專利名稱：用于增強人體免疫功能的注射劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及提高人體免疫功能的含有左旋咪唑或其衍生物的注射劑。
背景技術(shù)：
左旋咪唑及其衍生物，是公知的化合物。左旋咪唑的分子式為C11H12N2S，鹽酸左旋咪唑是左旋咪唑的一種衍生物。左旋咪唑及其衍生物被用作藥物已有較長的歷史。早期主要用左旋咪唑作驅(qū)蟲藥。經(jīng)過進一步研究后發(fā)現(xiàn)，它還具有激發(fā)機體免疫功能的作用，因而人們將其作為增加免疫功能的增效劑，如用作針對抗感染(病毒或細菌或疫苗)免疫增效劑。早期的提高免疫功能的增效劑的劑型為口服片劑?？诜淖笮溥蛟鲂┯卸靖弊饔茫缡褂谜邜盒?、嘔吐、發(fā)生皮疹、發(fā)熱、粒細胞減少及腦類綜合癥等癥狀。新疆大學生命科學與技術(shù)學院申請的第02123695.X號名為“增強核酸疫苗免疫組合物及其生產(chǎn)方法和使用方法”的發(fā)明專利申請記載了一種含有核酸疫苗和左旋咪唑的組合物。其中的左旋咪唑起著疫苗增效劑的作用。該組合物可以通過注射、噴射、口服、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學介導的途徑進入機體。由于給藥途徑的多樣性，因而，可針對個體的差異做廣泛的選擇。但是將疫苗和左旋咪唑構(gòu)成組合物有一定的困難和不足1.由于該組合物是由二種或多種組分構(gòu)成，因而難以控制和保證該組合物的穩(wěn)定性；2.制備這種由疫苗和增效劑組合而成的組合物的工藝比較復雜，因而制備周期長，生產(chǎn)成本高，產(chǎn)品質(zhì)量也不易控制；3.用增效劑激活機體對疫苗的應(yīng)答是一個特殊的過程，只有在一定的期間內(nèi)，通過多次向機體施以增效劑，逐步激發(fā)機體的免疫機能，使機體處于最佳的免疫狀態(tài)下接受疫苗時才能產(chǎn)生最好的免疫效果。因此，將疫苗和左旋咪唑增效劑組合成一種組合物，則不能通過多次施以增效劑使機體在接受疫苗前處于較好的狀態(tài)。由于現(xiàn)有技術(shù)上述的不足，所以本技術(shù)領(lǐng)域一直期待著一種新的針對免疫功能的增效劑的出現(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種含有左旋咪唑溶液的、用于增強人體免疫功能的注射劑。
本發(fā)明的目的通過以下的技術(shù)方案實現(xiàn)1.一種用于增強人體免疫功能的的注射劑，它由重量百分比為0.05-5％的左旋咪唑和余量的水組成。
2.上述的用于增強人體免疫功能的注射劑，它還含重量百分比為0.2％-0.02％的穩(wěn)定劑。
3.上述第二項的用于增強人體免疫功能的注射劑，其中所述穩(wěn)定劑為亞硫酸氫鈉和EDTA-2Na。
4.上述的第1-3中任一項所述的用于增強人體免疫功能的注射劑，其中所述的鹽酸左旋咪唑的重量百分比為0.05-2.5％。
5.上述第4項所述的用于增強人體免疫功能的注射劑，其中所述的鹽酸左旋咪唑的重量百分比為0.5％。
