專利名稱：千層塔石杉總堿的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物堿的提取方法，特別是一種千層塔石杉總堿的提取方法。
背景技術(shù)：
千層塔為石杉科石杉屬蕨類植物，又名蛇足石杉、救命王。主布東北、長(zhǎng)江流域和閩、粵、桂、滇、黔等省區(qū)。民間常將全草入藥，有毒，用于退熱、止血、消腫散毒、跌打損傷等。 千層塔中含有的生物堿石杉?jí)A甲(HupA)和石杉?jí)A乙(HupB)是具有低毒、高效、可逆和高選擇性等優(yōu)點(diǎn)的乙酰膽堿酯酶抑制劑，對(duì)于治療重癥肌無力、中老年癡呆及提高記憶力具有良好的療效，并對(duì)抑制有機(jī)磷酸中毒有一定的作用。由于其獨(dú)特的藥用價(jià)值，千層塔及其提取物正日益受到國內(nèi)外市場(chǎng)的廣泛重視。目前，千層塔石杉總堿的提取方法很多，但均存在不同程度的缺點(diǎn)和不足。一般都是將千層塔粉碎后，加稀酸或有機(jī)溶劑浸泡萃取。如專利號(hào)200710018515.4 “一種從千層塔中提取分離石杉?jí)A甲的方法”，只是簡(jiǎn)單的采用有機(jī)溶劑浸泡萃?。粚＠暾?qǐng)?zhí)?200910014866. 7 “一種從千層塔中提取分離高純度石杉?jí)A甲的新方法”，也只是簡(jiǎn)單的采用稀硫酸浸泡萃取，這些方法只能少量的使藏在細(xì)胞壁中的生物堿析出，回收率很低，提取效率不高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種使隱藏在細(xì)胞壁中的生物堿充分析出的方法，以提高從千層塔中提取石杉總堿的回收率，節(jié)約有限資源。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案由粉碎、綜合提取、脫色、濃縮、氯仿萃取、稀堿萃取、稀酸反萃取、濃縮和干燥等工序完成，具體方法如下。⑴粉碎凈選千層塔藥材，粉碎，粒度為10-20目，過篩。⑵提取連續(xù)兩次提取，第一次提取是將千層塔粉粒用O. 8%的鹽酸溶液按照固液比為I :20-25的標(biāo)準(zhǔn)浸泡60min，再用600W功率的超聲波提取15min，然后再浸泡60min， 接著將提取液離心，取上清液；第二次提取是將濾渣用O. 8%的鹽酸溶液按照固液比為I : 18-22的標(biāo)準(zhǔn)浸泡45min，再用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡45min，接著將提取液離心，取上清液，最后將兩次上清液合并。⑶濃縮用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將上清液濃縮至原材料重量的10倍體積。⑷氯仿萃取加10%的氨水調(diào)ph值為9-10，加入1/6體積的氯仿與濃縮液混合， 萃取4次，合并氯仿相，再萃取一次。(5)濃縮用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，即得石杉總堿氯仿濃縮液。 (6)稀堿萃取加入相同體積的l%NaH0溶液，混合，萃取6次，取下層。(7)稀酸反萃取加入相同體積的1%HC1溶液，混合，反萃取6次，至萃取顏色很淡為止，取酸水層。(8)活性炭除雜加入15倍O. 8%的鹽酸溶液，調(diào)整pH值為1_2，加入相當(dāng)于濃縮液
33%體積的活性炭,攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液。(9)濃縮用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，即得石杉總堿濃縮液。(10)干燥將石杉總堿提取液烘干，即得千層塔石杉總堿晶體。本發(fā)明的有益效果是采用酸水浸泡提取，可將生物堿轉(zhuǎn)變?yōu)樯飰A鹽溶出，在提取過程中用超聲波和微波輔助提取，可以使千層塔細(xì)胞壁破裂，從而更好地讓生物堿溶解在浸泡液中，提高回收率，經(jīng)檢驗(yàn)，采用這種方法提取石杉總堿，其回收率可達(dá)98. 3%;采用稀酸和稀堿進(jìn)行萃取和反萃取，可以更好地去除雜質(zhì)，經(jīng)檢驗(yàn)，采用這種方法提取石杉總堿純度達(dá)28. 1%。


