專利名稱：人轉(zhuǎn)錄共激活因子pc4在制備診斷、治療或預(yù)防腫瘤的制劑中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4的應(yīng)用，尤其是人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4 在制備診斷、治療或預(yù)防腫瘤的制劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是嚴重威脅人類健康和生命的重大疾病。腫瘤危害的關(guān)鍵在于其 侵襲性生長和廣泛轉(zhuǎn)移。正常人體細胞的功能受到基因的調(diào)控，腫瘤相關(guān)基因 的發(fā)現(xiàn)為腫瘤的診斷提供了重要途徑。目前盡管發(fā)現(xiàn)了眾多基因與腫瘤有關(guān)， 但這些基因缺乏腫瘤細胞組織特異性，特別是對腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生的預(yù)警尚缺乏有 效的分子標志。對多數(shù)腫瘤尚缺乏特異性的早期診斷方法和有效的治療措施。
骨轉(zhuǎn)移是前列腺癌、乳腺癌、肺癌等多種惡性腫瘤經(jīng)過手術(shù)、放療或化療 等現(xiàn)有措施治療后腫瘤再次復(fù)發(fā)?？砂l(fā)生的轉(zhuǎn)移類型，是造成腫瘤患者死亡的 主要原因之一。據(jù)統(tǒng)計，在美國2/3以上的因癌癥死亡的病例是骨轉(zhuǎn)移。腫瘤發(fā) 生骨轉(zhuǎn)移后，對已有治療措施(如激素治療、放療、化療等)均無反應(yīng)。目前 對惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移發(fā)生的分子機制尚未闡明，尚無有效的診斷和治療手段，亟 需在分子水平尋找診斷和治療的新靶標。
人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4 (transcriptional coactivatorPC4)是參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào) 控過程的一個輔助激活因子，持續(xù)外源性過表達PC4基因可誘導(dǎo)間充質(zhì)干細胞 形態(tài)發(fā)生改變，表現(xiàn)為細胞增殖速度加快，并成復(fù)層生長；將轉(zhuǎn)染PC4基因的 多能干細胞移植給裸鼠皮下，可形成纖維組織細胞瘤，上述結(jié)果表明PC4基因 具有致癌基因的特性(程天民，史春夢,粟永萍,宗兆文.成體干細胞在體外培養(yǎng)擴 增中的自發(fā)惡性轉(zhuǎn)化.中華醫(yī)學(xué)雜志，2005,85(27):1883-1884; Shi C, ChengT, Su Y Molecular alterations of dermis-derived multipotent stem cells after spontaneous and malignant transformation in vitro. Journal of Tumor Marker Oncology, 2004; 19(S4):
23; Shi C， Zhu Y, Chung LW， Su Y， Cheng T. PC4 is a novel oncogenic gene for mesenchymal stem cell transformation and mediates the reciprocal actions between mesenchymal stem cells and prostate cancer cells. Experimental Hematology. 36 (Suppl.l): S82-83，2008.)但目前對PC4的生物學(xué)意義尚不清楚。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明人研究了人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4在臨床腫瘤組織中的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4基因在肺癌、乳腺癌、前列腺癌等多種人類腫瘤組織中 均高表達，而在正常組織中，幾乎檢測不到人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4蛋白表達； 進而發(fā)現(xiàn)，人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4的表達隨腫瘤的惡性程度增加而增強，在轉(zhuǎn) 移癌中表達最高，揭示人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4的高表達與臨床腫瘤進展具有相 關(guān)性。