專利名稱：清開靈中難溶性動物成分水解工藝的改進(jìn)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是涉及一種清開靈中難溶性動物成分水解工藝的改進(jìn)。
背景技術(shù)：
清開靈顆粒劑是一種以牛膽酸、豬去氧膽酸、珍珠母粉、水牛角粉水解物、黃芩甙、 桅子、板藍(lán)根、金銀花提取物等中藥材為主要原料的中成藥。該產(chǎn)品具有清熱解毒、鎮(zhèn)靜安 神之功效，適用于由溫?zé)岵∫鸬母邿煌?，煩燥不安、咽喉腫痛等癥，療效高，副作用小， 被國家衛(wèi)生部列為基本藥物，是臨床急癥用藥。其中，水牛角的化學(xué)成分水牛角可作為犀角的代用品，因其成分與犀角大同小異 (一)留醇類均含膽留醇；(二)氨基酸均含丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、亮氨酸、 脯氨酸、酪氨酸、組氨酸、纈氨酸；(三)肽類堿性肽類水解，兩者都產(chǎn)生精氨酸、賴氨酸、組 氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、纈氨酸、亮氨酸，但犀角還有天冬氨酸；(四)胍基衍生物均 有精氨酸及胍；(五)蛋白質(zhì)兩種角所含大部相同，但犀角尚有不同的蛋白質(zhì)存在；(六) 用氧化鋁層析法，均分離出同樣熔點215 218°C的結(jié)晶，具有興奮離體蛙心的作用。摘自(7k牛角的功‘效介紹 http://www. Dootool. net/health/dir cndrug/f 3/ dir 83/zhonRyao 1651. html)珍珠母的主要成分各種珍珠母含碳酸鈣，含量達(dá)80% 90%以上；亦含碳酸 鎂、磷酸鈣、角蛋白和多種元素等.馬氏珍珠貝角蛋白中含甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨 酸、絲氨酸、纈氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、精氨酸、組氨酸、酪氨酸等20余種氨基酸.珍珠貝所含 微量元素與珍珠基本相同.珍珠層與珍珠均是母貝的外套膜和珍珠囊的表皮細(xì)胞所分泌的珍珠質(zhì)所形成，二 者光澤、顏色及成分基本一致.。摘自(珍珠母的作用 http //www, ^syndication. com/d0252fe3b7f4086e40dd982 4f57f7d05. html)在其原有制備工藝中，珍珠母粉和水牛角粉水解物的制備為取水牛角粉，攪拌下緩緩加于8倍量的4mol/l氫氧化鋇溶液中加熱至沸，攪拌下 保持微沸6 7小時，隨時補(bǔ)加去離子水趁熱過濾。濾渣用少量熱水洗滌兩次，過濾，合并濾 液備用；取珍珠母粉，攪拌下緩緩加于8倍量的4mol/l硫酸水溶液中，加熱至沸并保持微沸 6 7小時，隨時補(bǔ)加去離子水，趁熱過濾。濾渣用少量熱水洗滌兩次，過濾，合并濾液，放冷 后白色針狀結(jié)晶析出，過濾，在攪拌下緩緩加入到水牛角水解液中，用氫氧化鋇調(diào)PH至4， 取濾液濃縮后用乙醇沉淀，取濾液回收乙醇，調(diào)PH至7后濾液濃縮成浸膏備用。此工藝由于其水解效率高、水解添加物清除徹底，被所有生產(chǎn)廠家所青睞，一直沿 用至今。隨著科技的不斷進(jìn)步，敏感的人們結(jié)合新的研究成果逐步發(fā)現(xiàn)，高溫下酸堿水解 醇沉法有三個漏洞其一，高溫下酸堿水解對氨基酸有破壞
在中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所申請的申請?zhí)枮?1133424.X的《一種角蛋白 酶的固態(tài)發(fā)酵制備方法及其應(yīng)用》中稱“傳統(tǒng)的角蛋白水解方式主要為高溫高壓蒸煮或酸 水解，屬于物理化學(xué)處理工藝，其工藝條件苛刻，易對熱敏氨基酸造成破壞，動物利用率低， 并造成環(huán)境污染。”(實際生產(chǎn)中，在上述酸堿法水解清開靈中珍珠母粉和水牛角粉的過程 中，可同時造成空氣、水源、土壤三重污染)；其二，高溫下酸堿水解可產(chǎn)生人造氨基酸在芬蘭生物技術(shù)信息公司申請的申請?zhí)枮?2101599. 