專(zhuān)利名稱(chēng)：一種簡(jiǎn)便高效的自體富血小板血漿提取裝置及提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種簡(jiǎn)便高效的自體富血小板血漿提取裝置 及提取方法，所提取的自體富血小板血漿中含有多種復(fù)合生長(zhǎng)因子，能夠有效地促進(jìn)組織 的修復(fù)。
背景技術(shù)：
富血小板血漿(platelet-rich plasma, PRP)是新鮮全血經(jīng)離心后提取的血小板 含量比正常全血中血小板含量高4 5倍的血漿。1984年，Assoian等發(fā)現(xiàn)人血漿中提取的PRP，體外激活后其中血小板α顆?？?釋放多種生長(zhǎng)因子，如血小板衍化生長(zhǎng)因子(platelet-derived growthfactor, PDGF)、 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β (transforming growth factor, TGF-β )、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、表皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelial growth factor, EGF)、類(lèi)胰島素樣生長(zhǎng)因子(insulin-like growthfactor, IGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng) 因子(fibroblast growth factor, FGF)等。它們以天然比例混合，發(fā)揮協(xié)同作用。其中 PDGF、TGF- β在骨折愈合中有重要作用，一些研究者將PRP用于骨缺損的修復(fù)，發(fā)現(xiàn)PRP有 利于刺激成骨、加速骨修復(fù)。PRP還可用于治療各種原因?qū)е碌难“鍦p少和出血性疾病， 并加速傷口愈合。國(guó)內(nèi)外已有機(jī)采PRP機(jī)，但價(jià)格昂貴，操作費(fèi)時(shí)，基本原理都需要兩個(gè)離心管，兩 次抽取血漿，易污染，血小板提取時(shí)有不同程度的損失。傳統(tǒng)兩次離心法需要兩個(gè)離心管， 即含枸櫞酸鈉抗凝劑的離心管和不含抗凝劑的離心管；一個(gè)抽血注射器，或采血針頭；兩 個(gè)長(zhǎng)針頭第一個(gè)用于第一次離心后白膜層其下2 3mm紅細(xì)胞層和血漿層的抽取，第二個(gè) 用于第二次離心后上層3/4血漿層的抽取；兩個(gè)抽取PRP的注射器；10%氯化鈣溶液；人凝 血酶凍干粉；低溫高速離心機(jī)；無(wú)菌環(huán)境如超凈臺(tái)。其缺點(diǎn)是污染率大，白膜層不完整，精 確度低，操作步驟多，費(fèi)時(shí)。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于上述傳統(tǒng)PRP提取過(guò)程中的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種簡(jiǎn)便高效的自體 富血小板血漿提取裝置及提取方法。本發(fā)明所述的自體富血小板血漿提取裝置，其特征在于由1個(gè)5毫升(或2毫升)注射器1、1個(gè)靜脈輸液器連接管2、1個(gè)靜脈留置針?biāo)?料卡片3和1個(gè)靜脈輸液器針頭4組成；其中，注射器1用以抽取靜脈血并充當(dāng)離心管；靜 脈輸液器針頭4通過(guò)靜脈輸液器連接管2和注射器1出口連接，靜脈輸液器針頭4用以皮 膚血管穿刺、抽取抗凝劑和激活劑或向人體需要部位注射提取后的自體富血小板血漿；靜 脈輸液器連接管2可彎曲固定于靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?中，通過(guò)靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?夾 緊輸液器連接管2，實(shí)現(xiàn)輸液器連接管2的關(guān)閉，從而阻止注射器1中的血液因離心力流出； 所用注射器、針頭、卡片均為無(wú)菌。
本發(fā)明所述的一種簡(jiǎn)便高效的自體富血小板血漿的提取方法，其步驟如下a.打開(kāi)靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?，注射器1內(nèi)先抽取無(wú)菌、濃度為102 109mmol/L 的檸檬酸鈉抗凝劑后再進(jìn)行靜脈采血，其中抗凝劑與全血血液的體積比為1 9 10;b.關(guān)閉靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?，阻斷注射器1中的血流，反復(fù)顛倒注射器1數(shù)次， 使全血和抗凝劑充分混合；C.使注射器出口向下，將注射器1放入離心機(jī)中，第一次離心，離心溫度15 220C，離心速度2000 5000rpm，離心時(shí)間3 6min ；離心后血液分層，下層為紅細(xì)胞(RBC) 層、中層為包括白細(xì)胞(WBC)和血小板(PLE)的白膜層，上層為血漿層，見(jiàn)圖2 ；d.打開(kāi)靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?，推動(dòng)注射器活塞，使靠近注射器1出口的大部分紅 細(xì)胞層從靜脈輸液器針頭4排出，保留0. 