專利名稱：判定大黃有效成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種判定中藥材原料中有效成分的方 法，具體地說是一種能夠準確判定大黃有效成分的方法。
背景技術(shù)：
大黃為蓼科植物掌葉大黃(Rheum palmatum L)、塘沽特大黃(Rheum tanguticum Maxim, ex Balf)或藥用大黃(Rheum officinale Baill)的干燥根及根莖，其性寒、味苦， 具有瀉熱通腸、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)等功效。大黃的化學(xué)成分中已被闡明化學(xué)結(jié)構(gòu)的有至少 13種以上，其主要成分為蒽醌類化合物，其中游離的羥基蒽醌類化合物主要為大黃酸、大黃 素、蘆薈大黃素、大黃素甲醚和大黃酚?，F(xiàn)代藥理研究表明，游離的蒽醌化合物為大黃的主 要抗菌成分，其中蘆薈大黃素、大黃素及大黃酸的抗菌作用較強，對多數(shù)革蘭陽性細菌均具 有抑制作用。中藥大黃的偽品在市場上流通的有很多種，如華北大黃、河套大黃、天山大黃、 信州大黃等，在大黃偽品中土大黃苷的含量較高而幾乎不含大黃酸，為了保證用藥安全、有 效，在對大黃有效成分進行鑒定時，通常將這五種羥基蒽醌類化合物作為薄層鑒別的主斑 點，并不得檢視出土大黃苷的斑點。目前，薄層檢視方法多采用在紫外燈365nm下檢視和氨蒸汽熏蒸后在日光下檢 視。土大黃苷在紫外光燈下顯藍紫色熒光，五種蒽醌類化合物均顯黃色熒光，因此在紫外燈 下檢視應(yīng)為五個黃色熒光斑點，而不得有持久的藍紫色熒光斑點。羥基蒽醌類化合物在堿 性溶液中顏色加深，多呈紅色或紫紅色，并且此種紅色物質(zhì)不溶于有機溶劑，加酸則顏色褪 去。氨蒸汽熏蒸檢測法就是利用該類化合物遇堿變紅的特性進行的，但是由于氨蒸汽易于 揮發(fā)，當(dāng)樣品從氨蒸汽中取出后，隨著氨蒸汽的揮發(fā)，紅色會很快褪去，從而給檢視帶來不 便，進一步地會造成判定誤差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題，是提供一種能夠準確判定大黃有效成分的方法，此法 常規(guī)方法的前述不足，當(dāng)它使斑點變?yōu)榧t色時，該紅色斑點可以長時間保存，不易褪色或消 失，便于從容檢視，確保檢測結(jié)果的準確性。本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題，所采用的技術(shù)方案是一種判定大黃有效成分的方法，按照如下步驟順序進行a.樣品制備取大黃藥材粉末加入甲醇浸泡lh，其中大黃藥材粉末質(zhì)量與甲醇體 積之比為lg 200ml，過濾，取濾液，于60 80°C水浴上蒸干，在蒸干后剩余固體中加入水 使其完全溶解，再加入鹽酸加熱回流30min，立即冷卻，用乙醚分2次震搖提取，合并兩次的 乙醚提取液，蒸干，在蒸干后剩余固體中加入三氯甲烷使其完全溶解，作為樣品溶液；b.對照組樣品溶液制備取已鑒定為合格的大黃藥材制作對照組樣品，按照步驟 a中樣品制備的方法進行處理，制得對照藥材溶液；c.對照品溶液制備取大黃酸作為對照品，加甲醇制成lmg/ml的溶液，作為對照品溶液；d.點樣將樣品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液點于同一硅膠H板上；e.展開將點樣后的硅膠H薄層板放在盛有展開劑的展開槽中進行展開；f 檢視①在365nm波長的紫外光燈下檢視，在樣品溶液色譜中，與對照藥材色譜相應(yīng)的 位置上，應(yīng)顯現(xiàn)完全相同的五個橙黃色熒光主斑點；在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯 現(xiàn)完全相同的黃色熒光斑點；②向展開后的硅膠H薄層板上噴顯色劑堿性有機溶液，斑點變?yōu)榧t色；如果同時滿足①與②兩個條件，則可由此判定所檢測的大黃藥材原料中含有有效 成分大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃素甲醚和大黃酚；否則所檢樣品為偽品大黃。