專利名稱：具有抗動脈粥樣硬化作用的二肽的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及以Trp-HiS所表示的二肽或其鹽作為有效成分，且即使并發(fā)有忌用鈣拮抗劑的心臟病時也能使用的、對動脈粥樣硬化癥具有預防或抑制其發(fā)展的作用的健康食品、功能性食品、醫(yī)藥品等的組合物。
背景技術：
鈣通道阻滯劑是具有血管舒緩作用乃至血管擴張作用的藥劑，有關其對動脈粥樣硬化癥的效果也有文獻記載。例如，在非專利文獻1中，對屬于代表性的鈣通道阻滯劑的阿折地平(azelnidipine)，記載了其抗動脈粥樣硬化作用。在此所記載的能夠確認效果的最小有效作用量為:3mg/kg/日，其與血管擴張作用所需的作用量8 16mg/日(體重60kg的患者)相比，是非常大的值。根據關于阿折地平的資料(“關于CALBL0CK(阿折地平)以及CALBL0CK片8mg · 16mg的資料”宇部興產株式會社、三共株式會社(http://WWW. info, pmda. go. jp/Shinyaku/g030102/，2009年2月23日從互聯網獲得))，在對大鼠的給藥實驗中，經10mg/kg/日的給藥時確認到了諸如心臟重量開始增加這樣的副作用。鈣通道阻滯劑由于其作用機理，對心臟的影響成為問題。雖然將鈣通道阻滯劑作為血管擴張劑使用時，其有效作用量與引起心臟重量增加的副作用的量之間有一定的距離，疑似很少成為問題，但是在將鈣通道阻滯劑作為抗動脈粥樣硬化劑使用時，如上所述， 作為抗動脈粥樣硬化劑的有效作用量與引起心臟重量增加的副作用的量之間的差距僅為 3. 3倍左右，因此，將鈣通道阻滯劑作為抗動脈粥樣硬化劑使用時成為問題。在先技術文獻非專利文獻非專利文獻1 Atherosclerosis 196(2008) 172-179

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的課題本發(fā)明的目的在于，以能夠比較容易地獲得的原料提供對心臟的影響少且具有抗動脈粥樣硬化作用的物質。解決課題的手段本發(fā)明人對上述的課題反復進行了深入的研究。從而發(fā)現已知作為鈣阻滯劑具有血管擴張作用的二肽Trp-His，并不引起一直被認為只要是鈣阻滯劑則必然會引起的對心臟的顯著的影響，且顯示出抗動脈粥樣硬化作用，進而完成了本發(fā)明。S卩，本發(fā)明如下(1) 一種動脈粥樣硬化癥的預防或改善劑，是以Trp-HiS所表示的二肽或其鹽為有效成分，即使相對于有效作用量進行過量的給藥也不會引起對心臟的副作用。(2) 一種動脈粥樣硬化癥的預防或改善劑，是以Trp-His所表示的二肽或其鹽作為有效成分，用于患有忌用鈣拮抗劑的心臟病的患者。
(3) (1)或( 所述的動脈粥樣硬化癥的預防或改善劑，其中，每日給藥量是，對每 Ikg體重，為5 IOOmg0發(fā)明效果根據本發(fā)明，利用通過合成等而能夠比較容易地調制的Trp-His所表示的二肽及其鹽，可提供不對心臟帶來顯著影響的、具有抗動脈粥樣硬化作用的藥劑等的組合物。


圖1是“ β -伴球蛋白α，-亞基”的序列。圖2是比較例1 (參照)、實施例1 (Trp-His給藥量10mg/kg/日)、實施例 2 (Trp-His給藥量100mg/kg/日)中的飼養(yǎng)9周后的主動脈(aortic tree)的動脈粥樣硬化病變(白色部分)?？梢源_認實施例1、2的病變比比較例1 (參照)小。圖3是圖2的病變區(qū)域的數值解析數據。與比較例1(參照)相比，實施例
