專利名稱：：代謝疾病治療中的內皮素和內皮素受體激動劑的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥和健康領域。更特別地，本發(fā)明涉及使用至少一種內皮素或內皮素受體激動劑減少食物攝入，體重減輕或治療對象代謝疾病，如糖尿病和肥胖癥的方法和組合物。
背景技術：
：肥胖癥影響上百萬人，特別是在諸如美國等發(fā)達國家。根據世界衛(wèi)生組織，全世界超過10億成人超重并且其中至少3億肥胖(具有大于30的體重指數(BMI))。Smyth等，AtoweMeJz""e12:75-80(2005)。僅在美國，大約65%的成人超重或肥胖。令人擔憂地，超重和肥胖也影響全世界估計10%的兒童。Yach等，Med/c,"e12:62-66(2005)。過重使個人易患多種癥狀和疾病，包括心血管疾病、中風、關節(jié)炎、2型糖尿病、睡眠窒息、呼吸系統(tǒng)疾病、腸胃道返流性疾病、代^"綜合癥、癌癥，以及心理后果(psychologicalconsequence)，^口自卑禾口臨床'f尤洧卩癥。重要;也，月巴胖癥也顯著提高幾乎所有其它疾病發(fā)病率和死亡率的可能性。盡管肥胖癥的發(fā)病機理通常是多因素的，但^本原因在于熱量(即食物或營養(yǎng))攝入相對于能量消耗不成比例地高。過量的熱量導致增多的脂肪或脂肪組織的產生。這些脂肪組織的持續(xù)流失可以降低并甚至消除肥胖癥的可怕結果。典型地，單獨限制總熱量:t聶入或與通過例如增加鍛煉增大能量消耗導致脂肪組織減少。如何方案如何簡便，然而超重和肥胖個體中持續(xù)的體重減輕仍格外困難，特別是對于肥胖患者。治療策略嚢括從膳食和鍛煉方案，行為修改技術，和藥物療法，如食名夂抑制劑和食物吸收抑制劑，到胃旁路手術(gastricbypasssurgery)和機械設備，如頜繞線(jawwiring)、腰索(waistcords)和氣嚢。最終地，這些策略中的每一個的目標是食物或營養(yǎng)攝入的持續(xù)減少。然而，多種因素使達到持續(xù)的、減少的食物攝入的目標變得復雜。一些治療對極度肥胖完全不可行。舉例來說，這些個體通常過大而無法安全地鍛煉或成為手術介入的較差對象。同時，盡管身體脂肪的流失是期望的，而無脂肪體重(leanbodymass)的流失則不是期望的。無脂肪體重構成肌肉、重要器官、骨、身體中的結締組織和其它非脂肪組織，并且其流失對個體的健康有損害。但是，多種治療導致脂肪組織和無脂肪體重的同時流失，使得該個體由于治療而虛弱。使食物攝入持續(xù)減少變復雜的額外因素包括增大的食欲和明顯的能量限制后降低的能量水平。內皮素是健康和心血管系統(tǒng)維持的關鍵因素。參jS斧/如Miyauchi,爿朋.尺ev.P/jj/s/o/.61:391-415(1999)。一個小組建議使用拮抗或阻斷內皮素表達的方法和組合物，通過干擾內皮素轉化酶-2(ECE-2)的酶活性乾向內皮素系統(tǒng)以治療代謝紊亂，如肥胖癥或糖尿病。參X辦如美國專利申請?zhí)?003/0232044。換句話說，代謝紊亂的治療通過使用ECE-2活性的調控劑降低或消除內皮素活性來完成。隨著世界范圍內肥胖個體數量的持續(xù)增長，急需減少食物攝入并引起體重減輕，以及在長時期中維持體重減輕的更有效方法。內皮素和內皮素受體激動劑為通過食物攝入減少而受益的癥狀或疾病提供了新的治療可選方案。
發(fā)明內容本文提供了治療可通過減少食物攝入而緩解的癥狀或疾病的方法和組合物，其包括單獨或與減少食物攝入、引起飽足感或增強體重減少或維持的其它化合物或組合物聯(lián)合給予有效量的內皮素或內皮素激動劑。這樣的方法可用于治療各種癥狀或疾病，包括肥胖癥、n型糖尿病、代謝綜合癥和胰島素抵抗綜合癥(insulin-resistancesyndrome)。因此，一方面，本文提供了通過以有效減少食物攝入的量給予內皮素或內皮素激動劑，減少渴望或需要其的對象的食物攝入的方法。另一方面，本文提供了減輕或維持渴望或需要的對象的體重的方法，該方法包括以有效減少或維持體重的量給予內皮素或內皮素激動劑。本文進一步提供了治療渴望或需要它的對象的肥胖癥的方法，該方法包括以有效治療肥胖癥的量給予內皮素或內皮素激動劑。本文也提供了預防或治療渴望或需要它的對象的代謝疾病的方法，其包括以有效減輕或緩解所述代謝疾病至少一種癥狀的量給予內皮素或內皮素激動劑。在一些實施方式中，代謝疾病是肥胖癥、糖尿病、胰島素抵抗綜合癥、X綜合癥(syndrome-X)或與過量熱量攝入相關的疾病。在上述方法的一個實施方式中，內皮素是內皮素-1,如SEQIDNOs:1-6;內皮素-2，如SEQIDNOs:7-9;或內皮素-3,如SEQIDNOs:10-13中的至少一種。在一種實施方式中，內皮素是內皮素-3。在另一實施方式中，內皮素是SEQIDNOs:1、7、10或其任意組合中的任一種。另一實施方式中，內皮素是SEQIDNOs:1-13或其任意組合，包括特定排除SEQIDNOs:1-13中一個或多個的每個子集中的任一種。而在另一實施方式中，內皮素具有與SEQIDNOs:1、7或10中任一至少75。/。、至少80%、至少85%、至少90%或95%—致性的氨基酸序列。又在另一實施方式中，內皮素激動劑是與SEQIDNOs:l、7或10中任一相比，含有不多于5個氨基酸替換、刪除或插入，或不多于10個氨基酸替換、刪除或插入的內皮素類似物。在又一實施方式中，內皮素激動劑是與SEQIDNOs:1、7或10中任一相比，含有不多于5個氨基酸替換的內皮素類似物。在另一實施方式中，內皮素激動劑是內皮素-1、內皮素-2或內皮素-3的片段，其中所述片段與ETA或ETB受體結合并激活它們。在另一實施方式中，所述片段優(yōu)選地結合并激活ETB受體；而在一種實施方式中，所述片段結合并激活ETb受體，但不激活ETa受體。在一種實施方式中，所述片段與全長內皮素，如SEQIDNOs:l-13相比，不含有多于7個氨基酸刪除。而在另一方面，內皮素受體激動劑是角蝽毒素(sarafotoxin),例如SEQIDNO:15、16、17、18、31或32中任一。也包括SEQIDNO:15、16、17、18、31或32的任意組合，包括可以特定排除前述SEQIDNOs中一個或多個的其任意子集。又在另一實施方式中，角蝰毒素具有與SEQIDNO:15、16、17、18、31或32中任一至少80%、至少85%、至少90%或95%的氨基酸序列一致性。在另一實施方式中，角蝰毒素與15、16、17、18、31或32中任一比較，含有不多于IO個，或不多于5個的氨基酸刪除、插入或替換。在一種實施方式中，角蝰毒素優(yōu)選地結合并激活ETB受體。在一種其它的實施方式中，內皮素激動劑是蛙皮抗菌肽且在更特別的實施方式中，蛙皮抗菌肽是腺香調節(jié)素。在一種實施方式中，蛙皮抗菌肽或腺苷調節(jié)素具有SEQIDNOs:20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64中任一或其組合的氨基酸序列，包括可以特定排除SEQIDNOs20-30和33-64中一個或多個的任意子集的氨基酸序列。而在另一實施方式中，蛙皮抗菌肽或腺苷調節(jié)素與SEQIDNOs:20-30或33-64中任一具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或95%的氨基酸序列一致性。在另一實施方式中，蛙皮抗菌肽或腺普調節(jié)素與SEQIDNOs:20-30或33-64中任一相比，含有不多于10個，或不多于5個的氨基酸刪除、插入或替換。在一種實施方式中，蛙皮抗菌肽或腺苷調節(jié)素優(yōu)選地結合并激活ETB受體。本文公開的方法也可以進一步包含給予化合物，其中所述化合物引起飽足感，減少食物攝入或增強體重減輕或維持。