治療癌癥的抗體和方法
【專利摘要】本文描述了抗-GPR49的抗體和該抗體的應用。不同的方面涉及抗-GPR49的單克隆抗體、人源化抗體或完全的人抗體、表達該抗體的雜交瘤或其他細胞系、編碼該抗體的核酸和包含編碼該抗體的核酸的載體，以及用該抗體治療癌癥的方法。
【專利說明】治療癌癥的抗體和方法
[〇〇〇1 ] 關于序列表
[0002] 本申請與序列表一起以電子形式遞交。序列表以文件名ΒΙ0Ν0. 002W0_Sequence. txt提供，文件大小為約31kb，創(chuàng)建于2012年10月26日。電子形式序列表的信息通過引 用以其整體并入本文。
[0003] 相關申請的交叉引用
[0004] 本申請要求于2011年11月1日遞交的名稱為"治療癌癥的方法（METHODS 0F TREATING CANCER) "的美國臨時專利申請61/554, 436的優(yōu)先權，且本申請還要求于2011年 11月1日遞交的名稱為"抗-GPR49抗體（ANTI-GPR49ANTIB0DIES)"的美國臨時專利申請 61/554, 440的優(yōu)先權，它們均通過引用在此整體并入本文。 【技術領域】
[0005] 本申請總體涉及癌癥生物學領域。更具體地，實施方案涉及抗-GPR49的抗體和這 類抗體的應用。一些實施方案涉及抗-GPR49的單克隆抗體、人源化抗體或完全的人抗體， 表達這類抗體的雜交瘤或其他細胞系，編碼這類抗體的核酸和包含編碼這類抗體的核酸的 載體，以及用這類抗體治療癌癥的方法。
[0006] 發(fā)明背景
[0007] G蛋白偶聯受體49(GPR49)也稱LGR5/HG38/FEX，屬于結構上類似于糖蛋白激素受 體的包含富含亮氨酸重復單元的G蛋白偶聯受體（LGR)。LGR分為3個亞組：（1)糖蛋白激 素受體，其包括促甲狀腺激素（TSH)受體、促卵泡激素（FSH)受體和促黃體激素（LH)受體； (2)松弛素受體LGR7和LGR8 ;以及（3)GPR48、GPR49和LGR6。GPR49表達于一些組織包括 腸、骨骼肌、胎盤、腦和脊髓中。然而，關于GPR49的功能所知甚少。
[0008] 發(fā)明概述
[0009] -些實施方案涉及治療哺乳動物的癌癥的方法，包括將治療量的以Kd小于 1χ1(Γ 9Μ結合G-蛋白偶聯受體49(GPR49)多肽的單克隆抗體給予至哺乳動物，其中所述 GPR49多肽具有SEQ ID NO: 1的氨基酸序列，且所述治療量足以治療癌癥。在一個方面，所述 治療量的抗體足以減少哺乳動物的腫瘤生長。在另一個方面，所述減少的腫瘤生長測量為 減少的腫瘤體積。在又一個方面，相比對照，所述治療量的抗體足以增加哺乳動物的存活。 在另一個方面，所述抗體以K d小于1χ1(Γ12Μ結合GPR49多肽。
[〇〇1〇] 在其他方面，所述抗體為IgG類抗體、IgGl類抗體、人抗體或小鼠抗體。在另外的 方面，所述GPR49多肽由SEQ ID NO: 1的氨基酸序列組成。
[0011] 在又一方面，所述抗體為單克隆抗體 78R)5、ro6. 3、1B3. 5、14A8. 1、76C12、18G7. 1、 5B10. 1、14F7. 1、5F2. 5 或 7C3. 4。
[0012] 在不同的方面，所述抗體競爭性抑制選自71C10、86C11、66D05、76C12、78F05和 76B04的單克隆抗體，或由雜交瘤細胞產生的選自以下的單克隆抗體：單克隆抗體2B5. 5、 7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、10A9. 2、2G8. 1、6C10. 5、6G10. 3、8Η8· 1、6Β10· 2、 3Β8· 11、2F12.5、5G2. 11、1F10.5、10Ε1· 1、7C3. 4、2Η9· 2、5Β12·4、3G8. 1、5F2.5、6G10.1、 14H9. 1、12G5. 1、6E10. 1、14F7. 1、4A10. 2、3F11. 1、11F6. 1、5B10. 1、14A8. 1、8E9. 1、9C7. 1、 4F6. 2、1B8. 1、18G7. 1、12E3. 1、6H5. 1、2P69. 2、17C9. 1、2H5. 1和 10A9. 2。
[0013] 某些實施方案涉及制備特異性結合GPR49的抗體或其片段的方法，包括培養(yǎng)含有 包含編碼權利要求1所述抗體的多核苷酸序列的載體的宿主細胞；以及回收所述抗體或其 片段。 【專利附圖】

【附圖說明】
[0014] 圖1為顯示通過ELISA的抗-GPR49Fab與人GPR49-FC結合的柱狀圖。
[0015] 圖2為顯示通過FACS的抗-GPR49Fab與人GPR49-HA轉染的HEK293E細胞結合的 柱狀圖。
[0016] 圖3的圖顯示了通過FACS結合的CH0-GPR49細胞（圖3A)或親本CH0細胞（圖 3B)上3個候選Dyax Fab的EC50值。
[0017] 圖4為顯示通過幾何平均值（圖4A)或陽性細胞百分比（圖4B)測量的GPR49Fab 與SW620結腸腫瘤細胞結合的一系列柱狀圖。
[0018] 圖5A為顯示通過FACS幾何平均值測量的GPR49Fab與SW480結腸腫瘤細胞結合 的柱狀圖。
[0019] 圖5B為顯示通過FACS陽性細胞百分比測量的GPR49Fab與SW480結腸腫瘤細胞 結合的柱狀圖。
[0020] 圖5C為用于結合SW480結腸腫瘤細胞的不同濃度的76C12Fab的一組FACS直方 圖。
[0021] 圖6A為顯示通過FACS幾何平均值測量的GPR49Fab與HCT116結腸腫瘤細胞結合 的柱狀圖。
[0022] 圖6B為顯示通過FACS陽性細胞百分比測量的GPR49Fab與HCT116結腸腫瘤細胞 結合的柱狀圖。
[0023] 圖6C為用于結合HCT116結腸腫瘤細胞的不同濃度的76C12Fab的一組FACS直方 圖。
[0024] 圖7A-C為顯示通過FACs的鼠 GPR49抗體與表達CH0GPR49-Flag-His的細胞結合 的曲線圖。
[0025] 圖8A和8C為顯示通過FACs的鼠 GPR49抗體與表達CH0GPR49-Flag-His的細胞 結合的曲線圖。圖8B和8D的表格分別顯示圖8A和8C的抗體的EC50。
[0026] 圖9A、9C、9E和9G為顯示通過直接ELISA的第二代小鼠抗體與GPR49結合的曲線 圖。圖9B、9D、9F和9H的表格分別顯示圖9A、9C、9E和9G的抗體的EC50。
