：一種具有抗高糖損傷的王不留行黃酮苷的應用，屬于中藥應用技術領域。本發(fā)明涉及一種具有抗高糖損傷活性的王不留行黃酮苷，闡明其在醫(yī)藥，食品、化妝品方面的新用途。

背景技術：
：王不留行為石竹科植物麥藍菜Vaccariasegetalis(Neck.)Garcke的干燥成熟種子。王不留行中主要含有三萜皂苷、黃酮苷、環(huán)肽、類脂和脂肪酸、單糖等成分[1、李帆，梁敬鈺.王不留行的研究進展[J].海峽藥學，2007，19(3)：1-5]，王不留行黃酮苷為淡黃色顆粒狀結晶，易溶于甲醇、甲醇-水、乙醇、乙醇-水、正丁醇等，難溶于氯仿、乙酸乙酯，石油醚等。據(jù)報道，王不留行黃酮苷在常溫下存在旋轉異構現(xiàn)象，當溫度升高時該現(xiàn)象減弱甚至消失[2、孟賀，陳玉平等.王不留行中王不留行黃酮苷的分離與鑒定[J].中草藥，2011，42(5)：874-876]。實驗發(fā)現(xiàn)王不留行黃酮苷具有抗高糖損傷的作用，其結果為下圖所示：血管內皮細胞(VascularEndothelialCell)具有多種生理功能，參與機體的凝血、免疫、物質轉運和生物活性物質釋放等生活活動。研究表明[3、ReinhartK，BayerO，BrunkhorstF，etal.Markersofendothelialdamageinorgandysfunctionandsepsis[J].CritCareMed，2002，30(5)：302.]，內皮細胞的損傷及功能紊亂與多種疾病的發(fā)生密切相關，包括高血壓、冠心病、糖尿病、慢性腎功能衰竭等。引起內皮細胞損傷是一個復雜的病理過程，參與的因素很多，如糖尿病、高血脂和高血壓等多種疾病，氧化應激反應等等。近年研究表明，多種中藥對血管內皮細胞有保護作用，如中藥可降低血管內皮細胞脂質過氧化，抗氧化損傷，可調節(jié)血管內皮細胞活性物質釋放，可抑制內皮細胞凋亡，提高內皮細胞的存活率，促進內皮細胞的生長。(1)中藥降低血管內皮細胞脂質過氧化、抗氧化損傷：丹參酮IIA能抑制由過氧化氫損傷引起的人臍靜脈血管內皮細胞(CRL-1730)減少[4、王維蓉，林蓉，彭寧，等.丹參酮IIA對過氧化氫損傷人血管內皮細胞的保護作用[J].中藥材，2006，29(1)：49-51]，抑制損傷的CRL-1730釋放LDH和MDA，保護血管內皮細胞。復方丹參注射液共培養(yǎng)能提高過氧化氫氧化損傷的血管內皮細胞的存活率，降低細胞培養(yǎng)上清液中MDA的含量，通過抗脂質過氧化作用保護血管內皮細胞[5、任香善，宋京郁，林貞花，等.復方丹參注射液對氧化損傷血管內皮細胞的保護作用[J].延邊大學醫(yī)學院學報，2006，29(1)：30-34]。川芎嗪共培養(yǎng)可抑制由低氧缺糖引起的血管內皮細胞(EVC-340)釋放LDH增多、MDA生成增多和膜流動性增強，可提高一氧化氮(NO)的水平。羥乙基葛根素對過氧化氫損傷的牛腦微血管內皮細胞(BCMEC)的壞死和凋亡有保護作用，其作用機制與其提高過氧化氫損傷的BCMEC存活率、降低LDH的釋放量、抗氧化作用有關[6、GUANGHM，ZHANGXM，LIYQ，etal.Protectiveeffectsofhydroxyethylpuerarinonculturedbovinecerebralmicrovaseularendothelialcellsdamagedbyhydrogenperoxide[J].ActaPharmSin，2005，40(3)：220-224.]。