2的《水解角蛋白的方法》 中稱“化學(xué)處理的弊端是部分或甚至全部損毀某些氨基酸并且在水解物中產(chǎn)生極不均勻 的大小的肽。化學(xué)水解，尤其是在堿性條件下，產(chǎn)生可能是具有毒副作用的人造氨基酸，羊 毛硫氨酸和賴氨基丙氨酸”(一旦人造氨基酸被人體所利用，其后果可大可小難以確認(rèn)難以 預(yù)測)。其三，醇沉可使珍珠母中大量的鈣不容物和微量元素成為工業(yè)垃圾被廢棄然而，中國補(bǔ)鈣網(wǎng)http://www. 236339. com/www/4/2007-l 1/461. html 發(fā)表題為 《鈣能預(yù)防治療感冒》的文章；同時，中國補(bǔ)鈣網(wǎng) http://www. 236339. com/www/4/2007-10/355. html 還發(fā)表題 為《缺鈣會導(dǎo)致120多種疾病的發(fā)生》的文章?？梢姡彘_靈原工藝中珍珠母粉和水牛角粉水解部分值得商榷，有進(jìn)行工藝改革 的必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在不放棄對原有工藝進(jìn)行局部改造的前提下，更優(yōu)選地提出一種 借用現(xiàn)代生物酶解技術(shù)水解清開靈中難溶性動物成分的工藝，采用此工藝可以避免原工藝 中化學(xué)水解法的所有不足，使水解過程更接近腸道的消化酶解，可全方位的保留原藥材中 的有效成分，有利于人體吸收，有利于進(jìn)一步提高藥物的生物利用度及療效。本發(fā)明所述的生物酶解技術(shù)水解清開靈中難溶性動物成分的工藝主要包括預(yù)處理、酶解、后處理等三道工序?；驗榱巳轿坏谋Ａ粼幉闹械挠行С煞?，可在上述工藝中追加酸解工序，此酸 解工序可加在酶解工序前，也可加在酶解工序后，即或預(yù)處理、酶解、酸解、后處理四道工序；或預(yù)處理、酸解、酶解、后處理四道工序。本發(fā)明所述清開靈中難溶性動物成分主要是指清開靈處方中珍珠母粉和水牛角 粉中的角蛋白、或包括無機(jī)鈣和多種微量元素。本發(fā)明所述生物酶解技術(shù)是指通過酶的參與對清開靈處方中珍珠母粉和水牛角 粉進(jìn)行類同于胃腸道消化的水解。本發(fā)明所述酶是指由細(xì)菌(如枯草芽孢桿菌、粘金黃桿菌)，霉菌(如宇佐美曲 霉)，以及植物(如菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶)和動物產(chǎn)生(如尿激酶、蜂蜜中的酶)的 由不同制造商提供的商品酸性、中性和堿性蛋白酶，或其他適合的蛋白水解酶。所述的對珍珠母粉和水牛角粉的水解可以是兩種成分分別水解，更優(yōu)選的是兩種 成分放在一起混合水解，混合水解珍珠母粉中的無機(jī)成分可促進(jìn)水牛角粉的水解。這是因為多數(shù)酶的活性表達(dá)依賴低濃度二價金屬離子(Ca2+、Mg2+等)的促進(jìn)。本發(fā)明所述的預(yù)處理工序，主要是指為了減輕酶解工序的壓力，對珍珠母和水牛 角進(jìn)行的粉碎和旨在破壞角蛋白s-s硫橋的角蛋白變性處理，如煮沸或加熱至80 100°C預(yù)處理；酸解預(yù)處理；亞硫酸根離子預(yù)處理。本發(fā)明所述的酶解工序包括可選擇產(chǎn)酶微生物的直接水解、和/或可選擇含酶植物的直接水解和/或可選擇提純商品酶的水解，更優(yōu)選的是提純商品酶的水解；提純商品酶可以選擇一種蛋白酶或幾種蛋白酶的混合物，最適PH值是中性或弱堿性，優(yōu)選的是將PH值控制在6 8. 5范圍，具有抗熱性，可根據(jù)所用的酶將溫度安排在50 80°C。本發(fā)明所述的后處理工序，主要是指通過超聲處理進(jìn)一步提升酶解收率，和固液 分離及干燥過程。本發(fā)明所述酸解工序所用的酸可選用乳酸、醋酸、檸檬酸、葡萄糖酸、鹽酸等人體 可耐受的與鈣可形成水溶性鹽的酸。
