本發(fā)明屬于藥物制劑領域，涉及復合高分子納米粒制劑，具體涉及一種裝載難溶性藥物的殼聚糖納米粒制劑及其制備方法和應用。該裝載難溶性藥物的復合殼聚糖納米粒經口服后到達體內發(fā)揮藥效，能顯著提高難溶性藥物的口服生物利用度。

背景技術：

研究顯示，藥物在吸收之前必須先溶解于胃腸道消化液中，然后才能以被動擴散或者主動轉運等吸收機制通過消化道黏膜，進入血液循環(huán)，難溶性藥物在消化液中的溶出通常為其吸收的限速階段。近10年來，本領域研究中，采用藥物高通量篩選除了大量應用于重大疾病治療的活性化合物，但篩選出的活性化合物大多分子量高、疏水性強；目前，在新開發(fā)的活性藥物中至少有40％因溶解度較低問題而不能應用于臨床；此外，其中高達70％的合成藥物也都存在溶解度低的問題。因此，提高難溶性藥物的溶解度和溶出速度常成為改善其口服給藥生物利用度的首要步驟，通過選用合適的載體和制劑技術改善難溶性藥物的理化性質，提高其與胃腸道粘膜的親和性和透過性，是促進其口服吸收的有效途徑。

Bay41-4109能同時抑制病毒DNA和核心蛋白，對病毒核心蛋白的作用是其的抗病毒機制，藥代動力學預試驗表明Bay41-4109在不同種屬動物經不同途徑給藥其吸收、分布、代謝轉化和排泄良好，口服生物利用度良好；與傳統(tǒng)的抗乙肝病毒藥物相比，Bay41-4109在抗病毒方式和機制上具有明顯的特點，有著良好的開發(fā)前景。

殼聚糖是一種天然多糖類纖維素，廣泛存在于昆蟲、甲殼類動物外殼及真菌細胞壁中，又稱可溶性甲殼素，具有無毒、生物相容性好、可降解等優(yōu)點，制備簡單、來源豐富、有較強的親水性；可被體內溶菌酶、胃蛋白酶等多種酶生物降解，降解產物無毒，且能被生物體完全吸收；而且具有抗酸，抗凝血，抗?jié)兊鹊哪芰Γ勺柚够驕p弱藥物在胃中造成的刺痛反應。

但迄今為止，尚未見裝載難溶性藥物的復合殼聚糖納米粒制劑及其制備方法 的報道。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種復合高分子納米粒制劑，用于裝載難溶性藥物的載體，以滿足解決各種難溶性藥物口服吸收的問題。具體涉及一種裝載難溶性藥物的復合殼聚糖納米粒制劑及其制備方法和應用。

本發(fā)明提供了一種裝載難溶性藥物的復合殼聚糖納米粒制劑，其包括殼聚糖、多聚磷酸鈉、增/助溶劑及冷凍干燥劑，該納米粒制劑裝載難溶性藥物；所述納米粒的粒徑為50～500nm。

本發(fā)明中，所述難溶性藥物為脂溶性而水不溶性藥物Bay41-4109。

本發(fā)明中，所述殼聚糖是一種生物可降解性高分子材料，其來源廣泛、安全、可靠，有良好的生物相容性，稱為藥物載體的首選材料，本發(fā)明選用的殼聚糖為低分子脫乙?；瘹ぞ厶牵涿撘阴６雀哂?5％，水溶性好；

本發(fā)明中，增/助溶劑選用甲醇或乙醇；

本發(fā)明中，冷凍干燥劑選用甘露醇、乳糖或甘氨酸中一種或幾種。

本發(fā)明的裝載難溶性藥物的復合殼聚糖納米粒制劑通過下述方法制備：

(1)制備殼聚糖溶液A：將低分子脫乙酰化殼聚糖粉末充分溶脹于0.1～1％的醋酸溶液，調節(jié)溶液的pH值至5，得到0.02～2％的殼聚糖溶液A；

(2)制備多聚磷酸鈉溶液B：將多聚磷酸鈉加水稀釋成1～5％的多聚磷酸鈉溶液B；

(3)制備含藥溶液C：將一定量的Bay41-4109溶于增/助溶劑中，加入至上述殼聚糖溶液A中，超聲振蕩30min后得到含藥溶液C；

(4)制備含藥納米粒溶液：持續(xù)攪拌下，按配比將B溶液逐滴加入C溶液中，控制滴速1～4ml/min，反應0.5～2h，反應結束后轉移至6～8kDa透析袋，用蒸餾水透析除去游離組分，得Bay41-4109納米粒溶液；

