專利名稱：用于診斷劑和治療劑的遞送系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及LRP8-結(jié)合穿梭試劑和使用該穿梭試劑的方法。本發(fā)明還涉及促進(jìn)治療分子或診斷分子轉(zhuǎn)運(yùn)到CNS中的方法。背景神經(jīng)病癥代表全球死亡和殘疾的主要原因。盡管有廣泛的進(jìn)展，目前的治療選擇在許多方面保持受到限制。這種局限性的一個(gè)原因在于腦僅允許特定類型的分子進(jìn)入。盡管這種限制性的進(jìn)入有助于腦的保護(hù)，但是這也意味著多種潛在有用的化合物不能滲入中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)，因此不能在某些神經(jīng)病癥或其他CNS疾病中發(fā)揮治療活性或者不能用于某些神經(jīng)病癥或其他CNS疾病的診斷。本發(fā)明代表了在提供所需要的分子靶向進(jìn)入CNS 方面的進(jìn)展(在其他情況下該分子穿過血腦屏障(BBB)的能力是有限的)。此外，本發(fā)明描述了在遞送這樣的分子時(shí)獲得高的腦選擇性的方法。概述本發(fā)明提供促進(jìn)治療性化合物和診斷性化合物穿過血腦屏障遞送到CNS中的組合物和方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含LRP8-結(jié)合分子和至少一種CNS-活性化合物的組合物。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子綴合到所述至少一種CNS-活性化合物上。在一個(gè)這樣的方面中，所述綴合是所述LRP8-結(jié)合分子與所述至少一種CNS-活性化合物之間的共價(jià)連接。在另一個(gè)這樣的方面中，所述綴合通過接頭進(jìn)行。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子選自LRP8的天然配體、LRP8的天然配體的片段、LRP8的天然配體的修飾形式和LRP8的天然配體的修飾形式的片段。在一個(gè)這樣的方面中，所述LRP8的天然配體選自顫蛋白(reelin)和含硒蛋白質(zhì)P (selenoprotein P)。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子是抗體。在一個(gè)這樣的方面中，所述抗體是多特異性抗體。在另一個(gè)這樣的方面中，所述抗體選自單克隆抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體和結(jié)合LRP8的抗體片段。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子不與一種或多種LRP8的天然配體競爭與LRP8的結(jié)合。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子與一種或多種LRP8的天然配體競爭與LRP8的結(jié)合。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子結(jié)合LRP8的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子優(yōu)先結(jié)合在腦中表達(dá)的LRP8。在另一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物選自治療性化合物和診斷性化合物。在一個(gè)這樣的方面中，所述治療性化合物選自神經(jīng)營養(yǎng)因子和化合物以治療或預(yù)防下列各項(xiàng)中的一種或多種神經(jīng)病(neuropathy),淀粉樣變性(amyloidosis),癌癥,眼科疾病或病癥(ocular disease or disorder),病毒或微生物感染(viral or microbial infection),炎癥(inflammation),缺血(ischemia),神經(jīng)變性疾病(neurodegenerative disease),發(fā)作(seizure)，行為障石尋(behavioral disorder)和溶酶體忙積病(lysosomal storagedisease)。在一個(gè)這樣的方面中，所述治療性化合物選自治療帕金森病(Parkinson’sdisease)的化合物和治療阿爾茨海默病(Alzheimer’ s disease)的化合物。在另一個(gè)這樣的方面中，所述診斷性化合物是特異性結(jié)合CNS靶標(biāo)的標(biāo)記的肽或抗體。在另一個(gè)方面中，所述LRP-結(jié)合分子與LRP8的結(jié)合實(shí)現(xiàn)所述CNS-活性化合物穿過血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種藥物制劑，其包含含有LRP8-結(jié)合分子和至少一種CNS-活性化合物的組合物和藥用載體。在一個(gè)方面中，所述藥物制劑還包含另外的治療劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通過調(diào)節(jié)LRP8的表達(dá)、穩(wěn)定性或活性而調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中CNS-活性化合物穿過血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)的方法。在一個(gè)方面中，靶向通過LRP8-結(jié)合分子的方式進(jìn)行并且增加所述CNS-活性化合物的轉(zhuǎn)運(yùn)。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子和所述CNS-活性化合物同時(shí)施用給哺乳動(dòng)物。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子綴合到所述CNS- 活性化合物上。在一個(gè)這樣的方面中，所述LRP8-結(jié)合分子與所述CNS-活性化合物之間的綴合選自共價(jià)締合、利用接頭的締合以及在同一多特異性抗體中作為不同的結(jié)合結(jié)構(gòu)部分。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子選自LRP8的天然配體、LRP8的天然配體的片段、LRP8的天然配體的修飾形式和LRP8的天然配體的修飾形式的片段。在一個(gè)這樣的方面中，所述LRP8的天然配體選自顫蛋白和含硒蛋白質(zhì)P。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子是抗體。在一個(gè)這樣的方面中，所述抗體是多特異性抗體。在另一個(gè)這樣的方面中，所述抗體選自單克隆抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體和結(jié)合LRP8的抗體片段。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子不與一種或多種LRP8的天然配體競爭與LRP8的結(jié)合。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子與一種或多種LRP8的天然配體競爭與LRP8的結(jié)合。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子結(jié)合LRP8的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子優(yōu)先結(jié)合在腦中表達(dá)的LRP8。在另一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物選自治療性化合物和診斷性化合物。在一個(gè)這樣的方面中，所述治療性化合物選自神經(jīng)營養(yǎng)因子和化合物以治療或預(yù)防下列各項(xiàng)中的一種或多種神經(jīng)病，淀粉樣變性，癌癥，眼科疾病或病癥，病毒或微生物感染，炎癥，缺血，神經(jīng)變性疾病，發(fā)作，行為障礙和溶酶體貯積病。在另一個(gè)這樣的方面中，所述治療性化合物選自治療帕金森病的化合物和治療阿爾茨海默病的化合物。在另一個(gè)這樣的方面中，所述診斷性化合物是特異性結(jié)合CNS靶標(biāo)的標(biāo)記的肽或抗體。在另一個(gè)方面中，所述哺乳動(dòng)物是人。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子和所述CNS-活性化合物與一種或多種另外的治療劑聯(lián)合施用。在一個(gè)這樣的方面中，所述LRP8-結(jié)合分子和所述CNS-活性化合物與藥用載體聯(lián)合施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通過靶向LRP8調(diào)節(jié)CNS-活性化合物穿過包括緊密連接的血管內(nèi)皮細(xì)胞層轉(zhuǎn)運(yùn)的方法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療患有CNS疾病或CNS病癥的個(gè)體的方法，其包括給所述個(gè)體施用有效量的組合物或任意前述組合物的一種藥物制劑或多種藥物制劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種在患有CNS疾病或CNS病癥的個(gè)體中減少或預(yù)防CNS疾病或CNS病癥的嚴(yán)重性、持續(xù)時(shí)間或癥狀的方法，其包括給所述個(gè)體施用有效量的所述組合物或任意前述組合物的一種藥物制劑或多種藥物制劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供診斷個(gè)體中的CNS疾病或CNS病癥的方法，其包括給所述個(gè)體施用有效量的所述組合物或任意前述組合物的一種藥物制劑或多種藥物制齊U，顯現(xiàn)或定量在所述個(gè)體腦中的所述CNS-活性化合物，并且將該結(jié)果與來自具有已知的CNS疾病或病癥實(shí)例的個(gè)體或不具有CNS疾病或病癥的個(gè)體的對照結(jié)果進(jìn)行比較。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供對個(gè)體中的CNS疾病或CNS病癥分期(staging)的方法，其包括給所述個(gè)體施用有效量的所述組合物或任意前述組合物的一種藥物制劑或多種藥物制劑，顯現(xiàn)或定量在所述個(gè)體腦中的所述CNS-活性化合物，并且將該結(jié)果與來自具有已知分期的CNS疾病或CNS病癥的個(gè)體的對照結(jié)果進(jìn)行比較。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供LRP8-結(jié)合分子或包含LRP8-結(jié)合分子和至少一種CNS-活性化合物的組合物，所述組合物用作藥物。在一個(gè)方面中,所述LRP8-結(jié)合分子或包含LRP8-結(jié)合分子的組合物是前述LRP8-結(jié)合分子或包含LRP8-結(jié)合分子的組合物中的一種。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子綴合到所述至少一種CNS-活性化合物上。在一個(gè)這樣的方面中，所述綴合是所述LRP8-結(jié)合分子與所述至少一種CNS-活性化合物之間的共價(jià)連接。在另一個(gè)這樣的方面中，所述綴合通過接頭進(jìn)行。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子選自LRP8的天然配體、LRP8的天然配體的片段、LRP8的天然配體的修飾形式和LRP8的天然配體的修飾形式的片段。在一個(gè)這樣的 方面中，所述LRP8的天然配體選自顫蛋白和含硒蛋白質(zhì)P。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子是抗體。在一個(gè)這樣的方面中，所述抗體是多特異性抗體。在另一個(gè)這樣的方面中，所述抗體選自單克隆抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體和結(jié)合LRP8的抗體片段。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子不與一種或多種LRP8的天然配體競爭與LRP8的結(jié)合。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子與一種或多種LRP8的天然配體競爭與LRP8的結(jié)合。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子結(jié)合LRP8的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子優(yōu)先結(jié)合在腦中表達(dá)的LRP8。在另一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物選自治療性化合物和診斷性化合物。在一個(gè)這樣的方面中，所述治療性化合物選自神經(jīng)營養(yǎng)因子和化合物以治療或預(yù)防下列各項(xiàng)中的一種或多種神經(jīng)病，淀粉樣變性，癌癥，眼科疾病或病癥，病毒或微生物感染，炎癥，缺血，神經(jīng)變性疾病，發(fā)作，行為障礙和溶酶體貯積病。在另一個(gè)這樣的方面中，所述治療性化合物選自治療或預(yù)防帕金森病的化合物和治療或預(yù)防阿爾茨海默病的化合物。在另一個(gè)這樣的方面中，所述診斷性化合物是特異性結(jié)合CNS靶標(biāo)的標(biāo)記的肽或抗體。在另一個(gè)方面中，所述LRP-結(jié)合分子與LRP8的結(jié)合實(shí)現(xiàn)所述CNS-活性化合物穿過血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種藥物制劑，其包含組合物和藥用載體，所述組合物含有LRP8-結(jié)合分子和至少一種CNS-活性化合物(用作藥物的)。在一個(gè)方面中，所述藥物制劑還包含另外的治療劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供LRP8-結(jié)合分子或包含LRP8-結(jié)合分子的組合物用于制備用于治療CNS疾病或CNS病癥的藥物的應(yīng)用。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子或包含LRP8-結(jié)合分子的組合物是前述LRP8-結(jié)合分子或包含LRP8-結(jié)合分子的組合物中的一種。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供LRP8-結(jié)合分子或包含LRP8-結(jié)合分子的組合物用于制備用于診斷或分期CNS疾病或CNS病癥的藥物的應(yīng)用。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子或包含LRP8-結(jié)合分子的組合物是前述LRP8-結(jié)合分子或包含LRP8-結(jié)合分子的組合物中的一種。附圖
