專利名稱：緩釋抗感染劑的制作方法
專利說明緩釋抗感染劑 本申請(qǐng)要求于2002年10月29日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/421,923提交的優(yōu)先權(quán)。本項(xiàng)緩釋技術(shù)適用于例如借助脂質(zhì)體和類脂復(fù)合物經(jīng)吸入方式給藥，通過緩釋作用、靶向能力及增強(qiáng)病灶部位對(duì)藥物的吸收對(duì)肺和全身提供一種長(zhǎng)期的處理效果。本發(fā)明包括一種脂質(zhì)體抗感染劑，以及應(yīng)用脂質(zhì)體或類脂復(fù)方抗感染劑處理囊性纖維變性(CF)患者肺部感染的方法。意想不到的是，用新配方進(jìn)行處理所需要的劑量遠(yuǎn)低于本行業(yè)中已知的有效劑量。就象Goodman和Gilman在“The Pharmaceutical Basis ofTherapeutics”[治療學(xué)的藥物基礎(chǔ)]第八版中所報(bào)道的那樣，“自從發(fā)現(xiàn)腎毒癥及耳毒癥的發(fā)生與氨基糖苷累集的濃度有關(guān)之后，減少腎功能損害患者體內(nèi)這類藥物的滯留劑量就變得極為關(guān)鍵”。由于不管病人是否已存在損傷，氨基糖苷類都能造成前庭或聽覺機(jī)能失調(diào)及腎毒性，因此普遍來講降低該類藥物的滯留劑量非常重要。本發(fā)明可顯著降低氨基糖苷類的滯留劑量。囊性纖維變性病人肺里有大量粘液和/或唾沫分泌物、多發(fā)伴隨性感染以及起源于細(xì)菌繁殖的生物被膜。所有這些分泌液和物質(zhì)均對(duì)于抗感染劑有效的靶向抗感染作用造成障礙。本發(fā)明可以克服這些障礙，并且可以降低劑量(在數(shù)量或頻率上)，因此可降低藥物在病人體內(nèi)的負(fù)荷。對(duì)于一般肺部感染來說，本發(fā)明所提供的給藥方案提供了一種降低藥物負(fù)荷的途徑。
發(fā)明概述
本發(fā)明所提供的之一是一種處理或改善囊性纖維變性患者肺部感染的方法，該方法包括給予患者肺部一種有效劑量的脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑，其中(i)給藥量為相應(yīng)單方藥量的50％或更少，或(ii)劑量為每天一次或更少，或(iii)以上兩者
本發(fā)明也提供一種處理或改善患病動(dòng)物肺部感染的方法，該方法包括給予患病動(dòng)物肺部包含有效劑量的脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑，其中(i)給藥量為相應(yīng)單方藥量的50％或更少，或(ii)劑量為每2天一次或更少。
附圖概述


圖1囊性纖維變性病人痰液/生物被膜的橫切面圖。圖2本發(fā)明中藥物靶向作用及存貯效果的圖示。圖3和4不同形式丁胺卡那霉素的細(xì)菌學(xué)圖示。圖5脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素和妥布霉素緩釋作用的圖示。圖6單方或者復(fù)方環(huán)丙沙星的數(shù)據(jù)。圖7使用不同給藥方案在肺中藥物殘留量的圖示。
發(fā)明的詳細(xì)描述[14]本申請(qǐng)揭示一種處理或改善肺部感染的方法，如囊性纖維變性病人的感染，該方法包給藥用類脂顆粒膠囊化的抗感染劑(如抗生素)?？垢腥緞┦堑挚垢腥镜乃巹缈辜?xì)菌、分支桿菌、真菌、病毒或者原生動(dòng)物的感染。本發(fā)明中所指的抗感染劑包括但并不僅限于以下幾類氨基糖苷類(如鏈霉素，慶大霉素，妥布霉素，丁胺卡那霉素，奈替米星，卡那霉素等)；四環(huán)素類(如金霉素，土霉素，甲烯土霉素，強(qiáng)力霉素，米諾四環(huán)素等)；磺胺類(如磺胺，磺胺嘧啶，磺胺甲噁唑(sulfamethaoxazole)，磺胺異噁唑，磺醋酰胺等)；對(duì)-氨基苯甲酸，二氨基嘧啶(如甲氧芐啶等，常與磺胺甲噁唑、吡嗪酰胺等聯(lián)合使用)；喹諾酮類(如萘啶酸，西諾沙星，環(huán)丙沙星和氟哌酸等)；青霉素類(如青霉素G，青霉素V，氨芐西林，阿莫西林，巴氨西林，羧芐西林，卡茚西林，替卡西林，阿洛西林，美洛西林，哌拉西林等)；耐青霉素酶青霉素(如甲氧苯青霉素，苯甲西林，氯唑西林，雙氯青霉素，萘夫西林等)；第一代先鋒霉素類(如頭孢羥氨芐，頭孢氨芐，頭孢菌素，先鋒霉素，頭孢匹林，頭孢唑林等)；第二代先鋒霉素類(如頭孢克洛，頭孢羥唑，頭孢尼西，頭孢西丁，頭孢替坦，頭孢呋辛，頭孢呋肟酯，頭孢美唑，頭孢羅齊，氯拉卡比，頭孢胺四唑等)；第三代先鋒霉素類(如頭孢平，頭孢哌酮，氨噻肟頭孢菌素，頭孢去甲噻肟，頭孢曲松，頭孢他定，頭孢克肟，頭孢泊肟，頭孢布坦等)；其他β-內(nèi)酰胺類(如亞胺培南，美羅培南，氨曲南，克拉維酸，舒巴克坦，三唑巴坦等)；β-內(nèi)酰胺酶抑制劑(如克拉維酸酸)，氯霉素，大環(huán)內(nèi)酯類(例如紅霉素，阿奇霉素，克拉霉素等)；林可霉素，氯林可霉素，大觀霉素，多粘菌素B，多聚喹碘(例如多粘菌素A，B，C，D，E1(粘菌素A)或E2，粘菌素B或C等)，粘菌素，萬古霉素，桿菌肽素，異煙肼，利福平，乙胺丁醇，乙硫異煙胺，氨基水楊酸，環(huán)絲氨酸，卷曲霉素，砜類(如氨苯砜，亞磺氨苯砜鈉等)，氯法齊明，沙利度胺，或其它任何可以進(jìn)行類脂膠囊化的抗菌制劑?？垢腥緞┛梢园拐婢鷦?，包括多烯抗真菌劑(如兩性霉素B，制霉菌素，那他霉素，及其它同類物)，氟胞嘧啶，咪唑類(如咪康唑，克霉唑，益康唑，酮康唑，及其它同類物)，三唑類(如伊曲康唑，氟康唑，及其它同類物)，灰黃霉素，特康唑，環(huán)吡酮布康唑，環(huán)吡酮胺，鹵普羅近，托萘酯，萘替芬，特比萘芬，或其它任何可以進(jìn)行類脂膠囊化或復(fù)方化的抗真菌制劑。在討論及實(shí)施例中主要是指丁胺卡那霉素，但本申請(qǐng)范圍并不僅限于這種抗感染劑。也可以使用聯(lián)合藥物。特別優(yōu)選的抗感染劑包括氨基糖苷類，喹諾酮類，多烯抗真菌劑以及多粘菌素類。在肺感染中(如在囊性纖維病人中)，可用本發(fā)明的方法處理的有假單胞菌屬(例如綠膿假單胞菌，少動(dòng)假單胞菌，惡臭假單胞菌，螢光假單胞菌，食酸假單胞菌)，葡萄球菌，耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌(MRSA)，鏈球菌(包括肺炎鏈球菌)，大腸桿菌，克雷伯氏菌屬，腸桿菌屬，沙雷氏菌，嗜血桿菌屬，鼠疫耶爾森(氏)菌，類鼻疽伯克霍爾德氏菌，洋蔥(cepacia)伯克霍爾德氏菌，唐菖蒲(gladioli)伯克霍爾德菌，multivorans伯克霍爾德氏菌，越南(Vietnamiensis)伯克霍爾德氏菌，結(jié)核分支桿菌，鳥分枝桿菌復(fù)合體(MAC)(鳥分枝桿菌和細(xì)胞內(nèi)分枝桿菌)，堪薩斯分枝桿菌素，蟾蜍分枝桿菌，海分枝桿菌，潰瘍分枝桿菌，偶發(fā)分枝桿菌復(fù)合物(偶發(fā)分枝桿菌和龜分枝桿菌)感染。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中包括一種服用脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素的處理方法。
