專利名稱：西洋參莖葉總皂苷在制備治療心肌炎的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥有效成份的醫(yī)藥用途領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
心肌炎是指心肌局限性或彌漫性的急性或慢性炎癥病變，可分為感染性和非感染性兩大類。感染性心肌炎可由病毒、細(xì)菌、螺旋體、立克次體、霉菌、原蟲、蠕蟲所引起，非感染性心肌炎則包括過敏或變態(tài)反應(yīng)性心肌炎，如風(fēng)濕病以及理化因素或藥物所致的心肌炎等。心肌炎的癥狀輕重不一，病情嚴(yán)重程度不等。輕者可無自覺癥狀；嚴(yán)重者可表現(xiàn)為猝死、嚴(yán)重心律失常、心源性休克或心力衰竭，導(dǎo)致急性期死亡；也可表現(xiàn)為各種心律失常、心包炎或急性心肌梗塞等。病毒性心肌炎是臨床上最常見、發(fā)病人數(shù)最多的一類心肌炎，具有流行性，現(xiàn)在較10年前發(fā)病率上升了10倍以上，成為我國最常見的心肌病，多發(fā)生于人群中病毒感染流行之時(shí)，在病毒感染流行期約有5％的病人引起病毒性心肌炎。近年來，對病毒性心肌炎的認(rèn)識不斷加深?？梢鹦募⊙椎牟《竞芏?，如柯薩奇病毒、腺病毒、流感病毒等等，其中尤以柯薩奇B組病毒引起的心肌炎最多見，因?yàn)樾募Υ瞬《颈憩F(xiàn)特別敏感，心肌膜對該病毒有特殊的親和力。病人感染柯薩奇病毒后，約有5％的累及心臟。心臟各處的心肌細(xì)胞皆可發(fā)生灶性壞死；壞死灶中伴有炎性細(xì)胞浸潤，主要是單核細(xì)胞，有時(shí)也有中性粒細(xì)胞，有時(shí)炎細(xì)胞反應(yīng)不明顯。壞死灶最終為纖維化取代，且兒童病毒性心肌炎臨床表現(xiàn)較成人嚴(yán)重。病毒性心肌炎至今無特效治療，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)一般都是采用對癥及支持療法。主要為減輕心臟負(fù)擔(dān)、注意休息和營養(yǎng)；同時(shí)針對出現(xiàn)的心力衰竭、心律失常等癥狀進(jìn)行對癥治療，并營養(yǎng)心肌、改善心肌代謝，有時(shí)應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素。病毒性心肌炎急性期過后，常常需要很長時(shí)間的恢復(fù)期的治療，少則半年，有的甚至1-2年，或更長一段時(shí)間。近年來研究發(fā)現(xiàn)，利用中西醫(yī)結(jié)合方法治療病毒性心肌炎受到令人滿意的效果。因此，中藥對于病毒性心肌炎在癥狀控制、心功能的改善，心肌的恢復(fù)及整個(gè)機(jī)體功能的調(diào)節(jié)方面得到了廣大患者的認(rèn)可。
西洋參(Panax quinquefolium Linn.)系五加科人參屬植物。西洋參是珍貴藥材，本發(fā)明所述的西洋參莖葉總皂苷是通過下面方法獲得的以西洋參莖、葉為原料，通過水煎液過D型大孔樹脂柱，再以30～95％的乙醇洗脫液獲得，其中含有R0、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2、Rg3、Rh1、Rh2、F2、RA0、F11等多種有效成分。

發(fā)明內(nèi)容
本項(xiàng)發(fā)明的目的就是應(yīng)用西洋參莖葉總皂苷制備治療心肌炎的藥物，制成的藥物不僅能改善心肌代謝、營養(yǎng)心肌、保護(hù)心臟細(xì)胞提高心肌的抗病能力，而且能直接殺傷病毒，減輕病毒對心肌的損傷，起到抗病毒及整體調(diào)節(jié)相結(jié)合的作用效果，減輕西藥長期應(yīng)用對人體產(chǎn)生的副作用，使其成為理想的用于治療心肌炎的藥物。也可制成含有西洋參莖葉總皂苷的藥物組合物，這種藥物組合物可以是一種或多種天然或化學(xué)合成的活性成分，也可以是一種或多種中藥材或其有效組分與西洋參莖葉總皂苷組成的藥物組合物。