下面對本發(fā)明作進一步的說明為將左旋咪唑或者其衍生物，如鹽酸左旋咪唑制備成安全有效的注射劑，首先要確定該注射劑的安全有效的施用劑量。經(jīng)本發(fā)明人在做動物實驗時發(fā)現(xiàn)，當施用劑量大于50mg/kg體重·日時，會使實驗動物產(chǎn)生不良反應(yīng)，甚至死亡；而當施用劑量小于0.5mg/kg體重·日時，該注射劑對于增強免疫功能的效果不明顯。此外，本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)在施用劑量為50-5mg/kg體重·日的范圍內(nèi)時增強免疫功能的效果與施用劑量之間為負相關(guān)關(guān)系，即施用劑量減少時，增強免疫的效果反而更明顯，根據(jù)實驗結(jié)果，本發(fā)明人將用作針對免疫功能的增效劑的左旋咪唑或鹽酸左旋咪唑的施用劑量確定為50-0.5mg/kg體重·日。然而，為保證左旋咪唑注射劑配置的準確便捷和消毒殺菌的可靠，本發(fā)明人不提倡在施用現(xiàn)場臨時配置左旋咪唑注射劑。在藥廠實現(xiàn)按著嚴格的計量、滅菌、封裝等工藝預先制成規(guī)定裝量的注射劑是更為可取的。當施用劑量按上述實驗定為0.5mg-50mg/Kg體重*日，日注射量定為0.1毫升時，經(jīng)折算該用作免疫功能增效劑的左旋咪唑注射劑的安全有效重量百分比濃度應(yīng)為0.5-0.005％?？紤]到前述的左旋咪唑劑量與其增強免疫功能的效果之間的負相關(guān)關(guān)系，左旋咪唑的安全有效濃度較佳范圍應(yīng)為0.25％-0.005％，而最佳為0.05％。當上述實驗結(jié)果用于制備裝量為1毫升的適于人體免疫增效注射劑時，左旋咪唑的安全有效重量百分比濃度應(yīng)為0.05-5％，較佳為0.05-2.5％，最佳為0.5％。當用于人體免疫時，左旋咪唑的劑量應(yīng)為實驗小鼠所用劑量的1/30-1/50，而人的體重為小鼠體重的5000倍。
本發(fā)明的用于增強機體免疫功能的左旋咪唑注射劑是按如下步驟制備的1.將新生產(chǎn)的注射用水冷卻至室溫，然后向其通藥用氮氣至飽和；2.根據(jù)配方精確稱量左旋咪唑或鹽酸左旋咪唑及輔料；3.將稱出的所述輔料，如亞硫酸氫鈉和EDTA-2Na溶于注射用水中，然后再向該溶液中加入稱出的左旋咪唑和鹽酸左旋咪唑，并攪拌使之全溶；
4.用濾膜過濾上述溶液得到澄明的溶液，然后不斷地將藥用氮氣通入該溶液，再將其PH值調(diào)至4.2-4.5；5.將所得溶液按0.1-1ml/支的裝量灌裝成注射液；6.在以100℃的溫度將所得的注射液滅菌30分鐘，然后冷卻、包裝。
所述的輔料包括常規(guī)的抗氧劑，絡(luò)合劑和穩(wěn)定劑，如亞硫酸氫鈉、EDTA-2Na。就增強免疫功能的作用而言，左旋咪唑和鹽酸左旋咪唑的功效相似，由于后者易溶于水，故優(yōu)選后者。在本發(fā)明中將左旋咪唑和鹽酸左旋咪唑是作為等價效的物質(zhì)使用的。
以較小的劑量達到明顯的免疫效果，而且避免了口服劑所帶來的使機體產(chǎn)生惡心、嘔吐等不良反應(yīng)是本發(fā)明的優(yōu)點。本發(fā)明的左旋咪唑注射液中的主要成份是左旋咪唑而不含疫苗本身，因而可以通過向機體多次注射該注射劑的方式，逐步提高機體的免疫水平，然后在其處于較佳狀態(tài)時接受疫苗，從而產(chǎn)生較好的免疫效果。
下面結(jié)合實施例詳細說明本發(fā)明具體實施方式
實施例1.
鹽酸左旋咪唑注射液的制備將新生產(chǎn)的注射用水100毫升冷至室溫，然后向其通藥用氮氣至飽和；稱出1g鹽酸左旋咪唑，2g亞硫酸氫鈉和0.2g EDTA-2Na；先將稱出的亞硫酸氫鈉和EDTA-2Na溶于上述氮飽和注射用水中，然后再將稱出的鹽酸左旋咪唑加入該注射用水中，攪拌使之全溶，后加注射用水至1000毫升；用濾膜過濾上述溶液至澄明，再將藥用氮氣持續(xù)地將通入所得溶液，然后將其PH值調(diào)至4.4；得到重量百分比濃度為0.1％的左旋咪唑溶液；將所得溶液用灌裝機灌裝成裝量為0.5ml/支的注射劑；以100℃的溫度將所得的注射液滅菌30分鐘，待冷卻后包裝。
實施例2.