20這里所討論的“脂質(zhì)體或類脂復(fù)方”抗感染劑，或“脂質(zhì)體/復(fù)方”抗感染劑，或“Lip-抗感染劑”，或“Lip-An”是抗感染劑組份的任何形式，其中至少抗感染劑重量的1％與類脂相關(guān)聯(lián)，其可以是與類脂復(fù)合物的一部份，或作為一種脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體中的抗生素可以在液相中或脂質(zhì)雙層的疏水相中、或位于脂質(zhì)體雙層界面中間的頭部(headgroup)區(qū)。優(yōu)選地，至少5％，或至少10％，或至少20％，或至少25％是具有這種關(guān)聯(lián)性的。這種關(guān)聯(lián)通過過濾器進(jìn)行分離而測(cè)量，其中類脂或類脂相關(guān)聯(lián)藥物存留而單方藥劑在濾出液中。利用脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑處理較以前已知的處理方法所需的劑量明顯降低。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，人的服藥劑量為每天低于100mg氨基葡糖苷。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，每2天或每3天服藥約30～50mg。與其它非脂質(zhì)體或類脂復(fù)合物抗感染劑所推薦使用的劑量進(jìn)行比較，預(yù)計(jì)脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑在其它動(dòng)物中所使用的劑量也應(yīng)該相應(yīng)地降低。這是一種意料之外的低劑量。對(duì)于下述沒有提供特定劑量的那些，本發(fā)明中優(yōu)選的劑量是最低單方藥量(當(dāng)然可以是其鹽類)的50％或更低、35％或更低、20％或更低、或10％或更低。如果是通過噴霧器將藥物傳送到肺部，則在14天的療程后，可以使肺中菌落形成單位(CFU)降低一個(gè)數(shù)量級(jí)。相對(duì)的單方藥量是可用于本發(fā)明服藥療程中的累積藥量。在本章中所定義的相對(duì)的最低單方藥量是“相對(duì)單方藥量”。盡管本發(fā)明的實(shí)施方案優(yōu)選的是用于人類，但其中非囊性纖維變性的處理實(shí)施方案也適用于任何動(dòng)物。對(duì)某種特定的動(dòng)物所使用的相應(yīng)劑量可根據(jù)不同的動(dòng)物進(jìn)行測(cè)量。優(yōu)選的給藥方案是每天一次或更少。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，給藥方案是隔天、每3天、每周一次或更少。例如，給藥方案可以是隔天一次或更少，采用的劑量為相應(yīng)單方劑量的50％或更少?；蛘?，例如給藥也可以每天一次，劑量為相應(yīng)單方劑量的35％或更少。為處理本發(fā)明中所指的感染，臨床醫(yī)生將使用一種有效數(shù)量的藥物，而這種有效數(shù)量應(yīng)達(dá)到處理、減輕、改善、消除或者預(yù)防需要處理的疾病或需要防御或處理的病癥的一種或多種癥狀，或者能對(duì)疾病或病癥的病理產(chǎn)生臨床可識(shí)別的改變?！案纳啤卑ń档托璺乐蔚膭?dòng)物感染的發(fā)病率或嚴(yán)重程度。在特定的實(shí)施方案中，有效劑量指可以在肺部感染癥狀出現(xiàn)后，能夠處理或改善癥狀的劑量。在其他特定的實(shí)施方案中，有效劑量指能夠處理或改善需防治的動(dòng)物感染的平均發(fā)病率或嚴(yán)重程度(如統(tǒng)計(jì)學(xué)研究的測(cè)量結(jié)果)?；谥|(zhì)體或者其他類脂的傳遞系統(tǒng)可以以噴霧、粉狀或氣溶膠的形式進(jìn)行吸入，或者以鞘內(nèi)方式給藥。優(yōu)選的給藥途徑為吸入法。與單方或母方形式相比，該劑型的總結(jié)果是給藥頻率的減少及處理指數(shù)的增加。脂質(zhì)體或者脂質(zhì)復(fù)合物具有很大的優(yōu)勢(shì)，這是由于它們與肺紋理或肺表面活性物質(zhì)具相容性，對(duì)藥物具保護(hù)作用。本發(fā)明包括處理肺革蘭氏陰性菌感染的方法。一種普遍處理的感染是囊性纖維變性病人的慢性肺部感染。已知利用丁胺卡那霉素處理肺部感染(如囊性纖維變性病人)的方法是通過吸入法每天給予大約200-600毫克丁胺卡那霉素或者四環(huán)素。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，處理方法是每天給予100毫克或更低的丁胺卡那霉素(如果服藥頻率低，可標(biāo)準(zhǔn)化為每天給予100毫克或更低的量)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，處理方案為每天給予60毫克或者更少的丁胺卡那霉素。在又一個(gè)實(shí)施方案中，采取的是每2天給藥不多于一次，每次大約30-50毫克。最優(yōu)選的實(shí)施方案包括每隔一天或者每3天給藥約30-50毫克。已知利用妥布霉素處理成人及6歲或6歲以上兒童肺部感染的方法，一般藥量為300毫克，每天2次。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，處理方法是每天服用100毫克或更少的妥布霉素。在另一個(gè)實(shí)施方案中，實(shí)施的是每天服用60毫克或更少的妥布霉素。在又一個(gè)實(shí)施方案中，采取的是2天給藥不多于一次，每次大約30-50毫克。
最優(yōu)選的實(shí)施方案包括每隔一天或者每3天給藥約30-50毫克。在本發(fā)明的配方中所使用的類脂可以是合成的、半合成的或者天然類脂，包括磷脂類、維生素E、類固醇、脂肪酸、糖蛋白類如白蛋白、陰性類脂和陽性類脂。磷脂類包括卵磷酸卵磷酯(EPC)、卵磷脂酰甘油(EPG)、卵磷脂酰肌醇(EPI)、卵磷脂酰絲氨酸(EPS)、磷脂酰乙醇胺(EPE)和卵磷脂酸(EPA)；大豆的類似物，大豆磷酸卵磷酯(SPC)；SPG，SPS，SPI，SPE，和SPA；氫化的蛋類和大豆類似物(例如，HEPC，HSPC)；由甘油中2、3位脂肪酸的酯鍵所組成的包含12-26個(gè)碳原子的其他磷脂，以及由甘油中第1位的不同首基(head group)所組成的磷脂，包括膽堿、甘油、肌醇、絲氨酸、氨基乙醇、以及相應(yīng)的磷脂酸。這些脂肪酸的碳鏈可以是飽和的或者不飽和的，而磷脂可以由不同碳鏈長(zhǎng)度及不同飽和度的脂肪酸所組成。尤其是配方的成份中可包含一種二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，它像二油醇磷酸卵磷酯(dioleoylphosphatidylcholine)(DOPC)一樣，是天然的肺表面活性劑的一種重要成份。其他成份還包括二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、以及二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、和二軟酯酰卵磷酯(DPPG)、二硬脂酰卵磷脂(DSPC)、二硬脂酰卵磷酯(DSPG)、dioleyl-腦磷酯(DOPE)、以及混合磷脂如棕櫚酰硬脂酰磷酸卵磷酯(palmitoylstearoylphosphatidylcholine)(PSPC)和棕櫚酰硬脂酰磷脂酰甘油(palmitoylstearoylphosphatidylglycerol)(PSPG)、(PSPG)、三?；视汀⒍；视?、seranide、鞘氨醇、鞘磷脂和單?；字鐔?油?；?腦磷酯(MOPE)。所使用的類脂可以包括銨鹽脂肪酸、磷脂類和甘油酯、類固醇、磷脂酰甘油(PGs)、磷脂酸(PAs)、磷脂酰肌醇(PCs)、磷脂酰肌醇(Pls)和磷脂酰絲氨酸(PSs)。脂肪酸包括飽和或不飽和的碳鏈長(zhǎng)度為12-26個(gè)碳原子的脂肪酸。某些特例包括肉豆蔻胺、十六胺、月桂胺和硬脂酰胺、二月桂酰乙基磷酸膽堿(DLEP)、二肉豆蔻酰乙基磷酸膽堿(DMEP)、二棕櫚酰乙基磷酸膽堿(DPEP)和二硬脂酰乙基磷酸膽堿(DSEP)，氯化N-(2，3-二(9(Z)十八烯基氧(octadecenyloxy))-丙(prop)-1-基-N，N，N-三甲基銨(DOTMA)和1，2-雙(油酰氧基)-3-(三甲銨)丙烷(DOTAP)。類固醇包括膽固醇和麥角固醇。PGs，PAs，PIs，PCs和PSs包括DMPG，DPPG，DSPG，DMPA，DPPA，DSPA，DMPI，DPPI，DSPI，DMPS，DPPS和DSPS，DSPC，DPPC，DMPC，DOPC，以及卵PC。由磷酸卵磷酯(如DPPC)所組成的脂質(zhì)體或類脂復(fù)合物可以協(xié)助肺內(nèi)細(xì)胞如肺泡巨噬細(xì)胞吸收藥物，并且能幫助肺內(nèi)抗感染劑的持續(xù)釋放(Gonzales-Rothi et al.