當(dāng)本發(fā)明用于制備治療心肌炎的藥物時(shí)，其口服或非口服給藥均是安全的。在口服情況下，其可以是任何常規(guī)形式給藥，如散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、滴丸、軟膠囊、漂浮劑、口服液、懸浮液、糖漿、口腔含片、舌下含片、噴霧劑等；當(dāng)該藥物非口服給藥時(shí)，可采用任何常規(guī)形式，如栓劑、注射劑如靜脈注射、肌肉注射、軟膏劑、吸入劑等。
本發(fā)明制備治療心肌炎的藥物是由有效部位或多種有效成分單體與固體或液體的賦形劑一起構(gòu)成的，這里使用的固體或液體的賦形劑在本領(lǐng)域是眾所周知的，下面舉幾個(gè)具體例子，固體制劑的賦形劑有乳糖、淀粉、漿糊精、碳酸鈣、合成或天然硫酸鋁、氧化鎂、硬脂酸鎂，碳酸氫鈉、干燥酵母等；液體制劑的賦形劑有水、甘油、丙二醇、單糖漿、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；軟膏劑的賦形劑可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂臘、木臘、液體石臘、樹脂、高級臘等組合成的疏水劑或親水劑。
有效物質(zhì)的劑量可以根據(jù)服用方式，病人的年齡和體重及病情嚴(yán)重程度和其它類似的因素而改變，口服量為20-1000mg/次·人，每日三次服用注射劑用量為10～1000mg/人，每日一次。
其治療效果是通過西洋參莖葉總皂苷對柯薩奇病毒的抑制作用，減輕心律失常、增加抗心肌病變能力、改善血液循環(huán)、保護(hù)心肌細(xì)胞免受損傷等作用來實(shí)現(xiàn)的。劑量為7.5-140mg/kg，連續(xù)給藥5-10天。
本發(fā)明可通過下面的實(shí)驗(yàn)例進(jìn)一步說明。
實(shí)驗(yàn)例1對病毒致細(xì)胞病變保護(hù)作用
(1)實(shí)驗(yàn)材料藥物西洋參莖葉總皂苷，陽性對照藥為黃芪。
細(xì)胞株宮頸癌細(xì)胞Hela病毒株柯薩奇病毒B3株(CVB3)柯薩奇病毒B4株(CVB4)、柯薩奇病毒A16(CVA16)、腸道病毒E71株。
(2)試驗(yàn)方法與結(jié)果在細(xì)胞上分別加入10-1-10-6不同濃度的4種病毒液，吸附1h后洗去病毒液，加入無毒界限藥液，每一病毒稀釋度各加3復(fù)孔，同時(shí)設(shè)病毒對照、細(xì)胞對照、陽性藥物對照組。置37℃CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天在倒置顯微鏡下觀察病變，連續(xù)4d，記錄各孔病變情況。結(jié)果見表1。
表1 對病毒致細(xì)胞病變作用病毒株 黃芪 西洋參莖葉總皂苷細(xì)胞對照病毒對照6.25g/L1.562g/LCVA16 ±± - ++++腸道病毒E71+- - ++++CVB3± + - ++++CVB4+± - ++++注-示無細(xì)胞病變；±示有延緩細(xì)胞病變作用；+示1/4以下的細(xì)胞病變；++示1/4-1/2的細(xì)胞有病變；+++示1/2-3/4的細(xì)胞有病變；++++示3/4以上的細(xì)胞有病變。
表中結(jié)果表明，西洋參莖葉總皂苷能明顯的抑制柯薩奇病毒B4及柯薩奇病毒A16，對柯薩奇病毒B3的作用略弱，對腸道病毒E71無抑制作用。
