專利名稱：：在生理性pH緩沖液中顯示增強(qiáng)的溶解性的胰高血糖素類似物的制作方法在生理性pH緩沖液中顯示增強(qiáng)的溶解性的胰高血糖素類似物
背景技術(shù)：
：當(dāng)血糖水平降低到不能為機(jī)體活性提供足夠能量時(shí)，發(fā)生低血糖癥。在成年人或大于10歲的兒童中，除了作為糖尿病治療的副作用外，低血糖癥是罕見的，但它可能源于其他藥物或疾病，激素或酶缺陷，或胂瘤。當(dāng)血糖開始降低時(shí)，一種由胰腺產(chǎn)生的激素胰高血糖素將信號傳導(dǎo)到肝臟以分解糖原并釋放葡萄糖，使血糖水平上升到正常水平。而對于糖尿病患者來說，這種對低血糖癥的胰高血糖素反應(yīng)可能被損害，使葡萄糖水平更難回到正常范圍。低血糖癥是需要緊急醫(yī)療關(guān)注的危急生命的事件。胰高血糖素的施用是已確定的用于治療急性低血糖癥的藥物，它可以在施用幾分鐘內(nèi)恢復(fù)葡萄糖的正常水平。當(dāng)胰高血糖素被用于低血糖癥的急性醫(yī)學(xué)治療時(shí)，在稀釋的酸緩沖液中溶解胰高血糖素的結(jié)晶形式，并將該溶液進(jìn)行肌內(nèi)注射。盡管這種治療是有效的，但該方法對于半清醒的一些人來說是麻煩和危險(xiǎn)的。因此，需要一種胰高血糖素類似物，它在穩(wěn)定性，它可以被預(yù)先配制為預(yù)備用于注射的溶液。此外，糖尿病患者被鼓勵(lì)維持接近正常的血糖水平以延緩或預(yù)防微血管并發(fā)癥。該目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)需要密集的胰島素治療。在力圖實(shí)現(xiàn)該目標(biāo)時(shí)，醫(yī)生遭遇到他們的糖尿病患者中低血糖癥的頻率和嚴(yán)重性的相當(dāng)大的增加。因此，需要改進(jìn)的藥物和方法來治療糖尿病，它們比現(xiàn)有的胰島素療法誘發(fā)低血糖癥的可能性更低。如本文所述，提供高效力的胰高血糖素激動(dòng)劑，其在適于商業(yè)用途的藥物組合物中在生理性pH下顯示增強(qiáng)的生物物理學(xué)穩(wěn)定性和水溶性。天然的胰高血糖素在生理性pH范圍內(nèi)是既不可溶又不穩(wěn)定的，因此必須被制備為需要重新構(gòu)建和立即使用的干燥產(chǎn)物。本文描述的胰高血糖素類似物具有增強(qiáng)的物理特性，使它們比在當(dāng)前使用天然激素的現(xiàn)有藥用背景中使用的更好。可以根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案將這些化合物用于制備治療低血糖癥的注射備用預(yù)配溶液?？蛇x擇地，胰高血糖素激動(dòng)劑可以與胰島素共施用以緩沖胰島素的作用，從而能夠更穩(wěn)定的維持血糖水平。此外，在下文詳細(xì)描述包含本文公開的修飾的胰高血糖素肽的組合物的其他有益用途。概述本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供保留胰高血糖素受體活性并相對于天然胰高血糖素肽(SEQIDNO:l)顯示提高的可溶性的胰高血糖素肽。天然的胰高血糖素在水溶液中尤其在生理性pH下顯示很差的溶解性，傾向于隨時(shí)間聚集和沉淀。與此相反，在25。C24小時(shí)后pH為6到8的情況下，例如pH7，與天然的胰高血糖素相比，本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案的胰高血糖素肽顯示至少2倍、5倍或甚至更高的可溶性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述胰高血糖素肽保留天然的胰高血糖素活性的至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%活性、80%活性、85%活性或90%。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的胰高血糖素肽具有大于胰高血糖素的功效。本發(fā)明的任一胰高血糖素肽還可以顯示提高的穩(wěn)定性和/或減少的降解，例如，在25。C24小時(shí)后保留至少95%的初始肽。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供一種胰高血糖素肽，其中通過氨基酸取代和/或添加對該肽進(jìn)行修飾，所述氨基酸取代和/或添加在該肽的C末端部分引入帶電荷氨基酸，在一個(gè)實(shí)施方案中是在SEQIDNO:1的C末端位置到27位。任選的，可以在C末端部分內(nèi)以及在一個(gè)實(shí)施方案中C末端到27位引入1個(gè)、2個(gè)或3個(gè)帶電荷氨基酸。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，28和/或29位的天然氨基酸被帶電荷氨基酸取代，和/或?qū)?到3個(gè)帶電荷氨基酸添加到所述肽的C末端。在示例性的實(shí)施方案中，所述帶電荷氨基酸的l個(gè)、2個(gè)或全部是帶負(fù)電荷的?？梢詫σ雀哐撬仉倪M(jìn)行其他修飾(例如保守取代)，但使其仍然保留胰高血糖素活性。根據(jù)一個(gè)示例性的實(shí)施方案，胰高血糖素肽包括SEQIDNO:11的氨基酸序列，或含有相對于天然胰高血糖素1到3個(gè)另外的氨基酸修飾的其類似物，或其胰高血糖素激動(dòng)劑類似物。SEQIDNO:11代表修飾的胰高血糖素肽，其中天然蛋白質(zhì)28位的天門冬酰胺殘基被天冬氨酸取代。在另一個(gè)示例性的實(shí)施方案中，胰高血糖素肽包括SEQIDNO:38的氨基酸序列，其中天然蛋白質(zhì)第28位的天門冬酰胺殘基被谷氨酸取代。其他示例性的實(shí)施方案包括SEQIDNOs:24、25、26、33、35、36和37的胰高血糖素肽。通過在所述肽上連接親水部分可以進(jìn)一步提高任何上述化合物的可溶性。在一個(gè)實(shí)施方案中，親水部分是聚乙二醇鏈或其他水溶性聚合物，其被共價(jià)連接到所述胰高血糖素肽第16、17、21或24位氨基酸殘基的側(cè)鏈上。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述聚乙二醇鏈具有選自約500到約40,000道爾頓的分子量。本發(fā)明進(jìn)一步包括所述胰高血糖素激動(dòng)劑的藥學(xué)上可接受的鹽。在其他示例性的實(shí)施方案中，通過在胰高血糖素肽的羧基末端添加第二肽，可以進(jìn)一步修飾任何上述化合物中以改變其藥物特性。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素肽通過肽鍵與第二肽共價(jià)結(jié)合，其中所述第二肽包括選自SEQIDNO:20、SEQIDNO:21和SEQIDNO:22的序列。在另一個(gè)示例性的實(shí)施方案中，通過修飾SEQIDNO:1的第15位氨基酸可以進(jìn)一步修飾任何上述化合物中以提高穩(wěn)定性，減少尤其在酸性或堿性緩沖液中所述肽隨時(shí)間的降解。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供包含任何本文公開的新胰高血糖素肽以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體或賦形劑的藥物組合物，所述胰高血糖素肽的純度水平優(yōu)選的為至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。這種組合物可以包含濃度為至少0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml或更高的胰高血糖素肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包括水溶液，該水溶液^皮滅菌并任選的保存于不同容器中。在其他實(shí)施方案中，藥物組合物包括凍干粉末。藥物組合物可以被進(jìn)一步包裝為試劑盒的一部分，所述試劑盒包括用于將所述組合物給患者施用的一次性裝置。所述容器或試劑盒可以被標(biāo)明用于在環(huán)境室溫或冷藏溫度保存。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供一種利用預(yù)配水性組合物來快速增加葡萄糖水平或治療低血糖癥的方法。該方法包括施用有效量的包含本文新的修飾的胰高血糖素肽的水溶液的步驟。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種誘導(dǎo)腸道的瞬時(shí)麻痹的方法。該方法包括給需要其的患者施用一種或更多種本文公開的胰高血糖素肽的步驟。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種減少重量增加或誘導(dǎo)重量損失的8方法，包括施用有效量的包含本發(fā)明胰高血糖素肽的水溶液。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，提供治療糖尿病的方法，包括共施用胰島素和本發(fā)明的胰高血糖素肽。示例性的胰高血糖素肽選自SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:33，其中所述胰高血糖素肽的氨基酸29通過肽鍵與第二肽結(jié)合，所述第二肽包含SEQIDNO:20、SEQIDNO:21或SEQIDNO:22的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，力夷高血糖素肽^皮PEG化。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括施用包含SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的序列的肽的步驟，其中聚乙烯鏈與第21位或24位的氨基酸共價(jià)連接。附圖簡述圖1是表示胰高血糖素Cys"馬來酰亞氨基PEGsk在37。C分別溫育24、48、72、96、144和166小時(shí)的穩(wěn)定性的柱狀圖。圖2表示對在pH5條件下，37°C，分別溫育24、72或144小時(shí)的胰高血糖素Cys21馬來酰亞氨基PEGsK進(jìn)行HPLC分析得到的數(shù)據(jù)。圖3代表在pH為2、4、5.5、7和8的條件下，25°C,60小時(shí)后，分別顯示胰高血糖素類似物(D28、E29、E30)相對于天然胰高血糖素的可溶性的數(shù)據(jù)。圖4代表在pH為2、4、5.5和7的條件下，25。C24小時(shí)，并且然后4°C24小時(shí)后，分別顯示胰高血糖素類似物(E15D28、D28E29和D28E30)相對于天然胰高血糖素的可溶性的數(shù)據(jù)。圖5表示在pH7的條件下，4°C,24小時(shí)后，胰高血糖素類似物D28、D28E30和E15,D28的最大可溶性。圖6代表顯示相對于天然胰高血糖素匿，胰高血糖素類似物(K29▲、K30Y和K29K30)的胰高血糖素受體介導(dǎo)的cAMP誘導(dǎo)的數(shù)據(jù)。圖7代表顯示相對于天然胰高血糖素B，胰高血糖素類似物(D28□、E29A、E30V、K30K3lO和K30,，)的胰高血糖素受體介導(dǎo)的cAMP誘導(dǎo)的數(shù)據(jù)。圖8代表顯示相對于天然胰高血糖素國，胰高血糖素類似物(D289□、E28會(huì)和K29,A)的胰高血糖素受體介導(dǎo)的cAMP誘導(dǎo)的數(shù)據(jù)。圖9代表顯示相對于天然胰高血糖素國，胰高血糖素類似物(D28E29+、D28E30X、E15D28來和E29A)的胰高血糖素受體介導(dǎo)的cAMP誘導(dǎo)的數(shù)據(jù)。圖IO代表在肌內(nèi)施用胰高血糖素和胰高血糖素類似物后，顯示小獵犬中血清葡萄糖濃度變化的數(shù)據(jù)。給動(dòng)物施用0.005mg/kg劑量的以下物質(zhì)胰高血糖素，包含胰高血糖素以及與胰高血糖素羧基末端連接的SEQIDNO:31的序列的胰高血糖素類似物(胰高血糖素-CEX),或含有在氨基酸28的天冬氨酸取代的胰高血糖素類似物(胰高血糖素-Asp28)SEQIDNO:11。詳述定義在描述和主張本發(fā)明時(shí)，將使用與下文闡述的定義一致的下列術(shù)語。本文使用的術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"包括任何標(biāo)準(zhǔn)藥物載體，諸如磷酸鹽緩沖鹽溶液、水、乳液諸如油/水或水/油乳液，以及各種類型的濕潤劑。該術(shù)語還包括由美國聯(lián)邦政府的管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的或在美國藥典中列出的用于動(dòng)物包括人的任何試劑。