這樣的化合物可以包括但不限于毒封斤外泌肽、糊精、PYY、瘦蛋白、泌酸調節(jié)肽、神經調節(jié)肽或縮膽嚢肽(CCK)、它們的激動劑類似物或其衍生物。在特定的實施方式中，內皮素激動劑是腺苷調節(jié)素、IRL1620、角蝰毒素S6c或其任意組合。在一些實施方式中，內皮素或內皮素激動劑通過ETB受體作用。在特定的實施方式中，內皮素或內皮素激動劑不通過ETA受體作用。本文進一步提供了含有內皮素或內皮素激動劑中至少一種的制劑的用途，用于以有效治療狀況的量治療如在此公開的可通過減少食物攝入來緩解的癥狀或疾病。也提供了內皮素或內皮素激動劑中至少一種在制備藥物中的用途，所述藥物用于介導效果或治療在此公開的疾病或紊亂。圖1示出了使用內皮素受體B(ETb)激動劑在120分鐘內劑量依賴的食物攝入減少。圖2顯示了使用ETB激動劑在30分鐘內劑量依賴的食物攝入減少。圖3示出了使用ETB激動劑在60分鐘內劑量依賴的食物攝入減少。圖4顯示了維持高脂肪膳食的、膳食引發(fā)肥胖(DIO)的小鼠中給予腺苷調節(jié)素的身體脂肪的減少，相對于維持高脂肪膳食的僅接受載體(vehicle)治療的小鼠或低脂肪膳食喂養(yǎng)并僅接受載體治療的小鼠。圖5顯示了維持高脂肪膳食并接受300nmol/kg/d腺苷調節(jié)素28天的，膳食引發(fā)肥胖(DIO)的小鼠的體重減少。高脂肪鹽(HFsaline):維持高脂肪膳食并僅接受載體(即鹽)治療的小鼠。低脂肪鹽(LFsaline):維持低脂肪膳食并僅接受載體(即鹽)治療的小鼠。接受肽YY(PYY)治療同時維持高脂肪膳食的DIO小鼠作為陽性對照。圖6顯示了維持高脂肪膳食并通過皮下(s.c.)滲透泵接受20nmol/kg/d內皮素1(ET-1)治療28天的DIO小鼠的身體脂肪的減少。發(fā)明詳述本文提供了使用內皮素和內皮素受體激動劑在渴望或需要它的對象中減少食物攝入，或減輕或維持體重。內皮素在許多正常的生理和病理生理狀態(tài)下產生強有力的活性。斧/如,Kedzierski等，乂朋.P/amiaco/.rox,co/.41:851-76(2001)。內皮素發(fā)揮強有力的副分泌血管收縮肽的作用，維持基礎的血管彈性并調控血管生長。這些肽控制呼吸道和血管的彈性，控制腎臟水和鈉的分泌以及酸堿平衡，和神經傳導。相反地，內皮素也參與高血壓、動脈石更化、心臟肥大、充血性心力衰竭、肺動脈高血壓和腎臟衰竭的發(fā)生和病理學。刺激內皮素產生和激活的因子包括凝血酶、TGF-、TNF-、去曱腎上腺素和胰島素。參X辨如，Miyauchi等，爿朋.itev.尸/^z》/.61:391-415(1999)。但是，目前內皮素在肥胖癥和糖尿病中的唯一作用涉及在患有這些疾病的患者中觀察到的血管并發(fā)癥和高血壓的控制。參i辦如，Wolpert等，MetoZ)ofow42:1027-30(1993);Ferri等，ixp.C//".五"fifoc"朋/.105(S2):38-40(1997)。本文公開了全身給予內皮素產生減少食物攝入，減輕身體重量或兩者兼具的發(fā)現。因此，使用內皮素和內皮素受體激動劑減輕重量的方法代表治療代謝疾病，如肥胖癥、n型糖尿病、胰島素抗性、x綜合癥、代謝綜合癥和與不期望或過量熱量攝入相關的其它疾病的新治療方法。在這樣的對象中減少食物攝入也可能對降低血漿葡萄糖水平、血漿脂質水平和這些對象中心血管疾病風險有用。除非另有定義，本文所用的所有^t支術和科學術語具有與本發(fā)明所屬領域的技術人員通常理解相同的意義。所有的專利、申請、公開的申請和本文提到的其它文獻在這里被完整引入作為參考。如果本部分所述定義與專利、申請、公開的申請和本文引入作為參考的其它文獻中所述的定義不同或不一致，本部分所述的定義勝于本文引入作為參考的定義。用在這里，"一/一個(a)，，或"一/一個(an)"表示"至少一個"或"一個或多個"。術語"可通過減少食物攝取治療、緩解或預防的癥狀或疾病"指的是對象中由相對高的食物攝入引起的、惡化的或加劇的，或可以通過減少食物攝入和/或體重緩解或避免的任何癥狀或疾病。這些癥狀或疾病包括但不限于月巴胖癥，糖尿病，包括II型糖尿病，胰島素抵抗綜合癥和X綜合癥。減少食物攝入也可以按照膳食計劃輔助控制、減輕或保持重量，并減少每天的熱量攝入。術語"內皮素激動劑"指的是任何分離的、天然發(fā)生的或合成的化合物，其與內皮素受體結合并在該受體處模擬內皮素的食物減少攝入作用，導致食物攝入的減少。因此，出于本申請的目的，內皮素激動劑和內皮素受體激動劑可以被互換使用。在一些實施方式中，內皮素激動劑特異地模擬內皮素-1、內皮素-2或內皮素-3的一種或多種作用。生物功能包括起始一個或多個信號傳導組件，如PLC激活、磷脂酶A2激活、磷脂酶D激活、MAPK;敫活、原癌基因(proto-oncogene)表達(^口c-/os*，c-w少c，)或Shc-Grb2復合體形成。這些活性可以根據標準技術和試驗體外或體內測定。參見例如，Badr等，J.C/肌/"veW.83:336-42(1989);Takuwa等，丄C/〖力./wve沈85:653-58(1990);Resnik等，￡wJ.說0c/2e附.189:415-21(1990);Cazaubon等，J.說o/.C7ew.269:24805-09(1994);Wang等，爿附.丄尸A，,0/.267:C1130-35(1994);Simonson等，丄Ao/.267:8643-49(1992)。用在這里，術語"肥胖癥"或"肥胖，，典型地是指具有30kg/n^或更高的身體質量指數(BMI)的個體。參見國家健康研究所，成人超重和肥胖的識別、評估和治療的臨床指南(1998)(NationalInstituteofHealth,ClinicalGuidelinesontheIdentification,Evaluation,andTreatmentofOverweightandObesityinAdults(1998))。術語"超重"描述了具有25kg/n^或以上身體質量指數(BMI)，但小于30kg/m2的個體，或無論其BMI多大，有減輕體重愿望的個體。BMIl基于數據公式表達體重對身高的關系(或比例)的量度，該公式中個體以千克為單位的人體重除以以米為單位的他或她身高的平方(即體重/(身高)2(wt/(ht)2))。術語"代謝紊亂(代謝疾病，metabolicdisorder)"指的是由體內異常的能量使用或消耗引起或表征的紊亂、疾病和癥狀。代謝疾病的實例包括但不限于肥胖癥、II型糖尿病、胰島素抵抗綜合癥、代謝綜合癥和X綜合癥。用在這里，術語"對象(subject)"包括人以及馴養(yǎng)和農場的動物，非人類的靈長類，以及動物園動物，體育動物(sportsanimals)或寵物動物，如狗、貓、馬、牛等，和其它哺乳動物。技術人員應該理解，對象是適合食物攝取減少、體重減輕或體重減輕維持的期望或需求的個體。在特定的實施方式中，對象是人類。術語"治療(treating)"或"治療(treatment)"指的是給予患有狀況或疾病，或易患癥狀或疾病的對象一種或多種治療試劑，目的是減輕、緩解、改善、治療、改善、改進、影響、減緩或停止進展，減緩或停止疾病的惡化，狀況或失調的至少一種癥狀，或易患狀況或紊亂的傾向。內皮素系統(tǒng)包含三種內皮素，兩種內皮素受體和兩種內皮素特異蛋白酶。內皮素以三種同種型(isoform)之一存在內皮素-l(ET-l)、內皮素-2(ET-2)或內皮素-3(ET-3)。每一種內皮素起始于大約200個氨基酸殘基的內皮素前體蛋白(preproendothelin)。弗林樣(Furin-like)肽鏈內切酶在二基位點(dibasicsites)剪切內皮素前體蛋白形成大約37-41個氨基酸的生物學上無活性的中間體，被稱為大內皮素(bigendothelin)(大ETs)或前內皮素(pro-endothelin)。內皮素轉化酶(如ECE-1和ECE-2)隨后剪切大ETs形成21個氨基酸的有生物活性的終產物。