專利名稱：：紅曲中降壓活性物質(zhì)的提取方法以及紅曲降壓藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥和保健領(lǐng)域，具體涉及藥食兩用紅曲中降壓活性部位的提取和純化工藝以及紅曲中降壓活性物質(zhì)的醫(yī)藥和保健用途。
背景技術(shù)：
：高血壓是當(dāng)今社會(huì)的常見病，特別在中老年人群，隨著我國(guó)老齡化進(jìn)程加速，如不盡快加強(qiáng)高血壓的防治和有效干預(yù)，高血壓及心血管疾病在近幾年或幾十年內(nèi)將會(huì)大幅度上升，高血壓所導(dǎo)致的腦卒和冠心病的發(fā)病也會(huì)日益增加。并且可能伴有血管、心、腦、腎等器官生理性或病理性改變，導(dǎo)致各種并發(fā)癥，因此尋找高效、低毒且原料廉價(jià)易得的抗高血壓藥仍是醫(yī)藥領(lǐng)域的重要研究課題之一。本發(fā)明研究對(duì)象——紅曲(Monascuspurpureus)分布于我國(guó)福建、浙江、江蘇和臺(tái)灣等省，古代稱"丹曲"，即是中藥，又是食品，是經(jīng)真菌接種于蒸熟大米上發(fā)酵而成的一種紫紅色米曲；在中國(guó)已有一千多年的歷史，被廣泛應(yīng)用于釀酒、食品著色、食品發(fā)酵、中藥等方面?！侗静菥V目》和《本草從新》中均記載紅曲味甘、性溫，具有活血化淤、健脾消食之功效；主治產(chǎn)后惡露不凈、淤滯腹痛、赤白下痢、跌打損傷等癥狀。近年來，紅曲在對(duì)高血壓的預(yù)防和保健方面的作用被發(fā)現(xiàn)，日本已廣泛將紅曲添加于食品和飲料中制成保健品用于高血壓的預(yù)防和保健。本發(fā)明組之前對(duì)紅曲的降壓效果及降壓機(jī)制也有諸多研究成果，用不同的高血壓模型(腎血管型高血壓模型、DOCA—鹽型高血壓模型、L-硝基精氨酸型高血壓模型和原發(fā)型高血壓模型)大鼠對(duì)紅曲(Monascuspurpureus)的降壓效果及降壓機(jī)制進(jìn)行了的探討，結(jié)果提示中劑量(0.42g/KgBW)和高劑量(0.83g/KgBW)的紅曲對(duì)腎血管型高血壓模型、DOCA一鹽型高血壓模型、L-硝基精氨酸型高血壓模型(唐粉芳，張靜，鄒潔等.紅曲對(duì)L-硝基精氨酸高血壓大鼠降壓作用初探.食品科學(xué)，2004，25(4):155-157.)和原發(fā)性高血壓模型(鄭健全，郭俊霞，金宗濂.紅曲對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠降壓機(jī)理研究.食品工業(yè)科技，2007,28(3):207-208.)大鼠均有良好的降壓效果。并通過測(cè)定紅曲對(duì)腎血管型高血壓大鼠肺血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin-convertingenzyme，ACE)、主動(dòng)脈一氧化氮合成酶(NOsynthase,NOS)、血漿內(nèi)皮素(endothelin，ET)和血漿降鈣素基因相關(guān)肽(calcitoningene-relatedp印tide，CGRP)四個(gè)降壓生化指標(biāo)的影響，由此推測(cè)紅曲的降壓途徑可能是多方面的在腎血管型高血壓大鼠(renalvascularhypertensiverat，RHR)上可能主要通過抑制肺ACE起到降壓作用，同時(shí)也能降低血漿ET和升高血漿CGRP;在DOCA-鹽型高血壓大鼠(DOCA-salthypertensiverat，DHR)上可能主要通過抑制鈉水潴留降低血容量起到降壓作用。同時(shí)，對(duì)紅曲降血壓的血管機(jī)制也進(jìn)行了研究，認(rèn)為紅曲可通過刺激平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮和抑制,丐通道而引起血管舒張(郭俊霞，鄭建全，雷萍等.紅曲降血壓的血管機(jī)制:抑制平滑肌^5通道并激發(fā)其一氧化氮釋放.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2006，28(3):236-243.)。