5 1毫米高度的紅細(xì)胞層及其上的白膜層、血漿 層，然后關(guān)閉靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ? ；e.反復(fù)顛倒注射器1數(shù)次，重新混合注射器1中血液，并使注射器出口向上，第二 次離心，離心速度2000 5000rpm，離心時(shí)間10 15min ；離心后血液再次分為3層，上層 為血漿層、中間層為包括白細(xì)胞(WBC)和血小板(PLE)的白膜層、下層為紅細(xì)胞層，見(jiàn)圖3 ；f.打開(kāi)靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?，推動(dòng)注射器活塞，使靠近注射器1出口的70 80%體積的血漿層從針頭4排出，余下的20 30%體積的血漿層和白膜層、紅細(xì)胞層的混 合物即為富血小板血漿(Platelet-richplasma, PRP)。在次期間，不需要更換靜脈輸液器連接管2和靜脈輸液器針頭4，但若疑有污染， 必須立即更換。制備得到富血小板血漿(Platelet-rich plasma, PRP)后，從靜脈輸液器針頭4吸 取無(wú)菌的含人凝血酶500U · ml—1的10% (9mmol/L)氯化鈣激活劑，激活劑與注射器內(nèi)PRP 的體積比為1 9 10，再關(guān)閉靜脈留置針?biāo)芰峡?，充分混合注射器1的液體，在激活劑的 作用下，激活富血小板血漿(Platelet-rich plasma, PRP)中的α顆粒使其釋放各種生長(zhǎng) 因子。若需立即使用可直接注射于需要的創(chuàng)傷部位；或室溫靜置IOmin后，使注射器1出口 在上，高速離心8000 15000r/min，離心3 5min，提取萃取液，注射于需要的創(chuàng)傷部位； 或離心后將萃取液置于無(wú)菌容器中-80°C凍存。檸檬酸鈉抗凝劑的作用是阻止血液凝固，在兩次離心過(guò)程中需要保持血液為抗凝 狀態(tài)，保持血小板未被激活；在血小板濃縮后抽取無(wú)菌10%氯化鈣(CaCl2)溶液，CaCl2作為 檸檬酸鈉抗凝劑的拈抗劑，使靜脈血不處于抗凝狀態(tài)，才能使人凝血酶激活PRP中血小板， 使血小板釋放出各種生長(zhǎng)因子。


圖1 改良的PRP提取裝置結(jié)構(gòu)示意圖；圖2 第一次離心后注射器中血液分層示意圖；圖3 第二次離心后注射器中血液分層示意圖。如圖1所示，各部分名稱(chēng)為5毫升或2毫升注射器1、靜脈輸液器連接管2、靜脈 留置針?biāo)芰峡ㄆ?、靜脈輸液器針頭4 ；如圖2所示，第一次離心后，注射器的針頭向下，其中血液分層的各層為血漿層 5、白膜層6、紅細(xì)胞層7 ；
如圖3所示，第二次離心后，注射器的針頭向上，其中血液分層的各層為血漿層 5、白膜層6、紅細(xì)胞層7。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 a.注射器1內(nèi)先抽取0. 2ml,3. 2% (109mmol/L)檸檬酸鈉抗凝劑后再進(jìn)行靜脈采 血 1. 8ml ；b.關(guān)閉靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?，阻斷注射器1中的血流，反復(fù)顛倒注射器1數(shù)次， 使全血和抗凝劑充分混合；c.使注射器出口在下，將注射器1放入離心機(jī)中，第一次離心，離心溫度20V，離 心速度3000rpm，離心^iin ；離心后血液分層，即下層為紅細(xì)胞(RBC)層、中層為包括白細(xì)胞 (WBC)和血小板(PLE)的白膜層，上層為血漿層，見(jiàn)圖2 ；d.打開(kāi)靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?，推動(dòng)注射器活塞，使靠近注射器1出口的大部分 RBC層從靜脈輸液器針頭4排出，保留0. 5毫米高度的RBC層及其上的白膜層、血漿層，然后 關(guān)閉靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ? ；e.反復(fù)顛倒注射器1數(shù)次，重新混合注射器1中血液，并使注射器出口向上，第二 次離心，離心速度3000rpm，離心15min ；離心后血液再次分為3層，即上層為血漿層、中間層 為包括白細(xì)胞(WBC)和血小板(PLE)的白膜層、下層為紅細(xì)胞層，見(jiàn)圖3 ；f.打開(kāi)靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?，推動(dòng)注射器活塞，使靠近注射器1出口的3/4體積 的血漿層從針頭4排出，余下的1/4體積的血漿層和白膜層、紅細(xì)胞層的混合物即為富血小 板血漿(Platelet-rich plasma, PRP)。從靜脈輸液器針頭4吸取無(wú)菌的含人凝血酶500U · πιΓ1的10%氯化鈣激活劑， 激活劑與注射器內(nèi)PRP的體積比為1 9，關(guān)閉靜脈留置針?biāo)芰峡?，充分混合注射器1的 液體，在激活劑的作用下，激活血小板中的α顆粒使其釋放各種生長(zhǎng)因子。若需立即使用 可直接注射于需要的創(chuàng)傷部位；或室溫靜置IOmin后，針頭4出口向上，高速離心12000r/ min,離心5min，提取萃取液，注射于需要的創(chuàng)傷部位，或離心后將萃取液置于無(wú)菌容器 中_80°C凍存。