綴合試劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種通式化合物，其中每個X獨立地代表聚合物鏈；p代表1-6的整數(shù)；Y代表酰胺基；且Z代表-CH.(CH2L)2或-C(CH2L)(＝CH2)，其中每個L獨立地代表離去基團。所述化合物是可用于將聚合物綴合至蛋白質(zhì)上的試劑，所得綴合物是新的并且也構(gòu)成本發(fā)明的一部分。
【專利說明】綴合試劑
[0001] 本發(fā)明涉及用于將聚合物綴合到蛋白質(zhì)和肽的新型綴合試劑，還涉及生產(chǎn)新型綴 合物的新方法。
[0002] 許多治療活性分子，例如蛋白質(zhì)，不具有在臨床醫(yī)學(xué)用途中達(dá)到效果所需要的性 質(zhì)。例如，許多天然蛋白質(zhì)不能作為良好的藥物，因為在將其給予患者時有幾個固有缺點， 包括：（1)蛋白質(zhì)被多種存在于血液或組織中的肽鏈內(nèi)切酶和肽鏈端解酶消化；（2)在一定 程度上，幾乎所有的蛋白質(zhì)都是免疫原性的；和（3)蛋白質(zhì)能被腎臟超濾作用和細(xì)胞內(nèi)吞 作用快速地排泄。一些被發(fā)現(xiàn)可在醫(yī)學(xué)上作為活性治療劑的分子具有全身毒性或缺乏最佳 生物利用度和藥物動力學(xué)。如果蛋白質(zhì)很快地從血液循環(huán)清除，則它們通常不得不被頻繁 地給予患者。頻繁的給藥進一步提高毒性風(fēng)險，尤其是免疫學(xué)衍生的毒性。通常很難達(dá)到 治療有效劑量，因此效力受損。因此，快速清除既是效力問題也是安全性問題。
[0003] 水溶性合成聚合物，特別是聚亞烷基二醇，被廣泛用于綴合治療活性分子如蛋白 質(zhì)。通過延長循環(huán)時間和降低清除率，這些治療綴合物已顯示可有利地改變藥物動力學(xué)，降 低全身毒性，并且在一些情況下，顯示出提高的臨床效力。將聚乙二醇PEG共價綴合到蛋白 質(zhì)的方法通常稱為"PEG化"。
[0004] 對于使效力最優(yōu)化和確保劑量之間的一致性非常重要的是，對于每個分子，綴合 到每個蛋白質(zhì)的綴合聚合物分子的數(shù)量是相同的，并且各聚合物分子特異性地共價綴合到 每個蛋白質(zhì)分子的相同的氨基酸殘基上。在沿著蛋白質(zhì)分子的位點上非特異性綴合會導(dǎo)致 綴合產(chǎn)物分布，且通常未綴合的蛋白質(zhì)形成難以純化且純化成本高的復(fù)雜混合物。
[0005] WO 2005/007197公開了一系列新型綴合試劑，所述綴合試劑可用于與蛋白質(zhì)的親 核基團反應(yīng)從而產(chǎn)生蛋白質(zhì)-聚合物綴合物。這些試劑發(fā)現(xiàn)特別有用，因為其能夠與來自 蛋白質(zhì)中的二硫鍵的兩個硫原子綴合從而形成硫醚綴合物，并且也能用于綴合其它親核試 齊[J，例如與兩個組氨酸殘基，例如在與蛋白質(zhì)連接的聚組氨酸標(biāo)簽中的兩個組氨酸殘基綴 合，如WO 2009/047500中記載的。
[0006] 對于一些用途，需要將兩個聚合物鏈綴合到蛋白質(zhì)上，因為含有給定分子量的單 鏈的綴合物的空間性質(zhì)可明顯不同于含例如各具有一半分子量的兩條鏈的綴合物的性質(zhì)。 可用于這種綴合作用的試劑是已知的。因此，例如，US 5, 932, 462 (Harris)公開了能將兩條 PEG鏈綴合到蛋白質(zhì)的試劑。Cong et al，Bioconjugate Chemistry 23(2012)，ρρ· 248-263 也公開了能將兩條PEG鏈綴合到蛋白質(zhì)的試劑，具體地，如第249頁圖1的試劑3所示的 PEG-雙砜試劑。在Cong的試劑中，兩個PEG鏈連接到作為苯基基團上的不同位置，所述苯 基基團為該試劑與蛋白質(zhì)反應(yīng)官能團之間的連接基團。Cong的試劑能夠?qū)蓚€PEG鏈綴合 至IJ，例如，來自蛋白質(zhì)中的二硫鍵的兩個硫原子，或者綴合到與蛋白質(zhì)連接的聚組氨酸標(biāo)簽 中存在的兩個組氨酸殘基，其與Harris的試劑相比提供了改良的綴合作用。
[0007] 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)能夠?qū)蓷l聚合物鏈綴合到蛋白質(zhì)的新試劑，其顯示超越Cong已知試 劑的改良性質(zhì)。