本文使用的術(shù)語"藥學(xué)上可接受的鹽"是指化合物的鹽，其保留母體化合物的生物活性，并且不是生物學(xué)上或在其他方面不良的。依靠氨基和/或羧基或其類似基團(tuán)的存在，本文公開的許多化合物能夠形成酸和/或》威鹽?？梢詮臒o機(jī)和有機(jī)堿制備藥學(xué)上可接受的堿加成鹽。源自無機(jī)堿的鹽，僅從舉例來說包括，鈉、鉀、鋰、銨、釣和鎂鹽。源自有機(jī)堿的鹽包括，但不限于伯胺、仲胺和叔胺的鹽?？梢詮臒o機(jī)和有機(jī)酸制備藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。源自無機(jī)酸的鹽包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸，等等。源自有機(jī)酸的鹽包括乙酸、丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、安息香酸、肉桂酸、扁桃酸、曱磺酸、乙磺酸、對曱苯磺酸、水楊酸，等等。本文使用的術(shù)語"治療"包括特定病癥或狀況的預(yù)防，或與特定病癥或狀況有關(guān)的癥狀的減輕，和/或預(yù)防或消除所述癥狀。如本文使用的，胰高血糖素肽的"有效，，量或"治療有效量"是指無毒但足以提供預(yù)期效果的肽的量。例如一種需要的效果是低血糖癥的預(yù)防或治療，例如通過血糖水平的增加來衡量。對于不同的受試者來說"有效"的量將是不同的，取決于個(gè)體的年齡和全身狀況，施用方式，等等。因此，并不總是能夠規(guī)定準(zhǔn)確的"有效量"。但是，本"^效"量。、"^-。、。；、術(shù)語"腸胃外的，，表示未通過消化道而是通過其他的途徑諸如皮下的，肌內(nèi)的，脊柱內(nèi)的或靜脈內(nèi)的。本文使用的術(shù)語"純化的"和類似術(shù)語涉及將分子或化合物分離成基本上不含在天然或自然環(huán)境中通常伴隨該分子或化合物的污染物的形式。本文使用的術(shù)語"純化的"并不需要絕對的純度；它預(yù)期只作為相對定義。術(shù)語"純化的多肽"在本文中用于描述已經(jīng)與其他化合物(包括但不限于核酸分子、脂質(zhì)和碳水化合物)分離的多肽。術(shù)語"分離的"需要所提及材料從其初始環(huán)境(例如，如果其天然存在就是自然環(huán)境)中被移去。例如，活體動(dòng)物中存在的天然產(chǎn)生的多核苷酸不是分離的，但同樣的多核苷酸，如果它與自然系統(tǒng)中共存材料中的一些或全部分開，則它是分離的。本文使用的"胰高血糖素肽"包括任何肽，所述肽包含SEQIDNO:l的氨基酸序列，或SEQIDNO:1的氨基酸序列的任何類似物，包括該肽的氨基酸取代、添加或缺失，或翻譯后修飾(例如甲基化、?；?、泛素化等等)，如利用實(shí)施例13所述分析法通過cAMP產(chǎn)生所測定的，所述肽刺激胰高血糖素或GLP-1受體活性。術(shù)語"胰高血糖素激動(dòng)劑，，是指包含胰高血糖素肽的復(fù)合物，如利用實(shí)施例13所述分析法通過cAMP產(chǎn)生所測定的，所述復(fù)合物刺激胰高血糖素受體活性。本文使用的"胰高血糖素激動(dòng)劑類似物，，是一種胰高血糖素肽，包括選自SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12和SEQIDNO:13的序列或這類序列的類似物，所述類似物已經(jīng)被修飾，包括在第2、5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21、24、27、28或29位的一個(gè)或更多個(gè)保守氨基酸取代。本文使用的氨基酸"修飾"是指氨基酸的取代、添加或缺失，包括任何人類蛋白中常見的20種氨基酸以及非典型或非天然存在的氨基酸的取代或添加。本申請自始至終，所有通過數(shù)字對具體氨基酸位置的標(biāo)引(例如第28位)是指在天然胰高血糖素(SEQIDNO:l)中該位置的氨基酸或其任意類似物中相應(yīng)的氨基酸位置。例如，本文中對"第28位"的標(biāo)引對于SEQIDNO:1的第一個(gè)氨基酸已經(jīng)缺失的胰高血糖素類似物來說將表示相應(yīng)的第27位。類似地，本文中對"第28位"的標(biāo)引對于SEQIDNO:1的N末端前已經(jīng)添加一個(gè)氨基酸的胰高血糖素類似物來說將表示相應(yīng)的第29位。本文使用的氨基酸"取代"是指用不同的氨基酸殘基取代氨基酸殘基。本文使用的術(shù)語"保守氨基酸取代"在本文中被定義為在下列五組之一中交換i.小脂肪族的、非極性或輕微極性的殘基Ala、Ser、Thr、Pro、Gly;n.極性的、帶負(fù)電荷的殘基和它們的酰胺Asp、Asn、Glu、Gln、半胱磺酸和高半胱磺酸(homocysteicacid);m.極性的、帶正電荷的殘基His、Arg、Lys;鳥氨酸(Orn)iv.大的、脂肪族的、非極性殘基Met、Leu、Ile、Val、Cys、正亮氨酸(Nle)、高半胱氨酸(homocysteine)V.大的、芳香族殘基Phe、Tyr、Trp、乙?；奖彼帷１疚氖褂玫囊话阈g(shù)語"聚乙二醇"或"PEG"是指支鏈或直鏈的環(huán)氧乙烷與水的縮合聚合物的混合物，由通式H(OCH2CH2)nOH表示，其中n至少為9。沒有任何進(jìn)一步的特征，該術(shù)語旨在包括平均總分子量選自500到40,000道爾頓的乙二醇的聚合物。"聚乙二醇"或"PEG"與數(shù)字后綴組合使用以標(biāo)明其近似平均分子量。例如，PEG-5，000是指平均總分子量約5,000的聚乙二醇。本文使用的術(shù)語"PEG化"和類似術(shù)語是指從其天然狀態(tài)通過將聚乙二醇聚合物連接到化合物上從而被修飾的化合物。"PEG化的胰高血12糖素肽，，是PEG鏈與胰高血糖素肽共價(jià)結(jié)合的胰高血糖素肽。本文使用的對肽的一般引用旨在包括具有修飾的氨基和羧基末端的肽。例如，指定標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的氨基酸序列意圖包括用酰胺基取代末端羧酸的氨基酸鏈。本文使用的"接頭"是使兩個(gè)分離的實(shí)體相互結(jié)合的鍵、分子或分子基團(tuán)。接頭可以提供兩個(gè)實(shí)體間合適的間隔，或可以進(jìn)一步提供允許兩個(gè)實(shí)體彼此分隔的不穩(wěn)定的鍵。不穩(wěn)定的鍵包括可光裂解基團(tuán)、酸不穩(wěn)定的基團(tuán)、堿不穩(wěn)定的基團(tuán)及可酶裂解基團(tuán)。本文使用的"二聚體"是包括通過接頭彼此共價(jià)結(jié)合的兩個(gè)亞基的復(fù)合物。當(dāng)沒有任何限定語言時(shí)，術(shù)語二聚體包括同型二聚體和異型二聚體。同型二聚體包括兩個(gè)相同的亞基，而異型二聚體包括兩個(gè)不同的亞基，盡管這兩個(gè)亞基是基本上彼此類似的。本文使用的術(shù)語"pH穩(wěn)定的胰高血糖素肽，，是指在用于藥理學(xué)目的的最寬pH范圍的水性緩沖液中，相對于天然胰高血糖素顯示更好的穩(wěn)定性和溶解性的胰高血糖素激動(dòng)劑類似物。本文使用的術(shù)語"帶電荷氨基酸"是指包含在生理性pH的水性溶液中為帶負(fù)電荷的(即，去質(zhì)子化的)或?yàn)閹д姾傻?即，質(zhì)子化的)的側(cè)鏈的氨基酸。例如帶負(fù)電荷的氨基酸包括天冬氨酸、谷氨酸、半胱磺酸、高半胱磺酸和高谷氨酸，而帶正電荷的氨基酸包括精氨酸、賴氨酸和組氨酸。帶電荷氨基酸包括在人類蛋白中常見的20種氨基酸及非典型或非天然存在的氨基酸中的帶電荷氨基酸。本文使用的術(shù)語"酸性氨基酸"是指包括第二酸性部分(包括例如羧酸或磺酸基)的氨基酸。實(shí)施方案申請人發(fā)現(xiàn)通過在天然胰高血糖素的羧基末端引入電荷可以對其進(jìn)行修飾，以增強(qiáng)肽的溶解性同時(shí)保留肽的激動(dòng)劑性能。溶解性的增加允許在接近中性pH的條件下制備和保存胰高血糖素溶液。在相對中性的pHs(例如pH為約6.0到約8.0)下配制胰高血糖素溶液提高胰高血糖素肽的長期穩(wěn)定性。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及相對于His-Ser-Gln畫Gly-Thr-Phe畫Thr畫Ser畫Asp-Tyr-Ser畫Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser匿Arg-Arg畫Ala畫Gln-Asp-Phe-Val畫Gln-Trp-Leu畫Met-Asn畫Thr(SEQIDNO:l)的野生型肽已經(jīng)被修飾，以提高肽在水溶液尤其是約5.5到約8.0的pH范圍內(nèi)的溶解性，同時(shí)保留天然肽的生物活性的胰高血糖素激動(dòng)劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過用選自賴氨酸、精氨酸、組氨酸、天冬氨酸和谷氨酸的帶電荷氨基酸取代天然非帶電荷氨基酸，或在肽的氨基或羧基末端添加帶電荷氨基酸，給肽添加電荷。出人意料的，申請人發(fā)現(xiàn)用帶電荷氨基酸取代第28和/或29位正常存在的氨基酸，和/或在胰高血糖素肽的羧基末端添加1到2個(gè)帶電荷氨基酸，使胰高血糖素肽在生理相關(guān)pHs(即，約6.5到約7.5的pH)的水溶液中的溶解性和穩(wěn)定性增加至少5倍和增加30倍。因此，當(dāng)在25。C24小時(shí)后測量時(shí)，在約5.5到8之間的指定pH例如pH7的條件下，本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案的胰高血糖素肽保留胰高血糖素活性，并顯示相對于天然胰高血糖素至少2倍、5倍、10倍、15倍、25倍、30倍或更高的溶解性。本文公開的任何胰高血糖素肽在5.5到8的pH范圍內(nèi)還顯示提高的穩(wěn)定性，例如，在25。C24小時(shí)后保留至少75%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的初始肽。所述胰高血糖素肽可以包括改變其藥物特性的其他修飾，例如增加的功效，循環(huán)中延長的半衰期，增加的保存期限，減少的沉淀或聚集，和/或減少的降解，例如，保存后剪切或化學(xué)修飾發(fā)生的減少。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以制備溶解性提高的胰高血糖素肽，例如，通過在天然胰高血糖素的C末端部分及在一個(gè)實(shí)施方案中C末端位置到第27位引入1、2、3或更多個(gè)帶電荷氨基酸。例如，通過在例如第28或29位用帶電荷氨基酸取代天然氨基酸，或可選的在例如第27、28或29位后添加帶電荷氨基酸，可以引入這類帶電荷氨基酸。在示例性的實(shí)施方案中，所述帶電荷氨基酸的1、2、3個(gè)或全部是帶負(fù)電荷的。在其他實(shí)施方案中，所述帶電荷氨基酸的1、2、3個(gè)或全部是帶正電荷的。在具體的示例性實(shí)施方案中，胰高血糖素肽可以包括下列修飾中的任意一種或兩種用E取代N28;用D取代N28;用D取代T29;用E取代T29;在第27、28或29位后插入E;在第27、28或29位后插入D。例如，E28E30、D28E30。可以對胰高血糖素肽進(jìn)行其他修飾，這可以進(jìn)一步增加溶解性和/或穩(wěn)定性和/或胰高血糖素活性?？蛇x擇地，胰高血糖素肽可以包括基本上不影響溶解性或穩(wěn)定性而且基本上不降低胰高血糖素活性的其他14修飾。在示例性的實(shí)施方案中，相對于天然胰高血糖素序列，胰高血糖素肽可以包括總共l,最多達(dá)2，最多達(dá)3，最多達(dá)4，最多達(dá)5，最多達(dá)6，最多達(dá)7，最多達(dá)8，最多達(dá)9，或最多達(dá)IO個(gè)氨基酸修飾。示例性的修飾包括但不限于保守取代，例如，在第2、5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21、24、27、28或29位的一個(gè)或更多個(gè)位置的保守取代；第15位天冬氨酸的修飾，例如，通過用谷氨酸、高谷氨酸、半胱磺酸或高半胱磺酸取代，這可以減少降解；如本文所述，例如在第16、17、20、21、24或29位添加親水部分諸如水溶性聚合物聚乙二醇，這可以增加溶解性和/或半衰期；第27位氨基酸的修飾，例如，通過用甲硫氨酸、亮氨酸或正亮氨酸取代；如本文所述第1或2位的修飾；如本文所述的C末端延伸；如本文所述的同型二聚化或異型二聚化；和上述的組合。