專利名稱：：用于預防和治療牙周病、改善牙周創(chuàng)傷愈合以及促進口腔健康的新藥物靶標的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于預防、防止和/或治療感染性牙周病(例如牙齦炎和牙周炎)以及影響牙齦組織的壞死性病癥的化合物和方法，還涉及一般性促進口腔健康，并且還涉及改善局部牙周創(chuàng)傷(例如手術(shù)創(chuàng)傷)的愈合。特別的，本發(fā)明涉及用于預防和治療感染性牙周病、促進口腔健康和改善牙周創(chuàng)傷愈合的新方法。
背景技術(shù)：
：牙周病牙周病是一種影響支持并固定牙齒的組織(又稱為牙周)的慢性炎性疾病。它是由于特定牙齦下微生物與宿主免疫和炎性應(yīng)答之間不平衡的相互作用引起的(1)。它影響幾乎四分之三的成年A^體，并且被認為是人類最常見的疾病之一。涉及牙周病的組織是牙床(gum)，其包括牙齦(gingiva)、牙周韌帶、牙骨質(zhì)和牙槽骨(圖1)。牙齦(gingiva)是覆蓋牙一部分以及牙槽骨一部分的粉紅色角質(zhì)化黏膜。牙周韌帶是牙床的主要部分。牙骨質(zhì)^i覆蓋牙下部的鈣化結(jié)構(gòu)。牙槽骨^1頜骨(上頜和下頜)的一系列突起，牙齒就嵌于其中。牙周病起始的區(qū)域是牙齒和牙床之間的袋-牙齦溝。感染、炎癥和隨后的宿主防御及創(chuàng)傷愈合都是牙周病的標志。此疾病開始于圍繞牙齒的牙齦中的多種細菌感染(2)。在健康口腔中，已發(fā)現(xiàn)了超過500種微生物。在牙周病中，已經(jīng)研究了幾種潛在的牙周病病原體，其包括牙齦p卜啉單胞菌(/^/7;AjT0/1i("flsg/"g/vfl/i's)、直腸彎曲桿菌(Ca附/^/o6fl"")、伴放線放線軒菌(y4",Vio6fl"7/MS"cftVi0附ccte附co挑iY"ws)和具核梭軒菌(F"s^6acten'M附/fi/c/cflfti附),其被認為代表了大部分的病原微生物。這些微生物可在宿主細胞中誘導多種因子，例如IL-1、IL-6、TNF以及酶，其被認為直接或間接地造成不可逆的組織破壞，包括牙床、牙槽骨、牙根外層的破壞以及最終導致牙齒缺失。另外，嚴重牙周病可導致呼吸變差、心臟病和中風、糖尿病、呼吸疾病和懷孕期間早產(chǎn)。還有其它的病因，例如吸煙/使用煙草、遺傳、懷孕和青春期、壓力、藥物、糖尿病、營養(yǎng)不良以及其它的全身性疾病。另一種形式的牙槽骨感染性破壞(即種植體周圍炎(Periimplantitis))非常類似于牙周炎，其可發(fā)生于將異質(zhì)材料手術(shù)M到頜中之后。此^方法常被稱為骨結(jié)合(3)，其需要所述異質(zhì)材料(即牙種植體，常由鈦制成)與活骨之間的緊密接觸。此方法用于在喪失天然牙之后恢復咬合，目前是治療無牙癥(edentulism)的標準方法。骨結(jié)合牙種植體和天然牙之間的主要區(qū)別是種植體周圍缺少真正的牙周組織。正常牙齒是懸在允許牙齒在牙槽骨中生理性移動的膠原性纖維網(wǎng)絡(luò)中，而牙^物則牢固地與骨相連接而不沒有軟組織介入。盡管存在與骨組織連接上的此主要差異，但是在感染過程中牙和植入物的病理改變的許多關(guān)鍵特征是一樣的，例如通過生物膜形成和定殖的感染、炎癥應(yīng)答以及免疫防御。因此，種植體周圍炎是一種在功能上影響骨結(jié)合^物周圍組織的炎癥/感染性過程，其導致支持骨的喪失。種植體周圍炎可導致完全的脫落和^物喪失，即使在已經(jīng)進行了大量針對解決種植牙周感染的治療的情況下。種植體周圍炎還隨種植體周圍軟組織的可逆性炎性/感染性改變但沒有任何骨喪失的情形下發(fā)生。已報道軟組織中種植體周圍炎的發(fā)病率是8-44%,而骨中種植體周圍炎的發(fā)生率則是1-19%。發(fā)病率的廣泛性至少在部分上是由于在實體限定上的差異。種植體周圍炎的發(fā)病率最可能與^UV物的已M年數(shù)相關(guān)。因為牙#^物治療引入的相對較晚，所以其數(shù)量可能會隨著年數(shù)增加?？紤]到對牙和牙植入物感染的炎癥應(yīng)答和免疫防御的相似性很大，可以將種植體周圍炎看作是影響^異質(zhì)材料的一種牙周病形式。牙周病是口腔整體健康的一個重要方面?？谇唤】抵缚谇?M目關(guān)組織的健康狀況，其使得個體能夠在沒有活動性疾病、不適或馗搶的情況下進食、說話和社交，這有助于總體的健康狀況?？谇唤】档闹饕獦酥景ㄍ僖汉脱来步M織中的細菌菌群以及牙床組織中的組織壞死和炎癥。口腔健康是總體健康的組成部分，其不應(yīng)被看作是孤立的。自第二次世界大戰(zhàn)以來，抗生素和其它抗微生物藥物已被廣泛用于治療感染性疾病。抗微生物劑針對致病微生物的成功是現(xiàn)代醫(yī)學的巨大成就之一。但是，許多抗微生物劑已不再像過去一樣有效。產(chǎn)生抗生素抗性的一個關(guān)鍵因素是感染性生物快速適應(yīng)新環(huán)境條件的能力。隨著時間選艮，一些細菌已4L艮出逃避抗生素作用的方式。廣泛使用抗生素被認為刺激了演化性適應(yīng)，這使得細菌能夠經(jīng)受這些過去如此強力的藥物而生存下來。最終，對抗微生物難度的增加導致了在醫(yī)院或其它環(huán)境下獲得感染風險的增加。藥物抗性對于有嚴重疾病患者的醫(yī)院來說是一個特別困難的問題，這些患者在沒有抗生素幫助的情況下不太能夠?qū)垢腥?。因此，人們越來越意識到，非常需要新的治療策略來改善抗感染的感染防御。牙周病的治療包括保守性(非手術(shù))方法和手術(shù)方法。保守治療由被稱為潔治(scaling)和根面平整(rootplaning)的深度清潔以及牙齦刮除(gingivalcurettage)組成。此治療目的是除去定植于受影響根表面上的生物膜并重建可發(fā)生愈合的環(huán)境。在良好口腔衛(wèi)生的情況下，這M持健康的正常牙齦。牙周手術(shù)治療由骨手術(shù)、牙齦/牙周移植、牙齦翻瓣術(shù)、系帶切斷術(shù)、牙齦切除術(shù)、引導組織再生/骨增量組成。然而，盡管多種治療方法已經(jīng)成功地改善了牙周病的治療，但口腔健康的巨大挑戰(zhàn)依然存在。這些挑戰(zhàn)因素包括口腔細菌對抗生素的抗性增加、對總體改善口腔健康的更簡單方法的需要、昂貴且冗長的牙齒護理過程、壓力巨大的現(xiàn)代生活以;M^發(fā)達國家和iL^中國家貧困A^中更加沉重的牙齒負擔。因此，非常需要用于預防和治療牙周病、促進口腔健康以及改善牙周創(chuàng)傷愈合的新方法。壞死壞死是指細胞和活組織的非程序性或意外死亡。其相比于凋亡(細胞程序性死亡的一部分)而言是較為無序的。與凋亡相反，通過免疫系統(tǒng)吞噬細胞清除細胞碎片通常^>困難，因為無M的細胞死亡不發(fā)送出告知鄰ii^噬細胞來吞嗟該垂死細胞的"吃掉我"的細胞信號。此信號傳遞的缺乏使得對免疫系統(tǒng)而言，定位通過壞死而死去的死亡細胞并使之再循環(huán)比確定是否細胞已經(jīng)歷凋亡更困難。在壞死中，在細胞膜損壞后細胞內(nèi)容物的釋M產(chǎn)生炎癥的原因。壞死有許多原因，包括外傷、感染、癌癥、梗塞、毒液進入(invenomation)和炎癥。細胞中一種重要系統(tǒng)的嚴重損壞導致其它系統(tǒng)的繼發(fā)損壞，即所謂的"級聯(lián)效應(yīng)"。壞死由特定的酶引起，所述酶由溶SI^釋放，能夠消化細胞成分或整個細胞自身。細胞所受的損傷可危及溶SI^膜，或者可能引發(fā)造成酶釋放的無組織鏈式反應(yīng)。與凋亡不同，通過壞死而死亡的細胞可釋放破壞其它細胞的有害化學物質(zhì)?；顧z材料的壞死通過固定或者冷凍而停止。壞死發(fā)生于某些類型的牙周病中。壞死性牙齦炎是一種炎性破壞性牙齦病癥，其特征為牙間隙壞死性潰瘍、自發(fā)出血、快逸t生疼痛和臭氣。除非適當治療，壞死性牙齦炎有明顯的復發(fā)傾向并導致大量牙周支持物的喪失。目前，有四種治療壞死的主要治療方法。第一種是手術(shù)，其最為快速,因此當存在大的壞死區(qū)域或者深的傷痕時推薦使用。第二種是機械方法，其包括水療法、聚糖酐(dextranomer)和創(chuàng)傷沖洗。第三種是酶方法，所用的酶主要AJ^原酶(例如Santyl)，但是，當存在感染時其起效太慢；第四種是通過自溶方法，其通過創(chuàng)傷流體中的酶進行，但是療效非常慢。然而，這四種治療方法中沒有一種可給出功能和外觀上令人滿意的壞死去除及組織重建。因此，非常需要新的治療策略以實現(xiàn)成功的壞死去除。纖溶酶原活化系統(tǒng)(PA系統(tǒng))纖溶酶(plasmin)是PA系統(tǒng)的關(guān)鍵成員。它是一種能夠降解ECM的一些成員(包括纖維蛋白、明膠、纖連蛋白、層粘連蛋白和蛋白聚糖)的廣譜蛋白酶U)。另夕卜，纖溶酶可將一些前基質(zhì)金屬蛋白酶(pro-MMP)轉(zhuǎn)化成活性MMP。因此，已表明纖溶酶可能是細胞外蛋白水解的一種重要上游調(diào)控因子(5;6)。纖溶酶通過兩種生理性PA(tPA或uPA)中任一種的蛋白水解切割從酶原纖溶酶原形成。因為纖溶酶原以相對高的水平存在于血漿和其它體液中，所以PA系統(tǒng)的調(diào)節(jié)主要在PA合成和活性水平上進行。PA系統(tǒng)成員的合成受不同因素(例如激素、生長因子和細胞因子)的高度調(diào)節(jié)。另外，存在纖溶酶和PA的特異性生理抑制劑。纖溶酶的主要抑制劑是012-抗纖溶酶。PA的活性受PAI-1和PAI-2的調(diào)控，PAI-1抑制uPA和tPA,而PAI-2主要抑制uPA。某些細胞還具有uPA的特異性細J^面受體(uPAR)，其可引導對細M面的蛋白水解活性(8;9)。纖溶酶原(planminogen)是一種由790個^J^酸組成的單^I蛋白，其分子量是約92kDa(7;8)。纖溶酶原主要在肝臟中合成，并且在大多數(shù)細胞外體液中含量很高。在血漿中，纖溶酶原的濃度是約2fiM。因此，纖溶酶原構(gòu)成了組織和體液中蛋白水解活性的大量潛在來源(9;10)。纖溶酶原以兩種分子形式存在Glu-纖溶酶原和Lys-纖溶酶原。天然分泌且未切割的形式具有氨基端(N端)谷氨酸，因此被稱為Glu-纖溶酶原。但是，在纖溶酶存在時，Glu-纖溶酶原在Lys氣Lys"被切割成Lys-纖溶酶原。相比于Glu-纖溶酶原，Lys-纖溶酶原具有對纖維蛋白更高的親和力，并且以更高的速率被PA活化。這兩種形式的纖溶酶原都可以在Arg56G-Val561肽鍵處被uPA或tPA切割，導致形成二硫鍵連接的兩^:的蛋白酶纖溶酶(11)。