(1991))。陰性類脂(例如PG，PA，PS和PI，)除能夠減少粒子聚集之外，還在吸入劑組份的緩釋及組份在肺內(nèi)的運(yùn)輸(胞吞轉(zhuǎn)運(yùn)作用(transcytosis))以使全身吸收中起作用。人們認(rèn)為甾醇類化合物能影響藥物組份的釋放及滲漏特性。脂質(zhì)體是內(nèi)含液相容積的完全閉合的類脂雙層膜。脂質(zhì)體可以是單層囊泡(含單個(gè)的雙層膜)或者多層囊泡(含多個(gè)雙層膜的典型的洋蔥樣結(jié)構(gòu)，相互之間由一液體層分隔)。雙層膜由兩個(gè)脂質(zhì)單層所組成，每個(gè)單層含一疏水性的″尾″區(qū)和一親水性的“頭”區(qū)。雙層膜的結(jié)構(gòu)是疏水性(非極性)“尾”區(qū)類脂單層朝向脂質(zhì)雙層膜的中央，而親水性的“頭”部朝向雙層膜的水相。類脂復(fù)合物是類脂和摻入的抗感染劑之間的聯(lián)系物。這種聯(lián)系可以是共價(jià)的、離子的、靜電的、非共價(jià)的或立體的。這類復(fù)合物是非脂質(zhì)體，并且不會(huì)捕獲多余的水溶性溶解物。這類復(fù)合物的例子包括兩性霉素B的類脂復(fù)合物(Janoff等，Proc.Nat Acad.Sci.，856122 6126，1988)以及心肌磷脂與阿霉素的復(fù)合物。類脂包合物是一種三維的、籠子一樣的結(jié)構(gòu)，包含一種或多種類脂，這種結(jié)構(gòu)可以捕獲一種具生物學(xué)活性的試劑。這樣的包合物屬于本發(fā)明的范疇之內(nèi)。脂質(zhì)體前體是當(dāng)與某種水溶性液體接觸時(shí)可形成脂質(zhì)體或者類脂復(fù)合物的組份。攪拌或者其它混合方式是必需的。這樣的脂質(zhì)體前體屬于本發(fā)明的范疇之內(nèi)。脂質(zhì)體可由多種方法制備(如見，Bally，Cullis等.BiotechnolAdv.5(1)194，1987).Bangham的操作(J.Mol.Biol.，J Mol Biol.13(1)238-52，1965)制備普通的多層囊泡(MLV).Lenk等(美國(guó)，專利號(hào)分別為4,522,803、5,030,453和5,169,637)，F(xiàn)ountain等(美國(guó)，專利號(hào)為4,588,578)以及Cullis等(美國(guó)，專利號(hào)為4,975,282)揭示了制備多層脂質(zhì)體的方法，在其每層液體隔層里有大致相等的層間溶質(zhì)分布。Paphadjopoulos等在，(美國(guó)，專利號(hào)為4,235,871)中揭示了通過反相蒸發(fā)法制備寡層脂質(zhì)體的方法。單層囊泡可以通過多種技術(shù)經(jīng)MLV產(chǎn)生，例如，Cullis等(美國(guó)，專利號(hào)為5,008,050)以及Loughrey等(美國(guó)，專利號(hào)為5,059,421)的擠壓法。可以利用聲裂法和勻漿化從大的脂質(zhì)體生產(chǎn)較小的單層脂質(zhì)體(見，例如，Paphadjopoulos等，Biochim.Biophys.Acta.，135624-638，1967；Deamer，美國(guó)，專利號(hào)為4,515,736；以及Chapman等，Liposome Technol.，1984，pp.1-18)。Bangham等(J.Mol.Biol.，1965，13238-252)最初制備脂質(zhì)體的方法包括將磷脂懸浮到一種有機(jī)溶劑中，隨后蒸發(fā)至干，在反應(yīng)容器中留下一層磷脂膜。然后加入適量的水相，使混合物進(jìn)行″膨脹″，所產(chǎn)生的包含多層脂囊(MLV)的脂質(zhì)體通過機(jī)械方法進(jìn)行分散。這種制備法為Papahadjopoulos等(Biochim.Biophys，Acta.，1967，135624-638)所描述的通過聲波處理生產(chǎn)小單層囊泡及大單層囊泡的方法提供了基礎(chǔ)。生產(chǎn)大的單層囊泡(LUV)的技術(shù)如反相蒸發(fā)法、注入過程和清潔劑稀釋，均可應(yīng)用于生產(chǎn)脂質(zhì)體。對(duì)這些方法的綜述以及生產(chǎn)脂質(zhì)體的其他方法見“脂質(zhì)體”，Marc Ostro，等，Marcel Dekker公司，NewYork，1983，第1章，其有關(guān)部分在這里被引為參考文獻(xiàn)。也可見Szoka，Jr.等.，(1980，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.”，9467)，其有關(guān)部分在這里也被作為參考文獻(xiàn)。其它用于制備囊泡的方法包括那些能形成反相蒸發(fā)囊泡(REV)的方法(Papahadjopoulos等.，美國(guó)，專利號(hào)4,235,871)。另一類可利用的脂質(zhì)體是那些具有大致相同溶質(zhì)層分布特點(diǎn)的脂質(zhì)體。這類脂質(zhì)體被Lenk等在美國(guó)專利4,522,803中命名為穩(wěn)定的多層囊泡(SPLV)，并包括Fountain等在美國(guó)專利4,588,578中所描述的單相囊泡以及以上所描述的冷凍和融解的多層囊泡(FATMLV)。多種甾醇及其水溶性衍生物例如膽固醇和半琥珀酸酯已經(jīng)被用于制備脂質(zhì)體；特別見于Janoff等，美國(guó)專利4,721,612，1988年1月26日出版，題目為“甾族脂質(zhì)體”。Mayhew等描述了一種減少抗細(xì)菌制劑及抗病毒制劑毒性的方法，該方法利用含α-生育酚及其特定衍生物的脂質(zhì)體將上述藥劑膠囊化。此外，多種生育酚及其水溶性衍生物也被用于制備脂質(zhì)體，見Janoff等美國(guó)專利號(hào)5,041,278。形成脂質(zhì)體或者類脂復(fù)合物的過程涉及一個(gè)″溶劑注入″的過程。該過程包括在少量的(優(yōu)選最少量的)過程合適的溶劑里溶解一種或多種類脂，以形成類脂懸浮液或溶液(優(yōu)選溶液)，然后將該溶液注入到含生物活性制劑的水溶性介質(zhì)中。典型的過程合適溶劑是能夠通過例如透析之類的過程清洗掉的溶劑。進(jìn)行冷/熱循環(huán)的組合物優(yōu)選通過溶劑注入而形成，優(yōu)選的為乙醇注入。優(yōu)選的溶劑為酒精?！耙掖甲⑷搿笔侨軇┳⑷脒^程的一種，即在少量的(優(yōu)選最少量的)的酒精里溶解一種或多種類脂，以形成類脂溶液，然后將該溶液注入到含生物活性制劑的水性介質(zhì)中?！吧佟绷咳軇┦侵冈谧⑷脒^程里可以形成脂質(zhì)體或者類脂復(fù)合物的合適的量。該過程可見于以下的文獻(xiàn)中Lee等，美國(guó)專利申請(qǐng)10/634,144，2003年8月4日提交；Pilkiewicz等，美國(guó)專利申請(qǐng)10/383,173，2003年3月5日提交；以及Boni等，美國(guó)專利申請(qǐng)10/383,004，2003年3月5日提交。以上申請(qǐng)?jiān)诖巳勘灰秊閰⒖嘉墨I(xiàn)。脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物的分篩可以由多種方法完成，本行業(yè)熟練技術(shù)人員非常熟悉并且普遍使用的方法如擠壓法、聲裂法和勻漿法。擠壓法是將脂質(zhì)體在一定的壓力下，用規(guī)定孔徑大小的濾器進(jìn)行一次或多次過濾。濾器通常是由聚碳酸酯制造的，但也可以由其它任何耐用材料制備，只要該材料不與脂質(zhì)體相互反應(yīng)，而且在擠壓時(shí)能耐足夠的壓力即可。優(yōu)選的濾器包括“直線濾過”型濾器，因?yàn)樵摓V器一般能承受本發(fā)明中優(yōu)選的擠壓過程所需的高壓。也可以使用“彎曲型”濾器。擠壓法也可以使用非對(duì)稱的濾器，如AnotecOTM濾器，該濾器涉及通過一種多孔徑的分支型氧化鋁濾器擠壓脂質(zhì)體。脂質(zhì)體或類脂復(fù)合物也可以用聲裂法進(jìn)行分篩，該方法是利用聲波的能量破裂或剪切脂質(zhì)體，可以使其自然形成更小的脂質(zhì)體。