才艮據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，SEQIDNO:1的天然胰高血糖素肽通過以下方式被修飾用帶負(fù)電荷的氨基酸(例如，天冬氨酸或谷氨酸)取代第28和/或29位的天然氨基酸，及任選的在該肽的羧基末端添加帶負(fù)電荷的氨基酸(例如，天冬氨酸或谷氨酸)。在一個(gè)可選擇的實(shí)施方案中，SEQIDNO:1的天然胰高血糖素肽通過以下方式#^務(wù)飾用帶正電荷的氨基酸(例如，賴氨酸、精氨酸或組氨酸)取代第29位的天然氨基酸，及任選的在該肽的羧基末端添加1個(gè)或2個(gè)帶正電荷的氨基酸(例如，賴氨酸、精氨酸或組氨酸)。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供一種溶解性和穩(wěn)定性提高的胰高血糖素類似物，其中所述類似物包含SEQIDNO:34的氨基酸序列，條件是第28或29位的至少一個(gè)氨基酸被酸性氨基酸取代和/或在SEQIDNO:34的羧基末端添加附加酸性氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，酸性氨基酸獨(dú)立的選自Asp、Glu、半胱磺酸和高半胱磺酸。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供一種溶解性和穩(wěn)定性提高的胰高血糖素激動(dòng)劑，其中所述激動(dòng)劑包含SEQIDNO:33的氨基酸序列，其中第27、28或29位的至少一個(gè)氨基酸被非天然氨基酸殘基取代(即類似物的第27、28或29位存在的至少一個(gè)氨基酸是不同于SEQIDNO:1中相應(yīng)位置存在的氨基酸的酸性氨基酸)。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供一種胰高血糖素激動(dòng)劑，其包含SEQIDNO:33的序列，條件是當(dāng)?shù)?8位的氨基酸是天門冬酰胺并且第29位的氨基酸是蘇氨酸時(shí)，該肽進(jìn)一步包括在胰高血糖素肽的羧基末端添加的獨(dú)立的選自Lys、Arg、His、Asp或Glu的1到2個(gè)氨基酸。已經(jīng)有報(bào)道說天然胰高血糖素肽的某些位置可以被修飾同時(shí)保留親代肽的至少一些活性。因此，申請人預(yù)期位于SEQIDNO:11的肽的第2、5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21、24、27或29位的一個(gè)或更多個(gè)氨基酸可以被不同于天然胰高血糖素肽中存在的氨基酸所取代，但仍然保留增強(qiáng)的功效、生理性pH穩(wěn)定性和親代胰高血糖素肽的生物活性。例如，根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，天然肽第27位存在的曱硫氨酸殘基被改變?yōu)榱涟彼峄蛘涟彼嵋苑乐闺牡难趸到狻Ｔ谝粋€(gè)實(shí)施方案中，4是供一種SEQIDNO:33的胰高血糖素類似物，其中選自所述類似物的第1、2、5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21或24位的1到6個(gè)氨基酸不同于SEQIDNO:1的相應(yīng)氨基酸。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供一種SEQIDNO:33的胰高血糖素類似物，其中選自所述類似物的第1、2、5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21或24位的1到3個(gè)氨基酸不同于SEQIDNO:1的相應(yīng)氨基酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供SEQIDNO:7、SEQIDNO:8或SEQIDNO:34的胰高血糖素類似物，其中選自所述類似物的第1、2、5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21或24位的1到2個(gè)氨基酸不同于SEQIDNO:1的相應(yīng)氨基酸，在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述1到2個(gè)不同氨基酸代表相對于天然序列(SEQIDNO:l)中存在的氨基酸的保守氨基酸取代。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供SEQIDNO:ll或SEQIDNO:13的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽進(jìn)一步包括在選自第2、5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21、24、27或29位的位置的1、2或3個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)實(shí)施方案中，第2、5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、27或29位的取代是保守氨基酸取代。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供包括SEQIDNO:1的類似物肽的胰高血16糖素激動(dòng)劑，其中所述類似物與SEQIDNO:1的不同點(diǎn)在于第2位具有除了絲氨酸以外的氨基酸，并且用酸性氨基酸取代第28或29位的天然氨基酸或在SEQIDNO:1的肽的羧基末端添加酸性氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述酸性氨基酸是天冬氨酸或谷氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供SEQIDNO:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13或SEQIDNO:32的胰高血糖素類似物，其中所述類似物與親代分子的不同點(diǎn)在于第2位的取代。更具體的，所述類似物肽的第2位被選自d-絲氨酸、丙氨酸、甘氨酸、n-曱基絲氨酸和氨基異丁酸的氨基酸取代。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供包括SEQIDNO:1的類似物肽的胰高血糖素激動(dòng)劑，其中所述類似物與SEQIDNO:l的不同點(diǎn)在于第l位具有除了組氨酸以外的氨基酸，并且用酸性氨基酸取代第28或29位的天然氨基酸或在SEQIDNO:1的肽的羧基末端添加酸性氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述酸性氨基酸是天冬氨酸或谷氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供SEQIDNO:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13或SEQIDNO:32的胰高血糖素類似物，其中所述類似物與親代分子的不同點(diǎn)在于第1位的取代。更具體的，所述類似物肽的第l位被選自d-組氨酸、脫氨組氨酸、羥基組氨酸、乙酰基組氨酸和高組氨酸(homo-histidine)的氨基酸取代。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，修飾的胰高血糖素肽包括選自SEQIDNO:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13和SEQIDNO:32的序列。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，提供包括SEQIDNO:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13或SEQIDNO:32的序列的胰高血糖素肽，其進(jìn)一步包括在SEQIDNO:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13或SEQIDNO:32的c末端添加的1到2個(gè)氨基酸，其中所述附加氨基酸獨(dú)立的選自Lys、Arg、His、Asp、Glu、半胱磺酸或高半胱磺酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，添加到羧基末端的附加氨基酸選自Lys、Arg、His、Asp或Glu，在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，附加氨基酸是Asp或Glu。在另一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素肽包括SEQIDNO:7的序列或其胰高血糖素激動(dòng)劑類似物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述肽包括選自SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12和SEQIDNO:13的序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述肽包括選自SEQIDNO:8、SEQIDNO:10和SEQIDNO:ll的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素肽包括SEQIDNO:8、SEQIDNO:10和SEQIDNO:11的序列，其進(jìn)一步包括在胰高血糖素肽的c末端添加的選自Asp和Glu的附加氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素肽包括SEQIDNO:11或SEQIDNO:13的序列，在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，胰高血糖素肽包括SEQIDNO:11的序列。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供包括修飾的胰高血糖素肽的胰高血糖素激動(dòng)劑，所述修飾的胰高血糖素肽選自NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Xaa畫Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Xaa畫Xaa畫Xaa誦R(SEQIDNO:34),NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp畫Ser-Arg畫Arg畫Ala畫Gln-Asp-Phe-Val-Gln-T卬-Leu隱Met畫Asp隱Thr-R(SEQIDNO:ll)和NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Xaa-Tyr-Leu-Glu畫Ser畫Arg-Arg曙Ala-Gln-Asp匿Phe-Val-Gln-Trp國Leu-Met-Asp-Thr-R(SEQIDNO:13)其中第15位的Xaa是Asp、Glu、半胱磺酸、高谷氨酸或高半胱磺酸，第28位的Xaa是Asn或酸性氨基酸，第29位的Xaa是Thr或酸性氨基酸，R是酸性氨基酸、COOH或CONH2，條件是第28、29或30位中之一存在酸性的酸殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，R是COOH,在另一個(gè)實(shí)施方案中，R是CONH2。本文還包括胰高血糖素融合肽，其中第二肽融合到胰高血糖素肽的c末端以增強(qiáng)胰高血糖素肽的穩(wěn)定性和溶解性。更具體的，所述融合胰高血糖素肽可以包括胰高血糖素激動(dòng)劑類似物，該類似物包括胰高血糖素肽NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Xaa-Ser-Arg畫Arg畫Ala-Gln國Asp-Phe-Val-Gln陽Trp國Leu-Xaa-Xaa畫Xaa-R(SEQIDNO:34),其中R是酸性氨基酸或鍵，以及與胰高血糖素肽的羧基末端氨基酸連接的SEQIDNO:20(GPSSGAPPPS)、SEQIDNO:21(KRNRNNIA)或SEQIDNO:22(KRNR)的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素肽選自SEQIDNO:33、SEQIDNO:7或SEQIDNO:8，其進(jìn)一步包括與胰高血糖素肽的羧基末端氨基酸連接的SEQIDNO:20(GPSSGAPPPS)、SEQIDNO:21(KRNRNNIA)或SEQIDNO:22(KRNR)。