專利名稱：：靜脈注射用前列地爾長循環(huán)脂微球制劑及其制備方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于藥物制劑領域，涉及一種供靜脈注射用前列地爾的脂微球制劑及其制備方法。
背景技術：
：前列地爾(前列腺素El，PGE1)是前列腺素的一種，具有擴張血管、抑制血小板聚集、抑制胃酸分泌及剌激腸道和子宮平滑肌、肝腎功能保護作用，抑制胰腺外分泌，抗脂質氧化作用，剌激胰島素分泌等作用。臨床主要應用于l)治療慢性動脈閉塞癥(血栓閉塞性脈管炎、閉塞性動脈硬化癥等)引起的四肢潰瘍及微小血管循環(huán)障礙引起的四肢靜息疼痛，改善心腦臟器微循環(huán)障礙。2)治療進行性全身硬化癥、卡普蘭綜合癥、糖尿病引起的皮膚潰瘍。3)恢復振顫病引起的末梢血流障礙伴隨的自覺癥狀，及末梢循環(huán)、神經、運動功能障礙的恢復。4)動脈導管依賴性先天性心臟病，用以緩解低氧血癥，保持導管血流以待時機手術治療。5)改善經上腸系膜動脈性門靜脈造影功能。過去臨床上應用前列地爾通常采用大劑量長時間給藥，這樣使PGE1的藥理作用遍及全身，產生紅腫、全身發(fā)熱等副作用。PGE1可激活5-HT，使常規(guī)制劑使用時注射部位伴有難以忍受的疼痛。因此，開發(fā)前列地爾的新型制劑，以延長作用時間，提高生物利用度，降低毒副作用，提高病患的適應性，勢在必行。目前，國內外現(xiàn)有的前列地爾的制劑主要有前列地爾注射液、乳膏、凍干粉針、脂肪乳微球等。其中前列地爾的注射用制劑主要以凍干粉針和普通脂微球為主，凍干粉針包括普通的凍干粉針和環(huán)糊精包合的凍干粉針劑。脂微球(LIPIDMICROSPHERE)和其它先進的遞藥技術是近年來發(fā)展較快的藥物新劑型，具有很高的臨床和經濟價值。脂微球是以植物油(主要成分為脂肪酸甘油三酯)、磷脂乳化劑、等滲劑和注射用水制成的穩(wěn)定的水包油型(0/W)乳劑，可供靜脈注射，能完全被機體代謝和利用。脂微球的安全性能好，對靜脈無剌激，是臨床治療中廣泛使用的腸外營養(yǎng)劑。它不但可以為患者快速提供高能量，還與氨基酸、維生素、電解質等治療性輸液有很好的兼容性，可以同時配合使用。脂微球的粒徑小且分布均勻，穩(wěn)定性好，具有一定的靶向性，作為藥物載體能解決油狀藥物和脂溶性藥物的制劑難題，明顯降低藥物的毒副作用，減少藥物的剌激性，提高藥物的生物利用度，已經成為提高藥物療效的重要制劑研究方向。聚乙二醇是水溶性、無生物活性、無毒、柔軟的線性高分子。通過聚乙二醇修飾脂微球可以非常好的解決脂微球藥物制劑易從體循環(huán)中被肝、脾巨噬細胞迅速清除的缺點，可以使脂微球藥物制劑在血液中保留較長時間，增加了藥物的被動靶向功能。雖然有關聚乙二醇延長脂微球在血液中存留時間的作用機理仍然不是完全清楚，但是基本上可以認為主要是三種作用其一，聚乙二醇在脂微球表面形成有效的高分子隔離帶，其空間位阻阻斷或延緩了血中的脂蛋白或血蛋白與脂微球的相互作用，這種相互作用被認為會引起磷脂交換、脂微球泄露、脂微球磷脂膜的破壞和溶解；其二，高分子隔離帶隔斷了脂微球與細胞的直接相互作用；其三，聚乙二醇隔離帶阻斷或延緩了血漿蛋白在脂微球表面的吸附，有效阻止了其表面的調理作用，降低MPS對脂微球的親和力，從而達到延長脂微球在血液中的存留時間的效果。由于聚乙二醇價廉易得、可以大規(guī)模生產、分子量易于控制、良好的物理化學性質，同時可以事先將其制備成聚乙二醇_的衍生物，制劑的工藝相對簡單等優(yōu)點，使得用他修飾的脂微球具有實用性。通過臨床實驗，現(xiàn)有技術制備的前列地爾藥物的治療效果不是很令患者滿意，所以我們經過長時間的研究，發(fā)明了一種治療效果好，且解決了現(xiàn)有技術存在問題的前列地爾制劑。本發(fā)明研制的新型脂微球前列地爾制劑，是以脂微球為藥物載體、以聚乙二醇衍生物為長效支持劑的新型靜脈注射用長循環(huán)前列地爾制劑。在兼顧前列地爾脂微球注射液的已有的臨床優(yōu)勢的基礎上，同時因聚乙二醇衍生物的構象屏障使前列地爾發(fā)揮持久有效作用的優(yōu)勢。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種前列地爾長循環(huán)脂微球制劑。本發(fā)明的制劑包括(1)前列地爾，(2)植物油(藥物稀釋溶解油)，(3)作為乳劑表面活性劑的磷脂，(4)作為乳劑制劑穩(wěn)定劑、乳化劑、粒徑控制劑、和增加脂微球在血液中半衰期的聚乙二醇磷脂或其衍生物，(5)作為乳劑制劑穩(wěn)定劑、乳化劑的油酸或油酸鹽，(6)抗氧化劑(7)作為控制陽離子濃度的絡合劑，(8)甘油，(9)水。本發(fā)明制劑各組分的重量百分比如下前列地爾0.0001%-0.1%植物油5%-30%磷脂0.3%-4%聚乙二醇磷脂或其衍生物0.01%-5%油酸或油酸鹽0-0.6%抗氧化劑0-1%作為控制陽離子濃度的絡合劑0-1%甘油1-3%余量為注射用水。其中，具體成分如下(1)前列地爾選自前列地爾或者其衍生物；(2)植物油可以是但不限于，大豆油、棕櫚油、當歸油、沙棘油、莪術油、川芎油、薏米仁油、紅花油、花椒油、大蒜油；(3)磷脂選自蛋黃卵磷脂、大豆磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、氫化大豆磷脂、人工合成磷脂；(4)聚乙二醇磷脂或其衍生物，選自聚乙二醇-腦磷脂或其衍生物、聚乙二醇_膽固醇或其衍生物、聚乙二醇_二_脂肪酸甘油酯或其衍生物、聚乙二醇_脂肪酸酯或其衍生物、聚乙二醇_脂肪胺或其衍生物、聚乙二醇_脂肪醇或其衍生物、以及含有脂溶性高分子片段的聚乙二醇磷脂衍生物；(5)油酸或油酸鹽，選自油酸、油酸鉀鹽、油酸鈉鹽；(6)抗氧化劑維生素E;(7)控制陽離子濃度的絡合劑，選自EDTA或其它離子絡合劑優(yōu)選的本發(fā)明的制劑的重量百分比如下前列地爾植物油磷脂聚乙二醇磷脂或其衍生物油酸或油酸鹽抗氧化劑作為控制陽離子濃度的絡合劑甘油余量為注射用水。