纖溶酶原的氨基端部分含有5個同源三環(huán)即所謂的三環(huán)域(kringle),氣基端部分含有蛋白酶結(jié)構(gòu)域。一些三環(huán)域含有賴氨酸結(jié)合位點，其介導纖溶酶原與纖維蛋白及其抑制劑(X2-AP的特異性相互作用。一個新的且有趣的發(fā)現(xiàn)是纖溶酶原的由三環(huán)域1-4組成的38kDa片段是血管發(fā)生的強效抑制劑。此片段被稱為血管抑素(angiostatin)，其可通過被一些MMP蛋白水解切割而由纖溶酶原產(chǎn)生。纖溶酶的主要底物是纖維蛋白，纖維蛋白的分解對于預防病理性血凝塊形成至關(guān)重要(12)。纖溶酶也具有針對ECM—些其它成員(包括層粘連蛋白、纖連蛋白、蛋白聚糖和明膠)的底物特異性，表明纖溶酶在ECM重構(gòu)中也起到重要作用(8;13;14)。纖溶酶還可以通過其將一些前-MMP轉(zhuǎn)化為活性MMP(MMP-1、MMP-2、MMP-3和MMP-9)的能力間接降解ECM的其它成員。因此，已表明纖溶酶可能是細胞外蛋白7jC解的重要上游調(diào)控蛋白(15)。另外，纖溶酶具有活化潛伏形式的某些生長因子的能力(16-18)。在體外，纖溶酶還切割補體系統(tǒng)的成員，由此釋M化性補體片段。已表明在細菌侵入過程中PA系統(tǒng)通過多種機制在一些階段參與其中(19)。大量的病原表達纖溶酶(原)受體(20;21)。細菌還影響哺乳動物細胞分泌PA及其抑制劑(22;23)。例如，已發(fā)現(xiàn)在被多種細菌感染的細胞中uPA的產(chǎn)生增加(24)。到目前為止，纖溶酶原活化在發(fā)病機制中的作用的體內(nèi)證據(jù)存在于一些細菌中，例如鼠疫耶爾森氏菌(I^Vi/戸船)、疏螺旋體(必onr/,Vi)和A族鏈球菌。纖溶酶原與一些細菌表面存在的受體的結(jié)合將這些細菌轉(zhuǎn)換成蛋白水解生物體。在革蘭氏陰性菌中，絲狀表面附屬物形成纖溶酶原受體的主要部分(25;26)。在革蘭氏陽性菌中，已鑒定出表面結(jié)合分子是纖溶酶原受體(27;28)。結(jié)果，可在可導致哺乳動物ECM降解的微生物(例如流感嗜血軒菌(祝側(cè)o/;緒msiVi^/7"ert潔)、鼠傷寒沙門氏菌(5"fl/歸weZ/a^V/7/r/附iiW"附)、肺炎鏈球菌(5^r印tococcns/me"wofi/"e)、鼠疫耶爾森氏菌和伯氏疏螺旋體(^wr^Vi^f^foi^n'))的表面上產(chǎn)生纖溶酶。另外在人血漿中，細菌蛋白酶還可直接活化潛伏的前膠原酶或者使蛋白酶抑制劑失活，因此加劇組織破壞和細菌穿過組織屏障的播散(29;30)。牙周病和牙周創(chuàng)傷的模型牙周病的模型包括自發(fā)型和誘導型。牙周組織暴露于富含微生物的環(huán)境?？谇恢谐掷m(xù)發(fā)生細菌侵入和隨后的宿主防御，通常保持平衡。此宿主-細菌平衡的破壞引起多種類型的牙周病。這可能是由于口腔微生物菌群、吞噬細胞功能改變和/或特異性免疫應(yīng)答之間的失衡而引起的。在約2%的美國青少年和約20%的美國成年人中發(fā)生嚴重的牙周病。通過某些細菌物種誘導牙周病提供了牙周炎的確定模型。常用的牙周病原體包括牙齦卟啉單胞菌(i^"/ij;nwf卵仍g,7ig/v"http://s)、直腸彎曲桿菌(Ca附"to6fl""re""s)、伴放線放線軒菌(Actinobacillusactinomcetemcomitans)和具核梭軒菌(jFY/so6"cten'w附wwc/eflrti附),其被認為代表了大部分的病原微生物菌群。它們具有或可在宿主細胞中誘導一些因子，例如IL-1、IL-6、肺瘤壞死因子、表面相關(guān)蛋白、菌毛、嚢泡、毒素和酶，其被認為直接或間接造成牙周支持組織的不可逆喪失。牙周創(chuàng)傷是常見的，尤其是在牙周手術(shù)過程中。可通過在小鼠牙床組織誘導切口創(chuàng)傷來建立牙周創(chuàng)傷模型。其后可評價創(chuàng)傷的愈合模式以及候選藥物或化合物的作用。用于治療感染(例如壞死和牙周病)的當前方法具有上述缺點。因此，本領(lǐng)域仍然需要治療牙周病和改善口腔健康的改進策略和手段。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及纖溶酶原活化途徑成員以及具有活化纖溶酶原能力的化合物可用于預防和治療牙周病和組織壞死、用于牙周創(chuàng)傷愈^合(例如手術(shù)創(chuàng)傷)和用于促進口腔g健康的新的改進策略的新發(fā)現(xiàn)。施用纖溶酶原和/或纖溶酶原活化途徑其它成員或者具有活化纖溶酶原能力的化合物，通過活化炎癥細胞、加速角質(zhì)形成細胞遷移、殺死細菌、去除壞死組織和增強細胞因子表達而在防止細菌誘導感染和促進牙周創(chuàng)傷愈合上起到多方面作用。在天然條件下纖溶酶原缺陷型小鼠中大量存在牙周病還提供了用于研究牙周病的極好動物模型，以及提供了用于鑒定和評價針對牙周病、牙周創(chuàng)傷改善和促進口腔整體健康的多個方面的治療方法和新藥和篩選方法。因此，本發(fā)明提供了作為纖溶酶原活化途徑成員或者具有直接或通過纖溶酶原活化途徑活化纖溶酶原之能力的活性藥劑或化合物在制備用于在需要治療的對象中預防、防止和/或治療牙周病(尤其是感染性牙周病)和/或去除牙床組織中壞死的藥物組合物中的用途，所述藥物組合物包含有效量的所述化合物/藥劑或者兩種或更多種這些藥劑/化合物的組合。優(yōu)選地，所述活性劑選自纖溶酶原激活劑、tPA、uPA、鏈激酶、沙蘆普酶(saruplase)、阿替普酶(alteplase)、瑞替普酶(reteplase)、替奈普酶(tenecteplase)、阿尼普酶(anistreplase)、孟替普酶(monteplase)、拉諾普酶(lanoteplase)、帕米普酶(pamiteplase)、葡激酶(straphylokinase)以及纖溶酶原活化途徑成員的重組形式和變體。更優(yōu)選地，所述活性劑選自纖溶酶或纖溶酶原及其衍生物例如纖溶酶或纖溶酶原的三環(huán)域(kringledomain)、纖溶酶或纖溶酶原的蛋白片段、小纖溶酶原(mini-plasminogen)和小纖溶酶(mini-plasmin)以及纖溶酶或纖溶酶原的合成衍生物。最優(yōu)選地，所述活性劑是纖溶酶原及其衍生物。所述活性劑可以本領(lǐng)域已知的任意施用途徑施用。優(yōu)選地且非限定性地，施用途徑包括局部施用(topicalapplication)、牙齦內(nèi)注射和靜脈內(nèi)注射。所述藥劑還可存在于涂lt^牙周組織被感染區(qū)域的創(chuàng)傷敷料中，如果可能的話，從其中轉(zhuǎn)移到牙周組織的被感染部位上。所述組合物可以是皿、洗劑、香骨(balm)、骨(paste)(牙骨)、含漱溶液(garglingsolution)(漱口液)或創(chuàng)傷lt料的一部分。在需要治療的對象中改善解決方案和/或促進牙周創(chuàng)傷和手術(shù)牙周創(chuàng)傷(尤其感染性牙周創(chuàng)傷和手術(shù)感染性牙周創(chuàng)傷)1^合的藥物組合物中的用途，所述藥物組合物包含有效量的所述化合物/藥劑或者兩種或更多種這些藥劑/化合物的組合。優(yōu)選地，所述活性藥劑選自纖溶酶原激活劑、tPA、uPA、鏈激酶、沙聲普酶、阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、阿尼普酶、孟替普酶、拉諾普酶、帕米普酶、葡激酶以及纖溶酶原活化途徑成員的重組形式和變體。更優(yōu)選地，所述活性劑選自纖溶酶或纖溶酶原。最優(yōu)選地，所述活性藥劑是纖溶酶原。所述活性劑可以本領(lǐng)域已知的任意施用途徑施用。優(yōu)選地且非限定性地，施用途徑包括局部施用、牙齦內(nèi)注射和靜脈內(nèi)注射。所述藥劑還可存在于施用于牙周組織創(chuàng)傷區(qū)域上的創(chuàng)傷敷料、劍歐、洗劑、香骨、骨、含漱溶液和牙骨中，如果可能的話，從其中轉(zhuǎn)移到牙周組織的受傷部位上。另外，本發(fā)明還提供了促進口腔健康的方法，其包括施用包含下列物質(zhì)的組合物作為纖溶酶原活化途徑成員的活性劑，或者具有活化纖溶酶原能力的化合物，或者兩種或更多種這些藥劑的組合。優(yōu)選地，所述活性藥劑選自纖溶酶原激活劑、tPA、uPA、鏈激酶、沙蘆普酶、阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、阿尼普酶、孟替普酶、拉諾普酶、帕米普酶、葡激酶和所述纖溶酶原活化途徑成員的重組形式和變體。更優(yōu)選地，所述活性劑選自纖溶酶或纖溶酶原。最優(yōu)選地，所述活性劑是纖溶酶原，例如Glu-纖溶酶原或Lys-纖溶酶原。所述活性劑可以本領(lǐng)域已知的任意施用途徑施用。所述組合物可以是:^、洗劑、香骨、骨或創(chuàng)傷lt料的一部分。優(yōu)選地且非限定性地，施用途徑包括局部施用，例如牙骨或使用含漱溶液，其可用于增強牙齒的抗腐敗性和促進口腔健康。本發(fā)明還提供了一種在宿主防御受阻或受損的情況下啟動宿主防御以治療牙周病尤其感染性牙周病的方法，所述方法包括施用作為活性成分的纖溶酶或纖溶酶原。在一個特定實施方案中，本發(fā)明的方法可用于在纖溶酶或纖溶酶原的局部或全身缺陷/損傷的情況下改善抗牙周病的宿主防御。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種通過施用化合物或藥物(其為纖溶酶或纖溶酶原及其衍生物、纖溶酶原激活劑、或者增強纖溶酶活性的化合物)來預防、防止和治療牙周病(尤其感染性牙周病)、改善牙周創(chuàng)傷(例如手術(shù)創(chuàng)傷)愈合以及促i^A或非AJit象的口腔健康的方法。優(yōu)選地，局部施用所述化合物以達到在被感染區(qū)域中的高濃度。另外，本發(fā)明還提供了一種通過施用組合物來減輕或預防口腔壞死形成的方法，所述方法包括局部或全身施用包含作為纖溶酶原活化途徑成員的化合物或具有活化纖溶酶原能力的化合物的組合物。所述組合物可以是凝膠、洗劑、香骨、骨或創(chuàng)傷敷料的一部分。作為替代，所述組合物可以全身施用。在一個實施方案中，將本發(fā)明方法與整形手術(shù)聯(lián)合用于牙周組織以減少感染、潰瘍和壞死的發(fā)生和形成。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種用于治療、預防和防止牙周病尤其感染性牙周病的藥物組合物，其包含有效量的作為纖溶酶原活化途徑成員的化合物或者具有活化纖溶酶原能力的化合物。