具體實施例方式為了進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明，不受此限制的給出如下實施例1、實施例1，只保留角蛋白水解成分的工藝1所述的對原有工藝進(jìn)行局部改造是指將原工藝的“4mol/l氫氧化鋇溶液”和 "4mol/l硫酸水溶液”兩處“加熱至沸，攪拌下保持微沸6 7小時”修改為“加熱至40 80°C超聲水解2 3小時”。從而可適當(dāng)?shù)膹浹a(bǔ)原工藝的部分缺欠與不足。在原工藝的基 礎(chǔ)上改進(jìn)后的新工藝為取水牛角粉，攪拌下緩緩加于8倍量的4mol/l氫氧化鋇溶液中加熱至40 80°C 超聲水解2 3小時，隨時補(bǔ)加去離子水趁熱過濾。濾渣用少量熱水洗滌兩次，過濾，合并 濾液備用；取珍珠母粉，攪拌下緩緩加于8倍量的4mol/l硫酸水溶液中，加熱至40 80°C 超聲水解2 3小時，隨時補(bǔ)加去離子水，趁熱過濾。濾渣用少量熱水洗滌兩次，過濾，合并 濾液，放冷后白色針狀結(jié)晶析出，過濾，在攪拌下緩緩加入到水牛角水解液中，用氫氧化鋇 調(diào)PH至4，取濾液濃縮后用乙醇沉淀，取濾液回收乙醇，調(diào)PH至7后濾液濃縮成浸膏備用。2、實施例2，只保留角蛋白水解成分的工藝2 (1)預(yù)處理將60 100目的珍珠母粉和水牛角粉置于容器中，加10 20倍量 的水(一般可用自來水)攪拌制成懸浮液；煮沸或加熱至80 100°C預(yù)處理10-60分鐘； 最佳20分鐘，冷卻至40-50°C ；(2)酶解加人微生物蛋白酶。其用量約為珍珠母粉和水牛角粉重量的2-3%，然 后水解2-6小時，將濾液再升溫至80-100°C滅酶；(3)后處理將所得溶液離心或過濾，濾液噴霧干燥即得酶解珍珠母和水牛角，或 濾液濃縮成浸膏，備用。
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3、實施例3，保留全有效水解成分的工藝1 :(1)預(yù)處理將60 100目的珍珠母粉和水牛角粉置于容器中，加10 20倍量 的水(一般可用自來水)攪拌制成懸浮液；煮沸或加熱至80 100°C預(yù)處理10-60分鐘； 最佳20分鐘，冷卻至40-50°C ；(2)酶解加人微生物蛋白酶。其用量約為珍珠母粉和水牛角粉重量的2-3%，然 后水解2-6小時；(3)酸解向曲水解珍珠液中加人乳酸轉(zhuǎn)化或酸解，乳酸的加人量為珍珠母粉 乳酸=1 3W/V，在室溫下攪拌酸解30-60分鐘，使珍珠粉中的碳酸鈣全部溶解，得到酶解 珍珠母和水牛角全溶液；(4)后處理將所得溶液離心或過濾(因珍珠粉幾乎全部溶解，故不溶物很少)將 不溶物再次混懸于適量濾液中超聲處理、離心或過濾合并濾液，將濾液再升溫至80-100°C 滅酶，噴霧干燥即得全溶性酶解珍珠母和水牛角，或濾液濃縮成浸膏，備用。4、實施例4，保留全有效水解成分的工藝2 (1)預(yù)處理將60 100目的珍珠母粉和水牛角粉置于容器中，加5 10倍量的 水(一般可用自來水)攪拌制成懸浮液；煮沸或加熱至80 90°C預(yù)處理10-60分鐘；最佳 20分鐘，冷卻至40-50 °C ；(2)酸解向曲水解珍珠液中加人乳酸轉(zhuǎn)化或酸解，乳酸的加人量為珍珠母粉 乳酸=1 3W/V，在室溫下攪拌酸解30-60分鐘，使珍珠粉中的碳酸鈣全部溶解，離心，制得 水溶性珍珠母活性鈣溶液，備用；(3)酶解離心不溶部分5 10倍量的水?dāng)嚢柚瞥蓱腋∫?，加人微生物蛋白酶。?用量約為珍珠母粉和水牛角粉重量的2-3%，然后水解2-6小時，再升溫至80-100°C滅酶， 終止酶解過程；(4)后處理將酶解所得溶液離心或過濾，與上述備用的水溶性珍珠母活性鈣溶 液合并濾液，混合均勻，將混合液噴霧干燥即得全溶性酶解珍珠母和水牛角，或混合液濃縮 成浸膏，備用。由于本發(fā)明所述新工藝屬于清開靈制劑前的藥材處理階段，因此本發(fā)明所述新工 藝制備出的備用的珍珠母和水牛角的水解產(chǎn)物，可直接用于清開靈的所有各種劑型的制 劑，值得一提的是在用于制備注射劑時需要將角蛋白完全水解成氨基酸。
權(quán)利要求
清開靈中難溶性動物成分水解工藝的改進(jìn)，其特征在于，本發(fā)明在不放棄對原有工藝進(jìn)行局部改造的前提下，更優(yōu)選地提出一種借用現(xiàn)代生物酶解技術(shù)水解清開靈中難溶性動物成分的工藝；其中，所述的生物酶解技術(shù)水解清開靈中難溶性動物成分的工藝主要包括預(yù)處理、酶解、后處理三道工序；或預(yù)處理、酶解、酸解、后處理四道工序；或預(yù)處理、酸解、酶解、后處理四道工序。
