專利名稱：雷帕霉素在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及眼科藥物制劑，尤其是一種雷帕霉素(mycin，sirolimus，RAPA)與可自行生物降解的藥物載體共同在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用，其是可供眼內(nèi)植入用的長效雷帕霉素緩釋藥物，使雷帕霉素在一些慢性與免疫相關(guān)的眼病中發(fā)揮獨特的治療作用。
背景技術(shù)：
角膜移植是角膜病盲人復明的唯一手段，術(shù)后的免疫排斥反應則是造成手術(shù)失效的最主要原因，而角膜新生血管化是最主要的高危因素。目前，糖皮質(zhì)激素是臨床應用的防治角膜移植等術(shù)后組織排斥的主要手段，但長期應用糖皮質(zhì)激素不僅會導致多種并發(fā)癥，如高血壓、糖尿病、全身免疫力下降等，眾多的有高危因素角膜移植患者在常規(guī)應用糖皮質(zhì)激素后，仍發(fā)生術(shù)后免疫排斥反應。環(huán)孢素A雖然是目前臨床常用的免疫抑制劑，但不能抑制角膜新生血管生成，對高危角膜移植術(shù)后抗免疫排斥效果不理想。因此防治角膜移植術(shù)后免疫排斥反應的研究已成為目前全球眼科界和制藥界的研究熱點。
有一種雷帕霉素的化合物，其常溫下呈白色結(jié)晶或晶狀粉末，分子式C51H79NO13，不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、丙醇、乙酸、乙酯及氯仿。雷帕霉素是第三代免疫抑制劑，對骨髓無毒性，但本藥口服吸收不完全，生物利用度差，食物可影響其吸收。服藥后1.5～2小時達到血藥峰濃度，一般有效濃度為5～20ng/ml，半衰期(t1/2)為62小時。雷帕霉素化學結(jié)構(gòu)式和另一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素FK506很相似，但二者的免疫抑制作用機制卻絕然不同。FK506的免疫抑制作用在細胞周期上表現(xiàn)為抑制T淋巴細胞由G0到G1期的增殖的功能，因此對于已經(jīng)開始增殖的淋巴細胞無抑制作用。雷帕霉素卻可以抑制T淋巴細胞由G1到S期的增殖，對未開始增殖和已經(jīng)開始增殖的淋巴細胞均具有明顯的抑制作用。因此雷帕霉素的免疫抑制作用比環(huán)孢素強50倍，比FK506強30倍。雷帕霉素強大的免疫抑制作用在其他大器官移植的作用已經(jīng)得到了實驗和臨床的證實，但是這么好的藥物在眼科為什么沒有得到更廣泛的應用呢？分析原因主要有以下幾個方面(1)雷帕霉素目前只有全身用制劑(注射液和口服液)，無眼科專用制劑。由于血眼屏障的存在，全身用藥體內(nèi)的生物利用度差，眼內(nèi)的藥物濃度極低，不利于眼科疾病的治療。雷帕霉素口服生物利用度僅有15％，藥物吸收入血后95％的藥物分布于紅細胞內(nèi)，血漿中的含量僅占3％，游離狀態(tài)的藥物極少。由此眼部得到的藥物量極少。再者雷帕霉素口服后吸收受體內(nèi)酸堿度影響，而且不同的食物可影響雷帕霉素藥物的吸收。(2)雷帕霉素屬于脂溶性藥物，只能溶解在油性溶劑中，如蓖麻油、豆油等，而且溶解度有限，容易產(chǎn)生沉淀。雷帕霉素溶液在室溫下不穩(wěn)定難以開發(fā)成理想跟用制劑，因此制成的滴眼液很難達到很高的藥物濃度。(3)雷帕霉素分子量大，很難通過角膜屏障。我們實驗用的混懸液是將雷帕霉素溶解在注射用豆油中，制成1％雷帕霉素滴眼液，該混懸液滴眼后，眼內(nèi)的該藥物濃度幾乎為“零”，此外滴眼液受淚液沖刷稀釋影響，容易波動。(4)雷帕霉素的治療窗口窄，目前的給藥方式很難在眼內(nèi)達到治療眼科疾病所需要的治療窗口的藥物濃度。所有這些原因都使得雷帕霉素目前的給藥方式在眼內(nèi)的藥物濃度很低，實驗證明免疫抑制劑在眼內(nèi)的藥物濃度很低時，不能起到治療眼科與免疫有關(guān)的疾病。要想使雷帕霉素在眼科得到很好的應用，就要改變雷帕霉素的制劑形式和在眼科的給藥方式。