1(Trp-His給藥量10mg/kg/日)、實施例2 (Trp-His給藥量100mg/kg/日)的病變區(qū)域小。圖4是比較例1 (參照)、實施例1 (Trp-His給藥量10mg/kg/日)、實施例
2(Trp-His給藥量100mg/kg/日)中的飼養(yǎng)9周后的主動脈竇的動脈粥樣硬化病變。比較例1、實施例1、實施例2之間沒有發(fā)現大的差別。圖5是圖4病變區(qū)域的數值解析數據。比較例1、實施例1 (Trp-His給藥量IOmg/ kg/日)、實施例2 (Trp-His給藥量100mg/kg/日)之間沒有發(fā)現顯著的差。
具體實施例方式本發(fā)明中所述的“抗動脈粥樣硬化作用，，是指，抑制動脈粥樣硬化癥的發(fā)病，或抑制臨時發(fā)病的動脈粥樣硬化癥的發(fā)展。本發(fā)明所述的“有效作用量”是指，顯示出抗動脈粥樣硬化作用的給藥量。而“相對于有效作用量進行過量的給藥”是指，相對于認為有效的作用量中盡量少的量，進行10倍量左右的給藥。另外，“不引起對心臟的副作用”是指，鑒于被稱為鈣阻滯劑的藥劑由于其作用機理禁止使用于并發(fā)有心臟病的患者的現狀，即使對并發(fā)有忌用鈣阻滯劑的心臟病的患者也能夠使用的程度的、對心臟的影響少的情況。更具體而言，如本發(fā)明實施例2，在相對于能確認目的效果的給藥量10mg/kg/日，以相當于其10倍量的100mg/kg/日進行給藥也不會對心臟重量帶來顯著的影響的情況時，可判斷為本發(fā)明所說的“不引起對心臟的副作用”。本發(fā)明的特征之一是“不引起對心臟的副作用”，特別優(yōu)選使用于并發(fā)心臟病的患者或忌用鈣阻滯劑的患者。其中，忌用鈣阻滯劑的心臟病，可舉出房室傳導阻滯、心原性休克等。動脈是由心臟發(fā)起，對于人來說是從左心室的主動脈口開始上行后以胸骨角或第 2肋軟骨的高度移向主動脈弓。上行主動脈的起始部上的血管徑大于末梢側，所以被稱為主動脈球(bulb of aorta)，其內腔被稱為主動脈竇(sinus of aorta)或瓦氏竇(sinus of Valsalva)。本發(fā)明中，對于主動脈竇未確認到效果。將本發(fā)明帶來效果的動脈記為主動脈(aortic tree)。在此所說的主動脈(aortic tree)不包括主動脈竇。作為本發(fā)明的有效成分的二肽Trp-His，是大豆蛋白質中也存在的序列，可通過將
4大豆蛋白質用適宜的酶進行分解，將其分餾提純?yōu)楹兴桦牡酿s分而獲得，或者由于肽鍵長度較短為2，所以也可以通過一般的肽合成的方法獲得。并且，Trp-His的序列是在大豆蛋白質β-伴球蛋白的α ’ -亞基一級結構中的125-1 位上存在。該大豆蛋白質的氨基酸序列示于圖1。若是從大豆蛋白等通過酶等進行分解而調制的Trp-His，則屬于來源于過去有食用經驗的原料，所以可作為增補劑、健康補助制品、特定保健食品的重要的原料而具有用途。通過合成法獲得本發(fā)明的二肽時，可使用通常的肽合成所用的化學合成法(固相法、液相法)、酶合成法以及使用DNA重組法的生物學合成方法中的任意種。關于酶法，已知的有利用蛋白質分解酶(蛋白酶)逆反應的方法(J. Biol. Chem.，707-720 (1937))、利用耐熱性氨?；鵷-RNA合成酶的方法[參照日本特開昭59-106298號公報]等，并且最近還公開了使用屬于埃希菌屬或芽孢桿菌屬的微生物的制造方法(國際公開番號W02004/058960)。另外，通過合成而獲得的本發(fā)明的肽可用反相高效液相色譜法、使用離子交換樹脂或多孔高聚樹脂(high porous polymers resin)的色譜法、親和色譜法等的通常的提純法進行提純。