專利名稱：：治療用途的來自人血漿的內(nèi)-α抑制劑蛋白質(zhì)的制備和組合物的制作方法治療用途的來自人血漿的內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)的制備和組合物相關(guān)申請本申請包含2003年11月8日申請的發(fā)明名稱為"治療用途的來自人血漿的內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)的制備和組合物"的臨時(shí)專利申請系列No.60/_中所公開的相關(guān)主題，該申請的公開內(nèi)容在此以其整體引入作為參考。政府支持本發(fā)明的一部分由國家健康研究所撥款R01GM053008、R01GM057468和R43GM065667支持。發(fā)明背景內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(Ialp)家族是一組血漿伴生的絲氨酸蛋白酶抑制劑。該家族的成員由重鏈和輕鏈多肽亞基構(gòu)成，通過糖氨基聚糖共價(jià)連接。輕鏈，也稱為bikunin,擔(dān)負(fù)分子的絲氨酸蛋白酶抑制劑活性。名字"bikunin"反映出存在2個(gè)Kunitz型的蛋白酵抑制結(jié)構(gòu)域。正常的血漿中，發(fā)現(xiàn)大部分bikunin是復(fù)合形式，如內(nèi)-a抑制劑(Ial)，其具有225kDa的分子量，和前-a抑制劑(Pal)，其具有120kDa的分子量。Ial中，bikimin連接2個(gè)多肽重鏈，Hl和H2,而，Pal中，只有單個(gè)重鏈(H3)連接bikunin。這些復(fù)合形式中，bikunin保持鈍化直至通過部分蛋白水解降解來釋放，這是作為調(diào)節(jié)活性方式的機(jī)理。從復(fù)合物中分裂后，通過腎小球?yàn)V過作用將激活的bikunin從血漿快速清除，這是通過低分子量和受體介導(dǎo)的吸收來促進(jìn)的過程。US專利No.6，489,128和6,660,482各自涉及診斷癌癥和膿毒癥的用途。還公開了抑制轉(zhuǎn)移和治療膿毒癥的方法，然而，實(shí)質(zhì)上組合物不是純的并具有穩(wěn)定性的問題，即短半衰期的問題。盡管在五十年多前引入了抗生素，其的確看到了膿毒癥誘導(dǎo)的死亡率從55%降低至35%，醫(yī)學(xué)沒有從膿毒癥個(gè)體死亡率顯著降低而受益。實(shí)際上，膿毒癥繼續(xù)是重病監(jiān)護(hù)室死亡原因之一和大量的膿毒癥個(gè)體死于隨后的敗血癥性休克和多器官衰竭，膿毒癥是對感染例如細(xì)菌感染的全身性反應(yīng)。其通常是由革蘭氏陰性細(xì)菌的內(nèi)毒素或革蘭氏陽性細(xì)菌的外毒素(其可以引發(fā)內(nèi)毒素樣反應(yīng))引起的。全身性反應(yīng)可以導(dǎo)致敗血癥性休克，其特征在于血壓下降、心血管虛脫和/或多器官衰竭。診斷為敗血癥性休克個(gè)體中的死亡率可以高達(dá)35-45%。已經(jīng)難以使用常規(guī)藥物來快速而可靠地治療膿毒癥。膿毒癥和敗血癥性休克與先天免疫和凝血系統(tǒng)的激活相關(guān)。膿毒癥和敗血癥性休克臨床上的特征為全身炎癥、凝血病、低血壓和多器官機(jī)能障礙(丄-L.Vincent等，AnnualsofMedicinei4(2002)606-613)。幾個(gè)膿毒癥過程中，特定蛋白酶的網(wǎng)激活凝血因子、血纖維蛋白溶解因子和補(bǔ)體因子。這些蛋白酶還可以引發(fā)組織和器官損傷并提高血漿中凝血因子和互補(bǔ)因子的非特異性蛋白水解(J.Wite等，IntensiveCareMedicine8(1982)215-222;S.J.Weiss,NewEnglandJournalofMedicine320(1989)365-376)。發(fā)明簡述本發(fā)明涉及純化人血漿的內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(Ialp)的方法及其用途，用于治療人疾病，如膿毒癥、急性炎癥疾病、嚴(yán)重休克、敗血癥性休克、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、癌轉(zhuǎn)移、傳染病和早產(chǎn)分娩；或用于降低膿毒癥、急性炎癥疾病、嚴(yán)重休克、敗血癥性休克、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、癌轉(zhuǎn)移、傳染病和早產(chǎn)分娩相關(guān)的死亡率風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)一方面，產(chǎn)生源自血漿的Ialp組合物的方法，其中IaI和PaI以生理比例存在于混合物中，包括從血漿分離含有l(wèi)al和Pal的血漿級分，其中Ial和Pal以生理比例存在；和純化血漿級分來獲得Ialp純度為約85%至約100%純的Ialp組合物。根據(jù)另一方面，Ialp組合物包括內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(lal)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物，其中l(wèi)al和Pal以生理比例存在于所述混合物中，約85%至約100%純。相關(guān)方面中，Ialp組合物包括內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(lal)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物，其中l(wèi)al和Pal以生理比例存在于所述混合物中并具有高的胰蛋白酶抑制比活性。另一相關(guān)方面中，Ialp組合物包括半衰期高于一小時(shí)的lal和200480040150.X說明書第3/30頁P(yáng)al。再一相關(guān)方面中，Ialp組合物包括Ial和Pal,其中l(wèi)al和Pal由與三個(gè)重鏈Hl、H2和H3中的至少一個(gè)結(jié)合的內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)的輕鏈組成。另一相關(guān)方面中，Ialp的組合物包括內(nèi)-a抑制刑蛋白質(zhì)(Ial)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物，其中Ial和Pal以生理比例存在于混合物中，包括與四個(gè)重鏈H1、H2、H3和H4中的至少一個(gè)結(jié)合的內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)的輕鏈。再一相關(guān)方面中，根據(jù)以下方法制得Ialp，該方法包括從血漿中分離出含有IaI和PaI的血漿級分，其中Ial和Pal以生理比例存在；和純化血漿級分來獲得Ialp純度為約85%至約100%純的Ialp組合物。另一方面中，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物包括治療有效量的在此所述的Ialp組合物和藥物學(xué)上可接受的載體。另一方面涉及治療個(gè)體的炎癥相關(guān)疾病、癌癥或傳染病的方法，其包括給藥治療有效量的通過以下所述任何方法產(chǎn)生的Ialp。另一相關(guān)方面中，治療個(gè)體的方法包括測定IaI、Pal、Ialp、H3、H4、Hl、H2和LC中一個(gè)或多個(gè)的治療前水平；并將治療有效量的Ialp給藥于個(gè)體。相關(guān)方面中，描述了預(yù)測對Ialp治療反應(yīng)的方法。該方法包括測試從個(gè)體獲得的樣品來檢測Ial、Pal、Ialp、H3、H4、Hl、H2和LC中一個(gè)或多個(gè)的水平；其中所檢測的水平鑒定可以良好反應(yīng)Ialp治療的個(gè)體。另一相關(guān)方面中，描述了監(jiān)控Ialp治療的治療個(gè)體進(jìn)展的方法，并包括測定IaI、Pal、Ialp、H3、H4、Hl、H2和LC中一個(gè)或多個(gè)的治療前水平；將治療有效量的Ialp給藥于個(gè)體；并在Ialp治療初期后測定個(gè)體的一個(gè)或多個(gè)水平，其中Ialp治療后個(gè)體水平的提高表示個(gè)體可能對ialp治療具有良好的臨床反應(yīng)。另一方面中，描述了用于Ialp治療的藥盒，包括IaI、Pal、Ialp、H3、H4、Hl、H2和LC中的一個(gè)或多個(gè)；和用于治療使用的說明書。相關(guān)方面中，描述了包括容器的組合物，容器中包括Ialp和插有有關(guān)將Ialp給藥于個(gè)體說明的標(biāo)簽或包裝。12再一相關(guān)方面中，描述了藥盒，其包括如上所述的組合物以及用于治療使用的說明書。以下公開了本發(fā)明的其他實(shí)施方案。附圖簡述圖1描繪了脾的組織病理學(xué).對照動物(A)中，保護(hù)白號圍繞帚形動脈，大范圍失去紅髄細(xì)胞基本組分，對IaIp治療動物(B)中，具有正常圍繞的白髄和輕微超細(xì)胞的紅髄(H&E染色，放大20x)。圖2描繪了H4的氨基酸序列。圖3描繪了盲腸結(jié)扎和穿刺(CLP)或假手術(shù)(Sham)后5和20小時(shí)時(shí)肝臟中bikiminmRNA表達(dá)的改變。數(shù)據(jù)表示為平均±SE(n=8/組)并通過方差的一尾分析(ANOVA)和Tukey測試來比較*P<0.05對假手術(shù)。圖3a顯示了擴(kuò)增和通過凝膠上大小分離的mRNA,和圖3b用圖表描繪了標(biāo)準(zhǔn)化至G3PDH表達(dá)的bikunin水平的結(jié)果。圖4描繪了盲腸結(jié)扎和穿刺(CLP)或假手術(shù)(Sham)后5和20小時(shí)時(shí)1251-IaI的t^的改變。數(shù)據(jù)表示為平均士SE(n-5/組)并通過方差的一尾分析(ANOVA)和Tukey測試來比較圖5描繪了栽體治療盲腸結(jié)扎和穿刺和盲腸切除(CLP+栽體)與內(nèi)ct抑制劑治療盲腸結(jié)扎和穿刺(CLP+Ialp)10天后存活率的改變。每組12只動物。通過Kaplan-Meier方法計(jì)算存活率并使用對數(shù)級測試來比較。女P〈0.05對CLP+栽體。圖6描繪了載體治療盲腸結(jié)扎和穿刺和盲腸切除(CLP+栽體)與內(nèi)a抑制劑治療盲腸結(jié)扎和穿刺(CLP+Ialp)10天后存活率的改變。每組11至12只動物。通過Kaplan-Meier方法計(jì)算存活率并使用對數(shù)級測試來比較。*P<0.05對CLP+載體。圖7描繪了栽體治療盲腸結(jié)扎和穿刺和盲腸切除(CLP+栽體)與內(nèi)a抑制劑治療盲腸結(jié)扎和穿刺(CLP+Ialp)10天后存活率的改變。每組16只動物。通過Kaplan-Meier方法計(jì)算存活率并使用對數(shù)級測試來比較。頭P〈0.05對CLP+栽體。圖8a和8b描繪了根據(jù)本發(fā)明從人血漿純化Ialp的略圖。圖9用圖表表示了高度純化的Ialp在膿毒癥動物研究中的有益效果。發(fā)明詳述在此公開的是從血漿純化Ialp的新方法。在此進(jìn)一步公開的是純化Ialp的治療組合物，用于給藥于個(gè)體來治療急性炎癥疾病、膿毒癥、嚴(yán)重休克、敗血癥性休克、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、癌轉(zhuǎn)移、傳染病和早產(chǎn)分娩。之前已知的純化含有因子X(FX)的污染物，通過蛋白質(zhì)印跡分析檢測為80kDa條帶。在凝血測試中也檢測到FX。除去FX是重要的，因?yàn)檎J(rèn)為FX是形成血栓的且如果給藥于人是有害的.在此所述的方法解決了之前Ialp組合物的FX污染問題。內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(Ialp)是結(jié)構(gòu)上相關(guān)的絲氨酸蛋白酶抑制劑家族，發(fā)現(xiàn)在人血漿中為相對高的濃度(400-800mg/L)。Ialp是大的、多成分復(fù)合物，作為胰島素-型蛋白酵抑制劑。和其他抑制劑分子不同，該家族的抑制劑由多肽鏈(輕鏈和重鏈)的組合物獨(dú)特地共價(jià)連接硫酸軟骨素鏈組成。