專利名稱：：組織膠原合成促進(jìn)用口服劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及含有羥基脯氨酸或其鹽作為有效成分的組織膠原合成促進(jìn)用口服劑、皮膚創(chuàng)傷治愈用口服劑、以及皮膚皺紋或松弛的抑制或改善用口服劑。
背景技術(shù)：
：膠原是填充生物體組織的細(xì)胞與細(xì)胞、或者細(xì)胞集團(tuán)與細(xì)胞集團(tuán)的間隙的細(xì)胞外基質(zhì)的主要蛋白質(zhì)成分，據(jù)說在哺乳動(dòng)物中占身體總蛋白質(zhì)的近30%(參照非專利文獻(xiàn)1)。膠原形成纖維狀或膜狀的構(gòu)造體，作為基本功能，起到組織的結(jié)構(gòu)維持、支撐、結(jié)合和增強(qiáng)等作用，大多存在于皮膚、骨、腱、韌帶、角膜、血管等中。伴隨這些組織的老化引起的皺紋和松弛、骨質(zhì)疏松等的主要原因認(rèn)為是組織膠原的減少、變性等。另?yè)?jù)報(bào)道，實(shí)際長(zhǎng)期的日光照射會(huì)使組織膠原顯著減少(參照非專利文獻(xiàn)2)，并且隨年齡增大生物體成分的新陳代謝的減弱成為膠原新陳代謝減弱的誘因而進(jìn)行(參照非專利文獻(xiàn)3)。作為促進(jìn)膠原合成的物質(zhì)，已知生長(zhǎng)因子TGFP-l(參照非專利文獻(xiàn)4)、植物提取物(參照專利文獻(xiàn)1)、膠原分解物(參照專利文獻(xiàn)2~5)或者氨基酸組合物(參照專利文獻(xiàn)6)等。更具體而言，已知作為通過口服具有膠原合成促進(jìn)作用的膠原分解物的特征序列的Gly-Pro-Hyp三肽，另一方面，已知Gly、Pro、Hyp等膠原構(gòu)成氨基酸與膠原中的構(gòu)成比相等的氨基酸組合物不顯示膠原合成促進(jìn)作用(參照專利文獻(xiàn)4)。另一方面，已知口服羥基脯氨酸的N-?；苌锞哂心z原合成促進(jìn)作用(非專利文獻(xiàn)4)，含有羥基脯氨酸的N-乙酰基衍生物的外用劑在歐洲作為創(chuàng)傷的治療藥物使用。另外，已知羥基脯氨酸及羥基脯氨酸的N-?；苌锏膶?duì)培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞的膠原合成促進(jìn)作用、通過外用對(duì)皺紋形成的抑制或者改善作用(專利文獻(xiàn)7)。但是，口服羥基脯氨酸的膠原合成促進(jìn)作用、皮膚的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用、皮膚的皺紋或松弛的抑制或改善作用未知。專利文獻(xiàn)1:日本特開2004-35527號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2:日本特開平7-278012號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3:日本特開2000-201649號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)4:日本特開2001-131084號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)5:日本特開2003-137807號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)6:日本特開2005-289928號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)7:國(guó)際公開第2000/051561號(hào)小冊(cè)子非專利文獻(xiàn)l:「生化學(xué)辭典第1版」、東京化學(xué)同人、1984年、「加齢&皮膚j、清至?xí)骸?986年、p.35「老化0少力二乂厶^制御」、7^t:。一？一、p.480非專利文獻(xiàn)2:非專利文獻(xiàn)31993年、p.151非專利文獻(xiàn)4:「工夕只^U^:/夕少'7yK'乇i^年-，一'乂《乂口y—」(Experimental&MolecularPathology)、1978年、第28巻第1期、p.58-64
