專利名稱：：一種鹽酸拓?fù)涮婵蛋邢蛑|(zhì)體制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及靶向脂質(zhì)體制劑，具體涉及含有鹽酸拓?fù)涮婵档陌邢蛑|(zhì)體及其制備方法。
背景技術(shù)：
：癌癥嚴(yán)重威脅人類健康，腫瘤靶向長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體是提高化療效果、降低抗腫瘤藥物毒性的理想的藥物輸送系統(tǒng)，具有顯著的臨床意義和應(yīng)用前景。它可通過(guò)靶向配基對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性識(shí)別機(jī)制，將藥物載體導(dǎo)向腫瘤組織，使包載的抗癌藥物濃集在癌變部位，提高化療效果，降低細(xì)胞毒性藥物對(duì)正常細(xì)胞組織的傷害。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體表面的聚乙二醇能在脂質(zhì)體表面形成一層水化膜，逃避網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)脂質(zhì)體的攝取，使脂質(zhì)體在體循環(huán)中的時(shí)間延長(zhǎng)，不僅能增加靶向配體識(shí)別和結(jié)合靶細(xì)胞的機(jī)會(huì)，還可借助腫瘤的EPR(enhancedpermeabilityandretention)效應(yīng),造成腫瘤局部高藥物濃度,逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性。整合素是介導(dǎo)細(xì)胞間，細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間相互作用的透膜蛋白，在細(xì)胞激活、遷移、增殖、存活和分化過(guò)程中起著極其重要的作用。其中整合素ανβ3在內(nèi)皮細(xì)胞和成熟內(nèi)皮細(xì)胞呈低水平表達(dá)，而高表達(dá)于腫瘤新生血管和腫瘤細(xì)胞表面，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)于骨肉瘤和侵入性腫瘤如晚期腦膠質(zhì)瘤，乳腺癌、前列腺癌、惡性黑色素瘤和卵巢癌。故整合素ανβ3成為新的腫瘤治療的重要靶標(biāo)。整合素ανβ3能夠和存在于細(xì)胞外基質(zhì)蛋白如纖維蛋白、纖連蛋白、層黏連蛋白的RGD(Arg-Gly-Asp，精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)序列特異性結(jié)合，在生理和病理過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。利用外源性的R⑶肽競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的整合素，可達(dá)到腫瘤的靶向治療。即RGD肽能介導(dǎo)藥物靶向表達(dá)ανβ3整合素受體的腫瘤。通過(guò)化學(xué)方法將RGD肽與脂質(zhì)體共價(jià)結(jié)合，即在脂質(zhì)體磷脂膜修飾多個(gè)RGD肽配體，形成的多價(jià)RGD結(jié)構(gòu)有利于與靶細(xì)胞結(jié)合和內(nèi)化，達(dá)到藥物主動(dòng)靶向腫瘤細(xì)胞的作用。但是，由于整合素不僅存在于腫瘤細(xì)胞中，在脾臟單核巨噬細(xì)胞也有表達(dá)，導(dǎo)致RGD肽容易被脾臟攝取，縮短體內(nèi)消除時(shí)間，環(huán)RGD肽在體內(nèi)消除半衰期僅為幾分鐘。因此，將RGD肽接枝到聚乙二醇遠(yuǎn)端的脂質(zhì)體消除速率也很快。因此，如何既使R⑶肽能發(fā)揮腫瘤靶向作用，又使聚乙二醇發(fā)揮其體內(nèi)長(zhǎng)循環(huán)作用，是制備聚乙二醇和RGD肽雙重修飾脂質(zhì)體需要解決的關(guān)鍵問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明旨在提供一種靶向長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體制劑及其制備方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，滿足臨床應(yīng)用的需要。