哺乳動物表達兩種內皮素受體，ETa和ETb。這些G蛋白偶聯(lián)的受體在其400個氨基酸的序列中具有7個跨膜域并引起包含磷脂酶C-(3激活、升高的胞內Ca"和即刻早期基因表達在內的信號傳導級聯(lián)放大。受體對三種ETs顯示出不同的親和性。ETA對ET-a和ET-2具有亞納摩爾級的親和性(20-60pm)，但對ET-3沒有(6500pm)。ETB對ET-1、ET-2和ET-3具有均等的親和性。參見例如，Arai等,A^wre348:730-32(1990);Sakurai等，淑眺348:732-35(1990);Sakumi等，7)尸S13:103-08(1992);美國專利號6,821,743。ET-3/ETB系統(tǒng)對于ET-1/ETA系統(tǒng)顯示出功能上的獨特性。ET-1/ETA系統(tǒng)隨著在整個脈管系統(tǒng)中觀察到的ETA表達，顯示出介導增殖和引起血管收縮的效果。因此，ETA拮抗劑通常被用來恢復內平衡。另一方面，ETs的表達顯示出更局限于在腸、腦垂體、大腦、下頜下腺、大腦、心臟、腎臟、空腸和胃部中表達。參見Matsumoto等，說oc/2ew.5/op/j，.We義Co/w附w".164:74-80(1989);Shiba等，說0c/2e附.5zop/2".Co/mwmw186:588-94(1992)。ET-3/ETB顯示出主要介導血管舒張，但是在一些情況下也介導血管收縮和細胞增殖。典型地，內皮素的循環(huán)水平低于生物活性所需水平。舉例來說，血管壁內的局部ET-1濃度大于等于其血漿水平的100倍。參見例如，Kedzierski等，乂朋.itev.尸/2a/7wc0/.7bx/co/.41:851-76(2001)。對內皮素的血管活性高局部濃度的明顯需求允許以較低劑量全身給予內皮素拮抗劑和激動劑，以利用內皮素的其它效果。在一種情況下，內皮素激動劑在全身給予后成功地在動物中提高了化學療法介導的腫瘤抑制，而沒有不良的心血管效果。參見美國專利申請?zhí)?004/0138121;Rajeshkumar等，5rea對C朋cer尺"94:237-47(2005)。ET-1、ET-2或ET-3的任意合適來源可被用作本方法的ET。ETs可從天然發(fā)生的來源中被分離或純化，使用分子生物學技術(如外源生產)或使用化學合成生產。在一種實施方式中，在公開的組合物和方法中有用的ETs不包括大ETs(前體-ETs)或ETs前體蛋白(prepro-ETs)。在另一實施方式中，公開的方法和組合物中有用的ETs具有包含36個氨基酸或更少的氨基酸序列。用于本方法及組合物的示例性內皮素列于表1。典型地，內皮素包含4個半胱氨酸殘基，其在兩個外側和兩個內側半胱氨酸對之間形成2組二石JU建。例如，SEQIDNO:1中的二好^建可能存在于t和15C之間與SC和"C之間。在一種實施方式中，內皮素和內皮素激動劑可以以包含本文所述的內皮素、角蛤毒素、蛙皮抗菌肽或腺苷調節(jié)素的失活(前體藥物)的形式提供給對象。合適的前體藥物形式包括內皮素前體蛋白或大ET。表l示例性的內皮素內皮素-1c(CSCSSLMDKECVYFCHLDIIW)SEQIDNO:1c(CSCSSLLDKECVYFCHLD而)SEQIDNO:2c(CSCATFLDKECVYFCHLDIIW)SEQIDNO:3c(CSCASFLDKECVYFCHLDIIW)SEQIDNO:4c(CSCSSLLDEECVYFCHLDIIW)SEQIDNO:5c(CSCSSLLDKECVYFCLLDIIW)SEQIDNO:6內皮素-2c(CSCSSWLDKECVYFCHLDIIW)SEQIDNO:7c(CSCNSWLDKECVYFCHLDIIW)SEQIDNO:8c(CSCNSWLDKECIYFCHLDIIW)SEQIDNO:9內皮素-3c(CTCFTYKDKECVYYCHLD而)SEQIDNO:10c(CTCYTYKDKECVYYCHLDIIW)SEQIDNO:11c(CTCFTYKDRECVYYCHLDIIW)SEQIDNO:12c(CTCYSYKDKECVYYCHLDIIW)SEQIDNO:13示例性的ETB激動劑包括但不限于ET-l、ET-2或ET-3的類似物、衍生物或功能片段。而且，內皮素的代表性序列包括但不限于Inoue等，Prac.Ato/.86:2863-67(1989)和美國專利號5,294,569;5,231,166及4,981,950中公開的那些，其在這里引入作為參考。類似物、衍生物或片段可以使用標準分子生物學技術或化學合成制備，并且是保持生物功能或活性的，如本文所述的減少食物攝入，減低體重或兩者兼具。在一種實施方式中，激動劑結合ETB受體。在特定的實施方式中，激動劑選擇性地結合ETb受體，而以不足以在標準測試中引起可檢測ETa激活的水平結合ETA。在一種實施方式中，激動劑不結合ETA受體。在一些實施方式中，內皮素激動劑以比結合ETA受體更高的親和性結合ETB受體，如親和性高至少5倍、10倍、25倍、100倍、200倍或1000倍。用于公開的方法的ETs激動劑包括但不限于BQ-788(ClinalfaAG;N-反式-2,6-二甲基哌啶子基羰基-L卞曱基亮氨酰-D-l-曱氧基羰基色氨?；?D-正亮氨酸；Ishikawa等，Prac.Ato/.爿o^.91:4892(1994)),IRL1620(N-琥珀?；?[Glu9,Ala"'"]-內皮素1片段8-21;Takai等，6&c/2e附.說o//2".184:953(1992)),BQ-3020(N-乙?；?[Ala"'"]-內皮素1片段6-21;Ihara等，丄,/e&t51:PL47-PL52,(1992))和[八1^'311'15]￡1-1(ASASSLMDKEAVYFAHLDIIW[SEQIDNO:14〗)。激動劑的另一來源是角繚毒素。從非洲穴蝰(burrowingasp)，毒蛇穴繚(Atractaspicengadensisan)中分離，該促凝毒素(pro-coagulanttoxin)優(yōu)選地與ETB結合。參見Takasaki等，Toxicon26:543-48(1988)。一些示例性的角蝰毒素ETB激動劑在下面的表2中公開。其它的角螋毒素包括CSCNDMNDKECMYFCHQDVIW(SEQIDNO:31)和CSCKDMSDKECLNFCHQDVIW(SEQIDNO:32)。與內皮素相似，二硫鍵可能存在于角蝰毒素半胱氨酸殘基的外側對和內側對之間。表2示例性的角蝽毒素ETB激動劑<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>角發(fā)毒素S6dc(Cys-Thr-Cys-Asn-Asp-Met-Thr-Asp-Lys-Glu-Cys-Leu-Tyr-Phe-Cys-His-Glu-Asp-Ile-Ile-Trp)[SEQIDNO:18]而在另一實施方式中，ET受體激動劑是腺苷調節(jié)素。參見例如，Donly等，尸rac,WW/.爿o^.t/&489:10960-963(1992);Amiche等，說o/^，.i饑Cowm.191:983-90(1993)。腺苷調節(jié)素的已知序列包括Genbank序列X70278和X72387。最初從巨葉樹蛙(frogi%;〃om^toaWco/w)的皮膚分離，腺普調節(jié)素屬于蛙皮抗菌肽家族，其是抗微生物肽的家族。參見例如，Amiche等，丄說o/.C/7e附.269:17847-52(1994);Zhou等，所oto:/mo/.丄加.27:725-30(2005)。示例性的腺普調節(jié)素列于表3。通過給予額外的示例性腺苷調節(jié)素減少食物攝入的實例列于表4。在一種實施方式中，內皮素受體激動劑是與載體或不治療相比，在給予后120分鐘顯示至少15%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%或至少70%食物攝入減少的那些。