專利名稱：水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮的制備方法。
背景技術(shù)：
尼泊爾鳶尾異黃酮是葛花苷的水解產(chǎn)物，申請(qǐng)人曾于2005年起致力于該物質(zhì)在藥物中的 應(yīng)用，研究證明它具有明顯的擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、腦動(dòng)脈及外周血管和微血管的作用，并可降低 血管阻力，降低膽固醇和血液粘稠度等。由于尼泊爾鳶尾異黃酮屬于異黃酮類化合物，在水 中無(wú)法溶解，無(wú)法制成注射液，而實(shí)驗(yàn)證明，尼泊爾鳶尾異黃酮現(xiàn)有的藥用途徑，影響其藥 效，因此，申請(qǐng)人研究了其衍生物的水溶性結(jié)構(gòu)，但是，這種制備方法復(fù)雜，容易引入雜質(zhì) ，增加了藥品的副作用，如需純化處理時(shí)使生產(chǎn)成本大幅增高。如何開發(fā)一種水溶性尼泊爾 鳶尾異黃酮的制備方法，在不增加生產(chǎn)成本的前提下，使藥物活性與尼泊爾鳶尾異黃酮完全 相同，便于增加藥效的吸收是本領(lǐng)域研究的重要課題之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮的制備方法，采用本發(fā)明方法制備的 水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮，其方法簡(jiǎn)單，沒(méi)有雜質(zhì)，不需增加純化步驟，制造成本低，產(chǎn)品 的純度高，藥品安全性高，與尼泊爾鳶尾異黃酮的藥液相同，提高了藥物的有效利用。
本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的，通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮的制備方法 ，包括如下步驟
① 將尼泊爾鳶尾異黃酮溶于相應(yīng)的無(wú)機(jī)或有機(jī)堿水溶液中，調(diào)溶液PH值至8-14;
② 將調(diào)節(jié)PH值后的溶液置于常溫下攪拌，同時(shí)，在攪拌下加入乙醇、丙醇、丁醇、丙酮 中的任一種；
③ 將步驟②中得到的溶液靜置2-4小時(shí)后過(guò)濾、洗滌，然后在3(TC-9(TC下減壓干燥至恒 重，得到淡黃色結(jié)晶性粉末狀物質(zhì)，即為水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮。
所述在步驟②溶液中加入乙醇、丙醇、丁醇及丙酮與尼泊爾鳶尾異黃酮的重量比為1
所述步驟①中所述的有機(jī)堿水溶液是氫氧化鈉溶液。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于采用本發(fā)明方法制備的水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮，其方法簡(jiǎn)單，沒(méi) 有雜質(zhì)，不需增加純化步驟，制造成本低，產(chǎn)品的純度高，藥品安全性高，與尼泊爾鳶尾異黃酮的藥液相同，提高了藥物的有效利用。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的方法包括如下步驟
① 將尼泊爾鳶尾異黃酮溶于相應(yīng)的無(wú)機(jī)或有機(jī)堿水溶液中，調(diào)溶液PH值至8-14;
② 將調(diào)節(jié)PH值后的溶液置于常溫下攪拌，同時(shí)，在攪拌下加入乙醇、丙醇、丁醇、丙酮中的任一種，或其混合均勻；
③ 將步驟②中得到的溶液靜置2-4小時(shí)后過(guò)濾、洗滌，然后在3(TC-9(TC下減壓干燥至恒重，得到淡黃色結(jié)晶性粉末狀物質(zhì)，即為水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮。
所述的在步驟②溶液中加入乙醇、丙醇、丁醇及丙酮與尼泊爾鳶尾異黃酮的重量比為
1: 1。
步驟①中所述的有機(jī)堿水溶液是氫氧化鈉溶液。本發(fā)明方法制備的水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮的通式為<formula>formula see original document page 4</formula>
式中的Ri+、 R2+分別為Na離子、鉀離子、乙二胺離子、異丙胺離子、三乙胺離子或三乙醇胺離子、精氨酸離子，Ri+、 R2+在同一化合物中可以相同也可以不同。
由于尼泊爾鸞尾異黃酮屬于異黃酮類化合物，受分子間氫鍵作用，使其堆積緊密，故水溶性差。在體內(nèi)不易吸收，所以，生物利用度極低，影響臨床療效。本發(fā)明采用堿中和的方法使尼泊爾鸞尾異黃酮在5， 7位失去氫，引入金屬離子能增加分子間排斥力，使分子間氫鍵失去作用，改變其分子間的排列，使其在水溶液中形成分子狀態(tài)，這種變化在化學(xué)角度分析
，并未使尼泊爾鳶尾異黃酮母核發(fā)生變化，在體內(nèi)體液生理ra的作用下，能夠完全恢復(fù)成尼
泊爾鸞尾異黃酮。因此水溶性尼泊爾鸞尾異黃酮具有與尼泊爾鸞尾異黃酮相同的藥理作用，同時(shí)又具有良好的水溶性，提高了生物利用度和臨床療效，增加新的藥用途徑和劑型，擴(kuò)大臨床應(yīng)用范圍和滿足臨床的不同需要。