圖I為本發(fā)明千層塔石杉總堿的提取方法流程示意圖。圖2為本發(fā)明實(shí)施例I石杉總堿提取液色譜圖。圖3為本發(fā)明實(shí)施例2石杉總堿提取液色譜圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例I。凈選千層塔藥材100kg，用粉碎機(jī)粉碎，粒度為10-20目，過篩；然后用O. 8%的HCl 溶液2000kg浸泡60min，接著用600W功率的超聲波輔助提取15min，然后浸泡60min，再將浸泡液在離心機(jī)上離心，取上清液，同時(shí)將濾渣再用O. 8%的HCl溶液1800kg浸泡45min， 接著用600W功率的超聲波輔助提取lOmin，然后浸泡45min，再將浸泡液在離心機(jī)上離心， 取上清液，將兩次上清液合并；再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液濃縮至1000L，W 10%的氨水調(diào)節(jié)ph 值為9，然后加入17L氯仿與濃縮液混合，萃取4次，合并氯仿相，再萃取一次；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至100L，即得石杉總堿氯仿濃縮液。然后加入l%NaH0溶液100L，混合，萃取6次，取下層；再加1%HC1溶液100L，混合，反萃取6次，取酸水層，加入1500L0. 8%的鹽酸溶液，調(diào)整PH值為1-2，加入相當(dāng)于濃縮液3kg活性炭，攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，即得石杉總堿濃縮液。最后將石杉總堿提取液烘干5h，即得千層塔石杉總堿晶體，經(jīng)稱量，為49. 8g。精密稱取該晶體lmg，采用lmol/1的氫氧化鈉溶液和O. Olmol/ I的硫酸滴定液進(jìn)行酸堿滴定含量測(cè)定，該晶體中石杉總堿的含量為27. 7%，收率為97. 7%， 見圖2。實(shí)施例2。凈選千層塔藥材100kg，用粉碎機(jī)粉碎，粒度為10-20目，過篩；然后用O. 8%的HCl 溶液2500kg浸泡60min，接著用600W功率的超聲波輔助提取15min，然后浸泡60min，再將浸泡液在離心機(jī)上離心，取上清液，同時(shí)將濾渣再用O. 8%的HCl溶液2200kg浸泡45min， 接著用600W功率的超聲波輔助提取lOmin，然后浸泡45min，再將浸泡液在離心機(jī)上離心， 取上清液，將兩次上清液合并；再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液濃縮至1000L，W 10%的氨水調(diào)節(jié)ph 值為9，然后加入17L氯仿與濃縮液混合，萃取4次，合并氯仿相，再萃取一次；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至100L，即得石杉總堿氯仿濃縮液。然后加入l%NaHO溶液100L，混合，萃取6次，取下層；再加1%HC1溶液100L，混合，反萃取6次，取酸水層，加入1500L0. 8%的鹽酸溶液，調(diào)整PH值為1-2，加入相當(dāng)于濃縮液3kg活性炭，攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，即得石杉總堿濃縮液。最后將石杉總堿提取液烘干5h，即得千層塔石杉總堿晶體，經(jīng)稱量，為50. 3g。精密稱取該晶體lmg，采用lmol/1的氫氧化鈉溶液和O. Olmol/ I的硫酸滴定液進(jìn)行酸堿滴定含量測(cè)定，該晶體中石杉總堿的含量為27. 8%，收率為97. 9%， 見圖3。實(shí)施例3。凈選千層塔藥材100kg，用粉碎機(jī)粉碎，粒度為10-20目，過篩；然后用O. 8%的HCl 溶液2200kg浸泡60min，接著用600W功率的超聲波輔助提取15min，然后浸泡60min，再將浸泡液在離心機(jī)上離心，取上清液，同時(shí)將濾渣再用O. 8%的HCl溶液2000kg浸泡45min，接著用600W功率的超聲波輔助提取lOmin，然后浸泡45min，再將浸泡液在離心機(jī)上離心，取上清液，將兩次上清液合并；再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液濃縮至1000L，W 10%的氨水調(diào)節(jié)ph值為9，然后加入17L氯仿與濃縮液混合，萃取4次，合并氯仿相，再萃取一次；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至100L，即得石杉總堿氯仿濃縮液。