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素融合肽包括SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6或其胰高血糖素激動(dòng)劑類似物，其進(jìn)一步包括與胰高血糖素肽的氨基酸29連接的SEQIDNO:20(GPSSGAPPPS)、SEQIDNO:21(KRNRNNIA)或SEQIDNO:22(KRNR)的氨基酸序列。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，融合肽進(jìn)一步包括與第16、17、21或24位氨基酸連接的PEG鏈，其中所述PEG鏈選自500到40,000道爾頓的范圍。在一個(gè)實(shí)施方案中，SEQIDNO:20(GPSSGAPPPS)、SEQIDNO:21(KRNRNNIA)或SEQIDNO:22(KRNR)的氨基酸序列與胰高血糖素肽的氨基酸29通過肽鍵結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素融合肽的胰高血糖素肽部分包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:ll和SEQIDNO:13的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素融合肽的胰高血糖素肽部分包括SEQIDNO:11或SEQIDNO:13的序列，其中在第21或24位分別連接PEG《連。在另一個(gè)實(shí)施方案中，融合肽的胰高血糖素肽序列包括SEQIDNO:11的序列，其進(jìn)一步包括與胰高血糖素肽的氨基酸29連接的SEQIDNO:20(GPSSGAPPPS)、SEQIDNO:21(KRNRNNIA)或SEQIDNO:22(KRNR)的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素融合肽包括選自SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的序列。通常本發(fā)明的融合肽將具有含標(biāo)準(zhǔn)羧酸基團(tuán)的c末端氨基酸。但是，所述序列的類似物(其中C末端氨基酸具有取代羧酸的酰胺)也被包括作為實(shí)施方案。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，融合胰高血糖素肽包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:13的胰高血糖素激動(dòng)劑類似物，其進(jìn)一步包括與胰高血糖素肽的氨基酸29連接的SEQIDNO:23(GPSSGAPPPS-CONH2)的氨基酸序列?？梢赃M(jìn)一步修飾本發(fā)明的胰高血糖素激動(dòng)劑以提高肽在水溶液中的溶解性和穩(wěn)定性同時(shí)保留胰高血糖素肽的生物活性。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，在選自SEQIDNO:11的肽或其胰高血糖素激動(dòng)劑類似物的第16、17、20、21、24和29位的一個(gè)或更多個(gè)位置引入親水基團(tuán)，預(yù)期將提高pH穩(wěn)定胰高血糖素類似物的溶解性和穩(wěn)定性。更具體的，在一個(gè)實(shí)施方案中，SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:1319或SEQIDNO:32的胰高血糖素肽被修飾以包括與胰高血糖素肽的第21和24位存在的氨基酸側(cè)鏈共價(jià)連接的一個(gè)或更多個(gè)親水基團(tuán)。才艮據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，SEQIDNO:11的胰高血糖素肽^皮修飾以包含在第16、17、20、21、24和/或29位的一個(gè)或更多個(gè)氨基酸取代，其中天然氨基酸被具有適于與親水部分(包括例如PEG)交聯(lián)的側(cè)鏈的氨基酸取代。天然肽可以用天然存在的氨基酸或合成(非天然存在的)氨基酸取代。合成或非天然存在的氨基酸是指在體內(nèi)不是天然存在的氨基酸，盡管如此，但是其可以被摻入本文描述的肽結(jié)構(gòu)。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供SEQIDNO:10、SEQIDNO:11或SEQIDNO:13的胰高血糖素激動(dòng)劑，其中天然的胰高血糖素肽序列已經(jīng)凈皮修飾以包含在天然序列的第16、17、21和24位中的至少之一的天然存在或合成的氨基酸，其中所述氨基酸取代進(jìn)一步包括親水部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，取代位于第21或24位，在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，親水部分是PEG鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，SEQIDNO:11的胰高血糖素肽被至少一個(gè)半胱氨酸殘基取代，其中半胱氨酸殘基的側(cè)鏈進(jìn)一步被巰基反應(yīng)性試劑修飾，包括例如，馬來酰亞氨基、乙烯砜、2-吡咬巰基、囟代烷基和卣代酰基。這些巰基反應(yīng)性試劑可以包含羧基、酮基、羥基和醚基團(tuán)，以及其他親水部分諸如聚乙二醇單元。在一個(gè)可選擇的實(shí)施方案中，天然胰高血糖素肽被賴氨酸取代，并利用胺反應(yīng)性試劑進(jìn)一步修飾所述取代的賴氨酸殘基的側(cè)鏈，所述胺反應(yīng)性試劑例如是諸如聚乙二醇的親水部分的羧酸或醛的活性酯(琥珀酰亞氨基，酐，等等)。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素肽選自SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18和SEQIDNO:19。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，PEG化的胰高血糖素肽包括與胰高血糖素肽共價(jià)結(jié)合的兩條或更多條聚乙烯鏈，其中胰高血糖素鏈的總分子量為約1,000到約5,000道爾頓。在一個(gè)實(shí)施方案中，PEG化的胰高血糖素激動(dòng)劑包括SEQIDNO:6的肽，其中PEG鏈與第21和24位的氨基酸殘基共價(jià)連接，并且其中兩條PEG鏈的合并分子量為約1,000到約5,000道爾頓。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PEG化的胰高血糖素激動(dòng)劑包括SEQIDNO:6的肽，其中PEG鏈與第21和24位的氨基酸殘基共價(jià)連接，并且其中兩條PEG鏈的合并分子量為約5,000到約20,000道爾頓。聚乙二醇鏈可以采用直鏈形式，或它也可以是分枝的。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，聚乙二醇鏈具有選自約500到約40,000道爾頓的平均分子量。在一個(gè)實(shí)施方案中，聚乙二醇鏈具有選自約500到約5,000道爾頓的分子量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，聚乙二醇鏈具有約20,000到約40,000道爾頓的分子量。如實(shí)施例中詳細(xì)所述，本發(fā)明的胰高血糖素激動(dòng)劑在生理性pH溶液中具有增強(qiáng)的生物物理學(xué)穩(wěn)定性和水溶性，同時(shí)相對于天然肽保留或顯示增強(qiáng)的生物活性。因此，本發(fā)明的胰高血糖素激動(dòng)劑被認(rèn)為適合于先前針對天然胰高血糖素肽描述的任何用途。因此，本文描述的修飾的胰高血糖素肽可用于治療低血糖癥，增加血糖水平，針對放射性用途誘導(dǎo)腸的暫時(shí)麻痹，減輕并維持體重，作為胰島素的輔助療法，或治療其他源于胰高血糖素的低血液水平的代謝疾病。本文的一個(gè)方面涉及一種用于治療低血糖癥的本文胰高血糖素激動(dòng)劑的預(yù)配水溶液。本文所述激動(dòng)劑組合物的提高的穩(wěn)定性和/或溶解性允許制備用于低血糖癥的快速施用和治療的胰高血糖素的預(yù)配水溶液。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種用于給低血糖癥患者施用的包含本發(fā)明胰高血糖素激動(dòng)劑的溶液。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種給低血糖癥患者施用的包含本文所述PEG化胰高血糖素激動(dòng)劑的溶液，其中與PEG化胰高血糖素激動(dòng)劑連接的PEG鏈的總分子量為約500到約5,000道爾頓。在一個(gè)實(shí)施方案中，PEG化的胰高血糖素激動(dòng)劑包含選自SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18和SEQIDNO:19的肽及其胰高血糖素激動(dòng)劑類似物，其中所述胰高血糖素肽第16、17、21或24位的氨基酸殘基的側(cè)鏈與聚乙二醇鏈共價(jià)結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，PEG化的胰高血糖素激動(dòng)劑包含SEQIDNO:16的肽，其中所述肽第21位的氨基酸殘基與聚乙二醇共價(jià)連接。在一個(gè)實(shí)施方案中，PEG化的胰高血糖素激動(dòng)劑包含SEQIDNO:17的肽，其中所述肽第24位的氨基酸殘基與聚乙二醇共價(jià)連接。本發(fā)明治療低血糖癥的方法包括利用任意標(biāo)準(zhǔn)施用途徑將本文胰高血糖素激動(dòng)劑給患者施用的步驟，所述標(biāo)準(zhǔn)給藥途徑包括腸胃外的施用途徑，諸如靜脈內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、皮下的或肌內(nèi)的、鞘內(nèi)的、經(jīng)皮膚的、直腸的、口服的、鼻的或通過吸入。在一個(gè)實(shí)施方案中，皮下或肌內(nèi)施用組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，腸胃外施用組合物，將胰高血糖素組合物預(yù)先包裝在注射器中。有利地，本文所述的水性穩(wěn)定胰高血糖素類似物在用于藥理學(xué)目的的最寬pH范圍的水性緩沖液中，相對于天然胰高血糖素顯示更好的穩(wěn)定性和溶解性。使用本文所述穩(wěn)定的胰高血糖素類似物，允許在生理性pH條件下制備胰高血糖素激動(dòng)劑溶液并長時(shí)間保存。申請人發(fā)現(xiàn)可以制備PEG化的胰高血糖素肽，其保留親代肽的生物活性和特異性。但是，增加PEG鏈的長度或?qū)⒍鄺lPEG鏈連接到肽上(這樣的話連接的PEG的總分子量大于5,000道爾頓)將開始延長修飾的胰高血糖素的時(shí)間作用。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供SEQIDNO:11或SEQIDNO:13的胰高血糖素肽或其胰高血糖素激動(dòng)劑類似物，其中所述肽包括一條或更多條聚乙二醇鏈，其中連接的PEG的總分子量大于5，000道爾頓，在一個(gè)實(shí)施方案中大于IO，OOO道爾頓，^f旦低于40,000道爾頓。這種修飾的胰高血糖素肽具有延長的活性時(shí)間，但沒有生物活性的損失。因此，可以預(yù)防性施用這種化合物以延長施用的胰高血糖素肽的效果?？梢耘c胰島素聯(lián)合施用胰高血糖素肽(已經(jīng)被修飾以共價(jià)結(jié)合具有大于IO，OOO道爾頓的分子量的PEG鏈)以緩沖胰島素的作用并有助于維持糖尿病患者的穩(wěn)定血糖水平。本文的修飾的胰高血糖素肽可以與胰島素作為單個(gè)組合物共施用，或作為分離的溶液同時(shí)施用，或可選的，胰島素和修飾的胰高血糖素肽可以在彼此相對來說不同的時(shí)間施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，包括胰島素的組合物和包括修飾的胰高血糖素肽的組合物在彼此相距12小時(shí)內(nèi)施用。