專利名稱：：一組gp96蛋白的多肽片段及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一組gp96蛋白的多肽片段及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：熱休克蛋白gp96存在于人和動(dòng)物幾乎所有細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜中，也存在于某些細(xì)胞的質(zhì)膜上，它是熱休克蛋白90家族(HSP90)中的成員。人的gp96蛋白由803個(gè)氨基酸組成，N端21個(gè)氨基酸為信號(hào)肽序列，因此成熟的蛋白由782個(gè)氨基酸組成。Gp96是糖蛋白，該分子擁有6個(gè)潛在的糖基化位點(diǎn)。犬類的gp96(與人的gp96高度同源，有98.5的同源性)與ATP結(jié)合的晶體結(jié)構(gòu)已經(jīng)解析，單個(gè)分子分為N端結(jié)構(gòu)域、中間(M)結(jié)構(gòu)域和C端結(jié)構(gòu)域，gp96以同源二聚體的形式存在,其N端結(jié)合ATP,C端形成二聚化,整個(gè)二聚體從C端到N端圍繞分子中軸左旋扭曲形成扭曲的V字形。該分子與ATP的結(jié)合及發(fā)揮水解ATP的功能與其構(gòu)象變化相關(guān)，其構(gòu)象變化涉及N端結(jié)構(gòu)域和M段結(jié)構(gòu)域的90°的旋轉(zhuǎn)，gp96構(gòu)象變化引發(fā)與其它蛋白的結(jié)合或釋放。HER2又稱為erbB-2，它是原癌基因?qū)儆贓GFR家族成員，編碼一種酪氨酸激酶受體。該家族共有四個(gè)成員即HER1，HER2，HER3和HER4。HER2與該家族的其它三個(gè)成員之間可以形成異源二聚體，該異源二聚體與配體結(jié)合后，能活化下游信號(hào)通路。HER2在正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、惡性轉(zhuǎn)化和抵抗化療藥物的過(guò)程中起著重要的作用。HER2的過(guò)表達(dá)可以向腫瘤細(xì)胞提供促有絲分裂的信號(hào)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)速度加快，并抵抗細(xì)胞凋亡。HER2過(guò)表達(dá)的腫瘤惡性程度高、遷移性和浸潤(rùn)性強(qiáng)，對(duì)化療藥物更加不敏感，且治療后復(fù)發(fā)的可能性更大。HER2在包括乳腺癌在內(nèi)的多種上皮源性腫瘤中過(guò)度表達(dá)，與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后等關(guān)系密切。大約四分之一的乳腺癌病人有HER2的基因擴(kuò)增或蛋白過(guò)表達(dá)，HER2的過(guò)表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的數(shù)目和病人預(yù)后不良有關(guān)。因此HER2是極具發(fā)展前途的治療靶位，抑制HER2基因表達(dá)對(duì)治療HER2陽(yáng)性的乳腺癌將有著很重要的意義。Trastuzumab(即赫塞汀)是一種人源化的HER2單克隆抗體，對(duì)HER2基因擴(kuò)增和過(guò)表達(dá)的乳腺癌病人，trastuzumab單獨(dú)應(yīng)用或與其它藥物聯(lián)合應(yīng)用有效率可分別達(dá)到25%或50%，赫塞汀目前已成為乳腺癌等治療的一線藥物，銷售額位居腫瘤生物治療藥物前列。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一組gp96蛋白的多肽片段及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的多肽片段，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列18所示的氨基酸序列組成的多肽片段；(b)將序列18的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的添加且與具有相同功能的由序列18衍生的多肽片段。所述(b)中的多肽片段具體可為序列表的序列I至17中任一所示的多肽片段。本發(fā)明還保護(hù)所述的多肽片段的如下⑴至⑷中任一所述的應(yīng)用(I)在與gp96蛋白結(jié)合中的應(yīng)用；(2)在抑制胰酶消化gp96蛋白中的應(yīng)用；(3)在制備與gp96蛋白結(jié)合的產(chǎn)品中的應(yīng)用；(4)在制備抑制胰酶消化gp96蛋白的產(chǎn)品中的應(yīng)用。