進一步優(yōu)選的本發(fā)明的制劑的重前列地爾植物油磷脂0.0001%-0.1%5%-30%0.3%-4%0.01%-5%0-0.6%0-1%0-1%1-3%百分比如下0.0001%-0.1%5%-30%0.3%-4%0-0.6%0.01%-5%0-1%0-1%2.2%油酸或油酸鹽聚乙二醇-磷脂或其衍生物維生素EEDTA-2Na甘油余量為注射用水。其他最優(yōu)的本發(fā)明的制劑在實施例中。本發(fā)明的藥物制劑為注射劑。本發(fā)明的另一個目的在于提供本發(fā)明的前列地爾長循環(huán)脂微球制劑的制備方法。制備過程具體如下取前列地爾，植物油，磷脂，聚乙二醇磷脂或其衍生物，在氮氣保護的條件下，加熱，攪拌溶解；另取注射用水，加入甘油，油酸鈉；在氮氣保護的條件下，含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml;高壓均質機均質，過濾，分裝，通入氮氣，密封。優(yōu)選的制備過程如下取前列地爾，大豆油，加入卵磷脂、維生素E、聚乙二醇-磷脂，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油與油酸鈉。在氮氣保護的條件下，含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在80nm-150nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115t:旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25t:以下貯藏。其他最優(yōu)選的制備方法在實施例中。本發(fā)明最優(yōu)選的配方是篩選得到的，篩選過程如下以脂微球粒徑及包封率為指標進行工藝條件優(yōu)化，對前列地爾長循環(huán)脂微球制劑7配方中各種輔料的用量范圍進行了驗證。在通過臨床實驗比較靜脈注射的剌激性，并對前列地爾藥理藥效進行分析后，最終確定最佳藥物濃度為5mg/L。最優(yōu)選的各輔料用量使脂微球的包封率達到最佳，形成了穩(wěn)定的藥物制劑。本發(fā)明的靜脈注射用前列地爾長循環(huán)脂微球，其脂微球制劑的平均粒徑小于180nm，最好處于50-150nm。其制劑工藝的終端滅菌溫度必須保證Fo>12。本發(fā)明還提供了本發(fā)明制劑的檢測方法。本發(fā)明的檢測方法，包括對本發(fā)明制劑進行前列地爾含量、制劑pH值、脂微球粒度分布，游離脂肪酸、過氧化值、細菌內毒素、無菌等指標的檢驗。特別是對前列地爾的含量進行測定。前列地爾含量測定方法如下色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.0067mol/L磷酸鹽緩沖液(pH為6.3)(取磷酸二氫鉀9.07g，加水使溶解，制成1000ml，另取無水磷酸氫二鈉9.46g，加水使溶解，制成1000ml，將后者加到前者中，直至pH為6.3，取此液100ml加水至1000ml，搖勻，即得)-乙腈(3:1)為流動相；流速為每分鐘lml;柱后反應液為lmol/L氫氧化鉀溶液，柱后反應管為聚四氟乙烯管(小O.5mmX10m);柱溫6(TC;檢測波長278nm。前列地爾與內標物的分離度應符合要求。內標溶液的制備取P-萘酚約25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，量取5ml，置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為溶液(1)。取溶液(1)5ml，置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為內標溶液。對照品溶液的制備取前列地爾對照品(在五氧化二磷減壓干燥器中，室溫干燥4小時)約5mg，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加無水乙醇10ml溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml與溶液(1)5ml，置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。(配制后2小時內使用)供試品溶液的制備精密量取本發(fā)明實施例1的樣品適量(相當于前列地爾2.5iig)，置20ml棕色具塞試管中，加四氫呋喃2.5ml，混勻，加磷酸溶液(1—1000)15ml，混勻，通過預處理柱[填充物為十八烷基硅烷鍵合硅膠，粒徑為70iim，小10mmX9mm聚丙烯管(SEP-PAKC18柱，Waters)。使用前用甲醇10ml、水10ml沖洗]，試管用10ml水沖洗并通過預處理柱。再用甲醇7ml洗脫，洗脫液全部移入10ml棕色蒸餾瓶中，于5(TC減壓蒸餾10分鐘，蒸干溶劑，殘渣用內標溶液1.Oml溶解，搖勻，即得。(配制后2小時內使用)測定法精密量取供試品溶液和對照品溶液各20ii1注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按內標法以峰面積計算。