[0027] 圖10A為顯示來自分選的GPR49+、分選的GPR49-或未分選的結腸腫瘤細胞的腫瘤 球平均數的柱狀圖。圖10B為腫瘤球測定中GPR49+和GPR49-細胞的顯微圖像。
[0028] 圖11為顯示接種至小鼠的GPR49+MoFlo分選的結腸腫瘤細胞隨時間的腫瘤體積 (圖11A)和體重（圖11B)曲線圖。
[0029] 圖12A為顯示小鼠中GPR49抗體76C12隨時間的血清濃度曲線圖。圖12B為顯示 小鼠中每周一次給藥劑量的抗-GPR49抗體76C12隨時間的模擬血清濃度曲線圖。圖12C 為顯示單次腹腔內給藥后小鼠中抗-GPR49抗體C12IgGl的藥代動力學參數的表格。
[0030] 圖13A為顯示用IgGl對照mAb、抗-GPR49mAb76C12(C12)或伊立替康 (Irinotecan)處理的小鼠中原代結腸腫瘤體積隨時間的曲線圖。圖13B為顯示第62天的 T/C值的圖。
[0031] 圖14為顯示用IDEC152對照抗體、76C12 (ET CSC mAb)、帶化療媒介物對照的mAb 對照，或帶化療媒介物對照的ET CSC mAb處理的小鼠中腫瘤體積隨時間的一系列曲線圖。
[0032] 圖15為顯示未處理的小鼠或用伊立替康和IgGl對照、76C12(ETmAb)，或伊立替康 和76C12(ETmAb)處理的小鼠隨時間的存活百分比的Kaplan-Meier曲線。
[0033] 圖16A為顯示用IDEC152對照抗體、伊立替康和IDEC152對照抗體，或76C12 (C12) 抗體處理的小鼠中DLD-1結腸異種移植物腫瘤生長隨時間的曲線圖。
[0034] 圖16B為顯示用葡萄糖對照、伊立替康和對照IgGl，或伊立替康和76C12(ET12)抗 體處理的小鼠中DLD-1結腸異種移植物腫瘤生長隨時間的曲線圖。
[0035] 圖17為顯示具有K-Ras、PI3K、PTEN和p53突變的原代結腸癌模型中腫瘤生長抑 制的曲線圖。
[0036] 圖18為顯示腫瘤生長抑制百分比的圖表。
[0037] 圖19為顯示通過GPR49mAb+伊立替康組合處理的、具有K-Ras、PI3K、PTEN和p53 突變的CRC腫瘤的腫瘤抑制百分比的圖表。
[0038] 圖 20 為顯示具有 K-Ras、PI3K、PTEN、H-Ras、APC、TP53、FGFR2、VANGL2、STKll、JAK2 和RB1突變的原代結腸癌模型中腫瘤生長抑制的曲線圖。
[0039] 圖21A為顯示在具有K-Ras、PI3K、PTEN和p53突變的結腸癌腫瘤中抗-GPR49抗 體降低癌癥干細胞頻率的圖表。
[0040] 圖21B為顯示抗-GPR49抗體處理抑制具有K-Ras、PI3K、PTEN和p53突變的CRC 腫瘤在移植到第二受體小鼠時再形成新腫瘤的能力的圖。
[0041] 圖 22 為顯示 GPR49mAbl8G. 7. 1 處理減少來自具有 K-Ras、PI3K、PTEN、H-Ras、APC、 丁卩53、？6?1?2、￥4如1^、51'1(11、從1(2和1?1突變的0^腫瘤的癌癥干細胞數目的圖表。在用此 前已按文中所述處理的原代CRC腫瘤細胞進行的一系列再移植、有限稀釋檢測中測量CSC 頻率。
[0042] 圖23為顯示抗-GPR49抗體+伊立替康處理抑制具有K-Ras、PI3K、PTEN、H-Ras、 APC、TP53、FGFR2、VANGL2、STK11、JAK2和RB1突變的CRC腫瘤在再移植到第二受體小鼠后 生長的能力的曲線圖。
[0043] 發(fā)明詳述
[0044] 本申請的一些實施方案涉及抗-GPR49的抗體和用這類抗體治療癌癥。不同的實 施方案涉及抗-GPR49的人源化抗體或完全的人抗體、表達這類抗體的雜交瘤或其他細胞 系，編碼這類抗體的核酸和包含編碼這類抗體的核酸的載體，以及用這類抗體治療癌癥的 方法。
[0045] 抗-GPR49 抗體
[0046] 數個實施方案涉及抗-GPR49抗體。如本文所用，GPR49包括但不限于，人GPR49， 包括 NCBI 登錄號 NP_003658. 1 (SEQ ID NO: 1)所示的多肽，其由 NM_003667. 2(SEQ ID N0:2) 中的編碼性核苷酸序列或其片段所編碼。NCBI登錄號NP_003658. 1的氨基酸序列和 NM_003667. 2的核苷酸序列通過引用以其整體完整并入本文。本文涉及的GPR49片段的實 例包括GPR49胞外域、跨膜結構域或胞內域和其部分。
[0047] 如本文所用，術語"抗體"包括但不限于，合成抗體、單克隆抗體、重組產生的抗體、 胞內抗體、多特異性抗體（包括雙特異性抗體）、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、合成抗體、 單鏈Fvs(scFv)、Fab片段、F(at/ )片段、二硫鍵連接的Fvs(sdFv)(包括雙特異性sdFv)和 抗-獨特型（抗-Id)抗體，以及上述中任一個的表位結合片段。本文提供的數個實施方案 的抗體可具有單特異性、雙特異性、三特異性或具有更大的多特異性。多特異性抗體可具有 針對多肽的不同表位的特異性，或者可具有針對多肽以及異源表位，如異源多肽或固體支 撐材料的特異性。參見，例如，PCT公開W093/17715 ;W092/08802 ;W091/00360 ;W092/05793 ; Tutt，etal.，J.Immunol.l47:60-69(1991);美國專利第 4,474,893、4,714,681、 4, 925, 648、5, 573, 920、5, 601，819號；Kostelnyetal.，J. Immunol. 148:1547-1553(1992); 其各自通過引用以其整體并入本文。