聲裂法是通過將含有脂質(zhì)體懸液的玻璃管浸入到一種震動(dòng)的聲波中，該聲波由一種“浴室型”的超聲破碎器產(chǎn)生。或者也可以使用一種探頭型的超聲破碎器，其聲波能量是通過鈦探頭與脂質(zhì)體懸液的直接接觸時(shí)的震動(dòng)而產(chǎn)生的。勻漿法及研磨儀如Gifford Wood勻漿器、Poltron或MicrofluidizerTM也可用來將大的脂質(zhì)體或類脂復(fù)合物破碎成小的脂質(zhì)體或類脂復(fù)合物。所形成的脂質(zhì)體/復(fù)合物可以使用在本行業(yè)中所熟知的方法分散成均質(zhì)物；例如正切流動(dòng)過濾。在這個(gè)過程中，大小不同的異質(zhì)脂質(zhì)體或類脂復(fù)合物流過正切流動(dòng)過濾器，從而形成具有上限和/或下限尺寸大小的脂質(zhì)體聚合物。當(dāng)使用兩種具有不同孔徑的過濾器時(shí)，直徑小于第一種過濾器孔徑的脂質(zhì)體可以通過該過濾器。該濾液可通過第二種過濾器進(jìn)行正切流動(dòng)過濾，第二次過濾的孔徑小于第一次。這種過濾器的產(chǎn)物是具有第一和第二種過濾器所分別規(guī)定的上下限孔徑大小范圍之內(nèi)的脂質(zhì)體/復(fù)合物的聚合體。Mayer等發(fā)現(xiàn)可以利用跨膜離子梯度來解決與親脂性的、可電離的生物活性制劑的有效捕獲相關(guān)的問題，如蒽環(huán)類抗生素或長(zhǎng)春花堿類等抗腫瘤制劑。該類跨膜梯度除了可誘導(dǎo)更有效的捕獲外，還能增加抗感染劑在脂質(zhì)體/復(fù)合物中的滯留。脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑具有持續(xù)的抗感染效果及較低的毒性，因此可以減少給藥頻率并提高處理指數(shù)。在臨床前的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，與同等劑量的吸入性妥布霉素(并非脂質(zhì)體或者類脂復(fù)方)相比，脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素在給藥后不久直至給藥24小時(shí)后，在肺內(nèi)的藥物水平是妥布霉素的二到幾百倍之多。另外，脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素可將這種藥效保持到超過24個(gè)小時(shí)。在用于模擬囊性纖維變性病人中可見的假單胞菌感染的動(dòng)物模型中，與單方氨基糖苷類比較，脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素可明顯減輕動(dòng)物的肺部感染。肺表面活性劑使得肺在呼吸時(shí)可以擴(kuò)張和收縮。這種作用可以通過用類脂和蛋白質(zhì)的組合物涂敷肺來完成。類脂呈現(xiàn)的是一種單層，其疏水性碳鏈朝向外側(cè)。類脂占肺表面活性劑的80％，類脂的主要成份為磷脂酰膽堿，其中50％為二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)(Veldhuizen等，1998)。表面活性蛋白(SP)的功能是維持表面活性劑的結(jié)構(gòu)，并協(xié)助呼吸時(shí)肺表面活性劑的擴(kuò)張和收縮。在這些蛋白中，SP-B和SP-C尤其具有溶解特性，可以溶解脂質(zhì)體(Hagwood等，1998；Johansson，1998)。人們相信這種溶解特性可以促進(jìn)隨后對(duì)脂質(zhì)體的連續(xù)分解，并通過釋放其內(nèi)容物而發(fā)揮一種存貯作用。這種脂質(zhì)體的分解自然發(fā)生，可通過自然裂解由細(xì)胞外排作用所排出的板層狀小體所證實(shí)(Ikegami&Jobe，1998)。脂質(zhì)體除了可由肺表面活性劑所同化，也可由巨噬細(xì)胞通過吞噬作用直接進(jìn)行消化(Couveur等，1991；Gonzales-Roth等，1991；Swenson等，1991)。肺泡巨噬細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的攝取是藥物傳遞到病灶部位的另一種方法。優(yōu)選的用來形成吸入性脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物的類脂，與發(fā)現(xiàn)于肺表面活性劑中的內(nèi)源性類脂類似。脂質(zhì)體由雙層膜組成，可以捕獲所需的藥劑。這些同心雙層可構(gòu)成多層脂囊，其中藥劑可捕獲于不同層的類脂之內(nèi)或?qū)优c層之間的液相空間中。本發(fā)明使用獨(dú)特的方法生產(chǎn)獨(dú)特的脂質(zhì)體和脂質(zhì)體/藥物復(fù)合物。這些方法和該類方法的產(chǎn)品都是本發(fā)明的一部分。用于本發(fā)明中優(yōu)選的類脂與藥劑的比率是小于3比1。更優(yōu)選的類脂與藥劑的比率是小于2.5比1。此外，產(chǎn)品在透析一段時(shí)間之后，其中游離的抗感染劑的比例會(huì)降低。這里所描述的全部方法均很容易適用于大規(guī)模及無菌生產(chǎn)。最終脂質(zhì)體的大小可以通過修改類脂的組成、濃度、輔料及加工的參數(shù)進(jìn)行調(diào)整。處理例如綠膿假單胞菌那樣的傳染病的一個(gè)障礙是藥物在上皮細(xì)胞的痰液/生物被膜屏障內(nèi)部的滲透(圖1)，綠膿假單胞菌是造成囊性纖維變性患者慢性疾病的首要原因。在圖1中，環(huán)形表示脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑，符號(hào)″+″表示單方抗感染劑，符號(hào)″-″表示粘蛋白、藻酸鹽和DNA，實(shí)心條符號(hào)表示綠膿假單胞菌。這種屏障由包埋于藻酸鹽中的集落型和浮游的綠膿假單胞菌或來源于細(xì)菌的胞外多糖，以及來源于破損的粒細(xì)胞中的DNA和肺上皮細(xì)胞中的粘蛋白所組成，以上物質(zhì)均含負(fù)電荷(Costerton，等，1999)。這些負(fù)電荷相互結(jié)合，并且阻止帶正電荷的藥物(例如氨基糖苷類)的滲透，使其生物學(xué)功能失效(Mendelman等，1985)。將抗感染劑捕獲于脂質(zhì)體或者類脂復(fù)合物中，可以屏蔽或者部分屏蔽抗感染劑與痰液/生物被膜的非特異性結(jié)合，從而使脂質(zhì)體或者類脂復(fù)合物(內(nèi)含氨基葡糖苷)可以進(jìn)行滲透(圖1)。研究發(fā)現(xiàn)丁胺卡那霉素對(duì)細(xì)菌酶具有高度抵抗力，因此能比其它氨基糖苷類包括妥布霉素和慶大霉素處理更大比例的臨床敏感分離株(Price等，1976)。尤其是綠膿假單胞菌分離株對(duì)丁胺卡那霉素的敏感性遠(yuǎn)大于其他氨基糖苷類(Damaso等，1976)。從圖2中可清楚地看出脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素的緩釋效應(yīng)及存貯效應(yīng)。在該研究中，大鼠通過氣管和靜脈途徑給予妥布霉素，也通過氣管途徑給予相同劑量(4毫克/每只大鼠)的脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素。數(shù)據(jù)顯示，只有脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素能達(dá)到緩釋及存貯效果。事實(shí)上，在給藥后24小時(shí)，只有脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素在動(dòng)物肺內(nèi)具有明顯的藥量，而兩種妥布霉素配方均顯示陰性水平，主要原因是全身的快速吸收。