隨著現(xiàn)代制藥技術(shù)的發(fā)展，緩釋技術(shù)得到了越來廣泛的應用，緩釋技術(shù)是將藥物與控釋載體結(jié)合，使藥物以受控的形式恒速(零級或接近零級速度)從載體中緩慢釋放出來。藥物控釋系統(tǒng)可使藥物濃度長期保持在較為穩(wěn)定的治療水平，減少了藥物的用量、用藥次數(shù)和毒副作用?，F(xiàn)在已經(jīng)知道有一種含有環(huán)孢素A的植入眼內(nèi)的控釋藥膜，其中控釋藥膜采用的是非降解性藥物載體材料乙烯-醋酸乙烯酯與聚乙烯醇制成的。這種控釋藥膜可以植入眼內(nèi)，在眼內(nèi)達到較高穩(wěn)定的藥物濃度。因此將雷帕霉素開發(fā)成可供眼內(nèi)植入的新型藥物控釋裝置對雷帕霉素發(fā)揮最大的藥理作用，減少其副作用有著重要的意義。
據(jù)眼科醫(yī)學常識，眼內(nèi)植入藥物制劑要求其具有不受淚液沖洗、稀釋影響，用藥量極少，能長時期在眼內(nèi)緩慢釋放藥物的特點；特別是對由于存在血眼屏障而使局部和全身用藥后，藥物難以達到的眼球等部位仍能達到很高的用藥效果。因此，長期來眼內(nèi)植入藥物制劑一直受到全世界眼科醫(yī)學界的矚目。然而由于藥物載體的問題一直沒有得到較好地解決，迄今為止，尚未出現(xiàn)一種具有長期穩(wěn)定釋藥功能的眼內(nèi)植入緩釋劑。藥物載體起著對藥物的保護和控制釋放速度，從而達到可在眼內(nèi)長期釋放效果的作用。藥物載體必須對藥物具有一定的通透性，并與藥物不發(fā)生相互作用。此外，由于眼內(nèi)藥物制劑是長期在眼內(nèi)進行藥物釋放，因此，其必須具有與眼組織有很好的生物相容性，不對眼組織尤為角膜內(nèi)皮細胞、視網(wǎng)膜等眼的重要組織產(chǎn)生炎癥、刺激、致敏等作用。有一種生物惰性材料，其作為藥物載體時，雖然可以維持藥物的長期緩釋效果，且不會對機體產(chǎn)生致炎、刺激和致敏等生物相容性的問題，但是由于隨著時日的增加，藥劑中含藥量的不斷減少，藥物釋放速度及釋藥劑是也會不斷下降，因此藥物的釋放劑量隨時間在不斷減少，無法保證恒定的藥物劑量。由于這些材料的生物惰性，在體內(nèi)還不會發(fā)生變化，因此在藥物釋放完后，還必須再從體內(nèi)取出，以免作為異物留在體內(nèi)會產(chǎn)生不良的影響。還有一種采用膠原、或脂質(zhì)體為載體的環(huán)孢素釋放系統(tǒng)，它們的持續(xù)釋藥時間都較短，并且還存在載體對視力有一定的影響(如膠原體)，或載體價格非常昂貴(如脂質(zhì)體)，以及載體會受淚液影響而使藥物喪失，從而進一步縮短藥效的缺點?，F(xiàn)有技術(shù)的眼內(nèi)釋藥體系的療效，仍是不能令人滿意的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是要克服雷帕霉素溶液在室溫下不穩(wěn)定難以開發(fā)成理想眼用制劑的技術(shù)難題，克服雷帕霉素全身用藥療效差，治療窗口窄，毒副作用大。鑒于目前的眼用制劑手段不能把雷帕霉素制成理想的眼用制劑的實際問題，首次利用藥物緩釋技術(shù)將雷帕霉素與可自行生物降解的藥物共同作為制備供眼內(nèi)植入長期釋藥的雷帕霉素緩釋系統(tǒng)，以避免目前的眼內(nèi)植入釋藥制劑不能穿透眼屏障，達到有效眼內(nèi)藥物濃度的難題。
本發(fā)明的任務是由以下技術(shù)方案實現(xiàn)的，研制的是一種雷帕霉素與可自行生物降解的藥物載體共同在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用。
所述的眼內(nèi)植入緩釋藥物，其是用于防治療角膜移植后的排斥反應和角膜新生血管增殖的藥物。
