專(zhuān)利名稱：核黃素衍生物高度分散制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及藥劑學(xué)領(lǐng)域，涉及含核黃素衍生物的高度分
散制劑。
背景技術(shù)：
核黃素(Riboflavin)又稱維生素B2 (Vitamin B2)，是一種水溶性B族維生素。核黃素在1920年被發(fā)現(xiàn)，1931年從卵蛋白中分離出來(lái)，1935年化學(xué)結(jié)構(gòu)被鑒定。核黃素是人體新陳代謝酶系統(tǒng)的組成部分，生命活動(dòng)不可缺少，與碳水化合物、脂肪及氨基酸代謝密切相關(guān)。它的生物活性形式是黃素單核苷酸(FMN)和黃素嘌呤二苷酸(FAD)兩種黃素輔酶。這兩種輔酶與多種蛋白形成黃素蛋白，參與生物機(jī)體的生物氧化反應(yīng)和能量代謝，是機(jī)體細(xì)胞內(nèi)混合功能氧化酶系統(tǒng)的必要組分。同時(shí)，該酶系統(tǒng)是化學(xué)致癌物在機(jī)體內(nèi)代謝活化或解毒的主要酶系統(tǒng)。 核黃素是人體必需的營(yíng)養(yǎng)成分，同時(shí)臨床上主要用于預(yù)防和治療核黃素缺乏癥，如舌炎、口角炎和陰囊炎等。近幾年的研究表明，核黃素還具有利尿、降血脂、抗腫瘤和改善心臟功能等作用(王林靜.核黃素與健康.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，16(3) :223)。它的重要性已引起廣泛關(guān)注，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其生理功能進(jìn)行了大量深入的研究。在心血管系統(tǒng)方面，核黃素有降血脂、抗血小板聚集和抑制脂質(zhì)過(guò)氧化等作用，這些都是高血壓并發(fā)癥相關(guān)的危險(xiǎn)因素。高血壓患者口服核黃素(75mg/d)后，與用藥前比能顯著抑制血小板聚集性、降低血清丙二醛含量和甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇含量，增強(qiáng)超氧化物歧化酶活性(楊煥民.核黃素對(duì)受冷大鼠增重、成活和有關(guān)激素的影響.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，1998，20(3):281;Hennekens CH. Platelet inhibitors andadtioxidant vitamins in cardiovasculardisease. Am Heart J， 1994， 128 (9) :1333)。在抗腫瘤方面，大量的流行病學(xué)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)資
料表明，核黃素有防癌和抗癌作用。伊朗、中國(guó)等地居民因核黃素缺乏或嚴(yán)重的核黃素?cái)z入不足而致慢性食道炎普遍存在或區(qū)域性高發(fā)的食管癌(Munoz N，et al. Precursor lesionsofoesophageal cancer in highrisk population in Iran and China. Lancet,1982， (1):876)。補(bǔ)充核黃素組的食管癌前病人的食管上皮細(xì)胞增生轉(zhuǎn)換的好轉(zhuǎn)率和穩(wěn)定率明顯高于安慰劑組(林英.核黃素營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)食管上皮增生轉(zhuǎn)化的影響.河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，1995，16(4) :192)，因此核黃素可抑制食管上皮增生或促進(jìn)其向正常轉(zhuǎn)化。除影響上皮組織完整性外，核黃素還有抗突變作用。Ames試驗(yàn)顯示，核黃素是黃曲霉毒素B工突變劑很有效的拮抗物(郭志成.維生素對(duì)突發(fā)的抑制作用.解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，1993，11(5) :396)。