所述的靶向脂質(zhì)體制劑，為鹽酸拓?fù)涮婵蛋邢蛑|(zhì)體制劑，由鹽酸拓?fù)涮婵岛椭|(zhì)體組成，重量比為鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體=I:5I:20;優(yōu)選為鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體=I:8I:16;所述脂質(zhì)體靶向配基、親水性聚合物聚乙二醇(PEG)、馬來(lái)酰亞胺化磷脂酰乙醇胺(MBPE)、磷脂和膽固醇各比例如下磷脂和膽固醇摩爾比為I:I10:I;磷脂和MBPE摩爾比為200:I5:I;磷脂和PEG摩爾比為100:I5:I;MBPE和靶向配基摩爾比為10II:I;優(yōu)選為磷脂和膽固醇摩爾比為I.2I5I;磷脂和MBPE摩爾比為40I10I；磷脂和PEG摩爾比為80:I8:I;MBPE和靶向配基摩爾比為8I2:I。所述親水性聚合物聚乙二醇選自二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)或巰基化聚乙二醇(聚乙二醇單甲醚2000-琥珀酰基半胱氨酸，PEG-SC)；所述的靶向配基選自含有巰基的RGD肽及其類似物，RGD肽是指含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的環(huán)肽和線性肽，如RGDwc或環(huán)RGD肽即c(RGDfc)；所述的RGD妝，可米用文獻(xiàn)[l]NefziA,FenwickJE.N-terminus4-ChloromethylThiazolePeptideasaMacrocyclizationToolintheSynthesisofCyclicPeptides!ApplicationtotheSynthesisofConformationalIyConstrainedRGD-ContainingIntegrinLigands.[2]LiuSQ,TianQ,WangL,HedrickJL,HuiJH,YangYY,EePL.InjectableBiodegradablePoly(ethyleneglycol)/RGDPeptideHybridHydrogelsforinvitroChondrogenesisofHumanMesenchymalStemCells.報(bào)導(dǎo)的方法制備；所述的環(huán)RGD妝，可以文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)[3]Haubner,R.,etal.,Radiolabeledalpha(v)beta3integrinantagonistsanewclassoftracersfortumortargeting或[4]Chen,X.,etal.Pharmacokineticsandtumorretentionof1251—labeledRGDpeptideareimprovedbyPEGylation.為基礎(chǔ)進(jìn)行制備；例如采用固相合成的方法，以2_氯三苯甲基樹(shù)脂和Fmoc保護(hù)的氨基酸(藥甲基羰基-甘氨酸，芴甲基羰基-天冬氨酸叔丁基酯，芴甲基羰基-D-苯丙氨酸，N-芴甲氧羰?；?2，2，4，6，7-五甲基二氫苯并呋喃_5_磺酰-L-精氨酸，芴甲氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸)為原料，以HBTU/HOBt/DIEA為縮合劑，先將五個(gè)Fmoc保護(hù)的氨基酸通過(guò)接肽反應(yīng)逐個(gè)接到樹(shù)脂上，再脫去樹(shù)脂得到直鏈五肽，通過(guò)DPPA/NaHC03環(huán)合，經(jīng)脫保護(hù)得到環(huán)五肽，用制備液相(RP-HPLC)分離提純。所述普通磷脂選自大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)或氫化大豆磷脂(HSPC)；所述馬來(lái)酰亞胺化磷脂酰乙醇胺的制備方法，以及有關(guān)的理化鑒別參數(shù)，在中國(guó)專利，申請(qǐng)?zhí)枮?00810205017.5中有詳細(xì)的報(bào)導(dǎo)；巰基化聚乙二醇的制備方法，以及有關(guān)的理化鑒別參數(shù)，在中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00810205019.4中有詳細(xì)的報(bào)導(dǎo)；所述二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