(2)中藥調節(jié)血管內皮細胞活性物質的釋放：一些中藥的單體、有效成分及其復方制劑通過增強細胞培養(yǎng)液中的一氧化氮和一氧化氮合酶(NOs)的活性，抑制ET含量的增多，提高PGI的合成，抑制炎癥因子白細胞介素(IL)等物質的分泌等作用來對抗病理條件下舒/縮血管活性物質的比例失衡，發(fā)揮保護血管內皮細胞的作用。(3)中藥抑制內皮細胞凋亡，提高血管內皮細胞的存活率，促進內皮細胞的生長：部分中藥可通過抑制內皮細胞的凋亡，提高血管內皮細胞的存活率，促進血管內皮細胞生長因子(VEGF)的分泌等作用來發(fā)揮其保護血管內皮細胞的作用。經(jīng)過調研，未見我國學者對王不留行黃酮苷具有保護內皮免受氧化應激損傷作用的相關文獻報道(自CNKI、維普中國期刊網(wǎng))，因此王不留行黃酮苷在抗高糖損傷的藥理、藥效等研究領域尚處于空白階段。本研究發(fā)現(xiàn)王不留行黃酮苷具有保護內皮細胞抗高糖損傷的作用，為保護內皮細胞的相關疾病提供新的治療方法與應用。

技術實現(xiàn)要素：
：發(fā)現(xiàn)所述王不留行黃酮苷對內皮細胞抗氧化應激有保護作用：建立過氧化氫氧化模型，給藥后發(fā)現(xiàn)，王不留行黃酮苷的高劑量組(13.76μmol/L)對H2O2誘導的細胞活力有明顯改善。因此，所述王不留行黃酮苷可以用于防止和/或治療動脈粥樣硬化、白內障、老年黃斑變性等由于內源性或外源性活性氧類的侵襲而誘發(fā)的一系列疾病。發(fā)現(xiàn)所述王不留行黃酮苷對內皮細胞抗高糖有保護作用：建立高糖損傷模型，給藥后發(fā)現(xiàn)王不留行黃酮苷的高劑量組(13.76μmol/L)對高糖誘導的細胞活力有明顯改善。因此，所述王不留行黃酮苷是用于防止和/或治療糖尿病及其它由高糖損傷引起的相關疾病。具體實施方式：實施例1：王不留行黃酮苷對H2O2誘導EA·hy926細胞損傷的改善選擇對數(shù)生長期的細胞，胰酶消化制成細胞懸液，調整細胞濃度，按每孔8000個細胞接種于96孔板，每孔接種160μL，每組設4個復孔，24h后隨機分組：正常組和模型組加入20μL無血清培養(yǎng)基，3個給藥組分別加入相應濃度等體積王不留行黃酮苷的藥液，使藥物終濃度分別為13.76、6.88、3.44μmol/L，于37℃孵育預保護12h后，模型組和王不留行黃酮苷組每孔加入20μLH2O2，其終濃度為1000μmol/L，正常對照組加入20μL無血清培養(yǎng)基，于37℃孵育2h后，SRB法檢測細胞活力。見表1：表1王不留行黃酮苷對H2O2損傷的細胞活力的影響與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與正常組比較，過氧化氫模型損傷組細胞活力顯著下降；而與模型組比較，王不留行黃酮苷的高劑量組(13.76μmol/L)對H2O2誘導的細胞活力有明顯改善。接著，選擇對數(shù)生長期的細胞，胰酶消化制成細胞懸液，調整細胞濃度，按每孔4×104個接種于24孔板，每孔接種800μL，每組設3個復孔，24h后隨機分組：正常組和模型組加入100μL無血清培養(yǎng)基，三個給藥組分別加入相應濃度等體積王不留行黃酮苷藥液，使藥物終濃度分別為13.76、6.88、3.44μmol/L，于37℃孵育預保護12h后，除正常組加入100μL無血清培養(yǎng)基外，模型組和王不留行黃酮苷組每孔加入100μLH2O2，其終濃度為1000μmol/L，正常對照組加入100μL無血清培養(yǎng)基，于37℃孵育2h后，按說明書要求取細胞上清液測定LDH和MDA的釋放量；裂解細胞，BCA法測定蛋白含量，測定胞內SOD活力。