這種脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑能使氨基葡糖苷在肺中增加100倍以上，這種現(xiàn)象支持具緩釋效果的脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑的服藥頻率可以遠(yuǎn)低于現(xiàn)在通用的TOBITM配方(Chiron公司，AMERYVILLE，CA)的觀點(diǎn)。而且，由于痰液/生物被膜的表面與抗感染劑結(jié)合，其存在能阻礙單方氨基糖苷類的滲透(圖1)。因此，妥布霉素的劑量在超過1000μg/克肺組織時(shí)才能在囊性纖維變性病人中具有處理效果。而脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素能克服這一缺點(diǎn)。因此，與單方妥布霉素比較，脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素藥效的持續(xù)時(shí)間要長(zhǎng)得多。這種結(jié)合與滲透的簡(jiǎn)易性也可以作為一種方法，利用此方法脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素可顯著降低細(xì)菌的耐藥性，而這種耐藥性在體內(nèi)的抗菌藥物劑量低于最低抑制濃度時(shí)經(jīng)常出現(xiàn)。丁胺卡那霉素的藥物動(dòng)力學(xué)是在大鼠中以氣管內(nèi)(IT)給予單方妥布霉素或者脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素之后確定的。這些數(shù)據(jù)是與尾靜脈注射單方妥布霉素后藥物在肺部的分布進(jìn)行比較的。在所有的實(shí)驗(yàn)中，給藥劑量為4mg/只大鼠。正如在圖2所見的一樣，與注射相比，氣管內(nèi)給藥所傳送的氨基葡糖苷的數(shù)量要大得多。脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑技術(shù)與氣管或靜脈給予妥布霉素所產(chǎn)生的貯存效果相比，在給藥后24小時(shí)，脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素在肺中的藥量提高同樣在100倍以上。因此，與單方妥布霉素相比，脂質(zhì)體丁胺卡那霉素配方中藥物處理水平的持續(xù)時(shí)間要長(zhǎng)。特別是當(dāng)氨基糖苷類與囊性纖維變性病人痰液的結(jié)合導(dǎo)致抗感染劑生物活性的降低時(shí)，這種結(jié)合成為人們關(guān)心的問題(Hunt等，1995)。為確定脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素是否能長(zhǎng)時(shí)間保留生物學(xué)活性，通過氣管內(nèi)滴注法給予正常大鼠脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素。然后分別在2小時(shí)或24小時(shí)通過支氣管肺泡灌洗(BAL)移出藥物，以確定其生物學(xué)活性。樣品通過超濾及隨后的過濾(0.2微米)進(jìn)行濃縮，以去除所污染的肺部微生物。丁胺卡那霉素濃度的確定采用TDX儀，而其生物學(xué)活性利用米勒·欣頓(Mueller Hinton)肉湯稀釋分析(綠膿假單胞菌)進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見以下的表1。 如上表所示，在給藥24小時(shí)后，所獲得的過濾的脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素在米勒·欣頓肉湯分析中仍能殺死綠膿假單胞菌，最低抑菌濃度為4。在2小時(shí)所得到的MIC是2，該結(jié)果與過濾的脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素貯存液類似。因此，脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素在肺里24個(gè)小時(shí)后仍具有活性。24小時(shí)時(shí)，相同劑量的單方妥布霉素在支氣管肺泡灌洗液中已檢測(cè)不到。這表明脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑配方不僅在肺中持續(xù)存在，而且可以長(zhǎng)時(shí)間有效滲透痰液/生物被膜。這些數(shù)據(jù)與圖2和表II(在下面)的事實(shí)結(jié)合起來表明，脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素在長(zhǎng)時(shí)間釋放單方抗感染劑的同時(shí)，在肺里也能長(zhǎng)期維持高水平的抗感染劑，這種現(xiàn)象支持該系統(tǒng)可長(zhǎng)時(shí)間產(chǎn)生緩釋效果的理論。這種效果應(yīng)當(dāng)能顯著降低假單胞菌屬的生物負(fù)荷及由于抗感染劑水平降低產(chǎn)生的耐藥性。作為體外演示脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素的緩釋作用及其持續(xù)抗感染效果的實(shí)驗(yàn)，將該配方與患者的痰液共同培養(yǎng)，患者具有含PAO1株粘液樣假單胞菌的慢性阻塞性肺疾病(COPD)。脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素也與含PAO1株粘液樣假單胞菌的藻酸鹽共培養(yǎng)。在兩種情況下，均觀察到對(duì)假單胞菌長(zhǎng)期持續(xù)的、增強(qiáng)的殺滅作用，如表II中所示
經(jīng)典殺菌曲線不適用于脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑技術(shù)，這是因?yàn)橹|(zhì)體配方具有緩釋作用及促進(jìn)抗感染的效果。直至丁胺卡那霉素的釋放，脂質(zhì)體/復(fù)合物能保護(hù)該藥物免受痰液及藻酸鹽的破壞。丁胺卡那霉素釋放時(shí)，能觀察到對(duì)細(xì)菌完全的殺滅效果，這與緩釋及持續(xù)抗感染模型是一致的，不存在對(duì)抗感染劑的干擾或滅活作用。用一種慢性肺部感染模型來研究脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素的有效性(Cash等，1979)。該模型是將包埋于瓊脂糖小球基質(zhì)中的綠膿假單胞菌滴入到大鼠的氣管中。建立這種粘液樣假單胞菌動(dòng)物模型是為了模仿囊性纖維變性病人中所見的假單胞菌感染。與囊性纖維變性臨床特征相關(guān)的包括相似的肺病理學(xué)；免疫復(fù)合物紊亂的出現(xiàn)；以及由綠膿假單胞菌菌株所產(chǎn)生的粘液樣表型轉(zhuǎn)化(Cantin和Woods，1999)。用分離于囊性纖維變性病人中的大于107菌落形成單位(CFU)的粘液樣假單胞菌(PAO1株)感染大鼠肺，然后分別用以下配方進(jìn)行處理(a)單方氨基葡糖苷(b)作為非藥物對(duì)照的類脂載體本身(c)脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素。另外，首先在改進(jìn)的Kirby-Bauer培養(yǎng)皿上對(duì)以上不同配方體外殺滅綠膿假單胞菌的能力進(jìn)行了篩選。各種脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素配方的測(cè)試是基于其不同的類脂組成或不同的生產(chǎn)參數(shù)，導(dǎo)致在體外實(shí)驗(yàn)中不同的殺滅區(qū)域。本實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)是為了確定脂質(zhì)體/復(fù)方氨基葡糖苷相對(duì)于單方氨基葡糖苷藥效的增加。