[0048] 本文涉及的其他抗-GPR49抗體包括"寡克隆"抗體。如本文所用，術語"寡克隆" 抗體是指不同單克隆抗體的預定的混合物。產生寡克隆抗體的方法為本領域已知。參見， 例如，PCT公布W095/20401"實施例部分"的實施例1 ;美國專利第5, 789, 208和6, 335, 163 號；其各自通過引用以其整體并入本文。在某些實施方案中，寡克隆抗體由單個細胞中產生 的針對一個或多個表位的預定的抗體混合物組成。在其他實施方案中，寡克隆抗體包含能 夠與普通輕鏈配對的多條重鏈，以產生具有多特異性的抗體（例如，PCT公布W004/009618， 其通過引用以其整體并入本文）。當預期靶向單個目標分子（例如，GPR49)上的多個表位 時，寡克隆抗體尤其有用。本領域技術人員能夠了解或確定哪種類型的抗體或抗體混合物 適用于預期的目的和需要。具體地，數個實施方案的抗體包含免疫球蛋白分子和免疫球蛋 白分子的免疫學活性部分，即包含特異性結合GPR49抗原的抗原結合位點（例如，抗-GPR49 抗體的一個或多個互補決定區(qū)（CDR))的分子。本文還具體地涉及，數個實施方案的抗體包 含免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫學活性部分，即包含特異性結合GPR49抗原的 抗原結合位點（例如，抗-GPR49抗體的一個或多個互補決定區(qū)（CDR))的分子。
[0049] 數個實施方案涉及按照下文實施例中所述制備的抗-GPR49的人Fab，包括抗體 71C10、86C11、66D05、76C12、78F05 和 76B04,其結合人 GPR49-FC 胞外域（GPR49-RFc) (SEQ ID N0:3)。如在實施例中所述，數個實施方案涉及這些Fab的全長的人IgG。
[0050] 如在下文的實施例中所述，數個實施方案涉及針對人GPR49胞外域（GPR49-His) (SEQ ID N0:4)培育的小鼠單克隆抗體，包括抗體2B5.5、7F8.2、1B3.5、9C6.4、6H5.4、 10A6.7、10Α9·2、2G8. 1、6C10. 5、6G10. 3、8Η8·1、6Β10· 2、3Β8· 11、2F12. 5、5G2. 11、1F10. 5、 10Ε1. 1、7C3. 4、2Η9· 2、5Β12· 4、3G8. 1、5F2. 5 和 6G10. 1。
[0051] 如在下文的實施例中所述，數個實施方案涉及針對全長人GPR49培育的小鼠單 克隆抗體，包括抗體 14H9. 1、12G5. 1、6E10. 1、14F7. 1、4A10. 2、3F11. 1、11F6. 1、5Β10· 1、 14Α8. 1、8Ε9· 1、9C7. 1、4F6. 2、1Β8· 1、18G7. 1、12Ε3· 1、6Η5· 1、2Ρ69· 2、17C9. 1、2Η5· 1 和 10Α9. 2。
[0052] 數個實施方案的抗-GPR49抗體可為免疫球蛋白分子的任何類型（例如，IgG、IgE、 IgM、IgD、IgA 和 IgY)、類別（例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)或亞類。免疫球 蛋白可具有重鏈和輕鏈。一系列的IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY重鏈可與κ或λ形式 的輕鏈配對。
[0053] 數個實施方案涉及產生抗-GPR49抗體的輕鏈和/或重鏈的雜交瘤，所述抗體包 括在下文的實施例中產生和描述的、命名為2B5. 5、7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、 10A9.2、2G8. 1、6C10. 5、6G10. 3、8Η8·1、6Β10·2、3Β8· 11、2F12. 5、5G2. 11、1F10. 5、10Ε1· 1、 7C3. 4、2Η9· 2、5Β12· 4、3G8. 1、5F2. 5、6G10. 1、14Η9· 1、12G5. 1、6Ε10· 1、14F7. 1、4Α10· 2、 3F11. 1、11F6. 1、5B10. 1、14A8. 1、8E9. 1、9C7. 1、4F6. 2、1B8. 1、18G7. 1、12E3. 1、6H5. 1、 2P69. 2、17C9. 1、2H5. 1和10A9. 2的抗-GPR49抗體中任一個。在一個方面中，所述雜交瘤產 生人源化或完全的人單克隆抗體的輕鏈和/或重鏈。
[0054] -些實施方案涉及編碼抗-GPR49抗體的輕鏈或重鏈的核酸分子，所述抗體包 括在下文的實施例中產生和描述的命名為2B5. 5、7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、 10A9.2、2G8.1、6C10.5、6G10.3、8Η8· 1、6Β10· 2、3Β8· 11、2F12. 5、5G2. 11、1F10. 5、10Ε1· 1、 7C3. 4、2Η9· 2、5Β12· 4、3G8. 1、5F2. 5、6G10. 1、14Η9· 1、12G5. 1、6Ε10· 1、14F7. 1、4Α10· 2、 3F11. 1、11F6. 1、5B10. 1、14A8.1、8E9. 1、9C7. 1、4F6.2、1B8. 1、18G7. 1、12E3. 1、6H5. 1、 2P69. 2、17C9. 1、2H5. 1和10A9. 2的抗-GPR49抗體中任一個。在一個方面，核酸分子編碼人 源化或完全的人單克隆抗體的輕鏈或重鏈。
[0055] 不同的實施方案涉及包含一個或多個編碼抗-GPR49抗體的輕鏈和/或重鏈的核 酸分子的載體，所述抗體包括在下文的實施例中產生和描述的命名為2B5. 5、7F8. 2、1B3. 5、 9C6. 4、6Η5· 4、10Α6· 7、10Α9· 2、2G8. 1、6C10. 5、6G10. 3、8Η8· 1、6Β10· 2、3Β8· 11、2F12. 5、 5G2. 11、1F10. 5、10Ε1· 1、7C3. 4、2Η9· 2、5Β12· 4、3G8. 1、5F2. 5、6G10. 1、14Η9· 1、12G5. 1、 6E10. 1、14F7. 1、4Α10· 2、3F11. 1、11F6. 1、5Β10· 1、14Α8· 1、8Ε9· 1、9C7. 1、4F6. 2、1Β8· 1、 18G7. 1、12Ε3· 1、6Η5· 1、2Ρ69· 2、17C9. 1、2Η5· 1 和 10A9. 2 的抗-GPR49 抗體中任一個。