修飾的胰高血糖素肽相對于施用的胰島素的精確比例將部分取決于確定患者的胰高血糖素水平，并可以通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供包括胰島素和修飾的胰高血糖素肽的組合物，所述修飾的胰高血糖素肽選自SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5及其胰高血糖素激動(dòng)劑類似物，其中所述修飾的胰高血糖素肽進(jìn)一步包括與第16、17、21或24位的氨基酸側(cè)鏈共價(jià)結(jié)合的聚乙二醇鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物是包括胰島素和胰高血糖素類似物的水溶液。在胰高血糖素肽包含SEQIDNO:ll或SEQIDNO:13的序列的實(shí)施方案中，所述肽可以進(jìn)一步包括與第16、17、21或24位的氨基酸側(cè)鏈共價(jià)結(jié)合的聚乙二醇鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，修飾的胰高血糖素肽的PEG鏈的分子量大于10,000道爾頓。在一個(gè)實(shí)施方案中，PEG化的胰高血糖素肽包括選自SEQIDNO:ll和SEQIDNO:13的肽，其中所述胰高血糖素肽第21或24位氨基酸殘基的側(cè)鏈與聚乙二醇鏈共價(jià)結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，聚乙二醇鏈具有約10,000到約40,000的分子量。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，本文公開的修飾的胰高血糖素肽被用于誘導(dǎo)腸道的暫時(shí)麻痹。該方法可用于放射性目的，包括施用有效量的藥物組合物的步驟，所述藥物組合物包括PEG化胰高血糖素肽，包括C末端延伸的胰高血糖素肽或所述肽的二聚體。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素肽包括選自SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12和SEQIDNO:13的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素肽進(jìn)一步包括約1,000到40,000道爾頓的PEG鏈，其與第21或24位的氨基酸殘基共價(jià)結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素肽選自SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16和SEQIDNO:17。在一個(gè)實(shí)施方案中，PEG鏈具有約500到約5,000道爾頓的分子量。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，用于誘導(dǎo)腸道暫時(shí)麻痹的組合物包括第一修飾的胰高血糖素肽和第二修飾的胰高血糖素肽，其中第一修飾的肽包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:13的序列，其任選的與約500到約5，000道爾頓的PEG鏈連接，第二肽包括約IO，OOO到約40,000道爾頓的共價(jià)連接的PEG鏈。在該實(shí)施方案中，每個(gè)肽的PEG鏈與相應(yīng)肽的第21或24位的氨基酸殘基共價(jià)結(jié)合，彼此互不依賴。泌酸調(diào)節(jié)肽，一種在小腸中發(fā)現(xiàn)的天然存在的消化激素，已經(jīng)被報(bào)道當(dāng)給大鼠或人施用時(shí)造成重量損失(參見Diabetes2005;54:2390-2395)。泌酸調(diào)節(jié)肽是37個(gè)氨基酸的肽，其包含胰高血糖素(即SEQIDNO:l)的29個(gè)氨基酸的序列，后面是SEQIDNO:23的8個(gè)氨基酸的羧基末端延伸(KRNRNfNIA)。因此，申請人認(rèn)為通過用本文公開的修飾的胰高血糖素肽取代泌酸調(diào)節(jié)肽的胰高血糖素肽部分，可以保留泌酸調(diào)節(jié)肽的生物活性(即食欲抑制和誘導(dǎo)的重量損失/重量維持)，同時(shí)提高化合物的溶解性和穩(wěn)定性及改善藥代動(dòng)力學(xué)。此外申請人還相信包括本發(fā)明的胰高血糖素肽的截短型泌酸調(diào)節(jié)肽分子(去除泌酸調(diào)節(jié)肽的末端4個(gè)氨基酸)還將有效抑制食欲并誘導(dǎo)重量損失/重量維持。因此，本發(fā)明還包括具有SEQIDNO:21(KRNRNNIA)或SEQIDNO:22的羧基末端延伸的本發(fā)明的修飾的胰高血糖素肽。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，給個(gè)體施用SEQIDNO:33的胰高血糖素激動(dòng)劑類似物(其進(jìn)一步包括與胰高血糖素肽的氨基酸29連接的SEQIDNO:21(KRNRNNIA)或SEQIDNO:22的氨基酸序列)以謗導(dǎo)重量損失或防止重量增加。才艮據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，給個(gè)體施用SEQIDNO:11或SEQIDNO:13的胰高血糖素激動(dòng)劑類似物(其進(jìn)一步包括與胰高血糖素肽的氨基酸29連接的SEQIDNO:21(KRNR麗IA)或SEQIDNO:22的氨基酸序列)以誘導(dǎo)重量損失或防止重量增加。在另一個(gè)實(shí)施方案中，一種在個(gè)體中減少重量增加或誘導(dǎo)重量減輕的方法包括施用有效量的包括胰高血糖素激動(dòng)劑的組合物，所述胰高血糖素激動(dòng)劑包括選自SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4或SEQIDNO:5的胰高血糖素肽，其中胰高血糖素肽的氨基酸29與第二肽通過肽鍵結(jié)合，所述第二肽包括SEQIDNO:24(KRNRNNIA)或SEQIDNO:25的序列，并且其中約l，OOO到40,000道爾頓的PEG4連與第21和/或24位的氨基酸殘基共價(jià)結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素激動(dòng)劑的胰高血糖素肽部分選自SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18和SEQIDNO:19,其中約l，OOO到40,000道爾頓的PEG鏈與第16、17、21或24位的氨基酸殘基共價(jià)結(jié)合。毒蜥外泌肽(exendin)-4是由39個(gè)氨基酸組成的肽。它是被稱為GLP-1的受體的有效刺激劑。該肽據(jù)報(bào)道還抑制食欲并誘導(dǎo)重量損失。申請人:發(fā)現(xiàn)將毒蜥外泌肽-4的末端序列添加到胰高血糖素的羧基末端時(shí)提高胰高血糖素的溶解性和穩(wěn)定性但不損害胰高血糖素的生物活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，毒蜥外泌肽-4的末端IO個(gè)氨基酸(即SEQIDNO:20(GPSSGAPPPS)的序列)與本文胰高血糖素肽的羧基末端連接。預(yù)期這些融合蛋白具有抑制食欲并誘導(dǎo)重量損失/重量維持的藥理活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，SEQIDNO:20延伸的末端氨基酸包括取代羧基的酰胺基(即，SEQIDNO:23),并且該序列與本文胰高血糖素肽的羧基末端連接。在一個(gè)實(shí)施方案中，一種在個(gè)體中減輕重量增加或誘導(dǎo)重量損失的方法包括施用有效量的包括胰高血糖素激動(dòng)劑的組合物，所述胰高血糖素激動(dòng)劑包括SEQIDNO:33的胰高血糖素肽，其中胰高血糖素肽的氨基酸29與第二肽通過肽鍵結(jié)合，所述第二肽包括SEQIDNO:20(GPSSGAPPPS)或SEQIDNO:23的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素肽選自SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12和SEQIDNO:13,其中胰高血糖素肽的氨基酸29與第二肽通過肽鍵結(jié)合，并且所述第二肽包括SEQIDNO:20(GPSSGAPPPS)或SEQIDNO:23的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素激動(dòng)劑的胰高血糖素肽選自SEQIDNO:11和SEQIDNO:13。在一個(gè)實(shí)施方案中，融合肽的胰高血糖素肽部分選自SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16和SEQIDNO:17，其中PEG鏈的分子量范圍選自500到40,000道爾頓。更具體的，在一個(gè)實(shí)施方案中，融合肽的胰高血糖素肽選自SEQIDNO:16和SEQIDNO:17，其中PEG鏈的分子量范圍選自1,000到5,000。在另一個(gè)實(shí)施方案中，給患者施用組合物以抑制食^t、防止重量增加和/或誘導(dǎo)重量損失，通過施用包括第一PEG化胰高血糖素肽和第二PEG化胰高血糖素肽的藥物組合物，其中第一和第二肽是包括C末端肽延伸的融合肽，所述C末端肽延伸包括SEQIDNO:20(GPSSGAPPPS)或SEQIDNO:23。第一PEG化的糖原肽包括約500到約10,000道爾頓的共價(jià)連接的PEG,第二PEG化的胰高血糖素肽包括約10,000到約40,000道爾頓的共價(jià)連接的PEG鏈。本文還包括此處公開的修飾的胰高血糖素肽的多聚體?？梢岳脴?biāo)準(zhǔn)的連接劑和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法將兩個(gè)或更多個(gè)修飾的胰高血糖素肽連接到一起。例如，通過利用雙功能巰基交聯(lián)劑和雙功能胺交聯(lián)劑在兩個(gè)修飾的胰高血糖素肽之間形成二聚體，尤其是對于被半胱氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、高半胱氨酸或乙酰基苯丙氨酸殘基取代25的胰高血糖素肽(例如SEQIDNO:4和SEQIDNO:5)。二聚體可以是同型二聚體，或可選的可以是異型二聚體。在一個(gè)實(shí)施方案中，二聚體包括胰高血糖素融合肽的同型二聚體，其中胰高血糖素肽部分包括SEQIDNO:11的激動(dòng)劑類似物及與胰高血糖素肽的氨基酸29連接的SEQIDNO:20(GPSSGAPPPS)、SEQIDNO:21(KRNRNNIA)或SEQIDNO:22(KRNR)的氨基酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，二聚體包括SEQIDNO:11的胰高血糖素激動(dòng)劑類似物的同型二聚體，其中胰高血糖素肽進(jìn)一步包括與該胰高血糖素肽的第21或24位共價(jià)結(jié)合的聚乙二醇鏈。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供包括通過接頭與第二胰高血糖素肽結(jié)合的第一胰高血糖素肽的二聚體，其中第一胰高血糖素肽包括選自SEQIDNO:1、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO和SEQIDNO:11的肽，并且第二胰高血糖素肽包括SEQIDNO:33。此外，對于第二胰高血糖素肽來說，當(dāng)?shù)?8位的氨基酸是天門冬酰胺和第29位的氨基酸是蘇氨酸時(shí)，第二胰高血糖素肽進(jìn)一步包括添加到第二胰高血糖素肽的羧基末端的1到2個(gè)氨基酸(獨(dú)立的選自Lys、Arg、His、Asp或Glu)，及所述胰高血糖素多肽的藥學(xué)上可接受的鹽。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供包括通過接頭與第二胰高血糖素肽結(jié)合的第一胰高血糖素肽的二聚體，其中所述第一胰高血糖素肽選自選自SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12和SEQIDNO:13,并且第二胰高血糖素肽獨(dú)立的選自SEQIDNO:ll和SEQIDNO:13,及所述胰高血糖素多肽的藥學(xué)上可接受的鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一胰高血糖素肽選自SEQIDNO:7,第二胰高血糖素肽獨(dú)立的選自SEQIDNO:11、SEQIDNO:12和SEQIDNO:13。