本發(fā)明還保護(hù)一種產(chǎn)品，它的活性成分為所述多肽片段；所述產(chǎn)品的用途為如下(I)至(7)中的至少一種(I)預(yù)防和/或治療肝炎；(2)預(yù)防和/或治療肝炎引發(fā)的肝損傷；⑶抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和/或生長(zhǎng)和/或侵襲；⑷促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡；(5)抑制腫瘤生長(zhǎng)；(6)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞中HER2蛋白與gp96蛋白的結(jié)合；(7)降低腫瘤細(xì)胞中HER2蛋白的含量。所述產(chǎn)品中，所述⑴和/或所述(2)中，所述肝炎為自體免疫性肝炎或重型肝炎。所述自體免疫性肝炎具體可為刀豆蛋白引發(fā)的自體免疫性肝炎。所述重型肝炎具體可為甘露糖引發(fā)的重型肝炎。所述產(chǎn)品中，所述(3)和/或所述(4)和/或所述(6)和/或所述(7)中，所述腫瘤細(xì)胞為乳腺癌細(xì)胞，優(yōu)選為乳腺癌細(xì)胞SKBR3。所述產(chǎn)品中，所述(5)中，所述腫瘤是由乳腺癌細(xì)胞引發(fā)的，所述乳腺癌細(xì)胞優(yōu)選為乳腺癌細(xì)胞SKBR3。所述多肽片段的如下(I)至(7)中任一所述的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍(I)制備預(yù)防和/或治療肝炎的藥物；(2)制備預(yù)防和/或治療肝炎引發(fā)的肝損傷的藥物；(3)制備抑制腫瘤細(xì)胞增殖和/或生長(zhǎng)和/或侵襲的藥物；(4)制備促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥物；(5)制備抑制腫瘤生長(zhǎng)的藥物；(6)制備促進(jìn)腫瘤細(xì)胞中HER2蛋白與gp96蛋白結(jié)合的藥物；(7)制備降低腫瘤細(xì)胞中HER2蛋白含量的藥物。所述應(yīng)用中，所述(I)和/或所述(2)中，所述肝炎為自體免疫性肝炎或重型肝炎。所述自體免疫性肝炎具體可為刀豆蛋白引發(fā)的自體免疫性肝炎。所述重型肝炎具體可為甘露糖引發(fā)的重型肝炎。所述應(yīng)用中，所述(3)和/或所述(4)和/或所述(6)和/或所述(7)中，所述腫瘤細(xì)胞為乳腺癌細(xì)胞，優(yōu)選為乳腺癌細(xì)胞SKBR3。所述應(yīng)用中，所述(5)中，所述腫瘤是由乳腺癌細(xì)胞引發(fā)的，所述乳腺癌細(xì)胞優(yōu)選為乳腺癌細(xì)胞SKBR3。以上任一所述gp96蛋白具體可為如下(a)或(b)(a)由序列表中序列19所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列19的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列19衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明提供的18種多肽片段可競(jìng)爭(zhēng)性地抑制該α-螺旋的功能，從而阻礙gp96的構(gòu)象變化。免疫系統(tǒng)調(diào)控失調(diào)和過(guò)度活化是導(dǎo)致急性乙肝和慢加急性肝炎等肝衰竭疾病的重要原因，Gp96蛋白作為炎癥因子，在急性乙肝和慢加急性肝炎等肝衰竭中發(fā)揮重要調(diào)控作用。Gp96與TLR2和TLR4相互作用，刺激IL-6、IL-12、TNF-α等細(xì)胞因子的產(chǎn)生，引發(fā)天然免疫；同時(shí)通過(guò)抗原呈遞激活特異性CTL，引發(fā)細(xì)胞免疫，加重肝損傷。本發(fā)明提供的多肽片段可有效抑制gp96的免疫學(xué)功能，阻止由gp96引發(fā)的天然免疫和細(xì)胞免疫，減輕肝損傷癥狀，對(duì)急性乙肝和慢加急性肝炎等肝衰竭疾病有治療作用。本發(fā)明提供的多肽片段抑制gp96后能明顯下調(diào)HER2，而且gp96與HER2分子相互作用。通過(guò)所述多肽片段下調(diào)gp96來(lái)抑制HER2，對(duì)乳腺癌細(xì)胞SKBR3、ZR751細(xì)胞增殖有抑制作用，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，降低細(xì)胞的侵襲性，在小鼠體內(nèi)對(duì)乳腺癌生長(zhǎng)有明顯抑制作用，因此本發(fā)明提供的多肽片段可用于治療HER2過(guò)表達(dá)的腫瘤。圖I為gp96蛋白的的N端結(jié)構(gòu)域、中間(M)結(jié)構(gòu)域和C端結(jié)構(gòu)域；兩個(gè)同源聚體分別用綠色和藍(lán)色表示，左為側(cè)面圖，右為俯視圖。圖2為rgp96蛋白的鑒定圖譜；1:分子量標(biāo)準(zhǔn)；2:步驟(二)的發(fā)酵液；3:親和層析后的洗脫液；4:離子交換層析后的洗脫液；5rgp96蛋白的westernblot。