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供安全且具有優(yōu)良效果的組織膠原合成促進(jìn)用口服劑、皮膚的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用口服劑、或者皮膚皺紋或松弛的抑制或改善用口服劑。本發(fā)明涉及以下(1)(10)。(l)一種組織膠原合成促進(jìn)用口服劑，其含有羥基脯氨酸或其鹽作為有效成分；(2)上述(1)的膠原合成促進(jìn)用口服劑，其中，組織為皮膚；(3)—種組織膠原合成促進(jìn)方法，其特征在于，口服有效量的羥基脯氨酸或其鹽；(4)羥基脯氨酸或其鹽在制造組織膠原合成促進(jìn)用口服劑中的應(yīng)用；(5)—種皮膚的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用口服劑，其含有羥基脯氨酸或其鹽作為有效成分；(6)—種皮膚的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)方法，其特征在于，口服有效量的羥基脯氨酸或其鹽；(7)羥基脯氨酸或其鹽在制造皮膚的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用口服劑中的應(yīng)用；(8)—種皮膚皺紋或松弛的抑制或改善用口服劑，其含有羥基脯氨酸或其鹽作為有效成分；(9)一種皮膚皺紋或松弛的抑制或改善方法，其特征在于，口服有效量的羥基脯氨酸或其鹽；(10)羥基脯氨酸或其鹽在制造皮膚皺紋或松弛的抑制或改善用口服劑中的應(yīng)用。發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，可以提供含有羥基脯氨酸或其鹽作為有效成分的、安全且具有優(yōu)良效果的組織膠原合成促進(jìn)用口服劑、皮膚的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用口服劑、或者皮膚皺紋或松弛的抑制或改善用口服劑。圖1是表示口服羥基脯氨酸后血清中的游離羥基脯氨酸濃度的圖；圖2是表示口服羥基脯氨酸后皮膚中的游離羥基脯氨酸濃度的圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明中使用的羥基脯氨酸，可以是任意一種羥基脯氨酸的立體異構(gòu)體。即，存在通過羥基脯氨酸的脯氨酸為D型或L型、羥基的位置為3位或4位、以及其立體異構(gòu)體為順式或反式而得到的8種立體異構(gòu)體，本發(fā)明中可以使用任意一種化合物。作為具體的羥基脯氨酸，可以列舉順式-4-羥基-L-脯氨酸、順式-4-羥基-D-脯氨酸、順式-3-羥基-L-脯氨酸、順式-3-羥基-D-脯氨酸、反式-4-羥基七-脯氨酸、反式-4-羥基-D-脯氨酸、反式-3-羥基-L-脯氨酸和反式-3-羥基-D-脯氨酸。羥基脯氨酸作為膠原中的主要構(gòu)成氨基酸成分，并且也是作為彈性蛋白的構(gòu)成氨基酸而在自然界廣泛存在的一種氨基酸，可以通過例如將來自豬或牛等動(dòng)物的膠原酸解，通過常規(guī)方法純化而制造。反式-4-羥基-L-脯氨酸，可以使用由擬無(wú)枝菌酸菌(Amycolatopsis)屬或指孢囊菌(Dactylosporangium)屬分離的脯氨酸4位羥化酶(日本特開平7-313179)制造。另外，順式-3-羥基-L-脯氨酸，可以使用由鏈霉菌(Streptomyces)屬分離的脯氨酸3位羥化酶(日本特開平7-322885)制造(/《一才0夕、、7卜！J一、14巻、31期、1997年)。使用上述微生物來源的酶制造的羥基脯氨酸，質(zhì)量?jī)?yōu)良，更優(yōu)選作為本發(fā)明中使用的羥基脯氨酸。作為羥基脯氨酸的鹽，可以列舉酸加成鹽、金屬鹽、銨鹽、有機(jī)胺加成鹽、氨基酸加成鹽等。作為酸加成鹽，可以列舉鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽等無(wú)機(jī)酸鹽，醋酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、乳酸鹽、a-酮戊二酸鹽、葡糖酸鹽、辛酸鹽等有機(jī)酸鹽。作為金屬鹽，可以列舉鈉鹽、鉀鹽等堿金屬鹽，鎂鹽、f丐鹽等堿土金屬鹽，銨鹽，鋅鹽等。作為銨鹽，可以列舉銨、四甲基銨等的鹽。作為有機(jī)胺加成鹽，可以列舉嗎啉、哌啶等的鹽。作為氨基酸加成鹽，可以列舉甘氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等的鹽。本發(fā)明的組織膠原合成促進(jìn)用口服劑、皮膚創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用口服劑、或者皮膚皺紋或松弛的抑制或改善用口服劑，含有羥基脯氨酸或其鹽，根據(jù)需要可以含有藥理學(xué)上容許的一種或兩種以上的載體，并且根據(jù)需要還可以含有其它用于治療的有效成分。本發(fā)明的組織膠原合成促進(jìn)用口服劑、皮膚創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用口服劑、或者皮膚皺紋或松弛的抑制或改善用口服劑，可以通過將羥基脯氨酸或其鹽與根據(jù)需要的載體一起混合，利用制劑學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