簡述圖I是在細(xì)胞膜情形中LRP8蛋白的結(jié)構(gòu)示意圖。LRP8的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域是LRP8由蛋白N端延伸至跨膜結(jié)構(gòu)域的部分，并且包括7個(gè)配體-結(jié)合重復(fù)和一個(gè)EGF-前體結(jié)構(gòu)域。LRP8的細(xì)胞內(nèi)部分包括細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域并且存在于細(xì)胞內(nèi)部。圖2A-2D描述將LRP8鑒定為在與血腦屏障相關(guān)的腦血管內(nèi)皮細(xì)胞上高度且特異性表達(dá)的蛋白的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖2A描述FACS分析的結(jié)果，從其他細(xì)胞類型中分選出CD31-陽性內(nèi)皮細(xì)胞用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。圖2B和2C圖解描述實(shí)施例I中所述的微陣列實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。在圖2B-1-2B-3中，顯示了來自成體樣品的相對轉(zhuǎn)錄水平，圖2C-1和2C-2來自相同的分析并且僅包括關(guān)于LRP8和LRPl的成體、幼體和胚胎樣品。在LRP8圖上最大的Y軸值是5. 7，而在LRPl圖上最大的Y軸值是O. 123。圖2D顯示實(shí)施例I中所述的驗(yàn)證性定量RT-PCR實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，證實(shí)在肺/肝血管內(nèi)皮細(xì)胞中幾乎沒有觀察到LRP8RNA，而那些細(xì)胞確實(shí)顯示高的LRP1RNA水平。相對轉(zhuǎn)錄物豐度值以針對設(shè)定為I的平均腦水平標(biāo)準(zhǔn)化的所有數(shù)值繪圖。圖3A-3E描述實(shí)施例2A所述的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，從而鑒定有效用于確定LRP8蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞樣品中的可檢測性的試劑并且確定LRP8蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞樣品中的可檢測性。圖3A顯示使用不同抗-ApoER2抗體進(jìn)行的ApoER2蛋白質(zhì)印跡分析。將重組人ApoER2稀釋到具有Ix還原劑的Invitrogen LDS樣品緩沖液中，并且以10ng、3ng、lng、0. 3ng的量上樣到10% Bis-Tris Nupage 15-孔凝膠中。左圖a.)將I : 500稀釋的抗_ApoER2小鼠單克隆抗體(Abeam ab58216) (2. O μ g/ml)用作一級(jí)抗體并且與印跡在4°C在振動(dòng)器上溫育48小時(shí)，b.)將I : 2000稀釋的生物素XX-抗-小鼠抗體用作二級(jí)抗體并且與印跡在室溫下溫育2小時(shí)。中間圖a.)將兔抗-ApoER2兔多克隆抗體(Invitrogen 40-7800)用作一級(jí)抗體并且與印跡在4°C在振動(dòng)器上溫育48小時(shí)，b.)將I : 2000稀釋的生物素XX-抗-兔抗體用作二級(jí)抗體并且與印跡在室溫下溫育2小時(shí)。右圖a.)將I : 500稀釋的LRP8小鼠多克隆抗體(Abnova H00007804-A01) (2. O μ g/ml)用作一級(jí)抗體并且與印跡在4°C在振動(dòng)器上溫育48小時(shí)，2.)將I : 2000稀釋的生物素XX-抗-小鼠抗體用作二級(jí)抗體并且與印跡在室溫下溫育2小時(shí)。圖3B和3C如圖3A中的所示的蛋白質(zhì)印跡，但是測定來自T175玻瓶培養(yǎng)物的第30代的D3細(xì)胞裂解物中LRP8的存在。圖3D描述如在實(shí)施例2中所述的檢測HUVEC或HBMEC細(xì)胞裂解物中LRP8蛋白的存在的Western印跡的結(jié)果。左圖使用兔抗-人LRP8抗體(Zymed)，右圖使用山羊抗-人LRP8抗體(Novus)，并且二圖均檢測到存在98KD分子量范圍的條帶，預(yù)測與存在LRP8相關(guān)。圖3E圖示競爭測定的結(jié)果，表明RAP不與抗-LRP8抗體競爭與ApoER2的結(jié)合。圖4A-4F描述在實(shí)施例2B中描述的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，其估測LRP8在各種培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞和在小鼠與人組織中的定位。圖4A顯示與固定的、滲透化處理的HUVEC的抗-LRP8結(jié)合的免疫細(xì)胞化學(xué)分析的圖片(左圖，Santa Cruz山羊抗-人LRP8抗體；右圖,Zymed兔抗-人LRP8抗體)。圖4B顯示在固定/滲透化處理(二級(jí)抗體山羊-抗-兔Alexa-Fluor488)后通過用抗-人LRP8抗體(Sigma A3481)染色無限增殖的人腦內(nèi)皮細(xì)胞(hCMEC/D3，左)或原代人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(右)得到的免疫熒光圖像。二圖均顯示LRP8的膜和囊泡分布；在原代細(xì)胞中的表達(dá)水平高于在無限增殖細(xì)胞系中的表達(dá)水平。圖4C顯示來自用LRP8配體顫蛋白預(yù)先處理HUVEC對那些細(xì)胞的抗-LRP8抗體染色的影響的免疫細(xì)胞化學(xué)分析的圖片，并且證明顫蛋白處理不改變LRP8在HUVEC上的定位。圖4D提供來自用抗-LRP8和⑶31標(biāo)記的小鼠腦組織的免疫組織化學(xué)分析的圖像，表明LRP8與血管內(nèi)皮細(xì)胞共定位。圖4E提供來自用Alexa488-標(biāo)記的抗-LRP8抗體系統(tǒng)處理I小時(shí)的小鼠、的圖片，其表明抗-LRP8抗體在腦切片中的定位。在整個(gè)切片中可以清楚地看到點(diǎn)狀模式的抗體，并且還容易在血管中顯現(xiàn)。圖4F顯示使用針對LRP8的一級(jí)抗體與針對細(xì)胞核的DAPI染色的人皮質(zhì)阿爾茨海默病腦切片的熒光顯微圖。可以檢測到在血管部位的LRP8染色。圖5A示意性描述實(shí)施例3中所述的遷移測定。圖5B-5C顯示實(shí)施例3中所述的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，其在體外遷移測定中確定LRP8穿過hCMEC/D3細(xì)胞單層轉(zhuǎn)運(yùn)的能力。發(fā)明實(shí)施方案詳述I.定義“接受體人構(gòu)架”用于本文的目的是包含來源于如下文定義的人免疫球蛋白構(gòu)架或人共有構(gòu)架的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)構(gòu)架或重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)構(gòu)架的氨基酸序列的構(gòu) 架?！皝碓从凇比嗣庖咔虻鞍讟?gòu)架或人共有構(gòu)架的接受體人構(gòu)架可以包括其相同的氨基酸序列，或其可以包含氨基酸序列改變。在一些實(shí)施方案中，氨基酸改變的數(shù)目是10個(gè)以下、9 個(gè)以下、8個(gè)以下、7個(gè)以下、6個(gè)以下、5個(gè)以下、4個(gè)以下、3個(gè)以下或2個(gè)以下。在一些實(shí)施方案中，VL接受體人構(gòu)架在序列上與VL人免疫球蛋白構(gòu)架序列或人共有構(gòu)架序列相同?！坝H和力”是指分子(例如，抗體)的單一結(jié)合位點(diǎn)與其結(jié)合配偶體(例如，抗原)之間的非共價(jià)相互作用的總和的強(qiáng)度。除非另外指明，用在本文時(shí)，“結(jié)合親和力”是指固有結(jié)合親和力，其反映結(jié)合對(例如，抗體和抗原)成員之間的I : I相互作用。分子X針對其配偶體Y的親和力通?？梢杂山怆x常數(shù)(Kd)表示。親和力可以通過本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法測量，包括本文所述的那些方法。下文描述用于測量結(jié)合親和力的具體的說明性和示例性的實(shí)施法案?！坝H和力成熟的”抗體是指與不具有所述改變的親本抗體相比在一個(gè)或多個(gè)高變區(qū)(HVRs)具有一個(gè)或多個(gè)改變的抗體，所述改變導(dǎo)致抗體對抗原的親和力提高。術(shù)語“抗-LRP8抗體”和“與LRP8結(jié)合的抗體”是指能夠以充分的親和力結(jié)合LRP8的抗體，所述親和力足以使所述抗體有效用作靶向LRP8并且促進(jìn)LRP8-介導(dǎo)的締合分子或鄰近分子的轉(zhuǎn)運(yùn)的試劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗-LRP8抗體與不相關(guān)的、非-LRP8蛋白結(jié)合的程度比例如通過放射免疫測定法(RIA)測量的所述抗體與LRP8的結(jié)合小約10%。在特定實(shí)施方案中，與LRP8結(jié)合的抗體具有彡I μ M，彡IOOnM, ( IOnM, ( InM, ( O. InM,彡 O. OlnM，或彡 O. OOlnM (例如，KT8M 以下，例如，1(Γ8Μ 至 10_13M，例如，1(Γ9Μ 至 I(T13M)的解離常數(shù)(Kd)。在特定實(shí)施方案中，抗-LRP8抗體結(jié)合在LRP8與不同物種之間保守的LRP8的表位。在特定實(shí)施方案中，抗-LRP8抗體結(jié)合LRP8的細(xì)胞外表位。在特定實(shí)施方案中，抗-LRP8抗體不與一種或多種天然LRP8配體競爭與LRP8的結(jié)合。在特定實(shí)施方案中，抗-LRP8抗體確實(shí)與一種或多種天然LRP8配體競爭與LRP8的結(jié)合。術(shù)語“抗體”在本文中以最廣泛的意思使用，并且包括各種抗體結(jié)構(gòu)，包括但不限于，單克隆抗體、多克隆抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)和抗體片段，只要它們表現(xiàn)出所需要的抗原-結(jié)合活性。“抗體片段”是指除完整抗體之外的分子，其包括完整抗體的一部分，該部分結(jié)合完整抗體所結(jié)合的抗原?？贵w片段的實(shí)例包括，但不限于，F(xiàn)v，F(xiàn)ab，F(xiàn)ab'，F(xiàn)ab’ -SH，F(xiàn)(ab' )2 ;雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如，scFv);和由抗體片段形成的多特異性抗體。
與參照抗體“結(jié)合相同表位的抗體”是指在競爭測定中阻斷所述參照抗體與其抗原的結(jié)合50%以上的抗體，反之，在競爭測定中所述參照抗體阻斷所述抗體與其抗原的結(jié)合50%以上。本文提供了示例性的競爭測定。“血腦屏障”或“BBB”是指在外周循環(huán)與腦和脊髓之間由腦毛細(xì)管內(nèi)皮質(zhì)膜內(nèi)的緊密連接形成的生理屏障，產(chǎn)生限制分子、甚至非常小的分子如尿素(60道爾頓)轉(zhuǎn)運(yùn)到腦中的緊密屏障。腦內(nèi)的血腦屏障、脊髓內(nèi)的血液-脊髓屏障、和在視網(wǎng)膜內(nèi)的血液-視網(wǎng)膜屏障是在CNS中的連續(xù)毛細(xì)管屏障，并且在本文中統(tǒng)稱為血腦屏障或BBB。BBB還包括血液-CSF屏障(脈絡(luò)叢)，其中所述屏障包括室管膜細(xì)胞而不是毛細(xì)管內(nèi)皮細(xì)胞?！爸袠猩窠?jīng)系統(tǒng)”或“CNS”是指控制身體功能的神經(jīng)組織的復(fù)合體，并且包括腦和脊髓。術(shù)語“嵌合的”蛋白是指這樣的分子，其中蛋白的一部分來源于特定的來源或物種，而蛋白的其余部分來源于不同的來源或物種。在抗體的情形中，“嵌合抗體”是指這樣的 抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分來源于特定的來源或物種，而重鏈和/或輕鏈的其余部分來源于不同的來源或物種?？贵w的“種類”是指其重鏈所具有的恒定結(jié)構(gòu)域或恒定區(qū)的類型。存在5種主要的抗體種類IgA，IgD，IgE，IgG和IgM，并且這些中的一些可以進(jìn)一步分成亞類(同種型)，例如，IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgAjP IgA2。與不同種類的免疫球蛋白相對應(yīng)的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域分別稱為α，δ，ε，γ和μ。“中樞神經(jīng)系統(tǒng)活性化合物”或“ CNS-活性化合物”用在本文中是指在受試者的CNS內(nèi)具有作用的物質(zhì)。CNS活性化合物包括，但不限于，治療性化合物、診斷性化合物和具有在研究中有用的作用的化合物。治療性CNS-活性化合物是有效治療一種或多種CNS疾病或病癥、預(yù)防一種或多種CNS疾病或病癥的發(fā)作或發(fā)展、或減小或防止一種或多種CNS疾病或病癥的嚴(yán)重性、持續(xù)時(shí)間或癥狀的化合物。診斷性CNS活性化合物是有效用于診斷或分期一種或多種CNS疾病或病癥或有效用于一個(gè)或多個(gè)腦部區(qū)域成像的化合物?！爸袠猩窠?jīng)系統(tǒng)疾病或病癥”或“CNS疾病或病癥”用在本文中是指影響CNS和/或具有在CNS中的病因?qū)W的疾病或病癥。示例性的CNS疾病或病癥包括，但不限于，神經(jīng)病，淀粉樣變性，癌癥，眼科疾病或病癥，病毒或微生物感染，炎癥，缺血，神經(jīng)變性疾病，發(fā)作，行為障礙和溶酶體貯積病。為了本申請的目的，CNS理解為包括眼，其通常通過血液-視網(wǎng)膜屏障與身體其余部分隔開。術(shù)語“細(xì)胞毒性劑”用在本文中是指抑制或防止細(xì)胞功能和/或引起細(xì)胞死亡或破壞的物質(zhì)。細(xì)胞毒性劑包括，但不限于，反射性同位素(例如，At211，I131，I125，Y90,Re186, Re188, Sm153, Bi212，P32，Pb212和Lu的放射性同位素)；化學(xué)治療劑或藥物(例如，甲氨喋呤(methotrexate),阿霉素(adriamicin),長春花生物喊(vinca alkaloids)(長春新堿(vincristine)，長春堿(vinblastine),依托泊苷(etoposide)),多柔比星(doxorubicin),美法侖(melphalan),絲裂霉素 C (mitomycin C),苯丁酸氮芥(chlorambucil),柔紅霉素(daunorubicin)或其他嵌入試劑(intercalating agents))；生長抑制劑；酶及其片段，如核酸裂解酶；抗生素；毒素如細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物來源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或變體；以及下文公開的各種抗腫瘤或抗癌試劑?！靶?yīng)子功能”是指可歸因于抗體的Fe區(qū)的那些生物學(xué)活性，其隨抗體同種型而不同。抗體效應(yīng)子功能的實(shí)例包括Clq結(jié)合和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC) ;Fc受體結(jié)合；抗體-依賴性細(xì)胞-介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC);吞噬作用；細(xì)胞表面受體(例如，B細(xì)胞受體)的下調(diào)；和B細(xì)胞激活。試劑的“有效量”，例如藥物制劑的“有效量”，是指在必要?jiǎng)┝亢蜁r(shí)間期間有效獲得所需治療或預(yù)防結(jié)果的量。術(shù)語“Fe區(qū)”在本文中用來定義免疫球蛋白重鏈的C-端區(qū)域，其包含恒定區(qū)的至少一部分。該術(shù)語包括天然序列Fe區(qū)和變體Fe區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，人IgG重鏈Fe區(qū)由Cys226,或由Pro230延伸至重鏈的羧基-末端。然而,Fe區(qū)的C-端賴氨酸(Lys447)可以存在或可以不存在。除非本文另外指明，F(xiàn)e區(qū)或恒定區(qū)中氨基酸殘基的編號(hào)是按照EU編號(hào)系統(tǒng)進(jìn)行的，EU編號(hào)系統(tǒng)也稱為EU索引(EU index),如在Kabat等，Sequences ofProteins of Immunological Interest (免疫目的的蛋白的序列)，第5版,公眾健康服務(wù)， 全國衛(wèi)生研究所(Public Health Service, National Institutes ofHealth), Bethesda,MD, 1991中所述?！皹?gòu)架”或“FR”是指除高變區(qū)(HVR)殘基之外的可變結(jié)構(gòu)域殘基?？勺兘Y(jié)構(gòu)域的FR通常由4個(gè)FR結(jié)構(gòu)域組成FR1，F(xiàn)R2，F(xiàn)R3和FR4。因此，HVR和FR序列通常以下述順序出現(xiàn)在 VH (或 VL)中=FRl-Hl (LI) -FR2-H2 (L2) -FR3-H3 (L3) -FR4。 術(shù)語“全長抗體”、“完整抗體”和“完全抗體”在本文中可互換使用，用來指具有與天然抗體結(jié)構(gòu)基本上相似的結(jié)構(gòu)的抗體或具有包含本文定義的Fe區(qū)的重鏈的抗體。術(shù)語“宿主細(xì)胞”、“宿主細(xì)胞系”和“宿主細(xì)胞培養(yǎng)物”可互換使用并且是指外源核酸已經(jīng)引入其中的細(xì)胞，包括所述細(xì)胞的后代。宿主細(xì)胞包括“轉(zhuǎn)化體”和“轉(zhuǎn)化的細(xì)胞”，其包括原代轉(zhuǎn)化細(xì)胞和來源于其的后代，與傳代次數(shù)無關(guān)。后代可以不與親代細(xì)胞的核酸內(nèi)容物完全相同，而是可以包含突變。本文包括具有與在初始轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中篩選或選擇的相同的功能或生物學(xué)活性的突變體后代?！叭丝贵w”是具有與由人或人細(xì)胞產(chǎn)生的或來源于非人來源的抗體的氨基酸序列相對應(yīng)的氨基酸序列的一種抗體，所述非人來源利用人抗體全體成員或其他人抗體-編碼序列。人抗體的這一定義特異性排除包括非人抗原-結(jié)合殘基的人源化的抗體。“人共有構(gòu)架”是表示在人免疫球蛋白VL或VH構(gòu)架序列的選擇中最常存在的氨基酸殘基的構(gòu)架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列的選擇是來自可變結(jié)構(gòu)域序列的亞組。通常，序列的亞組是 Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫目的的蛋白的序列)，第 5 版，NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991),卷 1-3 中的亞組。在一個(gè)實(shí)施方案中，對于VL，所述亞組是如Kabat等，同上所述的亞組κ I。在一個(gè)實(shí)施方案中，對于VH,所述亞組是如Kabat等，同上所述的亞組III?！叭嗽椿笨贵w是指包含來自非人HVRs的氨基酸殘基和來自人FRs的氨基酸殘基的嵌合抗體。