在發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的腫瘤組織中表達最高，并可以調(diào)控腫瘤細胞骨轉(zhuǎn)移；通 過從腫瘤組織基因文庫中分離擴增人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4基因并進行核苷酸序 列分析，發(fā)現(xiàn)人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4基因在腫瘤組織中沒有發(fā)生突變。因此， 人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4基因可用于多種腫瘤的檢測標志基因，特別是可作為晚 期腫瘤骨轉(zhuǎn)移腫瘤的預(yù)警的標志分子。
本發(fā)明的目的是提供人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4在制備診斷、治療或預(yù)防腫瘤的 制劑中的應(yīng)用。
本發(fā)明的優(yōu)選實施例中，所述人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4在制備診斷、治療或預(yù) 防腫瘤制劑為診斷、治療或預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的制劑；例如具體為診斷、治 療或預(yù)防腫瘤骨轉(zhuǎn)移的制劑。
本發(fā)明的另一優(yōu)選實施例中，所述診斷、治療或預(yù)防腫瘤的制劑為診斷、 治療或預(yù)防干細胞惡性轉(zhuǎn)化的制劑。
本發(fā)明所述的診斷、治療或預(yù)防腫瘤的制劑包括診斷、治療或預(yù)防前列腺 癌、乳腺癌或肺癌的制劑。
本發(fā)明所述的人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4具有如SEQ ID NO:l所示的氨基酸序 列，或缺失、替換或插入一個或多個氨基酸后的仍具有所述SEQIDNO:l所示的
氨基酸序列活性的氨基酸序列。
本發(fā)明所述的編碼所述人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4的核苷酸序列如SEQ ID NO:2的核苷酸序列所示或其中具有一個或多個核苷酸的取代、缺失或插入變異 后仍具有所述SEQIDNO:2編碼功能的核苷酸序列。
本發(fā)明旨在提供PC4基因制備診斷、治療或預(yù)防腫瘤制劑中的應(yīng)用。通過 PC4基因的表達檢測，PC4基因mRNA和蛋白的表達豐度與多種人類惡性腫瘤 (包括前列腺癌、乳腺癌、肺癌、)相關(guān)，在腫瘤組織中表達增強，而在正常組 織中表達很少，甚至不表達；特別是PC4基因的表達與上述腫瘤的病程進展階 段具有相關(guān)性，在早期、晚期腫瘤和發(fā)生轉(zhuǎn)移的腫瘤中表達依次增強。因此， 該基因可用于多種腫瘤的診斷標志基因，特別是可作為晚期腫瘤的判斷和轉(zhuǎn)移 腫瘤的預(yù)警的標志分子。PC4基因的過表達可以促進腫瘤細胞惡性行為的發(fā)展， 而下調(diào)或阻斷PC4基因，可抑制腫瘤的生長。因此，PC4基因可應(yīng)用于多種腫 瘤早期診斷的一個廣譜標志基因，特別是可作為腫瘤晚期發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的預(yù)警分 子；同時也可作為腫瘤基因治療的耙基因。
本發(fā)明的主要優(yōu)點在于本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了該腫瘤相關(guān)基因PC4對多種人 類腫瘤均具有診斷價值，并可根據(jù)表達強度區(qū)分腫瘤的惡性程度，填補了檢測 的盲區(qū)；特別是，該基因還可對原發(fā)腫瘤經(jīng)過治療后發(fā)生的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移進行預(yù) 警和診斷；而且該基因還可作為腫瘤治療的新耙點。
為讓本發(fā)明的上述和其它目的、特征和優(yōu)點能更明顯易懂，下文特舉較佳 實施例，并配合附圖，作詳細說明如下。


圖1 A和圖1B分別表示PC4蛋白在惡性程度低的LNCaP和惡性程度高的C4-2 人腫瘤細胞中的表達；