實(shí)驗(yàn)例2對小鼠病毒性心肌炎的影響(1)試驗(yàn)材料動(dòng)物Swiss小鼠，雌雄各半，3-4周齡，16-18g，由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
藥物西洋參莖葉總皂苷，陽性對照藥為黃芪。
(2)試驗(yàn)方法與結(jié)果將小鼠經(jīng)腹腔接種含104TCID50CVB3液0.2ml，1h后，灌胃給藥，連續(xù)給藥兩周。模型對照組小鼠接種相同劑量的病毒，每日給相同劑量的生理鹽水灌胃，連續(xù)兩周。末次給藥后，摘眼球取血，分離血清測定心肌三酶谷草轉(zhuǎn)氨酶AST、磷酸肌酸激酶CK、乳酸脫氫酶LDH。結(jié)果見表2。
表2 對小鼠病毒性心肌炎心肌三酶的影響(X±s)組別 劑量 動(dòng)AST(U/L) CK(U/L) LDH(U/L)物病毒對照 10 499.13±126.44 3215.0±1610.99 2367.75±179.84正常對照 10 203.3±56.34*892.14±526.04*1707±164.52西洋參莖葉總皂苷 75mg/kg 10 289.38±47.42*784.78±306.92**1855.25±108.92*38mg/kg 10 205.89±41.1*245.89±142.10**1687.63±124.95**19mg/kg 10 321.5±86.42*791.63±447.37**1963.50±116.80*黃芪 13g/kg 10 271.17±138.36 632.85±564.11**1697.17±171.62注與病毒對照組比*p＜0.05，**p＜0.01表2中結(jié)果表明，西洋參莖葉總皂苷能明顯的降低心肌炎模型動(dòng)物血中心肌三酶，具有治療病毒性心肌炎的作用。
實(shí)驗(yàn)例3對氯化鋇致大鼠心律失常的影響(1)試驗(yàn)材料藥物西洋參莖葉總皂苷；試驗(yàn)用陽性藥舒心素膠囊，批號941102。由吉林省集安制藥廠提供。氯化鋇，由開原化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。
動(dòng)物wistar大鼠，體重200-250g，購自吉林省中醫(yī)中藥研究院動(dòng)物室。
(2)試驗(yàn)方法與結(jié)果取45只大鼠，隨機(jī)分為五組模型組，舒心素膠囊140mg/kg劑量給藥組，西洋參莖葉總皂苷140、70、35mg/kg劑量組。每日灌胃給藥兩次，連續(xù)給藥五天，末次給藥后1小時(shí)，于大鼠腹腔注射水合氯醛300mg/kg麻醉，測定正常II導(dǎo)聯(lián)心電圖。然后舌下靜脈注射氯化鋇4mg/kg，觀察心電圖變化。記錄20分鐘內(nèi)心電圖恢復(fù)正常的動(dòng)物數(shù)及心律失常持續(xù)時(shí)間。結(jié)果見表3。
表3 對氯化鋇致大鼠心律失常的影響組別 動(dòng)物 20分鐘內(nèi)心電圖恢復(fù)心律失常持續(xù)時(shí)數(shù)(只) 正常百分率(％)(X2) 間(min)(X±s)模型對照組8 12.518.7±3.54舒心素膠囊140mg/kg6 50.017.5±2.74西洋參莖葉總皂苷 140mg/kg9 66.7*13.1±6.49*70mg/kg 9 44.416.4±6.1335mg/kg 9 22.216.7±5.59注與模型對照組比*p＜0.05結(jié)果表明，大鼠靜脈注射氯化鋇后立即出現(xiàn)心動(dòng)過速，室性早搏等心律失常心電圖，服用西洋參莖葉總皂苷的動(dòng)物可使心律失常癥狀得到緩解，20分鐘內(nèi)恢復(fù)正常的動(dòng)物數(shù)明顯增加，并縮短了心律失常的持續(xù)時(shí)間。