所述的眼內(nèi)植入緩釋藥物，其是用于治療慢性葡萄膜炎和眼內(nèi)新生血管性疾病的藥物。
所述的眼內(nèi)植入緩釋藥物，其是用于治療春季卡他性結(jié)膜炎的藥物。
所述的眼內(nèi)植入緩釋藥物，其是用于治療stevene-Johnson綜合癥病的藥物。
所述的雷帕霉素與可自行生物降解的藥物載體，二者的重量比為1∶0.25～4。
所述的可自行生物降解的藥物載體，其或為合成生物降解高分子材料，或天然生物降解高分子材料，或合成生物降解高分子材料和天然生物降解高分子材料的混合物；該載體的分子量范圍為1～15萬。
所述的藥物載體，其形態(tài)或為膜狀，或為片狀，或為粒狀，或為塊狀，或為條狀，或為棒狀；該載體或為無紡織物，或為海綿體物。
所述的海綿體物，其網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔的孔徑為20～400000納米，其密度為0.2～2g/mm3。
上述的藥物載體孔結(jié)構(gòu)的大小和密度由控制溶液揮發(fā)速度的方法實現(xiàn)。即先通過控制溶劑與聚合物的混合比例，之后由控制溶液揮發(fā)速度，如冷凍抽干，使溶劑揮發(fā)留下空間，就可得到不同孔徑的聚合物。或控制致孔劑量的方法，或通過控制織物密度的方法，進行控制載體孔結(jié)構(gòu)的大小。
本發(fā)明的優(yōu)點在于本發(fā)明的雷帕霉素釋放系統(tǒng)在藥物釋放完可保持一定的強度、和形狀，而在體內(nèi)的生理條件下可以自然降解、從而被吸收并通過代謝排出體外，既不會成為異物對機體產(chǎn)生刺激，也不會使機體產(chǎn)生異物反應，因此不需要行二次手術(shù)將其取出。由于本發(fā)明的雷帕霉素釋放系統(tǒng)所采用的可自行生物降解的藥物載體是屬于疏水性載體，其植入眼內(nèi)以后，水或溶媒不能進入內(nèi)部(網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)內(nèi))，因此被網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)載體包埋的雷帕霉素藥物只能慢慢隨其載體的降解而釋放。在該載體緩慢降解的過程中，緩釋系統(tǒng)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)載體外周圍的雷帕霉素藥物才能隨其載體的降解而緩慢持續(xù)釋放，而網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中心內(nèi)部的雷帕霉素藥物卻不能釋放，形成該載體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)部的雷帕霉素藥物由外向內(nèi)逐漸釋放，從而達到緩釋的目的。因此，本發(fā)明的雷帕霉素釋放系統(tǒng)是長效的釋放系統(tǒng)，雷帕霉素的釋藥周期為二周到半年；具有用藥量極少，不受淚液沖冼、稀釋的影響，能長時間在眼內(nèi)緩慢釋放藥物特點。該藥物釋放系統(tǒng)與人體溫一樣的玻璃化溫度，有這種特性的藥物植入眼后，對眼組織沒有損傷，組織相容性好。對于如眼球等藥物難以達到的部位，可達到要求的藥物濃度和很好的用藥效果。經(jīng)免疫生物學研究證實本發(fā)明的雷帕霉素釋放系統(tǒng)在細胞周期上表現(xiàn)為抑制T淋巴細胞由G1至S期的增殖，對于已經(jīng)開始增殖的淋巴細胞仍然有抑制作用，所以其免疫抑制作用強于現(xiàn)有技術(shù)的其它眼內(nèi)釋藥體系，此外雷帕霉素還可以抑制新生血管的生成，這是目前常用的免疫抑制劑所不具備的。本發(fā)明的雷帕霉素釋放系統(tǒng)還可以通過降低血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascular endothelium growth factor，VEGF)從而抑制腫瘤新生血管增殖的作用，這對于防治高危角膜移植術(shù)后免疫排斥反應和治療眼科新生血管性疾病都有著重要的意義。經(jīng)動物試驗和臨床應用實驗證明本發(fā)明的雷帕霉素釋放系統(tǒng)可用于眼科病的預防和治療角膜移植后的排斥反應，同時也可用于治療慢性葡萄膜炎、眼部新生血管性疾病、stevene-Johnson綜合征、頑固的春季卡他性結(jié)膜炎等眼科自身免疫疾病。