圖2A表示PC4蛋白在人正常前列腺組織中的表達；
圖2B表示PC4蛋白在人高分化前列腺癌中的表達；
圖2C表示PC4蛋白在人低分化前列腺癌中的表達； 圖2D表示PC4蛋白在人前列腺癌骨轉(zhuǎn)移中的表達； 圖3A表示PC4蛋白在人正常乳腺組織中的表達； 圖3B表示PC4蛋白在人高分化乳腺癌中的表達； 圖3C表示PC4蛋白在人低分化乳腺癌中的表達； 圖3D表示PC4蛋白在人乳腺癌骨轉(zhuǎn)移中的表達；
圖4A和4B，分別表示空載體對照組(無PC4基因表達)和PC4基因轉(zhuǎn)染 組(PC4基因高表達)對人腫瘤細胞C4-2在裸鼠體內(nèi)惡性生長行為的影響。
圖5A和圖5B，分別表示對照組的和處理組的siRNA技術(shù)阻斷PC4基因表 達誘導(dǎo)腫瘤細胞TDMC凋亡。
具體實施例方式
下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說 明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方 法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。
除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟 悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于 本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。
定義
PC4基因的核酸
如本發(fā)明所用，術(shù)語"本發(fā)明的腫瘤相關(guān)基因"指在腫瘤中表達上調(diào)的PC4;
術(shù)語"本發(fā)明的腫瘤相關(guān)蛋白"指在腫瘤中表達上調(diào)的PC4蛋白。本發(fā)明所指
的PC4蛋白具有SEQ IDNO:l所示的氨基酸序列，編碼PC4的基因具有SEQ ID
NO:2所示的核苷酸序列。本發(fā)明所用的PC4多核苷酸序列是人的PC4多核苷
酸序列，是由GEH等人首先克隆出來的(GeH, RoederRG. Purification, cloning, and characterization of a human coactivator, PC4， that mediates transcriptional
6activation of class II genes. Cell. 1994;78(3) :513-23.)，本發(fā)明所用的PC4基因 可以是DNA或RNA形式。PC4基因可以是SEQ ID NO:2中的部分或全部序列， 或其中具有一個或多個核苷酸的取代、缺失或插入變異后仍具有所述SEQ ID NO:2編碼功能的核苷酸序列，或各種與人PC4基因同源性大于60%的同源物。
PC4蛋白和抗體
基于本發(fā)明所揭示的腫瘤相關(guān)基因PC4的序列信息，利用本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù) 來產(chǎn)生腫瘤相關(guān)蛋白或片段以及利用相應(yīng)的蛋白或片段來產(chǎn)生抗PC4的抗體。
(GeH， Roeder RG. Purification, cloning, and characterization of a human coactivator: PC4，that mediates transcriptional activation of class II genes. Cell. 1994:78(3) :513-23.;黃培堂等譯《分子克隆實驗指南》，科學(xué)技術(shù)出版社，2002 年8月，第3版。)
本發(fā)明的PC4基因的核苷酸全長序列或其片段通?？梢杂肞CR擴增法、重 組法或人工合成的方法獲得。對于PCR擴增法，可根據(jù)公開的有關(guān)核苷酸序列 設(shè)計引物，并用市售或cDNA庫本領(lǐng)域技術(shù)人員己知的常規(guī)方法制備的cDNA 作為模板，擴增而獲得有關(guān)序列。 一旦獲得序列，可用重組法大量制備。通常 是將其克隆到載體，再轉(zhuǎn)入細胞，然后通過常規(guī)方法分離獲得。此外，還可通 過人工合成的方法制備有關(guān)序列。
本發(fā)明蛋白的片段除了可用重組方法產(chǎn)生外，還可通過直接化學(xué)合成而制 備。在體外合成肽可用手工或自動進行。另一方面，本發(fā)明還包括對PC4基因 或其片段編碼的多肽具有特異性的多克隆或單克隆抗體。不僅包括完整的抗體， 還包括具有免疫活性的抗體片段。本發(fā)明的抗體或片段可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人 員已知的各種技術(shù)進行制備。本發(fā)明的抗體包括能阻斷PC4基因功能的抗體以 及不影響PC4基因功能的抗體。
檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明還提供了檢測腫瘤的方法，通過檢測PC4在待測組織或細胞中基因 或蛋白的表達，觀察PC4表達是否高于正常對照，其中高于正常對照表示該個體患有腫瘤或腫瘤易感性高于正常人群。對于原法腫瘤已經(jīng)過常規(guī)治療(主要
指手術(shù)切除、放療和化療等)的患者通過檢測待測組織中PC4蛋白或基因的表 達，如果PC4基因的表達高于正常對照，表明該患者可能發(fā)生了復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。 用于檢測某一基因在待測細胞或組織中的表達的方法是本領(lǐng)域已知的，代表性 的例子，包括Northern雜交、定量和半定量PCR (RT-PCR)、 DNA芯片檢測 法、蛋白質(zhì)芯片檢測法、抗原-抗體檢測法(如免疫組織化學(xué)法、western blot和 ELISA法)。此外，也可以使用原位雜交法。上述方法都可適用于本發(fā)明。相關(guān) 儀器和設(shè)備可以購自Sigma等公司。
試劑盒
本發(fā)明還提供了診斷PC4基因異常的診斷試劑盒。在優(yōu)選例中，試劑盒包 括針對PC4基因的探針。該試劑盒還可含有封閉探針以及描述如何使用試劑盒 來檢測PC4基因的說明材料。試劑盒還可含有下組中的一種或多種用于協(xié)助 探針檢測的各種標記物或標記試劑；用于雜交的試劑；以及陽性和陰性雜交對 照等。
另一種優(yōu)選的檢測腫瘤易感性和復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的試劑盒包括特異性擴增PC4 基因的引物和說明書。
另一種優(yōu)選的檢測腫瘤易感性和復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的試劑盒包括特異性結(jié)合PC4 基因表達產(chǎn)物的抗體和說明書。
實施例1 PC4蛋白在人腫瘤細胞和組織中的表達 材料與方法
將PC4的cDNA通過內(nèi)切酶處理克隆入真核表達載體，制備出 pcDNA3.0-PC4重組質(zhì)粒(Ge H, Roeder RG. Purification, cloning, and characterization of a human coactivator, PC4， that mediates transcriptional activation of class II genes. Cell. 1994;78(3):513國23)。
人腫瘤細胞模型選用國際上公認并廣泛應(yīng)用的代表性低惡性程度前列腺癌 細胞株LNCaP和由LNCaP來源的惡性程度高的C4-2細胞開展研究(購買自美 國ATCC)。
PC4抗體購買自美國Santa Cruz Biotechnology公司。采用免疫組化SABC法檢 測PC4蛋白在細胞和組織中的表達， 一抗工作濃度為1 : 100，室溫孵育2h ，其 余操作按照常規(guī)方法進行(Zhu G Zhau HE, He H, Zhang L, Shehata B， Wang X， Cerwinka WH， Elmore J， He D. Sonic and desert hedgehog signaling in human fetal prostate development. Prostate. 2007;67(6):674-84.)。
結(jié)果如圖1A、 1B所示，分別表示PC4蛋白在惡性程度低的LNCaP和惡 性程度高的C4-2人腫瘤細胞中的表達；PC4蛋白在惡性程度低的LNCaP細胞 中PC4基因表達很低，而在其來源的惡性程度高的C4-2細胞中表達顯著增強。 這一結(jié)果與mRNA水平檢測結(jié)果一致。進一步檢測了 PC4在人腫瘤組織標本中 的表達，選擇不同病程階段的前列腺癌和乳腺癌腫瘤樣本，進行免役組織化學(xué) 染色。結(jié)果顯示在正常前列腺和乳腺組織中，幾乎檢測不到PC4蛋白表達， 在惡性程度低的高分化腫瘤組織中低表達，在惡性程度高的低分化腫瘤組織中 表達增高，而在發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的腫瘤組織中，表達進一步增高(圖2A、 2B、 2C、 2D， 3A、 3B、 3C、 3D)。這一結(jié)果在臨床腫瘤組織水平首次發(fā)現(xiàn)，PC4基因與 人腫瘤病程進展具有一定相關(guān)性。