所述纖溶酶原活化途徑成員可選自纖溶酶原、Lys-纖溶酶原、Glu-纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原和纖溶酶的三環(huán)域、小纖溶酶原、小纖溶酶、纖溶酶原激活劑、tPA和uPA。優(yōu)選地，所述纖溶酶原途徑成員是纖溶酶原或纖溶酶。所述具有活化纖溶酶原能力的化合物可選自鏈激酶、沙蘆普酶、阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、阿尼普酶、孟替普酶、拉諾普酶、帕米普酶、葡激酶以及所述纖溶酶原活化途徑成員的重組形式和變體。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種用于治療、預防和/或防止牙周病尤其感染性牙周病的方法，所述方法包括給需要此治療的對象施用權(quán)利要求1-16的包含有效量的化合物的藥物組合物，所述化合物是纖溶酶原活化途徑成員或者具有直接或通過纖溶酶原途徑活化纖溶酶原能力的化合物。所述纖溶酶原活化途徑成員可選自纖溶酶原、Lys-纖溶酶原、Glu-纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原和纖溶酶的三環(huán)域、小纖溶酶原、小纖溶酶、纖溶酶原激活劑、tPA和uPA。優(yōu)選地，所述纖溶酶原途徑成員是纖溶酶原或纖溶酶。所述具有活化纖溶酶原能力的化合物可選自鏈激酶、沙蘆普酵、阿^f"酵、瑞^"f"酵、替^f"酵、阿尼普酶、孟替普酶、拉諾普酶、帕米普酶、葡激酶以及所述纖溶酶原活化途徑成員的重組形式和變體。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種用于促進牙周創(chuàng)傷尤其是感染性牙周創(chuàng)傷愈合的藥物組合物，其包含有效量的纖溶酶原活化途徑成員或者具有活化纖溶酶原能力的化合物。所述纖溶酶原活化途徑成員可選自纖溶酶原、Lys-纖溶酶原、Glu-纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原和纖溶酶的三環(huán)域、小纖溶酶原、小纖溶酶、纖溶酶原激活劑、tPA和uPA。優(yōu)選地，所述纖溶酶原途徑成員是纖溶酶原或纖溶酶。所述具有活化纖溶酶原能力的化合物可選自鏈激酶、沙,普酶、阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、阿尼普酶、孟替普酶、拉諾普酶、帕米普酶、葡激酶以及所述纖溶酶原活化途徑成員的重組形式和變體。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種促進牙周創(chuàng)傷尤其是感染性牙周創(chuàng)傷愈合的方法，所述方法包括向有此治療需要的對^逸用包含有效量化合物的藥物組合物，所述化合物是纖溶酶原活化途徑成員或者具有直接或通過纖溶酶原活化途徑活化纖溶酶原能力的化合物。所述纖溶酶原活化途徑成員可選自纖溶酶原、Lys-纖溶酶原、Glu-纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原和纖溶酶的鉸三環(huán)域、小纖溶酶原、小纖溶酶、纖溶酶原激活劑、tPA和uPA。優(yōu)選地，所述纖溶酶原途徑成員是纖溶酶原或纖溶酶。所述具有活化纖溶酶原能力的化合物可選自鏈激酶、沙,普酶、阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、阿尼普酶、孟替普酶、拉諾普酶、帕米普酶、葡激酶以及所述纖溶酶原活化途徑成員的重組形式和變體。具體實施方案對于預防和治療牙周疾病、愈合牙周創(chuàng)傷以及保持口腔健康的改善根據(jù)本發(fā)明，提供或增強纖溶酶原和/或纖溶酶可用于預防、防止和治療牙周疾病，加速牙周創(chuàng)傷愈合和促進口腔健康。這可以通過多種不同的方式實現(xiàn)。例如，通過用上調(diào)纖溶酶、纖溶酶原或纖溶酶原激活劑表達的活性劑、藥物、激素、細胞因子、抗體或其它化合物治療患者；降低任意這些成員的降解；可增加纖溶酶原和/或纖溶酶的局部或全身7jc平。在另一個實施方案中，通過直接施用纖溶酶/纖溶酶原蛋白及其衍生物增加局部纖溶酶或纖溶酶原的水平。在又一個實施方案中，通過施用纖溶酶或纖溶酶原激活劑增強纖溶酶活性。在另一個實施方案中，使用人工、重組或細菌的纖溶酶原激活劑例如鏈激酶和葡激酶。在又一個實施方案中，使用纖溶酶原蛋白序列的片段例如合成肽、三環(huán)域、小纖溶酶原或小纖溶酶。纖溶酶原活化途徑成員或者具有活化纖溶酶原能力的化合物可通過純化來自細菌、人或其它動物的所述成員或化合物，或者通過在酵母(例如釀酒酵母(&cerev/s,Vie))、在細菌(例如大腸桿菌(五.和在哺乳動物細胞系(例如中國倉鼠卵巢細胞系)中重組產(chǎn)生而制得。所述成員可以是野生型或經(jīng)修飾/突變的。還可使用保留全長成員所期望活性的至少一部分的成員的片段。在一個優(yōu)選實施方案中，使用人纖溶酶原的基本上純的制備物。在又一個優(yōu)選實施方案中，使用人纖溶酶的基本上純的制備物。在又一個優(yōu)選實施方案中，使用小纖溶酶原、小纖溶酶或纖溶酶原蛋白序列片段的基本上純的制備物。應(yīng)用本發(fā)明方法用于預防、防止和治療牙周病、愈合牙周創(chuàng)傷和促進日常生活的口腔健康。這些動物包括但不限于脊推動物例如人和家養(yǎng)動物(包括狗、貓、馬、牛、豬)以及家禽。在一個實施方案中，應(yīng)用本發(fā)明方法以在人中控制牙周病。人或非人對象可以患有或不患有妨礙牙周病愈合的病癥。在另一個實施方案中，應(yīng)用本發(fā)明方法以改善牙周創(chuàng)傷的愈r合。所述牙周創(chuàng)傷包括但不限于外傷性創(chuàng)傷(由于外傷導致)創(chuàng)傷和手術(shù)創(chuàng)傷。在一個特定實施方案中，所it^象是計劃接受、正在接受或者已經(jīng)接受了口腔牙周區(qū)域整形手術(shù)的人。在這樣的情況下，可在手術(shù)之前和/或之后應(yīng)用或施用包含例如纖溶酶原的組合物。在又一個實施方案中，應(yīng)用本發(fā)明方法以促進口腔健康。在這樣的情況下，可應(yīng)用或施用包含增加纖溶酶原、纖溶酶或小纖溶酶水平/活性的方法的組合物，以促進口腔健康。組合物和治療本發(fā)明的活性劑用于調(diào)節(jié)藥物乾標的生物學活性，它們用于治療在其中觀察到ECM降解、宿主防御和/或創(chuàng)傷愈:合受損的病癥。特別的，它們可用于預防和治療牙周病、愈合牙周創(chuàng)傷和促進口腔健康。因此，可將本發(fā)明的活性劑配制成適于體內(nèi)施用的生物學相容形式藥物組合物以施用給對象。適于體內(nèi)施用的生物學相容形式指在其中治療效果超過任何毒性作用的待施用活性劑形式。所述活性劑可施用給包括人和動物的活生物體。本發(fā)明活性劑的活性量定義為實現(xiàn)所期望結(jié)果必需的在劑量和時間上的有效量。例如，活性劑的治療活性量可以根據(jù)一些因素例如疾病狀態(tài)、年齡、性別和個體體重以及抗體在個體中引發(fā)所期望應(yīng)答的能力而變化?？烧{(diào)整藥物劑量以提供最佳治療反應(yīng)。例如，可每天施用分為幾次的劑量，或者可才艮據(jù)治療情況緊急程度所指示來按比例減少劑量?？赏ㄟ^便利的方式來施用所述組合物，例如通過注射(皮下、靜脈內(nèi)等)、口服施用、吸入、直腸施用或透皮施用。根據(jù)施用途徑，可將所述活性劑包被在保護所述藥劑免受可能使所述藥劑失活的酶、酸和其它天然M的作用的材料中。因此，合適的施用途徑包括局部、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮內(nèi)、口服、直腸和陰道內(nèi)施用。一個優(yōu)選的施用途徑A^部施用或口服施用?？赏ㄟ^本來已知的用于制備可施用錄"對象的可藥用組合物的方法來制備本文所述組合物，使得有效量的一種或多種活性劑與可藥用栽體組合于混合物中。合適的載體描述于例如Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPublishingCompany,Easton，Pa"USA1985)。在此^ftll上，所述組合物包括但不限于活性劑以及一種或多種可藥用載體或稀釋劑在具有合適pH且與生理流體等滲的緩沖溶液中的溶液?？捎糜谶f送本發(fā)明活性劑的載體的實例包括但不限于凝膠、骨、香骨、蠟、洗劑、護膚霜(skincream)、漂洗溶液(rinsingsolution)、^^有/不含有填充劑(bulkingagent)的干粉以及本領(lǐng)域已知的用于局部遞送的多種其它形式。所述組合物還可以以粉末或噴霧溶液、或含漱液的形式局部遞送。作為替代，本發(fā)明組合物還可存在于創(chuàng)傷敷料、墊、繃帶、紗布或施加到目的區(qū)域的其它物品中，所述組合物從中轉(zhuǎn)移到所需區(qū)域。這些裝置還包括緩慢釋放裝置(其在較長時間段里持續(xù)釋放纖溶酶原或本發(fā)明的其它藥劑)，或者可包括立即釋放裝置，其在使用時立即釋放纖溶酶原或本發(fā)明的其它藥劑。在制備藥用組合物之后，可以將其置于合適的容器內(nèi)，并加上治療適應(yīng)癥的標簽。對于本發(fā)明組合物的施用，這樣的標簽將包括用量、頻率和施用方法。所述組合物可以以固定間隔施用，例如一天一次或兩次，或者添加到敷料或緩慢釋放裝置中，其可視情況進行更換。就促進口腔健康而言，可通過在使用時形成組合物來立即施用所述組合物。參考下述詳細描述并結(jié)合附圖，更易于理解本發(fā)明的上述特征和許多其它優(yōu)點。圖1.正常健康牙床組織(A)、炎性牙齦炎(B)和牙周感染牙周炎(C)的照片。圖2.在體外創(chuàng)傷愈合模型中存在于生長培養(yǎng)基中的纖溶酶原促進角質(zhì)形成細胞遷移。圖3.未處理的8-12周齡野生型和纖溶酶原缺陷型小鼠頜的形態(tài)。注意在纖溶酶原缺陷型小鼠的牙齦組織中存在壞死組織(N，紅色)和嚴重的骨間隔(bones印ta)降解(B)，而野生型小鼠的牙床組織則完全正常。在高放大倍率(x200)下，野生型和纖溶酶原缺陷型小鼠之間的差異就更加明顯(下圖)。B，骨間隔。N，壞死組織。圖4.未處理的12-16周齡野生型和纖溶酶原缺陷型小鼠頜的形態(tài)。12-16周纖溶酶原缺陷型小鼠的自發(fā)性牙周病比8-12周的更加嚴重。注意在纖溶酶原缺陷型小鼠的牙床組織中存在壞死組織(N，紅色)和嚴重的骨間隔降解(B)，而野生型小鼠的牙床組織則完全正常。