表3示例性的腺香調節(jié)素<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表4.通過腺苷調節(jié)素在120分鐘的食物攝入(FI)抑制百分數<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>其它ET受體激動劑使用本領域已知的方法可以容易地識別。參見例如Davenport,P/w7wac0/0g/c"/Wev.54:219-26(2002);美國專利號6,821,743。舉例來說，激動劑可以在表達ETA、ETB或兩者的細胞中使用已知內皮素引起的活動的體外或體內測定方法而容易地識別。這些細胞可以使用已知的分子生物學技術內源地或外源地表達受體。在一種實施方式中，選擇性的ETV激動劑不與ETa結合或引起可測量的ETa激活。相反地，在另一實施方式中，選擇性的ETA激動劑不與ETb結合或引起可測量的ETb激活。這樣的激動劑可以包含大量化學類別。在某些實施方式中，它們是有機分子，優(yōu)選地具有大于50且小于約2,500道爾頓分子量的小有機化合物。ET受體激動劑也包括生物分子，像抗體、肽、多肽、肽類似物(peptidomimetics)、糖類、月旨肪酸、類固醇、噤呤、嘧咬、右亍生物、結構類似物或其組合。在一些實施方式中，ET受體激動劑可以包括肽和蛋白試劑，如抗體或結合片,史或其類似物，如Fv、F(ab')2和Fab。已知的藥物學試劑可能進行定向或隨機的化學改性，如?；?、烷基化、酯化、酰胺化(amidification)等，以產生作為非選擇性或選擇性ET受體激動劑的結構類似物。在一些實施方式中，ET受體激動劑是內皮素變體，如ET-1、ET-2或ET-3的類似物或功能片段。功能片段是具有少于21個氨基酸，但仍結合并激活內皮素受體，導致食物攝入和/或體重減少的內皮素。類似物包括具有5個或更少的氨基酸替換的那些，以及與SEQIDNO:1、SEQIDNO:7或SEQIDNO:10具有至少75%、80%、85%、90%或95%氨基酸序列一致性的那些。在另一實施方式中，內皮素變體與諸如SEQIDNO:1、SEQIDNO:7或SEQIDNO:IO的已知內皮素相比，具有不多于10個、不多于7個、不多于5個、不多于4個、不多于3個、不多于2個或僅一個氨基酸刪除、插入或替換。來自人類以外其它物種的ET-1、ET-2和ET-3序列也被考慮。在一些實施方式中，ET受體激動劑是諸如本文表2或3的角蝰毒素或腺苷調節(jié)素的類似物或功能片段的變體。功能片段可以具有少于21個氨基酸，但仍結合并激活內皮素受體，導致食物攝入和/或體重減少。類似物包括具有5個或更少的氨基酸替換的那些，以及與表2或3中的序列具有至少75%、80%、85%、90%或95%氨基酸序列一致性的那些。在另一實施方式中，變體與表2或3中的序列相比，具有不多于10個、不多于7個、不多于5個、不多于4個、不多于3個、不多于2個或僅一個氨基酸刪除、插入或替換。來自人類以外其它物種的變體序列也被考慮。"序列一致性"，如本領域內公知，是通過序列比較確定的，兩個或多個多肽序列或兩個或多個多核苷酸序列之間的關系。在本領域中，"一致性"也可以表示由這些序列的字符間的匹配確定的多肽或多核苷酸序列之間序列相關性的程度。一致性也可以通過已知的方法容易地計算出來，已知方法包括但不限于Com戶她'朋a/Mo/ecw/ar腸/ogy,Lesk,A.M.,ed.,OxfordUniversityPress,NewYork(1988);^/ocom/wO'wg../w/o尸ma"cs'GewoweSmith,D.W.,ed.,AcademicPress,NewYork,1993;C謂/她r^4wa/，sD魄Part/,Griffin,A.M.andGriffin,H.G.,eds.,HumanaPress,NewJersey(1994);Se^wewcey4wa/戸^Mo/ecM/arvonHeinje,G,AcademicPress(1987);Se^wewce爿7W戸's尸"'膨r,Gribskov,M.andDevereux,J.,eds.,StocktonPress,NewYork(1991);及Carillo,H.,andLipman,D.,SIAMJ々///o/Ma//2,48:1073(1988)中描述的那些。確定一致性的方法被設計為給予被測序列之間最大的匹配。而且，確定一致性的方法在可公開獲取的程序中被編碼?？捎糜诖_定兩個序列間一致性的計算機程序包括但不限于GCG(Devereux,J等，M/c/e/c爿cwfei^^a/r/12(1):387(1984));5個BLAST程序的套裝，三個設計用于核苷酸序列查詢(BLASTN、BLASTX和TBLASTX)和兩個設計用于蛋白序列查詢(BLASTP和TBLASTN)(Coulson,7>ewAz力說otec/wo/ogy'72:76-80(1994);Birren等Ge朋mev4"a/jw、六543-559(1997))。BLASTX程序從NCBI和其它來源可公開地獲得(^RL4S:TA/朋m/,Altschul,S等，NCBINLMMH,Bethesda,MD20894;Altschul,S等，丄Mo/.說o/.,215:403-410(1990))。公知的Sm池Waterman算法也可以用于確定一致性。多肷序列比較的參數典型地包含以下算法Needleman和Wunsch,丄Mo/.Sw/.48:443-453(1970);比較矩陣BLOSSUM62，Hentikoff和Hentikoff,Prac.A^/.Jowf.&z.U&489:10915-10919(1992);空位罰分(GapPenalty):12;空位長度罰分(GapLengthPenalty):4。可與這些參數使用的程序是可從GeneticsComputerGroup("GCG"),Madison,Wisconsin公開獲得的"空位"程序("gap"program)。上述參數與末端空位的無罰分一起是肽比較的默認參數。在一種實施方式中，NCBI的BLASTP程序與沒有組合調整的默認參數一起^皮使用，默認參數預期值10，字長(wordsize)3,BLOSUM62矩陣，空位延伸成本(gapextensioncost)11，末端空位延4申成本(endgapextensioncost)1，blast延4申的下P爭(dropoffforblastextension)(X)(以位(bit)計)7，空位比對的X下降值(Xdropoffvalueforgappedalignment)(以位計)15，及空位比對的最終X下降值(以位計)25。本文提供了通過給予至少一種內皮素或其激動劑，在渴望或需要它的對象中減少食物攝入或降低(或維持)體重，或兩者兼具的方法。這樣的對象典型地是患有狀況或疾病，或有發(fā)生狀況或疾病的風險的那些對象，它們將從減少食物攝入，降低(或維持)體重或兩者中獲益。因此，一方面本文提供了在渴望或需要它的對象中減輕體重的方法，包括給予有效量的內皮素或內皮素激動劑。本文還提供了治療需要它的對象的肥胖癥的方法，包括給予治療有效量的內皮素或內皮素激動劑。本文也提供了預防或治療需要它的對象中代謝紊亂的方法，包括給予患有代謝紊亂或有患代謝紊亂風險的對象有效量的內皮素或內皮素受體激動劑。在一些實施方式中，代謝紊亂是肥胖癥、糖尿病、胰島素抵抗綜合癥、代謝綜合癥、X綜合癥或由過度熱量攝入或食物或能量代謝失調導致的其它紊亂。在一種實施方式中，患有代謝紊亂的對象也肥胖、超重，期望減輕或維持體重，或期望預防體重進一步增加。內皮素可以是內皮素-1、內皮素-2、內皮素-3、類似物、衍生物或其功能片段或其組合。在特定的實施方式中，內皮素為人內皮素-3(SEQIDNO:10)。