在一個(gè)實(shí)施方案中，在兩個(gè)肽之間形成二聚體，其中每個(gè)肽包含SEQIDNO:ll的氨基酸序列。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供一種藥物組合物，其中所述組合物包括本文的胰高血糖素激動(dòng)劑類似物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，和藥學(xué)上可接受的載體。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包括pH7.0-8.5的1mg/ml濃度的胰高血糖素激動(dòng)劑類似物和10-50mM三乙醇胺。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包括pH8.5的1mg/ml濃度的胰高血糖素激動(dòng)劑類似物和20mM三乙醇胺。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，可提供作為試劑盒的部分的本發(fā)明的修飾的胰高血糖素肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種用于給需要其的患者施用胰高血糖素激動(dòng)劑的試劑盒，其中所述試劑盒包括水溶液中的本發(fā)明任何胰高血糖素肽。這種試劑盒包含的示例性胰高血糖素肽包括選自以下的胰高血糖素肽l)一種胰高血糖素肽，其包含SEQIDNO:7、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11或SEQIDNO:13或SEQIDNO:33的序列；2)—種胰高血糖素融合肽，其包括SEQIDNO:11或SEQIDNO:13或SEQIDNO:33的胰高血糖素激動(dòng)劑類似物，及與胰高血糖素肽的氨基酸29連接的SEQIDNO:20(GPSSGAPPPS)、SEQIDNO:21(KRNRNNIA)或SEQIDNO:22(KRNR)的氨基酸序列；和3)一種SEQIDNO:11或SEQIDNO:13或SEQIDNO:33的PEG化胰高血糖素肽，其進(jìn)一步包括與胰高血糖素肽的氨基酸29連接的SEQIDNO:20(GPSSGAPPPS)、SEQIDNO:21(KRNRNNIA)或SEQIDNO:22(KRNR)的氨基酸序列，其中與第16、17、21或24位共價(jià)結(jié)合的PEG鏈具有約500到約40,000道爾頓的分子量。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供配備用于給患者施用胰高血糖素組合物的裝置的試劑盒，所述裝置例如為注射針，筆型裝置，噴射注射器或其他無針注射器?？蛇x擇地或此外，所述試劑盒可以包括一種或更多種各式各樣的容器，例如，小瓶、管、瓶子、單室或多室預(yù)填充注射器、藥筒、灌流泵(外部的或可移植的)、噴射注射器、預(yù)填充筆型裝置等等，任選的包含胰高血糖素肽。優(yōu)選的，所述試劑盒還包括使用說明書。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述試劑盒的裝置是氣霧劑分配裝置，其中組合物被預(yù)包裝到氣霧劑裝置內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑盒包括注射器和針頭，在一個(gè)實(shí)施方案中，胰高血糖素組合物被預(yù)包裝到注射器內(nèi)?？梢酝ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)合成方法，重組DNA^支術(shù)，或制備肽和融合蛋白的任何其他方法制備本發(fā)明的化合物。盡管通過標(biāo)準(zhǔn)重組DNA技術(shù)不能表達(dá)某些非天然的氨基酸，用于它們的制備技術(shù)是本領(lǐng)域已知的。除了適當(dāng)情況下的標(biāo)準(zhǔn)肽化學(xué)反應(yīng)外，可以通過標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)化學(xué)反應(yīng)來合成包括非肽部分的本發(fā)明的化合物。實(shí)施例常規(guī)的合成方案在改進(jìn)型AppliedBiosystem430A肽合成儀上，從0.2mmoleBocThr(OBzl)Pam樹脂起始，利用HBTU-活化的"FastBoc"單一偶聯(lián)合成胰高血糖素類似物。Boc氨基酸和HBTU獲自MidwestBiotech(Fishers,in)。使用的側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)是Arg(Tos)、Asn(Xan)、Asp(OcHex)、Cys(pMeBzl)、His(Bom)、Lys(2Cl畫Z)、Ser(OBzl)、Thr(OBzl)、Tyr(2Br-Z)和Trp(CHO)。N末端His的側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)是Boc。利用二曱基曱酰胺中的20%哌啶溶液處理每個(gè)完成的肽基樹脂，以從色氨酸除去曱?；?。在p-甲酚和二曱硫存在的條件下進(jìn)行液態(tài)氟化氬的裂解。利用HF裝置(PenninsulaLabs)在冰浴中裂解1小時(shí)。在HF蒸發(fā)后，將殘留物懸浮于乙醚，并過濾固體材料。每種肽被提取入30-70ml含水乙酸，并通過HPLC[BeckmanSystemGold,0.46x5cmZorbaxC8，lml/min,45C，214nm,A緩沖液二0.P/。TFA,B=0.1%TFA/90%乙腈，10分鐘內(nèi)從10%到80%B的梯度]分析稀釋的整分試樣。在2.2x25cmKromasilC18柱上通過FPLC進(jìn)行純化，同時(shí)監(jiān)測214nm的UV，并收集5分鐘的組分。合并同質(zhì)組分并凍干得到>95%的產(chǎn)物純度。利用MALDI-質(zhì)鐠分析確認(rèn)正確的分子量和純度。常規(guī)的PEG化方案(Cys-馬來酰亞氨基)通常，胰高血糖素Cys類似物溶于磷酸鹽緩沖鹽液(5-10mg/ml),并添加0.01M乙二胺四乙酸(總體積的10-15%)。添加過量(2倍)的馬來酰亞氨基曱氧基PEG試劑(Nektar)，在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)物并通過HPLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)展。8-24小時(shí)后，酸化反應(yīng)混合物，將其上樣于制備型反相柱，利用0.1。/。TFA/乙腈梯度進(jìn)行純化。合并適當(dāng)組分，凍干得到所需的PEG化類似物。實(shí)施例1胰高血糖素Cys"(l-29)及類似MonoCys類似物的合成在60ml反應(yīng)器中加入0.2mmoleBocThr(OBzl)Pam樹脂(SynChemInc)和下列序列，在改進(jìn)型AppliedBiosystems430A肽合成儀上利用FastBocHBTU-活化的單一交聯(lián)進(jìn)行反應(yīng)。HSQGTFTSDYSKYLDSCRAQDFVQWLMNT(SEQIDNO:27)使用下列側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)Arg(Tos)、Asp(OcHex)、Asn(Xan)、Cys(pMeBzl)、Glu(OcHex)、His(Boc)、Lys(2Cl-Z)、Ser(Bzl)、Thr(Bzl)、Trp(CHO)和Tyr(Br-Z)。利用20%哌啶/二甲基曱酰胺處理完成的肽基樹脂以去除Trp曱?；Ｗo(hù)，然后轉(zhuǎn)移到HF反應(yīng)器并在真空中干燥。利用磁力攪拌棒添加1.0mlp-曱酚和0.5ml二曱硫。將容器與HF裝置(PennisulaLabs)連接，在干冰/曱醇浴中冷卻，抽空，大約10ml液態(tài)氟化氫被壓縮入。在冰浴中攪拌反應(yīng)物1小時(shí)，然后在真空中去除HF。殘留物懸浮于乙醚；過濾固體，用乙醚洗滌，肽被提取入50ml含水乙酸中。利用裂解提取物的小樣進(jìn)行分析型HPLC。將剩余的提取物上樣于2.2x25cmKromasilC18制備型反相柱，利用PharmaciaFPLC系統(tǒng)運(yùn)行乙腈梯度。收集5分鐘的組分，同時(shí)監(jiān)測214nm處(2.0A)的UV。A=0.1%TFA，B=0.1%TFA/50%乙腈。梯度=450分鐘內(nèi)30%B到100%B。將包含最純產(chǎn)物的組分(48-52)合并冷凍，凍干得到30.1mg。該產(chǎn)物的HPLC分析顯示>90%的純度，MALDI質(zhì)譜分析顯示3429.7的目標(biāo)質(zhì)量。類似地制備胰高血糖素Cys21、胰高血糖素Cys"和胰高血糖素Cys29。實(shí)施例2胰高血糖素-Cex及其他C末端延伸類似物的合成。將285mg(0.2mmole)曱氧基二苯甲胺樹脂(MidwestBiotech)放入60ml反應(yīng)器中，加入下列序列，并在改進(jìn)型AppliedBiosystems430A肽合成儀上利用FastBocHBTU-活化的單一偶聯(lián)進(jìn)行反應(yīng)。HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTGPSSGAPPPS(SEQIDNO:28)使用下列側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)Arg(Tos)、Asp(OcHex)、Asn(Xan)、Cys(pMeBzl)、Glu(OcHex)、His(Boc)、Lys(2Cl-Z)、Ser(Bzl)、Thr(Bzl)、Trp(CHO)和Tyr(Br-Z)。利用20%哌啶/二曱基曱酰胺處理完成的肽基樹脂以去除Trp甲酰基保護(hù)，然后轉(zhuǎn)移到HF反應(yīng)器并在真空中干燥。利用磁力攪拌棒添加1.0mlp-曱酚和0.5ml二曱硫。將容器與HF裝置(PennisulaLabs)連接，在干冰/曱醇浴中冷卻，抽空，大約10ml液態(tài)氟化氫被壓縮入。在水浴中攪拌反應(yīng)物1小時(shí)，然后在真空中去除HF。殘留物懸浮于乙醚；過濾固體，用乙醚洗滌，肽被提取入50ml含水乙酸中。在裂解提取物的整分試樣上進(jìn)行分析型HPLC。將提取物上樣于2.2x25cmKromasilCI8制備型反相柱，利用PharmaciaFPLC系統(tǒng)進(jìn)行乙腈梯度洗脫。收集5分鐘的組分，同時(shí)監(jiān)測214nm處(2.0A)的UV。A=0.1%TFA，B=0.1%TFA/50%乙腈。梯度=450分鐘內(nèi)300/oB到100。/oB。合并組分58-65,冷凍，凍干得到198.1mg。產(chǎn)物的HPLC分析顯示大于95%的純度。MALDI質(zhì)譜分析顯示存在目標(biāo)理論質(zhì)量4316.7,產(chǎn)物為C末端酰胺。從適當(dāng)加載的PAM樹脂起始，類似地制備作為C末端羧酸的泌酸調(diào)節(jié)肽和泌酸調(diào)節(jié)肽-KRNR。實(shí)施例3胰高血糖素Cys17Mal-PEG-5K將15.1mg胰高血糖素Cys"(l-29)和27.3mg曱氧基聚(乙二醇)馬來酰亞氨(平均分子量5000)(mPEG-Mal-5000,NektarTherapeutics)溶于3.5ml磷酸鹽緩沖鹽液(PBS)，并添力o0.5ml0.01M乙二胺四乙酸(EDTA)。在室溫下攪拌反應(yīng)物，通過HPLC分析監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)展。5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物上樣到2.2x25cmKromasilC18制備型反相柱上。在PharmaciaFPLC上運(yùn)行乙腈梯度，同時(shí)監(jiān)測214nm的UV波長，并收集5分鐘的組分。A=0.1%TFA，B-0.1o/oTFA/50o/o乙腈，梯度450分鐘內(nèi)30%B到100%B。合并對應(yīng)于產(chǎn)物的組分，冷凍，凍干得到25.9mg。通過HPLC分析該產(chǎn)物，顯示大約90%的純度。MALDI(基質(zhì)輔助激光解吸電離)質(zhì)譜分析顯示8700到9500的寬質(zhì)量范圍(典型PEG衍生物)。這顯示起始胰高血糖素肽(3429)大約5,000a.m.u.的質(zhì)量增加。