實施例二 PC4基因過表達促進腫瘤細胞生長
材料與方法PC4全長基因真核重組表達載體的構(gòu)建按照常規(guī)方法參照文 獻進行(Cell. 1994;78(3):513-23.) (PCDNA3.0)，通過電轉(zhuǎn)移法進行基因轉(zhuǎn)染。 腫瘤細胞選用C4-2人前列腺癌細胞。在轉(zhuǎn)染前一天，把C4-2細胞培養(yǎng)到六孔 板內(nèi)，使第二天細胞能達到約70-80%滿。然后把六孔板每孔內(nèi)換成新鮮的細胞 培養(yǎng)液。培養(yǎng)液,的體積約為2ml左右，可以含有血清和抗生素。把Lipotap脂質(zhì) 體轉(zhuǎn)染試劑輕輕混勻。按照試劑說明書的要求，對于待轉(zhuǎn)染的六孔板中一個孔 的細胞，在一潔凈無菌離心管內(nèi)依次加入適量不含抗生素和glutamine的DMEM 溶液，15微升Lipotap，及2.5微克DNA，使最終體積為75微升，用槍輕輕吹 打混勻。25 °C孵育15分鐘。細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3-6小時后，去除含有Lipotap-DNA 的培養(yǎng)液。每孔加入2ml新鮮細胞培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。對照細胞轉(zhuǎn)染空載體，不
含有PC4目的基因。在轉(zhuǎn)染后48小時加入篩選藥物G418，進行穩(wěn)定表達細胞 株的篩選。將篩選的細胞克隆進行鑒定，獲得穩(wěn)定高表達PC4的基因細胞克隆 和含有空載體的對照細胞克隆，進行大量培養(yǎng)。將培養(yǎng)后的兩組細胞以相同的 細胞數(shù)量接種裸鼠兩側(cè)脛骨內(nèi)，每只脛骨接種1000000個細胞，觀察腫瘤生長 情況。
結(jié)果如圖4A和4B所示，細胞接種8周后，高表達PC4基因的C4-2細 胞在裸鼠體內(nèi)的生長速度顯著高于空載體對照組，表明PC4基因可誘導(dǎo)腫瘤細 胞的惡性行為增加。
實施例三RNA干擾PC4基因表達抑制腫瘤細胞生長
材料與方法選用高表達PC4的腫瘤細胞系TDMC開展研究(In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2007;43(8-9):290-6.)。 PC4特異性siRNA購買自Santa Cruz Biotechnology公司。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine2000購買自Invitrogen公司。 按照Lipofectamine2000操作說明進行siRNA轉(zhuǎn)染實驗，于轉(zhuǎn)染后3天，觀察細 胞形態(tài)的改變。
結(jié)果見圖5A和圖5B，分別表示對照組的和處理組的siRNA技術(shù)阻斷 PC4基因表達誘導(dǎo)腫瘤細胞TDMC調(diào)亡。應(yīng)用PC4序列特異性siRNA (購自美 國Santa Cruz公司)作用于TDMC，發(fā)現(xiàn)阻斷或下調(diào)PC4蛋白的表達，可誘導(dǎo) 腫瘤細胞形態(tài)發(fā)生改變，發(fā)生凋亡，表明通過下調(diào)或阻斷PC4基因可能是抑制 腫瘤細胞增殖和誘導(dǎo)細胞調(diào)亡的新的耙分子，在腫瘤治療中具有重要意義。
本發(fā)明應(yīng)用PC4特異性siRNA (購自美國Santa Cruz公司)作用于間充質(zhì) 干細胞，發(fā)現(xiàn)阻斷或下調(diào)PC4蛋白的表達，可誘導(dǎo)腫瘤細胞形態(tài)發(fā)生改變，發(fā) 生凋亡，并具有量效關(guān)系，lug/ml中和多肽作用3天可誘導(dǎo)幾乎全部細胞發(fā)生 凋亡，隨劑量增大，誘導(dǎo)時間也相應(yīng)減少；機制研究揭示，siRNA可通過激活 caspase9， 3和PARP信號途徑而促進細胞凋亡；上述結(jié)果表明，PC4對腫瘤生 長的調(diào)控作用，該基因也可用于腫瘤治療的新耙點。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并非用以限定本發(fā)明的實質(zhì)技術(shù) 內(nèi)容范圍，本發(fā)明的實質(zhì)技術(shù)內(nèi)容是廣義地定義于申請的權(quán)利要求范圍中，任
何他人完成的技術(shù)實體或方法，若是與申請的權(quán)利要求范圍所定義的完全相同， 也或是一種等效的變更，均將被視為涵蓋于該權(quán)利要求范圍之中。
序列表