核黃素是一種水溶性維生素，在腸道內(nèi)的吸收窗狹窄，極少在體內(nèi)貯存。核黃素體內(nèi)磷酸化的產(chǎn)物為黃素單核苷酸和黃素腺嘌呤二核苷酸，兩者有60%與血漿蛋白結(jié)合，半衰期為1. 1小時(shí)，主要以代謝物形式自尿液中排出，給藥劑量增加后，尿中原形藥的排出量也相應(yīng)地增加。此外核黃素還易從汗液中排出(孫定人.維生素BJ核黃素)缺乏癥(口角炎)與補(bǔ)充.中國(guó)藥房，2003，14(7) :448)。吸收少和極短的半衰期造成了核黃素的低生物利用度，再加上人體對(duì)核黃素的儲(chǔ)存量十分有限，大劑量給藥的核黃素往往大部分被排出了體外。因此以原型核黃素為主的藥物不僅給藥次數(shù)多，而且難以發(fā)揮有效的治療作用，還造成不必要的浪費(fèi)。 研究者們通過(guò)多種方法來(lái)解決核黃素的生物利用度問(wèn)題，例如合成核黃素衍生物。核黃素分子的核糖醇側(cè)鏈分布有一些羥基，可利用這些羥基與脂肪鏈基團(tuán)相連接來(lái)獲得核黃素酯類(lèi)衍生物(徐琪壽，等.核黃素衍生物及其制備方法與應(yīng)用.CN 1659169A;W02004/013142A1)。核黃素衍生物作為核黃素的前藥，在體內(nèi)降解成原型核黃素后才能發(fā)揮藥理活性，因此通過(guò)控制核黃素衍生物的體內(nèi)釋放和降解速率可發(fā)揮不同的長(zhǎng)效作用。核黃素衍生物具有較一般核黃素更高的穩(wěn)定性，在體內(nèi)緩慢釋放核黃素原型藥物，單次給藥持續(xù)作用可達(dá)2 3個(gè)月之久，可有效預(yù)防或治療核黃素缺乏癥，并且沒(méi)有毒性(王彥博，等.核黃素-月桂酸酯對(duì)化療大鼠口腔黏膜的保護(hù)作用.感染、炎癥、修復(fù)，2007，8(1):26-29 ;吳南海，等.長(zhǎng)效核黃素預(yù)防大劑量甲氨喋呤化療毒副反應(yīng)療效觀察.中國(guó)小兒血液與腫瘤雜志，2006，11 (2) :73-75)。 核黃素衍生物特別是酯類(lèi)衍生物通過(guò)增加藥物的脂溶性而獲得在體內(nèi)緩慢釋放的效果，但脂溶性較強(qiáng)的藥物給藥有一定困難。因?yàn)橹苄运幬锊蝗芑螂y溶于水，使其一般制劑，如片劑和注射劑無(wú)法解決其在水溶液中的分散和溶解問(wèn)題。目前采用的長(zhǎng)效核黃素制劑是核黃素衍生物的油混懸劑，其中藥物顆粒大，易發(fā)生聚集，通針性不好。雖然采用粘度較高的油作為分散介質(zhì)能減緩藥物粒子的聚集，但油作為肌肉注射溶劑患者接受性較差。 高度分散劑型在最近幾十年內(nèi)得到迅速發(fā)展，具體包括脂質(zhì)體、非離子表面活性劑泡囊、微粒、納米粒、納米混懸液、乳劑、膠束等。 脂質(zhì)體(Liposomes)是一種由磷脂雙分子層構(gòu)成的泡囊(Vesicles)，是一種可以在水溶液中高度分散的傳遞系統(tǒng)，可以作為很多種藥物的載體。它的高度分散性使其在體內(nèi)具有耙向、緩釋等效果，口服具有淋巴趨向性，較易攜帶藥物穿越血腦屏障，容易通過(guò)融合、內(nèi)吞等途徑進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)(basic DD肌d P即ahadjopoulos D丄iposomes revisited.Science, 1995， 267 :1275)。脂質(zhì)體的局部給藥有生物相容性好、促進(jìn)藥物滲透的作用。脂質(zhì)體泡囊的磷脂雙分子層膜將內(nèi)部包裹的水相和外部水相隔開(kāi)，雙分子層內(nèi)呈疏水性。藥物根據(jù)其物理化學(xué)性質(zhì)的不同分別包裹在內(nèi)水相或膜中。 一般地，水溶性藥物在內(nèi)水相中；脂溶性藥物在膜層中。 非離子表面活性劑泡囊(Niosomes)是指某些非離子表面活性劑(如司盤(pán)60)在一定條件下在水中自組裝成泡囊結(jié)構(gòu)，類(lèi)似脂質(zhì)體。它同樣可以作為藥物載體，具有類(lèi)似月旨質(zhì)體的一些體內(nèi)夕卜特征(Uchegbu IF， Vyas SP. Non—ionic surfactant basedvesicles (niosomes)in drug delivery. Int J Pharm，1998，172 :33-70)。
微粒(Microparticles) —般指粒徑在微米級(jí)的粒子，范圍可從1微米到1000微米。由于其高度分散性，在體內(nèi)可產(chǎn)生黏附，高的表面積也有助于藥物特別是脂溶性藥物的溶出，也會(huì)g產(chǎn)生控釋效果(Hombreiro-Perez M， et al. Non_degradable microparticlesconteining a hydrophilic and/or a lipophilic drug-preparation,characterizationand drug release modeling. J Controlled Rel，2003，88 :413-428)。微球(Microspheres)一般指藥物溶解或分散在基質(zhì)中的微粒(Freiberg S，Zhu XX. Polymer microspheres forcontrolled drug release. Int JPharm， 2004， 282 :1-18)。將固體藥物或液體藥物作囊