000為德國(guó)Lipoid公司產(chǎn)品；所述的鹽酸拓?fù)涮婵蛋邢蛑|(zhì)體制劑的制備方法，包括如下步驟(I)將普通磷脂、膽固醇和馬來(lái)酰亞胺化磷脂酰乙醇胺與有機(jī)溶劑混合溶解，蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加緩沖液水化，再用洗脫劑置換外水相，收集得到含馬來(lái)酰亞胺化磷脂酰乙醇胺的空白脂質(zhì)體；所述的有機(jī)溶劑為三氯甲烷、二氯甲烷、水乙醇、乙醚或甲醇中的一種以上；所述的用于水化的緩沖液選自濃度為O.125O.250mol/L的硫酸銨溶液或pH為4.O的檸檬酸鹽緩沖液；所述的洗脫劑為緩沖液、葡萄糖溶液或氯化鈉溶液，所述緩沖液選自磷酸緩沖液如pH7.4的PBS、HEPES緩沖液、檸檬酸緩沖液或Tris緩沖液；氯化鈉溶液如生理鹽水；(2)再將上述空白脂質(zhì)體與鹽酸拓?fù)涮婵捣勰┗蚱淙芤夯旌稀?0°C60°C孵育5minlh，與靶向配基溶液混合、20°C50°C孵育IOminlh，與二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000或巰基化聚乙二醇溶液混合、20°C50°C孵育IOminlh，即得聚乙二醇和靶向配基修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體；所述的鹽酸拓?fù)涮婵等芤簽辂}酸拓?fù)涮婵邓芤?、鹽酸拓?fù)涮婵稻彌_液或鹽酸拓?fù)涮婵德然c溶液，濃度為2mg/ml15mg/ml；靶向配基溶液為靶向配基水溶液、靶向配基緩沖液或靶向配基氯化鈉溶液，濃度為O.lmg/ml3mg/ml；所述緩沖液選自磷酸緩沖液如pH7.4的PBS、HEPES緩沖液、檸檬酸緩沖液或Tris緩沖液；氯化鈉溶液如生理鹽水；發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)，利用功能性磷脂馬來(lái)酰亞胺化磷脂酰乙醇胺(MBPE)將靶向配基環(huán)R⑶肽與巰基化PEG共價(jià)結(jié)合在脂質(zhì)體膜表面，構(gòu)建靶向長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，具有腫瘤細(xì)胞靶向性以及體內(nèi)長(zhǎng)循環(huán)作用。這種組裝方式與文獻(xiàn)常用的在脂質(zhì)體膜表面PEG遠(yuǎn)端連接配體的方式相比，能夠發(fā)揮PEG的長(zhǎng)循環(huán)作用，并且更為簡(jiǎn)單易行，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。且該法為后接枝PEG法，還可解決普通方法制備時(shí)脂質(zhì)體膜內(nèi)PEG鏈段占位效應(yīng)使載藥量降低的問(wèn)題，即有望提高載藥量。為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它們僅用來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。具體實(shí)施例方式實(shí)施例I稱取氫化大豆卵磷脂HSPC40mg(50μmol)、膽固醇9.7mg(25μmol)和馬來(lái)酰亞胺化磷脂酰乙醇胺(MBPE)2.23mg(2.5ymol)于茄形瓶中，加三氯甲烷，超聲溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加入O.200mol/L硫酸銨溶液4mL于60°C下水化lh，超聲分散，用薄膜擠出儀經(jīng)400，200，100和50nm聚碳酸酯膜各15次擠壓得到脂質(zhì)體，再以O(shè).9%NaCl溶液為洗脫劑，通過(guò)葡聚糖凝膠G-50置換外水相，得到含MBPE的空白脂質(zhì)體；將所得空白脂質(zhì)體與鹽酸拓?fù)涮婵等芤?2mg/mL)2mL混合,于65°C孵育20min,包載拓?fù)涮婵?；再與環(huán)RGD肽溶液(I.45mg/mL)ImL(即2.5μmol)混合，于37°C孵育Ih,再與DSPE-PEG2000溶液(7mg/mL)ImL(即2.5μmol)于37°C孵育Ih;將上述脂質(zhì)體用超濾管濃縮至4mL，即得PEG和RGD肽修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體。