通過以下實驗進一步說明本發(fā)明制劑的有益效果前列地爾長循環(huán)脂微球對大鼠心肌損傷的保護作用1材料和方法1.1藥品和試劑前列地爾注射液，規(guī)格2ml:10i!g，北京泰德制藥有限公司出品，前列地爾長循環(huán)脂微球注射液，西安力邦制藥有限公司，本發(fā)明實施例1制備的注射液。鹽酸異丙腎上腺素，上海禾豐制藥有限公司出品，丙二醛(MDA)、谷胱甘肽、過氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒均購自南京建成生物工程有限公司。81.2動物SD大鼠，體重(250士25)g，由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供。1.4實驗分組及給藥方案我們將實驗動物進行分組正常對照組、急性心肌梗塞模型組、前列地爾脂肪乳治療組、前列地爾聚乙二醇脂微球治療組。急性心肌梗塞模型通過尾靜脈注射鹽酸異丙腎上腺素80mgkg—1制備。不同前列地爾制劑的給藥劑量分別為50iigkg—、前列地爾脂肪乳組和前列地爾聚乙二醇脂微球組在預處理給藥后20min靜脈注射鹽酸異丙腎上腺素80mgkg—1制造急性心肌梗塞模型，正常對照組尾靜脈注射等容積的生理鹽水。1.5心臟組織生化指標測定預處理12h后，處死大鼠，取出心臟，冰生理鹽水清洗后濾紙吸干水分，稱重，加入2倍重量的冰生理鹽水，勻漿，制備成10%心肌組織勻漿標本待用。再將部分10%心肌組織勻漿加冰生理鹽水制備1%勻漿。用生化試劑盒分別測定心肌勻漿MDA含量、GSH-Px活性、總-SOD(T-SOD)和錳-SOD(Mn-SOD)活性，各項指標測定均按照試劑盒說明書進行操作。1.6統(tǒng)計學分析采用SPSSll.10系統(tǒng)軟件自動處理，結果均以x士s表示，組間差異，采用單因素方差分析。2結果2.1前列地爾聚乙二醇脂微球預處理對急性心肌梗塞模型大鼠MDA、GSH-Px的影響檢測結果見表l，模型組與正常對照組相比大鼠心肌MDA含量顯著升高(P<0.01)。采用前列地爾脂肪乳和前列地爾聚乙二醇脂微球分別對實驗大鼠進行預處理后，MDA含量均低于模型組(P<0.05)，且前列地爾聚乙二醇脂微球組的MDA值比普通市售脂肪乳注射液組顯著降低。GSH-Px水平的測定結果顯示，模型組與正常對照組相比GSH-Px水平顯著降低，經前列地爾預處理后，不同前列地爾制劑組的GSH-Px水平與模型組相比顯著升高，與普通制劑組相比前列地爾聚乙二醇脂微球組升高的趨勢更為顯著。(P<0.05)表1前列地爾聚乙二醇脂微球預處理對急性心肌梗塞模型大鼠心肌MDA、GSH-Px的影響(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>aP<0.Olvs模型對照；bP<0.05vs前列地爾脂肪乳組.2.2前列地爾聚乙二醇脂微球預處理對急性心肌梗塞模型大鼠T-SOD和Mn-SOD的影響模型組與正常對照組相比大鼠心肌T-S0D和Mn-SOD含量顯著升高(P<0.01)。經前列地爾預處理后，各保護組的T-SOD和Mn-SOD含量均低于模型組(P<0.01)。經前列地爾聚乙二醇脂微球預處理后的T-SOD和Mn-SOD含量較普通前列地爾制劑的含量顯著降低(P<0.05)。結果見表2。表2前列地爾聚乙二醇脂微球預處理對急性心肌梗塞模型大鼠心肌T-SOD和Mn-SOD的影響(x±s)、組別wT-SODMn-SOD(NU/g)(NU/g)空白對照模型對照前列地爾脂肪乳組888前列地爾聚乙二醇脂微球845.3±4.6a125.3±9.5101.1±8.8a80.3±6.4ab22.1±2.0a71.6±5.842.3±5.9a28.8±4.6abaP<0.05vs模型對照;bP<0.05vs前列地爾脂肪乳組通過采用前列地爾聚乙二醇脂微球對動物模型進行預處理后，發(fā)現(xiàn)其可顯著減少大鼠心肌梗塞后MDA的生成，同時使GSH-Px活性維持在較高水平，產生對抗過氧化反應導致的GSH-Px活性降低的作用，減輕心肌過氧化損傷程度，保護心肌的正常功能。在與普通前列地爾制劑的對比研究中，發(fā)現(xiàn)其藥效作用顯著提升。表明前列地爾聚乙二醇脂微球遞藥系統(tǒng)增加了前列地爾對心梗模型大鼠心肌的保護作用，提高了藥效。另外，受體內自由基水平的影響，自由基產生可剌激SOD的合成，在測定SOD活性的實驗中，SOD活性與MDA含量成正相關，自由基增多可剌激SOD的合成，前列地爾聚乙二醇脂微球預適應顯著降低試驗大鼠心肌SOD上升幅度，這一結果也間接的表明，該制劑可減輕氧自由基引起的心肌細胞不可逆的損害，同時在與普通前列地爾制劑對比中我們也觀察到其具有更強的藥效活性，該結果也進一步證明了這種新型遞藥系統(tǒng)可增強前列地爾對實驗大鼠的心肌保護作用。本發(fā)明的前列地爾長循環(huán)脂微球制劑具有擴張血管、抑制血小板聚集、抑制胃酸分泌、抑制胰腺外分泌、抗脂質氧化及剌激胰島素分泌，早期心肌保護作用，其能縮小模型大鼠心肌梗塞面積，提高心肌抗氧化損傷能力的作用。本發(fā)明的制劑與現(xiàn)有技術相比，具有治療效果好，穩(wěn)定性好，副作用少，保質期長，見效快，價格便宜，適合大規(guī)模生產等特點。圖1采用激光散射粒徑儀測定的脂微球的粒經和粒徑分布具體實施例方式通過以下實施例進一步說明本發(fā)明，但不作為本發(fā)明的限制。實施例1最優(yōu)選的本發(fā)明前列地爾脂微球制劑前列地爾5.Omg大豆油(注射用)跳Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.Og甘油22.lg注射用水加至1000ml取前列地爾，大豆油，加入卵磷脂、維生素E、聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油與油酸鈉。