2.如權(quán)利要求1所述的清開靈中難溶性動物成分水解工藝的改進(jìn)，其特征在于，所述 清開靈中難溶性動物成分主要是指清開靈處方中珍珠母和水牛角中的角蛋白，或包括無機(jī) 鈣和多種微量元素。
3.如權(quán)利要求1所述的清開靈中難溶性動物成分水解工藝的改進(jìn)，其特征在于，所述 生物酶解技術(shù)是指通過酶的參與對清開靈處方中珍珠母粉和水牛角粉進(jìn)行類同于胃腸道 消化的水解；所述酶是指由細(xì)菌(如枯草芽孢桿菌、粘金黃桿菌)，霉菌(如宇佐美曲霉)，以及植 物(如菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶)和動物產(chǎn)生(如尿激酶、蜂蜜中的酶)的由不同制造商 提供的商品酸性、中性和堿性蛋白酶，或其他適合的蛋白水解酶。
4.如權(quán)利要求1、3所述的清開靈中難溶性動物成分水解工藝的改進(jìn)，其特征在于，所 述的對珍珠母粉和水牛角粉的酶解可以是兩種成分分別水解，更優(yōu)選的是兩種成分放在一 起混合水解。
5.如權(quán)利要求1所述的清開靈中難溶性動物成分水解工藝的改進(jìn)，其特征在于，所述 的預(yù)處理工序，主要是指對珍珠母和水牛角進(jìn)行的粉碎和旨在破壞角蛋白s-s硫橋的角蛋 白變性處理，如煮沸或加熱至80 100°C預(yù)處理； 酸解預(yù)處理； 亞硫酸根離子預(yù)處理。
6.如權(quán)利要求1所述的清開靈中難溶性動物成分水解工藝的改進(jìn)，其特征在于，所述 的酶解工序包括可選擇產(chǎn)酶微生物的直接水解、和/或可選擇含酶植物的直接水解和/或可選擇提純商品酶的水解，更優(yōu)選的是提純商品酶的水解；提純商品酶可以選擇一種蛋白酶或幾種蛋白酶的混合物，最適PH值是中性或弱堿性，優(yōu)選的是將PH值控制在6 8. 5范圍，具有抗熱性，可根據(jù)所用的酶將溫度安排在50 80°C。
7.如權(quán)利要求1所述的清開靈中難溶性動物成分水解工藝的改進(jìn)，其特征在于，所述 的后處理工序，主要是指通過超聲處理進(jìn)一步提升酶解收率，和固液分離及干燥過程。
8.如權(quán)利要求1所述的清開靈中難溶性動物成分水解工藝的改進(jìn)，其特征在于，所述 酸解工序所用的酸可選用乳酸、醋酸、檸檬酸、葡萄糖酸、鹽酸等人體可耐受的與鈣可形成 水溶性鹽的酸。
9.如權(quán)利要求1所述的清開靈中難溶性動物成分水解工藝的改進(jìn)，其特征在于，所述 的對原有工藝進(jìn)行局部改造是指將原工藝的“4mol/l氫氧化鋇溶液”和“4mol/l硫酸水溶 液”兩處“加熱至沸，攪拌下保持微沸6 7小時”修改為“加熱至40 80°C超聲水解2 3小時”。
10.如權(quán)利要求1 9所述的清開靈中難溶性動物成分水解工藝的改進(jìn)，其特征在于， 所述新工藝制備出的珍珠母和水牛角的水解產(chǎn)物，可直接用于清開靈的所 有各種劑型的制 劑。
全文摘要
本發(fā)明的清開靈中難溶性動物成分水解工藝的改進(jìn)，在不放棄對原有工藝進(jìn)行局部改造的前提下，更優(yōu)選地提出一種借用現(xiàn)代生物酶解技術(shù)水解清開靈中難溶性動物成分的工藝，采用此工藝可以避免原工藝中化學(xué)水解法的(其一，高溫下酸堿水解對氨基酸有破壞其二，高溫下酸堿水解可產(chǎn)生人造氨基酸其三，醇沉可使珍珠母中大量的鈣不容物和微量元素成為工業(yè)垃圾被廢棄)所有不足，使水解過程更接近腸道的消化酶解，可全方位的保留原藥材中的有效成分，有利于人體吸收，有利于進(jìn)一步提高藥物的生物利用度及療效。
文檔編號A61K36/744GK101850007SQ20091013043
公開日2010年10月6日 申請日期2009年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月6日
發(fā)明者叢繁滋 申請人:叢繁滋