實(shí)施例2稱取大卵憐脂S10040mg(50μmol)、膽固醇19.3mg(50μmol)和MBPE2.23mg(2.5μmoI)于茄形瓶中，加2mL二氯甲烷和8mL乙醇溶解后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加O.125mol/L硫酸銨溶液4mL于60°C下水化30min，超聲分散，用薄膜擠出儀經(jīng)400，200，100和50nm聚碳酸酯膜15次擠壓，再以O(shè).9%NaCl溶液為洗脫劑，通過(guò)葡聚糖凝膠G-50置換外水相，得到含MBPE的空白脂質(zhì)體；將所得空白脂質(zhì)體與環(huán)RGD肽溶液(O.58mg/mL)O.5mL(即O.5μmol)混合，于37°C孵育lh，再與PEG-SC溶液(3.5mg/mL)ImL(即I.25μmol)于37°C孵育Ih,再與鹽酸拓?fù)涮婵等芤?2mg/mL)2mL混合后于60°C孵育20min，用超濾管濃縮至4mL，即得PEG和RGD肽修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體。實(shí)施例3稱取氫化大豆卵磷脂HSPC40mg(50μmol)、膽固醇3.9mg(10μmol)和MBPE4.45mg(5μmoI)于茄形瓶中，加8mL三氯甲烷和2mL甲醇溶解后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加0.150mol/L硫酸銨溶液4mL于60°C下水化30min，超聲分散，用薄膜擠出儀經(jīng)400，200，100和50nm聚碳酸酯膜15次擠壓，再以5%葡萄糖溶液為洗脫劑，透析置換外水相，得到含MBPE的空白脂質(zhì)體；將所得空白脂質(zhì)體與環(huán)RGD肽溶液(0.58mg/mL)0.5mL(即0.5μmol)混合，于37°C孵育lh，再與PEG-SC溶液(I.75mg/mL)ImL(即0.63μmol)于37。。孵育lh，再加入鹽酸拓?fù)涮婵捣勰?mg，而后于60°C孵育30min，用超濾管濃縮至4mL，即得PEG和RGD肽修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體。實(shí)施例4稱取DPPC32mg(40μmol)、DSPC8mg(10μmol)>膽固醇2mg(5ymol)和MBPE8.9mg(10ymol)于茄形瓶中，加三氯甲烷溶解后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加0.250mol/L硫酸銨溶液4mL于60°C下水化lh，超聲分散，用薄膜擠出儀經(jīng)400，200，100和50nm聚碳酸酯膜20次擠壓，再以0.9%NaCl溶液為洗脫劑，通過(guò)葡聚糖凝膠G-50置換外水相，得到含MBPE的空白脂質(zhì)體；將所得空白脂質(zhì)體與環(huán)RGD肽溶液(I.45mg/mL)ImL(即2.5μmol)混合，于37°C孵育lh，再與PEG-SC溶液(5.6mg/mL)ImL(即2μmol)于37°C孵育Ih,再與鹽酸拓?fù)涮婵等芤?8mg/mL)0.5mL混合后于65°C孵育30min,用超濾管濃縮至4mL,即得PEG和RGD肽修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體。實(shí)施例5稱取氫化大豆卵磷脂HSPC40mg(50μmol)、膽固醇16.Img(41μmol)和MBPEI.Img(I.2μmol)于茄形瓶中，加6ml二氯甲烷和4ml乙醚，超聲溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加入PH4.O檸檬酸緩沖溶液4mL于60°C下水化30min，超聲分散，用薄膜擠出儀經(jīng)400，200，100和50nm聚碳酸酯膜各15次擠壓得到脂質(zhì)體，再用5%葡萄糖溶液透析置換外水相，得到含MBPE的空白脂質(zhì)體；將所得空白脂質(zhì)體與鹽酸拓?fù)涮婵等芤?15mg/mL)ImL混合，于65°C孵育30min,包載拓?fù)涮婵?；再與環(huán)RGD肽溶液(0.36mg/mL)ImL(即0.63μmol)混合，于37°C孵育Ih,再與DSPE-PEG2000溶液(8.75mg/mL)2mL(即6.25μmol)于37。。孵育lh，即得PEG和RGD肽修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體。