實(shí)施例一水溶性尼泊爾鸞尾異黃酮的制備方法尼泊爾鳶尾異黃酮2克，異黃酮與乙醇l: l重量比，加氫氧化鈉溶液溶解，調(diào)節(jié)PH值為
10，濾過(guò)，加乙醇50ml，攪拌均勻，放置4小時(shí)，濾過(guò)，用10毫升乙醇洗滌，將沉淀40。C加壓干燥至恒重，得1.8 ()淡黃色結(jié)晶性粉末。經(jīng)高效液相色譜法鑒別，水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮與尼泊爾鳶尾異黃酮在檢測(cè)波長(zhǎng)254nm下檢測(cè)，保留時(shí)間相同。
實(shí)驗(yàn)表明溶解性取上述化合物0.5g，加水25ml，搖勻即得澄清溶液，另取尼泊爾鳶尾異黃酮5mg，加水250ml，加熱煮沸10分鐘，溶液渾濁，說(shuō)明本發(fā)明的水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮在水中的溶解性有顯著提高。
穩(wěn)定性取上述化合物，置10ml無(wú)色透明的西林瓶中，密塞，置光照強(qiáng)度為4000-5000Lux光度箱中放置10天，于40。C 士2。C、相對(duì)濕度75%±5%的恒溫恒濕箱中放置6個(gè)月，外觀無(wú)明顯改變，采用HPLC檢測(cè)，含量未見明顯改變，降解產(chǎn)物，未見明顯增加表明該化合物具有較好的穩(wěn)定性。
藥理活性
一、 水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮能明顯延長(zhǎng)小鼠缺氧的存活時(shí)間
昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，即空白對(duì)照組、水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮大劑量組200mg/kg、小劑量組100mg/kg和陽(yáng)性對(duì)照藥葛根素注射液組150 mg/kg，每組10只。尾靜脈注射給藥l次。給藥體積為0.4ml/20g體重?？瞻讓?duì)照組給予等容積的溶劑。于給藥后30min開始耐缺氧實(shí)驗(yàn)。將小鼠放入密閉廣口瓶?jī)?nèi)。記錄小鼠自入瓶開始至死亡時(shí)的存活時(shí)間。
結(jié)果表明，水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮能明顯延長(zhǎng)小鼠耐缺氧的存活時(shí)間，與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P 〈0.05)。
二、 水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮對(duì)大鼠急性不完全性腦缺血的保護(hù)作用將50只Wistar大鼠(平均體重235. 77± 15. 67g)，雌雄各半。隨機(jī)分為5組，即假手術(shù)組
、腦缺血模型組、水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮大劑量組100mg/kg、小劑量組50. Omg/kg、陽(yáng)性對(duì)照藥葛根素注射液組80.0mg/kg。每組10只。腹腔注射給藥。每日1次，連續(xù)給藥5天。給藥體積為l. 0ml/200g，假手術(shù)組和腦缺血模型組均給予等容積的溶劑。于末次給藥后30min開始實(shí)驗(yàn)。大鼠在25%烏拉坦(lg/kg)腹腔注射麻醉下，頸部正中切口，分離兩側(cè)頸總動(dòng)脈，雙重結(jié)扎(假手術(shù)組僅穿雙線但不結(jié)扎)，造成急性不完全性腦缺血。結(jié)扎后3h每組各取IO只快速斷頭取腦，裝入稱量瓶稱腦濕重，計(jì)算腦指數(shù)[腦指數(shù)二腦濕重/體重X10(F。]，然后置于11(TC烤箱中烘烤72小時(shí)到恒重，稱腦干重，計(jì)算腦含水量。
結(jié)果表明腦缺血模型組的腦指數(shù)和腦含水量明顯高于假手術(shù)組(P 〈0.05)，說(shuō)明腦缺血模型建立成功。葛花苷大、小劑量組均明顯降低急性不完全性腦缺血大鼠的腦指數(shù)和腦含水量，表明水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮可明顯減輕大鼠急性不完全性腦缺血大鼠的腦指數(shù)和腦含水量，表明水溶性尼泊爾鳶尾黃酮可明顯減輕大鼠急性不完全性腦缺血所引起的腦水腫。
三、 水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮口服給藥對(duì)小鼠耐缺氧的影響
昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，即空白對(duì)照組、水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮大劑量組400mg/kg、小劑量組200mg/kg和陽(yáng)性對(duì)照藥葛根素注射組150 mg/kg，每組10只。灌胃給藥。連續(xù)給藥5天，每天1次。給藥體積為0.4 ml/20g體重?？瞻讓?duì)照組給予等容積的溶劑。于末次給藥后lh開始耐缺氧實(shí)驗(yàn)。將小鼠放入密封廣口瓶?jī)?nèi)。記錄小鼠自入瓶開始至死亡時(shí)的存活時(shí)間。