具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為自常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買得到的。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。BALB/c小鼠購(gòu)自北京維通利華公司，體重為18-20g。PBS緩沖液8gNaCUO.2gKC1、3.625gNa2HPO4·12Η20、0·24gKH2PO4，加水至1L，調(diào)ρΗ7·3。實(shí)施例I、制備各種多肽片段根據(jù)三維晶體結(jié)構(gòu)(圖I)分析發(fā)現(xiàn)gp96蛋白第448-475位氨基酸殘基形成一個(gè)α-螺旋，該α-螺旋可與分子內(nèi)的其它序列相互作用，對(duì)于gp96蛋白同源二聚體的扭曲張開(kāi)結(jié)構(gòu)和閉合結(jié)構(gòu)之間的構(gòu)象變化至關(guān)重要。分別人工合成如下十八條多肽片段多肽片段P440-480、多肽片段P441-480、多肽片段P442-480、多肽片段P443-480、多肽片段P444-480、多肽片段P445-480、多肽片段P446-480、多肽片段P447-480、多肽片段P448-480、多肽片段P444-475、多肽片段P444-476、多肽片段P444-477、多肽片段P444-478、多肽片段P444-479、多肽片段P440-475、多肽片段P442-475、多肽片段P446-475和多肽片段P448-475。十八條多肽片段的氨基酸序列如下(由氮末端至碳末端方向):多肽片段P440-480DDLPLNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIADDKY；多肽片段P441-480DLPLNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIADDKY；多肽片段P442-480LPLNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIADDKY；多肽片段P443-480PLNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIADDKY；多肽片段P444-480LNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIADDKY；多肽片段P445-480NVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIADDKY；多肽片段P446_480VSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIADDKY；多肽片段P447_480SRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIADDKY；多肽片段P448-480RETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIADDKY；多肽片段P444-475LNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKI；多肽片段P444-476LNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIA；多肽片段P444-477LNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIAD；多肽片段P444-478LNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIADD；多肽片段P444-479LNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIADDK；多肽片段P440-475DDLPLNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKI；多肽片段P442-475LPLNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKI；多肽片段P446-475VSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKI；多肽片段P448-475RETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKI；以上十八條序列按由上至下的順序依次為序列表的序列I至序列18。實(shí)施例2、各個(gè)多肽片段對(duì)gp96蛋白的作用gp96蛋白(人熱休克蛋白；GENBANKACCESSIONNO.AY040226)的氨基酸序列如序列表的序列19所示，其編碼序列如序列表的序列20所示。