將空白對(duì)照類脂組份、兩種不同的脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素配方、單方丁胺卡那霉素和單方妥布霉素進(jìn)行了比較，單方藥劑中的氨基葡糖苷與脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑配方中的濃度相同。另外，也采用了10倍高劑量的單方丁胺卡那霉素和10倍高劑量的單方妥布霉素。藥物以氣管內(nèi)方式給藥，時(shí)間為7天以上。結(jié)果(圖3)表明，兩種配方的脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素(類脂組成不同)可以顯著減少CFU水平，其減少CFU的能力高于10倍劑量的單方丁胺卡那霉素和單方妥布霉素。在圖中，Lip-An-14是指DPPC/Chol/DOPC/DOPG(42∶45∶4∶9)以及10mg/ml丁胺卡那霉素，Lip-An-15是DDPC/Chol(1∶1)也為10mg/ml。在此，所有的類脂-類脂和類脂-藥物均以重量表示。下一個(gè)實(shí)驗(yàn)(圖4)是用于證實(shí)脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素的緩釋作用及其持續(xù)的抗感染能力。給藥劑量是每隔一天一次共14天，作為與前面實(shí)驗(yàn)中每天一次共7天的比較。結(jié)果表明，與單方丁胺卡那霉素或單方妥布霉素比較，兩種配方中的脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素(類脂組成不同)的效果均增加10-100倍(減少CFU水平的能力更高)。人每日劑量600毫克TOBI(或者大約375毫克/平方米)相當(dāng)于大鼠每日劑量9.4毫克。因此數(shù)據(jù)可以直接對(duì)應(yīng)于在病人中增加效果10到100倍。應(yīng)當(dāng)指出的是，在該模型中，可觀察到的最佳效果是兩個(gè)對(duì)數(shù)的減少。在唾沫分析中，綠膿假單胞菌100倍的降低可對(duì)應(yīng)于肺功能的改進(jìn)(Ramsey，等1993)。脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素配方的緩釋效果表明，與單方氨基葡糖苷比較，復(fù)方低劑量和/或低頻率給藥可以更好地抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。在一個(gè)慢性肺部感染模型中研究了脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素的效果，該模型是將包埋于瓊脂糖小球基質(zhì)中的綠膿假單胞菌通過氣管滴入到Sprague/Dawley大鼠中。3天后，開始每天給予單方丁胺卡那霉素或者脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素(圖3)或者每隔一天給藥(圖4)，劑量按氨基葡糖苷的量計(jì)算為1毫克/大鼠或者10毫克/大鼠，按脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素計(jì)算為1毫克/大鼠，空白脂質(zhì)體(類脂載體)為對(duì)照，每組5只大鼠。對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行14天后的大鼠肺(冷凍)均化后分析氨基葡糖苷的含量及活性。用TDX儀進(jìn)行臨床化學(xué)分析，通過涂布枯草芽孢桿菌的瓊脂平板測(cè)量抑菌區(qū)進(jìn)行生物活性分析。結(jié)果示于表III。
藥品重量為沒有任何鹽的形式進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。表III結(jié)果表明，在兩種脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑配方中均存在氨基葡糖苷，且具有活性，而單方氨基葡糖苷即使在10倍劑量時(shí)也檢測(cè)不到。這些結(jié)果更進(jìn)一步明確了脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑的緩釋特性，而且也證實(shí)剩余的抗感染劑仍然具有活性。在上述配方中，只有單方妥布霉素(0.1μg/ml)在腎中具有可檢測(cè)的氨基葡糖苷水平。脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素的緩釋及存儲(chǔ)效應(yīng)在圖5中進(jìn)一步得到了展示。利用與檢測(cè)藥效時(shí)相同的瓊脂糖小球，通過氣管滴注包被于瓊脂糖小球基質(zhì)內(nèi)的綠膿假單胞菌，造成大鼠慢性肺部感染，然后以相同劑量(2毫克/大鼠)通過氣管內(nèi)給予大鼠單方妥布霉素或者脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素(配方Lip-An-14)。以微克抗感染劑/每克肺組織進(jìn)行測(cè)量所得的數(shù)據(jù)顯示，脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑具有緩釋及存儲(chǔ)效果，而單方妥布霉素在24個(gè)小時(shí)時(shí)肺中已檢測(cè)不到藥物，其主要原因估計(jì)是全身的快速吸收。大鼠肺中脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑這種100倍以上抗感染效果的增加，支持緩釋的脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑較現(xiàn)在通過的TOBITM配方服藥頻率可以明顯減少的觀點(diǎn)。丁胺卡那霉素的藥物動(dòng)力學(xué)是用大鼠如下測(cè)定的，在大鼠中通過氣管內(nèi)(IT)給予單方妥布霉素或者脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素。劑量采用的是2毫克/大鼠。脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑技術(shù)的儲(chǔ)存效果是通過與氣管內(nèi)給予單方妥布霉素進(jìn)行比較來證實(shí)的，給藥后24小時(shí)，感染肺中脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素仍具有100倍以上的藥量。因此，與單方妥布霉素相比，脂質(zhì)體配方中藥物處理水平的持續(xù)時(shí)間要長(zhǎng)。圖7顯示抗感染劑在肺中顯著的滯留時(shí)間及藥效累積效應(yīng)，該結(jié)果證實(shí)可采用相對(duì)較低的服藥頻率。每次劑量是4小時(shí)，通過吸入法(在大鼠中，每組3只大鼠，如上)給予霧狀的脂質(zhì)體丁胺卡那霉素(1∶1的DPPC/Chol.)，15mg/ml的丁胺卡那霉素。給藥分別是在第1天、3天和5天；或第1天、2天、3天、4天和第5天。標(biāo)有數(shù)據(jù)符號(hào)的大鼠分別在服藥后被處死。使用的配方與實(shí)施例中一致。類似的抗感染劑可用于處理細(xì)胞內(nèi)感染如肺炭疽和土拉菌病。在肺炭疽中，炭疽芽孢通過氣溶膠到達(dá)肺泡。所吸入的芽胞由肺泡中的肺巨噬細(xì)胞所吞噬，并將其攜帶到局部氣管支氣管淋巴結(jié)或通過淋巴系統(tǒng)運(yùn)到縱隔淋巴結(jié)(Pile等，1998；Gleiser等，1968)。巨噬細(xì)胞既是感染途徑的重要部分，又是全身吸入性炭疽宿主自毀的主要參與成份。脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑技術(shù)除協(xié)助緩釋及靶向以外，還可以增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)藥物的吸收，也可以利用肺泡巨噬細(xì)胞及肺上皮細(xì)胞進(jìn)行藥物的靶向及傳遞。