結(jié)果表明，水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮能明顯延長(zhǎng)小鼠耐缺氧的存活時(shí)間，與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P 〈0.05)，說(shuō)明水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮能顯著增強(qiáng)機(jī)體耐缺氧的能力。
四、 水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮口服給藥對(duì)垂體后葉素致大鼠急性心肌缺血的影響將Wistar大鼠40只，體重235士15g，雌雄各半。隨機(jī)分為4組，即水溶性尼泊爾鳶尾異
黃酮大劑量組200mg/kg、小劑量組IOO. Omg/kg、陽(yáng)性對(duì)照藥葛根素注射液組80. Omg/kg和空白對(duì)照組。每組10只。灌胃給藥。給藥體積為lml/200g。連續(xù)給藥5天，每天1次?？瞻讓?duì)照組給予等容積的溶劑。于末次給藥后lh開始檢測(cè)心電圖。大鼠用2. 5%戊巴比妥鈉腹腔麻醉，仰臥固定。用針電極刺入四肢皮下，記錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖，作為基礎(chǔ)心電圖對(duì)照。然后尾靜脈注射垂體后葉素O. 8u/kg，于10s內(nèi)注射完畢。立即記錄注射垂體后葉素后5s、 10s、 15s、30s、 lmin、 2min、 3min的心電圖，觀察T波、ST段和心率的變化。以心電圖出現(xiàn)下列指標(biāo)一項(xiàng)者即為陽(yáng)性心肌缺血J點(diǎn)升高1.5mv以上，T波低平(降低原T波高度50。/。以上)、雙向、倒置，ST段水平下移O. 5mv，心律不齊。
結(jié)果表明，水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮大、小劑量組均可明顯減少由垂體后葉素所致的急性心肌缺血陽(yáng)性率，與空白對(duì)照組比較有明顯差異(P 〈0.05)表l。
表l水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮對(duì)垂體后葉素致大鼠急性心肌缺血的拮抗作用組別
劑量 (mg/kg)
動(dòng)物數(shù)
心肌缺血(％)
空白對(duì)照組 水溶性尼泊爾鳶 尾異黃酮 葛根素注射液
(只) - 10 200.0 10 100.0 10 80.0 10
陰性率陽(yáng)性率
0 100
70 30
50 50
60 40
P值
〈0. 01 〈0. 05 〈0.01。
權(quán)利要求
1.水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮的制備方法，其特征在于包括如下步驟①將尼泊爾鳶尾異黃酮溶于相應(yīng)的無(wú)機(jī)或有機(jī)堿水溶液中，調(diào)溶液PH值至8-14；②將調(diào)節(jié)PH值后的溶液置于常溫下攪拌，同時(shí)，在攪拌下加入乙醇、丙醇、丁醇、丙酮中的任一種；③將步驟②中得到的溶液靜置24小時(shí)后過(guò)濾、洗滌，然后在30℃-90℃下減壓干燥至恒重，得到淡黃色結(jié)晶性粉末狀物質(zhì)，即為水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮的制備方法，其特征在于在步驟②溶液中加入乙醇、丙醇、丁醇及丙酮與尼泊爾鳶尾異黃酮的重量比為1 :1
3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮的制備方法，其特 征在于步驟①中所述的有機(jī)堿水溶液是氫氧化鈉溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮的制備方法，包括如下步驟①將尼泊爾鳶尾異黃酮溶于相應(yīng)的無(wú)機(jī)或有機(jī)堿水溶液中，調(diào)溶液PH值至8-14；②將調(diào)節(jié)PH值后的溶液置于常溫下攪拌，同時(shí)，在攪拌下加入乙醇、丙醇、丁醇、丙酮中的任一種；③將步驟②中得到的溶液靜置2-4小時(shí)后過(guò)濾、洗滌，然后在30℃-90℃下減壓干燥至恒重，得到淡黃色結(jié)晶性粉末狀物質(zhì)，即為水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮。本發(fā)明采用本發(fā)明方法制備的水溶性尼泊爾鳶尾異黃酮，其方法簡(jiǎn)單，沒(méi)有雜質(zhì)，不需增加純化步驟，制造成本低，產(chǎn)品的純度高，藥品安全性高，與尼泊爾鳶尾異黃酮的藥液相同，提高了藥物的有效利用。
文檔編號(hào)A61K31/352GK101632656SQ20091030516
公開日2010年1月27日 申請(qǐng)日期2009年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月4日
發(fā)明者英 仲, 孫敬勇, 左春旭, 莉 張, 菊 王, 王元書, 解硯英 申請(qǐng)人:山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所