一、制備重組gp96蛋白(rgp96蛋白)(一)重組質(zhì)粒pHFMDZ-RlL2GAmy-gp96的構(gòu)建I、提取人肝癌細(xì)胞H印G2(購(gòu)自ATCC，產(chǎn)品號(hào)HB-8065)的mRNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。2、以步驟I的cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。上游引物5，-CCGgaattcATGGACGATGAAGTTGATG-3，；下游引物5，-CCGctcgagCTATTAGAATTCATCTTTTTCAGCTGTAG-3，。3、用限制性內(nèi)切酶EcoRI和XhoI雙酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，回收酶切產(chǎn)物。4、用限制性內(nèi)切酶EcoRI和XhoI雙酶切質(zhì)粒pHFMDZ-RlA(購(gòu)自Invitrogen公司，產(chǎn)品號(hào)V20520)，回收載體骨架。5、將步驟3的酶切產(chǎn)物和步驟4的載體骨架連接，得到重組質(zhì)粒pHFMDZ-Rl_gp96。測(cè)序結(jié)果表明，重組質(zhì)粒pHFMDZ-Rl-gp96的骨架載體為pHFMDZ-RlA，在EcoRI和XhoI酶切位點(diǎn)之間插入了gp96蛋白的編碼序列)。6、在重組質(zhì)粒pHFMDZ-Rl-gp96的BglII酶切位點(diǎn)插入LEU2片段(序列表的序列21所示的DNA),BamHI酶切位點(diǎn)插入α-淀粉酶報(bào)告系統(tǒng)(序列表的序列22所示的DNA),得到重組質(zhì)粒pHFMDZ-RlL2GAmy-gp96。(二)rgp96蛋白的表達(dá)I、采用電轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒pHFMDZ-RlL2GAmy-gp96導(dǎo)入漢遜酵母(購(gòu)自ATCC，產(chǎn)品號(hào)MYA-335)細(xì)胞，得到重組菌。2、將重組菌接種于5mLSD液體培養(yǎng)基(購(gòu)自上海杰美基因醫(yī)藥公司，產(chǎn)品號(hào)GMS12117.7)，37°C培養(yǎng)48h，然后轉(zhuǎn)接到IOOmLSYN6培養(yǎng)基(購(gòu)自上海杰美基因醫(yī)藥公司，產(chǎn)品號(hào)GMS12116.I)，30°C培養(yǎng)48h，得到種子培養(yǎng)液。3、將兩瓶種子培養(yǎng)液接種于含有2LSYN6培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中，30°C培養(yǎng)；使用氨水控制pH維持在5.5;每4h檢測(cè)I次發(fā)酵液中甘油含量，根據(jù)發(fā)酵液中甘油的濃度補(bǔ)加甘油，控制甘油終濃度在O.5%左右，同時(shí)控制溶氧在20%以上；根據(jù)菌體的生成情況檢測(cè)菌體濕重,等菌體濕重達(dá)到180-200g/L的時(shí)候停止補(bǔ)加甘油，開(kāi)始誘導(dǎo)重組rgp96蛋白產(chǎn)生(補(bǔ)加甲醇，使甲醇濃度維持在O.5-0.8%左右)，誘導(dǎo)開(kāi)始72小時(shí)后停止發(fā)酵。(三)rgp96蛋白的分離純化將步驟(二)的發(fā)酵液離心收集菌體，用PBS緩沖液洗滌細(xì)胞2次，在球磨機(jī)(DYNO-MILLmodelKDL)中，按照廠家提供的操作手冊(cè)使用玻璃珠球磨的方法破碎細(xì)胞；破碎后的細(xì)胞12000轉(zhuǎn)/min離心20min，收集上清液；上清液用O.45μm濾膜進(jìn)行過(guò)濾，得到濾液，將濾液進(jìn)行濃縮，得到濃縮液。將濾液進(jìn)行親和層析,具體步驟如下采用英俊公司(InvitrogenCorporation)的Ni-NTAPurificationSystem進(jìn)行親和層析,主要步驟為先用PBS平衡柱子2h;然后用PBS(含20mM咪唑)平衡柱子2h;將濃縮液用PBS(含20mM咪唑)稀釋后上樣；用PBS(含20mM咪唑)沖洗柱子至OD值<O.01;用PBS(含200mM咪唑)洗脫I.5h，收集洗脫液(即為rgp96蛋白);所有操作在4°C下進(jìn)行,流速為O.5mL/min。每升步驟(二)的發(fā)酵液純化后可以獲得50毫克純度90%以上的rgp96蛋白。如果蛋白洗脫液中含有異源雜蛋白，可將親和層析的洗脫液進(jìn)行離子交換層析(Q柱)，主要步驟200mMNaCl的PBS液平衡；上樣；300mMNaCl的PBS液洗雜質(zhì)；800mMNaCl的PBS液洗目的蛋白。將步驟(二)的發(fā)酵液、親和層析后的洗脫液(rgp96蛋白)和離子交換層析后的洗脫液進(jìn)行10%SDS-PAGE，然后進(jìn)行考染，見(jiàn)圖2。rgp96蛋白的純度達(dá)90%以上。