說明檢視步驟中所述“完全相同”，意指樣品溶液色譜中與對照藥材色譜中所顯 現(xiàn)的斑點顏色完全相同。作為本發(fā)明的限定，所述展開劑為石油醚、甲酸乙酯和甲酸的混合溶液，其中石油 醚、甲酸乙酯、甲酸的體積比是15 5 1 ；所述石油醚的溫度為30 60°C。石油醚的溫度不同極性就不同，選30 60°C是因為該餾程范圍內(nèi)石油醚、甲酸乙 酯、甲酸按15 5 1的比例混合時的展開結(jié)果最佳。作為本發(fā)明的另外一種限定，在檢視步驟f 中，所述堿性有機溶液為氫氧化鈉或 氫氧化鉀的醇溶液，其中醇選自乙醇、甲醇或異丙醇中的一種，其濃度為0 飽和狀態(tài)的濃度。本發(fā)明所提供的上述判定大黃樣品中有效成分的方法，是基于大黃中的有效成分 羥基蒽醌類化合物在堿性溶液中顏色加深，多呈紅色或紫紅色，并且此種紅色物質(zhì)不溶于 有機溶劑的性質(zhì)，采用堿性有機溶液作為顯色劑，堿性物質(zhì)可以使斑點變?yōu)榧t色，由于有機 溶劑易于揮發(fā)，加快干燥速度，而紅色斑點不溶于有機溶劑，在有機溶劑揮發(fā)時不被帶走， 所以斑點不易褪色、消失，可以長時間保存，便于檢視，確保檢測結(jié)果準確。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，所取得的技術(shù)進步在于采用堿性有機溶液作為顯色劑， 使斑點變?yōu)榧t色，該紅色斑點可以長時間保存，不易褪色或消失，便于從容檢視，確保檢測 結(jié)果的準確性。本發(fā)明可用于對中藥原料藥大黃中的有效成分進行準確判定。本發(fā)明下面將結(jié)合具體實施例作進一步詳細說明。
具體實施例方式實施例1判定大黃有效成分的方法該判定方法按照以下步驟順序進行a、樣品制備取大黃藥材粉末0. lg，加入甲醇20ml，浸泡lh，過濾，取濾液5ml，于 60 80°C水浴上蒸干，在蒸干后剩余固體中加入10ml水使其完全溶解，再加入1ml鹽酸， 加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次震搖提取，每次20ml，合并乙醚提取液，蒸干，在 蒸干后剩余固體中加入三氯甲烷1ml使其完全溶解，作為樣品溶液；b、對照藥材樣品制備取合格的大黃藥材，同樣品處理方法；c、對照品制備取大黃酸對照品，加入甲醇制成lmg/ml的溶液，作為對照品溶液；d、點樣將樣品溶液、對照藥材樣品溶液和對照品溶液點于同一硅膠H板上；
e、展開將點了樣的硅膠H薄層板放在盛有展開劑的展開槽中進行展開；展開劑 為石油醚(30 60°C )甲酸乙酯甲酸體積比為15 5 1的混合液。f、檢視①在365nm波長的紫外光燈下檢視，在樣品溶液色譜中，與對照藥材色譜相應(yīng)的 位置上，應(yīng)顯現(xiàn)完全相同的五個橙黃色熒光主斑點；在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯 現(xiàn)完全相同的黃色熒光斑點；②向展開后的硅膠H薄層板上噴顯色劑堿性有機溶液，斑點變?yōu)榧t色；如果同時滿足①與②兩個條件，則可由此判定所檢測的大黃藥材原料中含有有效 成分大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃素甲醚和大黃酚；否則所檢樣品為偽品大黃。實施例2判定大黃有效成分的方法本實施例與實施例1的區(qū)別只在于檢視時，往展開后的硅膠H薄層板上噴顯色劑 氫氧化鉀的乙醇溶液，斑點變?yōu)榧t色。本實施例與實施例1的其它步驟同。