具體實施例方式
，本發(fā)明的實施例不局限本發(fā)明的保護范圍。
實施例1取乳酸/乙醇酸共聚物(PLGA，分子量6～11萬)5份，用三氯甲烷20份溶解后加入雷帕霉素粉末20份，攪拌均勻后注入聚四氟乙烯模具，待三氯甲烷揮發(fā)、并且完全干燥后，將此含有雷帕霉素的乳酸/乙醇酸共聚物的藥膜從聚四氟乙烯模具上取下，在室溫真空下進一步脫溶劑72小時，得厚度為1.0～1.5毫米、具有納米級孔結(jié)構(gòu)的片狀的、含有雷帕霉素的乳酸/乙醇酸共聚物的藥膜，再用孔徑為1.0～1.5毫米的沖模沖成厚為1.0～1.5毫米、直徑為1.0～1.5毫米的雷帕霉素制劑。將此雷帕霉素制劑用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌、再放置1周后植入兔眼前房。
術(shù)后的裂隙燈顯微鏡下觀察前房房閃、細胞，植入藥物的大小、形態(tài)及與周圍虹膜、房角和晶體的變化。在植入術(shù)后1，3，6個月處死動物取出眼球行組織病理學檢查。裂隙燈顯微鏡和組織病理學檢查結(jié)果表明前房無炎癥反應；角膜、晶狀體透明度和虹膜正常；眼壓也正常，手術(shù)前后無變化。此外，從局部組織病理學檢查結(jié)果所表明的雷帕霉素釋放系統(tǒng)所在部位的虹膜、睫狀體及角膜肉皮細胞無明顯炎性細胞浸潤、無組織變性及壞死表現(xiàn)，以及雷帕霉素釋放系統(tǒng)所在部位的房角與正常房角結(jié)構(gòu)無明顯區(qū)別，證明雷帕霉素釋放系統(tǒng)的眼內(nèi)生物相容性良好。
此外，在植入雷帕霉素釋放系統(tǒng)的12周內(nèi)，房水中長期維持一定的雷帕霉素濃度不低于5ng/ml，一般維持在6～15ng/ml之間，可有效防止角膜移植排斥反應。同時在血液中檢測不到雷帕霉素的存在，說明此釋放系統(tǒng)可避免雷帕霉素對腎臟的毒性損害等并發(fā)癥。此雷帕霉素釋放制劑在植入的12～36周后完全消失，可以不用再取出。
實施例2取聚DL-乳酸(PDLLA，分子量1～8萬)3份、二氧六環(huán)10份和雷帕霉素藥物10份，溶解并且混合均勻后注入聚四氟乙烯模具，放入凍干機，在凍結(jié)狀態(tài)和真空下脫溶劑72小時，得厚度為1.0～1.5毫米、孔徑約為50微米的片狀藥膜，再用孔徑為1.0～1.5毫米的沖模沖成厚為1.5～2.0毫米、直徑為1.5～2.0毫米的雷帕霉素制劑。將此雷帕霉素制劑用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌、再放置1周后同實施1方法植入兔眼的前房。
術(shù)后裂隙燈顯微鏡觀察和局部組織病理學檢查結(jié)果表明雷帕霉素釋放系統(tǒng)有良好的眼內(nèi)生物相容性，植入后的14周內(nèi)雷帕霉素可在房水維持一定濃度，而在血液中檢測不到有雷帕霉素存在，12～18周后雷帕霉素制劑完全消失，可以不用再取出。
實施例3按實施例1的方法與步驟，但采用按中國發(fā)明專利ZL 99105984.0方法制備的(乙醇酸/乳酸/己內(nèi)酯三元共聚物(PGLC，分子量6～12萬)10份、二氯甲烷10份和雷帕霉素藥物10份制得呈納米孔結(jié)構(gòu)的塊狀物，該塊狀物的密度為0.3～0.8g/mm3，再用孔徑為1.0毫米的沖模沖成直徑為1.0毫米的藥棒。將此藥棒切割成要求厚薄的片狀制劑后再進一步在室溫真空烘箱內(nèi)保持48小時以完全除盡溶劑，而后進行24小時環(huán)氧乙烷熏蒸滅菌。放置1周后再與實施例1同樣方法植入兔眼的前房。