公知的任意方法制造。將本發(fā)明的組織膠原合成促進(jìn)用口服劑、皮膚創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用口服劑、或者皮膚皺紋或松弛的抑制或改善用口服劑制劑化時(shí)，可以使用賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、分散劑、懸浮劑、乳化劑、稀釋劑、緩沖劑、抗氧化劑、細(xì)菌抑制劑等添加劑。制劑的劑型可以列舉片劑、散劑、顆粒劑、乳劑、糖漿劑、膠囊劑等。制劑的劑型為糖槳?jiǎng)┑纫后w制劑的情況下，可以添加水，蔗糖、山梨糖醇、果糖等糖類，聚乙二醇、丙二醇等二醇類，蓖麻油、橄欖油、大豆油等油類，對(duì)羥基苯甲酸酯類等防腐劑，草莓香料、薄荷等香料類等進(jìn)行制劑化。另外，可以添加適合口服的物質(zhì)進(jìn)行制劑化，例如為片劑、散劑、顆粒劑等的情況下，可以添加賦形劑，如乳糖、白糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇等糖類，馬鈴薯、小麥、玉米等的淀粉，碳酸鈣、硫酸鈣、碳酸氫鈉、氯化鈉等無(wú)機(jī)物，甘草粉、龍膽粉等植物粉末等；崩解劑，如淀粉、瓊脂、明膠粉末、結(jié)晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、碳酸鈣、碳酸氫鈉、藻酸鈉等；潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂、滑石、氫化植物油、聚乙二醇、硅油等；粘合劑，如聚乙烯醇、羥丙基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素、明膠、淀粉糊液等；表面活性劑，如脂肪酸酯等；增塑劑，如甘油等。另外，在適合口服的制劑中，可以添加一般的飲食品中使用的添加劑，例如，甜味料、著色料、保存料、增稠穩(wěn)定劑、抗氧化劑、發(fā)色劑、漂白劑、防霉劑、膠基、苦味料、酶、光澤劑、酸味料、調(diào)味料、乳化劑、增強(qiáng)劑、制造用劑、香料、香辣調(diào)味料提取物等。適合口服的制劑可以是原狀，或者也可以是例如粉末食品、薄片狀食品、瓶裝食品、罐裝食品、蒸煮食品、膠囊食品、藥片狀、流動(dòng)食品、飲劑等形態(tài)。另外，也可以作為組織膠原合成促進(jìn)用、皮膚創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用、或者皮膚皺紋或松弛的抑制或改善用健康食品、功能食品、營(yíng)養(yǎng)輔助食品、特定保健用食品等飲食品使用。本發(fā)明的口服劑中的羥基脯氨酸或其鹽的濃度，根據(jù)口服劑的種類、給用該口服劑所期待的效果等適當(dāng)選擇，以羥基脯氨酸或其鹽的形式，通常為0.1-100重量％、優(yōu)選0.5~70重量％、特別優(yōu)選1~50重量％。本發(fā)明的口服劑的給藥量根據(jù)給藥形態(tài)、服用者年齡、體重等而不同，對(duì)成人而言一天的羥基脯氨酸或其鹽通常為5mg5000mg、優(yōu)選50mg5000mg、更優(yōu)選500mg5000mg，一天一次或分?jǐn)?shù)次給藥。給藥周期沒有特別限制，通常是1天1年，優(yōu)選1周3個(gè)月。另外，本發(fā)明的口服劑不僅可以用于人，也可以用于人以外的動(dòng)物(以下，稱為非人動(dòng)物)。作為非人動(dòng)物，可以列舉哺乳類、鳥類、爬蟲類、兩棲類、魚類等人以外的動(dòng)物。非人動(dòng)物給藥時(shí)的給藥量，根據(jù)動(dòng)物的年齡、種類等不同，體重lkg每天的羥基脯氨酸或其鹽通常為0.1mg100mg、優(yōu)選lmg100mg、更優(yōu)選10mg100mg，一天一次或數(shù)次給藥。給藥周期沒有特別限制，通常是1天1年，優(yōu)選1周3個(gè)月。以下，列舉考査羥基脯氨酸對(duì)皮膚的膠原合成促進(jìn)效果、創(chuàng)傷治愈促進(jìn)效果及皮膚皺紋或松弛的改善效果的試驗(yàn)例。試驗(yàn)例1試驗(yàn)使用H0S:HR-1小鼠(雌性、7周大、自日本SLC公司購(gòu)入)。