擁有這些特性被認(rèn)為有利于處理這類細(xì)胞內(nèi)感染，這類感染發(fā)生于肺部而且是由巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)的。更重要的是這些特性使得含有疾病因子的細(xì)胞可以吞噬脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑，從而使其抗感染效果更強(qiáng)。抗感染劑將以靶向作用的方式在細(xì)胞內(nèi)釋放，因此在其擴(kuò)散之前，即可以發(fā)揮其抗感染的作用。這種膠囊化的藥物可以是已經(jīng)經(jīng)過認(rèn)證的藥物，如環(huán)丙沙星，四環(huán)素，erthyromycin或者丁胺卡那霉素。已經(jīng)研發(fā)了脂質(zhì)體/復(fù)方環(huán)丙沙星。在一項(xiàng)研究中，給小鼠服用上述復(fù)合藥物，與氣管內(nèi)給予單方環(huán)丙沙星和口服環(huán)丙沙星進(jìn)行了比較，三種藥物的給藥劑量相同(圖6)。每只小鼠的劑量是15毫克/千克，每組3只小鼠。脂質(zhì)體/復(fù)方環(huán)丙沙星的配比是二棕櫚酰磷脂酰膽堿/膽固醇為9∶1，環(huán)丙沙星的量是3mg/ml，該配方的生產(chǎn)與實(shí)施例中的一致。藥物與類脂的比率是12.5∶1的重量比。與口服環(huán)丙沙星相比，脂質(zhì)體/復(fù)方環(huán)丙沙星比單方環(huán)丙沙星在肺中的藥量高出兩個(gè)數(shù)量級(jí)。而且，只有脂質(zhì)體/復(fù)方環(huán)丙沙星在24個(gè)小時(shí)之后在肺里仍可檢測(cè)到，而口服藥劑在不到兩小時(shí)即無法檢測(cè)。該數(shù)據(jù)證實(shí)，使用脂質(zhì)體/復(fù)方環(huán)丙沙星及其它抗感染劑如氨基糖苷類、四環(huán)素類及大環(huán)內(nèi)酯類可處理及預(yù)防生物恐怖分子所用的細(xì)胞內(nèi)疾病。制造脂質(zhì)體/復(fù)方藥劑的一種方法典型地包括室溫進(jìn)行酒精注入，該溫度低于配方所用的類脂的轉(zhuǎn)換溫度。脂質(zhì)體是以小的單層囊(SUV)形式與包含用于膠囊化的生物活性制劑的水或醇溶液混合。將乙醇注入到該混合物中。該混合物立即形成片層狀類脂或單層囊泡(MLV)。如果形成片層狀類脂，在去除乙醇后可誘導(dǎo)形成單層囊泡(MLV)，這可以通過離心、透析或透析過濾等進(jìn)行噴灑或清洗進(jìn)行。MLV的直徑范圍典型地在大約0.1和3.0μm之間?；蛘?，所采用的類脂也可溶解于乙醇中形成類脂乙醇溶液。將類脂-乙醇溶液注入到水或者含需膠囊化的生物活性制劑分子的醇溶液中。全部制備過程是在類脂的最低相位轉(zhuǎn)變溫度以下進(jìn)行的。該混合物立即形成片層狀類脂或單層囊泡(MLV)(10)。片層狀類脂在去除乙醇后可誘導(dǎo)形成單層囊泡(MLV)，乙醇的去除可以采用離心、透析或透析過濾等進(jìn)行噴灑或清洗。MLV的直徑范圍典型地在大約0.1和3.0μm之間。 多種含有丁胺卡那霉素的配方是根據(jù)實(shí)施例中的方法制備的，就象下面所總結(jié)的一樣其它制備脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑的資料可在專利PCT/US03/06847里找到，提交日期為2003年3月5日，其全部資料在此作為參考。
實(shí)施例[75]以下是制備150mL脂質(zhì)體/復(fù)方丁胺卡那霉素的詳細(xì)描述。
總起始體積＝1.5L乙醇含量＝23.5％(v/v)類脂組成DPPC/Chol(1∶1摩爾比)起始[類脂]＝7.6mg/ml起始[丁胺卡那霉素硫酸鹽]＝57.3mg/ml最終產(chǎn)品體積＝150mL。I)配制和注入7.47克DPPC和3.93克膽固醇在50℃水浴中直接溶于352.5mL乙醇內(nèi)。85.95g硫酸丁胺卡那霉素直接溶于1147.5mL PBS緩沖液中。然后是用10N氫氧化鈉或氫氧化鉀將該溶液的pH值滴定至大約為6.8。將352.5mL乙醇/類脂加入或注入到1147.5mL丁胺卡那霉素/緩沖液中，使起始體積成為1.5L。將乙醇/類脂用一臺(tái)蠕動(dòng)泵以30mL/min(也稱注入率)的頻率抽到丁胺卡那霉素/緩沖液中，然后將其置于反應(yīng)器中，并在室溫以150RPM轉(zhuǎn)速在攪拌器上進(jìn)行快速攪拌。將該產(chǎn)品在室溫?cái)嚢?0-30分鐘。II)透析過濾或″沖洗″的步驟將混合器連接于一臺(tái)蠕動(dòng)泵及透析過濾盒。透析過濾盒是分子量的cut-off為500千道爾頓的空膜纖維。將產(chǎn)品從反應(yīng)器中抽出，通過透析過濾盒然后再在室溫注入到混合器中。透析過濾盒所產(chǎn)生的反壓力約為7磅/平方英寸。通過反壓力使單方丁胺卡那霉素和乙醇通過空膜纖維，留下脂質(zhì)體丁胺卡那霉素(產(chǎn)品)。將該產(chǎn)品在室溫沖洗8次。將新配的PBS緩沖液(通過另一臺(tái)蠕動(dòng)泵)加入到反應(yīng)器中，以補(bǔ)償滲出液，使產(chǎn)品體積保持恒定。將產(chǎn)品進(jìn)行濃縮。出版物和參考文獻(xiàn)包括但不限于專利和專利申請(qǐng)，在此全部引入以供參考。任何要求優(yōu)先權(quán)的專利申請(qǐng)?jiān)诖艘才c上述出版物和參考文獻(xiàn)相同的方式引入以供參考。本發(fā)明的重點(diǎn)在于描述優(yōu)選的實(shí)施方案，本行業(yè)普通技術(shù)人員顯然明確的是，優(yōu)選的儀器及方法可進(jìn)行適當(dāng)改變，而且本發(fā)明也能以與這里所特別描述的不同的方式實(shí)施。因此，本發(fā)明也包括以下權(quán)利要求中所定義的提綱和規(guī)定范圍內(nèi)的全部改動(dòng)。
參考文獻(xiàn)1.Veldhuizen，R.，Nag，K.，Orgeig，S.和Possmayer，F(xiàn).，The Role ofLipids in Pulmonary Surfactant，Biochim.Biophys.Acta 140890-108(1998).
2.Hagwood，S.，Derrick，M.和Poulain，F(xiàn).，Structure and Properties ofSurfactant Protein B，Biochim.Biophys.Acta 1408150-160(1998).
3.Johansson，J.，Structure和Properties of Surfactant ProteinC，Biochim.Biophys.Acta 1408161-172(1998).
4.Ikegami，M.和Jobe，A.H.，Surfactant Protein Metabolism in vivo，Biochim.Biophys.Acta 1408218-225(1998).
5.Couveur，P.，F(xiàn)attel，E.和Andremont，A.，Liposomes and Nanoparticlesin the Treatment of Intracellular Bacterial Infections，Pharm.Res.81079-1085(1991).
6.Gonzales-Rothi，R.J.，Casace，J.，Straub，L.，和Schreier，H.，Liposomes和Pulmonary Alveolar MacrophagesFunctional andMorphologic Interactions，Exp.Lung Res.17685-705(1991).
7.Swenson，C.E.，Pilkiewicz，F(xiàn).G.，和Cynamon，M.H.，LiposomalAminoglycosides and TLC-65 Aids Patient Care 290-296(Dec.，1991).