術(shù)后的裂隙燈顯微鏡觀察和局部組織病理學檢查結(jié)果表明雷帕霉素釋放系統(tǒng)有良好的眼內(nèi)生物相容性，沒有任何炎癥反應，植入后的2～20周內(nèi)雷帕霉素可在房水中維持一定濃度，而在血液中檢測不到有雷帕霉素存在，15～20周后雷帕霉素及藥物載體制劑完全消失，可以不用再取出。
實施例4、按實施例1的方法與步驟，但采用按中國發(fā)明專利ZL 99105984.0方法制備的(乙醇酸/乳酸/己內(nèi)酯三元共聚物(PGLC，分子量6～12萬)5份、二氯甲烷20份和雷帕霉素藥物20份制得呈納米孔結(jié)構(gòu)的塊狀物，該塊狀物的密度為0.2～1.8g/mm3，再用孔徑為1.0毫米的沖模沖成直徑為1.0毫米的藥棒。將此藥棒切割成要求厚薄的片狀制劑后再進一步在室溫真空烘箱內(nèi)保持48小時以完全除盡溶劑，而后進行24小時環(huán)氧乙烷熏蒸滅菌。放置1周后再與實施例1同樣方法植入兔眼的前房。
術(shù)后的裂隙燈顯微鏡觀察和局部組織病理學檢查結(jié)果表明雷帕霉素釋放系統(tǒng)有良好的眼內(nèi)生物相容性，沒有任何炎癥反應，植入后的2～30周內(nèi)雷帕霉素可在房水中維持一定濃度，而在血液中檢測不到有雷帕霉素存在，20～30周后雷帕霉素及藥物載體制劑完全消失，可以不用再取出。
實施例5、與實施例2相同方法與步驟，但采用按發(fā)明專利ZL 92113100.3方法制備的聚己內(nèi)酯/聚醚嵌段共聚物(PCE，分子量4～8萬)0.5份，孔結(jié)構(gòu)大小為10微米的雷帕霉素制劑2份，在用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌、再放置1周后植入兔眼的前房。
術(shù)后的裂隙燈顯微鏡觀察和局部組織病理學檢查結(jié)果雷帕霉素釋放系統(tǒng)有良好的眼內(nèi)生物相容性，植入后的一年內(nèi)雷帕霉素可以房水中維持一定濃度，而在血液中檢測不到有雷帕霉素存在，一年后雷帕霉素制劑完全消失，可以不用再取出。
實施例6、與實施例2相同方法與步驟，但采用按中國發(fā)明專利申請?zhí)?8102212X方法制備的聚己內(nèi)酯/聚乳酸三元共聚物(PCEI，分子量5～9萬)0.8份，得到孔結(jié)構(gòu)大小為10微米、密度為1.2～2.0g/mm3的雷帕霉素制劑2份，在用環(huán)氧乙烷蒸24小時滅菌消毒、再放置1周后植入兔眼的前房。
術(shù)后的裂隙燈顯微鏡觀察和局部組織病理學檢查結(jié)果表明雷帕霉素釋放系統(tǒng)有良好的眼內(nèi)生物相容性，植入后的30周內(nèi)雷帕霉素可在房水中維持一定濃度，而在血液中檢測不到有雷帕霉素存在，40周雷帕霉素制劑完消失，可以不用再取出。
實施例7、與實施例2相同方法步驟，但采用95％(重量)聚L乳酸(PLLA，分子量6萬)0.5份與5％(重量)甲殼質(zhì)0.5份，制成混合物作為載體，得到孔結(jié)構(gòu)大小為10微米、密度為1.5～2.0g/mm3的雷帕霉素制劑1份，再用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌，再放置1周后植入兔眼的前房。
術(shù)后的裂隙燈顯微鏡觀察和局部的組織病理學檢查結(jié)果表明雷帕霉素釋放系統(tǒng)有良好的眼內(nèi)生物相容性，植入后的50周內(nèi)雷帕霉素可在房水中維持一定濃度，而在血液中檢測不到有雷帕霉素存在，一年后雷帕霉素制劑完全消失，可以不用再取出。
實施例8、同實施例7的方法與步驟，但采用95％(重量)的聚DL-乳酸(PDLLA，分子量6萬)與5％(重量)的膠原制成混合物作為載體，得到孔結(jié)構(gòu)大小為10微米、密度為0.2～0.7g/mm3的雷帕霉素制劑，再用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌消毒，再放置1周后植入兔眼的前房。