內(nèi)-a蛋白質(zhì)的重鏈(Hl、H2和H3)也稱為透明質(zhì)酸(HA)結(jié)合蛋白。人血漿中發(fā)現(xiàn)的主要形式是內(nèi)-a-抑制劑(Ial)，其由兩個(gè)重鏈(H1&H2)和單個(gè)輕鏈(L)組成，和前-a-抑制劑(Pal)，其由一個(gè)重鏈(H3)和一個(gè)輕鏈(L)組成。已知輕鏈(也稱為bikunin(雙4""/G抑制劑，具有兩個(gè)Kunitz結(jié)構(gòu)域)廣泛抑制血漿絲氨酸蛋白酶。復(fù)合物已經(jīng)顯示出在抑制蛋白酶陣列中的重要性，蛋白酶陣列包括嗜中性彈性蛋白酶、血纖維蛋白溶酶、胰蛋白酵、組織蛋白醉G和精子酶。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Ial和Pal與H4復(fù)合，H4是Ialp蛋白質(zhì)的另一條重鏈。根據(jù)本發(fā)明特定實(shí)施方案的Ialp組合物包含與Pal、Ial或Pal和Ial兩者復(fù)合的H4。不希望受到任何科學(xué)理論的限制，我們推測Ialp的重鏈從復(fù)合物釋放出來后結(jié)合HA，以防止HA結(jié)合其受體CD44。Ialp的重鏈不存在時(shí)，HA將結(jié)合CD44并引發(fā)前炎癥因子的分泌。例如，TNF-a,并導(dǎo)致炎癥。其間，Ialp的輕鏈，一旦從復(fù)合物中釋放出了就呈現(xiàn)抗蛋白酶活性。"lalp組合物"指的是Ialp蛋白質(zhì)的制劑，包括生理比例的IaI和Pal。如在此所用的生理比例指的是包括沒有遭受感染或病癥的人或動物中發(fā)現(xiàn)的比例，和/或人血漿中天然出現(xiàn)的Ial和Pal的比例。生理比例通常為約60%至約80%IaI和約40%至約20%PaI。由于個(gè)體基因構(gòu)成的正常變化，生理比例可以不同于這些范圍。如在此所用的，"內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(Ial)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物"指的是含有Ial和Pal復(fù)合體兩者的組合物。混合物還可以含有緩沖劑、鹽或用于分離Ialp復(fù)合物的其他成分。特定方面中，Ial和Pal以生理比例存在于混合物中。血漿級分中存在的Ial和Pal具有約60,000至約280，000kDa的表觀分子量。通過十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳來測定分子量。如在此所用的"半衰期"指的是給藥的Ialp活性是給藥時(shí)一半的時(shí)間量。根據(jù)本發(fā)明Ialp組合物的半衰期為，例如，大于約1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、7.5或10小時(shí)。優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ialp組合物的半衰期高于約5小時(shí)。特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ialp組合物的半衰期高于約10小時(shí)。優(yōu)選較長的半衰期，例如，因?yàn)殡S著時(shí)間需要給藥于個(gè)體的劑量較低。本發(fā)明的Ialp組合物具有高的胰蛋白酶抑制活性，根據(jù)本發(fā)明的Ialp組合物的胰蛋白酶抑制比活性為約1000至約2000IU/mg。優(yōu)選胰蛋白酶抑制比活性為約1200IU/mg，更優(yōu)選約1500IU/mg.通過胰蛋白酶抑制測試使用L-BAPA作為底物來測量胰蛋白酶抑制比活性。參見，HUBergmeyer，編輯vol5，第3版，119(1984)VerlagChemie，Weinheim:Chromogenicsubstratefortheassayoftrypsin(效寸試胰蛋白酶的發(fā)色底物)R.Geiger，H.Fritz,MethodsofEnzymaticAnalysis,Ialp的組合物是內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(Ial)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物，其中Ial和Pal以生理比例存在于所述混合物中，包括內(nèi)誦a抑制劑蛋白質(zhì)的輕鏈結(jié)合三個(gè)重鏈Hl、H2和H3中的至少一個(gè)。根據(jù)本發(fā)明的組合物還具有內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)的輕鏈結(jié)合四個(gè)重鏈Hl、H2、H3和H4中的至少一個(gè)。Ialp復(fù)合體中每個(gè)蛋白的實(shí)例如下BikuninGenbank登錄號AAB84031、P02760;HlGenBank登錄號P19827、NP—002206;H2GenBank登錄號NP_002207、P19823;H3GenBank登錄號NP—002208;H4GenBank登錄號Q14624、NP_002209，每個(gè)在此以其整體引入作為參考。如在此所用的"源自血漿"指的是最初從血漿分離或純化的。即，組合物的自然環(huán)境是血漿。如在此所用的"血漿級分"是來自分離或純化步驟例如色謙的級分，最初源自血漿。根據(jù)本發(fā)明的血漿級分可以是，例如，從純化凝血因子IX獲得的副產(chǎn)物，從純化凝血酶原復(fù)合濃縮物獲得的副產(chǎn)物，從冷沉淀血漿獲得的冷上清液(描述于Hoffer等，JournalofChromatographyB669(1995)187-196)，或冷貧瘠血漿(poorplasma),冷貧瘠血漿在此與冷上清液交替使用。冷貧瘠血漿是從冷沉淀獲得的上清液。根據(jù)本發(fā)明的副產(chǎn)物實(shí)例是從純化凝血因子IX獲得的。已經(jīng)表明Ial/Pal混合物存在于因子IX(FIX)純化過程產(chǎn)生的副產(chǎn)物中。從純化凝血因子IX獲得副產(chǎn)物的方法描述于Hoffer等，JournalofChromatographyB669(1995)187-196，其在此以其整體引入作為參考。副產(chǎn)物的其他實(shí)例包括來自純化FIX的副產(chǎn)物或來自純化凝血酶原復(fù)合濃縮物的副產(chǎn)物，如描述于D.Josic等，ThrombosisResearch100(2000)433-441,其在此以其整體引入作為參考；以及作為血漿冷沉淀獲得冷上清液分離的副產(chǎn)物。(例如，合適的冷沉淀方法描述于Hoffer等，JournalofChromatographyB(1995)187-196)。用于從血液純化Ialp復(fù)合體的其他血漿級分包括強(qiáng)陰離子交換級分和整體色譜級分，將在以下的實(shí)施例中描述。根據(jù)本發(fā)明，血漿級分可以來自人、靈長類、牛、豬、貓或犬來源。如在此所用的，術(shù)語"獲得"包括購買、合成、分離或另外獲得本發(fā)明實(shí)施中所用的一種或多種物質(zhì)。因此，如在此所用的"獲得血液"，包括例如從人、靈長類、牛、豬、貓或犬來源獲得血液。例如，可以從血庫、醫(yī)院、收容所、私人公司、研究基金會或任何其他血液來源來獲得和/或購買血液。如在此所用的"獲得血漿"，包括例如從人、靈長類、牛、豬、、貓或犬來源獲得血漿。例如，可以從血庫、醫(yī)院、收容所、私人公司、研究基金會或任何其他血液來源來獲得和/或購買血漿?；蛘?，一旦獲得血液，也可以從血液分離血漿。分離血漿的合適方法包括重力和離心。如在此所用的，"獲得從純化凝血因子IX獲得的副產(chǎn)物級分"，包括例如從日常純化因子IX的公司或醫(yī)院獲得和/或購買從純化凝血因子ix獲得的副產(chǎn)物級分。如在此所用的，"獲得從純化凝血酶原復(fù)合濃縮物獲得的副產(chǎn)物級分"，包括例如從純化凝血酶原復(fù)合物的公司、研究組織或醫(yī)院獲得和/或購買副產(chǎn)物級分。如在此所用的，"獲得從血漿冷沉淀獲得的冷上清液"包括例如從以適用于本發(fā)明的方式冷沉淀血漿的醫(yī)院、研究組織或公司獲得和/或購買冷上清液。"固體載體"指的是可以用捕獲試劑衍生或另外連接捕獲試刑的固體材料。實(shí)例固體栽體包括探針、微量滴定板和色謙樹脂。"吸附"指的是分析物與吸附劑或捕獲試劑的可檢測非共價(jià)結(jié)合。吸附劑表面指的是結(jié)合吸附劑(也稱為"捕獲試劑"或"親和試劑")的表面。吸附劑是能夠結(jié)合分析物(例如，目標(biāo)多肽或核酸)的任何材料。色鐠吸附劑指的是色謙中通常所用的材料。色譜吸附刑包括，例如，離子交換材料，金屬螯合劑(例如，次氮基乙酸或亞氨基二乙酸)，固定金屬螯合物，疏水性交換吸附劑，親水性交換吸附刑，染料，簡單生物分子(例如，核苷酸，氨基酸，單糖和脂肪酸)和混合模式的吸附劑(例如，疏水性吸附/靜電推斥吸附劑)。生物特異性吸附劑指的是包括生物分子的吸附劑，生物分子例如，核酸分子(例如，適配子)，多肽，多糖，脂質(zhì)，類固醇或這些的綴合物(例如，糖蛋白，脂蛋白，糖脂，核酸(例如，DNA)-蛋白質(zhì)綴合物)。特定實(shí)施例中，生物特異性吸附劑是大分子結(jié)構(gòu)如多蛋白復(fù)合物，生物膜或病毒。生物特異性吸附劑的實(shí)例是抗體、受體蛋白質(zhì)和核酸。生物特異性吸附劑對目標(biāo)分析物的特異性通常比色謙吸附劑高。"洗脫劑"或"洗滌溶液"指的是用于影響或改變分析物和吸附劑表面的吸附和/或從表面除去未結(jié)合材料的試劑，通常是溶液。例如洗脫劑的洗脫特性取決于pH、離子強(qiáng)度、疏水性、混亂向性的程度、去污劑強(qiáng)度和溫度。"分析物"指的是樣品中期望得到檢測的任何成分。術(shù)語可以指樣品中的單種成分或多種成分。術(shù)語"多肽"、"肽"和"蛋白質(zhì)"在此可交替使用，用來表示氨基酸殘基的聚合物。術(shù)語適用于其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基是天然產(chǎn)生氨基酸相應(yīng)的類似物或模擬物的氨基酸聚合物，以及適用于天然產(chǎn)生的氨基酸聚合物。多肽可以是修飾的，例如，通過添加碳水化合物來形成糖蛋白。術(shù)語"多肽"、"肽"和"蛋白質(zhì)"包括糖蛋白以及非糖蛋白。"免疫測試"是使用特異性結(jié)合抗原(例如，Ialp復(fù)合物)的抗體的測試。免疫測試的特征在于使用特定抗體與分離物、目標(biāo)的特異性結(jié)合特性，和/或定量抗原。"抗體"指的是實(shí)質(zhì)上由一個(gè)免疫球蛋白基因或多個(gè)免疫球蛋白基因或其片段編碼的多肽配體，其特異性地結(jié)合和識別抗原決定部位(例如，抗原)。已知的免疫球蛋白基因包括k和y輕鏈恒定片段基因，a、y、S、s和p重鏈恒定片段基因，和無數(shù)的免疫球蛋白可變片段基因。例如抗體作為完整的免疫球蛋白或作為各種肽酶消化產(chǎn)生的充分表征的多個(gè)片段存在。這包括，例如，F(xiàn)ab，和F(ab)、片段?？贵w包括多克隆抗體和單克隆抗體，嵌合體，單鏈和人化抗體，以及Fab片段，包括Fab或其他免疫球蛋白表達(dá)文庫的產(chǎn)物。短語"特異性(或選擇性)結(jié)合"抗體或"特異性(或選擇性)免疫反應(yīng)"，當(dāng)涉及蛋白質(zhì)或肽時(shí)，指的是蛋白質(zhì)和其他生物制品的多種群體中決定蛋白質(zhì)存在的結(jié)合反應(yīng)。因此，在指定的免疫測試條件下，特定的抗體結(jié)合特定蛋白至少兩倍于背景且基本上沒有與樣品中存在的其他蛋白質(zhì)以顯著量結(jié)合。這樣條件下與抗體的特異性結(jié)合需要選擇抗體對特定蛋白的特異性。例如，可以選擇引起特定物種如大鼠、小鼠或人的Ialp復(fù)合物的多克隆抗體來獲得只與Ialp復(fù)合體特異性免疫反應(yīng)且沒有與其他蛋白質(zhì)反應(yīng)的那些多克隆抗體，除了多形變體和Ialp復(fù)合體的等位基因。通過排除與其他物種的Ialp復(fù)合體分子交叉反應(yīng)的抗體來獲得這種選擇。可以使用各種免疫測試形式來選擇與特定蛋白質(zhì)特異性免疫反應(yīng)的抗體。