4心物包裹而成藥庫(kù)型微小膠囊稱微囊(Microcapsules)(陸彬主編.藥物新劑型與新技術(shù).北京人民衛(wèi)生出版社，1998)。 納米粒(Nanoparticles) —般指是納米級(jí)分散的固體粒子，由于其高度分散性，它作為藥物載體有提高藥物生物利用度、增強(qiáng)靶向性等特點(diǎn)。固體脂質(zhì)納米粒(SLN)采用人體相容的脂質(zhì)材料作為主要輔料形成納米粒，具有普通納米粒的特點(diǎn)和生物相容性好的特點(diǎn)，近年來(lái)研究較多。納米囊(Nanocapsules)特指藥物包裹在成膜材料中形成的纟內(nèi)米粒子，同樣具有纟內(nèi)米粒的體內(nèi)夕卜特點(diǎn)(Kreuter J. Nanoparticles—a historicalperspective. Int J Pharm，2007，331 :1-10)。 藥物納米混懸液(Nanosuspensions)與納米粒和固體脂質(zhì)納米粒不同，它是用表面活性劑穩(wěn)定的純藥物粒子組成的亞微米級(jí)膠體分散系(艾萍，金義光.藥物傳送中的納米混懸液.國(guó)外醫(yī)學(xué)藥學(xué)分冊(cè)，2005， 32(1) :61-63 ;Rabinow BE. Nanosuspensions in drugdelivery. Nature, 2004， 3 :1-13)。納米混懸劑系統(tǒng)是一種分散度極好的固體藥物粒子水分散體系，與普通混懸劑最主要的區(qū)別在于其藥物粒子的粒徑小于1 ii m，多數(shù)在150 800nm的范圍內(nèi)。與脂質(zhì)體、乳劑等脂質(zhì)系統(tǒng)相似，納米混懸液技術(shù)可用于水不溶而脂溶性強(qiáng)的化合物。另外，它還適用于水油都不溶的化合物，后者一般晶格能大，熔點(diǎn)高。納米混懸液解決了非溶解必需的藥物傳遞問(wèn)題。致密的固體粒子載藥量大，適合大劑量給藥。同時(shí)高載藥量可減少給藥體積，對(duì)只能小體積給藥的肌注和眼部給藥很重要。通常用過(guò)量助溶劑增溶不溶性藥物的方法會(huì)帶來(lái)毒性，用溶劑分散法制備的納米混懸液不會(huì)有助溶劑的毒副作用，而使一些曾被放棄的候選藥物又得以應(yīng)用。藥物呈固態(tài)可使其化學(xué)穩(wěn)定；小粒子沉降慢，使其物理穩(wěn)定。水難溶性藥物的注射劑中常加入過(guò)量助溶劑，這樣會(huì)引發(fā)過(guò)敏反應(yīng)和注射疼痛，藥物也會(huì)被血液稀釋而沉淀。制成納米混懸液可解決上述問(wèn)題，此技術(shù)一般用于水中溶解度每毫升低于幾百微克的藥物，現(xiàn)已成功應(yīng)用于抗腫瘤藥、麻醉藥、抗真菌藥和抗細(xì)菌藥，以及治療惡性高熱和癌痛的藥物。納米混懸液注射后有自身的藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)。由于其單位體積載藥量可高達(dá)30 % ，在皮下、肌內(nèi)和皮內(nèi)的貯庫(kù)式傳遞可產(chǎn)生緩釋效果。
乳劑常用作脂溶性藥物的傳遞系統(tǒng)，在體內(nèi)具有靶向性、緩釋和控釋效果。乳劑的粒徑分布范圍很廣，從數(shù)微米到納米級(jí)。納米乳(Nanoemulsions)是指粒徑在200納米以下的乳滴組成的體系，可以將脂溶性藥物包裹在乳滴中。由于其高度分散性，它作為藥物載體同樣有提高藥物生物利用度、增強(qiáng)靶向性等特點(diǎn)。而微乳(Microemulsions)是指粒徑在100納米以下的乳滴組成的體系，同樣具有納米乳的特點(diǎn)。(Solans C， etal. Nano_emulsions. Curr0pin Colloid Interface Sci， 2005， 10 :102—110 ;Kawakami K，et al. Microemulsionformulation for enhanced absorption of poorly soluble drugsII. In vivo study. JControlled Rel，2002，81 :75-82) 膠束(Micelles)對(duì)藥物，特別是脂溶性藥物有很好的增溶作用，可用作藥物傳遞系統(tǒng)(Rangel-Yagui C0，et al.Micellar solubilization of drugs. J PharmPharmaceutSci，2005，8 :147-163)。