專(zhuān)利名稱(chēng)：一種治療免疫性肝損傷或免疫性肝纖維化的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及四氫嘧啶及其衍生物在制備免疫性肝損傷或免疫性肝纖維化治療藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
免疫性肝損傷是由免疫反應(yīng)引起的肝臟慢性疾病。其病因，目前認(rèn)為是患者本身存在先天性基因遺傳缺陷等原因造成的。機(jī)體免疫系統(tǒng)將自身肝組織細(xì)胞識(shí)別為外來(lái)抗原性異物，從而刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，錯(cuò)誤的對(duì)肝細(xì)胞產(chǎn)生免疫攻擊，從而破壞肝組織。 肝組織細(xì)胞的長(zhǎng)期大量損傷導(dǎo)致肝功能損傷，進(jìn)而會(huì)導(dǎo)致肝纖維化甚至肝硬化。目前，對(duì)免疫性肝損傷及免疫性肝纖維化的病因，尚未研究清楚。其治療方案目前僅能以藥物(熊去氧膽酸、糖皮質(zhì)激素等)等延緩病情的發(fā)展，尚無(wú)法徹底根治的方法，且現(xiàn)有藥物的治療效果有限。近年研究報(bào)道，異噁唑類(lèi)免疫調(diào)節(jié)藥來(lái)氟米特對(duì)免疫性肝損傷、免疫性肝纖維化等也有一定的療效，但實(shí)驗(yàn)側(cè)重來(lái)氟米特對(duì)某些生化指標(biāo)的影響，而對(duì)病理?yè)p傷的影響卻未提供足夠的證據(jù)。而生化指標(biāo)改善與病理?yè)p傷程度之間的關(guān)系往往錯(cuò)綜復(fù)雜，很難通過(guò)少數(shù)指標(biāo)推斷肝組織病理?yè)p傷的程度。四氫嘧啶，化學(xué)名為1，4，5，6-四氫-2-甲基_4_嘧啶羧酸或2-Methyl-l，4，5，6 -tetrahydropyrimidine-4-carboxylic acid 或(S)_2_methyl_l， 4, 5, 6-tetra-hydro pyrimidine-4-carboxylic acid 或 1,4,5,6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidine carbonic acid, CAS號(hào)為96702-03-3，是1985年從海洋生物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的氨基酸衍生物，具有保濕作用，近年來(lái)，已被用于化妝品。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供四氫嘧啶及其衍生物的一種新的用途， 具體的說(shuō)是四氫嘧啶及其衍生物在制備免疫性肝損傷或免疫性肝纖維化治療藥物中的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為
四氫嘧啶及其衍生物在制備免疫性肝損傷或免疫性肝纖維化治療藥物中的應(yīng)用。所述四氫嘧啶衍生物為1，4，5，6-四氫-2-甲基_5_羥基_4_嘧啶羧酸。所述四氫嘧啶及其衍生物的有效治療劑量為為(0. 1 100)mg/kg。所述四氫嘧啶及其衍生物的有效治療劑量為為(1 8)mg/kg。本發(fā)明的技術(shù)方案中所述的四氫嘧啶，化學(xué)名為2-Methyl-l，4，5，6-tetra hydropyrimidine-4-carboxylic acid 或(S)-2-methyl-l, 4, 5, 6-tetra-hydro pyrimidine-4-carboxylic acid 或 1, 4, 5, 6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidine carbonic acid。1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸俗稱(chēng)羥基四氫嘧啶，CAS號(hào)為96702-03-3，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員所周知的。
其藥物劑型可有多種。由于四氫嘧啶理想的理化性質(zhì)，其制劑范圍極廣，可被制成口服制劑如片劑、膠囊等；外用制劑如乳膏、軟膏等；注射制劑如注射液、凍干粉等。這在本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的，而各種制劑的制備技術(shù)也是本領(lǐng)域技術(shù)人員所周知的。本發(fā)明人在實(shí)驗(yàn)研究中驚奇的發(fā)現(xiàn)，四氫嘧啶及其衍生物，如羥基四氫嘧啶，對(duì)免疫性肝損傷或免疫性肝纖維化等免疫性肝病具有出乎意料的治療作用。


圖1 免疫性肝損傷實(shí)驗(yàn)各組小鼠肝組織病理圖片。圖2 免疫性肝纖維化實(shí)驗(yàn)各組大鼠肝組織病理圖片。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的解釋。應(yīng)當(dāng)理解的是，以下實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1 四氫嘧啶和1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸的急性毒性實(shí)驗(yàn)