在特定實(shí)施方案中，人源化抗體基本上包括至少一個(gè)、和典型地兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域的全部，其中全部或基本上全部的HVRs (例如，CDRs)對應(yīng)于非-人抗體的那些，全部或基本上全部的FRs對應(yīng)于人抗體的那些。人源化抗體任選地可以包括來源于人抗體的抗體恒定區(qū)的至少一部分?？贵w的“人源化形式”，例如，非-人抗體的“人源化形式”，是指已經(jīng)進(jìn)行人源化的抗體。術(shù)語“高變區(qū)”或“HVR”用在本文時(shí)是指在序列上高變和/或形成結(jié)構(gòu)限定的環(huán)(“高變環(huán)”)的抗體可變結(jié)構(gòu)域的每個(gè)區(qū)域。通常，天然4鏈抗體包含6個(gè)HVRs ;三個(gè)在VH中(Hl，H2，H3)，三個(gè)在VL中(LI，L2，L3)。HVRs通常包括來自高變環(huán)和/或來自“互補(bǔ)決定區(qū)”(CDRs)的氨基酸殘基，后者是最高的序列可變性和/或參與抗原識(shí)別。示例性的高變環(huán)存在于氨基酸殘基 26-32 (LI)，50-52 (L2)，91-96 (L3)，26-32 (Hl)，53-55 (H2)，和96-101 (H3)中。(Chothia 和 Lesk，J. Mol. Biol.(分子生物學(xué)雜志)196 :901-917 (1987)。)示例性的⑶Rs (⑶R-L1，⑶R-L2，⑶R-L3，⑶R-H 1，⑶R-H2，和⑶R-H3)存在于LI的氨基酸殘基 24-34，L2 的 50-56，L3 的 89-97，Hl 的 31_35B，H2 的 50-65，和 H3 的 95-102 中。(Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫目的的蛋白的序列)，第5 版，公眾健康服務(wù),全國衛(wèi)生研究所(Public Health Service, National Institutes ofHealth), Bethesda, MD (1991)。)除了 VH中的CDRl，CDRs通常包括形成和高變環(huán)的氨基酸殘基。⑶Rs還包含“特異性決定殘基”或“SDRs”，其是接觸抗原的殘基。SDRs包含在稱為縮短-CDRs (abbreviated-CDRs)或 a-CDRs 的 CDRs 區(qū)域中。示例性的 a-CDRs (a-CDR-Ll，a-CDR-L2，a-CDR-L3，a-CDR-Hl，a-CDR-H2，和 a_CDR-H3)存在于 LI 的氨基酸殘基 31-34，L2的 50-55，L3 的 89-96，Hl 的 31-35B，H2 的 50-58，和 H3 的 95-102 中。(參見 Almagro 和Fransson, Front. Biosci. 13 :1619-1633 (2008)。)除非另外指明，HVR 殘基和可變結(jié)構(gòu)域中的其他殘基(例如，F(xiàn)R殘基)在本文中按照Kabat等，同前所述編號(hào)。“免疫綴合物”是與一種或多種異源分子綴合的抗體。“個(gè)體”或“受試者”是哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物包括，但不限于，家畜(例如，母牛，綿羊，貓，狗，和馬)，靈長類動(dòng)物(例如，人和非人靈長類動(dòng)物如猴)，兔，和嚙齒動(dòng)物(例如，小鼠和大鼠)。在特定實(shí)施方案中，個(gè)體或受試者是人?！胺蛛x的”多肽是已經(jīng)與其天然環(huán)境成分分離的一種多肽。在一些實(shí)施方案中，多肽純化至大于95%或99%的純度，如例如通過電泳(例如，SDS-PAGE，等電聚焦(IEF)，毛細(xì)管電泳)或色譜(例如，離子交換或反相HPLC)確定純度。關(guān)于例如抗體純度的評(píng)估方法的綜述，參見，例如，F(xiàn)latman 等，J. Chromatogr. B848 :79-87 (2007)?！胺蛛x的”核酸是指已經(jīng)與其天然環(huán)境成分分離的核酸分子。分離的核酸包括通常包含核酸分子的細(xì)胞中所包含的核酸分子，但是該核酸分子存在于染色體外或存在于與其天然染色體位置不同的染色體位置上。“分離的編碼抗-LRP8抗體的核酸”是指編碼抗體重鏈和輕鏈(或其片段)的一種或多種核酸分子，包括在單一載體或分尚的載體中的所述核酸分子，并且所述核酸分子存在于宿主細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)位置?！敖宇^結(jié)構(gòu)部分”或“接頭”用在本文中時(shí)是指共價(jià)或非共價(jià)連接LRP8-結(jié)合化合物與CNS-活性分子的結(jié)構(gòu)。接頭的主要功能是作為間隔臂，并且其在本發(fā)明的穿梭試劑中的存在是任選的，這取決于要綴合的特定LRP8-結(jié)合分子和CNS-活性化合物的需要。在特定實(shí)施方案中，接頭是肽。在其他實(shí)施方案中，接頭是化學(xué)接頭。術(shù)語“LRP8”，與“載脂蛋白E受體2”和“ApoER2”互換使用，用在本文中時(shí)，是指來自任何脊椎動(dòng)物來源的任何天然的LRP8，除非另外指明，脊椎動(dòng)物來源包括哺乳動(dòng)物，如靈長類動(dòng)物(例如，人)和嚙齒動(dòng)物(例如，小鼠和大鼠)。該術(shù)語包括“全長的”未加工的LRP8以及由細(xì)胞內(nèi)加工導(dǎo)致的任何形式的LRP8。該術(shù)語還包括天然存在的LRP8變體，例如，剪接變體或等位基因變體。示例性人LRP8的氨基酸序列顯示在SEQ ID NO :1中
MGLPEPGPLRLLALLLLLLLLLLLRLQHLAAAAADPLLGGQGPAKECEKDQFQCRNERCIPSVWRCDEDDDCLDHSDEDDCPKKTCADSDFTCDNGHCIHERWKCDGEEECPDG SDESEATCTKQVCPAEKLSCGPTSHKCVPASWRCDGEKDCEGGADEAGCATLCAPHEFQCGNRSCLAAVFVCD⑶DDCGDGSDERGCADPACGPREFRCG⑶GGGACIPERWVCDRQFDCEDRSDEAAELCGRPGPGATSAPAACATVSQFACRSGECVHLGWRCD⑶RDCKDKSDEADCPLGTCRGDEFQC⑶GTCVLAIKHCNQEQDCPDGSDEAGCLQGLNECLHNNGGCSHICTDLKIGFECTCPAGFQLLDQKTCGDIDECKDPDACSQICVNYKGYFKCECY PGYEMDLLTKNCKAAGGKSPSLIFTNRYEVRRIDLVKRNYSRLIPMLKNVVALDVEVATNRIYWCDLSYRKIYSAYMDKASDPKEQEVLIDEQLHSPEGLAVDWVHKHIYWTDSGNKTISVATVDGGRRRTLFSRNLSEPRAIAVDPLRGFMYWSDWGDQAKIEKSGLNGVDRQTLVSDNIEWPNGITLDLLSQRLYffVDSKLHQLSSIDFSGGNRKTLISSTDFLSHPFGIAVFEDKVFWTDLENEAIFSANRLNGLEISILAENLNNPHDIVIFHELKQPRAPDACELSVQPNGGCEYLCLPAPQISSHSPKYTCACPDTMWLGPDMKRCYRAPQSTSTTTLASTMTRTVPATTRAPGTTVHRSTYQNHSTETPSLTAAVPSSVSVPRAPSISPSTLSPATSNHSQHYANEDSKMGSTVTAAVIGIIVPIVVIALLCMSGYLIWRNWKRKNTKSMNFDNPVYRKTTEEEDEDELHIGRTAQIGHVYPAAISSFDRPLWAEPCL GETREPEDPAPALKELFVLPGEPRSQLHQLPKNPLSELPVVKSKRVALSLEDDGLP(SEQ IDNO :1) (GenbankBAA21824. I)。在特定實(shí)施方案中，SEQ ID NO :1的前32個(gè)氨基酸是信號(hào)序列，并且示例性的加工過的人LRP8蛋白的序列在SEQ ID NO 2中給出AADPLLGGQGPAKECEKDQFQCRNERCIPSVWRCDEDDDCLDHSDEDDCPKKTCADSDFTCDNGHCIHERWKCDGEEECPDGSDESEATCTKQVCPAEKLSCGPTSHKCVPASWRCDGEKDCEGGADEAGCATLCAPHEFQCGNRSCLAAVFVCD⑶DDCGDGSDERGCADPACGPREFRCGGDGGGACIPERWVCDRQFDCEDRSDEAAELCGRPGPGATSAPAACATVSQFACRSGECVHLGWRCD⑶RDCKKKSDEADCPLGTCRGDEFQCGDGTCVLAIKHCNQEQDCPDGSDEAGCLQGLNECLHNNGGCSHICTDLKIGFECTCPAGFQLLDQKTCGDIDECKDPDACSQICVNYKGYFKCECYPGYEMDLLTKNCKAAGGKSPSLIFTNRYEVRRIDLVKRNYSRLIPMLKNWALDVEVATNRIYWCDLSYRKIVSAYMDKASDPKEQEVLIDEQLHSPEGLAVDWVHKHIYWTDSGNKTISVATVDGGRRRTLFSRNLSEPRAIAVDPLRGFMYWSDffGDQAKIEKSGLNGVDRQTLVSDNIEWPNGITLDLLSQRLYWVDSKLHQLSSIDFSGGNRKTLISSTDFLSHPFGIAVFEDKVFWTDLENEAIFSANRLNGLEISILAENLNNPHDIVIFHELKQPRAPDACELSVQPNGGCEYLCLPAPQISSHSPKYTCACPDTMWLGPDMKRCYRAPQSTSTTTLASTMTRTVPATTRAPGTTVHRSTYQNHSTETPSLTAAVPSSVSVPRAPSISPSTLSPATSNHSQHYANEDSKMGSTVTAAVIGIIVPIVVIALLCMSGYLIWRNWKRKNTKSMNFDNPVYRKTTEEEDEDELHIGRTAQIGHVYPAAISSFDRPLWAEPCLGETREREDPAPALKELFVLPGEPRSQLHQLPKNPLSELPVVKSKRVALSLEDDGLP(SEQ ID NO :2)?！癓RP8-結(jié)合分子”是指特異性結(jié)合LRP8的分子。LRP8-結(jié)合分子包括，但不限于，LRP8的天然配體(即，顫蛋白，ApoE,或含硒蛋白質(zhì)P), LRP8的天然配體的修飾形式,針對LRP8的抗體，特異性結(jié)合LRP8的肽，特異性結(jié)合LRP8的適體，和特異性結(jié)合LRP8的小分子以及前述任一項(xiàng)的LRP8-結(jié)合片段。在特定實(shí)施方案中，LRP8-結(jié)合分子不與LRP8的天然配體競爭與LRP8的結(jié)合。在特定實(shí)施方案中，LRP8-結(jié)合分子與LRP8的天然配體競爭與LRP8的結(jié)合。在特定實(shí)施方案中，LRP8-結(jié)合分子拮抗正常的LRP8功能。在特定實(shí)施方案中，LRP8-結(jié)合分子激動(dòng)正常的LRP8功能。術(shù)語“LRP8的天然配體的修飾形式”是指已經(jīng)被修飾的LRP8的天然配體，以使其不再與天然存在的LRP8配體形式相同但仍然保留結(jié)合LRP8的能力。所述修飾包括，但不限于，翻譯后修飾(即，糖基化)，氨基酸修飾(即，氨基酸置換、缺失或添加，條件是修飾的分子保持與LRP8結(jié)合)，融合(即，F(xiàn)e-融合)，和化學(xué)修飾(即，連接放射性標(biāo)記或其他可檢測的標(biāo)簽，如但不限于，熒光團(tuán)或六組氨酸標(biāo)簽)。術(shù)語“單克隆抗體”用在本文中是指由一群基本上同源的抗體獲得的抗體，S卩，包含所述群體的單一抗體是相同的和/或結(jié)合相同的表位，排除可能的變體抗體，例如，包含天然存在的突變或在生產(chǎn)單克隆抗體制劑過程中產(chǎn)生的變體抗體，所述變體通常以少量存在。與典型地包括針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制劑相反，單克隆抗體制劑的每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。因此，修飾詞“單克隆”表示抗體從基本上同源的抗體群體獲得的特征，并且不被解釋為需要通過任何特定的方法生產(chǎn)抗體。例如，要按照本發(fā)明使用的單克隆抗體可以通過各種技術(shù)制備，包括但不限于，雜交瘤方法，重組DNA方法，噬菌體-展示方法，和使用包括所有或部分人免疫球蛋白基因座的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法，本文描述了用于制備單克隆抗體的所述方法和其他示例性方法。 “裸抗體”是指沒有綴合到異源結(jié)構(gòu)部分(例如，CNS-活性化合物)或放射性標(biāo)記上的抗體。裸抗體可以存在于藥物制劑中。“天然抗體”是指天然存在的具有變化結(jié)構(gòu)的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗體是約150，000道爾頓的異源四聚體糖蛋白，由二硫鍵鍵合的兩個(gè)相同的輕鏈和兩個(gè)相同的重鏈構(gòu)成。從N-端到C-端，每個(gè)重鏈具有可變區(qū)(VH)，也稱為可變重鏈結(jié)構(gòu)域或重鏈可變結(jié)構(gòu)域，之后是三個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域(CH1，CH2，和CH3)。類似地，從N-端到C-端，每個(gè)輕鏈具有可變區(qū)(VL)，還稱為可變輕鏈結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，之后是恒定輕鏈(CL)結(jié)構(gòu)域?；谄浜愣ńY(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，抗體的輕鏈可以指定為稱為kappa ( K )和IambdaO )的兩種類型中的一種?！癓RP8的天然配體”或“LRP8天然配體”是指作為天然存在的LRP8配體的多肽。所述天然存在的配體包括，但不限于，顫蛋白，ApoE,含硒蛋白質(zhì)P和RAP。在特定實(shí)施方案中，LRP8的天然配體結(jié)合在LRP8上的任何位置。在特定實(shí)施方案中，LRP8的天然配體結(jié)合LRP8的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。在特定實(shí)施方案中，使用LRP8的天然配體的LRP8-結(jié)合片段。天然存在的人顫蛋白的氨基酸序列為MERSGWARQTFLLALLLGATLRARAAAGYYPRFSPFFFLCTHHGELE⑶GEQGEVLISLHIAGNPTYYVPGQEYHVTISTSTFFDGLLVTGLYTSTSVQASQSIGGSSAFGFGIMSDHQFGNQFMCSVVASHVSHLPTTNLSFIWIAPPAGTGCVNFMATATHRGQVIFKDALAQQLCEQGAPTDVTVHPHLAEIHSDSIILRDDFDSYHQLQLNPNIWVECNNCETGEQCGAMHGNAVTFCEPYGPRELITTGLNTTTASVLQFSIGSGSCRFSYSDPSIIVLYAKNNSADffIQLEKIRAPSNVSTIIHILYLPEDAKGENVQFQWKQENLRVGEVYEACWALDNILIINSAHRQVVLEDSLDPVDTGNWLFFPGATVKHSCQSDGNSIYFHGNEGSEFNFATTRDVDLSTEDIQEQffSEEFESQPTGffDVLGAVIGTECGTIESGLSMVFLKDGERKLCTPSMDTTGYGNLRFYFVMGGICDPGNSHENDIILYAKIEGRKEHITLDTLSYSSYKVPSLVSWINPELQTPATKFCLRQKNHQGHNRNVWAVDFFHVLPVLPSTMSHMIQFSINLGCGTHQPGNSVSLEFSTNHGRSWSLLHTECLPEICAGPHLPHSTVYSSENYSGWNRITIPLPNAALTRNTRIRWRQTGPILGNMWAIDNVYIGPSCLKFCSGRGQCTRHGCKCDPGFSGPACEMASQTFPMFISFSFGSSRLSSYHNFYSIRGAEVSFGCGVLASGKALVFNKEGRRQLITSFLDSSQSRFLQFTLRLGSKSVLSTCRAPDQPGEGVLLHYSYDNGITffKLLEHYSYLSYHEPRIISVELPGDAKQFGIQFRffffQPYHSSQREDVWAIDEIIMTSVLFNSISLDFTNLVEVTQSLGFYLGNVQPYCGHDWTLCFTGDSKLASSMRYVETQSMQIGASYMIQFSLVMGCGQKYTPHMDNQVKLEYSTNHGLTWHLVQEECLPSMPSCQEFTSASIYHASEFTQWRRVIVLLPQKTWSSATRFRWSQSYYTAQDEWALDSIYIGQQCPNMCSGHGSCDHGICRCDQGYQGTECHPEAALPSTIMSDFENQNGWESDWQEVIGGEIVKPEQGCGVISSGSSLYFSKAGKRQLVSWDLDTSffVDFVQFYIQIGGESASCNKPDSR