關(guān)于紅曲化學(xué)成分和藥理活性物質(zhì)，日本和我國(guó)學(xué)者進(jìn)行了研究，一般偏向于洛伐他汀類降脂成分；日本學(xué)者KeisukeT推測(cè)紅曲中的降壓活性成分可能是GABA和紅曲色素(KdsukeT.Antihypertensiveeffectsofbeni隱koji.NipponJozoKyokaishi，1994,89(3):207-211.);本發(fā)明組在紅曲降壓活性成分的初步篩選中，對(duì)^氨基丁酸(GABA)是否為紅曲中降壓的主要成分進(jìn)行了論證，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明GABA不是紅曲中的主要降壓成分(常平，李婷，李茉等.Y-氨基丁酸(GABA)是紅曲中的主要降壓功能成分嗎？.食品工業(yè)科技，2004，25(5):120-122)。日本學(xué)者Okawa,Junji在其專利申請(qǐng)JP2006104156A(20Apr2006)中指出降壓物質(zhì)是腺苷；本發(fā)明組在建立體外離體血管環(huán)法測(cè)紅曲中的降壓活性物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，紅曲中的主要降壓物質(zhì)并非集中在紅曲粗提物的較大極性部位或水溶性部位，排除了日本學(xué)者Okawa,Junji在其專利申請(qǐng)中所指的紅曲中的主要降壓物質(zhì)是腺苷的可能性。因此，紅曲中降壓的有效成分及降壓機(jī)制至今尚無定論，所以有必要首先研究清楚紅曲的主要降壓活性部位，進(jìn)而找到真正量較大的主要降壓物質(zhì)，為開發(fā)利用廉價(jià)易得的資源提供科學(xué)依據(jù)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種能提取紅曲中降壓活性部位并純化獲得降壓活性物質(zhì)的方法，進(jìn)而提供從紅曲中獲取的降壓活性物質(zhì)和紅曲降壓藥物。本發(fā)明提供的紅曲中降壓活性物質(zhì)的提取方法，采用以下步驟步驟一從紅曲干粉中用乙醇提取活性物質(zhì)，去除乙醇得濃縮液；步驟二對(duì)濃縮液再用中等極性有機(jī)溶劑萃取，得萃取液；步驟三減壓回收萃取液得到紅曲中降壓活性物質(zhì)；其中所述中等極性有機(jī)溶劑為氯仿、二氯甲烷、醋酸乙酯和正丁醇中的一種或多種的混合。上述方法中，步驟二可以先用石油醚萃取后再用中等極性有機(jī)溶劑萃取。上述方法中，所述步驟一濃縮液以下述過程獲取向紅曲干粉中加入乙醇溶液分多次超聲提取，合并濾液，過濾去渣，濾液減壓濃縮至乙醇全部蒸出即可。所述多次醇提中，可以使用質(zhì)量濃度為70%~95°%單一濃度的乙醇多次提取，或依次由高濃度至低濃度使用兩種或兩種以上質(zhì)量濃度在60%95%范圍內(nèi)的乙醇溶液組合提取；優(yōu)選使用80%單一濃度的乙醇分三次提取，或依次使用95%、80%和60%的乙醇分三次組合提取。上述方法種，所述步驟二用中等極性有機(jī)溶劑萃取，萃取多次，然后合并萃取液；使用石油醚時(shí)，先用石油醚多次萃取，然后再用中等極性有機(jī)溶劑多次萃取，合并中等極性溶劑萃取液。用以上所述方法獲取的紅曲降壓活性物質(zhì)也為本發(fā)明所要公開和尋求保護(hù)的內(nèi)容。該紅曲降壓活性物質(zhì)，其為脂溶性小分子物質(zhì)。以上所述紅曲降壓活性物質(zhì)在制備降壓藥物中的應(yīng)用也為本發(fā)明所要公開和尋求保護(hù)的內(nèi)容。具體應(yīng)用中，所述藥物為紅曲降壓片劑、膠囊劑、口服液或滴丸劑；其中紅曲降壓片是按1:1的重量比例將紅曲降壓活性物質(zhì)的干浸膏和淀粉混合，按制片工藝制成紅曲降壓片成品；紅曲降壓膠囊是按1:0.05的重量比例將紅曲降壓活性物質(zhì)的干浸膏和硬脂酸鎂混合，按制膠囊工藝制成紅曲降壓膠囊成品。以上所述紅曲降壓活性物質(zhì)在制備降壓保健品中的應(yīng)用也為本發(fā)明所要公開和尋求保護(hù)的內(nèi)容。本發(fā)明通過體外活性實(shí)驗(yàn)的跟蹤檢測(cè)，最終選出一條最佳的提取和純化的工藝路線，為市場(chǎng)提供一種高效、低毒且原料廉價(jià)易得的抗高血壓藥物或保健品。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)確證了紅曲中的主要降壓活性物質(zhì)存在于提取液中中等偏小的極性部位。