在一些實施方式中，內皮素或內皮素激動劑通過ETB受體作用。在特定的實施方式中，內皮素或內皮素受體不通過ETA受體作用，或對ETA受體具有降低的親和力。在另一實施方式中，內皮素或內皮素激動劑優(yōu)選地通過ETB受體作用。在一種實施方式中，期望或需要得到狀況或疾病的治療的對象不包括接受用于心血管適應癥的內皮素或內皮素激動劑的對象，所述狀況或疾病可通過減少食物攝入緩解，包括以有效減少食物攝入的量給予內皮素或內皮素激動劑。本文提供了抑制食欲或引起飽足感的方法，包括給予期望或需要它的對象有效抑制食欲或引起飽足感的量的內皮素或內皮素激動劑。本文公開的方法可以進一步包括給予其它化合物，其中所述其它化合物引起飽足感，減少食物4聶入或發(fā)揮維持或降低體重的作用。這樣的其它化合物可以包括但不限于毒蜥外泌肽或其激動劑(參見例如，美國專利號6,956,026;WO99/25727;W099/25728;WO99/07404);糊精或其激動劑(參見例如，Pittner等，丄Ce〃.說ocAem.55S:19-28(1994);美國專利號5,686,411、6,610,824、6,410,511);縮膽嚢肽(CCK)(參見例如，美國專利號5,739,106、5,270,302);泌酸調節(jié)狀(參見例如，美國專利號5,858,975);肽YY(PYY)(美國專利申請?zhí)?005/0176643、2002/0141985)或瘦蛋白(ob蛋白)(參見例如，美國專利號6,475,984;6,399,745)。合適的糊精激動劑包括，如["'""Pro-]-人類糊精(也被稱作"普林藍肽(pramlintide)，，)(參見例如，美國專利號5,175,145;5,814,600;5,998,367;6,114,304;6,410,511;6,608,029;6,6610,824)，鮭魚降血4丐素和US20050197287、WO2006105345、WO2006083254、WO2006052608和WO2005115437中所述的化合物，它們全部在此被5)入作為本文公開的糊精家族化合物的參考。用于一種實施方式中的CCK是CCK八肽(octopeptide)(CCK-8)。內皮素和內皮素激動劑可^^皮分別或與一種或多種這樣的化合物一同給予。給藥可能是同時的，依次的，或在相同或不同的組合物中連續(xù)給藥。也包括內皮素或內皮素受體激動劑用于在期望或需要它的對象中減少食物攝入，減輕(或維持)體重或兩者兼具，包括給予至少一種內皮素或內皮素受體激動劑。進一步提供的是內皮素或內皮素受體激動劑在制備適合在期望或需要它的對象中減少食物攝入，減輕體重或兩者兼具的藥物中的用途。一方面，本發(fā)明方法涉及在動物中減輕體重和/或減少體重增加，并且更特別地，涉及在患有肥胖癥或有患肥胖癥風險的患者中治療或改善肥胖癥。在一種實施方式中，該方法對可測量地減輕動物體重有效。在一些實施方式中，動物體重的減輕可以在給予化合物步驟至少大約2周后測量，有時在至少大約4周后，但通常在至少6-8周。在進一步的實施方式中，本文公開的任何方法導致對象的體重被減輕至少1%、至少5%、至少10%、至少20%、至少30%、至少40%或至少50%。在其它實施方式中，本文公開的任何方法導致對象的體重被降低至少約5磅或2kg、至少約10磅或5kg、至少約20磅或10kg、至少約30磅或15kg、至少約40-旁或20kg、至少約50石身或25kg、至少約75石身或35kg、至少約100磅或50kg、至少約125磅或55kg、至少約150磅或75kg、至少約175磅或80kg、至少約200磅或100kg。在另一進一步的實施方式中，本文/>開的任何方法的實施導致體重減輕，其中小于約40%、小于約20%、小于約10%、小于約5%、小于約2%、小于約1%或0%的體重流失是由于平均身體質量的流失。在另一實施方式中，與沒有給予本文所述的內皮素或內皮素受體激動劑的對象的平均食物攝入相比，對象的平均食物攝入被降低至少50%,或對象的平均食物攝入被降低40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或5%。平均食物攝入的百分數可對任意界定的時間段確定，例如以每一餐、每天、每周或每月為基礎。在另一實施方式中，與沒有給予本文所述的內皮素或內皮素受體激動劑的對象的食物攝入相比，對象的平均每日食物攝入減少至少2000卡路里，至少1500卡^各里或至少1000卡路里。而在另一實施方式中，與沒有給予本文所述的內皮素或內皮素受體激動劑的對象的食物:徵入相比，對象的平均每天食物攝入被降低2000卡路里、1500卡3各里、1000卡路里、750卡3各里、500卡路里、250卡^各里或100卡路里。用在這里，卡路里指的是營養(yǎng)的卡路里，也被稱為大卡(largecalorie)或千克卡路里。營養(yǎng)卡路里是表示當在體內被氧化時能夠釋放一大卡能量(1000克卡路里或3.968Btu)的食物中產熱或產能值的單位?；颊叩臓顩r或疾病可以通過以達到期望效果所必需的量和時間，給予該患者有效量的本發(fā)明的化合物而治療或預防。通過減少食物攝入或降低(或維持)體重來有效地改善紊亂的內皮素或內皮素激動劑的量是以合理的益處/風險比例應用于任何醫(yī)療治療的量。因此，劑量不是對患者引發(fā)不期望的心血管效果的量。對于任何特定患者的特定有效的劑量水平取決于各種因素，包括#:處理的狀況或疾病及狀況或疾病的嚴重程度；采用的化合物的活性；所采用的特定組合物；患者的年齡、體重、一般的健康狀況，性別和々欠食；給藥時間、給藥途徑、排泄率；治療的持續(xù)時間；及組合使用的其它活性試劑或一致(同時)療法。對于醫(yī)生使用，該組合物以含有一定量的內皮素或內皮素激動劑，帶有或不帶有另一種食物攝入減少劑、血漿葡萄糖降低劑或血漿脂質降低劑的劑量單位形式一皮提供。術語"有效量"指的是減少食物攝入、減輕(或維持)體重、或兩者兼合物的有效每天食物攝入減少劑量典型地在約IO嗎到約5mg/天、約10貼到約2mg/天、約10嗎到約1mg/天、或約30嗎到約500pg/天的范圍內，以單一或分成幾份的劑量給予。在另一實施方式中，內皮素或穴逄毒素的劑量在約1納摩爾/千克到約10微摩爾/千克的范圍內，在另一實施方式中從約1納摩爾/千克到約1000納摩爾/千克，在另一實施方式中從約10納摩爾/千克到約1000納摩爾/千克，而在另一實施方式中從約100納摩爾/千克到約1000納摩爾/千克。在某些實施方式中，腺苷調節(jié)素或蛙皮抗菌肽的劑量比內皮素或穴蝰毒素的劑量高5-10倍。因此，在一些實施方式中，腺苷調節(jié)素或穴蝰毒素的劑量在5納摩爾/千克到約1毫摩爾/千克范圍內，在其它實施方式中，從約5納摩爾/千克到約10微摩爾/千克，在其它實施方式中，從約50納摩爾/千克到約10微摩爾/千克，而又在其它實施方式中，從約500納摩爾/千克到約]0微摩爾/千克。在一些實施方式中，這些劑量根據患者的體重增加或減少。典型地，內皮素或內皮素受體激動劑的給藥開始于期望食物攝入抑制、體重降低或體重維持的任何時間，例如，在癥狀的第一標志時或在肥胖癥、糖尿病、胰島素抵抗綜合癥或本文公開的其它狀況或疾病診斷后即刻。給藥可以通過注射，例如皮下、月幾肉、腹膜內或靜脈內注射?？诜幕钚曰衔锟杀豢诜?，但是劑量通常被提高5-10倍。在一些實施方式中，化合物或組合物被每天、每周或每個月給藥。劑量可隨著個體的體重減輕而降低，直到建立起基本劑量或不需要劑量。在一種實施方式中，化合物在餐前一刻給藥。在另一實施方式中，化合物在吃飯開始時給藥。一方面，有效量是足以引起食物攝入減少、體重減輕或兩者兼具，而對心血管系統(tǒng)沒有顯著影響或沒有可測量的影響的劑量。對心血管系統(tǒng)的影響包括血壓的升高或降低，例如收縮壓、舒張壓或兩者；總的外周血管抗性的增高；或肺血管抗性的增高。