EEGVLLQYSNNGGIQWHLLAEMYFSDFSKPRFVYLELPAAAKTPCTRFRffffQPVFSGEDYDQffAVDDIIILSEKQKQIIPVINPTLPQNFYEKPAFDYPMNQMSVWLMLANEGMVKNETFCAATPSAMIFGKSD⑶RFAVTRDLTLKPGYVLQFKLNIGCANQFSSTAPVLLQYSHDAGMSWFLVKEGCYPASAGKGCEGNSRELSEPTMYHTCDFEEWTRITIVIPRSLASSKTRFRWIQESSSQKNVPPFGLDGVYISEPCPSYCSGHGDCISGVCFCDLGYTAAQGTCVSNVPNHNEMFDRFEGKLSPLWYKITGAQVGTGCGTLNDGKSLYFNGPGKREARTVPLDTRNIRLVQFVIQIGSKTSGITGIKPRTRNEGLIVQYSNDNGILWHLLRELDFMSFLEPQIISIDLPQDAKTPATAFRffffQPQHGKHSAQWALDDVLIGMNDSSQTGFQDKFDGSIDLQANWYRIQGGQVDIDCLSMDTALIFTENIGKPRYAETWDFHVSASTFLQFEMSMGCSKPFSNSHSVQLQYSLNNGKDWHLVTEECVPPTIGCLHYTESSIYTSER FQNWKRITVYLPLSTISPRTRFRWIQANYTVGADSWAIDNVVLASGCPWMCSGRGICCDAGRCVCDRGFGGPYCVPVVPLPSILKDDFNGNLHPDLWPEVYGAERGNLNGETIKSGTSLIFKGEGLRMLISRDLDCTNTMYVQFSLRFIAKSTPERSHSILLQFSISGGITWHLMDEFYFPQTTNILFINVPLPYTAQTNATRFRLWQPYNNGKKEEIWIVDDFIIDGNNVNNPVMLLDTFDFGPREDNWFFYPGGNIGLYCPYSSKGAPEEDSAMVFVSNEVGEHSITTRDLNVNENTIIQFEINVGCSTDSSSADPVRLEFSRDFGATWHLLLPLCYHSSSHVSSLCSTEHHPSSTYYAGTMQGWRREVVHFGKLHLCGSVRFRWYQGFYPAGSQPVTWAIDNVYIGPQCEEMCNGQGSCINGTKCICDPGYSGPTCKISTKNPDFLKDDFEGQLESDRFLLMSGGKPSRKCGILSSGNNLFFNEDGLRMLMTRDLDLSH ARFVQFFMRLGCGKGVPDPRSQPVLLQYSLNGGLSWSLLQEFLFSNSSNVGRYIALEIPLKARSGSTRLRWWQPSENGHFYSPWVIDQILIGGNISGNTVLEDDFTTLDSRKWLLHPGGTKMPVCGSTGDALVFIEKASTRYVVSTDVAVNEDSFLQIDFAASCSVTDSCYAIELEYSVDLGLSWHPLVRDCLPTNVECSRYHLQRILVSDTFNKWTRITLPLPPYTRSQATRFRWHQPAPFDKQQTWAIDNVYI⑶GCIDMCSGHGRCIQGNCVCDEQWGGLYCDDPETSLPTQLKDNFNRAPSSQNWLTVNGGKLSTVCGAVASGMALHFSGGCSRLLVTVDLNLTNAEFIQFYFMYGCLITPNNRNQGVLLEYSVNGGITWNLLMEIFYDQYSKPGFVNILLPPDAKEIATRFRWWQPRHDGLDQNDWAIDNVLISGSADQRTVMLDTFSSAPVPQHERSPADAGPVGRIAFDMFMEDKTSVNEHWLFHDDCTVERFCDSPDGVMLCGSHDGREVYAVTHDLTPTEGWMQFKISVGCKVSEKIAQNQIHVQYSTDFGVSWNYLVPQCLPADPKCSGSVSQPSVFFPTKGWKRITYPLPESLVGNPVRFRFYQKYSDMQffAIDNFYLGPGCLDNCRGHGDCLREQCICDPGYSGPNCYLTHTLKTFLKERFDSEEIKPDLWMSLEGGSTCTECGILAEDTALYFGGSTVRQAVTQDLDLRGAKFLQYWGRIGSENNMTSCHRPICRKEGVLLDYSTDGGITWTLLHEMDYQKYISVRHDYILLPEDALTNTTRLRWWQPFVISNGIVVSGVERAQWALDNILIGGAEINPSQLVDTFDDEGTSHEENWSFYPNAVRTAGFCGNPSFHLYWPNKKKDKTHNALSSRELIIQPGYMMQFKIVVGCEATSCGDLHSVMLEYTKDARSDSWQLVQTQCLPSSSNSIGCSPFQFHEATIYNSVNSSSWKRITIQLPDHVSSSATQFRWIQKGEETEKQSWAIDHVYIGEACPKLCSGHGYCTTGAICICDESFQGDDCSVFSHDLPSYIKDNFESARVTEANWETIQGGVIGSGCGQLAPYAHGDSLYFNGCQIRQAATKPLDLTRASKIMFVLQIGSMSQTDSCNSDLSGPHAVDKAVLLQYSVNNGITWHVIAQHQPKDFTQAQRVSYNVPLEARMKGVLLRWWQPRHNGTGHDQWALDHVEVVLVSTRKQNYMMNFSRQHGLRHFYNRRRRSLRRYP (Genbank kAAC51105. I) (SEQ ID NO :3)。天然存在的人含硒蛋白質(zhì)P的氨基酸序列為MWRSLGLALALCLLPSGGTESQDQSSLCKQPPAWSIRDQDPMLNSNGSVTVVALLQASXYLCIIEASKLEDLRVKLKKEGYSNISYIVVNHQGISSRLKYTHLKNKVSEHIPVYQQEENQTDVWTLLNGSKDDFLIYDRCGRLVYHLGLPFSFLTFPYVEEAIKIAYCEKKCGNCSLTTLKDEDFCKRVSLATVDKTVETPSPHYHHEHHHNHGHQHLGSSELSENQQPGAPNAPTHPAPPGLHHHHKHKGQHRQGHPENRDMPASEDLQDLQKKLCRKRCINQLLCKLPTDSELAPRSXCCHCRHLIFEKTGSAITXQCKENLPSLCSXQGLRAEENITESCQXRLPPAAXQISQQLIPTEASASXRXKNQAKKXEXPSN(GenBank CAA77836. I)，(SEQ IDNO :4)。術(shù)語“包裝插頁”用來指通常包括在商業(yè)治療產(chǎn)品包裝中的使用說明，其含有關(guān)于適應(yīng)證、用途、劑量、施用、組合治療、禁忌癥和/或關(guān)于使用所述治療產(chǎn)品的警告的信息。關(guān)于參照多肽序列的“氨基酸序列同一性百分?jǐn)?shù)) ”定義為在比對序列和必要時(shí)引入缺口以獲得最大序列同一性百分?jǐn)?shù)，并且不將任何保守置換視為序列同一性的一部分之后，候選序列中與所述參照多肽序列中氨基酸殘基相同的氨基酸殘基的百分?jǐn)?shù)。為確定氨基酸序列同一性百分?jǐn)?shù)目的的比對可以以本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的多種方式獲得，例如，使用公眾可獲得的計(jì)算機(jī)軟件如BLAST，BLAST-2, ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟件。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定用于比對序列的適當(dāng)?shù)膮?shù)，包括在被比較的序列全長上獲得最大比對所需要的任意算法。然而，為了本文的目的，氨基酸序列同一性％值使用序列比較計(jì)算機(jī)程序ALIGN-2產(chǎn)生。ALIGN-2序列比較計(jì)算機(jī)程序由Genentech，Inc.所有，并且源編碼已經(jīng)提交美國版權(quán)局(U. S. Copyright Office, Washington D. C. , 20559)的用戶文件，在那里其注冊為美國版權(quán)注冊號(hào)TXU510087。ALIGN-2程序可從加利福尼亞州南舊金山的Genentech, Inc.公眾獲得，或者可以由源編碼進(jìn)行編碼。ALIGN-2程序應(yīng)該為在UNIX操作系統(tǒng)、包括數(shù)字UNIX V4. OD上應(yīng)用進(jìn)行編碼。所有序列比較參數(shù)通過ALIGN-2程序設(shè)定并且不變化。 在使用ALIGN-2進(jìn)行氨基酸序列比較的情形中，給定的氨基酸序列A對于、與或針對給定的氨基酸序列B的氨基酸序列同一性％ (其可以備選地表述為具有或包括對于、與或針對給定的氨基酸序列B的特定氨基酸序列同一性％的給定的氨基酸序列A)計(jì)算如下100X 分?jǐn)?shù) X/Y其中X是在A和B的ALIGN-2程序比對中被序列比對程序ALIGN-2得分為相同匹配的氨基酸殘基的數(shù)目，并且Y是B中氨基酸殘基的總數(shù)。應(yīng)該理解，在氨基酸序列A的長度不等于氨基酸序列B的長度的情形中，A對于B的氨基酸序列同一性％不等于B對于A的氨基酸序列同一性％。除非另外特別闡明，本文所用的所有氨基酸序列同一性％值如在緊接本段的前段中所述使用ALIGN-2計(jì)算機(jī)程序獲得。在一些實(shí)施方案中，試劑是“外周施用的”或“施用在外周的”。當(dāng)用于本文時(shí)，這些術(shù)語是指藥劑、例如治療劑對個(gè)體的任何形式的施用，其不是直接施用至CNS，例如，其使得該試劑與血腦屏障的非腦一側(cè)相接觸。外周施用包括，但不限于，靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)皮、吸入、經(jīng)頰(transbuccal)、鼻內(nèi)、直腸和口服施用。術(shù)語“藥物制劑”是指這樣的制劑，其采用允許其中所包含的活性成分的生物學(xué)活性有效的形式，并且其不包含對要施用該制劑的受試者有不可接受的毒性的另外的成分?！八幱幂d體”是指藥用制劑中除活性成分之外的成分，其對受試者無毒。藥用載體包括，但不限于，緩沖齊 、賦形齊 、穩(wěn)定劑或防腐劑。術(shù)語“穿梭試劑”當(dāng)用于本文時(shí)是指包含至少一種LRP8-結(jié)合分子和至少一種CNS-活性化合物的化合物，其中所述至少一種LRP8-結(jié)合分子共價(jià)地(即，直接融合或接頭-介導(dǎo)的綴合)或非共價(jià)地(即，通過離子或疏水相互作用)綴合到所述至少一種CNS-活性化合物上。作為非限制性實(shí)例，穿梭試劑包括特異性結(jié)合LRP8和所需要的治療性或診斷性CNS靶標(biāo)中任一種的多特異性融合蛋白。“治療有效的”是指產(chǎn)生比在不患有病癥的個(gè)體中的平均或正常狀況更好的狀況(即，與不受折磨或無癥狀的受試者中的正?；蚱骄鶢顟B(tài)相比，在受試者中可至少部分歸因于CNS的功能行使的超常作用，如改善的認(rèn)知、記憶、情緒或其他特征)的產(chǎn)生。當(dāng)用于本文時(shí)，“治療(treatment)”(及其語法變化，如“進(jìn)行治療(treat) ”或“正在治療(treating)”)是指嘗試改變被治療的個(gè)體的天然過程的臨床干預(yù)，并且可以為預(yù)防目的而進(jìn)行或者在臨床病理學(xué)過程中進(jìn)行。治療的理想作用包括，但不限于，預(yù)防疾病的發(fā)生或復(fù)發(fā)，減輕癥狀，消除任何直接的或間接的疾病病理學(xué)后果，防止轉(zhuǎn)移，減小疾病進(jìn)展的速度，改善或減輕疾病狀況，并且減退或改善的預(yù)后。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物和方法用于延緩疾病或病癥的發(fā)展或者減緩疾病或病癥(即，CNS疾病或CNS病癥)的進(jìn)展。術(shù)語“可變區(qū)”或“可變結(jié)構(gòu)域”是指抗體重鏈或輕鏈參與抗體與抗原結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。天然抗體的重鏈和輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域(分別為VH和VL)通常具有相似的結(jié)構(gòu)，每個(gè)結(jié)構(gòu)域包括4個(gè)保守構(gòu)架區(qū)(FRs)和3個(gè)高變區(qū)(HVRs) 。(參見，例如，Kindt等KubyImmunology,第 6 版，W. H. Freeman and Co·,第 91 頁(2007)。)單一VH 或 VL 結(jié)構(gòu)域可以足以賦予抗原-結(jié)合特異性。此外，結(jié)合特定抗原的抗體可以使用來自結(jié)合該抗原的抗體的VH或VL結(jié)構(gòu)域分離，以分別篩選互補(bǔ)VL或VH結(jié)構(gòu)域的文庫。參見，例如，Portolano等，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)150 :880-887 (1993) ；Clarkson 等，Nature (自然)352 624-628(1991)。術(shù)語“載體”當(dāng)用于本文時(shí)是指能夠增殖其所連接的另一種核酸的核酸分子。該術(shù)語包括作為自我復(fù)制核酸結(jié)構(gòu)的載體以及結(jié)合到其被引入的宿主細(xì)胞的基因組中的載體。某些載體能夠指導(dǎo)與其可操作連接的核酸的表達(dá)。這樣的載體在本文中稱為“表達(dá)載體”。II.組合物和方法血腦屏障(是將多種外周-施用的化合物遞送至中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的限制因素。具體地，BBB對能夠自由滲透到CNS中的分子設(shè)置大小限制。通常，大分子治療齊U，如重組蛋白、反義藥物、基因藥物、單克隆抗體、或基于RNA干擾(RNAi)的藥物不能以藥學(xué)顯著量有效地穿過BBB。盡管通常認(rèn)為小分子藥物能夠穿過BBB，但是，由于它們?nèi)鄙俅┻^BBB的轉(zhuǎn)運(yùn)，事實(shí)上有< 2%的所有小分子藥物在腦中有活性。一般說來，為了以藥學(xué)顯著量穿過BBB，分子必須是脂溶性的并且具有小于400道爾頓的分子量，并且絕大部分小的有機(jī)分子不具有這兩種分子特征。因此，BBB是用于腦和CNS的新的治療劑、診斷劑和研究工具開發(fā)中的限制步驟。為了避開或回避這一 BBB問題，已經(jīng)使用了侵入式經(jīng)顱藥物遞送策略，諸如腦室內(nèi)(ICV)輸注、腦內(nèi)(IC)施用和對流增強(qiáng)的擴(kuò)散(CED)。還已經(jīng)使用了可植入性裝置。這些到腦的經(jīng)顱藥物遞送方法的每一種都是昂貴的、侵入性的和大部分無效的。ICV途徑典型地僅將蛋白遞送至腦的室管膜表面，不遞送到腦實(shí)質(zhì)中。此外，由于腦內(nèi)的低效率藥物擴(kuò)散，IC施用通常導(dǎo)致將藥物僅遞送至注射部位的局部區(qū)域。本發(fā)明提供一種關(guān)于這些高侵入性的和通常不令人滿意的方法的備選方案，以避開BBB，允許試劑，例如肽、蛋白和抗體由外周血穿過BBB。本發(fā)明是基于在BBB中存在的內(nèi)源性轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的應(yīng)用來提供一種將需要的物質(zhì)由外周血轉(zhuǎn)運(yùn)到CNS中的機(jī)制。本發(fā)明還闡述了尚未解決的將試劑穿過BBB遞送至CNS中的一種重要的關(guān)鍵因素到腦的腦特異性遞送。還沒有記述高度腦特異性的受體介導(dǎo)的遞送。先前用于遞送的大部分受體也在外周組織中高度表達(dá)，使得不可能用這些分子進(jìn)行僅腦特異性的遞送。提高的腦特異性的優(yōu)點(diǎn)是所施用的化合物更高的功效，以及在給定化合物劑量更少的潛在副作用。本發(fā)明提供令人驚訝的發(fā)現(xiàn)，即，LRP8是一種高度BBB-特異性的蛋白，其可以用于促進(jìn)通常不能穿過BBB滲透到腦中的其他分子的轉(zhuǎn)運(yùn)，所述其他分子包括生物學(xué)分子，如抗體。LRP8是低密度脂蛋白受體(LDLR)家族的一員(Brown和Goldstein, Science (科學(xué))232 (1986) 34-47);然而，LRP8包含另外的外顯子，其編碼在細(xì)胞質(zhì)尾中的新穎的59個(gè)氨基酸片段，其包括關(guān)于Src同源性3(SH3)_結(jié)合基序的最小共有序列的三個(gè)潛在的拷貝(Riddell 等，J. Lipid Res.(脂質(zhì)研究雜志)40 (1999) : 1925-1930)。LRP8 的結(jié)構(gòu)示意圖顯示在圖I中。LRP8具有幾個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域,包括在N端附近由7個(gè)重復(fù)組成的配體-結(jié)合重復(fù)區(qū)(連續(xù)編號(hào)，在最N端部分從I開始，在重復(fù)區(qū)的最C端部分為7)，EGF重復(fù)區(qū)，YWTD β -螺旋槳區(qū)和糖結(jié)構(gòu)域。在短跨膜區(qū)之后，蛋白的C-端信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域位于細(xì)胞內(nèi)。與其他所述的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相比，LRP8更加特異性地在腦/血腦屏障中表達(dá)。先前已經(jīng)顯示在人中，LRP8主要在腦和胎盤中表達(dá)，并且在其他組織中是不可檢測的(Novak等， J. Biol. Chem.(生物化學(xué)雜志)271 :11732-11736(1996) ;Kim 等，J. Biol. Chem.(生物化學(xué)雜志)271 :8373-8380 (1996))。對于使用其的治療劑，與如果也在外周以及腦中發(fā)生結(jié)合時(shí)另外需要的治療劑劑量相比，LRP8的高特異性不僅允許使用更小劑量的治療劑，還可以通過降低治療劑對除腦/CNS外的其他器官的暴露而減少或防止治療劑的潛在的副作用。