[0056] 其他實施方案涉及制備抗-GPR49抗體的方法，包括用至少一種編碼抗-GPR49 抗體的核酸分子轉染至少一個宿主細胞，在所述宿主細胞中表達所述核酸分子，并分離 所述抗體。在數個方面，該抗-GPR49抗體包括在下文的實施例中產生和描述的命名為 2Β5. 5、7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、10A9. 2、2G8. 1、6C10. 5、6G10. 3、8Η8· 1、6Β10· 2、 3Β8· 11、2F12.5、5G2. 11、1F10.5、10Ε1· 1、7C3. 4、2Η9· 2、5Β12·4、3G8. 1、5F2.5、6G10. 1、 14Η9. 1、12G5. 1、6Ε10. 1、14F7. 1、4Α10. 2、3F11. 1、11F6. 1、5Β10. 1、14Α8. 1、8Ε9. 1、9C7. 1、 4F6. 2、1Β8· 1、18G7. 1、12Ε3· 1、6Η5· 1、2Ρ69· 2、17C9. 1、2Η5· 1 和 10Α9. 2 的抗-GPR49 抗體中 任一個。
[0057] 在數個實施方案中，抗體能特異性結合GPR49和其抗原性片段，其解離常數或Kd (k 解離/k結合）小于1(Γ5Μ，或小于1(Γ6Μ，或小于1(Γ7Μ，或小于1(Γ 8Μ，或小于1(Γ9Μ，或小于l(r1QM， 或小于1(ΓηΜ，或小于1(Γ 12Μ，或小于1(Γ13Μ。
[0058] 在另一實施方案中，所述抗體能結合GPR49和/或其抗原性片段，其小于 IX lOW在其他實施方案中，所述抗體結合GPR49和其抗原性片段，其Kg小于lOW 小于δΧΚΓΥ1、小于ΙΟ、'小于δΧΙΟ?、小于ΚΓΥ1、小于δΧΚΓΥ1、小于ΙΟΛ'小 于5 X KT6s'小于l(T7s'小于5 X KTV、小于ΚΓΥ1、小于5 X ΚΓΥ1、小于ΚΓΥ1、小于 δχιοΛ-1 或小于 ?ο-1%-1。
[0059] 在另一實施方案中，所述抗體結合GPR49和/或其抗原性片段，其結合速率常 數或k#速率為至少loafs'至少5Χ1(Γ 5Μ?、至少ion'至少5Χ1(Γ6Μ?、至少 κγ7μ?、至少 5χκγ7μ?，或至少 κγ8μ?，或至少 κγ9μ?。
[0060] 另外的實施方案包括具有某些優(yōu)選的生化特征如特定的等電點（Pi)或熔解溫度 (Tm)的抗體。
[0061] 在一個實施方案中，所述高親和力抗體具有的pi范圍為5. 5-9. 5。在一個實施方 案中，數個實施方案的高親和力抗體的Tm范圍為約65°C至約120°C。
[0062] 數個實施方案的抗體還包括那些抗體，其在哺乳動物（例如，人）中具有的半衰期 (例如，血清半衰期）為：大于1天、大于2天、大于3天、大于4天、大于5天、大于6天、大于 7天、大于8天、大于9天、大于10天、大于15天、大于20天、大于25天、大于30天、大于35 天、大于40天、大于45天、大于2個月、大于3個月、大于4個月，或大于5個月。所述抗體在 哺乳動物（例如，人）中增加的半衰期導致所述抗體或抗體片段在哺乳動物中具有更高的 血清滴度，從而降低所述抗體或抗體片段的給藥頻率和/或降低所述抗體或抗體片段的給 藥濃度。具有增加的體內半衰期的抗體可通過本領域技術人員已知的技術制備。例如，可通 過修飾（例如，替換、缺失或添加）被確定為與Fc結構域和FcRn受體之間的相互作用有關 的氨基酸殘基來制備具有增加的體內半衰期的抗體（參見，例如，國際公開第W097/34631 號；第W004/029207號；美國專利第6, 737, 056號和美國專利公開第2003/0190311號，且在 下文有更詳細的討論）；其各自通過引用以其整體并入本文。
[0063] 在數個實施方案中，所述抗體可包含在它們的Fc結構域內的修飾/替換和/或新 的氨基酸，例如公開于下述文獻中的那些：Ghetie et al.，1997, Nat. Biotech. 15:637-40 ; Duncan et al, 1988, Nature332:563-564 ；Lund et al. , 1991, J. Immunol. 147:2657-2662 ; Lund et al,1992, Mol Immunol29:53-59 ；Alegre et al,1994,Transplantation57:153 7-1543 ；Hutchins et al.,1995, Proc Natl. Acad Sci USA92:11980-11984 ；Jefferis et al,1995,Immunol Lett.44:111-117；Lund et al.,1995, Faseb J9:115-119 ；Jefferis et al, 1996, Immunol Lett54:101-104 ；Lund et al, 1996, J Immunol 157:4963-4969 ；Armour et al.,1999,Eur J Immunol29:2613-2624 ；Idusogie et al,2000, J Immunol 164:4178-4184 ； Reddy et al, 2000, J Immunol164:1925-1933 ；Xu et al.,2000,Cell Tmmunol200:16-26 ； Idusogie et al,2001,J Immunol 166:2571-2575；Shields et al.,2001,J Biol Chem276:6591-6604 ；Jefferis et al,2002,Immunol Lett82:57-65 ；Presta et al· , 2002, Biochem Soc Trans30:487-490);美國專利第 5, 624, 821、5, 885, 573、5, 677, 425、 6, 165, 745、6, 277, 375、5, 869, 046、6, 121，022、5, 624, 821、5, 648, 260、6, 194, 551、 6, 737,056、6,821，505、6, 277, 375號；美國專利申請系列第10/370, 749號以及PCT公開 W094/2935、TO99/58572、TO00/42072、TO02/060919 和 TO04/029207 ;其各自通過引用以其 整體并入本文。Fc結構域的其他修飾/替換對本領域技術人員來說應為顯而易見的。