〈110>中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)
<120>人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4在制備診斷、治療或預(yù)防腫瘤的制劑中的應(yīng)用
〈130〉
<腦> 2
〈170〉 Patentln version 3. 2
<210〉 1
〈211> 127
〈212〉 PRT <213〉人轉(zhuǎn)錄共激活l
<400〉 1
Met Pro Lys Ser Lys 1 5 Ser Asp Ser Glu Val 20
Pro Glu Lys Pro Val 35
Leu Ser Ser Ser Lys 50
Gin lie Gly Lys Met 65
Val Leu lie Asp lie 85
Lys Pro Gly Arg Lys 100
Leu Lys Glu Gin lie 115
〈210〉 2 <211> 1336 〈212〉 ■
〈213〉人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4基因核苷酸序列
<400> 2
gtcagtcgcg鄉(xiāng)g肌cgaccaagagggtgttcgactgct卿gccgagcg卿cgatgc60
ctaaatcaaagg38Cttgtttcttcaggctcttctggcagtgattctgac兆tgaggttg120
aagcaagttgacctgtaaag180
caggtg卿cttcgagagccctgtcatcttcagcagcagc240
acatgtttcag3ttggga犯atg鄉(xiāng)tacgttagtgttcgcgatttt犯aggc咖gtgc300
taattgatattagagaatattgg3tgg3tCCtg卿gtg3aatgaaaccagg犯ga肌3g360
gtatttctttcaatggagcc3gCtg卿g3acagatttctg3C3ttgatg420
aattcgagccatataaataa犯cctgtactgttctagttg480
12
因子PC4氨基酸序列
Glu
Asp
Lys
Gin
Arg
70
Arg
Gly
Ser
Leu
Lys
Lys
Ser
55
Tyr
Glu
lie
Asp
Val
Lys
Gin
40
Ser
Val
Tyr
Ser
lie 120
Ser
Leu
25
Lys
Ser
Ser
Trp
Leu 105 Asp
Ser
10
Lys
Thr
Ser
Val
Met
90
Asn
Asp
Gly
Arg
Gly
Arg
Arg
75
Asp
Pro
Ala
Ser Ser
Lys Lys
Glu Thr
45 Asp Asp 60
Asp Phe
Pro Glu
Glu Gin
Val Arg 125
Gly Ser Asp 15
Gin Val Ala 30
Ser Arg Ala
Asn Met Phe
Lys Gly Lys 80
Gly Glu Met 95
Trp Ser Gin 110
Lys Leu
ttttaatctg tctttttaca ttagcttttg tttggattgc agaag肌ttt gtaagatgaa attgagtgaa gctaattgtc aactttatta taaaataaaa tcaagtaata caatcttaac gtactgttta aggccaaaag taacagtttt ac幼t犯aaa ggatttgtat tgcsttgagt ttgatctttt ctcttccaat caaatgtcta ttcactcttt ttatttactt cattttcctt tacttcactc tttattcttt tctttgatta tgtc犯肌tg ttatctc犯t a^gatactts attcaatatt agcagatcta atttgataaa gtttgtttac ccatagtgtt ctgtgtagtt gatgagatgt ctgacttgct ttcacttatt acatcagata ttgttcaact agactaggat
ttttctaaatgttctccaagctattgtatg540
tacttttttttaatgtgcat600
aggattactttgtctgcccaccacctagtg660
tgttgtggccttttttgatcat冊g3gttg720
tatagatcttttagtttcaactcagctttt780
ttat犯acttttggtttgtgaacttcatat840
ggcttgtttgacttccaccccc犯tggttt900
taataacttaatctcttcatgttcagtttt960