根據(jù)公式計算得到各組細胞的生化指標，見表2：表2王不留行黃酮苷對H2O2誘導的細胞損傷氧化指標的影響與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與正常組比較，模型組LDH和MDA水平顯著升高，SOD活性顯著下降；而與模型組比較，王不留行黃酮苷中、高劑量組LDH釋放量顯著下降；而在MDA水平上，王不留行黃酮苷給藥組均能使之顯著降低；SOD活性中，和王不留行黃酮苷高劑量組均能使之顯著升高，表明王不留行黃酮苷在細胞氧化指標上具有保護細胞抗氧化損傷的作用。實施例2：王不留行黃酮苷對高糖誘導EA·hy926細胞損傷的改善選擇對數(shù)生長期的細胞，胰酶消化制成細胞懸液，調整細胞濃度，按每孔8000個細胞接種于96孔板，每孔接種160μL，24h后隨機分組：正常組和模型組加入20μL無血清培養(yǎng)基，3個給藥組分別加入相應濃度等體積王不留行黃酮苷的藥液，使藥物終濃度分別為13.76、6.88、3.44μmol/L，于37℃孵育預保護12h后，模型組和王不留行黃酮苷組每孔加入20μL葡萄糖(終濃度180mmol/L)，正常對照組加入20μL無血清培養(yǎng)基，每組設4個復孔，37℃孵育24h后，SRB法檢測細胞活力。見表3：表3王不留行黃酮苷對高糖損傷的細胞活力的影響與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與正常組比較，高糖模型損傷組細胞活力顯著下降；而與模型組比較，王不留行黃酮苷的高劑量組(13.76μmol/L)對高糖誘導的細胞活力有明顯改善。接著，選擇對數(shù)生長期的細胞，胰酶消化制成細胞懸液，調整細胞濃度，按每孔為8×104個接種于24孔板，每孔接800μL，每組設3個復孔，24h后，隨機分6組：正常組和模型組加入20μL無血清培養(yǎng)基，陽性對照組加入終濃度為100μmol/L的維生素C溶液(溶于無血清培養(yǎng)基中)，3個給藥組分別加入相應濃度等體積王不留行黃酮苷的藥液，使藥物終濃度分別為13.76、6.88、3.44μmol/L，于37℃孵育預保護12h后，模型組、維生素C組和王不留行黃酮苷組每孔加入20μL葡萄糖(終濃度180mmol/L)，正常對照組加入20μL無血清培養(yǎng)基，于37℃孵育24h后，按說明書要求，取細胞上清液測定LDH和MDA的釋放量，裂解細胞，BCA法測定蛋白含量，測定胞內SOD活力。根據(jù)公式計算得到各組細胞的生化指標，見表4：表4王不留行黃酮苷對高糖誘導的細胞損傷氧化指標的影響與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與正常組比較，模型組LDH和MDA水平顯著升高，SOD活性顯著下降；而與模型組比較，王不留行黃酮苷高劑量組LDH和MDA水平顯著降低，SOD活性顯著升高；同時，王不留行黃酮苷中、低劑量組也可顯著降低細胞的MDA水平。表明王不留行黃酮苷在細胞氧化指標上具有保護細胞抗高糖損傷的作用。本發(fā)明是結合最佳實施例進行描述的，然而在閱讀了本發(fā)明的上述內容后，本領域技術人員能領會在公開的實施例中作許多改變也可獲得相同或類似的結果，而不超出本發(fā)明的構思、精神和范圍。更具體地說，顯然有些化學和生理性的相關試劑可替代本文所公開的試劑而得到相同或類似的結果。所有類似的取代和修飾對本領域技術人員來說，顯然都認為是本發(fā)明的精神、范圍和構思及權利要求范圍內的，即所有上述這些等價形式和所有對工藝參數(shù)的改進和變動都同樣屬于本發(fā)明的權利要求書所限定的范圍。