實(shí)施例4胰高血糖素Cys21Mal-PEG-5K將21.6mg胰高血糖素Cys"(l-29)和24mgmPEG-MAL-5000(NektarTherapeutics)溶于3.5ml磷酸鹽緩沖鹽液(PBS),并添加0.5ml0.01M乙二胺四乙酸(EDTA)。在室溫下攪拌反應(yīng)物。2小時(shí)后，再添加12.7mgmPEG-MAL-5000。8小時(shí)后，將反應(yīng)混合物上樣于2.2x25cmVydacC18制備型反相柱，在PharmaciaFPLC上按4ml/min運(yùn)行乙腈梯度，同時(shí)收集5分鐘的組分。A=0.1%TFA，B=0.1%TFA/50%ACN。梯度=450分鐘內(nèi)20。/oB到80%B。合并對應(yīng)于產(chǎn)物出現(xiàn)的組分，冷凍，凍干得到34mg。通過分析型HPLC對產(chǎn)物的分析顯示不同于起始胰高血糖素肽的均質(zhì)產(chǎn)物。MALDI(基質(zhì)輔助激光解吸電離)質(zhì)譜分析顯示8700到9700的寬質(zhì)量范圍(典型PEG類似物)。這顯示起始胰高血糖素肽(3470)大約5,000a.m.u.的質(zhì)量增加。實(shí)施例5胰高血糖素Cys24Mal-PEG-5K一邊攪拌一邊將20.1mg胰高血糖素(:24(1-29)和39.5mgmPEG-Mal-5000(NektarTherapeutics)溶于3.5mlPBS,并添加0.5ml0.01MEDTA。室溫下攪拌反應(yīng)物7小時(shí)，然后再添加40mgmPEG-Mal-5000。大約15小時(shí)后，將反應(yīng)混合物上樣于2.2x25cmVydacC18制備型反相柱，利用PharmaciaFPLC運(yùn)行乙腈梯度。收集5分鐘的組分，同時(shí)監(jiān)測214nm處(2.0A)的UV。A緩沖液-0.1。/oTFA，B緩沖液-0.1。/oTFA/50o/oACN,梯度=450分鐘內(nèi)30%B到100%B。合并對應(yīng)于產(chǎn)物的組分，冷凍，凍干得到45.8mg。MALDI質(zhì)譜分析顯示最大9175.2的典型PEG寬信號，其比胰高血糖素C24(3457.8)大約高5,000胰高血糖素Cys24Mal隱PEG畫20K室溫下一邊攪拌一邊將25.7mg胰高血糖素Cys"(l-29)和40.7mgmPEG-Mal畫20K(NektarTherapeutics)溶于3.5mlPBS，并添加0.5ml0.01MEDTA。6小時(shí)后，通過HPLC測定，起始原^l"與產(chǎn)物的比例大約為60:40。再添加25.1mgmPEG-Mal-20K,反應(yīng)物再攪拌16小時(shí)。產(chǎn)物比例沒有顯著^是高，然后將反應(yīng)混合物上樣于2.2x25cmKromasilC18制備型反相柱，并在PharmaciaFPLC上利用450分鐘內(nèi)30%B到100%B的梯度進(jìn)行純化。A緩沖液-0.iy。TFA，B緩沖液=0.1%TFA/50%ACN，流速=4ml/min,收集5分鐘的組分，同時(shí)監(jiān)測214nm(2.0A)的UV。合并包含均質(zhì)產(chǎn)品的組分，冷凍，凍干得到25.7mg。通過分析型HPLC測定的純度為90。/o。MALDI質(zhì)譜分析顯示從23,000到27,000的寬峰，其比起始胰高血糖素C24(3457.8)高大約20,000a.m.u,。實(shí)施例7胰高血糖素Cys29Mal-PEG-5K室溫下一邊攪拌一邊將20.0mg胰高血糖素Cys"(l-29)和24.7mgmPEG-Mal-5000(NektarTherapeutics)溶于3.5mlPBS，并添加0.5ml0.01MEDTA。4小時(shí)后，再添加15.6mgmPEG-Mal-5000以驅(qū)動(dòng)反應(yīng)完成。8小時(shí)后，將反應(yīng)混合物上樣于2.2x25cmVydacC18制備型反相柱，在PharmaciaFPLC系統(tǒng)中運(yùn)行乙腈梯度。收集5分鐘的組分，同時(shí)監(jiān)測214nm處(2.0A)的UV。A=0.1%TFA,B=0.1%TFA/50%ACN。將組分75-97合并冷凍，凍干得到40.0mg產(chǎn)物，所述產(chǎn)物不同于從HPLC回收的起始原料(組分58-63)。通過分析型HPLC對產(chǎn)物的分析顯示純度大于95%。MALDI質(zhì)譜分析顯示質(zhì)量范圍為8，000到10,OOO(最大為9025.3)的PEG組分的存在，其比起始原料(3484.8)高5,540a.m.u.。實(shí)施例8胰高血糖素Cys24(2-丁內(nèi)酯)向24.7mg胰高血糖素Cys"(l-29)中添加4ml0.05M碳酸氬銨/500/0乙腈和5.5ul2-溴-4-羥丁酸-y-內(nèi)酯溶液(100ul溶于900ul乙腈)。室溫下攪拌3小時(shí)后，向反應(yīng)混合物中再添加105ul內(nèi)酯溶液，再攪拌15小時(shí)。用10%含水乙酸將反應(yīng)混合物稀釋到10ml，將其上樣于2.2x25cmKromasilC18制備型反相柱。在PharmaciaFPLC上運(yùn)行乙腈梯度(450分鐘內(nèi)20%B到80%B)，收集5分鐘的組分并監(jiān)測214nm(2.0A)的UV。流速4ml/min,A=0.1%TFA，B=0.1%TFA/50%ACN。將組分74-77合并冷凍，凍干得到7.5mg。HPLC分析顯示純度為95%，MALDI質(zhì)譜分析顯示3540.7的質(zhì)量或超過起始原料84個(gè)質(zhì)量單位。該結(jié)果符合添加單個(gè)丁內(nèi)酯部分。HSOGTFTSDYSKYLDSRRAODFV—N^"fpWLMNT—'。。"分子量=3541.91SEQIDNO:29準(zhǔn)確質(zhì)量=3538分子式-C155H226N42O50S2實(shí)施例9胰高血糖素Cys24(S-羧曱基)將18.1mg胰高血糖素Cys24(l-29)溶于9.4ml0.1M磷酸鈉緩沖液(pH=9.2),并添加0.6ml溴乙酸溶液(1.3mg/ml，溶于乙腈)。在室溫下攪拌反應(yīng)物，通過分析型HPLC追蹤反應(yīng)進(jìn)展。l小時(shí)后再添加0.1ml溴乙酸溶液。再攪拌反應(yīng)物60分鐘。然后用含水乙酸酸化，上樣于2.2x25cmKromasilC18制備型反相柱進(jìn)行純化。在PharmaciaFPLC(流速=4ml/分鐘)上運(yùn)行乙腈梯度，收集5分鐘的組分并監(jiān)測214nm(2,0A)的UV。A=0.1%TFA,B=0.1%TFA/50%ACN。將組分26-29合并冷凍，凍干得到數(shù)毫克產(chǎn)物。分析型HPLC顯示90%的純度，MALDI質(zhì)譜分析確認(rèn)了預(yù)期產(chǎn)物3515的質(zhì)量。<image>imageseeoriginaldocumentpage34</image>實(shí)施例10胰高血糖素Cys^馬來酰亞氨基，PEG-3.4K-二聚體將16mg胰高血糖素Cys"和1.02mgMal-PEG-Mal-3400，聚(乙二醇)-雙-馬來酰亞胺(平均分子量3400),(NektarTherpeutics)溶于3.5磷酸鹽緩沖鹽液和0.5ml0.01MEDTA,并在室溫下攪拌反應(yīng)物。16小時(shí)后，再添加16mg胰高血糖素Cys24，繼續(xù)攪拌。大約40小時(shí)后，將反應(yīng)混合物上樣于PharmciaPepRPC16/10柱，在PharmaciaFPLC上運(yùn)行乙腈梯度，收集2分鐘的組分，監(jiān)測214nm(2.0A)的UV。流速二2ml/min,A=0.1%TFA，B=0.1%TFA/50%ACN。將組分69-74合并冷凍，凍干得到10.4mg。分析型HPLC顯示90%的純度，MALDI質(zhì)譜分析顯示9500-11,000范圍的組分，這與預(yù)期的二聚體一致。<image>imageseeoriginaldocumentpage34</image>實(shí)施例11胰高血糖素溶解度分析在0.01NHC1中制備胰高血糖素(或類似物)溶液(lmg/ml或3mg/ml)。用0.01NHC1將100ul母液稀釋到lml，測定UV吸光度(276nm)。利用200-250ul0.1MNa2HP04(pH9.2)將剩余母液的pH調(diào)節(jié)到pH7。將溶液在4。C靜置過夜，然后離心。然后用0.01NHC1將100ul上清稀釋到lml,測定UV吸光度(一式兩4分)。針對體積增加補(bǔ)償初始吸光度讀數(shù)，使用下列算法確定溶解度百分比類似物胰高血糖素胰高血糖素-Cex,R12胰高血糖素-Cex泌酸調(diào)節(jié)肽胰高血糖素，Cysl7PEG5K胰高血糖素，Cys21PEG5K胰高血糖素，Cys24PEG5K可溶百分比161048710494105133說明書第30/34頁最終吸光度，、X100=可溶百分比初始吸光度結(jié)果顯示于表l,其中胰高血糖素-Cex代表野生型胰高血糖素(SEQIDNO:l)加上在羧基末端添加SEQIDNO:20,胰高血糖素-CexR12代表SEQIDNO:1,其中第12位的Lys被Arg取代，并且羧基末端添加SEQIDNO:20的肽。表l胰高血糖素類似物的溶解度數(shù)據(jù)利用用于表1所列化合物的相同分析法研究胰高血糖素激動(dòng)劑類似物，D28,E29,E30，E15D28,D28E30,D28E29，的溶解度。數(shù)據(jù)(顯示于圖3&4)顯示，在5.5和7.0的pH值條件下，D28、E29、E30、E15D28、D28E30、D28E29的溶解性高于天然胰高血糖素。圖3的數(shù)據(jù)代表25°C60小時(shí)后測得的溶解度，而圖4的數(shù)據(jù)代表在25°C24小時(shí)，然后在4。C24小時(shí)后測得的溶解度。圖5代表涉及胰高血糖素類似物D28、D28E30和E15D28的最大溶解度的數(shù)據(jù)。實(shí)施例12胰高血糖素受體結(jié)合分析在竟?fàn)幗Y(jié)合分析法中利用閃爍親近分析技術(shù)測量肽與胰高血糖素受體的親和力。在96孔白色/透明底板(Corninglnc.,Acton,MA)中混合肽的系列3倍稀釋液(在閃爍親近分析緩沖液(0.05MTris-HCl,pH7.5，0.15MNaCl，0.1%w/v牛血清白蛋白)中制備)與0.05nM(3-[1251]-硤代酪氨酰)TyrlO胰高血糖素(AmershamBiosciences,Piscataway,NJ)，l-6微克每孔，從過表達(dá)人胰高血糖素受體的細(xì)胞制備的質(zhì)膜片段，以及1mg/孔用聚乙烯亞胺處理的小麥胚凝集素A型閃爍親近分析珠子(AmershamBiosciences,Piscataway,NJ)。在旋轉(zhuǎn)振蕩器上800rpm振搖5分鐘后，將玲反在室溫下溫育12小時(shí)，然后在MicroBeta1450液體閃爍計(jì)數(shù)器(Perkin-Elmer,Wellesley,MA)上讀數(shù)。在含"冷的"天然配體(其濃度是試驗(yàn)樣品中最高濃度的4倍)的孔中測量非特異性結(jié)合(NSB)放射性，在沒有竟?fàn)幬锏目字袡z測總結(jié)合放射性。如下計(jì)算特異性結(jié)合百分比特異性結(jié)合Q/。-((結(jié)合-NSB)/(總結(jié)合-NSB))x100。利用Origin軟件(OriginLab，Northampton,MA)測定IC50值。實(shí)施例13功能性分析-cAMP合成在基于螢火蟲螢光素酶的報(bào)告分析法中測量胰高血糖素類似物誘導(dǎo)cAMP的能力。通過在添加了0.25%牛生長血清(HyClone，Logan，UT)的DMEM(Invitrogen,Carlsbad,CA)中培養(yǎng)16小時(shí)，將共轉(zhuǎn)染胰高血糖素-或GLP-1受體及與cAMP應(yīng)答元件連接的螢光素酶基因的HEK293細(xì)胞去血清，然后與胰高血糖素、GLP-1或新的胰高血糖素類似物的系列稀釋物在96孔聚-D-賴氨酸-包被的"Biocoat"板(BDBiosciences,SanJose，CA)中37°C5%0)2條件下溫育5小時(shí)。溫育結(jié)束后在每孔中添加100微升LucLite發(fā)光底物試劑(Perkin-Elmer，Wellesley,MA)。將所述板輕輕振搖，在暗處溫育10分鐘，在MicroBeta-1450液體閃爍計(jì)數(shù)器(Perkin-Elmer,Wellesley,MA)上測量光輸出。利用Origin軟件(OriginLab,Northampton,MA)計(jì)算有效的50%濃度。結(jié)果顯示于表2和3。