專利名稱：一種丹參水溶性成分的衍生物erjt－12及其抗腫瘤應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹參水溶性成分的衍生物及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
中藥丹參是唇形科鼠尾草屬植物丹參(Salvia miltiorrhizae Bge.，SM)的干燥根及根莖，性味苦微寒涼。丹參是我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中應(yīng)用最廣泛的中藥之一，有悠久的臨床應(yīng)用歷史。丹參首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代本草多有收載。《中華人民共和國藥典》(2000年版第一部)歸納丹參的功能與主治為活血通絡(luò)，祛瘀止痛，涼血消癰，清心除煩等。以丹參為主的制劑有復(fù)方丹參注射劑、復(fù)方丹參滴丸及丹參片。近十年來主要應(yīng)用于下列疾病冠心病、肺心病、缺血性中風(fēng)、慢性腎功能不全、急性腎炎、急慢性肝炎等。
丹參的化學(xué)成分主要分為脂溶性成分和水溶性成分。20世紀(jì)早期的研究主要集中在以丹參酮為代表的脂溶性成分方面，經(jīng)過幾十年的努力，取得了巨大成就。丹參酮具有多種生物活性，主要表現(xiàn)為保護(hù)心肌、抗腫瘤、抗炎、抑制血小板聚集和抗血栓形成等；對(duì)丹參水溶性成分的研究起步較晚，主要原因是受到分離材料及分離鑒定技術(shù)的限制，而且早期的工作主要圍繞在水溶性成分的分離和結(jié)構(gòu)鑒定方面，涉及生物活性的研究較少。從70年代中期開始，對(duì)丹參水溶性有效成分的研究成為研究丹參的重要內(nèi)容。丹參水溶性有效成分主要為丹酚酸，具有抗肝損傷和肝纖維化、保護(hù)心腦血管、防治動(dòng)脈粥樣硬化等作用。遺憾的是，丹參水溶性成分抗腫瘤方面的研究仍然很少。
1991年，香港中文大學(xué)黃乃正從丹參水溶性成分中分離到天然的苯并呋喃類化合物5-(3-羥基丙基)-7-甲氧基-2-(3-甲氧基-4-羥基)-3-苯并[b]呋喃甲醛，它是腺苷A1受體拮抗劑，在治療心絞痛、心肌梗塞方面具有良好的應(yīng)用前景。2004年，臺(tái)灣學(xué)者發(fā)現(xiàn)，該化合物能夠抑制多種人腫瘤細(xì)胞的生長，并能抑制腫瘤細(xì)胞微管蛋白的聚合。這一發(fā)現(xiàn)為探索丹參水溶性成分的抗腫瘤作用提供了重要參考。然而，上述化合物在丹參中的含量?jī)H為0.1×10-6，因此，如果能夠以這個(gè)天然化合物為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)合成并篩選出抗腫瘤活性突出的新型衍生物，那是具有重要意義的事情。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種丹參水溶性成分的衍生物ERJT-12。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述衍生物ERJT-12在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明根據(jù)從丹參水溶性成分中分離到天然的化合物苯并呋喃類化合物5-(3-羥基丙基)-7-甲氧基-2-(3-甲氧基-4-羥基)-3-苯并[b]呋喃甲醛，設(shè)計(jì)合成衍生物ERJT-12，中文名稱為2-(3-甲氧基-4-羥基苯基)-4-甲?；?5-(2-甲氧基羧基乙基)-7-甲氧基苯并[b]呋喃；英文名稱為2-(3’-methoxy-4’-hydroxyphenyl)-4-formyl-5-(2’-(methoxycarbonyl)ethyl)-7-methoxybenzo[b]furan；分子式C21H20O7；分子量為384.38；熔點(diǎn)為110～112℃；淺黃色固體。結(jié)構(gòu)式如式(I) 該化合物以微管為靶點(diǎn)。體外藥理實(shí)驗(yàn)表明，化合物ERJT-12對(duì)多種人腫瘤細(xì)胞，包括人乳腺癌MCF-7，人肺腺癌GLC82，人卵巢癌HeLa，胃腺癌MGC803，膀胱癌ECV304，口腔上皮癌KB-3-1和白血病CCRF/CEM細(xì)胞等，具有明顯的生長抑制作用；Wright-Giemsa染色顯示，化合物ERJT-12使乳腺癌MCF-7細(xì)胞阻滯于有絲分裂期(M期)；微管蛋白聚合活性實(shí)驗(yàn)表明，化合物ERJT-12能夠抑制純化微管蛋白的聚合。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)新穎，合成方法切實(shí)可行；該化合物具有顯著的體外抗腫瘤活性，特別是其作用靶點(diǎn)明確，即作用于細(xì)胞的微管蛋白，而目前能夠用于臨床治療的以微管蛋白為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物非常有限。


圖1為ERJT-12誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7阻滯于有絲分裂期；圖2為ERJT-12對(duì)微管蛋白聚合活性的影響。其中，a為對(duì)照細(xì)胞，b為ERJT-12處理細(xì)胞。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1化合物ERJT-12的合成將3.0mmol化合物ERJT-11溶于10mL DMF中，0℃下滴加20mmol POCl3，r.t.攪拌20分鐘，95℃加熱攪拌2小時(shí)，將反應(yīng)液倒入3.8g醋酸鈉和4.6g氯化銨的30ml冰水溶液中，二氯甲烷(15mL×3)提取，飽和氯化鈉水溶液洗滌(5mL×3)，無水NaSO4干燥，用100～200目硅膠柱層析，乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2洗脫得產(chǎn)物ERJT-12。