本發(fā)明建立了一套穩(wěn)定、可靠的體外離體血管環(huán)法檢測(cè)紅曲中降壓活性物質(zhì)的方法，并用此法作為依據(jù)，尋找到了紅曲中的降壓活性部位。本發(fā)明還提供了一種降壓新藥，其中以上述活性部位作為藥用活性成分。本發(fā)明還提供了一種降壓功能的保健品，其中以上述活性部位作為活性成分。本發(fā)明提出了從紅曲中提取降壓活性部位的方法，首次驗(yàn)證紅曲的主要降壓功效組分存在于乙醇提取液的中等偏小極性部位，并依此得到以該活性部位制成的藥品和保健品。實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明提取的活性部位有明顯的降壓功能，又由于紅曲本身就可食用，所以其具有毒性小、安全等特點(diǎn)，以此活性部位作為活性成分可以得到有效的降壓新藥和/或降壓保健品，具有高效、低毒且原料廉價(jià)易得的特點(diǎn)，為高血壓的防治開辟了一條新途徑。圖l為紅曲中活性降壓部位的提取和純化工藝路線圖。圖2為實(shí)施例自發(fā)型高血壓大鼠灌胃紅曲后血壓變化曲線圖。具體實(shí)施例方式本發(fā)明提取紅曲中降壓活性部位的方法，為從紅曲粗粉中盡可能多的將原料中的降壓活性物質(zhì)提出，再通過適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑的萃取來富積活性降壓物質(zhì)。具體的，首先用乙醇(如質(zhì)量濃度7095%的乙醇)超聲提取，然后再用中等極性的溶劑(如酉昔酸乙酯)萃取，或先用小極性溶劑(如石油醚)萃取再用中等極性的溶劑萃取，減壓回收中等極性的溶劑萃取部分就可以得到紅曲中大部分的降壓活性組分。從紅曲中獲得降壓活性物質(zhì)的工藝路線參見圖1所示。本發(fā)明方法中各步提取和萃取物首先通過體外離體血管環(huán)法測(cè)舒血管活性物質(zhì)，再通過體內(nèi)自發(fā)性高血壓大鼠實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了體外舒血管活性物質(zhì)的體內(nèi)降壓活性。故本發(fā)明組建立了一套穩(wěn)定、可靠的用體外離體血管環(huán)法檢測(cè)紅曲中降壓活性物質(zhì)的方法。體外血管環(huán)法測(cè)紅曲中舒張血管活性物質(zhì)的方法a.離體血管環(huán)的制備健康雄性wister大鼠(體重150200g)，1%戊巴比妥鈉(50mg/kgbw，IP)腹腔注射麻醉，股動(dòng)脈放血后，迅速依次剪開皮膚、肌肉，剪斷兩側(cè)肋骨，暴露胸腔。將肺等器官向左翻，緊靠胸椎的即為胸主動(dòng)脈。用眼科剪小心剪出34cm長(zhǎng)的胸主動(dòng)脈，置于盛有預(yù)冷Kreb，s液的平皿里，用lml注射器輕輕沖去血管內(nèi)殘存血液，用虹膜剪小心剪去上面結(jié)締組織，并將鉗夾過以及注射器針頭觸碰過的兩端剪去。待血管處理干凈后，將其剪成23mm長(zhǎng)的血管環(huán)，將血管環(huán)懸掛于離體血管浴槽平行支架上，置于盛有10mlKrebs'液(37")恒溫浴槽內(nèi)，通有95%02和5%<:02(體積分?jǐn)?shù))的血管浴槽內(nèi)。標(biāo)本負(fù)荷2g,平衡lh，其間每15min換Krebs'液一次。血管環(huán)的舒縮活動(dòng)通過等長(zhǎng)張力換能器(MLT0201，澳大利亞)，連接至多道生理記錄儀(PowerLab400和四橋式放大器，澳大利亞)顯示并記錄。b.血管張力的檢測(cè)方法血管環(huán)在2g最適靜息張力下平衡lh后，以高K+溶液(KC160mmol/L，其它與krebs'液相同)預(yù)刺激2次，每次都用37'C的Krebs液沖洗至基線，反復(fù)沖洗多次，平衡30min。用3.0xio-3mol/L，lOpl去甲腎上腺素(NE)刺激血管，待張力由基礎(chǔ)張力2g升高達(dá)到平臺(tái)期后，加入待測(cè)物紅曲提取物溶液，觀察紅曲提取物舒張血管的效果并計(jì)算舒張幅度。計(jì)算公式舒張幅度(％)=[(張力最大值-張力最小值)/(張力最大值一基線張力值)]x100%。實(shí)施例一紅曲中舒張血管活性部位的粗提稱六份紅曲干粉，每份100g分為六組，每組加紅曲重量IO倍的不同質(zhì)量濃度的乙醇溶液超聲提取，每次1小時(shí)，共提取三次，合并濾液，過濾去渣，濾液減壓濃縮得粗提品浸膏，具體分組操作如下第一組100g紅曲干粉，每次加1000ml95。