至少一種活性劑是mek拮抗劑及選自由本文所述的fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑、b-raf拮抗劑或pik3拮抗劑組成的群組的一種或多種另外的藥劑。標(biāo)簽或藥品說明書指示該組合物用于治療所選病狀。此外，該制品可以包括(a)容納組合物的第一容器，其中該組合物包含mek拮抗劑及選自由fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑、pik3拮抗劑及b-raf拮抗劑組成的群組的一種或多種另外的藥劑；及(b)容納一種組合物的第二容器，其中該組合物包含另一細(xì)胞毒性劑或其它治療劑。該制品還可以包括(a)容納組合物的第一容器，其中該組合物包含mek拮抗劑；(b)容納一種組合物的第二容器，其中該組合物包含選自由fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑、pik3拮抗劑及b-raf拮抗劑組成的群組的一種或多種另外的藥劑；及任選地(c)包含另一細(xì)胞毒性劑或其它治療劑的第三容器。

在一些實施方案中，該制品包括容器、在該容器上的標(biāo)簽及包含在該容器中的組合物，其中該組合物包括一種或多種藥劑(例如結(jié)合至一種或多種生物標(biāo)記物的初級抗體，或針對本文所描述的一種或多種生物標(biāo)記物的探針和/或引物)，該容器上的標(biāo)簽指示該組合物可以用于評價樣品中一種或多種生物標(biāo)記物的存在，以及有關(guān)使用這些試劑評價樣品中一種或多種生物標(biāo)記物的存在的說明書。該制品可以另外包括有關(guān)制備樣品及利用這些試劑的一組說明書和材料。在一些實施方案中，該制品可以包括如初級抗體和二次抗體等試劑，其中該二次抗體與標(biāo)記，例如酶標(biāo)記偶聯(lián)。在一些實施方案中，該制品包括一個或多個針對本文所描述的一種或多種生物標(biāo)記物的探針和/或引物。

在該制品中任一種的一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑、mek拮抗劑、pik3拮抗劑和/或b-raf拮抗劑是抗體、結(jié)合多肽、結(jié)合小分子或多聚核苷酸。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑、mek拮抗劑、pik3拮抗劑和/或b-raf拮抗劑是小分子。在一些實施方案中，fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑、mek拮抗劑、pik3拮抗劑和/或b-raf拮抗劑是抗體。在一些實施方案中，該抗體是單克隆抗體。在一些實施方案中，該抗體是人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體。在一些實施方案中，該抗體是抗體片段并且該抗體片段結(jié)合fgfr信號傳導(dǎo)和/或抑制劑。

本發(fā)明該實施方案中的制品可以另外包含藥品說明書，該藥品說明書指示組合物可以用于治療特定病狀。替代地或另外，該制品可以另外包括含藥學(xué)上可接受的緩沖液，如注射用抑菌水(bwfi)、磷酸鹽緩沖生理鹽水、林格氏溶液(ringer′ssolution)及右旋糖溶液的第二(或第三)容器。其可以另外包括從商業(yè)和使用者觀點看所希望的其它物質(zhì)，包括其它緩沖劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。

該制品中的其它可選組分包括一種或多種緩沖液(例如阻斷緩沖液、洗滌緩沖液、底物緩沖液等)、其它試劑，如被酶標(biāo)記以化學(xué)方式改變的底物(例如色原體)、表位修復(fù)溶液、對照樣品(陽性和/或陰性對照)、對照載片等。

應(yīng)了解，作為fgfr信號傳導(dǎo)拮抗劑、mek拮抗劑、pik3拮抗劑和/或b-raf拮抗劑的替代或除此之外，以上制品中的任一種可以包括本文所描述的免疫偶聯(lián)物。

實施例

以下是本發(fā)明的方法和組合物的實施例。應(yīng)了解，根據(jù)以上提供的大體說明，可以實施各種其它實施方案。

實施例1

在10個her2+乳癌細(xì)胞系和10個b-raf突變型黑素瘤細(xì)胞系中研究fgf信號傳導(dǎo)和抗性(圖5)。該10個her2+乳癌細(xì)胞系中有7個被fgf2保護(hù)(圖5a)。該10個b-rafher2+乳癌細(xì)胞系中有8個被fgf2保護(hù)(圖5b)。接下來的分析確定，帶有v600e突變的50-70％的黑素瘤細(xì)胞系被fgf2保護(hù)(n＝30)。