在高放大倍率(x200)下，野生型和纖溶酶原缺陷型小鼠之間的差異就更加明顯(下圖)。B-骨間隔。N-壞死組織。圖5.未處理的16-20周齡野生型和纖溶酶原缺陷型小鼠頜的形態(tài)。16-20周纖溶酶原缺陷型小鼠的自發(fā)性牙周病比12-16周的更加嚴重。注意在纖溶酶原缺陷型小鼠的牙床組織中存在壞死組織(N，紅色)和嚴重的骨間隔降解(B)(右上圖)，而野生型小鼠的牙^ia織則完全正常(左上圖)。在高放大倍率(x200)下，野生型和纖溶酶原缺陷型小鼠之間的差異就更加明顯(下圖)。B，骨間隔，N，壞死組織。圖6.野生型、纖溶酶原雜合型和纖溶酶原缺陷型小鼠的唾液中的細菌回收。纖溶酶原缺陷型和纖溶酶原雜合型小鼠具有比野生型小鼠顯著更高的唾液中細菌數(shù)。圖7.補充了人纖溶酶原的纖溶酶原缺陷小鼠、補充了PBS的纖溶酶原缺陷型小鼠和未接受任何處理的野生型小鼠中所拔出牙齒中的細菌回收。圖8.補充了PBS或人纖溶酶原的纖溶酶原缺陷型小鼠的形態(tài)。注意在PBS處理的纖溶酶原缺陷型小鼠中，牙床組織中存在壞死組織，周圍的膠原組織開始從牙齒脫落，并且已經(jīng)發(fā)生了骨吸收(左圖)。但是，在纖溶酶原缺陷型小鼠中補充人纖溶酶原完全恢復了牙周組織中的細胞和組織結(jié)構(gòu)。放大倍率，x50。圖9.補充了BPS或人纖溶酶原的纖溶酶原缺陷型小鼠在高放大倍率(x50)下的形態(tài)。圖10.通過口腔注射補充了PBS或人纖溶酶原的纖溶酶原缺陷型小鼠的形態(tài)。注意在PBS處理的纖溶酶原缺陷型小鼠中，牙床組織中存在壞死組織，周圍的膠原組織開始從牙齒脫落，并且已經(jīng)發(fā)生了骨吸收(上圖中左邊兩幅圖)。但是，在纖溶酶原缺陷型小鼠中補充人纖溶酶原恢復了牙周組織中的細胞和組織結(jié)構(gòu)。放大倍率，xioo。圖ll.未治療的22周齡野生型(左圖)和tPA/uPA雙缺陷型(右圖)小鼠頜的形態(tài)。注意在tPA/uPA雙缺陷型小鼠的牙床組織中存在壞死組織(N，紅色)和嚴重骨間隔降解(B)，而野生型小鼠的牙床組織則完全正常。B，骨間隔，N，壞死組織。圖12.在膝關(guān)節(jié)處接種1><106CFU的金黃色葡萄球菌(51.做m^)Phillips林之后進行不同的局部和全身治療的plg-A和plg十/十小鼠膝關(guān)節(jié)中的細菌數(shù)。圖13.在膝關(guān)節(jié)處接種金黃色葡萄球菌3天后用Plg(實心柱)或PBS(空心柱)進行局部注射后plg+Z+小鼠膝關(guān)節(jié)中的細菌數(shù)。注意在局部注射Plg的野生型小鼠中，細菌數(shù)量比局部注射PBS的野生型小鼠的顯著低5倍。定義在本發(fā)明的背景和每個術(shù)語所使用的具體上下文中，本說明書中使用的術(shù)語通常具有其在本領(lǐng)域中的通常含義。對某些術(shù)語在下文或者在說明書的其它地方進行了討論，以為實施者提供有關(guān)描述本發(fā)明的組合物和方法以及如何制備和使用它們的另外指導。"包括纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原活化途徑成員、纖溶酶原類似物例如小纖溶酶、纖溶酶類似物、纖溶酶原活化途徑成員類似物、纖溶酶原激活劑的化合物"指分別直接或間接提供纖溶酶原或纖溶酶效應(yīng)的化合物。"纖溶酶原活化途徑成員"指纖溶酶原、Lys-纖溶酶原、Glu-纖溶酶原、包含纖溶酶原的一個或多個結(jié)構(gòu)域例如一個或多個三環(huán)域和蛋白水解結(jié)構(gòu)域的纖溶酶原變體和類似物(比如小纖溶酶原)；纖溶酶和包含纖溶酶的至少一個或多個結(jié)構(gòu)域例如一個或多個三環(huán)域和蛋白水解結(jié)構(gòu)域的纖溶酶變體和類似物(比如小纖溶酶和S-纖溶酶)；具有活化纖溶酶原的最終作用的纖溶酶原激活劑，例如通過級聯(lián)事件導致形成或活化纖溶酶原，比如uPA和tPA以及包含uPA和tPA的一個或多個結(jié)構(gòu)域(例如一個或多個三環(huán)域和蛋白水解結(jié)構(gòu)域)的tPA和uPA的變體和類似物。纖溶酶原、纖溶酶、tPA和uPA的變體包括這些蛋白的人和其它哺乳動物形式的所有天然遺傳變體，以及通過保守JL^酸替換獲得的這些蛋白質(zhì)的突變體。纖溶酶原或纖溶酶的"類似物"^!提供分別與纖溶酶原或纖溶酶相類似效應(yīng)的化合物，其通過酶i普、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)和FACS(熒光活化細胞分選儀)進行測定。還有一種用于測定轉(zhuǎn)化的纖溶酶活性水平的測定法，如之前所描述的Ny，A.，Leonardsson,Ci，Hagglund，A.C.，Hagglof,P"Ploplis,V.A"Carmeliet,P"和Ny，T.(1999)。Ovulationinplasminogen-deficientmice.Endocrinology74。,5030-5035。纖溶酶原活化途徑成員的"類似物"是提供基本上與纖溶酶原活化途徑成員相類似的效應(yīng)的化合物，其通過此類似物活化的纖溶酶活性水平進行測定。"牙周病"是一種由特定牙齦下微生物與宿主免疫和炎性應(yīng)答t間的相互作用引起的常見炎性疾病。牙周病的范圍包括從筒單的牙齦炎癥到導致支持牙齒的軟組織和骨的重大損傷的嚴重疾病。在最壞的情況下，牙齒喪失。細菌引起被稱為"牙齦炎"的牙床炎癥。在牙齦炎中，牙齦變紅、肺起并且容易出血。牙齦炎是一種輕微形式的牙床疾病，其通?？赏ㄟ^每天刷牙和用牙線清潔以及牙醫(yī)或牙科衛(wèi)生師的定期清潔來扭轉(zhuǎn)。此形式的牙床疾病不包括固定牙齒在其位置的骨和組織的任何喪失。當牙齦炎得不到治療時，它可發(fā)展成"牙周炎"(其意為"牙周圍的炎癥")。在牙周炎中，牙床與牙齒脫離并形成被感染的"袋"。當菌斑在牙床線以下擴展和生長時，機體免疫系統(tǒng)與細菌抗爭。細菌毒素和機體對抗感染的酶實際上開始破壞將牙齒固定在其位置上的骨和結(jié)締組織。如果得不到治療，那么支持牙齒的骨、牙床和結(jié)締組織將^L破壞。最終，所述牙齒可能會;f^動并不得不被除去。另一種類型的牙周炎-種植體周圍炎，作為將異質(zhì)材料手術(shù)植入到頜骨后的生物學并發(fā)癥而出現(xiàn)。種植體周圍炎是一種在功能上影響骨結(jié)合植入物周圍組織的炎癥/感染過程，其導致支持骨的喪失。即使在已針對解決種相:體周圍感染進行了大量治療的情況下，種植體周圍炎也可導致完全脫落和^物喪失。種植體周圍炎還作為種植體周圍軟組織的可逆性炎性/感染性變化而發(fā)生，而不造成任何骨喪失，有時被稱為種植體周圍粘膜炎。在本發(fā)明中，牙周病的定義至少包括牙周炎、牙齦炎、種植體周圍炎和種植體周圍粘膜炎。"感染性牙周病"是由感染引起的牙周病，其是與例如韌部牙周炎(ligneousperiodontitis)相對的。例如，感染性牙周炎可以由細菌、病毒或真菌感染而引起。"細菌性牙周病"是由細菌感染引起的。"牙周創(chuàng)傷"指發(fā)生在口腔牙周組織的外傷性創(chuàng)傷和手術(shù)創(chuàng)傷，其包括在牙周區(qū)域種植體周圍組織處的創(chuàng)傷。"口腔健康"指在沒有活躍性疾病、不適或馗搶的情況下使得個體能夠進食、說話和社交的并且有助于總體健康狀況的口腔和相關(guān)組織的健康標準。口腔健康的主要標志包括唾液和牙床組織中的菌群，以及牙床組織中的組織壞死和炎癥?？谇唤】凳强傮w健康的組成部分，并且不應(yīng)被看作是孤立的。"纖溶酶/纖溶酶原的衍生物"指例如纖溶酶或纖溶酶原的三環(huán)域、纖溶酶或纖溶酶原的蛋白片段、小纖溶酶原和小纖溶酶以及纖溶酶或纖溶酶原的合成衍生物。"小纖溶酶原"指天然纖溶酶原的C端片段，其包括酶活性位點。小纖溶酶原的相對分子量(Mr)是38000。用尿激酶或鏈激酶活化導致產(chǎn)生底物特異性與纖溶酶原^目似的兩#^的酶，其被稱為"小纖溶酶"。"壞死"指機體中組織的死亡。這在沒有足夠的血液供應(yīng)給受傷、受幅射或經(jīng)受化學品的組織時發(fā)生。壞死是不可逆的。壞死有許多原因，包括受傷、感染、癌癥、梗塞、毒液^、慢性創(chuàng)傷、潰瘍和炎癥。"表面(topical)"和"表面施用(topicalapplication)"指活性成分的非全身性局部施用。因此，表明施用可指將活性成分施用到創(chuàng)傷外表面。蛋白質(zhì)或化合物的"活性"指所述蛋白質(zhì)或化合物具有的對特^應(yīng)的作用，是其影響、調(diào)節(jié)、參與或促進所述反應(yīng)的能力的量度。通常，可測量蛋白質(zhì)或其它化合物的活性。例如，就酶(例如纖溶酶、PA和MMP)和調(diào)節(jié)劑來說，酶活性可表示為產(chǎn)生反應(yīng)產(chǎn)物的速率，例如表示為每單位時間每單位酶所產(chǎn)生的產(chǎn)物的量(例如濃度或重量)。在調(diào)節(jié)劑(例如PA)的情況下，活性可以指調(diào)節(jié)劑抑制或促進、提高或降低、上調(diào)或下調(diào)^JI速率或由所述反應(yīng)形成的產(chǎn)物量的能力。"創(chuàng)傷"是由外部物質(zhì)造成的器官或組織(包括上皮、結(jié)締組織和肌肉組織)之結(jié)構(gòu)的破壞。創(chuàng)傷的實例包括但不限于挫傷、擦傷、撕裂、切開、刺傷和燒傷。另一些特定類型的創(chuàng)傷^l:作為整形手術(shù)過程后果的那些創(chuàng)傷。"治療/處理，，對象或者"治療/處理"對象的疾病或病癥在本文中指減少或緩解所述疾病或病癥的臨床癥狀例如妨礙或延緩創(chuàng)傷愈合。"增強"創(chuàng)傷愈合指增加創(chuàng)傷愈合的速度?；蛘撸?增強"創(chuàng)傷愈合指減少愈合過程中或愈合后瘢痕組織的形成。在本文中"對象"包括人和非人動物。非人動物包括但不限于實驗動物例如小鼠、大鼠、兔、倉鼠、豚鼠等；家養(yǎng)動物例如狗和貓；以及農(nóng)場動物例如綿羊、山羊、豬、馬和牛。本發(fā)明的非人動物可以是哺乳動物或非哺乳動物；脊推動物或非脊推動物。測定中的"對照"、"對照值"或"參考值"是用于檢查在例如牙周病治療、牙周創(chuàng)傷愈合和促進口腔健康或本文所述任何其它測定中的變化的值。"具有(疾病或病癥)風險"、"易患"或"易感"疾病或病癥的對象指所述個體感染或發(fā)生所述疾病或病癥的風險高于平均A^。化合物"缺陷/缺乏"指所述化合物的量、水平或濃度明顯低于對照值。