例如，通常使用固相ELISA免疫測試來選擇與蛋白質(zhì)特異性免疫反應(yīng)的抗體(#jE，例如，Harlow&Lane,爿丄a6ora《of，Ma/iim/(1988)，描述了用于測定特異性免疫反應(yīng)性的免疫測試形式和條件)。通常特異性或選擇性反應(yīng)至少兩倍于背景信號或噪音，更通常高于10至100倍背景。如在此所用的"功能等價(jià)物"指的是能夠呈現(xiàn)與在此所述Ialp蛋白質(zhì)基本上相似的體內(nèi)或體外活性的任何蛋白，例如，影響膿毒癥的降低。例如，通過HPLC或其他本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的色謙方法來證實(shí)Ialp產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和純度。如在此所用的"Ialp復(fù)合體"用來包括Ialp蛋白質(zhì)的所有天然生成的生物活性變體，包括含有刪除、插入、添加和取代的蛋白質(zhì)。Ialp蛋白質(zhì)的"天然變體"定義為從血漿獲得的具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸改變序列的肽。變體可以具有"保守性"改變，其中取代的氨基酸具有相似的結(jié)構(gòu)或化學(xué)特性，例如，異亮氨酸替代亮氨酸。另一實(shí)施方案中，變體可以具有"非保守性"改變，例如色氨酸替代甘氨酸。相似變體還可以包括氨基酸刪除或插入，或兩者。使用本領(lǐng)域公知的計(jì)算機(jī)程序，例如，DNASTAR軟件，可以發(fā)現(xiàn)測定哪個(gè)和多少氨基酸殘基被取代、插入或檢測而沒有消除生物或免疫活性的指導(dǎo)。"刪除"定義為其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸殘基各自不存在的氨基酸或核苷酸序列改變。"插入"或"添加"是與天然生成的Ialp復(fù)合體相比較，各自使得一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸殘基添加的氨基酸或核苷酸序列改變。各自通過不同的氨基酸或核苷酸替代一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸形成"取代"。術(shù)語"生物活性"指的是具有天然生成Ialp復(fù)合體的結(jié)構(gòu)、調(diào)節(jié)或生化功能。同樣，"免疫活性"定位為天然、重組或合成Ialp復(fù)合體或其任何寡肽誘導(dǎo)合適動物或細(xì)胞中特異性免疫反應(yīng)并與特定抗體結(jié)合的能力。如在此所用的術(shù)語"衍生物"指的是編碼Ialp復(fù)合體的核酸或編碼的Ialp復(fù)合體的化學(xué)修飾。這樣的修飾通過烷基、?；虬被娲鷼鋪碚f明。核酸衍生物將編碼保留天然Ialp復(fù)合體實(shí)質(zhì)性生物特性的多肽。如在此所用的"純化"指的是從Ialp除去不需要的或污染的蛋白或成分來產(chǎn)生純化Ialp復(fù)合體的步驟。例如，可以通過連續(xù)色謙步驟處理含有生理比例的Ial和Pal的血漿級分來純化lalp組合物。如在此所用的"分離"指的是從血漿產(chǎn)生血漿級分，其含有生理比例的Ial和Pal。例如，根據(jù)本發(fā)明通過將血漿進(jìn)行色謙來獲得分離血漿級分。分離的指的是從其原始環(huán)境(例如，如果是天然產(chǎn)生的為自然環(huán)境)中取出來的材料，并因此從其天然狀態(tài)"通過人"來改變。例如，分離的多肽或蛋白質(zhì)可以是血漿的成分，或可以包含于細(xì)胞內(nèi)并認(rèn)為是"分離的"，因?yàn)檠獫{或特定細(xì)胞可以不是多肽的原始環(huán)境。如在此所用的色譜可以包括陰離子交換色謙。陰離子交換色謙可以是基于顆粒的，例如，DEAESepharose，DEAESephadexA50，ToyopearlDEAE,TMAEFractogel，DEAEFractogel或Q-S印harose。陰離子交換色謙還可以通過整體栽體，例如，帶有固定化陰離子交換配體的CIM如DEAE-CIM或Q-CIM。SEPHAROSE是新澤西Pharmacia,Inc，對高分子量物質(zhì)的商品名，該物質(zhì)用于大分子凝膠過濾的分離。陰離子交換柱具有兩個(gè)部分，基質(zhì)和配體?；|(zhì)可以是例如纖維素、葡聚糖、瓊脂糖或聚苯乙烯。配體可以是二乙基氨基乙基(DEAE),聚乙烯亞胺(PEI)或季銨官能團(tuán)。陰離子交換柱的強(qiáng)度指的是配體的離子化狀態(tài)。強(qiáng)陰離子交換柱，如具有季銨配體的那些，在寬的pH范圍內(nèi)帶有永久的正電荷。弱陰離子交換柱中，如DEAE和PEI，正電荷的存在取決于柱子的pH。優(yōu)選強(qiáng)陰離子交換柱如QSepharoseFF或金屬螯合Sepharose(例如，<:112+-螯合Sepharose)。陰離子交換柱通常裝填pH高于a-葡糖苷酶pi的低鹽緩沖劑。本發(fā)明的Ialp組合物優(yōu)選約85%至約100%純.如在此所用的，術(shù)語"純"指的是從其自然環(huán)境中取出的Ialp組合物，分離的或分開的，并至少約85%至約100%無，優(yōu)選卯％無，更優(yōu)選95%無與其天然相關(guān)的其他成分。優(yōu)選實(shí)施方案中，基本上純化的蛋白質(zhì)將構(gòu)成組合物中高于85%、87.5%、90%、92.5%、95%、99%或甚至更高的蛋白質(zhì)。多肽或蛋白質(zhì)具有其中肽、多肽或蛋白質(zhì)基本上無其他蛋白質(zhì)和生物成分的純度水平。任何合適的材料和方法可以用來進(jìn)行血漿的一個(gè)或多個(gè)分離步猓來獲得純化的Ialp。通常，Ioclp的制備涉及樣品的分離并收集用來測定含有目標(biāo)蛋白的級分。分離的方法包括，例如，固相提取，色謙，例如，陰離子交換色譜，大小排阻色譜，離子交換色謙，肝素色謙，親和色謙，連續(xù)提取，凝膠電泳和液相色謙。制備還可以包括純化，其包括色謙步驟，例如，離子交換色譜，肝素色譜，親和色諳，連續(xù)提取，凝膠電泳和液相色語。本發(fā)明的一實(shí)施方案中，通過陰離子交換色謙將樣品純化兩次。陰離子交換色鐠根據(jù)它們的電荷特征將樣品中蛋白質(zhì)粗略地純化.例如，可以使用Q陰離子交換樹脂(例如，QHyperDF,Biosepra)，并用不同pH的洗提液連續(xù)洗提樣品。陰離子交換色譖使得樣品中更多負(fù)電荷的生物分子從其他類型的生物分子中分離出來。用高pH的洗提劑洗提的蛋白可能是弱負(fù)電荷的，用低pH的洗提劑洗提的級分可能是強(qiáng)負(fù)電荷的。因此，除了降低樣品的復(fù)雜性，陰離子交換色謙根據(jù)它們的結(jié)合特性來分離蛋白質(zhì)。再一實(shí)施方案中，通過肝素色謙將樣品進(jìn)一步純化.肝素色謙使得樣品中的Ialp復(fù)合體進(jìn)一步純化，也是基于與肝素相互作用的親和性和電荷特征。肝素，硫酸化粘多糖，將結(jié)合具有正電荷部分的Ialp復(fù)合體，并用不同pH或鹽濃度的洗提劑連續(xù)洗提樣品。用低pH的洗提劑洗提的Ialp復(fù)合體更可能是弱正電荷的。用高pH的洗提劑洗提的Ialp復(fù)合體更可能是強(qiáng)正電荷的。因此，肝素色謙還降低了樣品的復(fù)雜性并根據(jù)它們的結(jié)合特性來分離Ialp復(fù)合體?？梢杂霉潭ㄓ谳d體的捕獲試劑來捕獲Ialp復(fù)合體，栽體如任何生物芯片、多孔微量滴定板、樹脂或隨后作為蛋白存在探針的硝基纖維素膜。特別地，可以在表面-提高的激光解吸/離子化(SEIDI)蛋白生物芯片上捕獲本發(fā)明的Ialp復(fù)合體?？梢栽谏t表面或生物特異性表面上捕獲。包括反應(yīng)性表面的任何SELDI蛋白質(zhì)生物芯片可以用于捕獲和檢測本發(fā)明的Ialp復(fù)合體。這些生物新片可以用特異性捕獲Ialp復(fù)合體的抗體來衍生，或可以用捕獲試劑來衍生，捕獲試劑如結(jié)合免疫球蛋白的蛋白A或蛋白G。然后使用特異性抗體將Ialp復(fù)合體捕獲于溶液中和通過捕獲試刑在芯片上分離捕獲的Ialp復(fù)合體。根據(jù)本發(fā)明的公開內(nèi)容定量蛋白、多肽或肽純化程度的各種方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。這些包括，例如，測定級分的特定蛋白質(zhì)活性，或通過凝膠電泳測定級分中多肽的數(shù)量。除了以下詳述的那些技術(shù)，適用于蛋白質(zhì)純化的各種其他技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。這些包括，例如，用硫酸銨、PEG、抗體等沉淀或通過熱變性，接著離心；色謙步驟如離子交換步驟，凝膠過濾步驟，反相步驟，羥磷灰石步猓，卵磷脂親和步驟，免疫親和色詳和其他親和色譜步驟；等電點(diǎn)聚焦；凝膠電泳，HPLC;和這些和其他技術(shù)的結(jié)合。此外，如果認(rèn)為需要，可以使用本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)的方法來進(jìn)行另外的純化步驟。這些方法能夠充分給予蛋白質(zhì)的高度純制備。其他實(shí)施方案中，可以使用凝膠色諳或分子篩色謙。凝膠色鐠是基于分子大小的特定類型分配色鐠。凝膠色鐠后的原理是柱子，用含有小孔的細(xì)顆粒惰性物質(zhì)制得，當(dāng)穿過或圍繞孔時(shí)根據(jù)大小將較大分子的從較小分子中分離出來。只要制成顆粒的材料沒有吸附分子，決定流速的唯一因素是大小。因此，以遞減的大小從柱子中洗提出分子，只要形狀是相對恒定的。凝膠色謙對于分離不同大小的分子是不勝任的，因?yàn)榉蛛x與所有其他因素如pH、離子強(qiáng)度、溫度等無關(guān)。實(shí)際上還不存在吸附，減少的區(qū)域分布和洗提體積是與分子量相關(guān)的簡單因素。另一實(shí)施方案中，可以使用親和色譜。親和色謙是依靠待分離物質(zhì)和特異性結(jié)合分子之間特異性親和性的色謙方法。即，例如，受體-配體型相互作用。可以通過將結(jié)合配偶體之一共價(jià)結(jié)合不溶基質(zhì)來合成柱子材料。然后柱子材料能夠從溶液中特異性吸附物質(zhì).例如，通過將條件改變成不會發(fā)生結(jié)合的那些來進(jìn)行洗提(例如，改變pH、離子強(qiáng)度和溫度)。在此所述的方法適于大規(guī)模生產(chǎn)，并形成蛋白質(zhì)，包括適于治療給藥形式的Ialp復(fù)合體和H4。如果需要，可以重復(fù)在此所述方法的任何分離或純化步猓來獲得較高的純度。色譜步驟可以是成批的或柱子形式。生產(chǎn)本發(fā)明的源自血漿的Ialp組合物的優(yōu)選方法包括從血漿中分離出含有Ial和Pal的血漿級分，其中Ial和Pal以生理比例存在；并純化血漿級分來獲得純度約85%至約100%純的Ialp組合物。根據(jù)本發(fā)明的方法還可以包括血漿級分的進(jìn)一步純化，例如，通過肝素親和柱并收集通過(未結(jié)合)級分的流出物。實(shí)施本發(fā)明中有用的方法還可以包括在純化和分離步驟之前和/或之后將血漿級分和/或純化Ialp病毒滅活。通常方法包括通過溶劑/去污劑處理或熱滅活將病毒滅活。本發(fā)明組合物的熱滅活或巴氏殺菌，可以為例如約55至約65°C或70至120°C的干熱.對于溶劑去污劑處理，溶劑和去污劑的特定組合，如，0.3%三-11-丁基磷酸鹽(TnBP)結(jié)合1%吐溫-80,24°C6小時(shí)，有效滅活包膜病毒(Horowitz等(1985)Transfusion25，pp.516-522)?；蛘撸诜€(wěn)定劑存在下將級分或純化的Ialp在55-65。C巴氏殺菌足以滅活存在的任何病毒。在純化或分離步驟的過程中，加入穩(wěn)定劑。Ialp的最終組合物還可以含有穩(wěn)定劑。例如，合適的穩(wěn)定劑包括清蛋白，聚乙二醇，a，a-海藻糖，氨基酸，鹽，甘油，co氨基酸如賴氨酸、聚賴氨酸、精氨酸，s氨基己酸和抗血纖溶環(huán)酸，糖，如蔗糖，或其組合。本發(fā)明的Ialp蛋白質(zhì)和組合物可以用于治療人疾病。這樣的疾病包括，例如，急性炎癥疾病、膿毒正、嚴(yán)重休克、敗血癥性休克、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、癌轉(zhuǎn)移、早產(chǎn)分娩和傳染病。