tggtatgcttatttggaaagtcagtgaaac1020
tatgag肌ctacaatcaccgaatctactgt1080
caacatggcttgtgtg犯犯ctgagcaggt1140
attgcttagtctgcag肌犯t幼tg3Ctt31200
aaeicatgttc3CC3tggg3tg￡ltgtCtgt3函
ttaataaaaattgtgaaagctt肌犯aaaa1320 133權(quán)利要求
1. 人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4在制備診斷、治療或預(yù)防腫瘤的制劑中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4在制備診斷、治療或預(yù)防腫 瘤制劑中的應(yīng)用，其特征在于所述診斷、治療或預(yù)防腫瘤的制劑為診斷、治療 或預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的制劑。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4在制備診斷、治療或預(yù)防腫 瘤制劑中的應(yīng)用，其特征在于所述診斷、治療或預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的制劑為 診斷、治療或預(yù)防腫瘤骨轉(zhuǎn)移的制劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4在制備診斷、治療或預(yù)防腫 瘤的制劑中的應(yīng)用，其特征在于所述診斷、治療或預(yù)防腫瘤的制劑為診斷、治 療或預(yù)防干細胞惡性轉(zhuǎn)化的制劑。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4在制備診斷、治療 或預(yù)防腫瘤制劑中的應(yīng)用，其特征在于所述診斷、治療或預(yù)防腫瘤的制劑包括 診斷、治療或預(yù)防前列腺癌、乳腺癌或肺癌的制劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4在制備診斷、治療或預(yù)防腫 瘤的制劑中的應(yīng)用，其特征在于所述的人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4具有如SEQ ID NO:l所示的氨基酸序列，或缺失、替換或插入一個或多個氨基酸后的仍具有所 述SEQIDNO:l所示的氨基酸序列活性的氨基酸序列。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4在制備診斷、治療或預(yù)防腫 瘤的制劑中的應(yīng)用，其特征在于編碼所述人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4的核苷酸序列如 SEQIDNO:2的核苷酸序列所示或其中具有一個或多個核苷酸的取代、缺失或插 入變異后仍具有所述SEQ ID NO:2編碼功能的核苷酸序列。
全文摘要
本發(fā)明涉及人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4在制備診斷、治療或預(yù)防腫瘤的制劑中的應(yīng)用，具體地，所述診斷、治療或預(yù)防腫瘤的制劑為診斷、治療或預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的制劑或診斷、治療或預(yù)防干細胞惡性轉(zhuǎn)化的制劑，本發(fā)明所述診斷、治療或預(yù)防腫瘤的制劑包括診斷、治療或預(yù)防前列腺癌、乳腺癌或肺癌的制劑。本發(fā)明結(jié)果表明人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4基因在肺癌、乳腺癌、前列腺癌等多種人類腫瘤組織中均高表達，人轉(zhuǎn)錄共激活因子PC4基因可用于多種腫瘤的檢測標志基因，特別是可作為晚期腫瘤骨轉(zhuǎn)移腫瘤的預(yù)警的標志分子。
文檔編號A61P35/00GK101377487SQ20081007028
公開日2009年3月4日 申請日期2008年9月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月11日
發(fā)明者冉新澤, 史春夢, 超 張, 毅 彭, 穎 朱, 王少軍, 程天民, 粟永萍 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)