在一種實施方式中，有效地引起食物攝入減少、體重減少或兩者的量不改變平均收縮壓、平均舒張壓或兩者超過5mmHg。在另一實施方式中，有效地引起食物攝入減少、體重減輕或兩者的量不升高平均全身收縮壓、平均全身舒張壓或兩個超過5mmHg。在一種實施方式中，有效地引起食物攝入減少、體重減輕或兩者的量不升高平均收縮壓到高于139mmHg或平均舒張壓到高于89mmHg。而在另一實施方式中，有效地引起食物攝入減少、體重減輕或兩者的量不升高收縮與舒張的全身血壓比例到高于139比89mmHg。從細胞培養(yǎng)測試和動物研究中獲得的數據可被用于配制一系列用于人類或其它受試動物的藥劑。這樣的化合物的劑量典型地在包括具有極小或沒有毒性的EDso的循環(huán)濃度范圍內。特別地，本發(fā)明采用避免有害的血管效應的ET激動劑，特別是在心血管系統(tǒng)中。劑量可能在該范圍內根據采用的劑型和所用的給藥途徑而變化。對于本文公開的方法所用的任何化合物，治療有效劑量可以從細胞培養(yǎng)測試初始地估計。藥劑可在動物模型中配制以達到如細胞培養(yǎng)確定的包括EC50的循環(huán)血漿濃度(即達到最大有效反應半數的測試化合物的濃度)。這些信息可^^用于更準確地確定人類中的有用劑量。血漿中的水平可通過，例如高效液相色語或抗體分析進行測量。最佳制劑和給予患者的本申請化合物的給藥方式取決于本領域已知的因素，如特定的狀況或疾病、期望的效果、患者類型和患者喜好。本方法中有用的化合物可以以適合腸胃外(包括靜脈、腹膜內、肌肉和皮下)或經鼻或口服給藥的制劑形式方便地提供。在一種實施方式中，給藥途徑是皮下或肌內。在一些情況下，以用于共同給藥的單一組合物或溶液，提供內皮素或內皮素受體激動劑以及食物攝入減少劑、血漿葡萄糖降低劑或血漿脂質降低劑，如毒蜥外泌肽-4、毒晰外泌肽激動劑、糊精、糊精激動劑、PYY、CCK或痩蛋白中的至少一種是方便的。在其它情況下，可能更有利的是在內皮素或內皮素激動劑之外單獨給予至少一種其它藥劑。合適的給藥形式可能最好由醫(yī)藥從業(yè)者對每個患者單獨地確定。合適的制藥上可接受的載體和其制劑在標準的制劑專著中有述。參見例如，Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(21stEd.Lipincott,Williams,&Wilkins2005)。如本文所述，內皮素和內皮素激動劑可以與適合減少食物攝入或促進或維持體重減輕的傳統(tǒng)方法或組合物結合。這些方法和方式包括但不限于飲食療法、鍛煉、奧利司他(orlistat)、西布曲明(sibutramine)、月巴胖癥治療手術(bariatricsurgery)和順勢療法食名夂抑制補充劑。本化合物的治療組合物包括與一種或多種治療上合適的賦形劑配制的有效量的化合物。術語"治療上合適的賦形劑，，，用在這里，代表無毒的固體、半固體或液體填料、稀釋劑、封裝材料或任意類型的制劑輔料。治療上合適的賦形劑的實例包括糖；纖維素及其衍生物；油；乙二醇；溶液；緩沖液、著色劑、釋放劑、包衣、甜味劑、調味劑和香料等等。這些治療組合物可以被腸胃外、腦池內、口服、直腸或腹腔內給藥。用于本化合物口服給藥的液體劑型包括本化合物的乳劑、微型乳劑、溶液、懸液、糖漿或酏劑的制劑。除了所述化合物，液態(tài)劑型可以含有稀釋劑和/或增溶劑或乳化劑。除了惰性稀釋劑，口服組合物可以含有潤濕劑、乳化劑、甜味劑、調味劑和香料。本化合物的可注射制劑包含無菌、可注射的水性或油性溶液、懸液或乳劑，它們中的任何一個都可以一皮任選地與腸胃外適當的稀釋劑、分散劑、潤濕劑或懸浮試劑一起配制。這些可注射的制備物可以通過細菌截留濾紙的過濾而滅菌或與在該可注射介質中溶解或分散的滅菌劑一起配制。本方法中有用的化合物能夠以用于注射或輸液的腸胃外組合物提供。它們可以，例如被懸浮在惰性油，適當地為植物油，如芝麻油、花生油、橄欖油或其它可接受的載體中。這些組合物可通過傳統(tǒng)的滅菌技術滅菌，或可以過濾滅菌。該組合物可以含有接近生理條件所需的制藥上可接受的輔助物質，如pH緩沖試劑。有用的緩沖液包括，例如醋酸鈉/醋酸緩沖液。貯存、持續(xù)或"儲存"緩慢釋放制劑的形式可被使用，以使藥物上有效量的制劑在透皮注射或給藥后許多小時或許多天中被輸送到血流中。期望的等滲性可使用氯化鈉或其它藥物上可接受試劑，如葡萄糖、硼酸、酒石酸鈉、丙二醇、多元醇(如甘露醇和山梨糖醇)、或其它無才幾或有機溶質取得。氯化鈉對含有鈉離子的緩沖液是特別優(yōu)選的。用于本文公開的方法和藥物的化合物可以是酸性(-OH)形式或N端酰胺化的(-NH2)形式。化合物也可以被配制為制藥上可接受的鹽(如酸加成鹽)和/或其復合物。制藥上可接受的鹽是在其被給予的濃度下無毒的合物發(fā)揮其生理作用來促進制藥應用。物理性質的有用變化的實例包括降低熔點以促進透粘膜給藥和提高溶解度以促進更高濃度的藥物給藥。制藥上可接受的鹽包括酸加成鹽，例如含有硫酸鹽、鹽酸鹽、磷酸鹽、氨基磺酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、曱磺酸乙烯酯、乙磺酸乙烯酯、苯磺酸乙烯酯、對甲苯磺酸酯、環(huán)己基氨基磺酸鹽和奎尼酸鹽的鹽。制藥上可接受的鹽可以從諸如鹽酸、硫酸、磷酸、磺胺酸、醋酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸、丙二酸、曱基磺酸、乙基磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、環(huán)己基氨基磺酸和查尼酸的酸獲取。這些鹽可以通過，例如將產物的游離酸或堿形式與合適的堿或酸的一種或多種等效物反應而制備，在鹽在其中不溶的溶劑或介質中，或在諸如水的溶劑中，其隨后在真空中被除去或通過凍千或通過在合適的離子交換樹脂上將存在的鹽中的離子用另一種離子交換而除去。載體或賦形劑也可以被用于促進化合物的給藥。載體和賦形劑的實例包括碳酸鈣，磷酸鈣，各種糖，如乳糖、葡萄糖或濕糖，或各種淀粉，纖維素衍生物，明膠，植物油，聚乙二醇和生理上相容的溶劑。組合物或藥物組合物可以通過不同的途徑給藥，包括靜脈內、腹膜內、皮下和肌肉、口服、局部、透粘膜給藥，或通過肺部吸入給藥。如果希望，上述組合物的溶液可用諸如甲基纖維素的增稠劑增稠。它們可能以油包水或水包油的乳化形式被制備。各種制藥上可接受的乳化劑中任何一種都可以被采用，包括，例如阿拉伯膠粉末、非離子型表面活性劑(如Tween)或離子型表面活性劑(例如^5威性聚醚醇>5危酸鹽或磺酸鹽，:i口Triton)。用于本發(fā)明的組合物按照普遍接受的程序通過混合各種成分制備。例如，選定的組分可在攪拌機或其它標準設備中簡單混合，以生產濃縮的混合物，其隨后可通過加入水或增稠劑被調整到終濃度和粘度，以及可能地加入纟爰沖液以控制pH或其它溶液以控制滲透性。為了幫助理解本方法，包含了以下實施例。涉及所公開方法的實驗當然不應該被解釋為特別地限制本發(fā)明，在本領域技術人員范圍內的本發(fā)明的變化——現在已知的或以后發(fā)展的，應該被認為落入本文所述和下文要求保護的本發(fā)明的范圍內。具體實施方式實施例1通過內皮素和內皮素激動劑減少食物凈聶入材料和方法實驗開始之前，NIH7瑞士小鼠被禁食大約17小時。在時間原點使用所示劑量在腹腔內(i.p.)注射肽。所有的小鼠以所示劑量接受載體或化合物的腹膜內注射(20(Hil),并立即給予預先稱重的食物粒。食物粒在給予后在30分鐘、1小時和2小時的間隔稱重，以確定被吃掉的食物的量。每一個點對接受內皮素或內皮素激動劑的小鼠反映n=4，或對接受載體的小鼠反映n=3。用于本實驗的化合物列于下面的表5。表5化合物名稱序列<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>在每個時間點，食物攝入值反應了測試樣品對食物攝入的效果，其使用下面提供的公式表達為相對于載體的變化百分數。