通過從血漿中分離出含有Ial和Pal的血漿級分來制得用于治療疾病的Ialp組合物，其中Ial和Pal以生理比例存在；和純化血漿級分來獲得Ialp純度為約85%至約100%純的Ialp組合物。本發(fā)明還包括Ialp的藥物組合物。Ialp的藥物組合物可以是治療有效量的在此所述的任何Ialp組合物和藥物學(xué)上可接受的載體。例如，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以是治療有效量的Ialp組合物，其是內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(Ial)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物，其中Ial和Pal以生理比例存在于所述混合物中，為約85o/o至約100%純。藥物組合物還可以是治療有效量的Ialp組合物，其是內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(Ial)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物，其中Ial和Pal以生理比例存在于所述混合物中，包括與三個(gè)重鏈H1、H2和H3或H1、H2、H3和H4中的至少一個(gè)結(jié)合的內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)的輕鏈。藥物量的Ialp組合物，其是內(nèi)-a抑制刑蛋白質(zhì)(Ial)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物，其中Ial和Pal以生理比例存在于所迷混合物中，并具有高的胰蛋白酶抑制刑特異活性。藥物組合物還可以是治療有效量的Ialp組合物，其是內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(Ial)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物，其中Ial和Pal以生理比例存在于所述混合物中，并具有高于一小時(shí)、五小時(shí)或十小時(shí)的半衰期。術(shù)語"藥物學(xué)上可接受的栽體或佐劑"指的是與本發(fā)明的組合物一起給藥于個(gè)體且以足夠傳送治療量組合物給藥時(shí)沒有破壞其藥物活性并是非毒性的栽體或佐劑。本發(fā)明的藥物組合物中所用的藥物學(xué)上可接受的載體、佐劑和賦形劑包括，但不限于，離子交換劑，鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂，自乳化藥物傳送系統(tǒng)(SEDDS)如d-a-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯，藥物劑型中所用的表面活性劑如吐溫或其他相似的聚合傳送基質(zhì)，血清蛋白，如人血清白蛋白，緩沖物質(zhì)如磷酸鹽，甘油，山梨酸，山梨酸鉀，飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，鹽或電解質(zhì)，如硫酸魚精蛋白，磷酸氫二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠態(tài)氧化硅，三硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，基于纖維素的物質(zhì)，聚乙二醇，羧甲基纖維素鈉，聚丙烯酸酯，蠟，聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物，聚乙二醇和羊毛脂。環(huán)糊精如a-、p-、Y-環(huán)糊精，或化學(xué)修飾的衍生物如羥烷基環(huán)糊精，包括2-和3-羥丙基-p-環(huán)糊精，或其他溶解的衍生物也可以有利地用于提高在此所述組合物的傳送。本發(fā)明的藥物組合物可以口服、非腸道、吸入噴霧、局部、直腸、鼻、頰、陰道或通過植入貯器來給藥，優(yōu)選通過口服給藥或通過注射給藥。本發(fā)明的藥物組合物可以含有任何常規(guī)非毒性的藥物學(xué)上可接受的栽體、佐劑或賦形劑。一些情況中，用藥物學(xué)上可接受的酸、堿或緩沖劑調(diào)節(jié)制劑的pH來提高配制組合物或其傳送形式的穩(wěn)定性.在此所用的術(shù)語非腸道包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、動脈內(nèi)、滑液內(nèi)、腹板內(nèi)、膜內(nèi)、腔內(nèi)和顱內(nèi)注射或灌輸技術(shù)。合適的給藥方法可以是片劑、膠嚢，或通過靜脈內(nèi)注射，尤其優(yōu)選注射形式的給藥。藥物組合物可以是無菌注射制劑的形式，例如，作為無菌注射水或油質(zhì)懸浮液?？梢圆鹏迵?jù)本領(lǐng)域已知技術(shù)來配制該懸浮液，^吏用合適的分散或潤濕劑(如，例如，吐溫80)和懸浮劑，無菌注射制劑還可以是無毒非腸道可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌注射溶液或懸浮液，例如，作為1，3-丁二醇溶液?？山邮茉泽w和溶劑中使用的是甘露醇，水，林格溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌、非揮發(fā)性油通常用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為了該目的，可以使用任何溫和的非揮發(fā)性油，包括合成的單-或二甘油酯。脂肪酸，如油酸及其甘油酯衍生物可用于注射制劑中，以及天然的藥物學(xué)上可接受的油，如橄攬油或蓖麻油，尤其是它們的聚氧乙基化形式。這些油溶液或懸浮液還可以含有長鏈醇稀釋劑或分散劑，或羧曱基纖維素或通常用于藥物學(xué)可接受劑型如乳化液和或懸浮液配制中的相似分散劑。為了配制的目的，藥物學(xué)上可接受固體、液體或其他劑型的制造中常用的其他常用表面活性劑如吐溫或司盤和/或其他相似乳化劑或生物利用度提高刑也可以使用。本發(fā)明的藥物組合物可以以任何口服可接受的劑型來口服給藥，包括，但不限于，膠囊、片劑、乳濁液和含水懸浮液、分散體和溶液。在口服使用的片劑的情況中，通常所用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還添加潤滑劑，如硬脂酸鎂。對于膠囊形式的口服給藥，有用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當(dāng)口服給藥含水懸浮液和/或乳法液時(shí)，將懸浮或溶解于油相中的活性成分結(jié)合乳化劑和/或懸浮劑。如果需要，可以加入特定的甜味劑和/或調(diào)味劑和/或色素。本發(fā)明的藥物組合物還可以以栓劑的形式給藥用于直腸給藥。通過將本發(fā)明的組合物與合適的非刺激性賦形劑混合來制備這些組合物，該賦形劑在室溫是固體的但在直腸溫度是液體并因此在直腸中融化來釋放活性成分。這樣的材料包括，但不限于，可可脂、蜜蠟和聚乙二醇。當(dāng)所需的治療涉及局部應(yīng)用容易接近的部位或器官時(shí)，本發(fā)明藥物組合物的局部給藥是有用的。對于皮膚的局部應(yīng)用，應(yīng)當(dāng)將藥物組合物與含有懸浮或溶解于載體中的活性成分的合適軟骨一起配制，用于本發(fā)明組合物局部給藥的栽體包括，但不限于，礦物油，液體石油，白石油，聚丙二醇，聚氧乙烯，聚氧丙烯組合物，乳化蠟和水.或者，藥物制劑可以與合適的洗液或乳劑和合適的乳化劑一起配制，洗液或乳劑含有懸浮或溶解于載體中的活性組合物。合適的栽體包括，但不限于，礦物油，山梨聚糖硬脂酸羊酯，聚山梨酸酯60，十六烷基酯蠟，鯨芳基醇，2-辛基十二烷醇，苯曱醇和水。本發(fā)明的藥物組合物還通過直腸栓劑或合適的灌腸制刑局部運(yùn)用至下腸道。本發(fā)明還包括局部經(jīng)皮的補(bǔ)片。本發(fā)明的藥物組合物可以通過鼻氣溶膠或吸入來給藥。根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域公知的技術(shù)來制備這樣的組合物并可以制成鹽溶液，使用苯曱醇或其他合適的防腐劑，提高生物利用率的吸收促進(jìn)劑，碳氟化合物和/或本領(lǐng)域已知的其他穩(wěn)定劑或分散劑。根據(jù)本發(fā)明治療個(gè)體疾病的方法，包括給藥根據(jù)本發(fā)明方法產(chǎn)生的治療有效量的Ialp組合物，這些疾病包括炎癥相關(guān)疾病例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒癥或敗血癥性休克、頭部創(chuàng)傷/損傷和腦膜炎，炎癥性腸病(節(jié)段性回腸炎)，慢性梗阻性肺病，鼻炎；癌癥，早產(chǎn)分娩或傳染病。在此組合物的給藥劑量為約1至50mg/kg體重，優(yōu)選劑量為500mg至1000mg/劑，每4至120小時(shí)，或根據(jù)特定藥物的需要。在此的方法包括給藥有效量的組合物來獲得所需的或所述的效果。通常，本發(fā)明的藥物組合物每天或隔天以連續(xù)灌輸給藥約1至約6次。這樣的給藥可以用作慢性或急性治療。結(jié)合栽體物質(zhì)來產(chǎn)生單次劑量形式的活性成分含量根據(jù)待治療的宿主和特定的給藥方式而改變。典型制劑將含有約5%至約95%的活性組合物(w/w)?；蛘?，這樣的制劑含有約20%至約80%的活性組合物。高于或低于上述那些的劑量也是有利的。對于特定個(gè)體的特定劑量和治療方案將取決于多種因素，包括所用特定組合物的活性，年齡，體重，一般健康狀況，性別，膳食，給藥時(shí)間，排泄率，藥物組合，疾病的嚴(yán)重程度和過程，病癥或癥狀，個(gè)體對疾病、病癥或癥狀的處置，和治療醫(yī)生的判斷。如果需要，病癥改善時(shí)，可以給藥維持劑量的本發(fā)明組合物或混合物。隨后，作為癥狀的函數(shù)，可以將給藥的劑量或頻率或兩者，減少至維持改善病癥的水平，當(dāng)癥狀已經(jīng)緩解至所需水平，治療應(yīng)當(dāng)停止。然而，基于疾病癥狀的任何復(fù)發(fā)，個(gè)體需要長期的間歇治療。還可以基于肝臟中的Ialp水平來判斷病癥的改善。如果發(fā)現(xiàn)肝臟中的Ialp為正常生理水平以及通過患者和治療醫(yī)生判斷患者的癥狀得到了改善，用維持刑量治療個(gè)體。當(dāng)本發(fā)明的組合物包括Ialp組合物和一種或多種其他治療劑或預(yù)防劑的混合物時(shí)，組合物和其他藥刑存在的劑量水平為通常單治療方案中給藥的約1至100%，更優(yōu)選約5至95%劑量。其他的藥刑可以與本發(fā)明的組合物分開給藥，作為多劑量方案的一部分?；蛘?，那些藥劑可以是單次劑量形式的一部分，與本發(fā)明的組合物混合于單個(gè)組合物中。治療個(gè)體急性炎癥疾病，膿毒癥，嚴(yán)重休克，敗血癥性休克，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，癌癥，癌轉(zhuǎn)移，傳染病，和/或早產(chǎn)分娩的方法，包括以下步驟測定IaI，Pal，Ialp,H3，H4，Hl，H2和LC中一個(gè)或多個(gè)的治療前水平；并將治療有效量的Ialp給藥于個(gè)體。Ial，Pal，Ialp，H3，H4，Hl，H2和LC的治療前水平是第一次給藥Ialp或任何Ialp復(fù)合蛋白質(zhì)前的個(gè)體蛋白質(zhì)水平。治療后的水平是給藥Ialp后測量的Ialp水平。本發(fā)明的方法包括測定Ialp治療初期后Ial，Pal，Ialp，H3,H4，Hl，H2和LC中一個(gè)或多個(gè)的治療后水平。lalp水平的調(diào)節(jié)表示治療正在產(chǎn)生良好的臨床反應(yīng)。治療的初期階段是獲得穩(wěn)定狀態(tài)的Ialp血漿濃度需要的時(shí)間。例如通過免疫方法來測定Ial，Pal，Ialp，H3，H4,Hl，H2和LC的水平。例如，可以通過各種檢測方法來檢測和/或測量Ialp復(fù)合體，包括，例如，氣相離子光謙方法，光學(xué)方法，電化學(xué)方法，原子力顯微鏡法，射頻方法，表面等離子體共振，橢圓對稱免疫和原子力顯微鏡方法。