將rgp96蛋白進(jìn)行westernblot,一抗為大鼠抗gp96抗體(購(gòu)自santacruz,產(chǎn)品號(hào)sc-56399),見(jiàn)圖2。gp96蛋白還可以從人肝癌細(xì)胞系!fepG2培養(yǎng)細(xì)胞，或臨床手術(shù)切除的腫瘤組織(如乳腺癌、腦膠質(zhì)瘤、腎癌、腸癌、肝癌或胃癌等各種腫瘤組織)，或人胎盤等組織中提取得到，具體提取方法見(jiàn)論文MengS,SongJ,RaoZ,TienP,GaoG.2002.Three-steppurificationofgp96fromhumanlivertumortissuessuitableforisolationofgp96-boundpeptides.JournalofImmunologicalMethods，264(1-2):29-35.。gp96蛋白還可利用漢遜酵母表達(dá)得到，具體方法見(jiàn)論文LiY，SongH，LiJ，WangY，YanX，ZhaoB,ZhangX,WangS,ChenL，QiuB,MengS.2011.Hansenulapolymorphaexpressedheatshockproteingp96exertspotentTcellactivationactivityasanadjuvant.JBiotechnol.[Epubaheadofprint]PMID:21167226。二、gp96蛋白與各個(gè)多肽片段的相互作用通過(guò)Biacore方法分別檢測(cè)實(shí)施例I制備的各種多肽片段與步驟一制備的gp96蛋白之間的相互作用。檢測(cè)所用儀器為BiacOre3000系統(tǒng)，使用CM5傳感芯片，按說(shuō)明書(shū)將gp96蛋白通過(guò)氨基偶聯(lián)固化在CM5傳感芯片上，具體方法如下采用過(guò)濾并除氣的HBS緩沖鹽溶液(10mmol/LHEPES’O.15mol/LNaCl，3·4mol/LEDTA，0.05%P-20；pH7.4)作為流動(dòng)相溶液，將CM5傳感器芯片模塊嵌入BIAcore系統(tǒng)；設(shè)定流過(guò)流動(dòng)池的流速為5μL/min；用O.2mol/L的N-乙基-N-二甲基-氨丙基碳二亞胺和O.05mol/L的N-羥基琥珀酰亞胺等體積混合溶液活化CM5傳感芯片表面7min;注射35μLlmg/mL的gp96蛋白到活化表面，使之與CM5傳感芯片表面結(jié)合；注射35μL乙醇胺使過(guò)量的反應(yīng)基團(tuán)失活；快速注射10μL20mmol/L的HCl,然后用Extraclean除去非共價(jià)結(jié)合型材料；通過(guò)在開(kāi)始注射gp96蛋白前放置第I個(gè)基線報(bào)道點(diǎn)，并在注射20mmol/LHCl結(jié)束后2min放置第2個(gè)報(bào)道點(diǎn)，來(lái)測(cè)定結(jié)合gp96蛋白的水平；設(shè)定結(jié)合gp96的流通池為檢測(cè)通道，未結(jié)合gp96蛋白的流通池為參比通道，HBS緩沖溶液為流動(dòng)相，流通池的流速為10μL/min;同時(shí)將待測(cè)物注入gp96蛋白流通池和參比流通池，使結(jié)合反應(yīng)在22-24°C，pH7.4的條件下進(jìn)行；注射10μL多肽片段(使用含lmg/mL羧甲基葡聚糖的HBS緩沖液稀釋)檢測(cè)；快速注射10μL20mmol/L的HCl,用Extraclean再生gp96蛋白表面；再次注射10μL多肽片段,重復(fù)此循環(huán)，以測(cè)定其結(jié)合到gp96蛋白表面的重現(xiàn)性。按上述步驟，分別檢測(cè)不同濃度級(jí)別(156，312，625，1250，2500nmol/L)的多肽片段，每一濃度級(jí)別重復(fù)測(cè)定I次。各多肽片段與gp96蛋白的結(jié)合系數(shù)KD(mM/L)見(jiàn)表I。表I各多肽片段與gp96結(jié)合反應(yīng)的系數(shù)權(quán)利要求1.一種多肽片段，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列18所示的氨基酸序列組成的多肽片段；(b)將序列18的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的添加且與具有相同功能的由序列18衍生的多肽片段。2.如權(quán)利要求I所述的多肽片段，其特征在于所述(b)所述的多肽片段為序列表的序列I至序列17中任一所示的多肽片段。3.權(quán)利要求I或2所述的多肽片段的如下(I)至(4)中任一所述的應(yīng)用(1)在與gp96蛋白結(jié)合中的應(yīng)用；(2)在抑制胰酶消化gp96蛋白中的應(yīng)用；(3)在制備與gp96蛋白結(jié)合的產(chǎn)品中的應(yīng)用；(4)在制備抑制胰酶消化gp96蛋白的產(chǎn)品中的應(yīng)用。