實(shí)施例6稱取蛋黃卵磷脂79mg(100ymol)、膽固醇13mg(33.3μmol)和MBPEImg(I.Iμmol)于茄形瓶中，加三氯甲烷，超聲溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加入0.200mol/L硫酸銨溶液6mL于60°C下水化lh，超聲分散，用薄膜擠出儀經(jīng)400，200，100和50nm聚碳酸酯膜各15次擠壓得到脂質(zhì)體，再以0.9%NaCl溶液為洗脫劑，通過(guò)葡聚糖凝膠G-50置換外水相，得到含MBPE的空白脂質(zhì)體；將所得空白脂質(zhì)體與鹽酸拓?fù)涮婵等芤?3mg/mL)4mL混合，于65°C孵育20min,包載拓?fù)涮婵担辉倥c環(huán)RGD肽溶液(O.Img/mL)ImL(即O.16μmol)混合，于37°C孵育lOmin，再與DSPE-PEG2000溶液(2.8mg/mL)0.5mL(即O.5μmol)于37°C孵育30min，即得。實(shí)施例7稱取蛋黃卵磷脂39mg(50ymol)、膽固醇6.5mg(16.7μmol)和MBPE4.45mg(5ymol)于茄形瓶中，加三氯甲烷，超聲溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加入O.150mol/L硫酸銨溶液4mL于60°C下水化lh，超聲分散，用薄膜擠出儀經(jīng)400，200，100和50nm聚碳酸酯膜各15次擠壓得到脂質(zhì)體，再以5%葡萄糖凝溶液透析置換外水相，得到含MBPE的空白脂質(zhì)體；將所得空白脂質(zhì)體與鹽酸拓?fù)涮婵等芤?2mg/mL)2mL混合，于60°C孵育20min，包載拓?fù)涮婵?；再與環(huán)RGD肽溶液(2.89mg/mL)ImL(即5μmol)混合，于37。。孵育lh，再與DSPE-PEG2000溶液(14mg/mL)2mL(即10μmol)于40°C孵育lh，即得。實(shí)施例8稱取大卵憐脂S10039mg(50μmol)、膽固醇4.8mg(12.5μmol)和MBPE4.45mg(5μmol)于茄形瓶中，加三氯甲烷，超聲溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加入0.125mol/L硫酸銨溶液4mL于60°C下水化lh，超聲分散，用薄膜擠出儀經(jīng)400，200，100和50nm聚碳酸酯膜各15次擠壓得到脂質(zhì)體，再以5%葡萄糖凝溶液透析置換外水相，得到含MBPE的空白脂質(zhì)體；將所得空白脂質(zhì)體與鹽酸拓?fù)涮婵等芤?2mg/mL)2mL混合，于60°C孵育IOmin;再與環(huán)RGD妝溶液(0.36mg/mL)ImL(即0.63μmol)混合，于37°C孵育30min,再與DSPE-PEG2000溶液(14mg/mL)ImL(即5μmol)于40°C孵育lh，用超濾管濃縮至4mL，即得PEG和RGD肽修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體。對(duì)比例I稱取氫化大豆磷脂HSPC44.2mg(56μmol)、膽固醇14.7mg(38μmol)、PEG化磷脂(DSPE-PEG2000)14mg(5ymol)于茄形瓶中，加8mL三氯甲烷，超聲溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加入0.200mol/L硫酸銨溶液2mL于60°C下水化30min，超聲分散，用薄膜擠出儀經(jīng)400，200,100和50nm聚碳酸酯膜各15次擠壓得到脂質(zhì)體，再以pH7.4的PBS為洗脫劑，通過(guò)葡聚糖凝膠G-50置換外水相，得到空白脂質(zhì)體；將所得空白脂質(zhì)體與鹽酸拓?fù)涮婵邓芤?4mg/mL)ImL混合，于60°C孵育lh，將上述脂質(zhì)體用超濾管濃縮至2mL，即得鹽酸拓?fù)涮婵礟EG修飾脂質(zhì)體。對(duì)比例2稱取氫化大豆磷脂HSPC44.2mg(56μmol)、膽固醇14.7mg(38μmol)于爺形瓶中，加6mL三氯甲烷，超聲溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加入0.200mol/L硫酸銨溶液2mL于60°C下水化30min，超聲分散，用薄膜擠出儀經(jīng)400，200，100和50nm聚碳酸酯膜各15次擠壓得到脂質(zhì)體，再以PH7.4的PBS為洗脫劑，通過(guò)葡聚糖凝膠G-50置換外水相，得到空白脂質(zhì)體；將所得空白脂質(zhì)體與鹽酸拓?fù)涮婵邓芤?4mg/mL)ImL混合，于60°C孵育lh，將上述脂質(zhì)體用超濾管濃縮至2mL，即得鹽酸拓?fù)涮婵灯胀ㄖ|(zhì)體。