另一實(shí)施方案中，可以使用免疫測試來檢測和分析樣品中的Ialp復(fù)合體。該方法包括(a)提供特異性結(jié)合Ialp復(fù)合體的抗體；(b)將樣品與抗體接觸；和(c)檢測結(jié)合樣品中Ialp復(fù)合體的抗體復(fù)合物的存在。用于本發(fā)明方法中的合適抗體包括，MAb69.31，MAb69.26,抗Ialp多克隆抗體(R16或R20)，和抗bikunin單克隆或多克隆抗體。免疫測試是使用特異性結(jié)合抗原(例如，Ialp復(fù)合體)的抗體的測試。免疫測試的特征在于使用特定抗體與分離物、目標(biāo)的特異性結(jié)合特性，和/或定量抗原。短語"特異性(或選捧性)結(jié)合"抗體或"特異性(或選擇性)免疫反應(yīng)"，當(dāng)涉及蛋白質(zhì)或肽時(shí)，指的是蛋白質(zhì)和其他生物制品的多種群體中決定蛋白質(zhì)存在的結(jié)合反應(yīng)。因此，在指定的免疫測試條件下，特定的抗體結(jié)合特定蛋白至少兩倍于背景且基本上沒有與樣品中存在的其他蛋白質(zhì)以顯著量結(jié)合。這樣條件下與抗體的特異性結(jié)合需要選擇抗體對特定蛋白的特異性。例如，可以選擇引起特定物種如大鼠、小鼠或人的Ialp復(fù)合物的多克隆抗體來獲得只與Ialp復(fù)合體特異性免疫反應(yīng)且沒有與其他蛋白質(zhì)反應(yīng)的那些多克隆抗體，除了多形變體和Ialp復(fù)合體的等位基因，通過排除與其他物種的Ialp復(fù)合體分子交叉反應(yīng)的抗體來獲得這種選擇。適于用Ialp治療的個(gè)體可以鑒定為患有炎癥、創(chuàng)傷/損傷、肺瘤入侵、腫瘤轉(zhuǎn)移、膿毒癥、敗血癥性休克或傳染病。個(gè)體可以是自我鑒定或由醫(yī)師診斷為患有炎癥、腫瘤入侵、腫瘤轉(zhuǎn)移、膿毒癥、敗血癥性休克或傳染病。個(gè)體可以是靈長類、人或其他動物。方法還包括和其他治療劑的共同給藥。例如，其他的治療刑可以是抗癌劑、抗炎劑、抗凝血?jiǎng)┗蛎庖哒{(diào)節(jié)劑。例如，二脫氧核苷，例如，齊多夫定(AZT)，2，，3，-二脫氧次黃苷(ddl)和2，，3，-二脫IMfe苷(ddC)、拉米夫定(3TC)、司他夫定(d4T)和TRIZIVIR(阿巴卡韋+齊多夫定+拉米夫定)，非核苷，例如，efavirenz(DMP-266，DuPontPharmaceuticals/BristolMyersSquibb)，nevirapine(BoehringerIngleheim)和delaviridine(Pharmacia-Upjohn)，TAT拮抗劑乳Ro3-3335和Ro24-7429，蛋白酶抑制劑，例如，印地那韋(Merck),利托那韋(Abbott),沙奩那韋(HoffmannLaRochw)，奈非那韋(AgouronPharmaceuticals)，141W94(Galxo-Wellcome)、atazanavir(BristolMyersSquibb)，安普那韋(GlaxoSmithKline)，fosamprenavir(GlaxoSmithKline)，替普那韋(BoehringerInglehdm)，KALETRA(洛匹那韋+利托那韋，Abbott),和其他藥劑乳9-(2-羥乙氧基曱基)鳥嘌呤(無環(huán)鳥苷)，干擾素，例如，a-干擾素，白細(xì)胞間介素II和膦?；姿猁}(Foscarnet)或登記的抑制劑，例如T20(enfuvirtide，Roche/Trimeris)或UK-427，857(Pfizer)，左旋咪唑或胸腺素，順鉑，卡波鉑，多烯紫杉醇，紫杉醇，氟脲嘧啶，卡培他濱，吉西他濱，伊立替康，拓樸替康，足葉乙甙，絲裂霉素，gefitinib，長春新堿，長春堿，阿霉素，環(huán)磷酰胺，塞來昔布，羅非昔布，伐地昔布，布洛芬，萘普生，酮洛芬，地塞米松，強(qiáng)的松，強(qiáng)的松龍，氫化可的松，醋氨酚，米索硝唑，氨褲汀，坦索羅新，非那吡啶，恩丹西酮，格非司瓊，阿洛司，帕洛諾司瓊，異丙喚，曲美節(jié)胺，aprepitant,氰苯哌酯和阿托品，和/或洛哌丁胺。抗凝血刑如抗凝血酶III,活性蛋白質(zhì)C和蛋白酶抑制劑如furin抑制劑。方法還包括預(yù)測對Ialp治療的反應(yīng)，測定從個(gè)體獲得的樣品來檢測IaI，Pal，Ialp，H3,H4，HI,H2和LC中一個(gè)或多個(gè)的水平；其中檢測的水平表示個(gè)體可以良好地反應(yīng)Ialp治療。例如，Ial和/或Pal可檢測水平的降低表示個(gè)體從Ialp的給藥獲益。方法還包括監(jiān)控Ialp治療的個(gè)體進(jìn)程，測定Ial，Pal，Ialp，H3，H4，Hl，H2和LC中一個(gè)或多個(gè)的治療前水平；將治療有效量的Ialp給藥于個(gè)體；并測定Ialp治療初期后個(gè)體中一個(gè)或多個(gè)的水平，其中Ialp治療后個(gè)體水平的提高表示個(gè)體可能對Ialp治療具有良好的臨床反應(yīng)。用于Ialp治療的藥盒包括Ial，Pal，Ialp,H3，H4，Hl，H2和LC中的一個(gè)或多個(gè)；和用于治療使用的說明書。藥盒還包括在此所述的Ialp組合物和使用說明書。例如，藥盒可以含有Ial,Pal和提供相關(guān)劑量信息、給藥形式和保存條件的說明書。還涉及容器，容器包括Ialp和插有將Ialp給藥于個(gè)體的說明書的標(biāo)簽或包裝。說明書提供了劑量、給藥形式和保存條件的說明。實(shí)施例將認(rèn)識到不應(yīng)當(dāng)認(rèn)為本發(fā)明受限于目前所述的實(shí)施例；相反，應(yīng)當(dāng)認(rèn)為本發(fā)明包括在此提供的任何和所有應(yīng)用和本領(lǐng)域技術(shù)人員技術(shù)范圍內(nèi)的所有等價(jià)變化。實(shí)施例1作為Ialp復(fù)合體一部分的H4的特征SELDI-TOF質(zhì)諳分析表明重鏈4(H4)也存在于125kDa條帶(Pal)和250kDa條帶(Ial)中(數(shù)據(jù)未顯示)。250kDa條帶中的H4存在更明顯。這表示Ial(H1+H2+LC)和Pal(H3+LC)以外的另一種復(fù)合體蛋白質(zhì)可能存在于本發(fā)明的一些組合物中。迄今為止，還沒有描述過復(fù)合形式的H4。游離H4小于125或250kDa。由于質(zhì)譜結(jié)果，我們認(rèn)為H4可能與bikunin(輕鏈)或其他的復(fù)合。實(shí)施例2膿毒癥的動物模型將雄性Sprague-Dawley大鼠(275-325g)圃養(yǎng)在控制溫度的房間里，12-h亮/暗循環(huán)并喂食標(biāo)準(zhǔn)Purina大鼠固型銅料。在誘導(dǎo)膿毒癥之前，將大鼠禁食過夜，但可以隨意飲水。用異氟烷吸入麻醉大鼠，將腹頸部、腹部和腹股溝剃毛并用10%聚維酮碘洗滌。進(jìn)行2-cm中線剖腹術(shù)。將盲腸暴露，在回盲瓣末梢結(jié)扎以避免腸梗阻，用18-規(guī)格的針穿刺兩次，輕微擠壓使少量的糞便物從孔中流出，并回到腹腔；然后一層層縫合腹部切口。假手術(shù)動動物(即，對照動物)經(jīng)受相同的程序，除了盲腸既沒有結(jié)扎液沒有穿刺。手術(shù)后立即用皮下3ml/100gBW生理鹽水使動物蘇醒。然后在盲腸結(jié)扎和穿刺(CLP)或假手術(shù)后的不同時(shí)間間隔將動物麻醉來收集組織樣本。所有實(shí)驗(yàn)根據(jù)國家健康學(xué)會(NationalInstitutesofHealth)的實(shí)驗(yàn)動物使用準(zhǔn)則來進(jìn)行。該項(xiàng)目得到NorthShoreLongIslandJewishResearchInstitute的InstitutionalAnimalCareandUseCommittee的批準(zhǔn)。人lalp的制備和給藥作為從人血漿純化凝血因子VIII而設(shè)計(jì)的程序的副產(chǎn)物來分離人Ialp(IaI和Pal兩者)。該程序涉及冷沉淀物的離子交換和大小排阻色譜。色i普分離后獲得約70%的純度。該含有Ialp的制劑就毒性、血栓形成或低血壓而言具有很小的副作用。膿毒癥發(fā)作后1、5、10或20h時(shí)，在異氟烷麻醉下用聚乙烯50-管插管于左股靜脈中。通過股導(dǎo)管以恒定的灌輸率靜脈內(nèi)給藥30mg/kgBW劑量的人Ialp濃縮物或等體積的載體(生理鹽水，1.5ml/大鼠)。在之前的實(shí)驗(yàn)中，人lalp的給藥在灌輸過程中或此后沒有改變平均動脈壓或心率(數(shù)據(jù)未顯示)。RNA提取和肝臟bikunin基因的測定肝是bikunin的主要來源。因此，我們測量肝臟中的bikuninmRNA表達(dá)。通過Tri-Reagent(MolecularResearchCenter,Cincinnati,OH)從肝臟提取總RNA。將1.5mlTri-Reagent中的100mg肝組織均質(zhì)，通過加入氯仿分離成水相和有機(jī)相，并離心。通過加入異丙醇從水相中分離出RNA，并用乙醇洗滌。將沉淀溶解于0.1。ADEPC-處理的、去離子的蒸餾水中。通過在260和280nm測量吸光率來測定RNA的濃度和純度。將每個(gè)組織的5嗎RNA在20^1反應(yīng)體積中逆轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)溶液含有50mMKC1，10mMTris-HCl,5mMMgC12，lmMdNTP，20URNA酶抑制劑，2.5mM寡d(T)16引物和50U逆轉(zhuǎn)錄酶。將逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溶液在42°C孵育lh，接著在95°C加熱5分鐘。用各自0.15jxM的3'和5'引物擴(kuò)增lnl的cDNA，引物對大鼠bikunin特異性(633bp)(5，TGAGGAATATGCCATTTTCC3，，5，CCACAGTACTCCTTGCACTCC3，)(登錄號No.S87544)，大鼠甘油醛畫3-磷酸鹽-脫氫酶7(G3PDH)(24)(983bp)(5，TGAAGGTCGGTGTCAACGGATTTGGC3，，5，CATGTAGGCCATGAGGTCCACCAC3，)，在25niPCR混合物中，含有50mMKCl，10mMTris隱HCl，2mMMgC12，0.2mMdNTP和0.7UAmpliTaqDNA聚合酶。在Bio-Rad熱循環(huán)儀上進(jìn)行PCR。RT-PCR后，將5pl的反應(yīng)混合物在含有0.22g/ml溴乙錠的1.2。/。TBE-瓊脂糖中電泳。然后產(chǎn)生凝膠并使用Bio-Rad圖象系統(tǒng)(Hercules,CA)通過G3PDH將條帶強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)化。蛋白質(zhì)的放射性碘化和Iotlp半衰期的測定用Na12SI(Amersham，ArlingtonHeights,IL)放射性^i^Mt純^(匕的Ialp，使用1，3，4，6-四氯-3a-6a-二苯基甘脲(IODO-GEN碘化劑；Pierce,Rockford，IL)將。將反應(yīng)混合物運(yùn)用至ExcelhiloseGF-5脫鹽柱(Pierce)上來除去未摻入的12SI。在y粒子計(jì)數(shù)管(Pharmacia畫LKB，Piscataway，NJ)中測定放射性。CLP和假手術(shù)后12小時(shí)時(shí)，用異氟烷吸入將動物麻醉。隨后靜脈內(nèi)注射戊巴比妥鈉(~30mg/kgBW)來維持鎮(zhèn)靜的穩(wěn)定狀態(tài)。將聚乙烯-50導(dǎo)管;^右頸靜脈和左股動脈中，并通過頸套管給藥1251-標(biāo)記的Ictlp造影劑團(tuán)注射(500，000cpm/大鼠)。用y粒子計(jì)數(shù)管測量注射器中剩余的放射性，并從最初的注射前計(jì)數(shù)減去放射性計(jì)數(shù)來測定凈注射的放射性。注射后立即收集血樣，然后每2小時(shí)測定循環(huán)中ml-Ialp的半衰期(t1/2)8小時(shí)。使用y粒子計(jì)數(shù)管測量每個(gè)樣品的放射性(cmp)。根據(jù)WuR，ZhouM，CuiX等在多微生物膿毒癥的晚期降低了ghrelin的清除(Chrelinclearanceisreducedatthelatestageofpolymicrobialsepsis)來計(jì)算t1/2。