例如，在纖溶酶原缺陷型動物中，纖溶酶原的體液和組織水平明顯低于野生型動物。本文所使用的"約，，或"大約"應(yīng)指在給定值或范圍的50%以內(nèi)，優(yōu)選20%以內(nèi)，更優(yōu)選5%以內(nèi)。與另一值"基本上不同"的值可指兩個值之間有統(tǒng)計學顯著性差異。本領(lǐng)域已知的任何合適的統(tǒng)計方法均可用于評價是否具有顯著差異。"統(tǒng)計學顯著性"差異指在至少卯％的置信區(qū)間、更優(yōu)選95%的置信區(qū)間上確定顯著性。縮寫本發(fā)明公開內(nèi)容中所使用的縮寫包括下列uPA=尿激酶型纖溶酶原激活劑；PA=纖溶酶原激活劑；MMP=!^金屬蛋白酶；TIMP=金屬蛋白酶組織抑制劑；tPA=組織型纖溶酶原激活劑；Plg=纖溶酶原ECM=細胞外基質(zhì)實施例通過下列實施例進一步描述本發(fā)明。然而，這些實施例僅僅是對本發(fā)明的舉例說明，而不以任何方式限制本發(fā)明的范圍和含義。事實上，在閱讀了本說明書后，本發(fā)明的許多變化和改變對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是顯而易見的，可在不脫離本發(fā)明精神和范圍的情況下做出這些變化和改變。實施例1體外角質(zhì)形成細胞遷移依賴于纖溶酶原的相對量因為創(chuàng)傷愈合涉及大量不同的因素、細胞和過程，所以引入了簡化的體外模型來描述纖溶酶原對細胞遷移的可能作用。方法在細胞培養(yǎng)基中孵育DOK(早期腫瘤/發(fā)育異常的人口腔角質(zhì)形成細胞)細胞。饑餓之后，將DOK細胞在存在或不存在人纖溶酶原、含有氫化可的松、谷氨酰胺、青霉素/鏈霉素、10。/。去除纖溶酶原的胎牛血清的DMEM細胞培養(yǎng)基中孵育。在第0h,在角質(zhì)形成細胞層上形成標準刮傷，以誘導體外創(chuàng)傷愈合模型。在不同時間點(Oh、12h和24h)在ZEISS顯微鏡下記錄角質(zhì)形成細胞遷移。結(jié)果在實驗過程中，在培養(yǎng)基中不存在纖溶酶原時，DOK(早期肺瘤/發(fā)育異常的人口腔角質(zhì)形成細胞)細胞遷移看起來幾乎停滯(圖2A上圖)。但是，在培養(yǎng)基中存在纖溶酶原時，角質(zhì)形成細胞遷移相比于缺乏纖溶酶原的培養(yǎng)基顯得增強(圖2A下圖)。在暴露于纖溶酶原(4nM)24小時后，這些體外創(chuàng)傷的邊緣趨于融合(圖2B)。另外，細胞遷移速率看上去呈纖溶酶原濃度依賴性。此實驗清楚地表明，纖溶酶原對于體外快速創(chuàng)傷閉合以及加快損傷組織愈合速率是重要的。實施例2纖溶酶原缺陷型小鼠中牙周病的自U生方法此實驗通過分析不同年齡的野生型和纖溶酶原缺陷型小鼠來研究纖溶酶原在牙周病發(fā)生中的重要性。將纖溶酶原缺陷(plg缺陷)型和野生型(wt)小鼠分為三個年齡組(每組每個基因型5-8只小鼠)組I:8-12周齡；組II:12-16周齡；組III:16-20周齡。牙通過分析每個基因型和年齡組的組織樣本來跟蹤牙周病的發(fā)生。為了分析組織樣本，將上下頜與顱骨分離，從總體軟組織(例如舌)上剝離肉，在4。/。多聚甲醛(PFA)中固定24小時。之后，將樣本轉(zhuǎn)移到脫鈣溶液中以從骨組織中除去鉀。在四周的脫釣過程之后，將樣本包埋于石蠟中并切片成5nm厚用于形態(tài)學染色。使用SafraninO染色用于形態(tài)學分析，因此軟骨和粘蛋白被染成深紅色，骨結(jié)構(gòu)和牙齒是藍色，細胞核被染成深藍色。結(jié)果8-12周齡時圍繞牙齒的牙床組織的形態(tài)學分析顯示，野生型小鼠沒有炎癥或膠原組織從牙齒表面脫離。相反地，所有plg缺陷小鼠均顯示牙齦炎最初階段的明顯標志一炎癥、膠原組織從牙齒脫離、在牙齒之間形成壞死組織以及骨間隔和下頜骨的降解(圖3)。直至20周齡時野生型小鼠具有健康的口腔(圖3、4、5);而在纖溶酶原缺陷型小鼠中，牙齦炎隨著年齡U成牙周炎牙齦組織嚴重發(fā)炎，在軟組織深處形成壞死組織以及明顯的骨間隔破壞(圖4、5)。這些數(shù)據(jù)明確證明纖溶酶原缺陷型小鼠自發(fā)發(fā)生嚴重牙周病并且疾病嚴重程度隨年齡增加而iU艮。實施例3纖溶酶原缺陷型小鼠比野生型小鼠在唾液中含有明顯更高的細菌數(shù)量方法將16-20周齡的野生型、纖溶酶原雜合型和纖溶酶原缺陷型小鼠用于此研究(表l)。通過用無菌移液器槍頭從口中收集唾液并轉(zhuǎn)移到用于立即培養(yǎng)的厭氧培養(yǎng)基中完成小鼠唾液取樣。結(jié)果從野生型和纖溶酶原雜合型小鼠中成功收集5微升唾液樣本。但是，由于纖溶酶原缺陷型小鼠口腔中的"fi4干燥條件，唾液樣本的可能量在在1.0微升至5.0微升之間變化。細菌回收顯示纖溶酶原缺陷型小鼠唾液中含有幾乎9.0xl0Vml的細菌，是三個組中最高的，顯著高于野生型小鼠。重要的是，纖溶酶原雜合型小鼠也具有顯著高于野生型小鼠的細菌數(shù)量(圖6)。這些數(shù)據(jù)清楚地表明，纖溶酶原在保持對口腔細菌的抵抗性上起到了重要作用。另外，細菌的數(shù)量看上去非常依賴于纖溶酶原的相對量，這提示纖溶酶原作為新藥促進口腔健康的治療重要性。實施例4在纖溶酶原缺陷型小鼠中補充人纖溶酶原成功改善這些小鼠中的自發(fā)性牙周病的臨床狀況方法將10只纖溶酶原缺陷(8-12周齡)型小鼠隨機分入纖溶酶原和PBS處理組(5只小鼠/組)中。從第0天至第9天，每天給小鼠靜脈內(nèi)注射100微升人纖溶酶原(iomg/ml)或PBS。在第10天，處死小鼠。對于左側(cè)頜而言，拔出臼齒以回收細菌。對右側(cè)頜進行脫釣處理、石蠟包埋以及形態(tài)學染色。在實驗中包含了相同年齡的三只未處理野生型小鼠作為對照。結(jié)果拔出牙齒樣本的細菌回收顯示補充了人纖溶酶原的纖溶酶原缺陷型小鼠相比于補充了PBS的纖溶酶原缺陷型小鼠具有顯著降低的細菌數(shù)(圖7)。這些數(shù)據(jù)表明纖溶酶原在對抗細菌定殖于牙齒的宿主防御中是必不可少的。如所預期的，在所有5個PBS處理的纖溶酶原缺陷型小鼠中均發(fā)生了嚴重的牙周病牙齒組織中存在壞死組織，周圍膠原組織開始從牙齒脫落以及已經(jīng)發(fā)生骨吸收(圖8和圖9,左圖)。補充了人纖溶酶原的纖溶酶原缺陷型小鼠已完全恢復了細胞和組織結(jié)構(gòu)在牙齒組織中沒有觀察到炎癥，壞死組織已被除去以及已發(fā)生膠原組織重建(圖8和圖9，右圖)。對于3只未處理的野生型小鼠，形態(tài)學分析顯示了如圖3所示類似的正常組織結(jié)構(gòu)。此數(shù)據(jù)清楚地顯示，纖溶酶原在維持正常組織結(jié)構(gòu)和對抗牙周病功能中起到了關(guān)鍵作用。實施例5在纖溶酶原缺陷型小鼠中牙床組織局部補充人纖溶酶原成功改善這些小鼠中自發(fā)性牙周病的臨床狀況方法將10只纖溶酶原缺陷(16-20周齡)小鼠隨機分入纖溶酶原和PBS處理組(5只小鼠/組)中。從第0天至第9天，每天向纖溶酶原缺陷型小鼠下頜兩側(cè)的牙床組織局部注射10微升人纖溶酶原(10mg/ml)。對于對照的PBS處理組，每天向纖溶酶原缺陷型小鼠下頜兩側(cè)的牙床組織局部注射IO微升PBS。在第10天，處死小鼠，進行形態(tài)學研究。將三只未處理的野生型小鼠和三只未處理的纖溶酶原缺陷型小鼠用作未處理對照。為了分析組織樣本，將上下頜與顱骨分離，從總體軟組織(例如舌)上剝離肉，在4%PFA中固定24小時。之后，將樣本轉(zhuǎn)移到脫鈣溶液中以從骨組織中除去鉀。在四周的脫鉀過程之后，將樣本包埋于石蠟中并切片成5nm厚用于形態(tài)學染色。將SafraninO染色用于形態(tài)學分析，因此軟骨和粘蛋白被染成深紅色，骨結(jié)構(gòu)和牙齒是藍色，細胞核被染成深藍色。結(jié)果在牙床組織局部注射纖溶酶原成功地減輕了在纖溶酶原缺陷型小鼠中牙周病的嚴重程度。如所預期的，在所有5只PBS處理的纖溶酶原缺陷型小鼠中都發(fā)生嚴重牙周病在牙床組織中存在壞死組織(N),周圍膠原組織開始從牙齒脫落以及已發(fā)生骨吸收(圖10，左側(cè)上面兩幅圖)。局部補充了人纖溶酶原的纖溶酶原缺陷型小鼠已在很大程度上恢復正常細胞和組織結(jié)構(gòu)在牙床組織中觀察到低水平的炎癥，壞死組織已被除去并且已經(jīng)發(fā)生了膠原組織重建(圖10,右側(cè)上面兩幅圖)。對于3只未處理的野生型和纖溶酶原缺陷型小鼠而言，形態(tài)學分析分別顯示與圖3中類似的組織結(jié)構(gòu)。此數(shù)據(jù)清楚地顯示局部補充纖溶酶原為治療牙周病提供了一種有效且有力的方式。實施例6在uPA和tPA雙缺陷小鼠中自發(fā)發(fā)生牙周病方法此實驗通過分析野生型和tPA/uPA雙缺陷小鼠中的牙周組織來研究纖溶酶在牙周病發(fā)生中的重要性。在我們實驗室中制造tPA/uPA雙缺陷小鼠以制造缺少纖溶酶原活化的小鼠。盡管在這些小鼠體內(nèi)含有纖溶酶原，但是它們無法將此纖溶酶前體轉(zhuǎn)化成活性纖溶酶。因此，來自這些小鼠的數(shù)據(jù)可直接得出活性纖溶酶在宿主對抗自發(fā)牙周病的防御中的重要性。通過分析每個基因型的組織樣品進行跟蹤，在tPA/uPA雙缺陷小鼠和它們的野生型同系鼠中在22周齡時發(fā)生了牙周病，。為了分析組織樣品，將上下頜與顱骨分離，#的軟組織(例如舌)上剝離肉，在4。/o多聚甲醛(PFA)中固定24小時。之后，將樣本轉(zhuǎn)移到脫鈣溶液中以從骨組織中除去釣。在四周的脫鉀過程之后，將樣本包埋于石蠟中并切片成5fim厚用于形態(tài)學染色。將SafraninO染色用于形態(tài)學分析，因此軟骨和粘蛋白被染成深紅色，骨結(jié)構(gòu)和牙齒;1^色，細胞核被染成深藍色。結(jié)果22周齡野生型以及tPA和uPA雙缺陷小鼠的形態(tài)學分析顯示，野生型小鼠沒有炎癥或膠原組織從牙齒脫離(圖11，左圖)，所有四只tPA和uPA雙缺陷小鼠均顯示嚴重的牙周病牙店ia織嚴重發(fā)炎，在軟組織深處形成壞死組織(N)以及已發(fā)生了明顯的骨間隔破壞(B)(圖11)。這些數(shù)據(jù)明確證明tPA和uPA雙缺陷小鼠自發(fā)發(fā)生了嚴重的牙周病，表明活性纖溶酶在正常牙周健康的維持上也是至關(guān)重要的。在下述實施例中，我們將要描述我們在細菌性關(guān)節(jié)炎研究中的發(fā)現(xiàn)以及我們將進行的研究。我們相信我們會得到如我們在細菌性關(guān)節(jié)炎研究中獲得的類似的前瞻性數(shù)據(jù)。