實施例3判定大黃有效成分的方法本實施例與實施例1的區(qū)別只在于檢視時，往展開后的硅膠H薄層板上噴顯色劑 氫氧化鉀的甲醇溶液，斑點變?yōu)榧t色。本實施例與實施例1的其它步驟同。實施例4判定大黃有效成分的方法本實施例與實施例1的區(qū)別只在于檢視時，往展開后的硅膠H薄層板上噴顯色劑 氫氧化鈉的乙醇溶液，斑點變?yōu)榧t色。本實施例與實施例1的其它步驟同。實施例5判定大黃有效成分的方法本實施例與實施例1的區(qū)別只在于檢視時，往展開后的硅膠H薄層板上噴顯色劑 氫氧化鉀的異丙醇溶液，斑點變?yōu)榧t色。本實施例與實施例1的其它步驟同。
權(quán)利要求
一種判定大黃有效成分的方法，其特征在于該方法按照如下步驟順序進行a.樣品制備取大黃藥材粉末加入甲醇浸泡1h，其中大黃藥材粉末質(zhì)量與甲醇體積之比為1g∶200ml，過濾，取濾液于60～80℃水浴上蒸干，在蒸干后剩余固體中加入水使其完全溶解，再加入鹽酸加熱回流30min，立即冷卻，用乙醚分2次震搖提取，合并兩次的乙醚提取液，蒸干，在蒸干后剩余固體中加入三氯甲烷使其完全溶解，作為樣品溶液；b.對照組樣品溶液制備取已鑒定為合格的大黃藥材制作對照組樣品，按照步驟a中樣品制備的方法進行處理，制得對照藥材溶液；c.對照品溶液制備取大黃酸作為對照品，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作為對照品溶液；d.點樣將樣品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液點于同一硅膠H板上；e.展開將點樣后的硅膠H薄層板放在盛有展開劑的展開槽中進行展開；f.檢視①在365nm波長的紫外光燈下檢視，在樣品溶液色譜中，與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯現(xiàn)完全相同的五個橙黃色熒光主斑點；在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯現(xiàn)完全相同的黃色熒光斑點；②向展開后的硅膠H薄層板上噴顯色劑堿性有機溶液，斑點變?yōu)榧t色；如果同時滿足①與②兩個條件，則可由此判定所檢測的大黃藥材原料中含有有效成分大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃素甲醚和大黃酚；否則所檢樣品為偽品大黃。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的判定大黃有效成分的方法，其特征在于所述展開劑為石油 醚、甲酸乙酯和甲酸的混合溶液，其中石油醚、甲酸乙酯、甲酸的體積比是15 5 1;所述 石油醚的溫度為30 60°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種判定大黃有效成分的方法，包括樣品制備、對照組樣品溶液制備、對照品溶液制備、點樣、展開、檢視等步驟。本方法基于大黃中的有效成分羥基蒽醌類化合物在堿性溶液中顏色加深，多呈紅色或紫紅色，并且此種紅色物質(zhì)不溶于有機溶劑的性質(zhì)，采用堿性有機溶液作為顯色劑，堿性物質(zhì)可以使斑點變?yōu)榧t色，由于有機溶劑易于揮發(fā)，加快干燥速度，而紅色斑點不溶于有機溶劑，在有機溶劑揮發(fā)時不被帶走，所以斑點不易褪色、消失，可以長時間保存，便于檢視，確保檢測結(jié)果準確。本發(fā)明可用于對中藥原料藥大黃中的有效成分進行準確判定。
文檔編號A61P31/04GK101978994SQ201010504500
公開日2011年2月23日 申請日期2010年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月13日
發(fā)明者劉志輝, 武路剛, 牛志勇, 王志香, 趙素娟, 郭艷玉, 陳淑芳 申請人:河北科星藥業(yè)有限公司