然后加入l%NaHO溶液100L，混合，萃取6次，取下層；再加1%HC1溶液100L，混合，反萃取6次，取酸水層，加入1500L0. 8%的鹽酸溶液，調(diào)整pH 值為1-2，加入相當(dāng)于濃縮液3kg活性炭，攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，即得石杉總堿濃縮液；最后將石杉總堿提取液烘干5h，即得千層塔石杉總堿晶體， 經(jīng)稱量，為51. lg。精密稱取該晶體lmg，采用lmol/1的氫氧化鈉溶液和O. Olmol/1的硫酸滴定液進(jìn)行酸堿滴定含量測(cè)定，該晶體中石杉總堿的含量為28. 1%，收率為98. 3%。
權(quán)利要求
1.千層塔石杉總堿的提取方法，由粉碎、綜合提取、脫色、濃縮、氯仿萃取、稀堿萃取、稀酸反萃取、濃縮和干燥等工序完成，其特征在于具體步驟如下⑴粉碎凈選千層塔藥材，粉碎，粒度為10-20目，過篩；⑵提取連續(xù)兩次提取，第一次提取是將千層塔粉粒用O. 8%的鹽酸溶液按照固液比為 I 20-25的標(biāo)準(zhǔn)浸泡60min，再用600W功率的超聲波提取15min，然后再浸泡60min，接著將提取液離心，取上清液；第二次提取是將濾渣用O. 8%的鹽酸溶液按照固液比為I :18-22的標(biāo)準(zhǔn)浸泡45min，再用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡45min，接著將提取液離心，取上清液，最后將兩次上清液合并；⑶濃縮用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將上清液濃縮至原材料重量的10倍體積；⑷氯仿萃取加10%的氨水調(diào)ph值為9-10，加入1/6體積的氯仿與濃縮液混合，萃取4 次，合并氯仿相，再萃取一次；(5)濃縮用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，即得石杉總堿氯仿濃縮液；(6)稀堿萃取加入相同體積的l%NaH0溶液，混合，萃取6次，取下層；00稀酸反萃取加入相同體積的1%HC1溶液,混合,反萃取6次,至萃取顏色很淡為止, 取酸水層；⑶活性炭除雜加入15倍O. 8%的鹽酸溶液，調(diào)整pH值為1-2，加入相當(dāng)于濃縮液3%體積的活性炭，攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液；⑶濃縮用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，即得石杉總堿濃縮液；(10)干燥將石杉總堿提取液烘干，即得千層塔石杉總堿晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的提取方法，其特征在于步驟⑵所述的提取方法為首先將千層塔粉粒用O. 8%的鹽酸溶液按照固液比為I :22的標(biāo)準(zhǔn)浸泡60min，再用600W功率的超聲波提取15min，然后再浸泡60min，接著將提取液離心，取上清液；然后再將濾渣用O. 8%的鹽酸溶液按照固液比為I :20的標(biāo)準(zhǔn)浸泡45min，再用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡60min，接著將提取液離心，取上清液，最后將兩次上清液合并。
全文摘要
千層塔石杉總堿的提取方法，包括稀酸浸泡、超聲波輔助提取、萃取和反萃取除雜等工序，其有益效果是采用酸水浸泡提取，可將生物堿轉(zhuǎn)變?yōu)樯飰A鹽溶出，在提取過程中用超聲波輔助提取，可以使千層塔細(xì)胞壁破裂，從而更好地讓生物堿溶解在浸泡液中，提高回收率，經(jīng)檢驗(yàn)，采用這種方法提取石杉總堿，其回收率可達(dá)98.3%，提高了回收率，節(jié)約有限資源；采用稀酸和稀堿進(jìn)行萃取和反萃取，可以更好地去除雜質(zhì)，經(jīng)檢驗(yàn)，采用這種方法提取石杉總堿純度達(dá)28.1%。
文檔編號(hào)A61P21/04GK102600226SQ20121010057
公開日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2012年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月9日
發(fā)明者何全慧, 向廷軍, 楊再江, 祝利, 趙勇彪 申請(qǐng)人:重慶市秀山紅星中藥材開發(fā)有限公司