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至lOOOml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在80nm-150nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115t:旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。實例2最高前列地爾含量的長循環(huán)前列地爾脂微球藥物制劑(僅以大豆油作為實施例)處方前列地爾l.Og大豆油(注射用)100.Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.Og甘油22.lg注射用水加至1000ml取前列地爾l.Og，大豆油100.Og，加入18.Og卵磷脂、20.Og聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.Og維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg與油酸鈉2.4g。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在80nm-150nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115。C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。—、對聚乙二醇-磷脂用量范圍的考察實例3最低聚乙二醇-磷脂含量的長循環(huán)前列地爾脂微球藥物制劑(僅以大豆油作為實施例)處方前列地爾5.Omg大豆油(注射用)100.Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.4g聚乙二醇-磷脂2.0g維生素E(注射用)5.0g甘油22.lg注射用水加至1000ml取前列地爾5.0mg、大豆油100.Og、加入18.Og卵磷脂、2.Og聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.0g維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至lOOOml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在100nm-180nm，調節(jié)pH5.0-8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115"C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25t:以下貯藏。實例4最高聚乙二醇_磷脂含量的長循環(huán)脂微球藥物制劑處方前列地爾5.Omg大豆油(注射用)跳Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.聚乙二醇-磷脂50.Og維生素E(注射用)5.Og甘油22.lg注射用水加至1000ml取前列地爾5.Omg，大豆油100.Og，加入18.Og卵磷脂、50g聚乙二醇:-磷月l(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.0g維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在60nm-120nm，調節(jié)pH5.0-8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115"C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25t:以下貯藏。二、對稀釋油用量范圍的考察實例5最低含量動植物油、液態(tài)油狀藥物或作為藥物溶劑的油溶液制備的長循環(huán)脂微球藥物制劑(僅以大豆油作為實施例)處方前列地爾5.Omg大豆油(注射用)50.Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.4g聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.0g12甘油22.lg注射用水加至1000ml取前列地爾5.0mg、大豆油50.Og、加入18.Og卵磷脂、20.Og聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.Og維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg與油酸鈉2.4g、。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至lOOOml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115°C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。實例6最高含量動植物油、液態(tài)油狀藥物或作為藥物溶劑的油溶液制備的長循環(huán)脂微球藥物制劑(僅以大豆油作為實施例)處方前列地爾5.Omg大豆油(注射用)300.Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.Og甘油22.lg注射用水加至1000ml取前列地爾5.Omg、大豆油300.Og、加入18.Og卵磷脂、20.Og聚乙二醇-磷月(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.0g維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg與油酸鈉2.4g。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115°C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。三、對主要乳化劑磷脂用量范圍的考察實例7最低配比含量磷脂制備的長循環(huán)脂微球藥物制劑(僅以卵磷脂E80作為實施例)處方前列地爾5.Omg大豆油(注射用)100.Og卵磷脂(注射用)3.0g油酸鈉2.4g聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.0g甘油22.lg注射用水加至1000ml取前列地爾5.0mg、大豆油100.Og、加入3.Og卵磷脂、20.Og聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.0g維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg、油酸鈉2.4g。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115°C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。實例8最高配比磷脂含量制備的長循環(huán)脂微球藥物制劑(僅以卵磷脂E80作為實施例)處方前列地爾5.Omg大豆油(注射用)100.Og卵磷脂(注射用)40.Og油酸鈉2.4g聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.0g甘油22.lg注射用水加至1000ml取前列地爾5.Omg、大豆油100.0g，加入40.Og卵磷脂、20.Og聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.0g維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg與油酸鈉2.4g、。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115°C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。四、對助乳化劑油酸或油酸鈉用量的考察實例9不加入油酸鈉制備的長循環(huán)脂微球藥物制劑處方前列地爾5.Omg大豆油(注射用)100.Og卵磷脂(注射用)18.Og聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.0g甘油22.lg注射用水加至1000ml取前列地爾5.Omg、大豆油100.Og，加入18.Og卵磷脂、20.Og聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.0g維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至lOOOml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為100MPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH7.0-8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115。C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25t:以下貯藏。實例10最高配比油酸鈉含量制備的長循環(huán)脂微球藥物制劑處方前列地爾5.Omg大豆油(注射用)跳Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉6.Og聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.Og甘油22.lg注射用水加至1000ml取前列地爾5.Omg、大豆油100.Og，加入18.Og卵磷脂、20.Og聚乙二醇-磷月(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.0g維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg與油酸鈉6.Og。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115°C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。五、制劑中維生素E用』l考察實例11不加入維生素E制備的長循環(huán)脂微球藥物制劑處方前列地爾5.Omg大豆油(注射用)跳Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.