近年來(lái)，聚合物膠束作為傳遞系統(tǒng)的作用越來(lái)越受到重視(Torchilin VP.Micellar nanocarriers :Pharmaceuticalperspectives. Pharm Res，2007,24 :1-16)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人在研究中意外地發(fā)現(xiàn)將核黃素衍生物制備成高度分散制劑后，具有其突出的優(yōu)勢(shì)。由于具備了高度分散制劑的特點(diǎn)，核黃素衍生物可以充分發(fā)揮其治療特點(diǎn)，例如增強(qiáng)生物利用度、緩控釋、長(zhǎng)循環(huán)、靶向性、提高制劑穩(wěn)定性和增強(qiáng)患者順應(yīng)性，并根據(jù)具體劑型和處方組成呈現(xiàn)不同的特點(diǎn)。 核黃素和本發(fā)明中的核黃素衍生物，分子結(jié)構(gòu)可表示如下
I~OR1
—OR
O 其中R1、 R2、 R3、 R4都為氫原子(H)時(shí)，分子為核黃素；R1、 R2、 R3、 R4為其他基團(tuán)時(shí)，分子為核黃素衍生物。四個(gè)位置可以是不同、相同或獨(dú)立存在的基團(tuán)。 本發(fā)明中的核黃素衍生物并不限制分子結(jié)構(gòu)形式，凡是具有水難溶性、水溶性/脂溶性均較低的核黃素衍生物均為本發(fā)明的范圍，其中優(yōu)選的是核黃素酯類(lèi)衍生物。用于生成核黃素酯類(lèi)衍生物的酸，選自有機(jī)酸和無(wú)機(jī)酸，優(yōu)選的是有機(jī)酸。無(wú)機(jī)酸選自磷酸、鹽酸、硝酸、硫酸。有機(jī)酸選自脂肪酸、氨基酸、金剛烷酸，優(yōu)選的是脂肪酸。脂肪酸選自硬脂酸、棕櫚酸、肉桂酸、月桂酸、癸酸、壬酸、辛酸、庚酸、戊酸、丁酸、丙酸、乙酸、異丁酸。這些酸可與核黃素分子生成單酯、雙酯、三酯、四酯。對(duì)于脂肪酸酯化的情況，本發(fā)明中的核黃素衍生物選自核黃素硬脂酸單酯、核黃素棕櫚酸單酯、核黃素肉桂酸單酯、核黃素月桂酸單酯、核黃素癸酸單酯、核黃素壬酸單酯、核黃素辛酸單酯、核黃素庚酸單酯、核黃素核黃素戊酸單酯、核黃素丁酸單酯、核黃素丙酸單酯、核黃素乙酸單酯、核黃素硬脂酸雙酯、核黃素棕櫚酸雙酯、核黃素肉桂酸雙酯、核黃素月桂酸雙酯、核黃素癸酸雙酯、核黃素壬酸雙酯、核黃素辛酸雙酯、核黃素庚酸雙酯、核黃素核黃素戊酸雙酯、核黃素丁酸雙酯、核黃素丙酸雙酯、核黃素乙酸雙酯、核黃素硬脂酸三酯、核黃素棕櫚酸三酯、核黃素肉桂酸三酯、核黃素月桂酸三酯、核黃素癸酸三酯、核黃素壬酸三酯、核黃素辛酸三酯、核黃素庚酸三酯、核黃素核黃素戊酸三酯、核黃素丁酸三酯、核黃素丙酸三酯、核黃素乙酸三酯、核黃素硬脂酸四酯、核黃素棕櫚酸四酯、核黃素肉桂酸四酯、核黃素月桂酸四酯、核黃素癸酸四酯、核黃素壬酸四酯、核黃素辛酸四酯、核黃素庚酸四酯、核黃素核黃素戊酸四酯、核黃素丁酸四酯、核黃素丙酸四酯、核黃素乙酸四酯，優(yōu)選的是核黃素的脂肪酸單酯，更優(yōu)選的是核黃素月桂酸單酯，最優(yōu)選的是核黃素_5' _月桂酸單酯。 由核黃素獲得核黃素衍生物包括核黃素酯類(lèi)衍生物的方法可參考很多公開(kāi)的文
6獻(xiàn)和書(shū)籍，例如制備某些含羥基化合物酯類(lèi)衍生物的方法和連接脂肪鏈基團(tuán)的通用合成方 法。運(yùn)用專(zhuān)業(yè)知識(shí)和查閱文獻(xiàn)后，本專(zhuān)業(yè)的一般技術(shù)人員可設(shè)計(jì)和合成得到相應(yīng)的核黃素 衍生物。某些核黃素衍生物的合成方法也有專(zhuān)門(mén)報(bào)道(徐琪壽，等.核黃素衍生物及其制 備方法與應(yīng)用.CN 1659169A;W0 2004/013142A1)。 一般地，可將核黃素和酰鹵或酸酐反應(yīng) 得到核黃素衍生物。 本發(fā)明中含核黃素衍生物的高度分散制劑，其粒子成高度分散狀態(tài)，一般地粒子 直徑小于1000微米，優(yōu)選的粒子直徑小于100微米，更優(yōu)選的粒子直徑小于1微米，進(jìn)一步 優(yōu)選的是小于0. 5微米，更進(jìn)一步優(yōu)選的是小于0. 2微米。核黃素衍生物高度分散制劑一 般以水性分散液的形式存在并給藥，也可以經(jīng)過(guò)適當(dāng)處理如干燥過(guò)程獲得固態(tài)或半固態(tài)形 式。高度分散劑型具體選自脂質(zhì)體、非離子表面活性劑泡囊、微粒、納米粒、納米混懸液、乳 劑、膠束。