<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>表3PEG化的胰高血糖素類似物的cAMP誘導(dǎo)肽cAMP誘導(dǎo)胰高血糖素受體GLP-1受體EC50，nMN*ECso,nMN胰高血糖素0.33±0.231812.71±3.742胰高血糖素C17PEG5K0.82±0.15455.86±1.132胰高血糖素C21PEG5K0.37±0.16611.52±3.682胰高血糖素C24PEG5K0.22±0,101213.65±2.954胰高血糖素C29PEG5K0.96±0.07212.71±3.742胰高血糖素C24PEG20K0.08±0.053未測定胰高血糖素C24二聚體0.10±0.053未測定GLP-1>10000.05±0.024-實(shí)驗(yàn)次數(shù)其他胰高血糖素類似物的數(shù)據(jù)顯示于圖6-9和表4。表4在過表達(dá)胰高血糖素受體的細(xì)胞中觀察到的EC50s(nM)買施例14胰高血糖素Cys-馬來酰亞氨基PEG類似物的穩(wěn)定性分析胰高血糖素標(biāo)準(zhǔn)品K29K30K29，K30K30,K31D28E28E29E30D28,E29D28,E30D28，E15試驗(yàn)20.040.060.120.050.050.04試驗(yàn)30.050.140.040.030.050.15試驗(yàn)4o.n0.220.17試驗(yàn)10,12529將各種胰高血糖素類似物溶于水或PBS，進(jìn)行初始HPLC分析。在調(diào)節(jié)pH(4、5、6、7)后，將樣品在37。C溫育特定時(shí)間，通過HPLC再次分析以確定肽的完整性。測定感興趣的特定肽的濃度，并計(jì)算相對于初始分析的剩余完整百分比。胰高血糖素Cys"-馬來酰亞氨基PEG5K的結(jié)果顯示于圖l和2。實(shí)施例15施用胰高血糖素類似物后小獵犬中血清葡萄糖濃度的變化使用8-12kg、8-16月齡和良好健康狀態(tài)的犬/小獵犬(beagledogs)測定胰高血糖素作用的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)。每只動(dòng)物禁食過夜，在每次給藥后下列時(shí)間點(diǎn)取血給藥后0小時(shí)(給藥前)、5、10、20、30、45、60、90、120、240分鐘。每個(gè)劑量組使用6只動(dòng)物，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集大約1-2ml全血。將約1.0ml全血添加到包含足夠體積的Trasylol(抑酶肽)的K2EDTA管中，得到至少500KIU/mL的全血。在冷凍離心機(jī)約1，500-3，000xg離心樣品10-15分鐘后收集大約500uL血漿。將樣品轉(zhuǎn)移到塑料小瓶，凍存于-70。C或更低。將血液樣品放入空管，在室溫靜置15-20分鐘，然后在冷凍離心機(jī)中1,500-3，000xg離心10-15分鐘，將剩余的1.0mL全血轉(zhuǎn)變?yōu)檠濉悠忿D(zhuǎn)移到塑料小瓶，凍存于-70。C或更低。將胰高血糖素和類似物按照0.1667mg/ml的濃度溶于0.01NHC1,并按照0.03ml/kg給動(dòng)物施用。給動(dòng)物肌內(nèi)施用0.005mg/kg劑量的以下物質(zhì)胰高血糖素，包含胰高血糖素以及與胰高血糖素羧基末端連接的SEQIDNO:31的序列的胰高血糖素類似物(胰高血糖素-CEX),或包含在氨基酸28的天冬氨酸取代的胰高血糖素類似物(胰高血糖素-AspM)SEQIDNO:11。所獲數(shù)據(jù)顯示于圖10。權(quán)利要求1.一種包含SEQIDNO33的序列或SEQIDNO33的類似物的胰高血糖素肽，其中所述類似物與SEQIDNO33的不同之處在于1到3個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于選自所述類似物第1、2、5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21和24位的一個(gè)或更多個(gè)位置，條件是所述胰高血糖素肽包括第28或29位與SEQIDNO1相應(yīng)位置發(fā)現(xiàn)的氨基酸不同的氨基酸，或在該肽的羧基末端添加有附加酸性氨基酸。2.權(quán)利要求1的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽包含SEQIDNO:34的序列。3.權(quán)利要求1的胰高血糖素肽，其中所述肽包含SEQIDNO:10的序列。4.權(quán)利要求1的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽包括SEQIDNO:34的類似物，其中SEQIDNO:34的肽的第2位氨基酸不是絲氨酸。5.權(quán)利要求4的胰高血糖素肽，其中所述肽的第2位是選自d-絲氨酸、丙氨酸、甘氨酸、n-曱基絲氨酸和氨基異丁酸的氨基酸。6.權(quán)利要求1的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽包括SEQIDNO:34的類似物，其中SEQIDNO:34的肽的第1位氨基酸選自d-組氨酸，脫氨組氨酸，羥基組氨酸，乙?；M氨酸和高組氨酸。7.權(quán)利要求1的胰高血糖素肽，其進(jìn)一步包括與胰高血糖素肽第16、17、21或24位共價(jià)結(jié)合的親水部分。8.權(quán)利要求7的胰高血糖素肽，其中所述親水部分是聚乙二醇。9.權(quán)利要求8的胰高血糖素肽，其中所述聚乙二醇鏈具有選自約1,000到約5,000道爾頓的分子量。10.權(quán)利要求8的胰高血糖素肽，其中所述聚乙二醇鏈具有至少約20,000道爾頓的分子量。11.權(quán)利要求1的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽進(jìn)一步包括選自SEQIDNO:20、SEQIDNO:21和SEQIDNO:22的序列，所述序列與所述胰高血糖素肽的羧基末端結(jié)合。12.—種包括SEQIDNO:7的序列或其胰高血糖素激動(dòng)劑類似物的純化胰高血糖素肽。13.權(quán)利要求12的胰高血糖素肽，其中所述肽包含選自SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:38的序列。14.權(quán)利要求13的胰高血糖素肽，其進(jìn)一步包括添加到胰高血糖素肽的羧基末端的附加氨基酸，所述附加氨基酸選自Asp和Glu。15.權(quán)利要求12的胰高血糖素肽，其進(jìn)一步包括與選自16、17、21和24位的氨基酸殘基共價(jià)結(jié)合的親水部分，及所述胰高血糖素肽的藥學(xué)上可接受的鹽。16.權(quán)利要求15的胰高血糖素肽，其中所述親水部分是聚乙二醇。17.權(quán)利要求16的胰高血糖素肽，其中所述聚乙二醇鏈具有選自約1,000到約5,000道爾頓的分子量。18.權(quán)利要求16的胰高血糖素肽，其中所述聚乙二醇鏈具有至少約20,000道爾頓的分子量。19，權(quán)利要求12的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽包含SEQIDNO:11或SEQIDNO:38的序列。20.權(quán)利要求19的胰高血糖素肽，其進(jìn)一步包括與所述胰高血糖素肽的氨基酸29結(jié)合的延伸肽，所述氨基酸序列選自SEQIDNO:20、SEQIDNO:21和SEQIDNO:22。21.—種包含SEQIDNO:33的序列的純化胰高血糖素肽，條件是當(dāng)?shù)?8位的氨基酸是天門冬酰胺并且第29位的氨基酸是蘇氨酸時(shí)，所述肽進(jìn)一步包括添加到胰高血糖素肽c末端的1到2個(gè)氨基酸，所述氨基酸獨(dú)立的選自Lys、Arg、His、Asp或Glu。22.權(quán)利要求21的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽包含選自SEQIDNO:9、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13和SEQIDNO:32的序列。23.權(quán)利要求22的胰高血糖素肽，其中所述肽進(jìn)一步包括添加到胰高血糖素肽c末端的1到2個(gè)氨基酸，所述氨基酸獨(dú)立的選自Lys、Arg、His、Asp或Glu。24.權(quán)利要求21的胰高血糖素肽，其進(jìn)一步包括與所述胰高血糖素肽的氨基酸29結(jié)合的延伸肽，所述氨基酸序列選自SEQIDNO:20、SEQIDNO:21和SEQIDNO:22。25.權(quán)利要求21的胰高血糖素肽，其進(jìn)一步包括與選自16、17、21和24位的氨基酸殘基共價(jià)結(jié)合的聚乙二醇鏈，及所述胰高血糖素肽的藥學(xué)上可接受的鹽。26.—種包括彼此通過接頭結(jié)合的兩個(gè)胰高血糖素肽的同型二聚體，其中所述胰高血糖素肽的每一個(gè)包含SEQIDNO:ll的序列。27.權(quán)利要求26的同型二聚體，其中所述接頭選自雙功能巰基交聯(lián)劑和雙功能胺交聯(lián)劑。28.—種包括通過接頭與第二胰高血糖素肽結(jié)合的第一胰高血糖素肽的二聚體，其中所述第一胰高血糖素肽包括選自SEQIDNO:1、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10和SEQIDNO:11的肽，并且第二胰高血糖素肽包括SEQIDNO:33,條件是對于第二胰高血糖素肽來說，當(dāng)?shù)?8位的氨基酸是天門冬酰胺和第29位的氨基酸是蘇氨酸時(shí)，第二胰高血糖素肽進(jìn)一步包括添加到第二胰高血糖素肽的羧基末端的1到2個(gè)氨基酸，所述氨基酸獨(dú)立的選自Lys,Arg，His,Asp或Glu,及所述胰高血糖素多肽的藥學(xué)上可接受的鹽。29.—種藥物組合物，其包括如權(quán)利要求12的胰高血糖素激動(dòng)劑或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載體。30.—種藥物組合物，其包括胰高血糖素激動(dòng)劑或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載體，所述胰高血糖素激動(dòng)劑包含SEQIDNO:11或SEQIDNO:38的序列。31.—種用于給需要其的患者施用胰高血糖素激動(dòng)劑的試劑盒，其中所述試劑盒包括權(quán)利要求29的藥物組合物；和用于將所述組合物給患者施用的裝置。32.權(quán)利要求31的試劑盒，其中所述裝置是氣霧劑分配裝置，其中所述組合物被預(yù)包裝到氣霧劑裝置內(nèi)。33.權(quán)利要求31的試劑盒，其中所述裝置包括注射器和針頭，其中所述組合物被預(yù)包裝到注射器內(nèi)。34.—種利用預(yù)配含水組合物治療^f氐血并唐癥的方法，所述方法包括r施用有效量的權(quán)利要求29的藥物組合物的步驟。35.—種引起腸道暫時(shí)麻痹的方法，所述方法包括施用有效量的權(quán)利要求29的藥物組合物。36.—種減輕重量增加或誘導(dǎo)重量損失的方法，所述方法包括施用有效量的包括胰高血糖素激動(dòng)劑的組合物，所述胰高血糖素激動(dòng)劑包括選自SEQIDNO:8的胰高血糖素肽，其中胰高血糖素肽的氨基酸29與第二肽通過肽鍵結(jié)合，并且所述第二肽包含選自SEQIDNO:20(GPSSGAPPPS)、SEQIDNO:21(KRNRNNIA)和SEQIDNO:22(KRNR)的序列。37.—種減輕重量增加或誘導(dǎo)重量損失的方法，所述方法包括施用有效量的包括胰高血糖素激動(dòng)劑的組合物，所述胰高血糖素激動(dòng)劑包括選自SEQIDNO:8的胰高血糖素肽。全文摘要本發(fā)明公開修飾的胰高血糖素肽，其具有提高的溶解性同時(shí)保留胰高血糖素激動(dòng)劑活性。通過用帶電荷氨基酸取代天然氨基酸，和/或?qū)щ姾砂被崽砑拥诫牡聂然┒?，將糖原肽修飾。通過PEG化或添加選自SEQIDNO20、SEQIDNO21、SEQIDNO23的羧基末端肽或上述兩種方法，可以將修飾的胰高血糖素激動(dòng)劑進(jìn)一步修飾，以進(jìn)一步增強(qiáng)胰高血糖素激動(dòng)劑類似物的溶解性。文檔編號A61K35/38GK101578102SQ200880001673公開日2009年11月11日申請日期2008年1月3日優(yōu)先權(quán)日2007年1月5日發(fā)明者J·沙貝內(nèi),M·迪馬基,R·D·迪馬基申請人:印第安納大學(xué)研究及科技有限公司