本發(fā)明的一個(gè)目的是提供能夠穿過BBB并且進(jìn)入腦發(fā)揮其治療和/或診斷功能的治療性和診斷性組合物。因此，本發(fā)明提供包含LRP8-結(jié)合分子和CNS-活性化合物二者的化合物，其中所述LRP8-結(jié)合分子結(jié)合LRP8并且實(shí)施將所述化合物穿過BBB的轉(zhuǎn)移，并且所述CNS-活性化合物在腦中具有需要的治療性和/或診斷性功能。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分特異性結(jié)合LRP8。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子以導(dǎo)致其穿過BBB轉(zhuǎn)運(yùn)的方式特異性結(jié)合LRP8。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子以導(dǎo)致所述LRP8-結(jié)合分子及其締合的穿梭試劑的其余部分穿過BBB轉(zhuǎn)運(yùn)的方式特異性結(jié)合LRP8。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分是LRP8的天然配體。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子是顫蛋白。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子是具有SEQ ID NO :3的氨基酸序列的蛋白。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子是含硒蛋白質(zhì)P。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子是具有SEQ ID NO :4的氨基酸序列的蛋白。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分是LRP8的天然配體的修飾形式。在一個(gè)方面中，所述天然配體通過添加標(biāo)記而被修飾。在一個(gè)方面中，所述標(biāo)記選自放射性標(biāo)記、熒光團(tuán)、生色團(tuán)和親和標(biāo)簽。在一個(gè)方面中，所述天然配體通過添加、缺失或置換一個(gè)或多個(gè)氨基酸而被修飾。在一個(gè)方面中，所述添加、缺失或置換相對于未修飾的天然配體與LRP8的結(jié)合調(diào)節(jié)修飾的天然配體與LRP8的結(jié)合。在一個(gè)這樣的方面中，所述調(diào)節(jié)是增加的結(jié)合。在一個(gè)這樣的方面中，所述調(diào)節(jié)是減少的結(jié)合。在一個(gè)方面中，所述添加、缺失或置換調(diào)節(jié)所述修飾的天然配體通過LRP8穿過BBB的轉(zhuǎn)運(yùn)。在一個(gè)這樣的方面中，穿過BBB的轉(zhuǎn)運(yùn)被提高。在一個(gè)這樣的方面中，穿過BBB的轉(zhuǎn)運(yùn)被減少。在一個(gè)方面中，天然配體的所述修飾形式是修飾的顫蛋白。在一個(gè)方面中，天然配體的所述修飾形式是修飾的SEQ IDNO :3的蛋白。在一個(gè)方面中，天然配體的所述修飾形式是修飾的含硒蛋白質(zhì)P。在一個(gè)方面中，天然配體的所述修飾形式是修飾的SEQ ID NO :4的蛋白。在一個(gè)方面中，天然配體的所述修飾形式是一種免疫綴合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分是LRP8的天然配體的LRP8-結(jié)合片段。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合片段是顫蛋白的片段。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合片段是具有SEQ ID NO :3的氨基酸序列的蛋白的片段。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合片段是含硒蛋白質(zhì)P的片段。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合片段是具有SEQ IDNO 4的氨基酸序列的蛋白的片段。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分是LRP8的天然配體修飾形式的LRP8-結(jié)合片段。在一個(gè)方面中，所述天然配體通過添加標(biāo)記而被修飾。在一個(gè)方面中，所述標(biāo)記選自放射性標(biāo)記、熒光團(tuán)、生色團(tuán)和親和標(biāo)簽。在一個(gè)方面中，所述天然配體通過添加、缺失或置換一個(gè)或多個(gè)氨基酸而被修飾。在一個(gè)方面中，所述添加、缺失或置換相對于天然配體的未修飾的LRP8-結(jié)合片段與LRP8的結(jié)合調(diào)節(jié)修飾的天然配體的LRP8-結(jié)合片段與LRP8的結(jié)合。在一個(gè)這樣的方面中，所述調(diào)節(jié)是增加的結(jié)合。在一個(gè)這樣的方面中，所述調(diào)節(jié)是減少的結(jié)合。在一個(gè)方面中，所述添加、缺失或置換調(diào)節(jié)修飾的天然配體的LRP8-結(jié)合片段通過LRP8穿過BBB的轉(zhuǎn)運(yùn)。在一個(gè)這樣的方面中，穿過BBB的轉(zhuǎn)運(yùn)被提高。在一個(gè)這樣的方面中，穿過BBB的轉(zhuǎn)運(yùn)被減少。在一個(gè)方 面中，天然配體的LRP8-結(jié)合片段的修飾形式是修飾的顫蛋白的LRP8-結(jié)合片段。在一個(gè)方面中，天然配體的LRP8-結(jié)合片段的修飾形式是修飾的SEQ ID NO 3的蛋白的LRP8-結(jié)合片段。在一個(gè)方面中，天然配體的LRP8-結(jié)合片段的修飾形式是修飾的含硒蛋白質(zhì)P的LRP8-結(jié)合片段。在一個(gè)方面中，天然配體的LRP8-結(jié)合片段的修飾形式是修飾的SEQ IDNO 4的蛋白的LRP8-結(jié)合片段。在一個(gè)方面中，天然配體的LRP8-結(jié)合片段的修飾形式是一種免疫綴合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分結(jié)合LRP8的配體結(jié)合重復(fù)區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分結(jié)合LRP8的配體結(jié)合重復(fù)I。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分結(jié)合LRP8的配體結(jié)合重復(fù)2。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分結(jié)合LRP8的配體結(jié)合重復(fù)3。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分結(jié)合LRP8的配體結(jié)合重復(fù)4。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分結(jié)合LRP8的配體結(jié)合重復(fù)5。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分結(jié)合LRP8的配體結(jié)合重復(fù)6。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分結(jié)合LRP8的配體結(jié)合重復(fù)7。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分結(jié)合LRP8的EGF重復(fù)區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分結(jié)合LRP8的YWTD β -螺旋槳區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分結(jié)合LRP8的糖結(jié)構(gòu)域區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分是抗體。在一個(gè)方面中，所述抗體是單克隆抗體。在一個(gè)方面中，所述抗體是嵌合抗體。在一個(gè)方面中，所述抗體是人源化的抗體。在一個(gè)方面中，所述抗體是人抗體。在一個(gè)方面中，所述抗體是多特異性抗體。在一個(gè)方面中，所述抗體被標(biāo)記。在一個(gè)這樣的方面中，所述標(biāo)記選自放射性標(biāo)記、熒光團(tuán)、生色團(tuán)和親和標(biāo)簽。在一個(gè)方面中，所述抗體具有足以允許其穿過BBB的轉(zhuǎn)運(yùn)的針對LRP8的親和力。在一個(gè)方面中，所述抗體具有足以允許穿梭試劑的其余部分(其是跨過BBB的部分)穿過BBB轉(zhuǎn)運(yùn)的針對LRP8的親和力。在一個(gè)方面中，所述抗體不具有效應(yīng)子功能。在一個(gè)方面中，所述抗體確實(shí)具有效應(yīng)子功能。在一個(gè)方面中，所述抗體同種型選自IgGl，IgG2，IgG3，IgG4，IgM, IgA, IgD和IgE。在一個(gè)方面中，所述抗體結(jié)合LRP8的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。在一個(gè)方面中，所述抗體與一種或多種LRP8的天然配體競爭與LRP8細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合。在一個(gè)方面中，所述抗體不與一種或多種LRP8的天然配體競爭與LRP8細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合。在另一個(gè)方面中，前述任一方面的抗體是結(jié)合LRP8的抗體片段。在一個(gè)實(shí)施方案中，穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分選自肽、適體和小分子。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子的結(jié)合親和力足以允許其穿過BBB的轉(zhuǎn)運(yùn)。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子具有足以允許穿梭試劑的其余部分(其是跨過BBB的部分)穿過BBB轉(zhuǎn)運(yùn)的針對LRP8的親和力。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子是LRP8-結(jié)合肽。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子是適體。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子是小分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，穿梭試劑的CNS-活性化合物部分是對一種或多種CNS靶標(biāo)有作用的化合物。在一個(gè)方面中，所述作用在研究中是有用的。在一個(gè)方面中，所述作用是治療性作用。在一個(gè)方面中，所述作用是在診斷中有用的作用。在一個(gè)這樣的方面中，所述CNS-活性化合物結(jié)合CNS中的一種或多種靶標(biāo)并且允許那些靶標(biāo)成像。在一個(gè)這樣的方面中，所述CNS-活性化合物與一種或多種CNS靶標(biāo)的結(jié)合指示CNS疾病或病癥的存在或進(jìn)展。在一個(gè)實(shí)施方案中，穿梭試劑的CNS-活性化合物部分針對其治療CNS疾病或病癥的能力進(jìn)行選擇。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是神經(jīng)病。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是淀粉樣變性。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是癌癥。在一個(gè)方面中，所 述CNS疾病或病癥是眼科疾病或病癥。在一個(gè)方面中,所述CNS疾病或病癥是病毒或微生物感染。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是炎癥。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是缺血。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是神經(jīng)變性疾病。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是發(fā)作。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是行為障礙。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是溶酶體貯積病。在一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物消除所述疾病或病癥。在一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物減輕所述疾病或病癥的嚴(yán)重性或持續(xù)時(shí)間。在一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物防止所述疾病或病癥的發(fā)作或進(jìn)展。在一個(gè)實(shí)施方案中，穿梭試劑的CNS-活性化合物部分針對其檢測CNS疾病或病癥的能力進(jìn)行選擇。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是神經(jīng)病。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是淀粉樣變性。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是癌癥。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是眼科疾病或病癥。在一個(gè)方面中,所述CNS疾病或病癥是病毒或微生物感染。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是炎癥。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是缺血。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是神經(jīng)變性疾病。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是發(fā)作。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是行為障礙。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是溶酶體貯積病。在一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物在癥狀發(fā)作之前檢測所述疾病或病癥。在一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物允許評(píng)估所述疾病或病癥的嚴(yán)重性或持續(xù)時(shí)間。在一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物允許對所述疾病或病癥的非侵入性檢測和/或成像。在一個(gè)方面中，所述成像是通過放射線照相術(shù)進(jìn)行的。在一個(gè)方面中，所述成像是通過體層攝影術(shù)進(jìn)行的。在一個(gè)方面中，所述成像是通過核磁共振成像進(jìn)行的。