術(shù)后的裂隙燈顯微鏡觀察和局部的組織病理學檢查結(jié)果表明雷帕霉素釋放系統(tǒng)有良好的眼內(nèi)生物相容性，植入后的20周內(nèi)雷帕霉素可以房水中維持一定濃度，而在血液中檢測不到有雷帕霉素存在，20周后雷帕霉素制劑完全消失，可以不用再取出。
實施例9、同實施例3的方法與步驟，將雷帕霉素藥片裁成厚為2毫米、寬為5毫米、長為30毫米、密度為0.2～0.6g/mm3的雷帕霉素制劑。將此雷帕霉素制劑用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌、再放置1周后植入保兔的前房內(nèi)。
術(shù)后的肉眼觀察和局部組織病理學檢查結(jié)果表明無炎癥反應、水腫、新生血管、萎縮或壞死的現(xiàn)象，且血壓正常，手術(shù)前后無變化。證明雷帕霉素釋放系統(tǒng)的體內(nèi)生物相容性良好。血液檢測結(jié)果表明，在血液中無雷帕霉素存在，可此可以避免雷帕霉素對腎臟的毒性損害及引起高血壓等并發(fā)癥。此雷帕霉素釋放制劑在植入的10周后完全消失，可以不用再取出。
實施例10、角膜縫線法制作新西蘭大白兔高危角膜移植動物模型進行角膜移植，術(shù)后裂隙燈顯微鏡觀察制片存活情況，原位雜交法對角膜植片組織的細胞因子進行檢測，高效液相色譜分析法對放水中雷帕霉素藥物濃度進行檢測。高危角膜移植新西蘭大白兔10只，術(shù)中前房內(nèi)植入按實施例3制備的含0.5mg雷帕霉素緩釋棒1粒，術(shù)后3個月未發(fā)生免疫排斥反應。角膜移植片保持透明，角膜皮晶狀體無炎癥反應。植片中IL-2R、MCP-1、TNF-α和VEGF不表達。觀察期內(nèi)，雷帕霉素房水濃度維持在7～20ng/ml。
實施例10對照例1高危角膜移植新西蘭大白兔10只，術(shù)后采用1％雷帕霉素滴眼液滴眼，每日4次。全部大鼠術(shù)后5周左右發(fā)生排斥反應。植片中IL-2R、MCP-1、TNF-α和VEGF少量表達。觀察期內(nèi)，房水中檢測不到雷帕霉素藥物濃度。
實施例10對照例2高危角膜移植新西蘭大白兔10只，術(shù)后不采取任何治療措施，結(jié)果全部兔術(shù)后2周左右發(fā)生排斥反應。植片中IL-2R、MCP-1、TNF-α和VEGF大量表達。觀察期內(nèi)，房水中檢測不到雷帕霉素藥物濃度。
實施例11、新西蘭大白兔30只，應用10mg分枝結(jié)核桿菌H37Ra(MTb H37Ra)抗原行足底皮下注射免疫致敏，術(shù)后1周玻璃體腔內(nèi)注入25μg MTb H37Ra抗原，完成初次免疫；為模擬復發(fā)性葡萄膜炎，眼內(nèi)初次免疫兩周后加強免疫。分別在初次免疫和加強免疫后不同時間點對各組前房閃輝、房水細胞、前玻璃體細胞和玻璃體混濁度以及前房滲出進行分級，觀察至加強免疫后10周；應用視網(wǎng)膜電圖檢查評價視網(wǎng)膜功能；組織病理學檢查炎癥對組織的破壞程度及有無肝腎損傷。應用免疫熒光偏振法檢測玻璃體腔液藥物濃度。
實驗分組 隨機分為四組A組10只兔，術(shù)后一周玻璃體腔內(nèi)植入按實施例3制成的雷帕霉素緩釋片2mg，B組10只兔，不作任何治療；C組10只兔，玻璃體腔內(nèi)植入空白載體2mg；D組10只兔，口服雷帕霉素1mg/kg/d。
實驗結(jié)果裂隙燈顯微鏡檢查顯示B、C、D組炎癥分級高于A組，差異有顯著性意義(P＜0.05)；ERG檢查顯示B、C、D三組b波波幅明顯降低，與A組比較差異有顯著性意義(P＜0.05)；組織病理學檢查顯示A組較其他三組炎癥反應輕，且藥物無肝腎毒性。對玻璃體腔液的檢測顯示A組術(shù)后3個月內(nèi)均有雷帕霉素藥物釋放，藥物濃度可以維持在5～15ng/ml之間。