(5)制備納米粒凍干制劑：在上述含藥納米粒溶液中按配比加入冷凍干燥劑，冷凍干燥，制得Bay41-4109納米粒制劑。

本發(fā)明制得的復合高分子納米粒制劑，其納米粒的粒徑為50～500nm，其藥物載藥率達到10～50％。

本發(fā)明提供了一種復合殼聚糖納米粒制劑，可將難溶性藥物均勻分布在殼 聚糖納米粒中，極大地提高了親水性殼聚糖對難溶性藥物的裝載率和包封率，避免了難溶性藥物以大晶體形式存在于載體中，藥物能夠穩(wěn)定快速釋放，且釋放速率可控；作為口服難溶性藥物載體，能滿足解決各種難溶性藥物的生物利用度問題；該產品是一種口服制劑，由于良好的細胞黏附、細胞內吞及膜通透性，經口服后有良好的治療效果及較低的毒副作用。進一步可用于制備抗乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)的藥物制劑。

本發(fā)明的復合殼聚糖納米粒制劑其優(yōu)點是：

1，采用殼聚糖多聚磷酸鈉制備的納米粒作為載體，生物相容性好，黏附性好，納米粒粒徑為50～500nm，口服之后藥物易被小腸上皮細胞吸附，藥物隨殼聚糖生物降解緩慢釋放，能顯著提高療效；

2，將最終制劑制成納米粒干粉制劑，便于保存，使用時加入少量蒸餾水即可分散為混懸液，使用方便；

3，制備方法適用于BCSII水溶性差而滲透性好的藥物，沒有其他雜質和有機溶劑的殘留，工藝制備簡單可行，粒徑分布均勻，有利于工業(yè)大規(guī)模生產。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的復合納米粒制劑制備圖示。

圖2為Bay41-4109，殼聚糖及載藥復合納米粒制劑的顯微鏡照片，

其中，a：Bay41-4109的顯微鏡照片；

b：殼聚糖的顯微鏡照片；

c：載藥復合納米粒制劑的顯微鏡照片。

圖3為Bay41-4109，殼聚糖及載藥復合納米粒制劑的X射線衍射圖譜，

其中，a：Bay41-4109的X射線衍射圖譜；

b：載藥復合納米粒制劑的X射線衍射圖譜；

c：殼聚糖的X射線衍射圖譜。

圖4為載藥復合納米粒制劑的粒徑分布測定結果。

圖5為載藥復合納米粒制劑的透射電鏡照片。

圖6為Bay41-4109，殼聚糖及載藥復合納米粒制劑的紅外圖譜，

其中，a：Bay41-4109的紅外圖譜；

b：殼聚糖的紅外圖譜；

c：載藥復合納米粒制劑的紅外圖譜。

圖7為Bay41-4109，殼聚糖，載藥復合納米粒制劑及空白納米粒的差示熱掃描圖譜，

其中，a：Bay41-4109的差示熱掃描圖譜；

b：殼聚糖的差示熱掃描圖譜；

c：載藥復合納米粒制劑的差示熱掃描圖譜；

d：空白納米粒的差示熱掃描圖譜。

具體實施方式

現(xiàn)結合實施例，對本發(fā)明作詳細描述

實施例1

按圖1所示，制備載藥納米粒，具體步驟為：

1、稱取適量殼聚糖粉末，室溫下溶于一定濃度的醋酸溶液，通過磁力攪拌將殼聚糖完全溶解，最終殼聚糖的濃度為0.02～2mg/mL，用1N NaOH溶液調整殼聚糖乙酸溶液的pH值至4～8；

2、稱取適量的多聚磷酸鈉，加水稀釋至濃度為5～10mg/mL的多聚磷酸鈉溶液；

3、稱取一定量的Bay41-4109，加入已配好的殼聚糖乙酸溶液中，得到含藥的殼聚糖溶液，持續(xù)攪拌下，按不同質量比將多聚磷酸鈉溶液逐滴加入含藥的殼聚糖溶液中，控制滴速1～4ml/min，反應0.5～2h，反應結束后轉移至6～8kDa透析袋，用蒸餾水透析除去游離組分，得Bay41-4109納米粒溶液；

4、將上述含藥納米溶液中按配比加入冷凍干燥支撐劑，冷凍干燥，即得到Bay41-4109的凍干納米粒制劑。

實施例2

稱取適量殼聚糖粉末，室溫下溶于0.3％的醋酸溶液，使殼聚糖終濃度為2mg/mL，通過磁力攪拌使殼聚糖完全溶于醋酸溶液中，用1N NaOH溶液調節(jié)殼聚糖醋酸溶液的pH值為5，稱取50mg Bay41-4109將其溶于已配好的殼聚糖醋酸溶液中得到濃度為0.5mg/mL的含藥殼聚糖醋酸溶液，保持室溫磁力攪拌狀態(tài)下，將0.5mL濃度為5mg/mL的多聚磷酸鈉溶液滴加到上述含藥殼聚糖的醋酸溶液中，反應1h，通過正負離子的離子鍵合交聯(lián)成納米粒，反應結束后轉移至 6～8kDa透析袋，用蒸餾水透析除去游離組分，得Bay41-4109納米粒溶液；精密稱取2.5g甘露醇加入上述含藥納米粒溶液，充分攪拌溶解后過0.22μm微孔濾膜后冷凍干燥，即得到Bay41-4109的凍干納米粒制劑。