盡管我們已有的數(shù)據(jù)來自細菌性關(guān)節(jié)炎的研究，但我們認為這些結(jié)果強烈提示在牙周區(qū)域進行類似研究時也會有這種期望的結(jié)果。因此，這些結(jié)果提示在牙周區(qū)域局部注射人纖溶酶原也可恢復plg-A小鼠中抗牙周病的正常宿主防御。此結(jié)論基于下述原因的考慮1、膝關(guān)節(jié)區(qū)域和牙周區(qū)域的宿主防御機制在很大程度上相似，在兩種情況中，通過宿主防御過程，炎癥細胞被活化并遷移到感染區(qū)域，細菌被活化的炎性細胞及其它分子殺死，細胞因子網(wǎng)絡(luò)表達增強，壞死組織被除去以及發(fā)生組織重建。2、在牙周炎和細菌性關(guān)節(jié)炎中，金黃色葡萄球菌都是在感染過程中起重要作用的臨床病原體。因此，從金黃色葡萄球菌誘導的細菌性關(guān)節(jié)炎的研究中所獲得的這些數(shù)據(jù)最有可能代表一般性現(xiàn)象，而不論具體的感染組織位置如何'3、用于細菌性關(guān)節(jié)炎模型的局部注射方法也已經(jīng)用于牙周炎研究(參見實施例5)，并且在plg-Z-小鼠中局部注射纖溶酶原減少自發(fā)性牙周炎的情況下已顯示陽性結(jié)果。這些相似性還表明從細菌性關(guān)節(jié)炎獲得的結(jié)果代表了也作為牙周病發(fā)病基礎(chǔ)的一般性機制。因此，我們使用來自我們對細菌性關(guān)節(jié)炎研究的數(shù)據(jù)(實施例7和8)來支持我們在本專利申請中的權(quán)利要求。來自細菌性關(guān)節(jié)炎研究數(shù)據(jù)的重要性在于首先，實施例7的結(jié)果表明在plg-A小鼠誘導感染模型中局部注射纖溶酶原恢復了宿主防御能力(例如殺死細菌)；另外，實施例8的結(jié)果表明在誘導感染模型中局部注射纖溶酶原還增強了正常野生型小鼠的正常宿主防御能力(例如殺死細菌)。另外，基于這些原因，我們在本專利申請中還包括了另一個我們要進行的實施例(實施例9)。在該實施例中，我們描述了誘導牙周病的臨M型，我們相信纖溶酶原的應(yīng)用可恢復plg-A小鼠的宿主防御并進一步增強野生型小鼠或其它物種中的正常宿主防御。實施例7對plgT小鼠局部補充人纖溶酶原(hPlg)恢復膝關(guān)節(jié)中正常的抗細菌感染宿主防御方法在小鼠的兩個膝關(guān)節(jié)中，通過局部接種10微升無菌PBS中的lx106CFU的金黃色葡萄球菌Phillips林來誘導細菌性關(guān)節(jié)炎。細菌接種后15分鐘，通過在膝關(guān)節(jié)組織周圍局部注射來對6只plgT小鼠的一側(cè)膝關(guān)節(jié)補充40微升的人纖溶酶原(PBS中10照/nl，Biopool，UmelSweden)。之后，以24小時的間隔補充人纖溶酶原7天。作為局部注射的對照，在細菌接種后15分鐘，向2只plgT小鼠的膝關(guān)節(jié)組織周圍僅局部注射40微升無菌PBS，之后在7天實驗期間以24小時的間隔注射。作為野生型小鼠對照，在細菌接種后15分鐘，給2只plg+Z+小鼠單獨局部注射40微升無菌PBS，之后以24小時的間隔注射7天。作為全身注射的plg-A小鼠對照，在細菌接種前1小時對2只plg-Z-小鼠靜脈給予100微升人纖溶酶原(10Hg/Hl)，之后每24小時給藥,共7天。在細菌接種后第7天處死小鼠，取下膝關(guān)節(jié)并在1亳升無菌PBS中勻漿。在系列稀釋后，將勻漿液涂布在LB瓊脂平板上，在371C孵育過夜。然后對活細菌菌落計數(shù)，以評價每種勻漿液中的金黃色葡萄球菌數(shù)。結(jié)果與用PBS局部處理的這些小鼠相比，持續(xù)7天對接種了金黃色葡萄球菌的plg-A小鼠局部注射纖溶酶原成功并且顯著地將細菌量降低了100倍。全i注射人纖溶酶原的plgV-小鼠或者局部注射PBS的plg+AH、鼠也成功地殺死了它們膝關(guān)節(jié)中的細菌。這些數(shù)據(jù)(表1)清楚地表明局部注射人纖溶酶原可恢復plg-A小鼠的正常細菌殺傷能力。表1、在接種1x106CFU的金黃色葡萄球菌Phillips林后第3天用不同的局部和全身處理的plg一小鼠和plg十/十小鼠中的細菌數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>*,P<0.05，相比于用局部注射PBS的plg-A小鼠組。實施例8對Dlg+廣小鼠局部補充人纖溶酶原增強膝關(guān)節(jié)中的抗細菌感染宿主防御方法通過向小鼠膝關(guān)節(jié)中局部接種10微升無菌PBS中的1x106CFU的金黃色葡萄球菌Phillips林來誘導細菌性關(guān)節(jié)炎。細菌接種后15分鐘，通it^膝部皮膚下和膝關(guān)節(jié)組織周圍局部注射對7只plg+廣小鼠的一側(cè)膝關(guān)節(jié)補充50微升的人纖溶酶原(hPlg，PBS中10fig/nl，Biopool，UmelSweden)。之后，以相同方式和24小時的間隔從第0天到第2天補充人纖溶酶原。作為局部注射的對照，在細菌接種后15分鐘時對7只plg+廣小鼠在膝部皮膚下和膝關(guān)節(jié)組織周圍局部注射單獨50微升無菌PBS，之后，在實驗期間的第0天到第2天以24小時的間隔進行同樣的局部注射。在細菌接種后第3天處死小鼠，取下膝關(guān)節(jié)并在1毫升無菌PBS中勻漿。在系列稀釋后，將勻漿液涂布在LB瓊脂平板上，在37"C孵育過夜。然后對活細菌菌落計數(shù)，以評價每種勻漿液中的金黃色葡萄球菌數(shù)。結(jié)果相比于PBS處理的對照plg+AH、鼠組而言，持續(xù)3天在plg+AH、鼠中膝關(guān)節(jié)處局部注射人纖溶酶原成功且顯著地將活金黃色葡萄球菌數(shù)減少了5倍。這些數(shù)據(jù)清楚地證明了人纖溶酶原是強力的促炎癥因子，其甚至在野生型動物中增強抗細菌感染的宿主防御。這些數(shù)據(jù)(表2)W明纖溶酶原是用于臨床應(yīng)用的新型抗感染候選藥物。表2、在接種1x106CFU的金黃色葡萄球菌Phillips林后第3天局部注射人纖溶酶原或PBS的野生型(plg+/+)小鼠中的細菌數(shù)。注意在局部注射了Plg的野生型小鼠中，細菌數(shù)比局部注射了PBS的野生型小鼠中顯著降低了5倍。<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>*,P<0.05，相比于用局部注射PBS的plg+Z+小鼠組。實施例9在實驗動物中補充纖溶酶原恢復/增強抗金黃色葡萄球菌誘導牙周病的宿主防御方法在此實施例中使用的實驗?zāi)Ｐ痛蟛糠秩缰八?31)，并根據(jù)我們的研究情況進行了必要修改。因為金黃色葡萄球菌是牙周病的主要致病原之一，所以我們將首先使用金黃色葡萄球菌作為此模型中的感染菌。但是，因為我們相信纖溶酶原在增強宿主抗感染防御中起到一般性作用，取決于實驗條件，我們有可能使用牙齦卟啉單胞菌作為另一種感染性細菌，進行與利用M色葡萄球菌類似的研究。將三十六只8周齡小鼠隨機分為三組結(jié)扎感染組、結(jié)扎假感染組和對照組。以12小時光照/12小時黑暗的周期常規(guī)飼養(yǎng)小鼠，隨意喂飼食物和水。^f口屋^染^祐餘|金黃悉薪萄球,付^^4'對于牙周感染，通過將無菌結(jié)扎線的7mm片段浸入LB培養(yǎng)液中并在37n培養(yǎng)到晚對數(shù)期-早平臺期來制備粘附有金黃色葡萄球菌的結(jié)扎線。對于假組(shamgroup),通過上述步驟處理結(jié)扎線但沒有微生物。對于結(jié)扎線上的細菌計數(shù)，將結(jié)扎線懸于l毫升LB培養(yǎng)液中并渦旋混勻30秒。之后，將懸液系列稀釋并涂布在LB瓊脂平板上，在37n孵育過夜。然后對活細菌菌落計數(shù)以評價金黃色葡萄球菌數(shù)目。#腐染通過將結(jié)扎線放置在麻醉動物上頜的臼齒周圍并打結(jié)來進行實驗組和假感染組中的牙周感染。借助于無菌器械，將金黃色葡萄球菌粘附的結(jié)扎線或假處理的結(jié)扎線在左上頜第一上頜臼齒(Ml)上打結(jié)。在收緊結(jié)之后，將結(jié)扎線按進縫隙中。對照動物既未結(jié)扎也未被微生物感染。^^浙;^婆定^^斧^薪萄承蘿在處死時，通過在結(jié)扎臼齒區(qū)域取生物膜樣品或者通過以無菌方式小心拔出臼齒來檢測細菌的存在。將樣本立即轉(zhuǎn)移到LB肉湯中，劇烈渦旋混勻，系列稀釋并置于LB瓊脂平板上，在37t:孵育過夜。之后對LB瓊脂平板上的總CFU進行計數(shù)以確定細菌數(shù)。在對小鼠模型的建立進行IHE之后，開始通過靜脈內(nèi)全身性注射或者在左上頜Ml邊緣牙齦處局部每日注射人pig(10ng/jil)。注射的起始點可以是實驗開始的時間，或者在實驗的感染階段期間。在實驗結(jié)束時，處死每個組的動物以進行最終的細菌學取樣和分析。將上頜與顱骨分離，從總體軟組織(例如舌)剝離下肉，在4V。多聚甲醛(PFA)中固定24小時。之后，將樣本轉(zhuǎn)移到脫釣溶液中以從骨組織中除去鈣。在四周的脫釣過程之后，將樣本包埋于石蠟中并切片成5nm厚用于形態(tài)學染色。將SafraninO染色用于形態(tài)學分析，因此軟骨和粘蛋白被染成深紅色，骨結(jié)構(gòu)和牙齒是藍色，細胞核被染成深藍色。結(jié)果基于我們之前來自纖溶酶原治療plg一小鼠的經(jīng)驗，在這些具有自發(fā)性牙周病的動物中全身注射和局部注射都已重建牙齦炎癥、正常宿主防御(例如殺死細菌)和適當?shù)难乐苤馗街覀儚娏翌A測在如上所述誘導牙周病模型中纖溶酶原治療plg-Z-小鼠也有相似的反應(yīng)。另外，基于我們之前對另一個感染模型(細菌性關(guān)節(jié)炎模型)的研究數(shù)據(jù)，在plg+Z+小鼠中纖溶酶原的局部注射增強抵抗感染性細菌的正常宿主防御時，我們強烈預測在如上所述誘導牙周病模型過程中在plg+Z+小鼠中的局部纖溶酶原治療也會增強？^+/+小鼠的正常宿主防御。并且因此，所有這些數(shù)據(jù)會明顯表明纖溶酶原是一種預防和治療牙周病、改善牙周創(chuàng)傷愈合以及促進口腔健康的新型候選藥物。1.ClarIc，W.B.，andLoe，H.1993,Mechanismsofinitiationandprogressionofperiodontaldisease.jPenorfo"fo/.2:72-82,2,Liakoni，H.