將反式-4-羥基-L-脯氨酸(協(xié)和發(fā)酵工業(yè)株式會(huì)社制造，以下，簡(jiǎn)稱羥基脯氨酸)溶解于純化水中達(dá)到50mg/ml，以500mg/kg口服給藥。0.5、1、2、4、6、24小時(shí)后，在乙醚吸入麻醉下從腹部大靜脈采血得到血清。另外，頸椎脫臼后取背部皮膚，冷凍粉碎后，利用水提取得到皮膚提取物。該血清和該皮膚提取物中的羥基脯氨酸量，用等量的2。/。(w/v)磺基水楊酸進(jìn)行除蛋白處理后，用NBD-Cl(4-氯-7-硝基-2，l,3-苯并嗯二唑，東京化成工業(yè)公司制造)標(biāo)記仲氨基，通過使用ODS柱(4.6cm())X15cm、GL科學(xué)公司制造)的高效液相色譜法分析。結(jié)果如圖1和圖2所示。可以看出口服的羥基脯氨酸迅速地移動(dòng)到血液中和皮膚中。試驗(yàn)例2將29周大的F344/DuCrlCrlj大鼠(雄性、自日本于卞一》7y/《一株式會(huì)社購(gòu)入)12只分成兩組，每組6只。第一組大鼠自由攝取實(shí)施例5所述的飼料7天、第二組大鼠自由攝取比較例1所述的對(duì)照飼料7天。在戊巴比妥腹腔內(nèi)注射麻醉下將腹部用理發(fā)推子剃毛，在皮下兩個(gè)部位插入切割為約150mg的海綿(7^〃口y公司制造、2mm厚、約38mmX12mm)并縫合，再飼養(yǎng)7天后取出海綿。對(duì)一片海綿使用6N鹽酸20ml使其在ll(TC下反應(yīng)18小時(shí)進(jìn)行酸熱分解。得到的酸熱分解物用1M硼酸緩沖液(pH-10.6)稀釋IO倍后，通過與試驗(yàn)例1同樣的方法測(cè)定羥基脯氨酸量，作為大鼠膠原合成能力和組織修復(fù)能力的指標(biāo)。值以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性差異檢驗(yàn)通過student-t檢驗(yàn)進(jìn)行。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>結(jié)果如表1所示。攝取羥基脯氨酸的第一組大鼠中，來自熱分解的膠原的羥基脯氨酸量顯著增加，因此皮膚的膠原合成被促進(jìn)，可知其結(jié)果是組織修復(fù)即創(chuàng)傷治愈被促進(jìn)。試驗(yàn)例3將苦惱于慢性皮膚干燥、皮膚粗糙的47歲至65歲的女性21名作為受試者，將她們分為兩組，兩周的觀察期后，使第一組受試者(9名)服用實(shí)施例6所述的硬膠囊，早晚各兩枚膠囊共4周，使第二組受試者(12名)服用比較例2所述的硬膠囊，早晚各兩枚膠囊共4周。試驗(yàn)通過平行組間雙盲試驗(yàn)進(jìn)行。硬膠囊的服用開始時(shí)及服用結(jié)束后，對(duì)受試者進(jìn)行提問以下13的問題，以回答"1"的為一階段、回答"10"的為十階段，通過十階段法評(píng)價(jià)受試者的皮膚。問題1:請(qǐng)?jiān)u價(jià)你面部的皺紋水平。1.整個(gè)面部有皺紋。10.完全沒有皺紋。問題2:請(qǐng)?jiān)u價(jià)你面部的皮膚彈性。1.沒有彈性。10.有極強(qiáng)的彈性。問題3:請(qǐng)?jiān)u價(jià)你面部皮膚有無(wú)張力。1.完全沒有張力。2.有張力。上述評(píng)價(jià)中，問題1中，階段越高，表示受試者感受到皮膚皺紋改善，問題2和問題3中，階段越高，表示受試者感受到與皮膚松弛相關(guān)的彈性和張力都變高。另外，改善率(％)根據(jù)式1計(jì)算。式1:改善率(e/。"服用后的階段平均值/服用前的階段平均值X100得到的結(jié)果如表2所示。另外，表中的值表示平均值。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>從表2可以看出，通過服用反式-4-羥基-L-脯氨酸，面部皺紋以及松弛得到改善。以上的試驗(yàn)例表示口服的羥基脯氨酸轉(zhuǎn)移到皮膚中，具有膠原合成促進(jìn)效果、創(chuàng)傷治愈效果及皮膚皺紋或松弛改善效果。以下，列舉本發(fā)明的實(shí)施例。實(shí)施例1含羥基脯氨酸的片劑的制造通過常規(guī)方法制造含有反式-4-羥基-L-脯氨酸的片劑。g卩，將下述各成分均勻混合，并將該混合物通過單沖式壓片機(jī)壓片，得到直徑5mm、重量15mg的組織膠原合成促進(jìn)用片劑。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例2含羥基脯氨酸的顆粒劑的制造將實(shí)施例1中得到的片劑粉碎、制粒、整粒，得到20-50目的皮膚創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用顆粒劑。