實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論與分析①酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)生長(zhǎng)因子含量PRP中含的血小板被激活后α顆粒中的血小板衍化生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor, PDGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β (transforminggrowth factor, TGF-β)、血管內(nèi) 皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growthfactor, VEGF)等釋放出來(lái)。采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)普通方法和采用本發(fā)明所述方法(改良組)提 取PRP的中PDGF、TGF-β、VEGF含量的差異。改良組三種生長(zhǎng)因子含量均高于普通組，P < 0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。表1 普通及改良法提取的PRP中PDGF、TGF_b、VEGFb含量(χ士 s，η = 10)
權(quán)利要求
1.一種自體富血小板血漿提取裝置，其特征在于由1個(gè)注射器(1)、1個(gè)靜脈輸液器連接管( 、1個(gè)靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ珻3)和1個(gè)靜 脈輸液器針頭(4)組成；注射器(1)用以抽取靜脈血并充當(dāng)離心管；靜脈輸液器針頭(4)通過(guò)靜脈輸液器連接 管⑵和注射器⑴出口連接，靜脈輸液器針頭⑷用以皮膚血管穿刺、抽取抗凝劑和激活 劑或向人體需要部位注射提取后的自體富血小板血漿；靜脈輸液器連接管( 可彎曲固定 于靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?3)中。
2.一種自體富血小板血漿的提取方法，其步驟如下a.打開(kāi)靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?3)，注射器(1)內(nèi)先抽取無(wú)菌、濃度為102 109mmol/L 的檸檬酸鈉抗凝劑后再進(jìn)行靜脈采血，其中抗凝劑與全血血液的體積比為1 9 10;b.關(guān)閉靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?3)，阻斷注射器(1)中的血流，反復(fù)顛倒注射器(1)數(shù) 次，使全血和抗凝劑充分混合；c.使注射器出口向下，將注射器(1)放入離心機(jī)中，第一次離心，離心溫度15 22°C， 離心速度2000 5000rpm，離心時(shí)間3 6min ；離心后血液分層，下層為紅細(xì)胞RBC層、中 層為包括白細(xì)胞WBC和血小板PLE的白膜層，上層為血漿層；d.打開(kāi)靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?3)，推動(dòng)注射器活塞，使靠近注射器(1)出口的大部分紅 細(xì)胞層從靜脈輸液器針頭4排出，保留0. 5 1毫米高度的紅細(xì)胞層及其上的白膜層、血漿 層，然后關(guān)閉靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?3)；e.反復(fù)顛倒注射器(1)數(shù)次，重新混合注射器(1)中血液，并使注射器出口向上，第二 次離心，離心速度2000 5000rpm，離心時(shí)間10 15min ；離心后血液再次分為三層，上層 為血漿層、中間層為包括白細(xì)胞WBC和血小板PLE的白膜層、下層為紅細(xì)胞RBC層；f.打開(kāi)靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?3)，推動(dòng)注射器活塞，使靠近注射器(1)出口的70 80%體積的血漿層從針頭(4)排出，余下的20 30%體積的血漿層和白膜層、紅細(xì)胞層的 混合物即為富血小板血漿。
全文摘要
本發(fā)明屬于臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種簡(jiǎn)便高效的自體富血小板血漿提取裝置及提取方法，所提取的自體富血小板血漿中含有多種復(fù)合生長(zhǎng)因子，能夠有效地促進(jìn)組織的修復(fù)。由1個(gè)注射器、1個(gè)靜脈輸液器連接管、1個(gè)靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?個(gè)靜脈輸液器針頭組成；注射器用以抽取靜脈血并充當(dāng)離心管；靜脈輸液器針頭通過(guò)靜脈輸液器連接管和注射器出口連接，靜脈輸液器針頭用以皮膚血管穿刺、抽取抗凝劑和激活劑并向人體需要部位注射提取后的自體富血小板血漿；靜脈輸液器連接管可彎曲固定于靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ小?br> 文檔編號(hào)A61M1/02GK102078644SQ201110053979
公開(kāi)日2011年6月1日 申請(qǐng)日期2011年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月8日
發(fā)明者周延民, 王悅 申請(qǐng)人:吉林大學(xué)