4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用,其特征在于所述gp96蛋白為如下(a)或(b)(a)由序列表中序列19所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列19的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列19衍生的蛋白質(zhì)。5.一種產(chǎn)品，它的活性成分為權(quán)利要求I或2所述的多肽片段；所述產(chǎn)品的用途為如下(I)至(7)中的至少一種(1)預(yù)防和/或治療肝炎；(2)預(yù)防和/或治療肝炎引發(fā)的肝損傷；(3)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和/或生長(zhǎng)和/或侵襲；(4)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡；(5)抑制腫瘤生長(zhǎng)；(6)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞中HER2蛋白與gp96蛋白的結(jié)合；(7)降低腫瘤細(xì)胞中HER2蛋白的含量。6.如權(quán)利要求5所述的產(chǎn)品，其特征在于所述(3)和/或所述⑷和/或所述(6)和/或所述(7)中，所述腫瘤細(xì)胞為乳腺癌細(xì)胞，優(yōu)選為乳腺癌細(xì)胞SKBR3;所述(5)中，所述腫瘤是由乳腺癌細(xì)胞引發(fā)的，所述乳腺癌細(xì)胞優(yōu)選為乳腺癌細(xì)胞SKBR3。7.如權(quán)利要求5或6所述的產(chǎn)品，其特征在于所述gp96蛋白為如下(a)或(b)(a)由序列表中序列19所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列19的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列19衍生的蛋白質(zhì)。8.權(quán)利要求I或2所述的多肽片段的如下⑴至(7)中任一所述的應(yīng)用(1)制備預(yù)防和/或治療肝炎的藥物；(2)制備預(yù)防和/或治療肝炎引發(fā)的肝損傷的藥物；(3)制備抑制腫瘤細(xì)胞增殖和/或生長(zhǎng)和/或侵襲的藥物；(4)制備促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥物；(5)制備抑制腫瘤生長(zhǎng)的藥物；(6)制備促進(jìn)腫瘤細(xì)胞中HER2蛋白與gp96蛋白結(jié)合的藥物；(7)制備降低腫瘤細(xì)胞中HER2蛋白含量的藥物。9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述(3)和/或所述(4)和/或所述(6)和/或所述(7)中，所述腫瘤細(xì)胞為乳腺癌細(xì)胞，優(yōu)選為乳腺癌細(xì)胞SKBR3;所述(5)中，所述腫瘤是由乳腺癌細(xì)胞引發(fā)的，所述乳腺癌細(xì)胞優(yōu)選為乳腺癌細(xì)胞SKBR3。10.如權(quán)利要求8或9所述的應(yīng)用，其特征在于所述gp96蛋白為如下(a)或(b)(a)由序列表中序列19所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列19的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列19衍生的蛋白質(zhì)。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一組gp96蛋白的多肽片段及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的多肽片段，為序列表的序列1至序列18中任一所述的多肽片段。所述多肽片段具有如下應(yīng)用(1)預(yù)防和/或治療肝炎；(2)預(yù)防和/或治療肝炎引發(fā)的肝損傷；(3)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和/或生長(zhǎng)和/或侵襲；(4)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡；(5)抑制腫瘤生長(zhǎng)；(6)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞中HER2蛋白與gp96蛋白的結(jié)合；(7)降低腫瘤細(xì)胞中HER2蛋白的含量。文檔編號(hào)A61P35/00GK102827257SQ20111015948公開(kāi)日2012年12月19日申請(qǐng)日期2011年6月14日優(yōu)先權(quán)日2011年6月14日發(fā)明者孟頌東,陳立釗,胡坤,李楊,李鑫,閆曉麗申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院微生物研究所