高度分散制劑根據(jù)其具體組成和給藥途徑，在體內(nèi)會(huì)表現(xiàn)出提高制劑穩(wěn)定性、促 吸收、增強(qiáng)生物利用度、靶向、緩釋、控釋、增強(qiáng)患者順應(yīng)性等作用。給藥途徑包括注射、口 服、局部給藥等。 本發(fā)明中含核黃素衍生物的乳劑，其粒子大小沒(méi)有限制，優(yōu)選自微乳或納米乳。本 發(fā)明中含核黃素衍生物的膠束，優(yōu)選的是聚合物膠束。 含核黃素衍生物的脂質(zhì)體制備方法可參考相關(guān)文獻(xiàn)和專(zhuān)業(yè)技術(shù)(如NewRRC ed. Liposome :a practical approach. Oxford :0xford University Press,1990 ; 鄧英 杰.脂質(zhì)體技術(shù).北京人民衛(wèi)生出版社，2007)。一般地，如果采用薄膜分散法制備脂質(zhì)體，
可以將核黃素衍生物與磷脂等膜材共同溶于有機(jī)溶劑，盛入燒瓶中，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到一 層薄膜，然后加入水或適當(dāng)緩沖液，進(jìn)行振蕩和超聲，直至形成均勻的混懸液。如果超聲時(shí) 間延長(zhǎng)，還可能得到納米級(jí)分散系統(tǒng)。如果采用反相蒸發(fā)法制備脂質(zhì)體，可以將核黃素衍生 物與磷脂等膜材共同溶于有機(jī)溶劑，加入水或緩沖液，高速攪拌或超聲制備成乳劑，然后減 壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到凝膠態(tài)物質(zhì)，然后加入水或適當(dāng)緩沖液或不加，繼續(xù)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直至 形成均勻的脂質(zhì)體混懸液。脂質(zhì)體混懸液還可以選擇適當(dāng)處方并在適當(dāng)條件下進(jìn)行冷凍干 燥或噴霧干燥，形成固態(tài)，這樣可以保證制劑的穩(wěn)定性，臨用前加入水溶液振搖即可得到脂 質(zhì)體混懸液。運(yùn)用相近的技術(shù)可以獲得含核黃素衍生物的非離子表面活性劑泡囊。選擇合 適的處方和工藝就可以得到較理想的含核黃素衍生物的脂質(zhì)體和非離子表面活性劑泡囊。 含核黃素衍生物的微粒包括微球和微囊。微球的制備方法可參考相關(guān)文獻(xiàn)和專(zhuān)業(yè) 技術(shù)(如Perez MH， et al. The preparation and evaluation ofpoly (e_caprolactone) microparticles containing both a lipophilic and a hydrophilicdrug. J Controlled Release, 2000， 65 :429-438)。 一般地，可將藥物與聚合物共同溶于有機(jī)溶劑中，然后利用 0/W乳化法制備得到微球。還有很多其他制備微球的方法，在許多文獻(xiàn)中都可以找到(如 Freiberg S，Zhu XX. Polymermicrospheres for controlled drug release. Int J Pharm， 2004,282 :1-18)，包括單體聚合法、溶劑揮發(fā)法、噴霧干燥法。微囊的制備方法包括相分離
法、液中干燥法、噴霧干燥法等(如陸彬主編.藥物新劑型與新技術(shù).北京人民衛(wèi)生出版
社，1998)。選擇合適的處方和工藝就可以得到較理想的含核黃素衍生物的微粒。
有很多種方法可用于制備含核黃素衍生物的納米粒，參考文獻(xiàn)很多。根 據(jù)納米粒的材料和要求不同，可參考相關(guān)文獻(xiàn)和專(zhuān)業(yè)技術(shù)(如Mohanraj VJ， Chen Y. Nanoparticles :a review.Tropic J Pharm Res，2006，5 (1) :561—573 ;YiguangJin.Nanotechnology in pharmaceutical manufacturing, in : (Shayne CoxGad， ed. )Pharmaceutical Manufacturing Handbook. John Wiley and Sons, Inc. ，2008， 1251-1290)。 一般地，聚合物納米粒的制備方法包括聚合法、沉淀法、溶劑揮發(fā)法、鹽析法； 固體脂質(zhì)納米粒(SLN)的制備方法包括高壓乳勻法、微乳法、溶劑揮發(fā)法；無(wú)機(jī)納米粒的制 備方法包括沉淀法。納米囊的方法一般地包括單體界面聚合法和聚合物界面納米沉積法。 含核黃素衍生物的納米?；鞈乙哼€可以選擇適當(dāng)處方并在適當(dāng)條件下進(jìn)行冷凍干燥或噴 霧干燥，形成固體粉末狀，這樣可以保證制劑的穩(wěn)定性，臨用前加入水溶液振搖即可得到納 米粒混懸液。選擇合適的處方和工藝就可以得到較理想的含核黃素衍生物的納米粒。