/o乙醇超聲提取l小時(shí)，共提取三次，過濾，合并三次濾液，減壓濃縮得干浸膏8.1g。第二組100g紅曲干粉，每次加1000ml80。/。乙醇超聲提取l小時(shí)，共提取三次，過濾，合并三次濾液，減壓濃縮得干浸膏9.5g。第三組100g紅曲干粉，每次加1000ml70Q/。乙醇超聲提取l小時(shí)，共提取三次，過濾，合并三次濾液，減壓濃縮得干浸膏9.8g。第四組100g紅曲干粉，每次加1000ml60。/。乙醇超聲提取l小時(shí)，共提取三次，過濾，合并三次濾液，減壓濃縮得干浸膏10.9g。第五組100g紅曲干粉，每次加1000ml50。/。乙醇超聲提取l小時(shí)，共提取三次，過濾，合并三次濾液，減壓濃縮得干浸膏10.5g。第六組100g紅曲干粉，第一次加1000ml95%乙醇超聲提取1小時(shí)，第二次加1000ml80。/。乙醇超聲提取1小時(shí)，第三次加1000ml60%乙醇超聲提取1小時(shí)，共提取三次，過濾，合并三次濾液，減壓濃縮得干浸膏12.2g。用體外血管環(huán)法測(cè)定紅曲粗提物對(duì)體外血管環(huán)的舒張作用分組精確稱取一定量紅曲粗提物樣品，配成終濃度為1.50mg/ml的Kreb's液10ml;本實(shí)驗(yàn)中選用維拉帕米作為陽性對(duì)照物，配成終濃度為5X10—5mol/L的Kreb's液10ml;選用等體積Kreb's液作為陰性對(duì)照物。所有被測(cè)樣品準(zhǔn)備好后，按前述方法進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試結(jié)果見表l:表l:紅曲粗提物對(duì)體外血管環(huán)的舒張作用紅曲提取物舒張幅度(％)N第一組粗提物62.9±6.110第二組粗提物71.2±6.510第三組粗提物51.8±5.210第四組粗提物29.0±2.810第五組粗提物27.7±2.010第六組粗提物58.3±5.310陽性對(duì)照物78.3±5.810陰性對(duì)照物010該組實(shí)驗(yàn)表明，超聲粗提過程中，使用質(zhì)量濃度為70%95%單一濃度的乙醇進(jìn)行提取，粗提物(如前三組)在實(shí)驗(yàn)中對(duì)體外血管環(huán)的舒張作用明顯；使用不同'濃度的乙醇組合提取(如第六組)，也可以達(dá)到較好的實(shí)驗(yàn)效果。不同濃度的乙醇組合提取的方式不限于第六組列舉的一種，可以是兩種或兩種以上不同濃度乙醇的組合，可以在操作中靈活掌握，組合提取時(shí)活性物質(zhì)的提取量有所增加，主要是較充分提取纟舌性物質(zhì)的同時(shí)，極性較大的組分和糖的溶出量增加了，但產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中應(yīng)考慮在后續(xù)醋酸乙酯萃取步驟中會(huì)增加萃取溶劑的量和成本。因此，本發(fā)明粗提過程優(yōu)化的乙醇濃度為80%。實(shí)施例二、紅曲中舒血管活性物質(zhì)的富集和純化根據(jù)實(shí)施例一的結(jié)果，80%乙醇粗提取對(duì)體外血管環(huán)的舒張作用最明顯。本實(shí)施例目的是進(jìn)一步確定粗提物中舒血管物質(zhì)的集中部位，將紅曲粗提物分成不同的極性段位，根據(jù)體外檢測(cè)結(jié)果判斷舒血管物質(zhì)主要集中在哪個(gè)極性段位。從而判斷舒血管物質(zhì)極性的大小。選取80%乙醇的紅曲粗提浸膏(實(shí)施例一的第二組粗提物)8g超聲水溶至100ml，分別用石油醚300ml和醋酸乙酯300ml依次萃取，連續(xù)萃取35次，合并相同萃取液，分為石油醚萃取部分、醋酸乙酯萃取部分和水相部分；水相部分過HP20型大孔吸附樹脂，再分別用水、30%乙醇、60%乙醇和95%乙醇依次洗脫；將以上各部分萃取液和洗脫液減壓濃縮成膏后，用體外血管環(huán)法測(cè)定其舒血管效果。測(cè)定時(shí)，精確稱取各部分紅曲萃取純化物樣品，配成終濃度為1.50mg/ml的Kreb's液10ml;本實(shí)驗(yàn)中選用維拉帕米作為陽性對(duì)照物，配成終濃度為5X10—5mol/L的Kreb's液10ml;選用等體積Kreb's液作為陰性對(duì)照物。所有被測(cè)樣品準(zhǔn)備好后，按前述方法進(jìn)行測(cè)試，測(cè)定結(jié)果參見表2。