實(shí)施例9小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(MPM)體外攝取實(shí)驗(yàn)MPM懸液的制備取(20±2)g昆明小鼠若干，斷頸處死，在無(wú)菌操作下，腹腔注射RPMI-1640培養(yǎng)液5ml，按壓腹腔2min，吸出腹腔液，600rpm離心5min，棄上清液，用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液漂洗稀釋至每毫升IXIO5備用。取上述MPM懸液I.Oml和制劑樣品O.5ml，制劑樣品分別為實(shí)施例I制備的PEG和RGD肽修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體、對(duì)比例I制備的鹽酸拓?fù)涮婵礟EG修飾脂質(zhì)體以及對(duì)比例2制備的鹽酸拓?fù)涮婵灯胀ㄖ|(zhì)體。而后，于(37±O.5)°C水浴中培養(yǎng)30min，再在冰浴中終止吞噬，IOOOrpm離心5min，棄去上清液。用生理鹽水洗滌，離心，棄去上清，得待測(cè)細(xì)胞樣品。測(cè)定細(xì)胞樣品中的鹽酸拓?fù)涮婵档臐舛?，?jì)算得MPM攝取的藥物量，再與加入的藥物總量相比，計(jì)算得出鹽酸拓?fù)涮婵礛PM攝取率。結(jié)果表明，實(shí)施例I制備的PEG和R⑶肽修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體與對(duì)比例I制備的鹽酸拓?fù)涮婵礟EG修飾脂質(zhì)體的MPM攝取率分別為20.41%±5.87%和18.62±4.52%，兩者無(wú)顯著差異(P>O.05)，且均比對(duì)比例2制備的鹽酸拓?fù)涮婵灯胀ㄖ|(zhì)體(MPM攝取率為34.9±4.59%)顯著減少(P<O.01)。說(shuō)明PEG和RGD肽修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體可減少巨噬細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的攝取，有長(zhǎng)循環(huán)特性。實(shí)施例10實(shí)施例28制備的聚乙二醇和環(huán)R⑶肽修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(MPM)體外攝取實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例9。計(jì)算MPM攝取率，并與對(duì)比例I制備的鹽酸拓?fù)涮婵礟EG修飾脂質(zhì)體以及對(duì)比例2制備的鹽酸拓?fù)涮婵灯胀ㄖ|(zhì)體組相比，結(jié)果顯示，實(shí)施例28制備的PEG和RGD肽修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體的MPM攝取率為16.5725.35%,均與PEG修飾脂質(zhì)體組無(wú)顯著差異(P>O.05)，均比普通脂質(zhì)體組顯著減少(P<O.05)，說(shuō)明其可減少巨噬細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的攝取，有長(zhǎng)循環(huán)特性。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非用以限定本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)內(nèi)容范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)內(nèi)容是廣義地定義于申請(qǐng)的權(quán)利要求范圍中，任何他人完成的技術(shù)實(shí)體或方法，若是與申請(qǐng)的權(quán)利要求范圍所定義的完全相同，也或是一種等效的變更，均將被視為涵蓋于該權(quán)利要求范圍之中。權(quán)利要求1.一種被親水性聚合物聚乙二醇(PEG)和靶向配基R⑶肽修飾的鹽酸拓?fù)涮婵蛋邢蛑|(zhì)體的組成，其特征在于脂質(zhì)體由RGD肽，親水性聚合物聚乙二醇、功能性磷脂馬來(lái)酰亞胺化磷脂酰乙醇胺(MBPE)、磷脂和膽固醇組成，磷脂和膽固醇摩爾比為I:I10:I;磷脂和MBPE摩爾比為100:I5:I;磷脂和PEG摩爾比為200:I5:I;MBPE和R⑶肽摩爾比為10:II:I;按重量計(jì)算，鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體為I:5I:20。