固體脂質(zhì)納米粒作為含核黃素衍生物的納米粒劑型的優(yōu)選。 一般地，將核黃素衍 生物與常溫下為固態(tài)的脂質(zhì)，如磷脂、脂肪酸、甘油酯，共同加熱熔融，然后加入水或適當(dāng)緩 沖液，在加熱情況下在高壓乳勻機(jī)上循環(huán)乳化多次，形成納米分散的乳滴，迅速冷卻，使之 固化，即得到含核黃素衍生物的固體脂質(zhì)納米粒。用微乳法也可制得含核黃素衍生物的固 體脂質(zhì)納米粒。 參考相關(guān)文獻(xiàn)及專(zhuān)業(yè)技術(shù)可以制備得到核黃素衍生物納米混懸液(如 Michal E.Drug nanoparticles by antisolvent precipitation :mixing energy versussurfactant stabilization. Langmuir， 2006，22，8951 ;Sigfridsson K， et al.Aformulation comparison, using a solution and different nanosuspensions of apoorly soluble compound. Eur J Pharm Biopharm，2007，67 :540 ;Keck CM， Muller RH. Drug nanocrystals of poorly soluble drugs produced by high pressurehomogenisation. Eur J Pharm Biopharm, 2006， 62 :3)。具體制備工藝包括介質(zhì)石開(kāi)
磨法、高壓均質(zhì)法、注入法、乳化法、溶劑蒸發(fā)沉降法、超臨界流體萃取法、類(lèi)乳化溶劑擴(kuò)散 法及固態(tài)反相膠束溶液法等多種方法。關(guān)于制備工藝的優(yōu)化要根據(jù)藥物的理化性質(zhì)及不同 設(shè)備的技術(shù)平臺(tái)進(jìn)行具體參數(shù)的選擇，它們對(duì)制劑的粒徑及粒度分布均會(huì)產(chǎn)生影響。例如，
介質(zhì)研磨法中，研磨的力度及研磨接觸點(diǎn)的數(shù)量是較為關(guān)鍵的參數(shù)；高壓均質(zhì)法中，循環(huán)的 次數(shù)和壓力是較為關(guān)鍵的參數(shù)。注入法中，分散方式、注入的速度及溫度是影響納米混懸液 質(zhì)量的主要參數(shù)。本發(fā)明中，優(yōu)選高壓均質(zhì)法和注入法來(lái)制備核黃素衍生物納米混懸液。
納米混懸液制備中一般加入穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑包括兩種， 一種是產(chǎn)生空間立體排斥 作用的非離子型表面活性劑，另一種是產(chǎn)生靜電排斥作用的離子型表面活性劑或一些大分 子電解質(zhì)。本發(fā)明中核黃素衍生物納米混懸液中的穩(wěn)定劑選自膽酸鹽、去氧膽酸鹽、磷脂、 多元醇酯類(lèi)表面活性劑、聚氧乙烯類(lèi)表面活性劑、聚乙二醇脂質(zhì)衍生物、多糖脂質(zhì)衍生物、 聚氨基酸脂質(zhì)衍生物、雙十六烷基磷脂酸。多元醇酯類(lèi)表面活性劑優(yōu)選的是失水山梨醇脂 肪酸酯，選自司盤(pán)60、司盤(pán)40、司盤(pán)20。聚氧乙烯類(lèi)表面活性劑選自聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段 共聚物(也稱泊洛沙姆)，聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪醇醚和聚氧乙烯脂肪醇酯，具體品種選 自泊洛沙姆P188、吐溫80、吐溫60、吐溫40、吐溫20及芐澤35。 若藥物易于水解或化學(xué)降解，或即使采用最好的穩(wěn)定劑仍不能使藥物納米混懸液 達(dá)到長(zhǎng)期穩(wěn)定時(shí)，可用冷凍干燥或者噴霧干燥將液體的納米混懸液固化成干粉，以提高物 理穩(wěn)定性和化學(xué)，臨用時(shí)以水再分散即可。但在固化過(guò)程中，溫度驟變可引起納米混懸液 的聚集結(jié)塊等現(xiàn)象發(fā)生，因此可通過(guò)處方的優(yōu)化，選擇適當(dāng)種類(lèi)和濃度的凍干保護(hù)劑；亦可 對(duì)噴霧干燥時(shí)添加的輔料、噴霧條件進(jìn)行優(yōu)化選擇，固化結(jié)束后還應(yīng)考察納米粒子的再分散性、粒徑的變化及Zeta電位的變化。