并且，氨基酸優(yōu)選為L型。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的給藥途徑、劑形，本領域技術人員可適宜設計。作為給藥途徑的例子有經口、口腔、注射(皮內、皮下、肌肉、靜脈)、呼吸道呼吸器官、體孔部(粘膜)， 作為劑形的例子有散劑、細粒劑、顆粒劑、片劑、膠囊、丸劑、液劑、懸浮劑、乳劑、吸入劑、噴劑、氣霧劑、栓劑等。制劑化時可以使用醫(yī)藥中允許的各種載體，例如可使用賦形劑、粘接劑、外皮(包層)、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、表面活性劑、調味(香)劑、著色劑、保存劑、穩(wěn)定劑等的制劑成分。該醫(yī)藥組合物可以經口給藥且有效。另外，也可以以食品的形態(tài)給藥，可以想到的方式有飲料、片式食品、烤制糕餅、冰激凌、巧克力等。并且，以規(guī)定量含有Trp-His所表示的二肽或其鹽，只要對本發(fā)明的效果等帶來不良影響的前提下，混合其他的肽和其他成分也不會成為問題。另外，“二肽或其鹽”這種記載也指二肽和其鹽混合存在的狀態(tài)。為得到抗動脈粥樣硬化作用所必要的Trp-His的量按照每Ikg體重優(yōu)選為5 IOOmg/日，更優(yōu)選為7 IOOmg/日，最優(yōu)選為10 IOOmg/日。Trp-His的量過少時，缺乏抗動脈粥樣硬化作用，在大多情況下不理想。另外，關于超過100mg/kg/日的給藥量，到 2009年2月23日的階段為止，還未進行其對心臟的影響的驗證。下面將記載實施例。若未特別指出，％表示重量％。實施例實驗1 (實施例1 2、比較例1)“二肽Trp-His的抗動脈粥樣硬化作用”肽、試劑的獲得Trp-His是通過Fmoc固相合成法(國產化學社制造)進行合成的。其他的試劑使用了試劑級的物質。動物測試體使用了由Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)購得并在九州大學醫(yī)學部動物實驗研究所中飼養(yǎng)的apo-E敲除小鼠(雄性8 18周齡)。將其分為3 個組，供給表1所示的飼料飼養(yǎng)了 9周。各組間的小鼠的周齢沒有顯著的差。(比較例1:15. 0 士 0· 8，實施例 1 14. 3 士 1. 2，實施例 2 :14. 6 士 1. 3)。
表1:飼料的配制
權利要求
1.一種動脈粥樣硬化癥的預防或改善劑，以Trp-HiS所表示的二肽或其鹽作為有效成分，即使相對于有效作用量進行過量的給藥也不引起對心臟的副作用。
2.一種動脈粥樣硬化癥的預防或改善劑，以Trp-His所表示的二肽或其鹽作為有效成分，用于患有忌用鈣拮抗劑的心臟病的患者。
3.如權利要求1或2所述的動脈粥樣硬化癥的預防或改善劑，其每日給藥量是，對每 Ikg體重，為5 IOOmg0
全文摘要
本發(fā)明對并發(fā)心臟病的動脈粥樣硬化癥患者提供可無需擔心對心臟的影響地使用的抗動脈粥樣硬化劑，并提供內含該功能的食品。因此，所提供的抗動脈粥樣硬化劑以及內含該功能的食品，以二肽Trp-His和/或其鹽為有效成分。
文檔編號A61P9/10GK102307585SQ20108000706
公開日2012年1月4日 申請日期2010年1月5日 優(yōu)先權日2009年3月13日
發(fā)明者中森俊宏, 今泉勝己, 佐藤匡央, 松井利郎, 松本清 申請人:不二制油株式會社, 國立大學法人九州大學