%基底=-100*[1-(治療組的食物攝入/載體組的食物攝入)]。通過ANOVA(p<0.05)辨識出明顯的測試樣品效果。在存在明顯差異的地方，使用Dunnett測試比4交測試平均值與對照平均值。使用用于Windows的GraphPadPrism版本3.01,GraphPadSoftware,SanDiego,CaliforniaUSA進行單向ANOVA和Dunnett事后測試(posttest)。結果外周給予ET-1以及ET-2、ET-3和穴螋毒素S6c之后，在測試的所有時間點有劑量依賴的食物攝入減少。參見圖1、2和3。食物攝入減少在30分鐘的劑量反應顯示了對測試的激動劑相似的效力，而60分鐘時的食物攝入減少是中間值。參見圖2和3。IRL1620在30和60分鐘減少食物攝入，而在120分鐘沒有效果，該效果可能是由于更加迅速的分子清理/失活。這些數據顯示了ET-1、ET-2和ET-3在禁食的小鼠中是強效的且完全有效的食欲抑制劑(anorexigen)，而沒有可觀察到的副作用。ET-3在減少食物攝入中的效果表明食欲抑制作用可能是由ETB受體介導的，因為ET-3與ETa結合^艮差，如果結合的話。實施例2通過內皮素或內皮素激動劑減輕DIO小鼠的體重材料和方法采用膳食引發(fā)肥胖(DIO)的小鼠。肥胖癥通過在治療前從4周齡(20)開始喂食成粒的高脂肪膳食(58%的熱量，#D12331,ResearchDiets,NewBrunswick,NJ)6周(對長期研究是4周)引起。小鼠隨后在整個治療期間保持粉末狀的該膳食，除非另有說明。所有動物被圃養(yǎng)在21-23。C，12小時:12小時光亮-黑暗循環(huán)條件下，并允許在治療前和治療后隨意取用食物。載體、ET-l[SEQIDNO:1](20nmol/kg/d)或腺苷調節(jié)素[SEQIDNO:33](300nmol/kg/d)通過Alzets.c.滲透泵給予DIO小鼠。小鼠被喂食成粒的高脂肪膳食，并且每周記錄體重和食物攝入。在每個時間點，體重(BWt)反映了當表達為相對于載體治療的變化百分數時測試樣品對BWt的效果。對每個治療組%體重減輕=100x[(載體治療的平均體重變化)-(治療的平均體重變化)/第0天的平均體重〗對于個體%體重減輕=100x[(載體治療的平均體重變化)-(治療的平均體重變化)/第0天的平均體重]。通過ANOVA(p<0.05)辨識出明顯的測試樣品效果。在存在明顯差異的地方，使用Dunnett測試比較測試平均值與對照平均值。使用用于Windows的GraphPadPrism版本3.01,GraphPadSoftware,SanDiego,CaliforniaUSA,進行單向ANOVA和Dunnett事后測試。結果DIO小鼠中持續(xù)2-4周輸液給予的ETB激動劑、腺苷調節(jié)素顯示出持續(xù)的體重減輕效果(圖5)以及身體脂肪的減少(圖4)。顯著地，腺苷調節(jié)素在估計低于產生抗生素效果的劑量下抑制嚙齒類的食物攝入。相似地，相對于對照組，持續(xù)輸入ET-1也減輕DIO小鼠的體重(圖6)。該效果在沒有可觀察到的病癥行為的情況下達到?？傊?，這些研究顯示出ET-1和ETB激動劑減少食物攝入，導致體重和身體脂肪減少的能力。本說明書中引用的所有出版物和專利申請在此作為參考引入，如同每個單獨的出版物和專利申請被特定地且獨立地表明被作為參考引入。盡管出于清楚理解的目的，前述發(fā)明已經通過例證和實施例^皮詳細描述，但是本領域普通技術人員容易清楚的是，考慮到本發(fā)明的教導，可以對本發(fā)明做某些變化和改變，而不背離所附權利要求書的精神和范圍。權利要求1.在渴望或需要的對象中減少食物攝入的方法，包括以有效減少食物攝入的量給予渴望或需要其的對象內皮素或內皮素激動劑。2.在渴望或需要的對象中減輕體重的方法，包括以有效減輕體重的量給予渴望或需要其的對象內皮素或內皮素激動劑。3.在渴望或需要的對象中治療肥胖癥的方法，包括以有效治療肥胖癥的量給予渴望或需要其的對象內皮素或內皮素激動劑。4.在渴望或需要的對象中預防或治療代謝疾病的方法，包括以有效治療所述代謝疾病的量給予渴望或需要其的對象內皮素或內皮素激動劑。5.依據權利要求4所述的方法，其中所述代謝疾病是肥胖癥、糖尿病、胰島素抵抗綜合癥、X綜合癥或其它營養(yǎng)過度疾病。6.依據權利要求1-5中任一項所述的方法，其中所述對象肥胖，超重，渴望減輕體重或渴望防止與疾病或狀況相關的體重進一步增加，如藥物引發(fā)的體重增加。7.依據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述內皮素是內皮素-1、內皮素-2或內皮素-3中至少一種。8.依據權利要求7所述的方法，其中所述內皮素是內皮素-1或與SEQIDNO:l具有至少75%序列一致性的序列。9.依據權利要求7所述的方法，其中所述內皮素是內皮素-2或與SEQIDNO:7具有至少75%序列一致性的序列。10.依據權利要求7所述的方法，其中所述內皮素是內皮素-3或與SEQIDNO:10具有至少75%序列一致性的序列。11.依據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述內皮素激動劑是含有不多于5個氨基酸替換、刪除或插入的SEQIDNO:l、SEQIDNO:7、SEQIDNO:IO的類似物。12.依據權利要求11所述的方法，其中所述類似物包含不多于5個氨基酸替換。13.依據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述內皮素是選自SEQIDNOs:l-6中至少一個的內皮素-1。14.依據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述內皮素是選自SEQIDNOs:7-9中至少一個的內皮素-2。15.依據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述內皮素是選自SEQIDNOs:10-13中至少一個的內皮素-3。16.依據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述內皮素激動劑是含有不多于35個tt酸的內皮素類似物。17.依據權利要求7-16中任一項所述的方法，其中所述內皮素類似物包含具有氨基酸序列FCHLDIIW的C末端。18.依據權利要求7-16中任一項所述的方法，其中所述內皮素類似物包含具有氨基酸序列FAHLDIIW的C末端。19.依據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述內皮素激動劑是N-反式-2,6-二曱基哌啶子基羰基-L卞甲基亮氨酰-D-l-曱氧基羰基色氨?；?D-正亮氨酸。20.依據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述內皮素激動劑是[Ala1,3'15]內皮素誦l(SEQIDNO:14)。21.依據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述內皮素激動劑是內皮素-1、內皮素-2、內皮素-3的片段，其中所述片段結合并激活ETA或ETb受體。22.依據權利要求21所述的方法，其中所述片段包含不多于7個氨基酸刪除。23.依據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述內皮素激動劑與SEQIDNO:l、7和10中任一比較，包含不多于10個氨基酸替換、插入或刪除。24.依據權利要求21或22所迷的方法，其中所述內皮素激動劑是N-琥珀?；?[Glu9,AlaU"]-內皮素-l片段8-21。25.依據權利要求22或23的用途，其中所述內皮素激動劑是N-乙?