另外，還確定fgf2使關(guān)鍵信號傳導(dǎo)路徑重新活化以促進(jìn)抗性(圖6)。這一點在細(xì)胞分析中得到顯示，其中使her2+乳癌細(xì)胞在存在或不存在拉帕替尼(2μm)情況下暴露于fgf2(50ng/ml)達(dá)10分鐘(圖6a)。類似地，進(jìn)行一項分析，其中使her2+乳癌細(xì)胞在存在或不存在拉帕替尼(2μm)情況下暴露于fgf2(50ng/ml)達(dá)24小時(圖6b)。基于這些實驗，確定fgf2刺激下游信號傳導(dǎo)的持續(xù)活化。

實施例2

另外對分泌因子介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)的動力學(xué)和反饋機(jī)制進(jìn)行研究。已經(jīng)顯示fgfr靶向有效地阻斷fgf2保護(hù)。

使三個細(xì)胞系(624mel、928mel及l(fā)oximvi)暴露于(5μm)plx4032(即，威羅非尼)達(dá)4小時，然后暴露于分泌的(50ng/ml)fgf(亞型1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、16、17、18、19、20、21及22)達(dá)10分鐘。制備免疫印跡并探測p-mek和p-erk。據(jù)測定，許多fgf活化mapk路徑，但不促進(jìn)抗性(圖7a)。另外，使624mel和982mel細(xì)胞系暴露于5μmplx4032達(dá)24小時，并且暴露于50ng/mlfgf(亞型1、2、4、6、8、9、17及18)達(dá)24小時，然后加工以得到免疫印跡。探測免疫印跡中的p-mek和p-erk。據(jù)測定，信號的壽命可能起到作用，但獲得藥物抗性涉及其它因素(圖7b)。

此外，還研究了與fgf保護(hù)的下游介體有關(guān)的反饋機(jī)制(圖8)。bt-474乳癌細(xì)胞在存在或不存在p38、pi3k、mek及fgfr中一種或多種抑制劑的情況下，用2μm拉帕替尼或2μm拉帕替尼加50ng/mlfgf2處理(圖8a)。將細(xì)胞另用2μm拉帕替尼、mek抑制劑，和/或p38、pi3k、p38和pi3k，或fgfr的小分子抑制劑預(yù)處理，然后用50ng/mlfgf2刺激10分鐘。對經(jīng)過預(yù)處理和刺激的細(xì)胞進(jìn)行加工并進(jìn)行免疫印跡，以探測p-her2、pmek、mek、p-erk、erk、p90rsk(ps380)、p90rsk、p-p38mapk(t180/y182)、p38mapk、p-akt(s473)、akt及β-肌動蛋白(圖8b)。還使用了hcc-1954和uacc-893乳癌細(xì)胞系進(jìn)行類似預(yù)處理/刺激實驗。

據(jù)測定，有效阻斷下游路徑通常不能克服fgf2保護(hù)，而且多種反饋和補(bǔ)償機(jī)制明顯可見。另外，已經(jīng)確定只有fgfr靶向有效地阻斷fgf2保護(hù)。

實施例3

對chl-1黑素瘤細(xì)胞進(jìn)行實驗以確定單一藥物和雙重藥物治療對細(xì)胞生長的影響(圖11)。將細(xì)胞用dmso(對照)、gdc-0973、gdc-0032、bgj398、gdc-0973加gdc-0032，或gdc-0973加bgj398處理。在第7、14、21、28及35天觀察細(xì)胞生長，或觀察直到細(xì)胞達(dá)到近100％匯合。結(jié)果顯示，用bgj398處理的細(xì)胞在第14天達(dá)到匯合，僅用dmso或gdc-0032處理的細(xì)胞在第7天達(dá)到匯合，而僅用gdc-0973處理的細(xì)胞在第28天達(dá)到匯合。相比之下，用gdc-0973加gdc-0032的組合處理，或gdc-0973加bgj398的組合處理的細(xì)胞直到第35天時仍未達(dá)到匯合。

因此，在chl-1黑素瘤細(xì)胞中，gdc-0973加gdc-0032的組合治療以及gdc-0973加bgj398的組合在防止/減慢細(xì)胞增殖和/或促進(jìn)細(xì)胞死亡方面比單一藥劑有效。