/"f/Afo/Me丄2003;12:777-782。存活研究如上所述進(jìn)行CLP。在CLP后l、5、10或10和20小時(shí)時(shí)，靜脈內(nèi)灌輸人Ialp濃縮物(30mg/kgBW)或栽體(生理鹽水，1.5ml/大鼠，CLP后1小時(shí)時(shí)或CLP后IO和20小時(shí)時(shí))。CLP后20小時(shí)時(shí)，切除壞死的盲腸并使用40ml溫?zé)岬臒o菌生理鹽水溶液將腹腔洗滌兩次。然后將腹部切口層層縫合。模擬只要有可能就除去膿毒病灶的臨床情況來進(jìn)行CLP動物中的盲腸切除程序。然后允許動物隨意進(jìn)食和飲水并監(jiān)控10天來記錄存活。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析將結(jié)果表示為平均±SE,使用方差一尾分析(ANOVA)和Tukey測試來比較不同組的實(shí)驗(yàn)動物。通過Kaplan-Meier方法來計(jì)算存活率并通過對數(shù)級測試來比較。如果尸O.05認(rèn)為值的差異是顯著的。CLP后bikuninmRNA表達(dá)的改變Bikunin是Ialp的活性部分。肝臟是bikimin的主要來源。因此，我們選擇肝臟中的bikiminmRNA表達(dá)來反應(yīng)Ialp的產(chǎn)生。如圖3所示的，在CLP后5h時(shí)，肝臟中bikimin的mRNA表達(dá)沒有改變，然而，在CLP后20h時(shí)于假手水的動物相比較，發(fā)現(xiàn)降低32%(P<0.05)。CLP后125I-IaIp的11/2改變通過測量膿毒癥發(fā)作后12h時(shí)注射的放射性標(biāo)記Ialp的血液含量改變來計(jì)算Ialp的半衰期，如圖4所示的，CLP后12SI-IaIp的t1/2從5.6±0.3h顯著提高至11.8±2.7h(P<0.05)Ialp對存活率的效果CLP和盲腸切除后單次栽體給藥(CLP后lh時(shí))的存活率在第2天為75%并在第5-10天降低至50%(圖5)。然而，CPL后lh時(shí)給藥人Ialp在整個(gè)10天的觀察階段中將存活率提高至92%(P<0.05;圖5)。盡管在CLP后5或10h時(shí)給藥人Ialp各自將存活率提高至64。/0和73%，這些提高沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(圖6)。CLP和盲腸切除后兩次載體給藥(CLP后10和20h時(shí))的存活率在第2天為56%并在第5-10天降低至44%(圖7)，與一次栽體給藥(圖5)相比沒有顯著差異。然而，CLP后10和20h時(shí)給藥人Ialp在整個(gè)10天的觀察階段中將存活率提高至8P/。，與載體組相比是顯著差異的(PO.05;圖7)。膿毒癥是特征在于全身炎癥、凝血病、呼吸衰竭、心肌功能障礙、腎機(jī)能不全和神經(jīng)認(rèn)知缺陷的臨床癥狀。通常認(rèn)為這種癥狀是由入侵微生物過量引發(fā)的內(nèi)源炎癥介質(zhì)引起的。這些介質(zhì)包括激活的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞釋放的物質(zhì)如細(xì)胞因子、反應(yīng)性氧物質(zhì)和蛋白酶。嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)中，各種血液和組織細(xì)胞，包括多核型粒細(xì)胞，胞外釋放溶菌蛋白酶并進(jìn)入循環(huán)中。這樣的蛋白酶以及吞噬過程中正常產(chǎn)生的胞內(nèi)氧化物質(zhì)，可以引發(fā)組織和器官損傷并提高血漿凝固和補(bǔ)體因子的非特異性水解作用。嗜中性粒細(xì)胞蛋白酶的釋放，尤其是人白細(xì)胞彈性蛋白酶，已經(jīng)涉及膿毒癥個(gè)體并發(fā)癥的進(jìn)展。他們的血漿水平與感染誘導(dǎo)炎癥的嚴(yán)重程度和即將出現(xiàn)的器官衰竭的高度預(yù)測性密切相關(guān)。人敗血癥性休克的過程中，除了提高的蛋白酶活性，還報(bào)道了降低的Ialp水平。Ialp濃度嚴(yán)重降低的個(gè)體具有較高的死亡率。我們的結(jié)果表明CLP動物肝臟中bikunin的基因表達(dá)顯著低于假手術(shù)動物中的。已經(jīng)在靈長類、豬和嚙齒動物的各種組織中檢測到與內(nèi)-a抑制劑家族蛋白相關(guān)的mRNA表達(dá)。這些研究表明Ialp家族所有成員來源的基因主要在肝臟中轉(zhuǎn)錄。我們的結(jié)果也表明了與假手術(shù)相比較，在CLP后5或20小時(shí)時(shí)，其他器官(即，腸和腎臟)中的bikunin基因表達(dá)沒有顯著改變(數(shù)據(jù)未顯示)。CLP后20小時(shí)時(shí)只在肝臟中觀察到顯著下調(diào)表明該器官是Ialp的重要來源，此外，在膿毒癥的晚期，肝臟中的bikimiii基因表達(dá)顯著降低。在治療上，已經(jīng)報(bào)道作為防止胃切除術(shù)后的胰腺炎或緩解心臟手術(shù)后的器官損傷的預(yù)防性治療，bikimin對人具有有益效果。測定bikunin在致病大腸桿菌菌血癥的急性犬模型中效果的研究表明了相似的結(jié)果，具有血液動力學(xué)變量和心輸出量的標(biāo)準(zhǔn)化和平均動脈壓的改善。因?yàn)閎ikimin的血漿半衰期非常短(約10分鐘)，因此延長bikumin的半衰期來維持該藥劑持續(xù)的有益效果顯現(xiàn)出重要性。我們的結(jié)果表明假手術(shù)動物中的Icdp半衰期為5.6h。當(dāng)我們在膿毒癥發(fā)作后12h時(shí)注射放射性標(biāo)記的Ialp時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)Ialp的半衰期延長至11.8h。這些結(jié)果表明在膿毒癥過程中Ialp清除率顯著降低。然而，即使具有降低的清除率，膿毒癥個(gè)體中Ialp的血漿水平仍然顯著較低。我們之前的研究已經(jīng)表明膿毒癥發(fā)作后早期(即，CLP后1小時(shí))給藥低純度Ialp維持心輸出量和全身氧傳遞和提高的全身氧消耗和全身氧提取率。此外，CLP后20h時(shí)Ialp下調(diào)TNF-a的產(chǎn)生并減少肝細(xì)胞損傷和乳酸酸中毒。此外，膿毒癥發(fā)作后lh時(shí)給藥Ialp提高了膿毒癥動物的存活。作為工業(yè)規(guī)模血漿分級的副產(chǎn)物來分離人Ialp蛋白。分離方法高度、同時(shí)富集了含bikunin蛋白(Ial和Pal)的主要血漿形式。因此，該制備中，獲得了血漿Ialp的生理組合物。所進(jìn)行的死亡率研究結(jié)果表明在CLP后1小時(shí)時(shí)給藥Ialp將CLP和盲腸切除后10天時(shí)的存活率從50%提高至92%。盡管在CLP后5或10小時(shí)時(shí)給藥人Ialp各自將存活率提高至64%和73%，這些提高沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。然而，在CLP后10和20h時(shí)給藥人Ialp顯著地將存活率從440/。提高至81%。因此，Iap看來似乎是有用的添加刑來用于提高多微生物膿毒癥進(jìn)展過程中的存活率?？傊?，在膿毒癥的過程中，肝臟中的bikunin基因表達(dá)降低和Ialp的半衰期從5.6±0.3小時(shí)提高至11.8±2.7小時(shí)，表明盡管清除率降低但下調(diào)了膿毒癥中的Wkunin。CLP后1小時(shí)時(shí)給藥Ialp將存活率從50%提高至92%,而當(dāng)CLP后5或10h時(shí)給藥Ialp沒有顯著提高。然而，CLP后10和20小時(shí)兩次注射Ialp將存活率從44%提高至81%。延遲但重復(fù)的給藥人Ialp提高了CLP后的存活率。實(shí)施例3Ialp的純化應(yīng)用滲析或超濾/滲濾后的洗出液用DEAESephadexA50固相提取后，用pH6.0含0.28M氯化鈉的0.005M檸檬酸納/0.0055M磷酸鈉緩沖液從DEAE-S印haroseFF柱洗提弱結(jié)合的成分(描迷于Hoffer等，JournalofChromatographyB^(1995)187-196)。之前的步驟中，用pH6.0含0.20M氯化鈉的0.005M檸檬酸納/0.0055M磷酸鈉緩沖液洗滌柱子。對pH7.0的0.005M磷酸鈉緩沖液滲析或超濾/滲濾(UF/DF)后，將洗出液運(yùn)用至羥磷灰石柱。Ialp不結(jié)合柱子并作為流出級分收集?？梢允褂眠f增濃度的磷酸鈉緩沖液梯度來洗提雜質(zhì)蛋白質(zhì)，主要是FII、FVII和FX。Ial/Pal含有高于90%的目標(biāo)蛋白，主要是Ial和Pal。實(shí)施例4從因子IX流出級分中純化Ialp將肝素瓊脂糖親和色謙的未結(jié)合蛋白質(zhì)(L.Hoffer等，J.ofChromatographyB)運(yùn)用至DEAE-SepharoseFF陰離子交換樹脂柱上。用最小的三柱體積pH7.0的0.005M砩酸鹽緩沖液洗滌柱子后，用pH7.0的含有0.55M氯化鈉的0.005M磷酸鹽緩沖液(洗提緩沖液)來洗提含Ialp/Pal的級分。洗出液含有約30-40%的Ial/Pal。對pH7.0的0.005M磷酸鈉緩沖液滲析或超濾/滲濾(UF/DF)后，將DEAESepharoseFF的洗出液運(yùn)用至鞋磷灰石柱。Ial/Pal不結(jié)合柱子并作為流出級分收集?？梢允褂眠f增濃度的磷酸鈉緩沖液梯度來洗提雜質(zhì)蛋白質(zhì)，主要是FII和FX。純化的Ial/Pal含有高于卯％的目標(biāo)蛋白。實(shí)施例5將冷貧瘠血漿在DEAE-SephadexA50(L.Hoffer等，J.ofChromatographyB)或Q-SephadexA50(D.Josic等，ThrombosisResearch,參考以上的)上的固相提取的洗提液運(yùn)用至具有80mL柱體積的DEAC-CIM管獨(dú)石柱上(參考，K.Branovic等，J.ofChromatographyA,903(2000)21-32)。收集未結(jié)合的級分(流出物)。隨后用三柱體積的pH7.4的0.02MTris-HCl(平衡緩沖液)洗滌柱子。第一步驟中用含有0.35Mol/L氯化鈉的pH7.4的0.02MTris-HC1洗提未結(jié)合的蛋白質(zhì)(洗出液1)，第二步稞中用含有0.55M氯化鈉的pIT7.4的0.02MTris-HCl(洗提2),在流出級分和洗出液1中發(fā)現(xiàn)了Ial/Pal。流出級分含有約35-45%的Ial/Pal。洗出液1中這些目標(biāo)蛋白的量為20-30%。將含有Ial/Pal的級分接受對pH7的0.005M磷酸鈉緩沖液的滲析或超濾/滲濾(UF/DF)并運(yùn)用至羥鱗灰石柱。Ialp不結(jié)合柱子并作為流出級分收集。流出級分含有高于90%的Ial/Pal。圖8a和8b描述了如實(shí)施例3-5呈現(xiàn)的以流程困表示的Ialp的示例性純化方案。實(shí)施例6高度純化的Ialp在動物研究中的有益效果在雄性Sprague-Dawley大鼠中通過盲腸結(jié)扎和穿刺(CLP)來誘導(dǎo)多微生物膿毒癥。在進(jìn)行CLP前將動物進(jìn)食過夜但可以隨意飲水。實(shí)驗(yàn)時(shí)，通過甲基氟烷吸入將大鼠麻醉，并進(jìn)行2-cm中線剖腹。將盲腸暴露，只在回盲瓣遠(yuǎn)側(cè)結(jié)扎來避免腸阻塞，用18-規(guī)格的針穿刺兩次，溫和地?cái)D壓來擠出少量糞便，然后返回腹腔。將腹部切口層層縫合，CLP后將動物立即皮下接受30mL/kg體重生理鹽水溶液作為流體蘇醒。該實(shí)驗(yàn)中使用兩組大鼠，每組n-12。在CLP后10和20小時(shí)時(shí)治療組接受30mg/kg體重的高度純化的Ialp。對照組接受鹽水。CLP后20小時(shí)時(shí)，切除壞死的盲腸并用40mL溫?zé)岬臒o菌生理鹽水溶液將腹腔洗滌兩次。然后將腹部切口層層縫合。進(jìn)行CLP動物中的盲腸切除程序來模擬其中除去膿毒病灶的臨床情況。允許實(shí)驗(yàn)動物隨意進(jìn)食并監(jiān)控10天來記錄非存活者的死亡。