聚乙二醇-磷脂20.Og甘油22.lg注射用水力口至1000ml取前列地爾5.Omg、大豆油100.Og，加入18.Og卵磷脂、20.Og聚乙二醇-磷月(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg與油酸鈉2.4g、。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH5.0-8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115。C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25t:以下貯藏。實例12最高配比維生素E含量制備的長循環(huán)脂微球藥物制劑處方15前列地爾5.Omg大豆油(注射用)跳Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.4g聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)10g甘油22.lg注射用水加至lOOOml取前列地爾5.0mg、大豆油100.Og，加入18.Og卵磷脂、20.Og聚乙二!淳_磷脂(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入lOg維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg與油酸鈉2.4g。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至lOOOml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH5.0-8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115。C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。六、不同動植物油作為稀釋油制備的長循環(huán)脂微球前列地爾制劑的實例考察(選用六種植物油為例)實例13莪術油作為稀釋油處方前列地爾5.Omg莪術油(注射用)跳Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.Og甘油22.lg注射用水力口至1000ml取前列地爾5.Omg、莪術油100.Og，加入18.Og卵磷脂、20.Og聚乙二醇:_磷月l(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.Og維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg與2.4g油酸鈉。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115°C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。實例14薏米仁油作為稀釋油處方前列地爾5.Omg薏米仁油(注射用)100.Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.4g聚乙二醇-磷脂20.0g維生素E(注射用)5.0g甘油22.lg注射用水加至lOOOml取前列地爾5.Omg、薏米仁油100.Og，加入18.Og卵磷脂、20.Og聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.0維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg與油酸鈉2.4g。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至lOOOml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115°C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。實例15大蒜油作為稀釋油處方前列地爾5.Omg大蒜油(注射用)100.Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.4g聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.0g甘油22.lg注射用水加至1000ml取前列地爾5.Omg、大蒜油100.Og，加入18.Og卵磷脂、20.Og聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.0g維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg與油酸鈉2.4g。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115°C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。實例16紅花油作為稀釋油處方前列地爾5.Omg紅花油(注射用)跳Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.Og甘油22.lg注射用水加至1000ml17取前列地爾5.0mg、紅花油100.0g，加入18.Og卵磷脂、20.Og聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.Og維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg與油酸鈉2.4g。