ERJT-12的合成路線為 ERJT-12為淺黃色固體，產(chǎn)率為54％。產(chǎn)物經(jīng)元素分析、IR譜、1H NMR譜、MS譜測(cè)定。分析結(jié)果如下元素分析(計(jì)算值/測(cè)定值)(％)C 65.63/65.89，H 5.21/5.25；IR譜υ3442，1729，1642，1508，1405，1287，1141，858，829，815cm-1；1H NMR譜(500MHz，CDCl3)δ2.73(2H，t，J＝8.0Hz，CH2)，3.42(2H，t，J＝8.0Hz，CH2)，3.68(3H，s，OCH3)，4.00(3H，s，OCH3)，4.11(3H，s，OCH3)，5.88(1H，br，OH)，6.66(1H，s，ArH)，6.98(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.38(1H，d，J＝2.0Hz，ArH)，7.49(1H，dd，J＝8.0Hz，2.0Hz，ArH)，7.67(1H，s，ArH)，10.49(1H，s，CHO)；FAB-MS譜m/z(％)384(M，48％)。
實(shí)施例2發(fā)明所述化合物的體外實(shí)驗(yàn)(1)化合物體外抗腫瘤細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)所選細(xì)胞株包括人乳腺癌MCF-7，人肺腺癌GLC82，人卵巢癌HeLa，胃腺癌MGC803，膀胱癌ECV304，口腔上皮癌KB-3-1和白血病CCRF/CEM細(xì)胞等。取對(duì)數(shù)生長期腫瘤細(xì)胞制成一定濃度的細(xì)胞懸液接種于96孔板中，每孔加入一定濃度的ERJT-12，對(duì)照孔不加化合物。培養(yǎng)72小時(shí)后加入一定量MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，棄去培養(yǎng)液，每孔加入200ul二甲基亞砜，用酶標(biāo)儀測(cè)定570/630nm雙波長吸光光度值，計(jì)算抑制50％細(xì)胞生長的化合物濃度(IC50)。結(jié)果見表1。
(2)化合物誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞有絲分裂阻滯分別收集對(duì)照細(xì)胞和ERJT-12處理的細(xì)胞，用細(xì)胞固定液(甲醇∶冰醋酸＝3∶1)固定15分鐘，離心后重懸細(xì)胞，滴片于載玻片上晾干，用Giemsa染液染色15～20分鐘，用水沖洗掉多余的染液，晾干后于顯微鏡下觀察。處于有絲分裂期的細(xì)胞核膜消失，染色體松散地分布于胞漿中，而間期細(xì)胞具有完整的核膜。結(jié)果見圖1(放大300倍)a，對(duì)照細(xì)胞；b，ERJT-12處理細(xì)胞。
(3)微管蛋白聚合活性實(shí)驗(yàn)迅速融化-80℃保存的純化微管蛋白溶液并放入冰浴，用聚合緩沖液稀釋到2mg/ml，加入GTP至1mmol/L。從冰浴上馬上取適量微管蛋白溶液加入比色杯，在紫外分光光度計(jì)350nm下調(diào)定為“0”點(diǎn)。然后將比色杯置于37℃保溫，每5分鐘測(cè)定吸光光度值一次，共45分鐘。隨著保溫時(shí)間的延長，微管蛋白逐漸聚合，表現(xiàn)為OD值上升，直至達(dá)到坪值。重復(fù)上述過程，在樣品中加入化合物ERJT-12或秋水仙素。根據(jù)記錄的OD值繪制變化曲線。結(jié)果見圖2。
表1ERJT-12體外抑制腫瘤細(xì)胞生長活性實(shí)驗(yàn)

IC50為50％抑制濃度體外藥理實(shí)驗(yàn)表明，化合物ERJT-12對(duì)多種人腫瘤細(xì)胞，包括人乳腺癌MCF-7，人肺腺癌GLC82，人卵巢癌HeLa，胃腺癌MGC803，膀胱癌ECV304，口腔上皮癌KB-3-1和白血病CCRF/CEM細(xì)胞等，具有明顯的生長抑制作用；Wright-Giemsa染色顯示，化合物ERJT-12使乳腺癌MCF-7細(xì)胞阻滯于有絲分裂期(M期)；微管蛋白聚合活性實(shí)驗(yàn)表明，化合物ERJT-12能夠抑制純化微管蛋白的聚合。因此，化合物ERJT-12可用于制備抗腫瘤藥物。
權(quán)利要求
1.一種丹參水溶性成分的衍生物ERJT-12，其分子式為C21H20O7；分子量為384.38；熔點(diǎn)為110～112℃；結(jié)構(gòu)式如式(I)所示
2.權(quán)利要求1所述丹參水溶性成分的衍生物ERJT-12在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種丹參水溶性成分的衍生物ERJT－12及其抗腫瘤應(yīng)用。本發(fā)明根據(jù)從丹參水溶性成分中分離到天然的化合物苯并呋喃類化合物5－(3－羥基丙基)－7－甲氧基－2－(3－甲氧基－4－羥基)－3－苯并[b]呋喃甲醛，設(shè)計(jì)合成衍生物ERJT－12，該化合物以微管為靶點(diǎn)，對(duì)多種人腫瘤細(xì)胞具有明顯的生長抑制作用，能使乳腺癌MCF－7細(xì)胞阻滯于有絲分裂期，并能夠抑制微管蛋白的聚合。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1803786SQ200610033300
公開日2006年7月19日 申請(qǐng)日期2006年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月24日
發(fā)明者冼勵(lì)堅(jiān), 楊華, 龐冀燕, 許遵樂 申請(qǐng)人:中山大學(xué)