在一個(gè)實(shí)施方案中，CNS-活性化合物選自抗體、蛋白、肽、適體、抑制性核酸和小分子，或前述任一項(xiàng)的片段。在一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物是抗體。在一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物是蛋白。在一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物是肽。在一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物是適體。在一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物是抑制性核酸。在一個(gè)這樣的方面中，所述抑制性核酸是siRNA。在一個(gè)這樣的方面中，所述抑制性核酸是核酶。在一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物是小分子。在一個(gè)方面中，CNS-活性化合物是前述任一項(xiàng)保留其在CNS中的活性的片段。在一個(gè)方面中，CNS-活性化合物被標(biāo)記。在一個(gè)這樣的方面中，所述標(biāo)記選自放射性標(biāo)記、熒光團(tuán)、生色團(tuán)和親和標(biāo)簽。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述LRP8-結(jié)合分子與所述CNS-活性化合物綴合。在一個(gè)方面中，綴合通過無接頭的直接綴合進(jìn)行。在一個(gè)方面中，綴合通過接頭結(jié)構(gòu)部分的方式進(jìn)行。在一個(gè)方面中，綴合是共價(jià)的。在一個(gè)方面中，綴合是非共價(jià)的。在一個(gè)方面中，所述接頭在CNS內(nèi)可分解。在一個(gè)方面中，所述綴合導(dǎo)致所述LRP8-結(jié)合分子與所述CNS-活性 化合物中的每一個(gè)保留它們的正常結(jié)合和/或活性的一部分。在一個(gè)這樣的方面中，每一種原始活性的100%被保留。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述LRP8-結(jié)合分子是多特異性抗體。在一個(gè)方面中，所述多特異性抗體是雙特異性的。在一個(gè)這樣的方面中，所述抗體特異性結(jié)合LRP8并且還通過組成第二特異性的CNS-結(jié)合化合物的方式而結(jié)合另一種CNS靶標(biāo)。在一個(gè)實(shí)施方案中，穿梭試劑包含多于一種LRP8-結(jié)合分子。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子的每個(gè)實(shí)例是相同的。在一個(gè)方面中，所述LRP8-結(jié)合分子不同。在一個(gè)實(shí)施方案中，穿梭試劑包含多于一種CNS-活性化合物。在一個(gè)方面中，穿梭試劑中CNS-活性化合物的每個(gè)實(shí)例是相同的。在一個(gè)方面中，所述CNS-活性化合物不同。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的穿梭試劑被修飾以調(diào)節(jié)分子的血清半衰期。在一個(gè)方面中，所述穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分被修飾。在一個(gè)方面中，所述穿梭試劑的CNS-活性化合物部分被修飾。在一個(gè)方面中，所述穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分和CNS-活性化合物部分均被修飾。在一個(gè)方面中，所述修飾是糖基化。在一個(gè)方面中，所述修飾是聚乙二醇化。在一個(gè)方面中，所述修飾是添加Fe結(jié)構(gòu)域。在特定方面中，血清半衰期的平均值是未修飾的穿梭試劑的血清半衰期的至少約5倍大。在一個(gè)實(shí)施方案中，配制本發(fā)明任一前述化合物。在一個(gè)方面中，制劑是無菌的。在一個(gè)方面中，所述制劑具有藥用載體。在一個(gè)方面中，所述制劑適于施用途徑。在一個(gè)方面中，所述制劑還包含另外的化合物。在一個(gè)這樣的方面中，選擇所述另外的化合物來治療需要治療的疾病。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供編碼穿梭試劑的蛋白質(zhì)樣部分的核酸分子。在一個(gè)方面中，提供編碼穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分的核酸分子。在一個(gè)方面中，提供編碼穿梭試劑的CNS-活性化合物部分的核酸分子。在一個(gè)方面中，提供編碼穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子和CNS-活性化合物兩個(gè)部分的單一核酸分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供包含前述核酸分子中的任一種的載體。在一個(gè)方面中，所述載體是表達(dá)載體。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供轉(zhuǎn)化了本發(fā)明的載體的宿主細(xì)胞。在一個(gè)方面中，所述宿主細(xì)胞是原核宿主細(xì)胞。在一個(gè)方面中，所述宿主細(xì)胞是真核宿主細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供制備本發(fā)明的穿梭試劑的方法。在一個(gè)方面中，所述穿梭試劑是完全蛋白質(zhì)樣的，并且由本發(fā)明的宿主細(xì)胞表達(dá)和純化。在一個(gè)方面中，穿梭試劑僅有一部分是蛋白質(zhì)樣的，并且該部分由本發(fā)明的宿主細(xì)胞表達(dá)和純化。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的前述組合物中的任一種用于制備藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的前述組合物中的任一種用于制備用于治療CNS疾病或病癥的藥物。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是神經(jīng)病。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是淀粉樣變性。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是癌癥。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是眼科疾病或病癥。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病 或病癥是病毒或微生物感染。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是炎癥。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是缺血。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是神經(jīng)變性疾病。在一個(gè)方面中， 所述CNS疾病或病癥是發(fā)作。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是行為障礙。在一個(gè)方面中,所述CNS疾病或病癥是溶酶體貯積病。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的前述組合物中的任一種用于制備用于檢測CNS疾病或病癥的藥物。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是神經(jīng)病。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是淀粉樣變性。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是癌癥。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是眼科疾病或病癥。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是病毒或微生物感染。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是炎癥。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是缺血。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是神經(jīng)變性疾病。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是發(fā)作。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是行為障礙。在一個(gè)方面中，所述CNS疾病或病癥是溶酶體貯積病。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供使用本發(fā)明的前述組合物來治療受試者中的CNS疾病或病癥的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供使用本發(fā)明的前述組合物來檢測、分期或監(jiān)測受試者中CNS疾病或病癥的進(jìn)展的方法。在一個(gè)方面中，外周施用前述組合物中的任一種。在一個(gè)方面中，所述施用是口服的。在一個(gè)方面中，所述施用是靜脈內(nèi)的。在一個(gè)方面中，所述施用是肌內(nèi)的。在一個(gè)方面中，所述施用是皮下的。在一個(gè)方面中，所述施用是腹膜內(nèi)的。在一個(gè)方面中，所述施用是直腸的。在一個(gè)方面中，所述施用是經(jīng)口的。在一個(gè)方面中，所述施用是鼻內(nèi)的。在一個(gè)方面中，所述施用是經(jīng)皮的。在一個(gè)方面中，所述施用是吸入的。在一個(gè)方面中，施用約Img至約IOOmg的組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，CNS疾病或病癥可以通過施用本發(fā)明的穿梭試劑聯(lián)合非侵入性療法進(jìn)行治療。在一個(gè)方面中，所述療法是放射性療法。在另一個(gè)方面中，所述療法是行為療法或精神療法。A.示例性的穿梭試劑在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供與LRP8結(jié)合并且穿過BBB轉(zhuǎn)運(yùn)到CNS中的分離的穿梭試劑。如本文所述,穿梭試劑包含至少一種LRP8-結(jié)合分子和至少一種CNS-活性化合物。至少一種LRP8-結(jié)合分子與所述至少一種CNS-活性化合物之間綴合。所述穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分特異性結(jié)合LRP8并且促進(jìn)所述穿梭試劑穿過BBB的轉(zhuǎn)運(yùn)。特異性結(jié)合給定抗原的結(jié)合分子的鑒定和制備在本領(lǐng)域中是公知的。可以是本發(fā)明的LRP8-結(jié)合分子的特定分子包括，但不限于，抗體、肽、LRP8的天然配體(即，顫蛋白，ApoE,或含硒蛋白質(zhì)P)、LRP8的天然配體的修飾版本、適體和小分子，以及前述任一項(xiàng)的保留LRP8-結(jié)合活性的片段。在特定實(shí)施方案中，LRP8-結(jié)合分子不與LRP8的天然配體競爭與LRP8的結(jié)合。在特定實(shí)施方案中，LRP8-結(jié)合分子與LRP8的天然配體競爭與LRP8的結(jié)合。在特定實(shí)施方案中，LRP8-結(jié)合分子不干擾LRP8的正常功能行使。在特定實(shí)施方案中，LRP8-結(jié)合分子拮抗正常的LRP8功能。在特定實(shí)施方案中，LRP8-結(jié)合分子激動(dòng)正常的LRP8功能。所述穿梭試劑的CNS-活性化合物部分在受試者的CNS中具有作用。CNS活性化合物包括，但不限于，治療性化合物、診斷性化合物和具有在研究中有用的作用的化合物。治療性CNS-活性化合物是有效治療一種或多種CNS疾病或病癥、預(yù)防一種或多種CNS疾病或病癥的發(fā)作或發(fā)展、或減小或防止一種或多種CNS疾病或病癥的嚴(yán)重性、持續(xù)或癥狀的化合物。診斷性CNS活性化合物是有效用于診斷或分期一種或多種CNS疾病或病癥或有效用于一個(gè)或多個(gè)腦部區(qū)域成像的化合物?？梢允潜景l(fā)明的CNS-活性化合物的特定分子包括，但不限于，CNS靶標(biāo)結(jié)合分子、
CNS靶標(biāo)抑制劑、CNS靶標(biāo)激活劑、藥物、酶、細(xì)胞毒素和檢測分子(通常針對CNS或?qū)μ囟ǖ腃NS靶標(biāo)特異的)?？梢允潜景l(fā)明的CNS-活性化合物的特定分子包括，但不限于，抗體、肽、蛋白、一種或多種CNS靶標(biāo)的天然配體、一種或多種CNS靶標(biāo)的天然配體的修飾版本、適體、抑制性核酸(即，小的抑制性RNAs(siRNA)和短的發(fā)夾RNAs (shRNA))、核酶和小分子、或前述任一項(xiàng)的活性片段。示例性的本發(fā)明的CNS-活性化合物記述在本文中，并且包括，但不限于，抗體、適體、蛋白、肽、抑制性核酸和小分子以及前述任一項(xiàng)的本身或特異性識(shí)別CNS靶標(biāo)分子和/或?qū)NS靶標(biāo)分子作用(即，抑制、激活或檢測)的活性片段，所述CNS靶標(biāo)分子諸如，但不限于，淀粉樣前體蛋白或其部分、β淀粉樣蛋白、β -分泌酶、Y -分泌酶、tau、α -突觸核蛋白、帕金蛋白、亨廷頓蛋白、DR6、早老蛋白、ApoE、神經(jīng)膠質(zhì)瘤或其他CNS癌癥標(biāo)記以及神經(jīng)營養(yǎng)蛋白。當(dāng)將抗體與藥物綴合時(shí)，得到的復(fù)合物稱為抗體-藥物綴合物(ADC)。在一個(gè)實(shí)施方案中，穿梭試劑是一種ADC。除了先前已知的用于治療本文所述的CNS疾病或病癥的治療性化合物之外，例如，在下面G部分中所的化合物，其可以在特定實(shí)施方案中用作CNS-活性化合物，一般的細(xì)胞毒性藥物可以用作本發(fā)明的穿梭試劑中的一種或多種CNS-活性化合物。所述藥物包括,但不限于，美坦生類化合物(maytansinoid)(參見美國專利號(hào) 5，208，020，5，416，064 和歐洲專利 EP O 425 235B1) ;auristatin 如monomethylauristatin藥物結(jié)構(gòu)部分DE和DF(MMAE和MMAF)(參見美國專利號(hào)5，635, 483和 5，780，588，以及 7，498，298);多拉司他汀(dolastatin);卡奇霉素(calicheamicin)或其衍生物(參見美國專利號(hào) 5，712，374,5, 714，586,5, 739，116,5, 767，285,5, 770，701，5，770，710，5，773，001，和 5，877，296 ;Hinman 等，Cancer Res.(癌癥研究)53 :3336-3342(1993);和 Lode 等，Cancer Res.(癌癥研究)58 :2925-2928 (1998));蒽環(huán)霉素(anthracycline)如道諾霉素(daunomycin)或多柔比星(doxorubicin)(參見 Kratz等，Current Med. Chem.(當(dāng)前藥物化學(xué))13 :477-523 (2006) ; Jeffrey 等,Bioorganic &Med. Chem. Letters (生物有機(jī)和藥物化學(xué)通信)16 :358-362 (2006) ；Torgov 等，Bioconj.Chem.(生物綴合物化學(xué))16 :717-721 (2005) ;Nagy 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA(美國國家科學(xué)院學(xué)報(bào))97 :829-834(2000) ;Dubowchik 等，Bioorg. & Med. Chem. Letters (生物有機(jī)和藥物化學(xué)通信)12 =1529-1532 (2002) ；King等，J. Med. Chem.(藥物化學(xué)雜志)45 :4336-4343(2002);和美國專利號(hào) 6，630，579);甲氨喋呤(methotrexate);長春地辛(vindesine);紫杉燒(taxane)如多西他賽(docetaxel),紫杉醇(paclitaxel),拉羅他賽(Iarotaxel),替司他賽(tesetaxel),和奧他賽(ortataxel);單端孢霉烯族化合物(trichothecene);以及 CC1065。在另一個(gè)實(shí)施方案中，穿梭試劑包含至少一種CNS-活性化合物，所述CNS-活性化合物是酶活性毒素或其片段。所述毒素或其片段包括，但不限于，白喉A鏈，白喉毒素的非結(jié)合活性片段，外毒素A鏈(來自銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)),蓖麻毒蛋白A鏈，相思豆毒蛋白A鏈，蒴蓮根毒素A鏈，α-八疊球菌，油桐(Aleurites fordii)蛋白，石竹素蛋白，美洲商陸(Phytolaca americana)蛋白(PAPI，PAPII，和PAP-S)，苦瓜(momordica charantia)抑制劑，麻瘋樹毒蛋白，巴 毒蛋白，肥阜草(sapaonariaofficinalis)抑制劑，白樹毒素，mitogellin,局限曲菌素,酹霉素,依諾霉素,和單端孢霉烯族化合物。在任一前述實(shí)施方案中，穿梭試劑可以包含一個(gè)或多個(gè)結(jié)合放射性原子的部分以形成放射性綴合物。多種放射性同位素可用于制備放射性綴合物。實(shí)例包括At211，I131，I125， Y90，Re186, Re188, Sm153, Bi212，P32，Pb212和Lu的放射性同位素。當(dāng)使用放射性綴合物進(jìn)行檢測時(shí)，其可以包括用于閃爍研究的放射性原子，例如tc99m或1123，或用于核磁共振(NMR)成像(也已知為磁共振成像，mri)的自旋標(biāo)記，同樣如碘-123，碘-131，銦-111，氟-19，碳_13，氣-15,氧-17,禮,猛或鐵。在任一前述實(shí)施方案中，穿梭試劑中包含的抗體可以被人源化。在一個(gè)這樣的實(shí)施方案中，穿梭試劑中包含的抗體包含來自非人物種的蛋白的高變區(qū)(HVRs)，并且還包含接受體人構(gòu)架，例如，人免疫球蛋白構(gòu)架或人共有構(gòu)架。在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，按照任一前述實(shí)施方案穿梭試劑中包含的抗體是單克隆抗體，包括嵌合抗體、人源化的抗體或人抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，穿梭試劑中包含的抗體是抗體片段，例如，？ ？&13，？&13’，8(^^雙抗體，或？(&13’)2片段。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體是全長抗體，例如，本文定義的任一抗體種類或同種型的完整抗體。在另一個(gè)方面中，按照任一前述實(shí)施方案的穿梭試劑可以單獨(dú)地或組合地結(jié)合如在下述部分1-7中所述的任一特征I.親和力在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的穿梭試劑具有充分的針對LRP8的親和力，足以允許所綴合的CNS-活性化合物的LRP8-介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)。在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的穿梭試劑具有至少兩種親和力LRP8-結(jié)合分子部分具有針對LRP8的親和力，CNS-活性化合物具有針對至少一種CNS靶標(biāo)的親和力。在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的穿梭試劑具有^ I μ M,^ IOOnM, ^ IOnM, ^ InM, ^ O. InM, ^ O.OlnM，或彡 O. OOlnM(例如，1(Γ8Μ 以下，例如，KT8M至10_13M，例如，KT9M至I(T13M)的解離常數(shù)(Kd)。在一個(gè)實(shí)施方案中，Kd通過用目的蛋白及其靶標(biāo)結(jié)合配偶體按照本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行的放射性標(biāo)記的抗原結(jié)合測定法(RIA)測量。例如，對于包含F(xiàn)ab的穿梭試劑，測定可以如下進(jìn)行。Fabs對抗原的溶液結(jié)合親和力這樣測量通過在存在滴定系列的未標(biāo)記的抗原下用最低濃度的(125I)-標(biāo)記的抗原平衡Fab，然后用抗-Fab抗體-包被的平板捕獲所結(jié)合的抗原(參見，例如，Chen等，J. Mol. Biol.(分子生物學(xué)雜志)293 865-881 (1999))。為了確定用于該測定的條件，將MICROTITER多孔板(ThermoScientific)用在 50mM碳酸鈉(pH 9.6)中的 5yg/ml 的捕獲抗-Fab 抗體(Cappel Labs)包被過夜，隨后用在PBS中的2% (w/v)牛血清白蛋白在室溫下(約23°C )封閉2至5小時(shí)。在非吸附平板(Nunc#269620)上，將IOOpM或26pM[125I]-抗原與目的Fab的連續(xù)稀釋液混合(例如，與抗-VEGF抗體，F(xiàn)ab-12的測量一致,在Presta等，Cancer Res.(癌癥研究)57 :4593-4599 (1997))。然后將目的Fab溫育過夜；然而，溫育可以持續(xù)更長的時(shí)間期間(例如，約65小時(shí))以確保達(dá)到平衡。此后，將混合物轉(zhuǎn)移到捕獲平板中用于在室溫下溫育(例如，I小時(shí))。然后，去除溶液，將平板用在PBS中的O. 1%聚山梨酸酯20(吐溫20")洗滌八次。當(dāng)平板已經(jīng)干燥時(shí)，加入150 μ I/孔的閃爍劑(MICR0SCINT-20 ；Packard)，并將該平板在TOPCOUNT Y計(jì)數(shù)器(Packard)上計(jì)數(shù)10分鐘。選擇產(chǎn)生小于或等于20%最大結(jié)合的每種Fab的濃度用于競爭結(jié)合測定。按照另一個(gè)實(shí)施方案，Kd用表面等離子體共振測定法測量，所述表面等離子體共振測定法在25°C用以 10反應(yīng)單位(RU)的固定的靶標(biāo)(即，LRP8，或CNS靶標(biāo))CM5芯片使用BlACOREli -2000 或BIACORE !! -3000(BIAcore, Inc. ,Piscataway, NJ)進(jìn)行。簡 言之，將羧甲基化的葡聚糖生物傳感器芯片(CM5，BIAC0RE，Inc.)用N-乙基-N’ _(3_ 二甲基氨基丙基)_碳二亞胺鹽酸化物(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)按照供應(yīng)商的使用說明活化。將靶標(biāo)用IOmM pH 4. 8的乙酸鈉稀釋至5 μ g/ml ( O. 2 μ Μ)，然后以5 μ I/分鐘的流速注射，以獲得約10個(gè)反應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)的蛋白。在注射抗原后，注射IM的乙醇胺以封閉未反應(yīng)的基團(tuán)。對于動(dòng)力性測量，將以確定Kd(0. 78ηΜ至500ηΜ)的目的蛋白(例如，F(xiàn)ab，抗體，免疫綴合物，或其他結(jié)合蛋白)的兩倍連續(xù)稀釋液在25°C以大約25μ 1/min的流速注射在具有O. 05%聚山梨酸酯20(吐溫-20 )表面活性劑(PBST)的PBS中。使用簡單的一對一 Langmuir結(jié)合模型(BIACORE 評(píng)估軟件版本3. 2)通過同時(shí)擬合締合和解離傳感圖而計(jì)算締合速率(km)和解離速率(kf)。平衡解離常數(shù)(Kd)作為kf/lv比率計(jì)算。參見，例如，Chen等，J. Mol. Biol.(分子生物學(xué)雜志)293 :865-881 (1999)。如果通過上述表面等離子共振測定的on-速率超過IO6M4iT1,則該on-速率可以通過使用熒光猝滅技術(shù)確定，該熒光猝滅技術(shù)技術(shù)在25°C在存在增加濃度的抗原的條件下測量20nM在pH7. 2的PBS中的抗-抗原抗體(Fab形式)的熒光發(fā)射強(qiáng)度的增加或減少(激發(fā)=295nm ；發(fā)射=340nm, 16nm通帶)，所述抗原濃度如在分光光度計(jì)中測量,諸如在配備停流的分光光度計(jì)(stop-flow equipped spectrophometer) (Aviv Instruments)或具有攬拌小杯的8000-系統(tǒng)SLM-AMINC0 分光光度計(jì)(ThermoSpectronic)中測量。如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解的，可以容易地采用前述測定法來測量非-抗體結(jié)合分子。2.片段在特定實(shí)施方案中，穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分是較大LRP8-結(jié)合蛋白的LRP8-結(jié)合片段。在特定實(shí)施方案中，穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分是LRP8的天然配體的LRP8-結(jié)合片段，或其修飾版本。在特定實(shí)施方案中，穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分是抗-LRP8抗體的LRP8-結(jié)合片段?？贵w片段包括，但不限于，F(xiàn)ab，F(xiàn)ab’，F(xiàn)ab’ _SH，F(xiàn)(ab’)2，F(xiàn)v，和scFv片段，以及下文所述的其他片段。對于特定抗體片段的綜述，參見Hudson等Nat.Med.(自然醫(yī)藥)9 :129-134(2003)。對于scFv片段的綜述，參見，例如，Pluckthiin，在ThePharmacology of Monoclonal Antibodies (單克隆抗體的藥理學(xué))，卷 113, Rosenburg 和Moore 編,(Springer-Verlag, New York),第 269-315 頁(1994)中；還參見 WO 93/16185 ；和美國專利號(hào)5，571，894與5，587，458。對于包含補(bǔ)救受體結(jié)合表位殘基并且具有增加的體內(nèi)半衰期的Fab和F(ab' )2片段的討論，參見美國專利號(hào)5，869，046。在特定實(shí)施方案中，穿梭試劑包含多特異性抗體的片段。雙抗體是具有兩個(gè)抗原-結(jié)合位點(diǎn)的抗體片段，其可以是二價(jià)的或雙特異性的。參見，例如，EP 404, 097 ；W01993/01161 ;Hudson 等，Nat. Med.(自然醫(yī)藥)9 :129-134(2003);和 Hollinger 等，Proc.Natl. Acad. Sci. USA (美國國家科學(xué)院學(xué)報(bào))90 =6444-6448(1993)。三鏈抗體和四鏈抗體也記述在 Hudson 等，Nat. Med.(自然醫(yī)藥)9 :129-134(2003)中。在特定實(shí)施方案中，穿梭試劑包含一種或多種單結(jié)構(gòu)域抗體。單結(jié)構(gòu)域抗體是包含抗體的全部或部分重鏈可變結(jié)構(gòu)域或全部或部分輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗體片段。在特定實(shí)施方案中，單結(jié)構(gòu)域抗體是人單結(jié)構(gòu)域抗體(Domantis, Inc. , Waltham, MA ;參見,例如,美國專利號(hào) 6，248，516B1)。片段可以通過多種技術(shù)制備，包括但不限于，蛋白的蛋白水解消化以及通過重組 宿主細(xì)胞(例如，大腸桿菌(E. coli)或噬菌體)產(chǎn)生，如本文所述。3.嵌合分子和人源化分子本發(fā)明的穿梭試劑包含LRP8-結(jié)合分子和CNS-活性化合物二者，并且因此是嵌合分子。在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分是嵌合分子。在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的穿梭試劑的CNS-活性化合物部分是嵌合分子。在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的作為穿梭試劑的抗體或其部分是嵌合抗體。特定的嵌合抗體記述在，例如，美國專利號(hào)4，816，567 ;和Morrison等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA(美國國家科學(xué)院學(xué)報(bào))，81 =6851-6855(1984))中。在一個(gè)實(shí)例中，嵌合抗體包含非人可變區(qū)(例如，來源于小鼠、大鼠、倉鼠、兔、或非人靈長動(dòng)物如猴的可變區(qū))和人恒定區(qū)。在另一個(gè)實(shí)例中，嵌合抗體是“種類轉(zhuǎn)換的”抗體，其中種類或亞類已經(jīng)由親本抗體的種類或亞類變化。嵌合抗體包括其抗原-結(jié)合片段。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解，修飾來源于非人物種的穿梭試劑中的一種或多種氨基酸是合乎需要的，以使其在面對人免疫系統(tǒng)時(shí)更加“人化”和/或當(dāng)施用給人時(shí)增加其活性或半衰期。在非人抗體或嵌合抗體的情形中(其中，分別沒有抗體或一些抗體是來源于人分子的)，最常進(jìn)行“人源化”。在特定實(shí)施方案中，包含非人或嵌合抗體的穿梭試劑被人源化。在特定實(shí)施方案中，嵌合抗體是人源化抗體。典型地，非人抗體被人源化，以減少對人的免疫原性同時(shí)保留親本非人抗體的特異性和親和力。通常，人源化抗體包含一個(gè)或多個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，其中HVRs，例如，CDRs(或其部分)來源于非人抗體，F(xiàn)Rs(或其部分)來源于人抗體序列。人源化抗體任選地還將包含至少部分人恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，人源化抗體中的一些FR殘基被來自非人抗體(例如，HVR殘基所衍生的抗體)的相對應(yīng)的殘基置換，例如，以恢復(fù)或提高抗體的特異性或親和力。人源化抗體以及制備其的方法綜述于例如Almagro和Fransson, Front.Biosci. 13 :1619-1633 (2008)中，并且進(jìn)一步記述在例如 Riechmann 等，Nature (自然)332 :323-329(1988) ;Queen 等，Proc. Nat’ IAcad. Sci. USA (美國國家科學(xué)院學(xué)報(bào))86 :10029-10033(1989);美國專利號(hào) 5，821，337，7，527，791，6，982，321，和 7, 087, 409 ；Kashmiri 等，Methods (方法)36 :25-34(2005)(描述 SDR(a-CDR)移接)；Padlan,Mol. Immunol.(分子免疫學(xué))28 =489-498(1991)(描述“表面再建”);Dall，Acqua 等，Methods (方法)36 :43-60(2005)(描述 “FR 改組”)；和 Osbourn 等，Methods (方法)36 61-68(2005)與 Klimka 等，Br. J. Cancer (英格蘭癌癥雜志)，83 =252-260(2000)(描述針對FR改組的“引導(dǎo)選擇”方法)。可以用于人源化的人構(gòu)架區(qū)包括但不限于使用“最佳適配”法(參見，例如，Sims等J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)151 :2296(1993))選擇的構(gòu)架區(qū)；來源于特定亞組的輕鏈或重鏈可變區(qū)的人抗體的共有序列的構(gòu)架區(qū)(參見，例如，Carter等Proc. Natl. Acad. Sci.USA(美國國家科學(xué)院學(xué)報(bào))，89 :4285(1992) JPPresta等J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)，151 2623(1993));人成熟的(體細(xì)胞成熟的)構(gòu)架區(qū)或人種系構(gòu)架區(qū)(參見，例如，Almagro和Fransson, Front. Biosci. 13 :1619-1633 (2008));以及來源于篩選 FR 文庫的構(gòu)架區(qū)(參見，例如，Baca 等，J. Biol. Chem.(生物化學(xué)雜志)272 :10678-10684 (1997)和 Rosok 等，J. Biol. Chem.(生物化學(xué)雜志)271 :22611-22618 (1996))。4.人分子在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的穿梭試劑是人源的。在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的穿梭試劑中所包含的抗體是人抗體。人抗體可以使用本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)制備。人抗體通常記述在van Dijk和van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol.(當(dāng)前藥理學(xué)觀點(diǎn))5 :368-74 (2001)和 Lonberg, Curr. Opin. Immunol.(當(dāng)前免疫學(xué)觀點(diǎn))20 450-459(2008)中。人抗體可以通過給轉(zhuǎn)基因動(dòng)物施用免疫原而制備，所述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物已經(jīng)被修飾來響應(yīng)抗原刺激產(chǎn)生完整的人抗體或具有人可變區(qū)的完整抗體。這樣的動(dòng)物典型地包含全部或部分人免疫球蛋白基因座，其替代內(nèi)源性免疫球蛋白基因座，或者其存在于染色體外或隨機(jī)整合到動(dòng)物的染色體中。在這樣的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中，通常內(nèi)源性免疫球蛋白基因座已被失活。關(guān)于從轉(zhuǎn)基因動(dòng)物獲得人抗體的方法的綜述，參見Lonberg, Nat. Biotech.(自然生物技術(shù))23 :1117-1125(2005) ο還參見，例如，美國專利號(hào)6，075，181和6，150,584，其描述XEN0M0USE 技術(shù)；美國專利號(hào)5，770，429，其描述HuMAB 技術(shù)；美國專利號(hào)7，041，870，其描述K-M MOUSE 技術(shù)，和美國專利申請公布號(hào)US 2007/0061900，其描述VelociMouse 技術(shù))。來自由這樣的動(dòng)物產(chǎn)生的完整抗體的人可變區(qū)可以進(jìn)一步修飾，例如，通過與不同的人恒定區(qū)組合進(jìn)行修飾。人抗體還可以通過基于雜交瘤的方法制備。已經(jīng)記述了用于產(chǎn)生人單克隆抗體的人骨髓瘤和小鼠-人異種骨髓瘤細(xì)胞系。(參見，例如，Kozbor J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)，133 :3001 (1984) ;Brodeur 等，Monoclonal Antibody Production Techniques andApplications (單克隆抗體生產(chǎn)技術(shù)和應(yīng)用)，第51-63頁(Marcel Dekker, Inc.，紐約，1987)；和 Boerner 等，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志),147 86 (1991)。)通過人 B 細(xì)胞雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的人抗體也記述在Li等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (美國國家科學(xué)院學(xué)報(bào))，103 =3557-3562(2006)中。另外的方法包括記述在例如美國專利號(hào)7，189,826(描述由雜交瘤細(xì)胞系生產(chǎn)單克隆人IgM抗體)和Ni, Xiandai Mianyixue (現(xiàn)代免疫學(xué))，26 (4) =265-268 (2006)(描述人-人雜交瘤)。人雜交瘤技術(shù)(三源雜交瘤技術(shù))還記述在 Vollmers 和 Brandlein, Histology and Histopathology (組織學(xué)和組織病理學(xué)學(xué))，20(3) :927-937 (2005)與 Vollmers和Brandlein,Methods and Findings in Experimentaland Clinical Pharmacology (實(shí)驗(yàn)和臨床藥理學(xué)方法和發(fā)現(xiàn))，27 (3) :185-91 (2005)。、