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油的與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至lOOOml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115°C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。實例17花椒油作為稀釋油處方前列地爾5.Omg花椒油(注射用)100.Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.4g聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.0g甘油22.lg注射用水加至1000ml取前列地爾5.0mg、花椒油100.0g，加入18.Og卵磷脂、20.Og聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加5.Og維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.Og與油酸鈉2.4g。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量1000ml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH5.0-8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115"旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。實例18川芎油作為稀釋油處方前列地爾5.Omg川芎油(注射用)跳Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.Og甘油22.lg注射用水力口至1000ml取前列地爾5.Omg、川芎油100.Og，加入18.Og卵磷脂、20.Og聚二醇:-磷月l(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，然后加入5.0g維生素E，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg與油酸鈉2.4g。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為100MPa，至粒徑范圍在150nm-300nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115°C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。實例19最低前列地爾含量的長循環(huán)前列地爾脂微球藥物制劑(僅以大豆油作為實施例)處方前列地爾0.lmg大豆油(注射用)跳Og卵磷脂(注射用)18.Og油酸鈉2.聚乙二醇-磷脂20.Og維生素E(注射用)5.Og甘油22.lg注射用水加至1000ml取前列地爾0.lmg，大豆油100.Og，加入18.Og卵磷脂、5.Og維生素E、20.Og聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，溶解混勻。另取注射用水800ml，加入甘油22.lg與2.4g油酸鈉。在氮氣保護的條件下，將含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml。高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在80nm-150nm，調節(jié)pH5.0-8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封。115"C旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25°C以下貯藏。權利要求一種前列地爾長循環(huán)脂微球制劑，其特征在于，包括以下組分前列地爾，植物油，磷脂，聚乙二醇磷脂或其衍生物，油酸或油酸鹽，抗氧化劑，絡合劑，甘油，水，各組分的重量百分比如下前列地爾0.0001％-0.1％植物油5％-30％表面活性劑0.3％-4％聚乙二醇磷脂或其衍生物0.01％-5％油酸或油酸鹽0-0.6％抗氧化劑0-1％作為控制陽離子濃度的絡合物0-1％甘油1-3％余量為注射用水。2.根據(jù)權利要求l所述的制劑，其特征在于，前列地爾選自前列地爾或者其衍生物；植物油選自大豆油、棕櫚油、當歸油、沙棘油、莪術油、川芎油、薏米仁油、紅花油、花椒油、大蒜油；磷脂選自蛋黃卵磷脂、大豆磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、氫化大豆磷脂、人工合成磷脂；聚乙二醇磷脂或其衍生物選自聚乙二醇_腦磷脂衍生物、聚乙二醇-膽固醇衍生物、聚乙二醇_二_脂肪酸甘油酯衍生物、聚乙二醇_脂肪酸酯衍生物、聚乙二醇_脂肪胺衍生物、聚乙二醇_脂肪醇衍生物、以及含有脂溶性高分子片段的聚乙二醇衍生物；油酸或油酸鹽選自油酸、油酸鉀鹽、油酸鈉鹽；抗氧化劑選自維生素E;絡合劑選自EDTA或其它離子絡合劑。