實施例4

對hs893.t黑素瘤細(xì)胞進(jìn)行實驗以確定單一藥物和雙重藥物治療對細(xì)胞生長的影響(圖12)。將細(xì)胞用dmso(對照)、gdc-0973、gdc-0032、bgj398、gdc-0973加gdc-0032，或gdc-0973加bgj398處理。在第7、14、21、28及35天觀察細(xì)胞生長。與實施例3中的chl-1細(xì)胞(圖11)不同，將hs893.t細(xì)胞用單一藥劑和雙重藥劑治療未達(dá)到匯合的結(jié)果。然而，用dmso或者單一藥劑治療之一處理的細(xì)胞展現(xiàn)的增殖和/或細(xì)胞死亡減少高于用gdc-0973加gdc-0032的組合治療或gdc-0973加bgj398的組合處理的細(xì)胞。

因此，在hs893.t黑素瘤細(xì)胞中，gdc-0973加gdc-0032的組合治療以及gdc-0973加bgj398的組合在防止/減慢細(xì)胞增殖和/或促進(jìn)細(xì)胞死亡方面比單一藥劑有效。

實施例5

對hs895.t正常皮膚成纖維細(xì)胞進(jìn)行實驗以確定單一藥物和雙重藥物治療對細(xì)胞生長的影響(圖13)。將細(xì)胞用dmso(對照)、gdc-0973、gdc-0032、bgj398、gdc-0973加gdc-0032，或gdc-0973加bgj398處理。在第7、14、21、28及35天觀察細(xì)胞生長成觀察直到細(xì)胞達(dá)到近100％匯合。結(jié)果顯示，用bgj398和dmso處理的細(xì)胞到第28天時達(dá)到匯合。用gdc-0973、gdc-0032、gdc-0973加gdc-0032以及gdc-0973加bgj398處理的細(xì)胞到第35天時仍未達(dá)到匯合。不過，相較于單一藥劑治療，gdc-0973/gdc-0032和gdc-0973/bgj398雙藥治療顯示明顯減少的增殖(和/或明顯增加的死亡)。

因此，在hs895.t正常皮膚成纖維細(xì)胞中，gdc-0973加gdc-0032的組合治療以及gdc-0973加bgj398的組合在防止/減慢細(xì)胞增殖和/或促進(jìn)細(xì)胞死亡方面比單一藥劑有效。

實施例6

制備對威羅非尼具有抗性的黑素瘤細(xì)胞(“skmel24vemr”)。將skmel24vemr細(xì)胞用威羅非尼(plx4032)、bgj398、gdc-0973、bgj398加gdc-0973、威羅非尼加bgj398、威羅非尼加gdc-0973，或威羅非尼、bgj398加gdc-0973處理。在所有處理情況下，威羅非尼的濃度都是5μm，，bgj398的濃度都是1μm，并且gdc-0973的濃度都是0.5μm。所有處理的暴露時間都是24小時。

接著對細(xì)胞進(jìn)行加工并且通過western印跡法探測fgfr1、pakt、pmek、perk、parp、pbad、bim及β肌動蛋白。如圖14中所示，用gdc-0973抑制skmel24vemr細(xì)胞看來使perk含量降低。此外，當(dāng)用mek和fgfr抑制劑(即，gdc-0973加bgj398的組合治療)處理細(xì)胞時，perk含量進(jìn)一步降低。

實施例7

產(chǎn)生對威羅非尼和克比替尼具有雙重抗性(即，對plx4032和gdc-0973具有抗性)的細(xì)胞系。對親本細(xì)胞系(即，g361)、威羅非尼單藥抗性細(xì)胞系(即，g361vemr)及威羅非尼加克比替尼雙藥抗性細(xì)胞系(即，g361rr)進(jìn)行細(xì)胞活力分析。在活力分析期間，將細(xì)胞用bcl-xl抑制劑(圖15a和15b)或bcl-xl/bcl-2抑制劑(圖15c和15d)處理。抑制劑篩選/活力分析的結(jié)果顯示，雙藥抗性模型對bcl-2/xl抑制劑的敏感性高于親本或威羅非尼單藥抗性細(xì)胞系。

雖然上文已出于清楚理解的目的借助于說明和實施例略為詳細(xì)地描述了本發(fā)明，但不應(yīng)將這些描述和實施例解釋為限制本發(fā)明的范圍。本文引用的所有專利和科學(xué)文獻(xiàn)的公開內(nèi)容都以引用的方式整體清楚地并入本文中。