專利名稱：川麥冬hplc指紋圖譜的建立方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，尤其是川麥冬藥材高效液相色譜(HPLC) 指紋圖譜的構(gòu)建方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
中藥指紋圖譜特指中藥樣本經(jīng)光譜或色譜等現(xiàn)代分析技術(shù)得到的中藥各組分群 體特征的圖譜或圖像。中藥指紋圖譜作為一種綜合的、可量化的質(zhì)量控制手段，目前，已被 眾多國際性醫(yī)藥機(jī)構(gòu)所承認(rèn)，已成為中成藥、天然藥物質(zhì)量控制最有效的方法之一。美國食 品藥品管理局在1996年制定的《FDA關(guān)于植物制品的指南》中，要求對植物原料、植物藥中 間品和植物藥產(chǎn)品提供相應(yīng)的指紋圖譜。英國草藥典、印度草藥典以及加拿大藥用及芳香 植物學(xué)會、德國藥用植物學(xué)會也接受色譜指紋圖譜。中國國家藥品監(jiān)督管理部門于2000年 發(fā)布了《中藥注射劑的指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》，明確要求對新申報的中藥注射 劑和已上市的中藥注射劑實(shí)行指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)。中藥指紋圖譜經(jīng)過了數(shù)十年的研究，使用了包括紫外、紅外、氣相、高效液相、薄 層、核磁共振、掃描電子顯微鏡、計算機(jī)圖像分析、電泳技術(shù)、同功酶分析法、分子生物學(xué)技 術(shù)、聚類分析技術(shù)等許多現(xiàn)代分析測試手段，為中藥的物質(zhì)鑒定和成分分析積累了大量的 數(shù)據(jù)。但從中藥全面質(zhì)量控制的角度看，還遠(yuǎn)未達(dá)到有效地反映和控制中藥的整體質(zhì)量的 目的。高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜在國際上容易獲得認(rèn)可，包括美國、英國、法國、加拿 大、德國、日本和印度在內(nèi)的許多國家更愿意接受HPLC指紋圖譜。因此，為中藥材建立相應(yīng) 的HPLC指紋圖譜，是現(xiàn)階段控制中藥內(nèi)在質(zhì)量的有效手段。麥冬為百合科沿階草屬多年生草本植物麥冬Ophiopogon japonicus(Thunb.) Ker-Gawl.的干燥塊根，四川是其最大的主產(chǎn)區(qū)之一。中醫(yī)臨床上常用于肺燥干咳、虛勞咳 嗽、津傷口渴、心煩失眠、內(nèi)熱消渴、腸燥便秘等病癥。麥冬含多種化學(xué)成分，自1936年報 道麥冬塊根中含維生素A類化合物以來，先后從麥冬中分離出糖類、皂苷、黃酮等化合物； 目前，《中國藥典》對麥冬的質(zhì)量評價方式單一，不足以系統(tǒng)、完整地表明麥冬藥材的整體質(zhì) 量，亟需探索更先進(jìn)、更有效的質(zhì)量控制手段。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種川麥冬藥材指紋圖譜的建立方法，以及由此方法所得到 的川麥冬藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。為實(shí)現(xiàn)此目的，本發(fā)明通過對川麥冬藥材高效液相色譜指紋 圖譜的研究，提出了一種更好的川麥冬藥材質(zhì)量控制方法，彌補(bǔ)了現(xiàn)有質(zhì)量控制技術(shù)的不 足，使)11麥冬藥材的質(zhì)量控制更加完善和科學(xué)。本發(fā)明的川麥冬藥材高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，包括如下步驟(1)供試品溶液的制備精密稱取藥材粉末稱量麥冬樣品3g至具塞容器中，加入 95 %乙醇水溶液50ml，超聲震蕩(20 V，90min)，濾膜過濾，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至2_3ml (50 V， 80r/min)用40ml水溶解，轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)，乙醚萃取4次，每次20ml，將乙醚層旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至3 5ml，甲醇定容至10ml，過0. 45 μ m —次性濾膜，濾液作為供試品溶液。(2)高效液相色譜分析色譜分離柱為Symmetry-Cw Q50 X 4. 6mm， 5ym)；流動相為甲醇-0. 2 %醋酸水溶液，梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?Omin — 20min — 38min — 67min — 90min,甲醇 15%— 32%— 67%— 74%— 100%;流速 1. OmL/min,檢測波長280nm，進(jìn)樣量15 μ L，柱溫30°C。在此條件下分析供試品溶液，得 到川麥冬藥材的指紋圖譜。按照本發(fā)明提供的方法，對16批川麥冬藥材建立了 HPLC指紋圖譜，通過分析比 較，確定了 25個共有特征峰。特征峰的保留時間分別為5.2min、17. 2min、18. lmin、23. 4min、32. 4min、 36. 5min、41. 4min、48. 6min、51. 2min>52. 7min、55. 6min>57. 0min、64.4min、67. lmin、 68.0min、69.6min>76.7min>77.2min>78. lmin>78.7min>79. 3min、80.0min、80.9min、 83. 3min,87. Omin，這些共有特征峰構(gòu)成了川麥冬藥材的指紋特征，可作為川麥冬藥材的標(biāo) 準(zhǔn)指紋圖譜。本發(fā)明具有如下顯著的優(yōu)點(diǎn)和用途(1)將川麥冬藥材作為一個整體對待，通過比較其共有峰可以找出不同藥材之間 的細(xì)微差異；(2)供試品制作簡便，色譜條件容易實(shí)現(xiàn)；(3)方法的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性都比較好；(4)適于對川麥冬藥材真?zhèn)巍a(chǎn)地和品質(zhì)的鑒別和控制。