本發(fā)明中核黃素衍生物納米混懸液的凍干或噴霧干 燥的保護(hù)劑選自乳糖、葡萄糖、海藻糖、甘露醇、水解明膠、甘氨酸、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮。 含核黃素衍生物的乳劑制備方法可參考相關(guān)文獻(xiàn)和專(zhuān)業(yè)技術(shù)(如陸彬主編.藥 物新劑型與新技術(shù).北京人民衛(wèi)生出版社，1998)。 一般地，需要添加乳化劑、油相，采用 各種乳化設(shè)備(如電動(dòng)攪拌器、膠體磨、超聲波乳化器、高速攪拌器、高壓乳勻機(jī))進(jìn)行分 散制得。選擇適當(dāng)處方后，乳劑還可以干燥形成干乳，臨用前配置重新形成乳劑。設(shè)計(jì)適 當(dāng)處方后，還可以制備得到自乳化系統(tǒng)(如Gursoy RN， et al. Self-emulsifying drug delivery systems(SEDDS)for improved oral delivery of lipophilic drugs. Biomed Pharmacother，2004，58 :173-182)。納米乳和微乳是較特殊的乳劑。納米乳的粒徑主要分 布在200nm以下；而微乳的粒徑主要分布在lOOnm以下。含核黃素衍生物的納米乳制備參 考相應(yīng)文獻(xiàn)(如Solans C， et al.Nano_emulsions.Curr Opin Colloidlnterface Sci， 2005,10:102-110)。含核黃素衍生物的微乳制備可以參考相應(yīng)文獻(xiàn)。 一般地，在微乳中包 括乳化齊U、助乳化齊U、助溶齊U、油相、水相、藥物。 一般在選擇合適的處方后，即可容易地形成 微乳。如果選擇合適的處方，一般包括乳化劑、助乳化劑、助溶劑、油相，還可以組成自微乳 化系統(tǒng)，在加入適量水溶液后，系統(tǒng)可以自行分散成微乳。選擇合適的處方和工藝就可以得 到較理想的含核黃素衍生物的乳劑。 含核黃素衍生物的膠束的制備可以參考文獻(xiàn)。聚合物膠束在本發(fā)明中作為優(yōu)選， 其制備方法參考相應(yīng)文獻(xiàn)(如Torchilin VP. Micellar nanocarriers-Pharmaceutical perspectives. Pharm Res，2007，24:1-16 ;Liu J， Lee H， Allen C.Formulation of Drugs in Block Copolymer Micelles :Drug Loading and Release. Curr Pharm Des，2006，12， 4685-4701)，一般地包括透析法、乳化法、薄膜分散法。選擇合適的處方和工藝就可以得到 較理想的含核黃素衍生物的膠束。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1.核黃素硬J旨酸四酯納米乳的制備 取核黃素硬脂酸四酯(75mg)溶于5ml精制植物油/四氫呋喃的復(fù)合溶媒中，按照 加入約10mg吐溫80和1ml丙二醇，加熱攪拌使成溶液態(tài)，在高速攪拌條件下，在上述溶液 中緩慢滴加水，期間不停攪拌，直至得到半透明帶黃色微乳光的液體。粒度測(cè)定結(jié)果大部分 粒子粒徑在150nm以下，上述液體即為含核黃素硬脂酸四酯的納米乳。
實(shí)施例2.核黃素月掛酸三酯fl旨質(zhì)體的制備 取核黃素月桂酸三酯(75mg)、卵磷脂(150mg)及膽固醇(50mg)，三者共同溶解于 乙醚中作為有機(jī)相，另將磷酸鹽緩沖液(PBS)適量置燒杯中6(TC恒溫?cái)嚢瑁瑫r(shí)將上述有 機(jī)相的溶液勻速滴加至高速攪拌狀態(tài)下的PBS緩沖溶液中，滴加完畢后繼續(xù)攪拌lh以揮盡 乙醚，將PBS加至處方量后混合均勻，然后于高壓均質(zhì)機(jī)上一定壓力下循環(huán)均質(zhì)3次，過(guò)濾 得到黃色乳狀溶液。粒度測(cè)定結(jié)果表明大部分脂質(zhì)體粒徑在500 800nm之間，即得核黃 素月桂酸三酯脂質(zhì)體。 實(shí)施例3.核黃素磷酸酯固體fl旨質(zhì)納米粒的制備 取核黃素磷酸酯(75mg)，分散于熔融狀態(tài)下的大豆磷脂和三硬脂酸甘油酯中，在攪拌下加入含有泊洛沙姆188和丙二醇并且溫度略高于上述熔融物的水溶液制備成初乳， 在相同溫度的條件下于高壓均質(zhì)機(jī)上一定壓力下循環(huán)均質(zhì)3次，迅速冷卻，加入凍干保護(hù) 劑甘露醇冷凍干燥后得黃色粉末。粒度測(cè)定結(jié)果表明大部分粒子粒徑在200nm以下，即為 核黃素磷酸酯固態(tài)脂質(zhì)納米粒。