實施例3

將60mg Bay41-4109溶于1mL甲醇溶液，加入按實施例1制備的殼聚糖醋酸溶液中，超聲振蕩30min，保持室溫磁力攪拌狀態(tài)下，將0.5mL濃度為5mg/mL的多聚磷酸鈉溶液滴加到上述含藥殼聚糖的醋酸溶液中，反應1h，通過正負離子的離子鍵合交聯(lián)成納米粒，將所得溶液雙蒸水透析24h，過0.45μm濾膜，即得到負載Bay41-4109的殼聚糖納米粒復合物混懸液；將混懸液4℃高速離心(15000rpm)30min，收集下層沉淀，用純水洗滌3次后，冷凍干燥即得到負載Bay41-4109的殼聚糖納米粒制劑。

實施例4

稱取適量殼聚糖粉末，室溫下溶于0.2％的醋酸溶液，使殼聚糖終濃度為2mg/mL，通過磁力攪拌使殼聚糖完全溶于醋酸溶液中，用1N NaOH溶液調節(jié)殼聚糖醋酸溶液的pH值為5，稱取30mg Bay41-4109將其溶于已配好的殼聚糖醋酸溶液中得到濃度為0.3mg/mL的含藥殼聚糖醋酸溶液，保持室溫磁力攪拌狀態(tài)下，將0.5mL濃度為5mg/mL的多聚磷酸鈉溶液滴加到上述含藥殼聚糖的醋酸溶液中，反應1h，通過正負離子的離子鍵合交聯(lián)成納米粒，反應結束后轉移至6～8kDa透析袋，用蒸餾水透析除去游離組分，得Bay41-4109納米粒溶液；精密稱取1.5g乳糖加入上述含藥納米粒溶液，充分攪拌溶解后過0.22μm微孔濾膜后冷凍干燥，即得到Bay41-4109的凍干納米粒制劑。

實施例5

稱取適量殼聚糖粉末，室溫下溶于0.3％的醋酸溶液，使殼聚糖終濃度為2mg/mL，通過磁力攪拌使殼聚糖完全溶于醋酸溶液中，用1N NaOH溶液調節(jié)殼聚糖醋酸溶液的pH值為5，稱取50mg Bay41-4109將其溶于已配好的殼聚糖醋酸溶液中得到濃度為0.5mg/mL的含藥殼聚糖醋酸溶液，保持室溫磁力攪拌狀態(tài)下，將0.5mL濃度為5mg/mL的多聚磷酸鈉溶液滴加到上述含藥殼聚糖的醋酸溶液中，反應1h，通過正負離子的離子鍵合交聯(lián)成納米粒；將膠體溶液在4℃高速離心(18000rpm)30min，收集下層沉淀，用純水洗滌3次，冷凍干燥得 Bay41-4109的殼聚糖含藥納米粒制劑；

晶體形態(tài)觀察：用光學顯微鏡比較Bay41-4109，殼聚糖及載藥復合物納米粒制劑的折射光變化；圖2顯示了制得的載藥復合物納米粒的形態(tài)已由Bay41-4109與殼聚糖的晶體形態(tài)轉變?yōu)闊o定形形態(tài)，此形態(tài)變化結果由X射線衍射的結果進一步證明(如圖3所示)；

粒徑分布和平均粒徑檢測：取納米粒樣品適量，以蒸餾水稀釋后，用激光散射粒度儀測定其平均粒徑及分布，圖4顯示粒徑測定結果：所制得的載藥復合納米粒的平均粒徑為167.9nm，粒徑分布系數(shù)PdI為0.276，結果表明制得的Bay41-4109載藥納米粒粒徑分布均勻，該粒徑分布的結果由圖5所示的透射電鏡照片結果進一步驗證；

交聯(lián)鍵合及結構基團化學位移檢測：通過圖6所示紅外掃描圖譜比較Bay41-4109，殼聚糖及載藥復合納米粒的主要結構基團偏移情況，結果表明此制備過程為離子交聯(lián)鍵合，不會產生Bay41-4109的化學結構位移，離子交聯(lián)鍵合會導致載藥復合納米粒的熱焓能量差隨溫度發(fā)生變化，此結果由圖7所示的差示熱掃描結果描述。