SPF級(jí)KM小鼠，雌雄各半，體重18g-22g，給藥前禁食8小時(shí)，稱(chēng)重，單次給藥(灌胃或靜脈注射)，給藥劑量為120mg/kg，給藥后連續(xù)觀察14天。觀察項(xiàng)目包括毒性反應(yīng)、體重和組織病理學(xué)。結(jié)果表明，小鼠單次灌胃給藥或靜脈注射給藥120mg/kg后，未見(jiàn)明顯毒性反應(yīng)， 給藥前后及實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)體重?zé)o明顯差異，組織病理學(xué)觀察，未發(fā)現(xiàn)顯著異常。說(shuō)明四氫嘧啶和1，4，5,6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸單次大劑量給藥(120mg/kg)無(wú)顯著的毒性反應(yīng)。實(shí)施例2 四氫嘧啶和1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸的長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)
食蟹猴，雌雄各半，隨機(jī)分組，分別給予生理鹽水(對(duì)照組)；高中低三個(gè)劑量的四氫嘧啶和高中低三個(gè)劑量的1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸，其中高劑量組均為 80mg/kg,中劑量組為40mg/kg，低劑量組為10mg/kg。每日給藥1次，連續(xù)給藥30天，對(duì)照組及各劑量組藥物均設(shè)灌胃給藥組和靜脈注射給藥組兩組。給藥前及給藥后進(jìn)行大體觀察， 記錄猴的一般癥狀、記錄給藥前及給藥后猴的體重，并定期進(jìn)行血液學(xué)、尿液學(xué)和血生化檢查，記錄給藥前及給藥后猴的心電圖。結(jié)果顯示，各劑量組動(dòng)物體重與對(duì)照組無(wú)顯著差異，大體觀察未發(fā)現(xiàn)異常。實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物的血液學(xué)、尿液學(xué)和血生化數(shù)據(jù)與對(duì)照組無(wú)顯著差異。說(shuō)明四氫嘧啶和1，4，5，6_四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸長(zhǎng)期給藥的安全性良好，耐受性符合要求。實(shí)施例3 四氫嘧啶和1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸對(duì)小鼠免疫性肝損傷的藥效學(xué)研究
SPF級(jí)KM小鼠，雌雄各半，18 22g。留一組小鼠作為正常對(duì)照，其余小鼠采用卡介苗加脂多糖(BCG+LPQ法造模。造模小鼠第一天尾靜脈注射給予卡介苗，劑量為2. 5mg/只， 然后于第十天尾靜脈注射給予脂多糖，劑量為IOyg/只。然后，禁食12小時(shí)，檢查肝功能指標(biāo)。造模成功后，將免疫性肝損傷小鼠隨機(jī)分組。第一組為模型對(duì)照組，灌胃給予生理鹽水；第二組為陽(yáng)性對(duì)照組，灌胃給予糖皮質(zhì)激素，給藥劑量為1. 5mg/kg ；第三組為給藥組，灌胃給予四氫嘧唆，給藥劑量為98mg/kg;第四組為給藥組，灌胃給予四氫嘧啶SOmg/ kg ；第五組為給藥組，灌胃給予四氫嘧啶，劑量為70mg/kg ；第六組為給藥組，灌胃給予四氫嘧啶，劑量為60mg/kg ；第七組為給藥組，灌胃給予1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸40mg/kg ；第八組為給藥組，灌胃給予1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸:3mg/kg。第九組為給藥組，尾靜脈注射給予1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸 5mg/kg。給藥結(jié)束后，處死小鼠，在鼠肝臟同一部位取部分組織，用10%的甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，HE染色染色后光鏡下觀察肝組織病理改變。結(jié)果見(jiàn)圖1。正常小鼠肝細(xì)胞胞漿疏松化；模型組小鼠肝細(xì)胞水腫，水樣變性，空泡變性，大片壞死，肝組織大面積淤血，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；來(lái)氟米特治療組小鼠肝細(xì)胞水腫，水樣變性，空泡變性，片狀壞死，肝組織淤血，中央靜脈周?chē)渭?xì)胞水腫，壞死，炎細(xì)胞浸潤(rùn)；四氫嘧啶和 1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸治療組小鼠未見(jiàn)明顯異常。由圖1可見(jiàn)，四氫嘧啶和1，4，5，6-四氫_2_甲基_5_羥基_4_嘧啶羧酸對(duì)免疫性肝損傷有顯著的治療作用，且在較寬的劑量范圍內(nèi)，治療效果均顯著優(yōu)于糖皮質(zhì)激素。實(shí)施例4 四氫嘧啶和1，4，5，6-四氫_2_甲基_5_羥基_4_嘧啶羧酸對(duì)大鼠免疫性肝纖維化的藥效學(xué)研究