表2:紅曲萃取純化物對(duì)體外血管環(huán)的舒張作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>該組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，醋酸乙酯萃取部分舒血管活性最好。實(shí)施例三、紅曲中舒血管活性物質(zhì)的富集和純化選取80%乙醇的紅曲粗提浸膏(實(shí)施例一的第二組粗提物)8g超聲水溶至100ml，分別用氯仿、二氯甲烷、醋酸乙酯或正丁醇300ml直接萃取，連續(xù)萃取35次，合并相同萃取液，將萃取液減壓濃縮成膏后，用體外血管環(huán)法測(cè)定其舒血管效果。表3:紅曲萃取純化物對(duì)體外血管環(huán)的舒張作用<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>該組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，直接用氯仿、二氯甲烷、醋酸乙酯或正丁醇萃取部分的舒血管活性均較好。實(shí)施例三采用中等極性的有機(jī)溶劑直接萃取，其萃取產(chǎn)物的舒血管活性均較好，說明也能較好地獲得降壓活性物質(zhì)；使用正丁醇雖可較完全地萃取了降壓活性物質(zhì)，但同時(shí)引入了過多的雜種，使降壓活性物質(zhì)的含量相對(duì)降低。實(shí)施例二用石油醚、醋酸乙酯依次萃取，可以先用石油醚萃取，除去極性很小的一小部分非降壓或舒血管物質(zhì),可以提高醋酸乙酯萃取物中降壓活性物質(zhì)的含量，從而可以得到紅曲中大部分的舒張血管活性物質(zhì)。因此，實(shí)施例二的提純工藝為本發(fā)明優(yōu)選。根據(jù)實(shí)施例二和實(shí)施例三體外血管環(huán)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用7095%乙醇超聲提取或使用不同濃度的乙醇組合提取，然后再由中等極性有機(jī)溶劑直接萃取，或先經(jīng)過石油醚萃取再用中等極性有機(jī)溶劑萃取，其中中等極性有機(jī)溶劑萃取得到的物質(zhì)經(jīng)活性測(cè)試結(jié)果表明，紅曲中的大部分舒張血管活性物質(zhì)在提取液的中等偏小的極性部位。從測(cè)試結(jié)果也可以看出，活性物質(zhì)不止一個(gè)，在較大的極性部位甚至水相也可能存在舒張血管的活性物質(zhì)。實(shí)施例四效果驗(yàn)證根據(jù)實(shí)施例二的結(jié)果，醋酸乙酯萃取部分舒血管活性最好。本實(shí)施例目的是進(jìn)一步確定舒血管活性物質(zhì)含量的多少是否與體內(nèi)降壓活性的強(qiáng)弱一致。將紅曲粗提物、紅曲純化物及陽性對(duì)照物進(jìn)行體內(nèi)活性降壓測(cè)試，根據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷上述實(shí)施例二中舒血管活性最強(qiáng)的部位就是降壓活性最好的部位。從而判斷降壓活性部位極性的大小。實(shí)驗(yàn)材料選用18周齡健康SPF級(jí)雄性自發(fā)性高血壓大鼠，測(cè)量大鼠基礎(chǔ)血壓、心率、{本重后，根據(jù)血壓和體重值隨機(jī)分為5組，每組10只，并且組間的血壓、心率、和體重不存在差異(PO.05);另外，選用選與上述各組間體重不存在差異的健康SPF級(jí)Wistar雄性大鼠IO只作為給予高劑量紅曲純化物的正常動(dòng)物組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[許可證號(hào)SCXK(京)2007-0001];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物詞養(yǎng)于北京聯(lián)合大學(xué)應(yīng)用文理學(xué)院保健食品功能檢測(cè)中心SPF級(jí)動(dòng)物室[許可證號(hào)SYXK(京)2002-0021]。