8.Costerton，J.W.，Stewart，P.S.，和Greenberg，E.P.，Bacterial BiofilmsA Common Cause of Persistent Infections，Science 2841318-1322(1999).
9.Cash，H.A.，Woods，D.E.，McCullough，W.G.，Johanson，J.R.，和Bass，J.A.，A Rat Model of Chronic Respiratory Infection withPseudomonas aeruginosa，American Review of Respiratory Disease 119453-459(1979).
10.Cantin，A.M.和Woods，D.E.Aerosolized Prolastin SuppressesBacterial Proliferation in a Model of Chronic Pseudomonas aeruginosaLungInfection，Am.J.Respir.Crit.Care Med.1601130-1135(1999).
11.Ramsey，B.W.，Dorkin，H.L.，Eisenberg，J.D.，Gibson，R.L.，Harwood，I.R.，Kravitz，R.M.，Efficacy of Aerosolized Tobramycin inPatients with cystic Fibrosis.New England J.of Med.3281740-1746(1993).
12.Mendelman，P.M.，Smith，A.L.，Levy，J.，Weber，A.，Ramsey，B.，Davis，R.L.，Aminoglycoside Penetration，Inactivation，and Efficacy inCystic Pibrosis Sputum，American Review of Respiratory Disease 132761-765(1985).
13.Price，K.E.，DeFuria，M.D.，Pursiano，T.A.Amikacin，anaminoglycoside with marked activity against antibiotic-resistant clinicalisolates.J Infect Dis 134S249-261(1976).
14.Damaso，D.，Moreno-Lopez，M.，Martinez-Beltran，J.，Garcia-Iglesias，M.C.Susceptibility of current clinical isolates of Pseudomonasaeruginosa and enteric gram-negative bacilli to Arnikacin and otheraminoglycoside antibiotics.J Infect Dis 134S394-90(1976).
15.Pile，J.C.，Malone，J.D.，Eitzen，E.M.，F(xiàn)riedl和er，A.M.，Anthrax asa potential biological warfare agent.Arch.Intern.Med.158429-434(1998).
16.Gleiser，C.A.，Berdjis，C.C.，Hartman，H.A.，&Glouchenour，W.S.，Pathology of experimental respiratory anthrax in Macaca mulatta.Brit.J.Exp.Path.，44416-426(1968).
權(quán)利要求
1.一種處理或改善囊性纖維變性患者肺部感染的方法，該方法包括通過肺部給予患者一種有效劑量的脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑，其中(i)給藥量為相應(yīng)單方藥量的50％或更少，或(ii)劑量為每天一次或更少，或(iii)以上兩者。
2.權(quán)利要求1中處理或改善的方法，其中抗感染劑是一種氨基糖苷，四環(huán)素，磺胺，副-氨基苯甲酸，二氨基嘧啶，喹諾酮，β-內(nèi)酰胺，β-內(nèi)酰胺酶抑制劑，氯霉素，大環(huán)內(nèi)酯，林可霉素，克林霉素，大觀霉素，多粘菌素-B，多粘菌素E，萬古霉素，桿菌肽，異煙肼，利福平，乙胺丁醇，乙硫異煙胺，對(duì)氨水楊酸，環(huán)絲氨酸，卷曲霉素，砜，氯法齊明，沙立度胺，或者是它們的組合。
3.權(quán)利要求1中處理或改善的方法，其中的抗感染劑是一種多烯抗真菌劑，氟胞嘧啶，咪唑，三唑，灰黃霉素，特康唑，布康唑，環(huán)吡酮，環(huán)吡酮胺，鹵普羅近，托萘酯，萘替芬，特比萘芬，或者是它們的組合。
4.權(quán)利要求1中處理或改善的方法，其中的抗感染劑是一種氨基葡糖苷。
5.權(quán)利要求4中處理或改善的方法，其中用于每天的處理或改善的服藥劑量是100mg或更少。
6.權(quán)利要求5中處理或改善的方法，其中的劑量是每天一次或更少。
7.權(quán)利要求5中處理或改善的方法，其中的劑量是每2天一次或更少。
8.權(quán)利要求5中處理或改善的方法，其中的劑量是每3天一次或更少。
9.權(quán)利要求1中處理或改善的方法，其中的抗感染劑是丁胺卡那霉素。
10.權(quán)利要求9中處理或改善的方法，其中用于每天的處理或改善的服藥劑量是100mg或更少。
11.權(quán)利要求10中處理或改善的方法，其中的劑量是每天一次或更少。
12.權(quán)利要求10中處理或改善的方法，其中的劑量是每2天一次或更少。
13.權(quán)利要求10中處理或改善的方法，其中的劑量是每3天一次或更少。
14.權(quán)利要求1中處理或改善的方法，其中所需處理或改善的感染是一種假單胞菌(如綠膿假單胞菌、少動(dòng)假單胞菌、惡臭假單胞菌、螢光假單胞菌和食酸假單胞菌)，葡萄球菌，耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌(MRSA)，鏈球菌(包括肺炎鏈球菌)，大腸桿菌，克雷伯氏菌屬，腸桿菌屬，沙雷式菌屬，嗜血桿菌，鼠疫耶爾森(氏)菌，類鼻疽伯克霍爾德氏菌，洋蔥伯克霍爾德菌，唐菖蒲伯克霍爾德菌，multivorans伯克霍爾德氏菌，越南伯克霍爾德氏菌，結(jié)核分支桿菌，鳥分枝桿菌復(fù)合體(MAC)(鳥分枝桿菌和細(xì)胞內(nèi)分支桿菌)，堪薩斯分枝桿菌，蟾分枝桿菌，海分枝桿菌，潰瘍分枝桿菌，或者偶發(fā)分枝桿菌復(fù)合體(偶發(fā)分枝桿菌和龜分枝桿菌)感染。
15.權(quán)利要求1中處理或改善的方法，其中所需處理或改善的感染是一種假單胞菌感染。
16.權(quán)利要求1中處理或改善的方法，其中所需處理或改善的感染是一種綠膿假單胞菌感染。
17.權(quán)利要求1中處理或改善的方法，其中的服藥劑量是相應(yīng)單方藥量的50％或更少。
18.權(quán)利要求17中處理或改善的方法，其中的劑量是每天一次或更少。
19.權(quán)利要求17中處理或改善的方法，其中的劑量是每2天一次或更少。
20.權(quán)利要求17中處理或改善的方法，其中的劑量是每3天一次或更少。
21.權(quán)利要求1中處理或改善的方法，其中的服藥量是相應(yīng)單方藥量的35％或更少。
22.權(quán)利要求1中處理或改善的方法，其中的服藥量是相應(yīng)單方藥量的20％或更少。
23.權(quán)利要求1中處理或改善的方法，其中的服藥量是相應(yīng)單方藥量的10％或更少。
24.權(quán)利要求1中處理或改善的方法，其中的有效量是指在肺感染癥狀已經(jīng)出現(xiàn)后可有效處理或改善的量。
25.一種處理或改善動(dòng)物肺部感染的方法，該方法包括通過肺部給予患病動(dòng)物一種有效劑量的脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑，其中(i)給藥劑量為對(duì)應(yīng)的單方藥量的50％或更少，或(ii)劑量為每2天一次或更少。
全文摘要
本發(fā)明所提供之一是一種處理或改善囊性纖維變性患者肺部感染的方法，該方法給予患者肺部一種有效劑量的脂質(zhì)體/復(fù)方抗感染劑，其中(i)給藥量為相應(yīng)單方藥量的50％或更少，或(ii)劑量為每天一次或更少，或(iii)以上兩者。
文檔編號(hào)A61K31/496GK1747738SQ200380106534
公開日2006年3月15日 申請(qǐng)日期2003年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月29日
發(fā)明者L·T·博尼, B·S·米勒 申請(qǐng)人:川塞夫有限公司