，Barber，P,,andNewman5H,N.1987.Bacterialpenetrationofpocketsofttissuesinchronicadultandjuvenileperiodontitiscases.Anultrastructura[study,丄尸en'oaTo"fo/.14:22-28,3*Branemarl;;P.I,，Hansson，B,0,5Adell，R.，Brdne，U"Lindstrom,J,，Hallen,O"andOhman入1977.Osseointegratedimplantsinthetreatmentoftheedentulousjaw.Experiencefroma10-yearperiod,Scand.丄尸fcwf.iieconjrr.Sw7"g.Sw//^16:1-132.4.AlexanderCM,andWerb，Z.1991,Extracellularmatrixdegradation,CW/Sfo/ogv</5幼-ace"w/"rAf咖lx,HayED,editor.PlenumPress.NewYork*255-302.5.Werb>Z,，Mainardi，C丄.,Vater，C.A.>andHarris，E,D.，Jr.1977.Endogenousactiviationoflatentcollagenasebyrheumatoidsynovialcells.Evidenceforaroleofplasminogenactivator*脂.296:1017-1023.6.HE，C.S.,Wilhelm，S.M.，Pentland,A,P"Marmer，B丄.，Grant,G.A,EisenAZ.，andGoldberg，G丄1989，Tissuecooperationinaproteolyticcascadeactivatinghumaninterstitialcollagenase.iVoc.Ate/.&rf.t/，J86:2632-2636.7.Wiman，B，，andWallen，P.1975.Structuralrelationshipbetween"glutamicacid"and"lysine"formsofhumanplasminogenandtheirinteractionwi仏theNH2-termitialactivationpeptideasstudiedbyaffinitychromatography,5wrJ.50:489494.8.Saksela，O.，幼dRifldn，D.B.1988.Cdl-associatedplasminogenactivation:regulationandphysiologicalfimctions,Jnnw.i^v.Ce//4:93-126.9.Wall6nP1980.Biochemistryofplasminogen.IhH6W打o/^'s.KibeDL，幼dReddyKKN，editors.CRCpress.Florida.1-24.10.RaungD.，Marcus，D.,Alper,C.A.，Levey，R,,Taylor,P.D.，andStarzl，T,E.1980.Synthesisofhumanplasminogenbytheliver.5t^ce208:1036-1037.11.Sottrup隱Jensen，L.，Zajdel，M.,Claeys，H.,Petersen,T.E.，andMagnusson,S.1975.Aminoacidsequenceofactivationcleavagesiteinplasminogen:homologywith"pro"partofprothrombin.iVoc.AtoAXcarf,t/.S爿72:2577-2581.12.Collen，D.，andLijnen，RR.1991.Basicandclinicalaspectsoffibrinolysisandthrombolysis,胸cf78:3114-3124,13.Alexander,C.M,，andWerb，Z,1989.ProteinasesandextxacelhilaTmatrixremodeling.Cwrr.Opf".0/Z￡/o/，1:974-982.14.Mignatti,P.，andRiflcin，D.B.1993,Biologyandbiochemistryofproteinasesintumorinvasion.15.Coilen，D.2001.Ham-Wassermanlecture:roleoftheplasminogensysteminfibrin-homeostasisandtissueremodding,/fgm"to/ogy.(!4m，iSbc.i/ewaro/.五rfwc.iVogram,)1-9.16.Rifldn，D，B.，Moscatelli,D"Bizik,JT.，Quarto，N"Blei，F(xiàn).,D咖is，P.，F(xiàn)laumenhaft,R"andMignatti，P.1990.Growthfactoreontrolofextracellularproteolysis.Ce//D(j^rDev.32:313-318.17.Andreasen，P.A.，Kjoller，L,，Christensen,L.，andDuffyJM.J,1997.Theurokinase'typeplasminogenactivatorsystemincancermetastasis:areview.Ca打ee/"72:1-22.18.Rifldn>D,B"Mazzieri，R,，.Mimger，J,S,,Noguera，I"andSung,J.1999.Proteolyticcontrolofgrowthfectoravailability.爿尸M/51107:8085.19.Lahtee脆aki，IC，Kuusela，P.,andKorhonen工IC2001.Bacterialplasminogenactivatorsandreceptors,fEM5AficraWo/.iev.25:531-552.20.Broder,C，C.，Lottenberg，R*，vonMering，G.O.,Johnston，ICH.,andBoyle，M,D,1991.Isolationofaprokaryotieplasminreceptor.Relationshiptoaplasminogenactivatorproducedbythesamemicro-organism.跑/,CA飾.266:4922492§.21，Berge,A,，andSjobring，U,1993.PAM，anovelplasminogen-bindingproteinfromStreptococcuspyogenes.5z》/.CAem.268:25417-25424.22.Fuchs，H.，Simon，M.M.，WalUch，R，BechteI，M.，andKramer，M.D.1996.Borreliaburgdorferiinducessecretionofpro-urokinase-typeplasminogenactivatorbyhumanmonocytes,i)yfec^/仿畫，64:43074312.23.Brandtzaeg,P.，Joo,G,B.,Brusletto，B"andKierulf，P.1990.Plasminogenactivatorinhibitor1and2，alpha-2-antiplasmin，plasminogen,andendotoxinlevelsinsystemicmeningococcaldisease.77!rom6.57:271-278，24.Fuchs,H,Simon,M.M,，WaWch，R,,Bechtel，M-，andKramer，M.D.1996.Borreliaburgdorferiinducessecretionofpro-urokinase-typeplasminogenactivatorbyhumanmonocytes,//!聲ct/附畫，64:43074312，25.KJeram，P.)幼dSchembri，M.A,2000.Fimbriae-assistedbacterialsurfacedisplayofheterologouspeptides,</■^/l^dJWi'croWo/.290:215-221.26.Lahteenmaki，K.，Westerlund，B.，Kuusda，P,andKorhonen，T.K.1993.ImmobilizationofplasminogenonEscherichiacoliflagella.■FEWSMi'croifo/.丄e比106:309-314.27.Berge，A"andSjobring，U,1993.PAM,anovelplasmi加gen-bindingproteinfromStreptococcuspyogenes'J，C7柳.268:25417-25424.28.Pancholi，V.,andFischetti，V.A.1998.alpha-em)lase，anovelstrongplasmin(ogen)bindingproteinonthesurfeceofpathogenicstreptococci./CTie^z,27^:14503-14515.29.Harrington，D丄1996,Bacterialcollagenasesandcollagen-degradingenzymesandtheirpotentialroleinhumandisease,/"/ecf.T"附加w".64:1885-1891.30.Paul,R.,Lorenzl,S"Koedel,U.,Sporer,B.,Vogel,U.,Frosch,M.,andPfister，H.W.1998.MatrixraetailoproteinasescontributetotheWood-brainbarrieTdisruptiondolingbacterialmeningitis._4肌7/e''o/.44:592-600.31.Kiraura，S.，Nagai，A.,Onitsuka,T"Koga,T"Fujiwara，T.,Kaya^H.,andHamada,S.2000.InductionofexperimentalperiodontitisinmicewithPorphyromonasgingivalis-adheredligatures.J,7V油'"o/.71:1167-1173.權(quán)利要求1、作為纖溶酶原活化途徑成員或者具有直接或通過纖溶酶原活化途徑活化纖溶酶原之能力的化合物在制備用于在需要治療的對象中預防、防止和/或治療感染性牙周病的包含有效量的所述化合物的藥物組合物中的用途。