輔仿".禾緒m翩,酉鵬細(xì)燃 取核黃素棕櫚酸單酯(75mg)溶解于5ml 二氯甲烷/四氫呋喃的復(fù)合溶媒中，將此 溶液緩緩滴入高速攪拌狀態(tài)下并含有適量聚乙烯醇及泊洛沙姆188的水溶液中，形成穩(wěn)定 的初乳溶液，再將初乳溶液減壓蒸發(fā)揮盡有機(jī)溶劑并再次進(jìn)行超聲分散，得到黃色乳狀液。 粒度測(cè)定結(jié)果表明大部分粒子粒徑在lOOnm以下，上述乳狀液即為核黃素棕櫚酸單酯的聚 合物膠束。 輔你15.禾緒m服if輔薩白勺燃 取核黃素月桂酸單酯(75mg)、聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA) (0. 5g)溶于5ml 二 氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(DMF)復(fù)合溶媒中，加入3%的聚乙烯醇(PVA)水溶液(20ml)， 高速攪拌成乳液，移至30ml的3% PVA水溶液中，室溫下攪拌4小時(shí)，揮盡二氯甲烷，固化微 球。離心微球混懸液，所得微球以蒸餾水洗滌3次，加入適量甘露醇，冷凍干燥，即得到桔黃 色粉末。少量水分散后，顯微鏡下觀察到3 7微米的圓整微球，即為核黃素月桂酸單酯微 球。 實(shí)施例6.核黃素月掛酸二酯表g活件劑泡囊的制備 取核黃素月桂酸二酯(75mg)，溶解于含有司盤(pán)60(150mg)的的二氯甲烷/四氫呋 喃的復(fù)合溶媒中，置于100ml圓底燒瓶中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮盡有機(jī)溶劑，直至瓶壁上形成一 層干膜，加入少量PBS，超聲處理至瓶壁上的干膜脫落并分散成均勻半透明黃色溶液。粒度 測(cè)定結(jié)果表明，粒子的粒徑在500nm以下，上述溶液即為核黃素月桂酸二酯的表面活性劑 泡囊。 實(shí)施例7.核黃素月掛酸單酯納米混懸液的制備 取核黃素月桂酸單酯(75mg)，泊洛沙姆P188 (25mg)，溶于5ml DMF中，作為有機(jī) 相，注射用水作為水相，用注入法將有機(jī)相注入到水相中，得到黃色乳狀液，將此乳狀液經(jīng) 透析除去DMF，濃縮，粒度測(cè)定結(jié)果表明粒子粒徑在150 300nm之間，即得到核黃素月桂酸 單酯納米混懸液。


圖1.核黃素月桂酸單酯納米混懸液的透射電鏡照片
10
權(quán)利要求
一種含核黃素衍生物的高度分散制劑。
2. 如權(quán)利要求1的含核黃素衍生物的高度分散制劑，其中核黃素衍生物指的是核黃素 酯類(lèi)衍生物。
3. 如權(quán)利要求1的含核黃素衍生物的高度分散制劑，其中核黃素衍生物指的是核黃素 脂肪酸單酯。
4. 如權(quán)利要求1的含核黃素衍生物的高度分散制劑，其中核黃素衍生物指的是核黃素 月桂酸單酯。
5. 如權(quán)利要求l的含核黃素衍生物的高度分散制劑，其中核黃素衍生物指的是核黃 素-5'-月桂酸單酯。
6. 如權(quán)利要求l的含核黃素衍生物的高度分散制劑，選自脂質(zhì)體、非離子表面活性劑 泡囊、微粒、納米粒、納米混懸液、乳劑、膠束。
7. 如權(quán)利要求l的含核黃素衍生物的高度分散制劑，選自納米粒、納米混懸液、乳劑。
8. 如權(quán)利要求l的含核黃素衍生物的高度分散制劑，選自納米混懸液。
9. 如權(quán)利要求1的含核黃素衍生物的高度分散制劑，其中粒子直徑小于100微米。
10. 如權(quán)利要求1的含核黃素衍生物的高度分散制劑，其中粒子直徑小于1微米。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種含核黃素衍生物的高度分散制劑，選自脂質(zhì)體、非離子表面活性劑泡囊、微粒、納米粒、納米混懸液、乳劑、膠束。核黃素衍生物可作為一種前藥，用于防治人體核黃素缺乏，其高度分散制劑有提高制劑穩(wěn)定性、促吸收、增強(qiáng)生物利用度、靶向、緩釋、控釋、增強(qiáng)患者順應(yīng)性等作用。
文檔編號(hào)A61P9/00GK101708153SQ20081022348
公開(kāi)日2010年5月19日 申請(qǐng)日期2008年10月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月6日
發(fā)明者徐琪壽, 李廣龍, 杜麗娜, 金義光 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所