SPF級(jí)Wistar大鼠，雌雄各半，體重158 176g。留一組大鼠作為正常對(duì)照，其余大鼠采用豬血清造模，每周腹腔注射2次豬血清(0. 5 ml/鼠)。造模成功后，隨機(jī)分組，第一組為模型對(duì)照組尾靜脈注射給予生理鹽水；第二組為陽(yáng)性對(duì)照組，尾靜脈注射給予熊去氧膽酸，給藥劑量為20mg/kg ；第三組為給藥組，尾靜脈注射給予四氫嘧啶，給藥劑量為93mg/ kg ；第四組為給藥組，尾靜脈注射給予四氫嘧啶50mg/kg ；第五組為給藥組，尾靜脈注射給予四氫嘧啶，劑量為20mg/kg ；第六組為給藥組，尾靜脈注射給予四氫嘧啶，劑量為5mg/kg ； 第七組為給藥組，尾靜脈注射給予1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸30mg/kg ； 第八組為給藥組，尾靜脈注射給予1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸ang/kg。 第九組為給藥組，尾靜脈注射給予1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸7mg/kg。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，采血(采血前禁食14小時(shí))分離血清，備用。采血后處死大鼠，在鼠肝臟同一部位取部分組織，用10%的甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，HE染色染色后光鏡下觀察組織改變；觀察指標(biāo)包括動(dòng)物血清指標(biāo)(HA、LN、PCIII)和肝組織病理改變。動(dòng)物血清指標(biāo)見(jiàn)表1。
表1
HA (μg/L)LN ( μg/L)PCIII ( μ g/L)第一組3461. 8±2. 42172. 3±3. 02670. 4±7. 3第二組2257. 3±9. 61635. 2±7. 52005. 6 ±3. 7第三組1794. 7±5. 298. 6±4. 791. 4±1. 3第四組1829. 1±7. 9102. 4±4. 286. 7±9. 0第五組1720. 4±5. 399. 7±9. 593. 5±7. 2第六組1708. 2±3. 496. 3±7. 695. 2±10. 1第七組1787. 9±6. 798. 1±9. 497. 3±2. 4第八組1772. 7±3. 996. 8±5. 793. 2±9. 3園九組丨1705. 2±5. 0 丨97. 3±7. 8 丨95. 8±3. 5|
光鏡下觀察各組大鼠肝組織發(fā)現(xiàn)，正常大鼠肝組織未見(jiàn)異常；模型組大鼠纖維組織包裹肝小葉，匯管區(qū)呈中度纖維化，匯管區(qū)結(jié)締組織增生；熊去氧膽酸組肝細(xì)胞脂肪變性，點(diǎn)片狀壞死，炎細(xì)胞浸潤(rùn)；給藥組大鼠存在輕微細(xì)胞水腫；肝組織病理改變見(jiàn)圖2。由表1和圖2可見(jiàn)，四氫嘧啶和1，4，5，6_四氫_2_甲基_5_羥基_4_嘧啶羧酸對(duì)免疫性肝纖維化有顯著的治療作用，且在ang/kg至93mg/kg劑量范圍內(nèi)，治療效果均顯著優(yōu)于熊去氧膽酸。施例5四氫嘧啶口服片劑的組方及其制備
四氫嘧啶200g
檸檬黃0.03g 微晶纖維素 500g 微粉硅膠 4g 硬脂酸鎂 15g 聚乙烯吡咯烷酮 20 g
將四氫嘧啶、微晶纖維素、檸檬黃、聚乙烯吡咯烷酮混合均勻，過(guò)80目篩網(wǎng)，加入微粉硅膠、硬脂酸鎂，混合3 min,壓片即得。
實(shí)施例6 1，4，5，6-四氫_2_甲基_5_羥基_4_嘧啶羧酸膠囊的組方及其制備 1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸200g
微晶纖維素50g
羧甲基淀粉鈉60g
十二烷基硫酸鈉18g
二氧化硅12g
1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸過(guò)100目篩，其余輔料過(guò)80目篩，混合
均
勻，采用輥壓法進(jìn)行干法制粒，填充入膠囊即可。
實(shí)施例7 1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸注射溶的組方及其制備
1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸200g
聚乙二醇40050ml
苯甲酸鈉2. 5g
加水至IOOOml
稱(chēng)取1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸，加水適量，按處方量加聚乙二醇 400，攪拌使之溶解，加入苯甲酸鈉和900ml水，混勻，加水至IOOOml，過(guò)濾，滅菌，分裝即得。
權(quán)利要求
1.四氫嘧啶及其衍生物在制備免疫性肝損傷或免疫性肝纖維化治療藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述四氫嘧啶衍生物為1，4，5，6_四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的應(yīng)用，其特征在于所述四氫嘧啶及其衍生物的有效治療劑量為為(O. 1 100)mg/kg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的應(yīng)用，其特征在于所述四氫嘧啶及其衍生物的有效治療劑量為為(1 8)mg/kg。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了四氫嘧啶及其衍生物的一種新用途，即四氫嘧啶及其衍生物在制備免疫性肝損傷或免疫性肝纖維化治療藥物中的應(yīng)用。其中四氫嘧啶衍生物包括1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸。其口服給藥效果較好，劑量為0.01～100mg/kg均具有良好的安全性和有效性。
文檔編號(hào)A61P37/02GK102423314SQ20111038117
公開(kāi)日2012年4月25日 申請(qǐng)日期2011年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月26日
發(fā)明者厲保秋, 董欣, 高繼友 申請(qǐng)人:濟(jì)南環(huán)肽醫(yī)藥科技有限公司