實(shí)施例3含羥基脯氨酸的飲料的制造通過將下述各成分?jǐn)嚢枞芙庵辆鶆?，并添加純化水使總量?000ml，制造含有反式-4-羥基-L-脯氨酸的組織膠原合成促進(jìn)用飲料。另外，下述成分中的適量，對(duì)于香料、色素是指通常的飲料制造中所使用的量，對(duì)于純化水是指加上其它成分使總量為1000ml所需要的量。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例4含羥基脯氨酸的糖果的制造通過常規(guī)方法制造由下述各成分組成的含有反式-4-羥基-L-脯氨酸的皮膚創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用糖果。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>粉末山梨糖醇香料山梨糖醇晶種98.750.200.05實(shí)施例5含羥基脯氨酸的動(dòng)物飼料的制造通過常規(guī)方法制造由下述各成分組成的含有反式-4-羥基-L-脯氨酸的動(dòng)物飼料。表6成分量(g)反式-4-羥基-L-脯氨酸1.0酪蛋白25.0蔗糖40.2纖維素5.0酒石酸氫膽堿0.2DL-蛋氨酸0.4L-天冬氨酸6.7玉米淀粉12.0玉米油5.0AIN76組成的維生素混合(未添加膽堿)3.5AIN76組成的礦物質(zhì)混合3.5實(shí)施例6含羥基脯氨酸的膠囊的制造分別稱量下述各成分后，投入混合機(jī)中，充分混合均勻后，通過常規(guī)方法密封入硬型明膠膠囊中，制造每一枚膠囊含有約500mg反式-4-羥基丄-脯氨酸的硬膠囊。表7成分量(g)反式-4-羥基-L-脯氨酸500.0微晶纖維素97.5膠態(tài)二氧化硅12.5硬脂酸鎂12.5比較例1將實(shí)施例5的反式-4-羥基-L-脯氮酸替換為L(zhǎng)-天冬氨酸，制造動(dòng)物飼料。比較例2將實(shí)施例6的反式-4-羥基-L-脯氨酸替換為玉米淀粉，制造膠囊。工業(yè)上的利用可能性根據(jù)本發(fā)明，可以提供含有羥基脯氨酸或其鹽作為有效成分的組織膠原合成促進(jìn)用口服劑、皮膚創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用口服劑、或者皮膚皺紋或松弛的抑制或改善用口服劑。權(quán)利要求1.一種組織膠原合成促進(jìn)用口服劑，其含有羥基脯氨酸或其鹽作為有效成分。2.如權(quán)利要求1所述的膠原合成促進(jìn)用口服劑，其中，組織為皮膚。3.—種組織膠原合成促進(jìn)方法，其特征在于，口服有效量的羥基脯氨酸或其鹽。4.羥基脯氨酸或其鹽在制造組織膠原合成促進(jìn)用口服劑中的應(yīng)用。5.—種皮膚的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用口服劑，其含有羥基脯氨酸或其鹽作為有效成分。6.—種皮膚的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)方法，其特征在于，口服有效量的羥基脯氨酸或其鹽。7.羥基脯氨酸或其鹽在制造皮膚的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用口服劑中的應(yīng)用。8.—種皮膚皺紋或松弛的抑制或改善用口服劑，其含有羥基脯氨酸或其鹽作為有效成分。9.一種皮膚皺紋或松弛的抑制或改善方法，其特征在于，口服有效量的羥基脯氨酸或其鹽。10.羥基脯氨酸或其鹽在制造皮膚鈹紋或松弛的抑制或改善用口服劑中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明的目的在于提供安全且具有優(yōu)良效果的組織膠原合成促進(jìn)用口服劑、皮膚的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用口服劑、或者皮膚皺紋或松弛的抑制或改善用口服劑。根據(jù)本發(fā)明，可以提供含有羥基脯氨酸或其鹽作為有效成分的組織膠原合成促進(jìn)用口服劑、皮膚的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)用口服劑、或者皮膚皺紋或松弛的抑制或改善用口服劑。文檔編號(hào)A61P17/00GK101404998SQ200780010388公開日2009年4月8日申請(qǐng)日期2007年3月23日優(yōu)先權(quán)日2006年3月23日發(fā)明者川田陽(yáng)子,神村彩子,神谷俊一申請(qǐng)人:協(xié)和發(fā)酵工業(yè)株式會(huì)社