[0064] 抗體可在它們的Fc區(qū)包含修飾/替換和/或新的氨基酸殘基，這可通過本領域技 術人員熟知的眾多方法產生。非限制性實例包括，分離抗體編碼區(qū)（例如，來自雜交瘤的）， 并在所分離的抗體編碼區(qū)的Fc區(qū)內制作一個或多個所需的替換?？蛇x擇地，抗體的可變區(qū) 可被亞克隆至編碼包含一個或修飾/替換和/或新的氨基酸殘基的Fc區(qū)的載體。
[〇〇65] 數個實施方案的抗體還可被修飾以改變糖基化，再次地，以改變所述抗體的一種 或多種功能特性。
[0066] 在不同的實施方案中，抗體的糖基化可被修飾。例如，可制備無糖基化 (aglycosylated)的抗體（即，所述抗體缺乏糖基化）。糖基化可被改變，例如，以增加抗體 對目標抗原的親和力。這樣的碳水化合物修飾，例如，可通過改變抗體序列內的一個或多個 糖基化位點來實現。例如，可制作一個或多個氨基酸替換而導致消除一個或多個可變區(qū)骨 架糖基化位點，從而消除在該位點的糖基化。這樣的無糖基化可增加抗體對抗原的親和力。 這樣的方法詳細描述于美國專利第5, 714, 350號和第6, 350, 861號，其各自通過引用以其 整體并入本文。
[〇〇67] 此外或可選擇地，數個實施方案的抗體可制備為具有改變的糖基化類型，如具有 減少量的巖藻糖殘基的低巖藻糖基化的抗體或具有增加的平分型GlcNAc結構的抗體。這 類改變的糖基化方式已經證明能增加抗體的ADCC能力。這樣的碳水化合物修飾，例如，可 通過在具有改變的糖基化機制的宿主細胞中表達所述抗體來實現。具有改變的糖基化機制 的細胞在本領域已有描述，且可用作宿主細胞，能在其中表達重組抗體從而產生具有改變 的糖基化的抗體。參見例如，Shields, R. L et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740 ; Umana et al. (1999)Nat. Biotech. 17:176-1，以及歐洲專利第 EP1, 176, 195 號；PCT 公開 W003/035835、W099/54342 ;其各自通過引用以其整體并入本文。
[0068] 數個實施方案的抗體可單獨使用或與其他組合物組合使用。所述抗體可在N-或 C-末端進一步重組融合至異源多肽，或者化學綴合（包括共價或非共價綴合）至多肽或 其他組合物。例如，抗體可重組融合或綴合至在檢測分析中用作標記的分子和效應分子， 如異源多肽、藥物、放射性核素或毒素。參見，例如，PCT公開W092/08495、W091/14438、 W089/12624 ;美國專利第5, 314, 995號和EP396, 387 ;其各自通過引用以其整體并入本文。 [〇〇69] 本文提供的抗體可包含修飾的衍生物，即，通過任何類型的分子共價結合至抗體 而修飾，以便共價結合不阻止所述抗體結合至GPR49多肽或其片段和/或產生期望的應答。 例如，但不以限制的方式，所述抗體衍生物包括已經被修飾的抗體，例如，通過已知的保護/ 阻斷基、蛋白水解切割、連接至細胞配體或其他蛋白等進行糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷 酸化、酰胺化、衍生化而修飾的?？赏ㄟ^已知技術進行眾多化學修飾中的任何一種，包括但 不限于，特異性化學切割、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代謝合成等。此外，所述衍生物可含有 一個或多個非經典的氨基酸。
[0070] 在數個實施方案中，所述抗體特異性結合包含或由下述GPR49多肽組成的多肽， 其與NCBI登錄號為NP_003658. 1(SEQ ID N0:1)的人GPR49多肽或其片段具有至少60% 同一性，或至少70%同一性，或至少80%同一性、至少85%同一性、至少90%同一性、至少 95%同一性，或至少97%同一性，或至少99%同一性，或100%同一性。該片段可為，例如， SEQ ID N0:1 所示的至少約 5、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、 500、550、600、650、700、750、800、850或900個連續(xù)的或非連續(xù)的氨基酸，或者在上述任何 長度之間的任何數目的連續(xù)的或非連續(xù)的氨基酸。
[0071] 例如，通過比對用于最佳比較目的的序列（例如，可將空位引入第一序列的序列 中），可以確定兩個氨基酸序列（或兩個核酸序列）的同一性百分比。然后，比較在對應位 置的氨基酸或核苷酸，并且兩個序列之間的同一性百分比與所述序列共有的相同位置數目 呈函數關系（即，％同一性=相同位置的#/位置的總#χιοο)?？赏ㄟ^熟知的方法，例如 使用數學算法來完成兩個序列的實際比較。這種數學算法的具體的非限制性實例描述于 Karlin et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:5873-5877 (1993)，其通過引用以其整體并入 本文。該算法被整合至BLASTN和BLASTX程序（2. 2版本）中，如Schaffer et al.，Nucleic Acids Res. ,29:2994-3005(2001)中所描述，其通過引用以其整體并入本文。當使用BLAST 和6&。口6(1131^51'程序時，可使用各自程序（例如，131^511'〇的默認參數。參見111^。://\￥￥￥. ncbi.nlm.nih.gov，提供于2002年4月10日。在一個實施方案中，所查找的數據庫為非冗 余（NR)數據庫，并且用于序列比較的參數可設置為：無過濾器；預期值10 ;字段長度3 ;矩 陣為BL0SUM62 ;空位存在罰分為11，而空位延伸罰分為1。
[0072] 數個實施方案還包括以上描述的抗體的變體，所述抗體包括在下文的實施例中 產生和描述的命名為 2B5. 5、7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、10A9. 2、2G8. 1、6C10. 5、 6G10. 3、8Η8· 1、6Β10· 2、3Β8· 11、2F12. 5、5G2. 11、1F10. 5、10Ε1· 1、7C3. 4、2Η9· 2、5Β12· 4、 3G8. 1、5F2.5、6G10. 1、14Η9. 1、12G5. 1、6Ε10. 1、14F7. 1、4Α10. 2、3F11. 1、11F6. 1、5Β10. 1、 14Α8. 1、8Ε9· 1、9C7. 1、4F6. 2、1Β8· 1、18G7. 1、12Ε3· 1、6Η5· 1、2Ρ69· 2、17C9. 1、2Η5· 1 和 10Α9. 2的抗-GPR49抗體中任一個，所述變體在可變輕鏈（VJ結構域和/或可變重鏈（VH) 結構域中包含一個或多個氨基酸殘基替換。一些還包括以上描述的抗體的變體，其在一個 或多個\ 和/或一個或多個VH 中具有一個或多個另外的氨基酸殘基替換。通過將 替換引入至以上描述的抗體的VH結構域、VH OTR、'結構域和/或'⑶R中而產生的抗體， 可在體外和體內檢測例如其結合GPR49的能力（例如，通過免疫測定，包括但不限于，ELISA 和 BIAcore)。