2、根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中所述纖溶酶原活化途徑成員選自纖溶酶原、Lys-纖溶酶原、Glu-纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原和纖溶酶的三環(huán)域、小纖溶酶原、小纖溶酶、纖溶酶原激活劑、tPA和uPA，或者其中所述具有直接或通過纖溶酶原活化途徑活化纖溶酶原能力的化合物選自鏈激酶、沙，普酶、阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、阿尼普酶、孟替普酶、拉諾普酶、帕米普酶、葡激酶以及所述纖溶酶原活化途徑成員的重組形式和變體。3、根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述對象是人，所述纖溶酶原活化途徑成員是人纖溶酶原。4、根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述對象是人，所述纖溶酶原活化途徑成員是人纖溶酶。5、根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中所述對象是非人哺乳動物。6、根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中所述組合物還包含可藥用載體。7、根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述組合物選自水溶液、含漱溶液、凝膠、洗劑、香骨、粉末、骨、牙骨、繃帶或創(chuàng)傷敷料。8、根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中所述組合物通過噴霧施用。9、根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述施用選自表面、經(jīng)口、局部和全身施用。10、根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中所述施用是表面施用。11、根據(jù)權(quán)利要求10的用途，其中所述組合物在每平方厘米施用面積上包含約l微克至約500亳克纖溶酶原。12、根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中所述牙周病是細菌感染或由其所引起。13、根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其還活化炎性細胞、促進角質(zhì)形成細胞遷移、減少細菌生長、去除壞死組織、改善組織重建和/或增強細胞因子表達。14、根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中所述施用重復至少一次。15、根據(jù)權(quán)利要求13的用途，其中所述施用每天重復。16、根據(jù)權(quán)利要求1-15中任一項的用途，其中所述牙周病選自牙周炎、牙齦炎、壞死性牙齦炎、種植體周圍炎和種植體周圍粘膜炎。17、作為纖溶酶原活化途徑成員的化合物或者具有直接或通過纖溶酶原活化途徑活化纖溶酶原之能力的化合物在制備用于在需要治療的對象中促進感染性牙周創(chuàng)傷愈合的包含有效量所述化合物的藥物組合物中的用途。18、權(quán)利要求17的用途，其還減少纖維蛋白沉積、促進角質(zhì)形成細胞遷移、增強細胞因子表達、去除壞死組織、活化炎性細胞和/或改善組織重建。19、權(quán)利要求17的用途，其中所述纖溶酶原活化途徑成員選自纖溶酶原、Lys-纖溶酶原、Glu-纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原和纖溶酶的三環(huán)域、小纖溶酶原、小纖溶酶、纖溶酶原激活劑、tPA和uPA，或者其中所述具有直接或通過纖溶酶原活化途徑活化纖溶酶原能力的化合物選自鏈激酶、沙聲普酶、阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、阿尼普酶、孟替普酶、拉諾普酶、帕米普酶、葡激酶以及所述纖溶酶原活化途徑成員的重組形式和變體。20、權(quán)利要求17的用途，其中所述對象是人對象，所述纖溶酶原活化途徑成員是人纖溶酶原。21、權(quán)利要求17的用途，其中所述對象是人對象，所述纖溶酶原活化途徑成員是人纖溶酶。22、權(quán)利要求17的用途，其中所述對象是非人哺乳動物。23、權(quán)利要求17的用途，其中所述施用是表面施用，并且所述組合物在每平方厘米創(chuàng)傷面積上包含約1微克至約500亳克纖溶酶原。24、權(quán)利要求17的用途，其中所述施用重復至少一次。25、權(quán)利要求24的用途，其中所述施用至少每天重復。26、權(quán)利要求17的用途，其中所述感染性牙周創(chuàng)傷是由外傷造成的創(chuàng)傷或者由牙周手術(shù)或整形手術(shù)造成的創(chuàng)傷。27、一種用于治療、預防、和/或防止感染性牙周病的藥物組合物，其包含有效量的作為纖溶酶原活化途徑成員的化合物或者具有直接或通過纖溶酶原活化途徑活化纖溶酶原之能力的化合物。28、根據(jù)權(quán)利要求27的組合物，其中所述纖溶酶原活化途徑成員選自纖溶酶原、Lys-纖溶酶原、Glu-纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原和纖溶酶的三環(huán)域、小纖溶酶原、小纖溶酶、纖溶酶原激活劑、tPA和uPA，或者其中所述具有直接或通過纖溶酶原活化途徑活化纖溶酶原能力的化合物選自鏈激酶、沙，普酶、阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、阿尼普酶、孟替普酶、拉諾普酶、帕米普酶、葡激酶以及所述纖溶酶原活化途徑成員的重組形式和變體。29、根據(jù)權(quán)利要求27的組合物，其中所述纖溶酶原活化途徑成員是人纖溶酶原。30、根據(jù)權(quán)利要求27的組合物，其中所述纖溶酶原活化途徑成員是人纖溶酶。31、一種用于預防、防止和/或治療感染性牙周病的方法，其包括給需要此治療的對象施用包含有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-16的所述化合物的藥物組合物，所述化合物是纖溶酶原活化途徑成員或者具有直接或通過纖溶酶原活化途徑活化纖溶酶原的能力。32、根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中所述纖溶酶原活化途徑成員選自纖溶酶原、Lys-纖溶酶原、Glu-纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原和纖溶酶的三環(huán)域、小纖溶酶原、小纖溶酶、纖溶酶原激活劑、tPA和uPA,或者其中具有直接或通過纖溶酶原活化途徑活化纖溶酶原之能力的化合物選自鏈激酶、沙聲普酶、阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、阿尼普酶、孟替普酶、拉諾普酶、帕米普酶、葡激酶以及所述纖溶酶原活化途徑成員的重組形式和變體。33、根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中所述纖溶酶原活化途徑成員是人纖溶酶原。34、根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中所述纖溶酶原活化途徑成員是人纖溶酶。35、一種用于促進感染性牙周創(chuàng)傷愈合的藥物組合物，其包含有效量的作為纖溶酶原活化途徑成員的化合物或者有效量的具有直接或通過纖溶酶原活化途徑活化纖溶酶原之能力的化合物。36、根據(jù)權(quán)利要求35的藥物組合物，其中所述纖溶酶原活化途徑成員選自纖溶酶原、Lys-纖溶酶原、Glu-纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原和纖溶酶的三環(huán)域、小纖溶酶原、小纖溶酶、纖溶酶原激活劑、tPA和uPA，或者其中所述具有直接或通過纖溶酶原活化途徑活化纖溶酶原能力的化合物選自鏈激酶、沙，普酶、阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、阿尼普酶、孟替普酶、拉諾普酶、帕米普酶、葡激酶以及所述纖溶酶原活化途徑成員的重組形式和變體。37、根據(jù)權(quán)利要求35的藥物組合物，其中所述纖溶酶原活化途徑成員是人纖溶酶原。38、根據(jù)權(quán)利要求35的藥物組合物，其中所述纖溶酶原活化途徑成員是人纖溶酶。39、一種用于促進感染性牙周創(chuàng)傷愈合的方法，其包括給需要此治療的對象施用包含有效量化合物的藥物組合物，所述化合物是纖溶酶原活化途徑成員或者具有直接或通過纖溶酶原途徑活化纖溶酶原的能力。40、根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中所述纖溶酶原活化途徑成員選自纖溶酶原、Lys-纖溶酶原、Glu-纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原和纖溶酶的三環(huán)域、小纖溶酶原、小纖溶酶、纖溶酶原激活劑、tPA和uPA，或者其中具有直接或通過纖溶酶原途徑活化纖溶酶原能力的化合物選自鏈激酶、沙,普酶、阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、阿尼普酶、孟替普酶、拉諾普酶、帕米普酶、葡激酶以及所述纖溶酶原活化途徑成員的重組形式和變體。41、根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中所述纖溶酶原活化途徑成員是人纖溶酶原。42、根據(jù)權(quán)利要求39的組合物，其中所述纖溶酶原活化途徑成員是人纖溶酶。全文摘要本發(fā)明涉及纖溶酶原活化途徑成員和具有直接或通過纖溶酶原活化途徑活化纖溶酶原能力的化合物用于下列的用途預防、防止和治療牙周病包括種植體周圍炎，牙周創(chuàng)傷愈合以及促進人和非人對象的口腔健康。文檔編號A61K38/36GK101563100SQ200780032092公開日2009年10月21日申請日期2007年8月28日優(yōu)先權(quán)日2006年8月28日發(fā)明者托爾·尼,托馬斯·林德,李季男,郭永志申請人:歐姆尼治療有限公司