實(shí)驗(yàn)劑量本發(fā)明組經(jīng)過4年多的前期研究，用大鼠的多種高血壓模型反復(fù)論證了藥食兩用紅曲確實(shí)存在活性較好的降壓代謝產(chǎn)物，且摸索出紅曲粉末直接口服的推薦劑量為成人(按60kg體重計(jì))每日10g，相當(dāng)于0.17g/日/kg體重；實(shí)驗(yàn)設(shè)人體推薦量的5倍，即每日0.83g/kgBW組對(duì)腎血管型高血壓模型、D0CA—鹽型高血壓模型、L-硝基精氨酸型高血壓模型和原發(fā)型高血壓模型大鼠均顯示較好的降壓效果，而0.42g/kgBW組(實(shí)驗(yàn)設(shè)人體推薦量的2.5倍)也顯示了降壓效果，但不是很明顯。本發(fā)明經(jīng)過實(shí)驗(yàn)確知紅曲粉末用70%~卯％乙醇提取，出膏率約為10%;粗膏再用醋酸乙酯萃取，其萃取率為粗膏的1/4~1/3，故通過前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的有效劑量折算，可以設(shè)計(jì)如下劑量進(jìn)行原發(fā)型高血壓模型大鼠的實(shí)驗(yàn)測(cè)試。①紅曲粗提物組(n-10):灌胃紅曲粗提物劑量為90mg/BW/天(折合1.08g/人/天)②紅曲純化物組I(r^9):灌胃紅曲醋酸乙酯萃取物高劑量組30mg/BW/天(折合0.36g/人/天)③紅曲純化物組11(11=8):灌胃紅曲醋酸乙酯萃取物低劑量組15mg/BW/天(折合0.18g/人/天)陽性對(duì)照組(11=8):灌胃降壓藥組卡托普利10mg/BW/天(折合120mg/人/天)，壽比山0.21mg/BW/天(折合2.5mg/人/天)陰性對(duì)照組(n=9):灌胃蒸餾水，lml/只沃⑥空白對(duì)照組(n=10):給正常動(dòng)物組灌胃紅曲純化物I，劑量為30mg/BW/天(折合0.36g/人/天)。紅曲提取物、卡托普利和壽比山都溶于蒸餾水中，以上各組均按各自劑量連續(xù)灌胃4周，每周測(cè)量體重、血壓和心率一次。大鼠灌胃體積為1.0mL/100g鼠重。實(shí)驗(yàn)儀器RBP-1B型大鼠血壓計(jì)(2004003)、ES-1000E動(dòng)物天平(2003004)實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)前一周對(duì)受試動(dòng)物進(jìn)行多次血壓、心率的測(cè)定，使其適應(yīng)測(cè)壓環(huán)境。給予受試物前測(cè)定血壓、心率一次，作為基礎(chǔ)值。實(shí)驗(yàn)開始后每周測(cè)量血壓、心率一次。停止給予受試物之后一周后測(cè)定血壓、心率一次。將大鼠放入恒溫盒38t:保溫10min，選用松緊適中的套袖，將鼠尾套袖放置于鼠尾根部。套袖以約20-30mmHg/s的速度充氣加壓至脈搏消失之后約20mmHg處。每次測(cè)量間隔一定時(shí)間，記錄心率變化^10次/min、血壓變化S6mmHg的連續(xù)三次讀數(shù)。當(dāng)心率>500次/min時(shí)停止測(cè)量。數(shù)據(jù)處理血壓、心率為計(jì)量資料，用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值〈F謹(jǐn)，結(jié)論各組均數(shù)間差異無顯著性；F值^F。.05，PS0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果判定依據(jù)若受試物組動(dòng)物血壓明顯低于陰性對(duì)照組，差異具有顯著性(P0.05)，且對(duì)受試物組動(dòng)物心率和正常動(dòng)物組動(dòng)物的血壓及心率無影響，可判定該受試物輔助降血壓功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。結(jié)果表4:灌胃紅曲提取物期間大鼠體重的變化(；±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>由表4可見，大鼠的初始體重在各劑量組與陰性對(duì)照組間比較，差異均無顯著性(P〉0.05)。即大鼠的初始體重在各組間較為均衡。經(jīng)口給予大鼠不同劑量的藥物4周后，大鼠體重在各劑量組與陰性組間比較，差異均無顯著性(P〉0.05)?？梢姡景l(fā)明紅曲提取物對(duì)大鼠的體重?zé)o不良影響。表5:灌胃紅曲提取物期間大鼠心率的變化(；±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表5可見，經(jīng)口給予自發(fā)高血壓大鼠不同劑量的紅曲提取物，給予受試物l一4周及停止給予受試物1周的大鼠心率在各劑量組與陰性對(duì)照組間比較，差異均無顯著性(PX).05)。