[0073] 在其他實施方案中，抗體可具有至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5 個或至少6個以上描述的抗體的CDR，所述上述抗體包括在下文的實施例中產生和描述的 命名為 2B5. 5、7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、10A9. 2、2G8. 1、6C10. 5、6G10. 3、8Η8· 1、 6Β10. 2、3Β8· 11、2F12. 5、5G2. 11、1F10. 5、10Ε1· 1、7C3. 4、2Η9· 2、5Β12· 4、3G8. 1、5F2. 5、 6G10. 1、14Η9· 1、12G5. 1、6Ε10· 1、14F7. 1、4Α10· 2、3F11. 1、11F6. 1、5Β10· 1、14Α8·1、8Ε9·1、 9C7. 1、4F6. 2、1Β8· 1、18G7. 1、12Ε3· 1、6Η5· 1、2Ρ69· 2、17C9. 1、2Η5· 1 和 10Α9. 2 的抗-GPR49 抗體中任一個。
[0074] 不同的實施方案包括特異性結合包含抗-GPR49抗體的￥11結構域、V H OTR、'結構域 或\ CDR的衍生物的GPR49的抗體，所述抗-GPR49抗體如在下文的實施例中產生和描述的 命名為 2B5. 5、7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、10A9. 2、2G8. 1、6C10. 5、6G10. 3、8Η8· 1、 6Β10. 2、3Β8· 11、2F12. 5、5G2. 11、1F10. 5、10Ε1· 1、7C3. 4、2Η9· 2、5Β12· 4、3G8. 1、5F2. 5、 6G10. 1、14Η9. 1、12G5. 1、6Ε10. 1、14F7. 1、4Α10. 2、3F11. 1、11F6. 1、5Β10. 1、14Α8. 1、8Ε9. 1、 9C7. 1、4F6. 2、1Β8· 1、18G7. 1、12Ε3· 1、6Η5· 1、2Ρ69· 2、17C9. 1、2Η5· 1 和 10Α9. 2 的抗-GPR49 抗體中任一個，其特異性結合至GPR49?？墒褂帽绢I域技術人員已知的標準技術將突變（例 如，添加、缺失和/或替換）引入至編碼抗體的核苷酸序列，包括，例如，定點誘變和PCR-介 導的誘變均被常規(guī)用于產生氨基酸替換。在一個實施方案中，相對于原來的V H和/或' CDR，所述VH和/或' CDR衍生物包含小于25個氨基酸替換、小于20個氨基酸替換、小于 15個氨基酸替換、小于10個氨基酸替換、小于5個氨基酸替換、小于4個氨基酸替換、小于 3個氨基酸替換，或小于2個氨基酸替換。在另一實施方案中，所述V H和/或' CDR衍生物 具有在一個或多個預期的非必需氨基酸殘基（即，對于所述抗體結合GPR49不關鍵的氨基 酸殘基）處產生的保守氨基酸替換（例如，同上）?？蛇x擇地，可通過如飽和誘變將突變隨 機引入至所述V H和/或' CDR編碼序列的全部或部分，且可針對生物學活性對所得的突變 體進行篩選，以確認出保留了活性的突變體。誘變以后，可表達所編碼的抗體，并確定所述 抗體的活性。
[0075] 數個實施方案還包括特異性結合GPR49或其片段的抗體，所述抗體包含可變重鏈 和/或可變輕鏈的氨基酸序列，其與本文描述的任何抗體的可變重鏈和/或輕鏈氨基酸 序列具有至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至 少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性，所述本文描述的抗體包括在 下文的實施例中產生和描述的命名為2B5. 5、7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、10A9. 2、 2G8. 1、6C10. 5、6G10. 3、8Η8· 1、6Β10· 2、3Β8· 11、2F12. 5、5G2. 11、1F10. 5、10Ε1· 1、7C3. 4、 2H9. 2、5B12. 4、3G8. 1、5F2.5、6G10. 1、14H9.1、12G5. 1、6E10. 1、14F7. 1、4A10. 2、3F11.1、 11F6.1、5B10. 1、14A8. 1、8E9. 1、9C7. 1、4F6. 2、1B8. 1、18G7. 1、12E3. 1、6H5. 1、2P69.2、 17C9. 1、2H5. 1 和 10A9. 2 的抗-GPR49 抗體中任一個。
[0076] 不同的實施方案還包括特異性結合GPR49或其片段的抗體，所述抗體或抗體片段 包含一個或多個CDR的氨基酸序列，所述CDR與本文描述的抗體的一個或多個CDR的氨基 酸序列具有至少45 %、至少50 %、至少55 %、至少60 %、至少65 %、至少70 %、至少75 %、至 少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %或至少99 %的同一性，所述本文描述的抗體包括在 下文的實施例中產生和描述的命名為2B5. 5、7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、10A9. 2、 2G8. 1、6C10. 5、6G10. 3、8Η8· 1、6Β10· 2、3Β8· 11、2F12. 5、5G2. 11、1F10. 5、10Ε1· 1、7C3. 4、 2H9. 2、5B12. 4、3G8. 1、5F2. 5、6G10. 1、14H9. 1、12G5.1、6E10.1、14F7.1、4A10.2、3F11.1、 11F6. 1、5B10. 1、14A8. 1、8E9. 1、9C7. 1、4F6. 2、1B8. 1、18G7. 1、12E3. 1、6H5. 1、2P69.2、 17C9. 1、2H5. 1和10A9. 2的抗-GPR49抗體中任一個?？赏ㄟ^本領域技術人員已知的任何方 法，包括BLAST蛋白查找，確定兩個氨基酸序列的同一性百分比。