使用對數(shù)級測試來比較不同組動物之間的死亡率并通過Kaplan-Meier方法來測定/7值。與鹽水對照組相比較，觀察到治療組中存活的顯著提高(治療組中81.3%存活動物對對照組中44%存活(/7值=0.0293))，表明高度純化的Iotlp在降低膿毒癥動物的膿毒癥相關(guān)死亡中是生物活性的和有效的。結(jié)果顯示于圖9中。表1.Ialp抑制比活性的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>TIU-胰蛋白酶抑制單位；平均士SD來自單個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)計(jì)算高度純化的Ialp(來自冷貧瘠血漿)的抑制比活性并與冷沉淀物純化的Ialp相比較，冷沉淀物是FVIII因子生產(chǎn)的副產(chǎn)物.在胰蛋白酶抑制測試中使用產(chǎn)色底物L(fēng)-BAPA(N(a)-苯甲酰-L-精氦酸-4-硝基酰苯胺鹽酸鹽)(FlukaChemicals)來測量Ialp的生物活性。該測試是基于Ialp抑制L-BAPA水解的能力。通過410nm處的5吸光率/分鐘的速率降低來監(jiān)控抑制。通過BioRad蛋白質(zhì)測試來定量測量蛋白質(zhì)濃度，并通過竟?fàn)幮訣LISA使用MAb69,31來測量Ialp濃度，如Lim等，J.ofInfectiousDisease,2003中所述的。從冷貧療血漿和冷沉淀物純化的Ialp制劑之間的特異性胰蛋白酶抑制活性沒有顯著差異(/7值=0.939),表明兩種級分中的Ialp具有相當(dāng)?shù)纳锘钚浴?shí)施例7來自FIX純化的副產(chǎn)物"洗滌級分"來自DEAE-SepharoseFF上的凝血因子FIX色譜純化(Josic等，JournalofChromatography,以上所引的)。用pH6.0的含有0.25M氯化鈉的0.01-0.1M檸檬酸鈉/0.005-0.1M磷酸鈉緩沖液來洗提該級分。Ial和Pal是該級分中的主要成分。在下一步驟中用pH6.0的含有0.3-0.6M氯化鈉的0.01-0.1M檸檬酸鈉/0.005-0.1M磷酸鈉緩沖液從DEAE-S印haroseFF柱洗提含F(xiàn)IX的級分。該級分中還含有其他維生素K依賴性凝血因子如凝血因子II(FII)、凝血因子X(FX)、較低含量的凝血因子VII(FVII)和殘留量的Ialp。降低滲透壓和鹽濃度的滲析后，通過固定肝素上的親和色謙以及遞增鹽濃度和滲透壓緩沖劑中的洗提步驟來收集FIX級分中的殘余Ialp。早期洗提步驟的洗滌緩沖液中的級分含有超過80%的Ialp和非常低的FIX雜質(zhì)。FIX的洗提發(fā)生在較后的較高鹽濃度和滲透壓緩沖液步驟中。還存在不結(jié)合柱子的流出級分，是無FIX的并含有Ialp(30-40%)、維生素K依賴性凝血因子和用于病毒滅活的溶劑/去污劑(S/D)的混合物?？梢栽诹硗獾腄EAE-SepharoseFF色謙步驟中除去S/D。從DEAE-S印harose收集含Ialp的級分，固定于肝素或肝素的流出物可以單獨(dú)地進(jìn)一步純化或作為幾鱗灰石的集合。使用任一種方法，最終的制劑含有高于卯％的ITI。使用這些程序純化的濃縮物含有高于卯％的Ial/Pal。已經(jīng)通過溶劑/去污劑處理將病毒滅活?？梢砸胗没虿挥梅€(wěn)定劑的最后容器中的最終加熱超過30分鐘或在穩(wěn)定劑存在下55-65°C巴氏殺菌來作為第二個(gè)病毒滅活步驟而活性沒有顯著丟失。用S/D處理或作為第二個(gè)滅活步驟，用或不用穩(wěn)定劑將純化的蛋白質(zhì)最終加熱30分鐘，或者，在穩(wěn)定劑存在下55-65°C巴氏殺菌將所得到的含有高于90%IaI/PaI的濃縮物滅活病毒。強(qiáng)陰離子交換級分替代弱陰離子交換DEAES印hadexA50固相提取后的洗出液，可以使用強(qiáng)陰離子交換QSephadexA50固相提取后的洗出液。洗提的條件描述于德國專利DE4342131C1中。Ial和Pal的混合物不結(jié)合或只是微弱地結(jié)合整體陰離子交換栽體DEAE-CIM。在分開的級分中洗提出其他蛋白質(zhì)如凝血因子FII、FVII、FIX和FX，凝血抑制劑PC、PS和PZ,粘著蛋白玻連蛋白和蛋白酶FSAP。在下一步驟中使用羥磷灰石色鐠可以獲得剩余雜質(zhì)的進(jìn)一步分離。整體色鐠級分DEAECIM整體(膜)可以用于FIX純化中的色謙分離來替代DEAESepharoseFF或其他基于顆粒的陰離子交換器(參見DE4342132C1)。令人驚訝地，Ial和Pal不結(jié)合或只是微弱地結(jié)合整體栽體。其他蛋白質(zhì)，如FIX、玻連蛋白和FII、FVII(低量)和FX作為分開的級分得到洗提。在該純化步驟中，主要來自因子VH激活蛋白酶(FASP)的蛋白水解活性(J.Roemisch,BiologicalChemistry翌(2002)1119-1124)也得到了充分地分離。在下一步驟中使用羥噼灰石色譜來獲得含Ial/Pal級分的剩余雜質(zhì)的進(jìn)一步分離，即痕量維生素K依賴性凝血因子FII、FVII和FX。該申請中引用的所有出版物和專利文件以其整體引入作為參考用于所有目的至相同程度，好像每個(gè)獨(dú)立的出版物和專利文件是單獨(dú)表示的。除非另外指出，在此所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的意思。以下的參考文獻(xiàn)給技術(shù)人員提供了本發(fā)明中所用的許多術(shù)語的一般定義Singleton等，微生物和分子生物學(xué)字典(/>/"/<mar"/Mci*<^/o5yandAfi1V/0gy)(第2版，1994);劍橋科技字典(7TieCa挑6nV/geD/"iV"fli^o/SciV/i"r"/mo/ogy)(Walker編輯，1988);遺傳學(xué)術(shù)語(JT^(/仍sao;G匿to)，第5版，R.Rieger等(編輯)，SpringVerlag(1991);和Hale&Marham,HarperCollins生物學(xué)字典(77^D/"/o/mij/丑/o/柳)(1991)。引入?yún)⒖嘉墨I(xiàn)貫穿本申請所引用的所有參考文獻(xiàn)(包括參考文獻(xiàn)，公開的專利，公開的專利申請和共同未決的專利申請)的內(nèi)容在此特意以其整體引入作為參考。等價(jià)物本領(lǐng)域技術(shù)人員使用不超出常規(guī)的實(shí)驗(yàn)將認(rèn)識到或能夠確定在此所述的本發(fā)明特定實(shí)施方案的許多等價(jià)物。確定這樣的等價(jià)物由以下的權(quán)利要求所包括。權(quán)利要求1.生產(chǎn)源自血漿的IαIp組合物的方法，該組合物含有內(nèi)-α抑制劑蛋白質(zhì)(IαI)和前-α蛋白質(zhì)(PαI)的混合物，其中IαI和PαI以生理比例存在于所述混合物中，該方法包括從血漿中分離出含有IαI和PαI的血漿級分，其中IαI和PαI以生理比例存在；和純化所述血漿級分來獲得IαIp純度為約85％至約100％純的IαIp組合物。2.權(quán)利要求1的方法，其中通過固相提取來分離。3.權(quán)利要求2的方法，其中通過DEAESephadex來固相提取.4.權(quán)利要求1的方法，其中分離包括將血漿進(jìn)行色謙分離。5.權(quán)利要求4的方法，其中色譜包括陰離子交換色譜。6.權(quán)利要求5的方法，其中陰離子交換色謙是基于顆粒的。7.權(quán)利要求6的方法，其中顆粒含有固定化的陰離子交換基團(tuán)如DEAESephadex、DEAESephadexA50、ToyopearlDEAE、TMAEFractogel、DEAEFractogel或Q-Sepharose。8.權(quán)利要求4的方法，其中通過整體栽體將血漿進(jìn)行色謙分離。9.權(quán)利要求8的方法，其中整體栽體是具有固定化陰離子交換配體的CIM如DEAE-CIM或Q-CIM。10.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中血漿級分包括純化凝血因子IX獲得的副產(chǎn)物級分。11.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中血漿級分包括純化凝血酶原復(fù)合體濃縮物的副產(chǎn)物級分。12.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中作為血漿冷沉淀得到的冷上清液來分離血漿級分。13.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中血漿級分是冷貧脊血漿。14.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中血漿級分是人、靈長類、牛、豬、貓或犬的血漿級分。15.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，進(jìn)一步包括獲得血液。16.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，進(jìn)一步包括獲得血漿。17.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，進(jìn)一步包括獲得純化凝血因子IX獲得的副產(chǎn)物級分。18.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，進(jìn)一步包括獲得純化凝血酶原復(fù)合濃縮物的副產(chǎn)物級分。19.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，進(jìn)一步包括獲得血漿冷沉淀獲得的冷上清液。20.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，進(jìn)一步獲得冷貧瘠血漿。21.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中通過幾鱗灰石色謙來純化。22.權(quán)利要求l-21任一項(xiàng)的方法，其中通過親和色譜來純化。23.權(quán)利要求22的方法，其中親和色謙是肝素。24.權(quán)利要求21的方法，其中通過離子交換色譜和羥磷灰石色傳來純化。25.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中存在于血漿級分的Ial和Pal具有約60,000至約280，000kDa的表觀分子量。26.權(quán)利要求25的方法，其中通過十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳來測定分子量。27.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，進(jìn)一步包括進(jìn)一步純化血漿級分。28.權(quán)利要求27的方法，其中通過肝素親和柱并收集流過(未結(jié)合)級分來進(jìn)一步純化。29.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，進(jìn)一步包括將血漿級分和/或純化的Ialp進(jìn)行病毒滅活。30.權(quán)利要求29的方法，其中通過溶劑/去污劑處理或熱滅活來進(jìn)行滅活病毒。31.權(quán)利要求30的方法，其中熱滅活是約55至約65°C的溫度或在70至120。C的千熱。32.權(quán)利要求29的方法，進(jìn)一步包括加入穩(wěn)定劑。33.權(quán)利要求29的方法，進(jìn)一步包括將純化的Ialp巴氏殺菌或在約70至約1加。C干熱。34.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，進(jìn)一步包括將純化的Ialp進(jìn)行陰離子交換色譜。35.權(quán)利要求34的方法，其中陰離子交換色謙是DEAESepharose。36.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中Ictlp組合物具有高于1小時(shí)的半衰期。37.權(quán)利要求1-36任一項(xiàng)的方法，其中Ialp組合物具有高于5小時(shí)的半衰期。38.