以與實施例1相同的步驟制備左旋咪唑注射劑，但鹽酸左旋咪唑的加入量為0.5g，所得的注射劑中的左旋咪唑的重量百分比濃度為0.05％。
實施例3.
以與實施例1相同的步驟制備左旋咪唑注射劑，但鹽酸左旋咪唑的加入量為0.05g，所得的注射劑中的左旋咪唑的重量百分比濃度為0.005％。
實施例4.
鹽酸左旋咪唑?qū)w液免疫功能及細胞免疫功能的影響實驗動物二級ICR小鼠，體重18-22g，雌雄各半，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供。
實驗藥物1.鹽酸左旋咪唑，由亞洲(北京)國際肝病研究院提供。
2.Alsever‘s液用葡萄糖2.000g、檸檬酸鈉0.800g、檸檬酸0.055g、氯化鈉0.420g、溶于100ml蒸餾水中制成。
3.都氏試劑用氰化鉀0.025g、高鐵氰化鉀0.100g、碳酸氫鈉0.500g溶于1000ml蒸餾水中制成。
4.北京人參蜂王漿，北京三九藥業(yè)有限公司出產(chǎn)，口服給藥。
一.鹽酸左旋咪唑?qū)τ谛∈蟮募毎庖吖δ艿挠绊憽?br> 1.鹽酸左旋咪唑溶液的制備用滅菌生理鹽水將上述鹽酸左旋咪唑分別配成重量百分比濃度為4.00％、2.00％、1.00％、0.50％、0.25％、0.10％、0.05％、0.005％的水溶液。
2.抗原的制備取健康家養(yǎng)成年綿羊外頸靜脈血，去除纖維蛋白后，加入為羊血體積2倍的Alsever‘s液，搖勻，置于4℃冰箱內(nèi)待用。
3.實驗1)預試將濃度為4.00％的鹽酸左旋咪唑0.1ml肌肉注射實驗小鼠1次，結(jié)果實驗小鼠全部死亡；1.00％濃度的該溶液0.1ml每日肌肉注射實驗小鼠1次，連續(xù)2日，結(jié)果實驗小鼠全部死亡。
2)正式實驗將小鼠隨機分成7組，每組10只，一組為空白對照組，注射生理鹽水；一組為陽性藥對照組，口服人參蜂王漿，目的是使用療效肯定的免疫增強劑，如增強了小鼠的免疫功能，則證明本組其它實驗是可靠的；其余5組為實驗組，分別連續(xù)7日，每日一次注射0.1ml濃度為0.50％、0.25％、0.10％、0.05％和0.005％的按上述方法配置的鹽酸左旋咪唑溶液。
在注射鹽酸左旋咪唑溶液的第二天，向?qū)嶒炐∈笪察o脈注射羊紅細胞約5×106個/只羊紅細胞致敏。注射實驗溶液的第7天將20％羊紅細胞0.02ml作為抗體分別注入小鼠后肢左右腳掌皮內(nèi)，24小時后，用游標卡尺測量足跖腫脹度(FPR)，以左、右后肢的厚度差值作為免疫(DTH)指標。結(jié)果表示于表I表I.鹽酸左旋咪唑?qū)π∈蟮募毎庖叻磻?yīng)引起的足跖腫脹的影響x±S

注與空白對照組比較，*P＜0.01，**P＜0.05數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理計算各組FPR值x±S，對各組間進行Student’t檢驗，采用孫瑞元、陳志揚、鄭青山教授等主編的DAS軟件對上述結(jié)果進行統(tǒng)計學處理，判定顯著性差異。
二.左旋咪唑溶液對小鼠體液免疫功能的影響綿羊紅細胞懸液及鹽酸左旋咪唑溶液的制備同上。
隨機取小鼠70只，平均分成7組，每組10只，第一組為空白對照組；一組為陽性藥對照組，口服人參蜂王漿；其余5組為實驗組。
實驗空白對照組每天肌肉注射生理鹽水。
制備豚鼠血清自豚鼠心臟取血，放置1小時后，離心收集血清，于-20℃保證，臨用時用生理鹽水按1∶10稀釋。
實驗組每天分別肌肉注射上述不同濃度的鹽酸左旋咪唑溶液0.1ml/10g體重，連續(xù)7日。注射第1天，每鼠靜脈注射3∶5(v∶v)綿羊紅細胞生理鹽水稀釋液0.2ml，該稀釋液的紅血球濃度為20億個/ml。給藥第7日20分鐘后，自小鼠后眼眶取血進行溶血素測定。
溶血素測定將上述取自小鼠眼眶的血于離心管內(nèi)放置1小時后，使血清充分分離出，再以2000轉(zhuǎn)/分的速度離心分離10分鐘，提取血清，用生理鹽水稀釋200倍按下表進行試驗。再按下表方式進行試驗。
溶血素測定

將上述樣品于37℃水浴中保溫10分鐘。用冰浴終止反應(yīng)后，以2000轉(zhuǎn)/分離心分離10分鐘，取上清液1.0ml及都氏液3.0ml于試管內(nèi)。用空白對照管于540nm波長處調(diào)零待測個管吸收度值。
綿羊紅細胞半數(shù)溶血值測定管取10％綿羊紅細胞稀釋液0.25ml，都氏試劑4.0ml于另一試管內(nèi)用于測定綿羊紅細胞半數(shù)溶血值。
按下列公式計算每只小鼠樣品的半數(shù)溶血值HC50.