[0008] 因此，本發(fā)明提供通式化合物：
[0009]
【權(quán)利要求】
1. 以下通式的化合物
其中每個X獨立地代表聚合物鏈；P代表1-6的整數(shù)；Y代表酰胺基；Z代表-CH. (CH2L)2或-C (CH2L) ( = CH2)，其中每個L獨立地代表離去基團。
2. 權(quán)利要求1的化合物，其中每個X獨立地代表聚（亞烷基二醇）、聚乙烯吡咯烷酮、 聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚噁唑啉、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、HPM共 聚物、聚酯、聚縮醛、聚（原酸酯）、聚碳酸酯、聚（亞氨基碳酸酯）、聚酰胺、或多糖。
3. 權(quán)利要求1的化合物，其中每個X代表聚（乙二醇）。
4. 前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中Y代表-NH-CO-。
5. 前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中p是3。
6. 前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中每個L獨立地代表-SR、-S02R、-0S02R、-N +R3、-N+HR2、-N+H2R、鹵素、或-〇0,其中R代表氫原子或烷基、芳基或烷芳基，且0代表含有至少一 個吸電子取代基的取代芳基。
7. 權(quán)利要求6的化合物，其中每個L獨立地代表苯磺?；蚣妆交酋；?br> 8. 權(quán)利要求1的化合物，其具有式：
9. 權(quán)利要求8的化合物，其中每個X獨立地代表式CH3O-(CH2CH2O) m-的聚乙二醇，其中 m是X中環(huán)氧乙燒單元的數(shù)量。
10. 以下通式的化合物
其中X、p和Y具有上述權(quán)利要求任一項中給定的含義，A代表基團CO、CHOH、CH. NH2、 CH. NHR、CH. NR2、CH. OR CH. 0? C (O) R、CH. NHC (O) R 或 CH. N(C (O) R) 2，其中每個 R 代表氫原子 或烷基、芳基或烷芳基，且每個Pr1和pr2代表獨立的蛋白質(zhì)或肽分子或Pr1和pr 2二者一起 代表在兩個獨立的點處結(jié)合的單個蛋白質(zhì)或肽。
11. 權(quán)利要求10的化合物，其具有通式：
其中X、p、Y和A具有權(quán)利要求10中給定的含義，且Pr代表在兩個不同點上結(jié)合的單 個蛋白質(zhì)或肽。
12. 權(quán)利要求11的化合物，其中Pr代表單個蛋白質(zhì)或肽，其結(jié)合至來自所述蛋白質(zhì)或 肽中的二硫鍵的兩個硫原子、或結(jié)合至與所述蛋白質(zhì)或肽連接的聚組氨酸標(biāo)簽中存在的兩 個組氨酸殘基。
13. 權(quán)利要求11或12的化合物，其中Pr代表IgG Fab片段、INF-a、IFN-P或復(fù)合 IFN。
14. 制備權(quán)利要求10-13任一項的化合物的方法，其包括將權(quán)利要求1-9任一項的化合 物與蛋白質(zhì)或肽反應(yīng)；以及任選地將所得綴合物中的酮基還原。
15. 藥物組合物，其包括權(quán)利要求1-9任一項的化合物與可藥用載體，并任選地還包括 其他活性成分。
16. 權(quán)利要求1-9任一項的化合物或權(quán)利要求15的組合物，用于治療用途。
17. 治療患者的方法，其包括向所述患者給予藥物有效量的權(quán)利要求1-9和16任一項 的化合物或權(quán)利要求15的藥物組合物。
【文檔編號】A61K47/48GK104363926SQ201380031844
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2013年6月17日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月18日
【發(fā)明者】A·戈德溫 申請人:寶力泰銳克斯有限公司