即本發(fā)明紅曲提取物對(duì)自發(fā)高血壓大鼠的心率無不良影工向。表6:紅曲提取物對(duì)正常動(dòng)物組大鼠血壓和心率的影響(；±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表6可見，經(jīng)口給予空白對(duì)照組(正常動(dòng)物組)大鼠30mg/BW/天的紅曲高劑量純化物，給予受試物l一4周及停止給予受試物1周的大鼠血壓和心率與給予受試物前比較，差異均無顯著性(PX).05)。即紅曲高劑量純化物對(duì)正常動(dòng)物組大鼠的血壓和心率無不良影響。表7:灌胃紅曲提取物期間大鼠血壓的變化(；±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>*:與陰性對(duì)照組比較有顯著差異由表7可見，經(jīng)口給予自發(fā)性高血壓大鼠不同劑量的紅曲提取物第4周，與陰性對(duì)照組比較，該受試物在紅曲粗提物和紅曲純化物高劑量組能顯著降低自發(fā)高血壓大鼠血壓(P<0.05)。該組實(shí)驗(yàn)結(jié)果還請(qǐng)參見圖2所示。小結(jié)經(jīng)口給予自發(fā)高血壓大鼠不同劑量的紅曲提取物第4周，與陰性對(duì)照組比較，紅曲粗提物組和紅曲純化物高劑量組能顯著降低自發(fā)高血壓大鼠血壓(P<0.05)。受試物對(duì)大鼠體重增長(zhǎng)無不良影響；對(duì)各劑量組自發(fā)高血壓大鼠心率和正常動(dòng)物組大鼠的血壓和心率均無影響。實(shí)驗(yàn)中紅曲粗提物組劑量為90mg/BW/天(相當(dāng)于紅曲粉末口服劑量的1/10)，而紅曲高劑量純化物組為30mg/BW/天，是紅曲粗提物組的1/3，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示減少量的兩種提取物均能顯著降低自發(fā)高血壓大鼠血壓，與紅曲^"末口服效果相當(dāng)，說明提取物中確實(shí)含有紅曲降壓活性物質(zhì)；紅曲高劑量純化物對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的降壓效果比紅曲粗提物組略好，且使用劑量是紅曲粗提物組的1/3，也說明紅曲降壓活性物質(zhì)主要集中在純化物中。由此可以確定體外離體實(shí)驗(yàn)中舒血管活性物質(zhì)含量高的部位，在自發(fā)性高血壓大鼠體內(nèi)的降壓測(cè)試中，降壓效果也越好；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明舒血管活性最強(qiáng)的部位就是降壓活性最好的部位，從而確定紅曲中的主要降壓活性部位在紅曲乙醇粗提物的中等偏小的極性部位。實(shí)施例五降壓新藥的制備醋酸乙酯浸膏的制取取紅曲粗粉5000g，用重量是紅曲10倍的80%的乙醇超聲提取3次，每次2小時(shí)，合并3次濾液，減壓濃縮至乙醇全部蒸出，剩余水溶液分別用石油醚、醋酸乙酯萃取，醋酸乙酯萃取液減壓濃縮得干浸膏。紅曲降壓片按l:l的重量比例稱取醋酸乙酯萃取部分的干浸膏36g，淀粉36g混勻，制成濕顆粒，在6(TC左右干燥，得干顆粒，壓成素片100片，包糖衣或薄膜衣，檢驗(yàn)合格，分裝，即得紅曲降壓片成品。紅曲降壓膠囊按1:0.05的重量比例稱取醋酸乙酯萃取部分的干浸膏36g，硬脂酸鎂1.8g混勻，制成濕顆粒，在4(TC左右干燥，制成100粒膠囊，檢驗(yàn)合格，分裝，即得紅曲降膠囊成品。以上通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了本發(fā)明提供的方法可以獲得紅曲的降壓活性物質(zhì)。依據(jù)該結(jié)論，本領(lǐng)域技術(shù)人員均了解，將其作為藥用活性成分，可以加入適應(yīng)不同使用劑型的可藥用輔料或載體制成藥品，使用劑型包括片劑、膠囊劑、口服液或滴丸劑；也可以加入其他可食用的輔劑制成保健品，包括保健目的的吞咽片、咀嚼片、泡騰片、膠囊、口服液、或保健食品或飲料等等。本發(fā)明在此不一一贅述。本發(fā)明首次用實(shí)驗(yàn)確證了紅曲中的主要降壓活性物質(zhì)集中在紅曲粗提物的中等偏小的極性段位，判斷紅曲中的主要降壓活性物質(zhì)是小分子物質(zhì)，且是脂溶性的，不是文獻(xiàn)報(bào)道的水溶性的多肽、腺苷和小分子的GABA。