[0077] 另一實施方案包括將保守氨基酸替換引入至抗-GPR49抗體的任何部分，如在下 文的實施例中產生和描述的命名為2B5. 5、7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、10A9. 2、 2G8.1、6C10. 5、6G10.3、8Η8·1、6Β10·2、3Β8· 11、2F12.5、5G2. 11、1F10. 5、10Ε1·1、7C3.4、 2H9. 2、5B12. 4、3G8. 1、5F2. 5、6G10. 1、14H9. 1、12G5. 1、6E10. 1、14F7.1、4A10.2、3F11.1、 11F6. 1、5B10. 1、14A8. 1、8E9. 1、9C7. 1、4F6. 2、1B8. 1、18G7. 1、12E3. 1、6H5. 1、2P69.2、 17C9. 1、2H5. 1和10A9. 2的抗-GPR49抗體中任一個。在本領域眾所周知的是，"保守氨基 酸替換"是指替換功能上等同的氨基酸的氨基酸替換。保守氨基酸改變導致在所得的肽中 氨基酸序列的沉默變化。例如，具有類似極性的一個或多個氨基酸用作功能等同物，并導致 在肽中氨基酸序列的沉默變化。電荷中性且用更小的殘基替換殘基的替換也可認為是"保 守替換"，即使所述殘基在不同的組內（例如，用更小的異亮氨酸替換苯丙氨酸）。具有類似 側鏈的氨基酸殘基家族在本領域中已經進行了定義。保守氨基酸替換的幾個家族如表1所 /_J、1 〇
[0078] 表1保守氨基酸替換的家族
[0079]
【權利要求】
1. 治療哺乳動物的癌癥的方法，包括將治療量的以Kd小于10χ1(Γ9Μ結合G-蛋白偶聯 受體49(GPR49)多肽的單克隆抗體給予至所述哺乳動物，其中所述GPR49多肽具有SEQ ID NO: 1的氨基酸序列，且所述治療量足以治療癌癥。
2. 根據權利要求1所述的方法，其中所述抗體以Kd小于1χ1(Γ9Μ結合G-蛋白偶聯受體 49(GPR49)多肽。
3. 根據權利要求1所述的方法，其中所述治療量的抗體足以減少哺乳動物的腫瘤生 長。
4. 根據權利要求3所述的方法，其中所述減少的腫瘤生長測量為減少的腫瘤體積。
5. 根據權利要求3所述的方法，其中相比對照，所述治療量的抗體足以增加哺乳動物 的存活。
6. 根據權利要求1所述的方法，其中所述抗體為IgG類抗體。
7. 根據權利要求3所述的方法，其中所述抗體為IgGl類抗體。
8. 根據權利要求3所述的方法，其中所述抗體為人抗體。
9. 根據權利要求3所述的方法，其中所述抗體為小鼠抗體。
10. 根據權利要求1所述的方法，其中所述抗體為選自以下的單克隆抗體：78F05、 5D6. 3、1Β3· 5、14Α8· 1、76C12、18G7. 1、5Β10· 1、14F7. 1、5F2. 5、7C3.4 和 8E9.1。
11. 根據權利要求1所述的方法，其中所述抗體或其片段抑制選自71C10、86C11、 66D05、76C12、78F05和76B04的單克隆抗體，或由雜交瘤細胞產生的選自以下的單克隆 抗體：單克隆抗體 2B5. 5、7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、10A9. 2、2G8. 1、6C10. 5、 6G10. 3、8Η8· 1、6Β10· 2、3Β8· 11、2F12. 5、5G2. 11、1F10.5、10Ε1· 1、7C3. 4、2Η9·2、5Β12·4、 3G8. 1、5F2.5、6G10. 1、14Η9. 1、12G5. 1、6Ε10. 1、14F7. 1、4Α10. 2、3F11. 1、11F6. 1、5Β10. 1、 14Α8. 1、8Ε9· 1、9C7. 1、4F6. 2、1Β8· 1、18G7. 1、12Ε3· 1、6Η5· 1、2Ρ69· 2、17C9. 1、2Η5· 1 和 10Α9. 2。
12. 根據權利要求1所述的方法，其中所述單克隆抗體以Kd小于1χ1(Γ12Μ結合GPR49 多肽。
13. 根據權利要求1所述的方法，其中所述抗體為嵌合抗體。
14. 預防哺乳動物對象中接受了治療的癌癥腫瘤的再生長的方法，包括將治療量的 結合G-蛋白偶聯受體49(GPR49)多肽的單克隆抗體給予至所述哺乳動物對象，其中所述 GPR49多肽具有SEQ ID NO: 1的氨基酸序列，且所述治療量足以預防接受了治療的癌癥腫瘤 的再生長。
15. 根據權利要求14所述的方法，其中所述抗體為選自以下的單克隆抗體：78F05、 5D6.3、1Β3·5、14Α8· 1、76C12、18G7. 1、5Β10· 1、14F7. 1、5F2. 5、7C3. 4 和 8E9. 1。
16. 延遲哺乳動物對象中接受了治療的癌癥腫瘤的再生長的方法，包括將治療量的結 合G-蛋白偶聯受體49 (GPR49)多肽的單克隆抗體給予至所述哺乳動物對象，并且其中所述 GPR49多肽具有SEQ ID NO: 1的氨基酸序列，且所述治療量足以預防接受了治療的癌癥腫瘤 的再生長。
17. 根據權利要求16所述的方法，其中所述抗體為選自以下的單克隆抗體：78F05、 5D6. 3、1Β3· 5、14Α8· 1、76C12、18G7. 1、5Β10· 1、14F7. 1、5F2. 5、7C3. 4 和 8E9.1。
18. 單克隆抗體，其以Kd小于10χ1(Γ9Μ結合G-蛋白偶聯受體49(GPR49)多肽，其中所 述GPR49多肽具有SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。
19. 根據權利要求18所述的抗體，其中所述抗體為IgG類抗體。
20. 根據權利要求19所述的抗體，其中所述抗體為IgGl類抗體。
21. 根據權利要求19所述的抗體，其中所述抗體為人抗體。