；?[Ala""]-內皮素-l片段6-21。26.依據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述內皮素激動劑是穴蝰毒素。27.依據權利要求26所述的方法，其中所述穴蝰毒素具有選自SEQIDNO:15、16、17、18、31和32的氨基酸序列。28.依據權利要求26所述的方法，其中所述穴蝰毒素具有與SEQIDNO:15、16、17、18、31和32至少75%—致性的氨基酸序列。29.依據權利要求26-28中任一項所述的方法，其中所述穴睡毒素包含具有氨基酸序列FCHQDVIW的C末端。30.依據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述內皮素激動劑是腺苷調節(jié)素。31.依據權利要求30所述的方法，其中所述腺苷調節(jié)素具有選自SEQIDNO:20-30的氨基酸序列。32.依據權利要求30所述的方法，其中所述腺苷調節(jié)素具有與SEQIDNO:20-30中任一具有至少75。/。一致性的^JJ爽序列。33.依據權利要求1-32中任一項所述的方法，其中所述內皮素或內皮素激動劑是ETB受體激動劑，但不是ETA受體激動劑。34.依據權利要求1-32中任一項所述的方法，其中所述內皮素或內皮素激動劑與ETA受體相比，優(yōu)先地結合并激活ETB受體。35.依據權利要求1-32中任一項所述的方法，進一步包含給予第二種化合物，其中所迷化合物引起飽足感，減少食物攝入，減輕或維持體重或其任意組合。36.依據權利要求35所述的方法，其中所述第二種化合物選自毒蜥外肽酶或其激動劑、糊精或其激動劑類似物、PYY或其激動劑類似物、瘦蛋白、泌酸調節(jié)肽或縮膽嚢肽(CCK)的一種或多種化合物。37.內皮素或內皮素激動劑在藥物制備中的用途，該藥物用于以有效減少食物攝入的量在渴望或需要其的對象中減少食物攝入。38.內皮素或內皮素激動劑在藥物制備中的用途，該藥物用于以有效減輕體重的量在渴望或需要其的對象中減輕體重。39.內皮素或內皮素激動劑在藥物制備中的用途，該藥物用于以有效治療肥胖癥的量在渴望或需要其的對象中治療肥胖癥。40.內皮素或內皮素激動劑在藥物制備中的用途，該藥物用于以有效治療所述代謝疾病的量在渴望或需要其的對象中預防或治療代謝疾病。41.依據權利要求40所述的用途，其中所述代謝疾病是肥胖癥、糖尿病、胰島素^4元綜合癥、X綜合癥或其它營養(yǎng)過度疾病。42.依據權利要求37-41中任一項所述的用途，其中所述對象肥胖，超重，渴望減輕體重或渴望防止與疾病或狀況相關的體重進一步增加，如藥物引發(fā)的體重增加。43.依據權利要求37-41中任一項所述的用途，其中所述內皮素是內皮素-1、內皮素-2或內皮素-3中至少一種。44.依據權利要求43所述的用途，其中所述內皮素是內皮素-1或與SEQIDNO:l具有至少75%序列一致性的序列。45.依據權利要求43所述的用途，其中所述內皮素是內皮素-2或與SEQIDNO:7具有至少75%序列一致性的序列。46.依據權利要求43所述的用途，其中所述內皮素是內皮素-3或與SEQIDNO:IO具有至少75%序列一致性的序列。47.依據權利要求37-41中任一項所述的用途，其中所述內皮素激動劑是含有不多于5個氨基酸替換、刪除或插入的SEQIDNO:l、SEQIDNO:7、SEQIDNO:10的類似物。48.依據權利要求47所述的用途，其中所述類似物包含不多于5個氨基酸替換。49.依據權利要求37-41中任一項所述的用途，其中所述內皮素是選自SEQIDNOs:l-6中至少一個的內皮素-1。50.依據權利要求37-41中任一項所述的用途，其中所述內皮素是選自SEQIDNOs:7-9中至少一個的內皮素-2。51.依據權利要求37-41中任一項所述的用途，其中所述內皮素是選自SEQIDNOs:10-13中至少一個的內皮素-3。52.依據權利要求37-41中任一項所述的用途，其中所述內皮素激動劑是含有不多于35個氨基酸的內皮素類似物。53.依據權利要求43-52中任一項所述的用途，其中所述內皮素類似物包含具有氨基酸序列FCHLDIIW的C末端。54.依據權利要求43-52中任一項所述的用途，其中所述內皮素類似物包含具有氨基酸序列FAHLDIIW的C末端。55.依據權利要求37-41中任一項所述的用途，其中所述內皮素激動劑是N-反式-2,6-二甲基哌啶子基羰基-L卞曱基亮氨酰-D-l-甲氧基羰基色氨酰基-D-正亮氨酸。56.依據權利要求37-41中任一項所述的用途，其中所述內皮素激動劑是[八1^3;11，15]內皮素-1(SEQIDNO:14)。57.依據權利要求37-41中任一項所述的用途，其中所述內皮素激動劑是內皮素-1、內皮素-2、內皮素-3的片段，其中所述片段結合并激活ETa或ETb受體。58.依據權利要求57所述的用途，其中所述片段包含不多于7個氨基酸刪除。59.依據權利要求37-41中任一項所述的用途，其中所述內皮素激動劑與SEQIDNO:l、7和10中任一比較，包含不多于10個氨基酸替換、插入或刪除。60.依據權利要求57或58所述的用途，其中所述內皮素激動劑是N-琥珀?；?[Glu9,AlaH'"]-內皮素-l片段8-21。61.依據權利要求57或58的用途，其中所述內皮素激動劑是N-乙?；?[AlaH"]-內皮素-l片段6-21。62.依據權利要求37-41中任一項所述的用途，其中所述內皮素激動劑是穴蝰毒素。63.依據權利要求62所述的用途，其中所述穴蝰毒素具有選自SEQIDNO:15、16、17、18、31和32的氨基酸序列。64.依據權利要求62所述的用途，其中所述穴蝰毒素具有與SEQIDNO:15、16、17、18、31和32具有至少75%—致性的氨基酸序列。65.依據權利要求62-64中任一項所述的用途，其中所述穴蝰毒素包含具有氨基酸序列FCHQDVIW的C末端。66.依據權利要求37-41中任一項所述的用途，其中所述內皮素激動劑是蛙皮抗菌肽或腺苷調節(jié)素。67.依據權利要求66所述的用途，其中所述蛙皮抗菌肽或腺普調節(jié)素具有選自SEQIDNO:20-30和33-64的氨基酸序列。68.依據權利要求66所述的用途，其中所述蛙皮抗菌肽或腺苷調節(jié)素具有與SEQIDNO:20-30和33-64中任一具有至少75%—致性的氨基酸序列。69.依據權利要求37-68中任一項所述的用途，其中所述內皮素或內皮素激動劑是ETB受體激動劑，但不是ETA受體激動劑。70.依據權利要求37-68中任一項所述的用途，其中所述內皮素或內皮素激動劑與ETA受體相比，優(yōu)先地結合并激活ETB受體。71.依據權利要求37-68中任一項所述的用途，進一步包含給予第二種化合物，其中所述化合物引起飽足感，減少食物攝入，減輕或維持體重或其任意組合。72.依據權利要求71所述的用途，其中所述第二種化合物選自毒蜥外肽酶或其激動劑、糊精或其激動劑類似物、PYY或其激動劑類似物、瘦蛋白、泌酸調節(jié)肽或縮膽囊肽(CCK)的一種或多種化合物。73.依據權利要求1到72中任一項所述的方法或用途，其中所述對象肥胖，超重，渴望減輕體重，渴望保持體重，或渴望防止體重進一步增加。74.權利要求73所述的方法或用途，其中所述體重增加是藥物引起的。全文摘要公開了治療可通過減少食物攝入而緩解的癥狀或疾病的方法，其包括單獨或與影響飽足感的其它化合物或組合物聯(lián)合給予有效量的內皮素或內皮素激動劑。該方法可用于治療各種癥狀或疾病，包括肥胖癥、II型糖尿病、飲食性疾病和胰島素抵抗綜合癥。也公開了用于本發(fā)明方法的藥物組合物。文檔編號A61P3/04GK101405020SQ200780010296公開日2009年4月8日申請日期2007年3月23日優(yōu)先權日2006年3月23日發(fā)明者A·楊,R·皮特納申請人:安米林藥品公司