3.根據(jù)權利要求2所述的制劑，其特征在于，各組分的重量百分比如下0.0001%-0.1%5%-30%0.3%-4%0.01%-5%0-0.6%0-1%0-1%1-3%前列地爾植物油磷脂聚乙二醇磷脂或其衍生物油酸或油酸鹽抗氧化劑絡合劑甘油余量為注射用水。4.根據(jù)權利要求3所述的制劑，前列地爾植物油磷脂油酸或油酸鹽聚乙二醇-磷脂或其衍生物其特征在于，各組分的重j0.0001%-0.1%5%-30%0.3%-4%0-0.6%0.01%-5%:百分比如下維生素E0-1%EDTA-2Na0-1%甘油2.2%余量為注射用水。5.權利要求1所述的前列地爾長循環(huán)脂微球制劑的制備方法，其特征在于，步驟為取前列地爾，植物油，磷脂，聚乙二醇磷脂或其衍生物，在氮氣保護的條件下，加熱，攪拌溶解；另取注射用水，加入甘油，油酸鈉；在氮氣保護的條件下，含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，高壓均質機均質，過濾，分裝，通入氮氣，密封。6.權利要求1所述的前列地爾長循環(huán)脂微球制劑的制備方法，其特征在于，步驟為取前列地爾，大豆油，卵磷脂、維生素E、聚乙二醇-磷脂，在氮氣保護的條件下，加熱至75t:，攪拌約10min使得添加的各種類脂化合物充分溶解，溶解混勻，另取注射用水800ml，加入甘油與油酸鈉，在氮氣保護的條件下，含有藥物的油溶液在剪切攪拌條件下加入甘油與油酸鈉的水溶液中，制成初乳，并調節(jié)總量至1000ml，高壓均質機均質5-8次，均質壓力大約為lOOMPa，至粒徑范圍在80nm-150nm，調節(jié)pH5.0_8.0，過濾，分裝，通入氮氣，密封，115t:旋轉滅菌30min，燈檢合格后，包裝，在25t:以下貯藏。7.權利要求1所述的前列地爾長循環(huán)脂微球制劑的檢測方法，其特征在于，步驟為依次對前列地爾的含量、制劑的pH值、脂微球粒度分布，游離脂肪酸、過氧化值、細菌內毒素、無菌等指標進行檢測。8.權利要求1所述的前列地爾長循環(huán)脂微球制劑的檢測方法，其特征在于，前列地爾的含量測定方法為，將樣品進行預處理后，加入內標溶液采用高效液相色譜法經柱后衍生測定前列地爾及其有關物質的含量，色譜條件如下用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸鹽緩沖液-乙腈(3:1)為流動相，柱溫6(TC;檢測波長為278nm，流速lml/min。9.權利要求1所述的前列地爾長循環(huán)脂微球制劑的檢測方法，其特征在于，前列地爾含量測定方法如下色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.0067mol/L磷酸鹽緩沖液_乙腈=3:1為流動相；流速為每分鐘lml;柱后反應液為lmol/L氫氧化鉀溶液，柱后反應管為聚四氟乙烯管；柱溫6(TC;檢測波長278nm，前列地爾與內標物的分離度應符合要求，內標溶液的制備取P-萘酚25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，量取5ml，置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為溶液(1)，取溶液(1)5ml，置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為內標溶液，對照品溶液的制備取前列地爾對照品5mg，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加無水乙醇10ml溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml與溶液(1)5ml，置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，供試品溶液的制備精密量取本品適量，置20ml棕色具塞試管中，加四氫呋喃2.5ml，混勻，加磷酸溶液1—1000，15ml，混勻，通過預處理柱[填充物為十八烷基硅烷鍵合硅膠，粒徑為70iim，(M0mmX9mm聚丙烯管，使用前用甲醇10ml、水10ml沖洗，試管用10ml水沖洗并通過預處理柱，再用甲醇7ml洗脫，洗脫液全部移入10ml棕色蒸餾瓶中，于5(TC減壓蒸餾10分鐘，蒸干溶劑，殘渣用內標溶液1.Oml溶解，搖勻，即得，測定法精密量取供試品溶液和對照品溶液各20iU注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按內標法以峰面積計算。10.權利要求1所述的前列地爾長循環(huán)脂微球制劑，其脂微球制劑的平均粒徑小于180nm，最好處于50-150nm。其制劑工藝的終端滅菌溫度必須保證Fo>12。全文摘要本發(fā)明涉及靜脈注射用前列地爾長循環(huán)脂微球的配方和制備。本發(fā)明的制劑包括(1)前列地爾藥物，(2)植物油(藥物稀釋溶解油)，(3)作為乳劑表面活性劑，(4)作為乳劑制劑穩(wěn)定劑、乳化劑、粒徑控制劑、和增加脂微球在血液中半衰期的聚乙二醇磷脂衍生物，(5)作為乳劑制劑穩(wěn)定劑、乳化劑的油酸或油酸鹽，(6)抗氧化劑，(7)作為控制陽離子濃度的絡合物，(甘油)。文檔編號A61K9/16GK101700229SQ20091022320公開日2010年5月5日申請日期2009年11月20日優(yōu)先權日2009年11月20日發(fā)明者張陽,王惟嬌,王汝濤,陳濤申請人:西安力邦制藥有限公司