實施例12、縫線法誘導新西蘭大白兔角膜新生血管化，術(shù)中縫線對應的結(jié)膜下植入片狀雷帕霉素1mg，術(shù)后觀察30天，結(jié)果僅有少量的新生血管張入角膜，角膜新生血管化面積明顯低于空白對照組(未經(jīng)任何治療的組)。免疫組化法檢查可見角膜基質(zhì)中少量的VEGF(血管內(nèi)皮細胞生長因子)。
實施例12對照例1縫線法誘導新西蘭大白兔角膜新生血管化，術(shù)中縫線對應的結(jié)膜下植入片狀空白藥物載體PGLC 1mg，結(jié)果僅有大量的新生血管張入角膜，角膜新生血管化面積與空白對照組(未經(jīng)任何治療的組)無明顯的區(qū)別。免疫組化法檢查可見角膜基質(zhì)中大量的VEGF(血管內(nèi)皮細胞生長因子)。
實施例12對照例2縫線法誘導新西蘭大白兔角膜新生血管化，不采用任何治療，結(jié)果僅有大量的新生血管張入角膜。免疫組化法檢查可見角膜基質(zhì)中大量的VEGF(血管內(nèi)皮細胞生長因子)。
實施例13、春季卡他性結(jié)膜炎和Steven-Johnson綜合癥是與免疫有關(guān)的疾病，目前的研究表明，這兩種疾病都是過敏原引起機體的淋巴細胞增殖，引起的I型超敏反應。因此體外培養(yǎng)人淋巴細胞，采用藥物干涉的方法對體外淋巴細胞的增殖進行研究，對這兩種疾病的治療有著重要的意義。
體外培養(yǎng)人淋巴細胞，在培養(yǎng)液中加入按實施例3制成的雷帕霉素緩釋系統(tǒng)1mg，觀察雷帕霉素對體外培養(yǎng)淋巴細胞增殖的影響和雷帕霉素體外釋放的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示雷帕霉素緩釋系統(tǒng)可以在體外持續(xù)釋放，濃度維持在3-20ng/ml，可以很好的抑制體外培養(yǎng)的淋巴細胞的增殖。
實施例13對照例1體外培養(yǎng)人淋巴細胞，在培養(yǎng)液中加入釋藥載體(不含雷帕霉素)1mg，結(jié)果顯示釋藥載體不能抑制體外培養(yǎng)的淋巴細胞的增殖。
本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員都會理解，在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)，對于上述實施例進行修改，添加和替換都是可能的，其都沒有超出本發(fā)明的保護范圍。
權(quán)利要求
1.一種雷帕霉素(RAPA)與可自行生物降解的藥物載體共同在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述雷帕霉素(RAPA)與可自行生物降解的藥物共同在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用，其特征在于所述的眼內(nèi)植入緩釋藥物，其是用于防治療角膜移植后的排斥反應和角膜新生血管增殖的藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述雷帕霉素(RAPA)與可自行生物降解的藥物共同在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用，其特征在于所述的眼內(nèi)植入緩釋藥物，其是用于治療慢性葡萄膜炎和眼內(nèi)新生血管性疾病的藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述雷帕霉素(RAPA)與可自行生物降解的藥物共同在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用，其特征在于所述的眼內(nèi)植入緩釋藥物，其是用于治療白塞氏病的藥物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