22. 根據權利要求19所述的抗體，其中所述抗體為小鼠抗體。
23. 根據權利要求18所述的抗體，其中所述抗體以Kd小于5xlO_9M結合GPR49。
24. 根據權利要求18所述的抗體，其中所述抗體以Kd小于1(Γ9Μ結合GPR49。
25. 根據權利要求18所述的抗體，其中所述抗體以Kd小于10+?結合GPR49。
26. 根據權利要求18所述的抗體，其中所述抗體以Kd小于10_nM結合GPR49。
27. 根據權利要求18所述的抗體，其中所述抗體以Kd小于10_12M結合GPR49。
28. 根據權利要求18所述的抗體，其中所述Kd通過表面等離子體共振（SPR)、熒光激 活細胞分選（FACs)或酶聯免疫吸附測定（ELISA)確定。
29. 根據權利要求18所述的抗體，其中所述抗體為單克隆抗體76C12、78R)5、2B5. 5、 7F8.2、1Β3·5、9C6.4、6C10. 5、10Α9· 2、2Η9-2、6Η5· 4、6G10. 1、8Ε9· 1、11F6. 1、12G5. 1、 5B10. 1、6Η5·1、14Α8· 1、9C7. 1、4Α10· 2、14Η9· 1、14Ε3· 1、14F7. 1、4F6. 2、6Ε10· 1、2Ρ69· 2、 3F11. 1、7C3. 4、18G7. 1、1Β3· 5 或 17C9. 1。
30. 根據權利要求18所述的抗體，其中所述抗體或其片段抑制選自71C10、86C11、 66D05、76C12、78F05和76Β04的單克隆抗體，或由雜交瘤細胞產生的選自以下的單克隆 抗體：單克隆抗體 2B5. 5、7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、10A9. 2、2G8. 1、6C10. 5、 6G10.3、8Η8· 1、6Β10· 2、3Β8· 11、2F12. 5、5G2. 11、1F10.5、10Ε1·1、7C3.4、2Η9· 2、5Β12· 4、 3G8. 1、5F2. 5、6G10. 1、14Η9· 1、12G5. 1、6Ε10·1、14F7.1、4Α10·2、3F11.1、11F6.1、5Β10·1、 14Α8. 1、8Ε9· 1、9C7. 1、4F6. 2、1Β8· 1、18G7. 1、12Ε3· 1、6Η5· 1、2Ρ69· 2、17C9.1、2Η5· 1 和 10Α9. 2。
31. 單克隆抗體，其以Kd小于1χ10_9Μ結合G-蛋白偶聯受體49(GPR49)多肽用于治療 癌癥，其中所述GPR49多肽包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。
32. 根據權利要求31所述的單克隆抗體，其中所述抗體為選自以下的單克隆抗體： 78F05、5D6.3、1B3. 5、14A8. 1、76C12、18G7. 1、5B10. 1、14F7. 1、5F2. 5、7C3. 4 和 8E9. 1。
33. 根據權利要求31所述的單克隆抗體，其中所述抗體或其片段抑制選自71C10、 86C11、66D05、76C12、78F05和76B04的單克隆抗體，或由雜交瘤細胞產生的選自以下的單 克隆抗體：單克隆抗體 2B5. 5、7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、10A9. 2、2G8. 1、6C10. 5、 6G10. 3、8Η8· 1、6Β10· 2、3Β8· 11、2F12. 5、5G2. 11、1F10. 5、10Ε1· 1、7C3. 4、2Η9· 2、5Β12·4、 3G8. 1、5F2. 5、6G10. 1、14Η9· 1、12G5. 1、6Ε10· 1、14F7. 1、4Α10· 2、3F11. 1、11F6. 1、5Β10· 1、 14Α8. 1、8Ε9· 1、9C7. 1、4F6. 2、1Β8· 1、18G7. 1、12Ε3· 1、6Η5· 1、2Ρ69·2、17C9. 1、2Η5· 1 和 10Α9. 2。
34. 根據權利要求31所述的單克隆抗體，其中所述單克隆抗體以Kd小于1χ1(Γ12Μ結合 GPR49多肽。
35. 單克隆抗體，其以Kd小于1χ1(Γ9Μ結合G-蛋白偶聯受體49(GPR49)多肽用于預防 腫瘤再生長，其中所述GPR49多肽包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。
36. 根據權利要求35所述的單克隆抗體，其中所述抗體為選自以下的單克隆抗體： 78F05、5D6.3、1Β3· 5、14Α8· 1、76C12、18G7. 1、5Β10· 1、14F7. 1、5F2. 5、7C3. 4 和 8Ε9· 1。
37. 根據權利要求35所述的單克隆抗體，其中所述抗體或其片段抑制選自71C10、 86C11、66D05、76C12、78F05和76Β04的單克隆抗體，或由雜交瘤細胞產生的選自以下的單 克隆抗體：單克隆抗體 2B5. 5、7F8. 2、1B3. 5、9C6. 4、6H5. 4、10A6. 7、10A9. 2、2G8. 1、6C10. 5、 6G10. 3、8Η8· 1、6Β10· 2、3Β8· 11、2F12. 5、5G2. 11、1F10. 5、10Ε1· 1、7C3. 4、2Η9· 2、5Β12·4、 3G8. 1、5F2. 5、6G10. 1、14Η9· 1、12G5. 1、6Ε10· 1、14F7. 1、4Α10· 2、3F11. 1、11F6. 1、5Β10· 1、 14Α8. 1、8Ε9· 1、9C7. 1、4F6. 2、1Β8· 1、18G7. 1、12Ε3· 1、6Η5· 1、2Ρ69· 2、17C9. 1、2Η5· 1 和 10Α9. 2。
38. 根據權利要求35所述的單克隆抗體，其中所述單克隆抗體以Kd小于1χ1(Γ12Μ結合 GPR49多肽。
【文檔編號】A61K39/395GK104053671SQ201280062458
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2012年10月31日 優(yōu)先權日:2011年11月1日
【發(fā)明者】克里斯多佛·L·里耶斯, 彼得·朱, 譚向陽, 楊衛(wèi)星, 克莉絲蒂琳·格拉夫 申請人:生態(tài)學有限公司