樣品HC50＝(樣品吸收度值÷羊紅細胞半數(shù)溶血時吸收度值)×稀釋倍數(shù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理計算各組HC50值x±S，對各組間進行Student’t檢驗，采用孫瑞元、陳志揚、鄭青山教授等主編的DAS軟件對上述結(jié)果進行統(tǒng)計學處理，判定顯著性差異。
實驗結(jié)果見下表II表II 鹽酸左旋咪唑?qū)π∈笱迥鬯氐挠绊?X±S)


注與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01結(jié)論上述實驗結(jié)果表明，鹽酸左旋咪唑?qū)毎庖吖δ芎腕w液免疫功能有顯著的影響。但在鹽酸左旋咪唑制成注射劑時，其重量百分比濃度不能超過0.5％，否則會使接受鹽酸左旋咪唑的機體產(chǎn)生不良反應(yīng)乃至死亡。從上述實驗發(fā)現(xiàn)，在低濃度范圍時，鹽酸左旋咪唑的濃度與其對機體免疫功能的影響呈負相關(guān)關(guān)系，因而鹽酸左旋咪唑注射劑的適宜濃度為0.05％左右，由于本發(fā)明含有鹽酸左旋咪唑溶液的免疫增效注射劑對增強機體的細胞免疫功能和體液免疫功能有積極的作用，因此，本領(lǐng)域的技術(shù)人員不難預見和理解該注射劑對具體的抗原(病毒或細菌或疫苗)有良好的增強特異性免疫功能的作用，從而達到抗感染的目的。
權(quán)利要求
1.一種用于增強人體免疫功能的注射劑，其特征在于其裝量為1ml，它由重量百分比為0.05-5％的鹽酸左旋咪唑和余量的水組成。
2.權(quán)利要求1所述的用于增強人體免疫功能的注射劑，其特征在于它還含有重量百分比為0.2％--0.02％的穩(wěn)定劑。
3.權(quán)利要求2所述的用于增強人體免疫功能的注射劑，其特征在于其中所述穩(wěn)定劑為亞硫酸氫鈉和EDTA-2Na。
4.權(quán)利要求1-3中任一項所述的用于增強人體免疫功能的注射劑，其特征在于其中所述的鹽酸左旋咪唑的重量百分比為0.05-2.5％。
5.權(quán)利要求4中任一項所述的用于增強人體免疫功能的注射劑，其特征在于其中所述的鹽酸左旋咪唑的重量百分比為0.5％。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于針對增強人體免疫功能的注射劑。它含有重量百分比為0.05－5％，更好是0.05－2.5％，最好是0.5％的鹽酸左旋咪唑。該注射劑對于提高細胞免疫功能和體液免疫功能有良好的作用，因而適于作免疫增效劑。由于本發(fā)明的注射劑中不含疫苗，因而可以通過連續(xù)注射的方式向機體提供左旋咪唑，從而激發(fā)機體的免疫功能，使之在接受抗原感染(病毒或細菌或疫苗)時處于較好的免疫狀態(tài)。
文檔編號A61P37/04GK1785183SQ20041009677
公開日2006年6月14日 申請日期2004年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月7日
發(fā)明者王竹生, 鄭禮, 朱凱甦 申請人:亞洲(北京)國際肝病研究院