人抗體還可以通過分離選自人來源的噬菌體展示文庫的Fv克隆可變結(jié)構(gòu)域序列而產(chǎn)生。然后，可以將所述可變結(jié)構(gòu)域序列與需要的人恒定結(jié)構(gòu)域組合。從抗體文庫選擇人抗體的技術(shù)記述在下文中。5.文庫來源的蛋白本發(fā)明的穿梭試劑、LRP8-結(jié)合分子和CNS-活性化合物可以通過篩選關(guān)于具有一種或多種所需要的活性的穿梭試劑、LRP8-結(jié)合分子和CNS-活性化合物的組合文庫而分離。例如，本領(lǐng)域已知有多種方法用于產(chǎn)生噬菌體文庫并且篩選所述文庫獲得具有所需要的結(jié)合特征的蛋白。這樣的方法綜述在例如Sidhu等，編，Phage DisplayIn Biotechnology and Drug Discovery (生物技術(shù)和藥物發(fā)現(xiàn)中的卩遼菌體展不)，CRCPress (2005) ;Hoogenboom 等 Methods in Molecular Biology (分子生物學(xué)方法)178 :1-37 (O，Brien 等，編，Human Press, Totowa, NJ, 2001),并且進(jìn)一步記述在例如 McCafferty等，Nature (自然)348 :552-554 ;Clackson 等，Nature (自然)352 :624-628(1991) ；Marks等，J. Mol. Biol.(分子生物學(xué)雜志)222 :581-597 (1992) ；Marks 和 Bradbury, Methods in Molecular Biology (分子生物學(xué)方法)248 :161-175 (Lo,編，Human Press, Totowa,NJ, 2003) ；Sidhu 等，J. Mol. Biol.(分子生物學(xué)雜志)338 (2) :299-310 (2004) ；Lee 等，J. Mol. Biol.(分子生物學(xué)雜志)340(5) :1073-1093(2004) ；Fellouse, Proc. Natl. Acad.Sci. USA(美國國家科學(xué)院學(xué)報(bào))101 (34) :12467-12472(2004);和 Lee 等，J. Immunol.Methods (免疫學(xué)方法雜志)284 (1-2) 119-132 (2004)。在針對抗體鑒別的特定噬菌體展示方法中，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)分別克隆VH和VL基因的全體成員庫，并且在噬菌體文庫中隨機(jī)重組，然后，其可以篩選抗原結(jié)合噬菌體，如在Winter等，Ann. Rev. Immunol.(免疫學(xué)年度綜述)，12 =433-455 (1994)中所述。噬菌體典型地展示抗體片段，作為單鏈Fv(ScFv)片段或作為Fab片段。來自被免疫的來源的文庫提供針對免疫原的高親和力抗體，不需要構(gòu)建雜交瘤。備選地，可以克隆未接觸抗原的全體成員庫(例如，來自人)，從而提供單一來源的抗體至寬泛范圍的非自體以及自體抗原，而無需任何的免疫，如Griffiths等，EMBO J，12 :725-734 (1993)所述。最后，未接觸抗原的文庫還可以這樣合成制備通過克隆來自干細(xì)胞的未重排的V基因片段，并且使用包含隨機(jī)序列的PCR引物來編碼高度可變的CDR3區(qū)并且在體外完成重排，如 Hoogenboom 和 Winter, J. Mol. Biol.(分子生物學(xué)雜志)，227 :381-388 (1992)所述。描述人抗體噬菌體文庫的專利公布包括，例如美國專利號(hào)5，750，373，和美國專利公布號(hào) 2005/0079574,2005/0119455,2005/0266000,2007/0117126,2007/0160598,2007/0237764, 2007/0292936，和 2009/0002360。由人文庫分離的蛋白(即，抗體或抗體片段)在本文中認(rèn)為是人蛋白。6.多特異性抗體在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的穿梭試劑是多特異性抗體，例如，雙特異性抗體。多特異性抗體是對至少兩個(gè)不同位點(diǎn)具有結(jié)合特異性的單克隆抗體。在特定實(shí)施方案中，一種結(jié)合特異性是針對LRP8的并且另一種結(jié)合特異性是針對任意其他CNS靶標(biāo)的。在特定實(shí)施方案中，多特異性抗體可以結(jié)合LRP8和任意其他CNS靶標(biāo)的兩個(gè)不同表位。多特異性抗體還可以用來將CNS-活性化合物定位到表達(dá)LRP8的細(xì)胞。多特異性抗體可以制備為全長抗體或抗體片段。
用于制備多特異性抗體的技術(shù)包括，但不限于，具有不同特異性的兩種免疫球蛋白重鏈-輕鏈對的重組共表達(dá)(參見Milstein和Cuello，Nature(自然)305 =537(1983)),WO 93/08829，和 Traunecker 等，EMBO J. 10 :3655 (1991))，和“凸起-在-孔中”改造(參見，例如，美國專利號(hào)5，731，168)。多特異性抗體還可以這樣制備通過改造靜電操作作用(engineering electrostatic steering effects)用于制備抗體 Fe-異型二聚體分子(WO 2009/089004A1);交聯(lián)兩種或多種抗體或片段(參見，例如，美國專利號(hào)4，676，980，和Brennan等，Science (科學(xué))，229 :81 (1985));使用亮氨酸拉鏈以產(chǎn)生雙特異性抗體(參見，例如，Kostelny 等，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)，148 (5) :1547-1553(1992));使用“雙抗體”技術(shù)制備雙特異性抗體片段(參見，例如，Hollinger等,Proc. Natl. Acad. Sci. USA(美國國家科學(xué)院學(xué)報(bào))，90 =6444-6448(1993));和使用單鏈Fv (sFv) 二聚體(參見，例如，Gruber等，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)，152 :5368(1994));和制備三特異性抗體，如例如在Tutt 等，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)147 60 (1991)中所述。 具有三個(gè)以上功能抗原結(jié)合位點(diǎn)的改造的抗體,包括“章魚(Octopus)抗體”也包括在本文中(參見，例如，US 2006/0025576A1)。本發(fā)明的抗體或片段還包括“雙重作用Fab (Dual Acting FAb) ”或“DAF”，其包含結(jié)合LRP8以及另一個(gè)不同抗原(例如參見，US 2008/0069820)，即CNS靶標(biāo)的抗原結(jié)合位點(diǎn)。7.穿梭試劑變體在特定實(shí)施方案中，考慮本發(fā)明提供的穿梭試劑的氨基酸序列變體。例如，當(dāng)所述部分是蛋白時(shí)，可以理想地提高穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子部分或CNS-活性化合物部分、或上述兩個(gè)部分的結(jié)合親和力和/或其他生物學(xué)特性。所有或部分穿梭試劑的氨基酸序列變體可以通過向編碼所述穿梭試劑或其部分的核苷酸序列中引入適當(dāng)?shù)男揎椈蛲ㄟ^肽合成制備。所述修飾包括，例如，從所述穿梭試劑的氨基酸序列中缺失、和/或插入和/或置換殘基?？梢赃M(jìn)行缺失、插入和置換的任意組合，以獲得最終構(gòu)建體，條件是最終構(gòu)建體具有所需要的特征，例如，靶標(biāo)結(jié)合，諸如結(jié)合LRP8和結(jié)合一種或多種所需要的CNS靶標(biāo)。a)置換、插入和缺失變體在特定實(shí)施方案中，提供具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸置換的穿梭試劑變體。本發(fā)明提供的穿梭試劑中的變異可以這樣進(jìn)行，例如，使用例如在美國專利號(hào)5，364，934中提及的保守和非保守突變的任意技術(shù)和指導(dǎo)進(jìn)行。當(dāng)考慮進(jìn)行修飾的穿梭試劑的一個(gè)或多個(gè)部分是抗體時(shí)，用于置換誘變的目的位點(diǎn)包括高變區(qū)和構(gòu)架區(qū)。保守氨基酸置換顯示在表I中，其標(biāo)題為“保守置換”。更實(shí)質(zhì)性的變化提供在表I中，其標(biāo)題為“示例性置換”，并且參照氨基酸側(cè)鏈種類在下文中進(jìn)一步描述。關(guān)于確定哪種或哪些氨基酸殘基可以插入、置換或缺失而不會(huì)不利地影響所需要的活性的指導(dǎo)可以通過將所述穿梭試劑的LRP8-結(jié)合分子和/或CNS-活性化合物的序列與已知同源的蛋白分子比較并且將在高度同源性區(qū)域中進(jìn)行氨基酸序列變化的數(shù)目減至最少而進(jìn)行。掃描氨基酸分析也可以用來沿著連續(xù)序列鑒定一種或多種氨基酸。氨基酸置換可以引入到目的穿梭試劑中，并且篩選產(chǎn)物的理想活性，例如，與LRP8和/或CNS靶標(biāo)的保留的/提高的結(jié)合或減少的免疫原性=。表I
權(quán)利要求
1.組合物，其包含LRP8-結(jié)合分子和至少一種CNS-活性化合物。
2.權(quán)利要求I的組合物，其中所述LRP8-結(jié)合分子與所述至少一種CNS-活性化合物綴入口 ο
3.權(quán)利要求2的組合物，其中所述綴合是所述LRP8-結(jié)合分子與所述至少一種CNS-活性化合物之間的共價(jià)連接。
4.權(quán)利要求2的組合物，其中所述綴合是通過接頭進(jìn)行的。
5.權(quán)利要求I的組合物，其中所述LRP8-結(jié)合分子選自LRP8的天然配體、LRP8的天然配體的片段、LRP8的天然配體的修飾形式和LRP8的天然配體的修飾形式的片段。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述LRP8的天然配體選自顫蛋白和含硒蛋白質(zhì)P。
7.權(quán)利要求I的組合物，其中所述LRP8-結(jié)合分子是抗體。
8.權(quán)利要求7的組合物，其中所述抗體是多特異性抗體。
9.權(quán)利要求7的組合物，其中所述抗體選自單克隆抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體和結(jié)合LRP8的抗體片段。
10.權(quán)利要求I的組合物，其中所述LRP8-結(jié)合分子不與一種或多種LRP8的天然配體競爭與LRP8的結(jié)合。
11.權(quán)利要求I的組合物，其中所述LRP8-結(jié)合分子與一種或多種LRP8的天然配體競爭與LRP8的結(jié)合。
12.權(quán)利要求I的組合物，其中所述LRP8-結(jié)合分子結(jié)合LRP8的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。
13.權(quán)利要求I的組合物，其中所述LRP8-結(jié)合分子優(yōu)先結(jié)合在腦中表達(dá)的LRP8。
14.權(quán)利要求I的組合物，其中所述CNS-活性化合物選自治療性化合物和診斷性化合物。
15.權(quán)利要求14的組合物，其中所述治療性化合物選自神經(jīng)營養(yǎng)因子和化合物以治療或預(yù)防下列各項(xiàng)中的一種或多種神經(jīng)病，淀粉樣變性，癌癥，眼科疾病或病癥，病毒或微生物感染，炎癥，缺血，神經(jīng)變性疾病，發(fā)作，行為障礙和溶酶體貯積病。
16.權(quán)利要求15的組合物，其中所述治療性化合物選自治療帕金森病的化合物和治療阿爾茨海默病的化合物。
17.權(quán)利要求15的組合物，其中所述診斷性化合物是特異性結(jié)合CNS靶標(biāo)的標(biāo)記的肽或抗體。
18.權(quán)利要求I的組合物，其中所述LRP-結(jié)合分子與LRP8的結(jié)合實(shí)現(xiàn)所述CNS-活性化合物穿過血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)。
19.藥物制劑，其包含權(quán)利要求I的組合物和藥用載體。
20.權(quán)利要求19的藥物制劑，其還包含另外的治療劑。
21.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的組合物，其用作藥物。
22.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的組合物，其用于通過調(diào)節(jié)LRP8的表達(dá)、穩(wěn)定性或活性來調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中CNS-活性化合物穿過血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)。
23.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的組合物，其通過靶向LRP8來調(diào)節(jié)CNS-活性化合物穿過包括緊密連接的血管內(nèi)皮細(xì)胞層的轉(zhuǎn)運(yùn)。
24.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的組合物，其用于減少或預(yù)防CNS疾病或CNS病癥的嚴(yán)重性、持續(xù)時(shí)間或癥狀。
25.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的組合物，其用于診斷CNS疾病或CNS病癥。
26.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的組合物，其用于對CNS疾病或CNS病癥分期。
27.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的組合物在制備藥物中的應(yīng)用。
28.權(quán)利要求27的應(yīng)用，其中所述藥物用于通過調(diào)節(jié)LRP8的表達(dá)、穩(wěn)定性或活性來調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中CNS-活性化合物穿過血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)。
29.權(quán)利要求27的應(yīng)用，其中所述藥物用于通過靶向LRP8來調(diào)節(jié)CNS-活性化合物穿過包括緊密連接的血管內(nèi)皮細(xì)胞層的轉(zhuǎn)運(yùn)。
30.權(quán)利要求27的應(yīng)用，其中所述藥物用于減少或預(yù)防CNS疾病或CNS病癥的嚴(yán)重性、持續(xù)時(shí)間或癥狀。
31.權(quán)利要求27的應(yīng)用，其中所述藥物用于診斷CNS疾病或CNS病癥。
32.權(quán)利要求27的應(yīng)用，其中所述藥物用于對CNS疾病或CNS病癥分期。
全文摘要
本發(fā)明提供一種穿梭試劑和利用該穿梭試劑促進(jìn)治療分子或診斷分子轉(zhuǎn)運(yùn)到CNS中的方法。
文檔編號(hào)A61K39/395GK102791292SQ201180006525
公開日2012年11月21日 申請日期2011年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月22日
發(fā)明者于蘊(yùn)華, 佩爾-奧拉·弗雷斯克加德, 斯蒂芬·塔姆, 賴安·J·沃茨, 馬克·丹尼斯 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司