由于本發(fā)明是從藥食兩用紅曲中純化得到的降壓活性部位，所以具有毒性小、安全等特點(diǎn)；又因?yàn)榧t曲是由大米發(fā)酵而來，所以成本低，資源廉價(jià)、易得，降壓功效已得到確證，活性部位可以開發(fā)成為一個(gè)新的降壓藥物和/或降壓保健保健品。權(quán)利要求1、一種紅曲中降壓活性物質(zhì)的提取方法，其特征在于，采用以下步驟步驟一從紅曲干粉中用乙醇提取活性物質(zhì)，去除乙醇得濃縮液；步驟二對(duì)濃縮液再用中等極性有機(jī)溶劑萃取，得萃取液；步驟三減壓回收萃取液得到紅曲中降壓活性物質(zhì)；其中所述中等級(jí)性有機(jī)溶劑為選自氯仿、二氯甲烷、醋酸乙酯和正丁醇中的一種或多種的混合。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述方法，其特征在于，步驟二中，先用石油醚萃取后再用中等極性有機(jī)溶劑萃取。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述方法，其特征在于，所述步驟一濃縮液以下述過程獲取向紅曲干粉中加入乙醇溶液分多次超聲提取，合并濾液，過濾去渣，濾液減壓濃縮至乙醇全部蒸出即可。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，所述多次醇提中使用質(zhì)量濃度為70%95%單一濃度的乙醇多次提取，或依次由高濃度至低濃度使用兩種或兩種以上質(zhì)量濃度在60%95%范圍內(nèi)的乙醇溶液組合提取；優(yōu)選使用80%單一濃度的乙醇分三次提取，或依次使用95%、80%和60%的乙醇分三次組合提取。5、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述方法，其特征在于，所述步驟二用中等極性有機(jī)溶劑萃取，萃取多次，然后合并萃取液；使用石油醚時(shí)，先用石油醚多次萃取，然后再用中等極性有機(jī)溶劑多次萃取，合并中等極性溶劑萃取液。6、上述任一權(quán)利要求所述方法獲取的紅曲降壓活性物質(zhì)。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述紅曲降壓活性物質(zhì)，其特征在于，其為脂溶性小分子物質(zhì)。8、權(quán)利要求6或7所述紅曲降壓活性物質(zhì)在制備降壓藥物中的應(yīng)用。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述應(yīng)用，所述藥物為紅曲降壓片劑、膠囊劑、口服液或滴丸劑；其中紅曲降壓片是按1:1的重量比例將紅曲降壓活性物質(zhì)的干浸膏和淀粉混合，按制片工藝制成紅曲降壓片成品；紅曲降壓膠囊是按1:0.05的重量比例將紅曲降壓活性物質(zhì)的干浸膏和硬脂酸鎂混合，按制膠囊工藝制成紅曲降壓膠囊成品。10、權(quán)利要求6或7所述紅曲降壓活性物質(zhì)在制備降壓保健品中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了從紅曲中提取純化降壓活性物質(zhì)的方法，是用70～95％乙醇超聲提取或依次使用不同濃度的乙醇組合提取得到粗提品，然后再用石油醚、醋酸乙酯依次萃取后，減壓回收醋酸乙酯萃取液得到紅曲中降壓活性物質(zhì)。本發(fā)明首次驗(yàn)證紅曲的主要降壓功效組分存在于乙醇提取液的中等偏小極性部位，并依此得到以該活性部位制成的藥品和保健品。實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明提取的活性部位有明顯的降壓功能，又由于紅曲本身就可食用，所以其具有毒性小、安全等特點(diǎn)，以此活性部位作為活性成分可以得到有效的降壓新藥和/或降壓保健品，具有高效、低毒且原料廉價(jià)易得的特點(diǎn)，為高血壓的防治開辟了一條新途徑。文檔編號(hào)A61P9/00GK101416989SQ20071017643公開日2009年4月29日申請(qǐng)日期2007年10月26日優(yōu)先權(quán)日2007年10月26日發(fā)明者唐粉芳,尚小雅,平常,鄭健全,郭俊霞,金宗濂,文陳申請(qǐng)人:北京聯(lián)合大學(xué)