述雷帕霉素(RAPA)與可自行生物降解的藥物共同在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用，其特征在于所述的眼內(nèi)植入緩釋藥物，其是用于治療春季卡他性結(jié)膜炎的藥物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述雷帕霉素(RAPA)與可自行生物降解的藥物共同在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用，其特征在于所述的眼內(nèi)植入緩釋藥物，其是用于治療stevene-Johnson綜合癥病的藥物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6的任一項所述雷帕霉素(RAPA)與可自行生物降解的藥物共同在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用，其特征在于所述的雷帕霉素(RAPA)與可自行生物降解的藥物載體，二者的重量比為1∶0.25-4。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述雷帕霉素(RAPA)與可自行生物降解的藥物共同在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用，其特征在于所述的可自行生物降解的藥物載體，其或為合成生物降解高分子材料，或天然生物降解高分子材料，或合成生物降解高分子材料和天然生物降解高分子材料的混合物；該載體的分子量范圍為2-9萬。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述雷帕霉素(RAPA)與可自行生物降解的藥物共同在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用，其特征在于所述的藥物載體，其形態(tài)或為膜狀，或為片狀，或為粒狀，或為塊狀，或為條狀，或為棒狀；該載體或為無紡織物，或為海綿體物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述雷帕霉素(RAPA)與可自行生物降解的藥物共同在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用，其特征在于所述的海綿體物，其網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔的孔徑為20-400000納米，其密度為0.2～2g/mm3。
全文摘要
本發(fā)明是雷帕霉素(rapamycin，RAPA)與可自行生物降解的藥物共同作為在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應用。該藥物在藥物釋放完可保持一定的強度、和形狀，而在體內(nèi)的生理條件下可以自然降解、從而被吸收并通過代謝排出體外，既不會成為異物對機體產(chǎn)生刺激，也不會使機體產(chǎn)生異物反應，因此不需要行二次手術(shù)將其取出。該眼內(nèi)植入緩釋藥物的釋藥周期為二周到半年，具有用藥量極少，不受淚液沖冼、稀釋的影響，能長時間在眼內(nèi)緩慢釋放藥物特點；可用于眼科病的預防和治療角膜移植后的排斥反應，同時也可用于治療慢性葡萄膜炎、眼部新生血管增殖性疾病、stevene－Johnson綜合征、頑固的春季卡他性結(jié)膜炎等眼科自身免疫疾病。
文檔編號A61P27/02GK1634046SQ20041008625
公開日2005年7月6日 申請日期2004年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月29日
發(fā)明者史偉云, 謝立信, 王身國, 高華, 張華 申請人:山東省眼科研究所