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中Ialp組合物具有高的胰蛋白酶抑制比活性。39.權(quán)利要求38的方法，其中胰蛋白酶抑制比活性為約1000至約2000IU/mg。40.含有內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(Ial)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物的Ialp組合物，其中Ial和Pal以生理比例存在于所述混合物中，為約85%至約100%純。41.權(quán)利要求40的組合物，其中Ialp包括約60%至約80%的Ial和約40%至約20%的Pal。42.權(quán)利要求40的組合物，其中生理比例是人血漿中天然呈現(xiàn)的Ial與Pal的比例。43.權(quán)利要求40的組合物，其中蛋白質(zhì)用于治療人疾病。44.權(quán)利要求43的組合物，其中人疾病是急性炎癥疾病、膿毒癥、嚴(yán)重休克、敗血癥性休克、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、癌轉(zhuǎn)移、創(chuàng)傷/損傷、傳染病和早產(chǎn)分娩。45.權(quán)利要求40的組合物，進(jìn)一步包括穩(wěn)定劑。46.權(quán)利要求45的組合物，其中穩(wěn)定劑是白蛋白、聚乙二醇、a，a-海藻糖、氨基酸、鹽、甘油、-氨基酸、糖或其組合。47.含有內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(Ial)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物的Ialp組合物，其中Ial和Pal以生理比例存在于所述混合物中并具有高的胰蛋白酶抑制比活性。48.權(quán)利要求47的組合物，其中Ialp包括約60%至約80%的Ial和約40%至約20%的Pal。49.權(quán)利要求47的組合物，其中生理比例是人血漿中天然呈現(xiàn)的比例。50.權(quán)利要求47的組合物，其中蛋白質(zhì)用于治療人疾病。51.權(quán)利要求50的組合物，其中人疾病是急性炎癥疾病、膿毒癥、嚴(yán)重休克、敗血癥性休克、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、癌轉(zhuǎn)移、傳染病和早產(chǎn)分娩。52.權(quán)利要求47的組合物，進(jìn)一步包括穩(wěn)定劑。53.權(quán)利要求52的組合物，其中穩(wěn)定劑是白蛋白、聚乙二醇、a，ct-海藻糖、氨基酸、鹽、甘油、(o-氨基酸、糖或其組合。54.含有內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(Ial)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物的Ialp組合物，其中Ial和Pal以生理比例存在于所述混合物中并具有高于一小時(shí)的半衰期。55.權(quán)利要求54的組合物，其中Ialp包括約60%至約80%的Ial和約40%至約20%的Pal。56.權(quán)利要求54的組合物，其中Ialp組合物具有至少5小時(shí)的半衰期。57.權(quán)利要求54的組合物，其中Ialp組合物具有至少10小時(shí)的半衰期。58.權(quán)利要求54的組合物，其中生理比例是人血漿中天然呈現(xiàn)的比例。59.權(quán)利要求54的組合物，其中蛋白質(zhì)用于治療人疾病。60.權(quán)利要求59的組合物，其中人疾病是急性炎癥疾病、膿毒癥、嚴(yán)重休克、敗血癥性休克、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、癌轉(zhuǎn)移、傳染病和早產(chǎn)分娩。61.權(quán)利要求54的組合物，進(jìn)一步包括穩(wěn)定劑，62.權(quán)利要求61的組合物，其中穩(wěn)定劑是白蛋白、聚乙二醇、a，a-海藻糖、氨基酸、鹽、甘油、(D-氨基酸、糖或其組合。63.含有內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(Ial)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物的Ialp組合物，其中Ial和Pal以生理比例存在于所述混合物中，包括與三個(gè)重鏈Hl、H2和H3中的至少一個(gè)結(jié)合的內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)的輕鏈。64.權(quán)利要求63的組合物，其中Ialp包括約60%至約80%的Ial和約40%至約20%的Pal。65.權(quán)利要求63的組合物，其中生理比例是人血漿中天然呈現(xiàn)的Ial與Pal的比例。66.權(quán)利要求63的組合物，其中蛋白質(zhì)用于治療人疾病。67.權(quán)利要求66的組合物，其中人疾病是急性炎癥疾病、膿毒癥、嚴(yán)重休克、敗血癥性休克、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、癌轉(zhuǎn)移和傳染病。68.權(quán)利要求63的組合物，進(jìn)一步包括穩(wěn)定劑。69.權(quán)利要求63的組合物，其中穩(wěn)定劑是白蛋白、聚乙二醇、a，a-海藻糖、氨基酸、鹽、甘油、(D-氨基酸、糖或其組合。70.含有內(nèi)-ot抑制劑蛋白質(zhì)(Ial)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物的Ialp組合物，其中Ial和Pal以生理比例存在于所述混合物中，包括與四個(gè)重鏈H1、H2、H3和H4中的至少一個(gè)結(jié)合的內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)的輕鏈。71.權(quán)利要求70的組合物，其中Ialp包括約60%至約80%的Ial和約40%至約20%的Pal。72.權(quán)利要求70的組合物，其中生理比例是人血漿中天然呈現(xiàn)的Ial與Pal的比例。73.權(quán)利要求70的組合物，其中蛋白質(zhì)用于治療人疾病。74.權(quán)利要求73的組合物，其中人疾病是急性炎癥疾病、膿毒癥、嚴(yán)重休克、敗血癥性休克、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、癌轉(zhuǎn)移、傳染病和早產(chǎn)分娩。75.權(quán)利要求70的組合物，進(jìn)一步包括穩(wěn)定劑，76.權(quán)利要求75的組合物，其中穩(wěn)定刑是白蛋白、聚乙二醇、a，a-海藻糖、氨基酸、鹽、甘油、co-氨基酸、糖或其組合。77.根據(jù)權(quán)利要求1-39任一項(xiàng)制得的含有內(nèi)-a抑制劑蛋白質(zhì)(Ial)和前-a蛋白質(zhì)(Pal)的混合物的Ialp組合物，其中Ial和Pal以生理比例存在于所述混合物中。78.權(quán)利要求44-77任一項(xiàng)的組合物，進(jìn)一步包括另外的治療劑。79.權(quán)利要求78的組合物，其中另外的治療劑是抗癌劑、抗炎劑、抗凝血?jiǎng)┗蛎庖哒{(diào)節(jié)劑。80.藥物組合物，包括權(quán)利要求40、47、54、63、70或77中任一項(xiàng)的治療有效組合物和藥物學(xué)上可接受的栽體。81.治療個(gè)體炎癥相關(guān)疾病、癌癥或傳染病的方法，包括給藥治療有效量的權(quán)利要求1-39任一項(xiàng)方法產(chǎn)生的Ialp。82.權(quán)利要求81的方法，其中從個(gè)體分離Ialp。83.權(quán)利要求82的方法，其中個(gè)體是人、牛、豬、山羊或靈長類動物。84.權(quán)利要求81的方法，其中以片劑、膠囊或注射刑給藥Ialp。85.權(quán)利要求81的方法，其中Ialp是至少85%純。86.權(quán)利要求81的方法，其中Ialp為約85%至約100%純。87.權(quán)利要求81的方法，其中Ialp包括約60%至約80%的Ial和約40%至約20%的Pal。88.治療個(gè)體急性炎癥疾病、膿毒癥、嚴(yán)重休克、敗血癥性休克、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、癌轉(zhuǎn)移、傳染病或早產(chǎn)分娩的方法，包括(a)測定個(gè)體中以下水平中一個(gè)或多個(gè)的治療前水平(i)Ial的水平；(ii)Pal的水平；(iii)Ialp的水平；(iv)H3的水平；(v)H4的水平；(vi)Hl的水平；(vii)H2的水平；和(viii)LC的水平；和(b)將治療有效量的Ialp給藥于個(gè)體。89.權(quán)利要求88的方法，進(jìn)一步包括(c)測定Ialp治療初期后一個(gè)或多個(gè)水平的治療后水平，其中Ialp水平的調(diào)節(jié)表示產(chǎn)生良好臨床反應(yīng)的治療。90.權(quán)利要求89的方法，其中調(diào)節(jié)是Ialp水平的提高。91.權(quán)利要求88的方法，其中通過免疫方法測定Ial、Pal、Ialp、H3、H4、Hl、H2和LC的水平。92.權(quán)利要求88的方法，其中個(gè)體鑒定為患有炎癥、腫瘤入侵、腫瘤轉(zhuǎn)移、膿毒整、敗血癥性休克、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、早產(chǎn)分娩、癌癥或傳染病。93.權(quán)利要求88的方法，其中治療初期是獲得穩(wěn)定狀態(tài)的Ialp血漿濃度所需要的時(shí)間。94.權(quán)利要求88的方法，進(jìn)一步包括給藥另外的治療劑。95.權(quán)利要求94的方法，其中另外的治療劑是抗癌刑、抗炎劑、抗凝血?jiǎng)┗蛎庖哒{(diào)節(jié)劑。96.預(yù)測Ialp治療反應(yīng)的方法，包括測定從個(gè)體獲得的樣品來檢測以下中一個(gè)或多個(gè)的水平(i)Ial;(ii)Pal;(iii)Ialp;(iv)H3;(v)H4;(vi)Hl;(vii)H2;和(viii)LC;其中檢測的水平表示良好反應(yīng)Ialp治療的個(gè)體。97.權(quán)利要求96的方法，其中檢測的水平是Ial和Pal水平的降低。98.監(jiān)控Ialp治療個(gè)體進(jìn)展的方法，包括(a)測定個(gè)體以下水平中一個(gè)或多個(gè)的治療前水平(i)Ial的水平；(ii)Pal的水平；(iii)Ialp的水平;(iv)H3的水平；(v)H4的水平；(vi)Hl的水平；(vii)H2的水平；和(viii)LC的水平；(b)將治療有效量的Ialp給藥于個(gè)體；和(c)測定Ialp治療初期后一個(gè)或多個(gè)水平的治療后水平，其中Ialp治療后個(gè)體水平的提高表示個(gè)體對Ialp治療具有良好的臨床反應(yīng)。99.用于Ialp治療的藥盒，包括以下的一個(gè)或多個(gè)(i)Ial;(ii)Pal;(iii)Ialp;(iv)H3;(v)H4;(vi)HI;(vii)H2;和(viii)LC;和治療使用的說明書。100.包括容器的組合物，容器包括Ialp和插有有關(guān)將Ialp給藥于個(gè)體的說明書的標(biāo)簽或包裝。101.藥盒，包括權(quán)利要求40、47、54、63、70或77任一項(xiàng)的組合物和治療使用的說明書。全文摘要本發(fā)明涉及內(nèi)-α抑制劑蛋白質(zhì)(IαIp)。本發(fā)明還涉及純化IαIp組合物的方法及其用于治療人疾病如膿毒癥和敗血癥性休克、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)、癌癥和傳染病的用途。文檔編號A61K35/14GK101160133SQ200480040150公開日2008年4月9日申請日期2004年11月5日優(yōu)先權(quán)日2004年11月5日發(fā)明者D·C·?？松?D·喬斯克,Y·-P·林申請人:普羅瑟拉生物公司