圖1是本發(fā)明提供的川麥冬藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。圖中從左到右分別標(biāo)出了其共 有特征峰1至25號。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例如下(1)儀器和藥品使用安捷倫1101高效液相色譜儀；川麥冬藥材共16批，均采集 于川麥冬地道產(chǎn)區(qū)四川省綿陽市三臺縣；其它試劑為色譜純或分析純。(2)精密稱取藥材粉末稱量麥冬樣品3g至具塞容器中，加入95%乙醇水溶液 50ml，超聲震蕩(20°C，90min)，濾膜過濾，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至2_3ml (50°C，80r/min)用40ml水 溶解，轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)，乙醚萃取4次，每次20ml，將乙醚層旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至3 5ml，甲醇定容 至10ml，過0. 45 μ m —次性濾膜，濾液作為供試品溶液。(3)高效液相色譜分析色譜分離柱填料為5 μ m Symmetry-C18 (250 X 4. 6mm,)； 流動相為甲醇-0. 2 %醋酸水溶液，梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?Omin — 20min — 38min — 67min — 90min,甲醇 15%— 32%— 67%— 74%— 100%;流速 1. OmL/min，檢測波長280nm，進(jìn)樣量15μ L，柱溫30°C。在此條件下分析供試品溶液，得 到川麥冬藥材的指紋圖譜。(4)按照本發(fā)明提供的方法，對16批川麥冬藥材建立了 HPLC指紋圖譜，通過分 析比較，確定了 25個共有特征峰，其保留時間分別為5. 2min、17. 2min、18. lmin,23. 4min、32.4min>36. 5min、41. 4min、48.6min、51. 2min>52. 7min>55.6min>57. 0min、64. 4min、 67. lmin、68. 0min、69. 6min>76. 7min>77.2min、78. lmin>78. 7min>79.3min、80. Omin、 80. 9min、83. 3min,87. Omin，這些共有特征峰構(gòu)成了川麥冬藥材的指紋特征，可作為川麥冬 藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
權(quán)利要求
1.一種川麥冬藥材高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特征包括供試品溶液的制 備、指紋圖譜的制作和標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的確定。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的川麥冬藥材高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特征是 所述的供試品溶液的制備方法是精密稱取藥材粉末稱量麥冬樣品3g至具塞容器中，加入 95 %乙醇水溶液50ml，超聲震蕩(20 V，90min)，濾膜過濾，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至2_3ml (50 V， 80r/min)用40ml水溶解，轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)，乙醚萃取4次，每次20ml，將乙醚層旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至 3 5ml，甲醇定容至10ml，過0. 45 μ m —次性濾膜，濾液作為供試品溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的川麥冬藥材高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特征是 所述的指紋圖譜的制作過程為色譜分離柱為Symmetry-C18 (250 X 4. 6mm，5 μ m)；流動相為 甲醇-0. 2%醋酸水溶液，梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?min — 20min — 38min — 67min — 90min, 甲醇 15% — 32% — 67% — 74% — 100% ；流速1. OmL/min，檢測波長280nm，進(jìn)樣量 15 μ L，柱溫30°C。在此條件下分析供試品溶液，得到川麥冬藥材的指紋圖譜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3所述的川麥冬藥材高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特 征是所述的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的確定方法是按照本發(fā)明提供的方法，對16批川麥冬藥材建 立了 HPLC指紋圖譜，通過分析比較，確定了 25個共有特征峰，保留時間分別為5. 2min、 17. 2min>18. lmin>23. 4min>32. 4min>36. 5min、41. 4min、48. 6min、51. 2min>52. 7min、 55.6min>57. 0min、64. 4min、67. lmin、68. 0min、69. 6min>76.7min>77. 2min>78. lmin、 78. 7min、79. 3min、80. 0min、80. 9min、83. 3min、87. Omin，這些共有特征峰構(gòu)成了川麥冬藥 材的指紋特征，可作為川麥冬藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種川麥冬藥材HPLC指紋圖譜的建立方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，包括供試品溶液的制備，對照品溶液的制備，色譜條件的選擇，并用高效液相色譜儀進(jìn)行測定，得到川麥冬藥材的指紋圖譜。通過對16批次川麥冬藥材HPLC指紋圖譜的對比，確定其共有指紋特征，得到標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。本發(fā)明具有方法簡便、重現(xiàn)性好、特征峰多、準(zhǔn)確可靠等特點(diǎn)。所建立的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜能有效地表征川麥冬藥材的質(zhì)量。
文檔編號A61K36/8968GK102119997SQ20101010658
公開日2011年7月13日 申請日期2010年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月29日
發(fā)明者劉江, 陳興福 申請人:劉江, 陳興福