2.一種如權(quán)利要求I所述的脂質(zhì)體，其特征在于，脂質(zhì)體中磷脂和膽固醇摩爾比為1.2I5I;磷脂和MBPE摩爾比為40:I10:I;磷脂和PEG摩爾比為80I8I;MBPE和R⑶肽摩爾比為8:I2:I;按重量計(jì)算，鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體為I:8I:16。3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的靶向脂質(zhì)體，其特征在于，所述親水性聚合物聚乙二醇選自二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)或巰基化聚乙二醇(聚乙二醇單甲醚2000-琥珀酰基半胱氨酸，PEG-SC)；所述的靶向配基選自含有巰基的RGD肽及其類似物，RGD肽是指含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的環(huán)肽和線性肽，如RGDwc或環(huán)RGD肽即c(RGDfc)；所述普通磷脂選自大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)或氫化大豆磷脂(HSPC)或其組合。4.一種如權(quán)利要求1-3所述的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體的制備方法，其特征在于，它包括步驟(1)將普通磷脂、膽固醇和馬來(lái)酰亞胺化磷脂酰乙醇胺等膜材與有機(jī)溶劑混合，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加緩沖液水化，再用洗脫劑置換外水相，收集得到含MBPE的空白脂質(zhì)體；(2)再將上述空白脂質(zhì)體與鹽酸拓?fù)涮婵邓幬锓勰┗蚱淙芤?、靶向配基溶液、親水性聚合物二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000或巰基化聚乙二醇溶液混合孵育，即得聚乙二醇和靶向配基修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的有機(jī)溶劑為三氯甲烷、二氯甲烷、無(wú)水乙醇、乙醚或甲醇中的一種以上；所述的用于水化的緩沖液選自濃度為0.1250.250mol/L的硫酸銨溶液或pH為4.0的檸檬酸鹽緩沖液；硫酸銨溶液、pH4.0檸檬酸鹽緩沖液等。所述的洗脫劑為緩沖液、葡萄糖溶液或氯化鈉溶液，所述緩沖液選自磷酸緩沖液如PH7.4的PBS、HEPES緩沖液、檸檬酸緩沖液或Tris緩沖液；氯化鈉溶液如生理鹽水；步驟(2)中，所述的鹽酸拓?fù)涮婵等芤簽辂}酸拓?fù)涮婵邓芤?、鹽酸拓?fù)涮婵稻彌_液或鹽酸拓?fù)涮婵德然c溶液，濃度為2mg/ml15mg/ml,孵育條件為40°C60°C,5minIh；靶向配基溶液為靶向配基水溶液、靶向配基緩沖液或靶向配基氯化鈉溶液，濃度為0.lmg/ml3mg/ml,鮮育條件為20°C50°C，IOminIh；所述緩沖液選自磷酸緩沖液如PH7.4的PBS、HEPES緩沖液、檸檬酸緩沖液或Tris緩沖液；氯化鈉溶液如生理鹽水。6.一種如權(quán)利要求I5所述的被親水性聚合物聚乙二醇和靶向配基肽修飾的包載抗腫瘤藥物的脂質(zhì)體的用途，其特征在于，所述的脂質(zhì)體制劑可用于制備治療癌癥的藥物。7.—種如權(quán)利要求I5所述的被親水性聚合物聚乙二醇和靶向配基修飾的鹽酸拓?fù)涮婵抵|(zhì)體，其特征在于，可用于治療惡性腫瘤。全文摘要本發(fā)明提供了一種鹽酸拓?fù)涮婵蛋邢蛑|(zhì)體制劑及其制備方法，本發(fā)明將抗腫瘤藥物鹽酸拓?fù)涮婵蛋d入被親水性聚合物聚乙二醇和靶向配基環(huán)RGD肽修飾的靶向長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體中，該脂質(zhì)體能延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，達(dá)到腫瘤靶向，提高療效，降低毒副反應(yīng)。文檔編號(hào)A61K9/127GK102764234SQ201210275218公開(kāi)日2012年11月7日申請(qǐng)日期2012年8月3日優(yōu)先權(quán)日2012年8月3日發(fā)明者印璽璟,柴旭煜,趙雁,鄧家欣,陳中亞,陶濤,高大林申請(qǐng)人:上海現(xiàn)代藥物制劑工程研究中心有限公司