實(shí)驗(yàn)例4對異丙腎上腺素致大鼠心肌缺血的影響(1)試驗(yàn)材料動(dòng)物wistar大鼠，體重200-250g，購自吉林中醫(yī)中藥研究院動(dòng)物室。
藥物西洋參莖葉總皂苷；生脈注射液，由華西醫(yī)科大學(xué)制藥廠生產(chǎn)，批號970403。鹽酸異丙腎上腺素Iso注射液由上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，批號951002。
(2)試驗(yàn)方法與結(jié)果取58只大鼠，隨機(jī)分為六組空白對照組，缺血模型組，生脈注射液4.5ml/kg劑量給藥組，西洋參莖葉總皂苷20、10、5mg/kg三個(gè)劑量組。每日一次，連續(xù)靜脈注射給藥三天。末次給藥后30分鐘，除空白對照組外，其余動(dòng)物均皮下注射Iso 8mg/kg，24小時(shí)后再給藥一次。末次給藥前30分鐘再皮下注射一次Iso 2mg/kg，末次給藥后15分鐘將動(dòng)物以水合氯醛300mg/kg麻醉。腹靜脈采血，分離血清，測定CK、AST、LDH活性；然后將動(dòng)物斷頭處死，迅速取出心臟，取心尖部分，于10％福爾馬林固定，作病理檢查；另取心室肌組織，于0-4℃勻漿，測定其中SOD活性和MDA含量。結(jié)果見表4、5、6。
表4 對異丙腎上腺素致心肌缺血大鼠心肌三酶的影響(X±s)組別 動(dòng)物數(shù) AST CK LDH(只)(U/L) (U/L)(U/L)空白對照組 8 97.5±12.97 245.3±124.54540.9±313.73模型組 10 172.1±58.89**696.4±425.85*695.7±302.15生脈注射液 10 118.7±33.29#291.9±98.39##663.3±201.62西洋參莖葉總皂苷 20mg/kg 10 115.8±27.93#226.4±171.79##331.7±180.73##10mg/kg 10 114.7±16.42##201.7±73.71##417.4±173.71#5mg/kg10 170.6±40.34600.7±510.99544.1±211.46注與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與模型組比較#P＜0.05，##P＜0.01，##P＜0.001以下表5、表6同表4
由結(jié)果可見，動(dòng)物出現(xiàn)心肌缺血后血清中心肌三酶明顯升高，特別是CK和AST明顯高于空白對照組。注射西洋參莖葉總皂苷和生脈注射液可明顯抑制CK和AST的升高，西洋參皂苷亦能降低LDH的活性，表現(xiàn)出明顯的抗心肌缺血作用。
表5 對異丙腎上腺素致心肌缺血大鼠心肌中SOD活性和MDA含量的影響(X±s)組別 動(dòng)物數(shù)(只) SOD(U/g組織)MDA(nmol/g組織)空白對照組 8 100.0±24.719.4±0.71模型組 10 59.3±27.27**12.3±3.69*生脈注射液 10 80.8±24.82 6.8±0.87###西洋參莖葉總皂苷 20mg/kg 10 90.0±13.66##6.4±0.74###10mg/kg 10 90.2±23.75#7.1±1.00###5mg/kg10 81.4±26.49 7.4±0.82###表6 西洋參莖葉總皂苷對異丙腎上腺素致心肌缺血大鼠心肌病理改變的影響組別 動(dòng)物數(shù) 0級1級2級3級(只)空白對照組 8 8 0 0 0模型組 100 0 3 7生脈注射液 100 0 5 5西洋參莖葉總皂苷 20mg/kg100 4 6 010mg/kg100 4 6 05mg/kg 100 2 5 3由結(jié)果可見，西洋參莖葉總皂苷可明顯增強(qiáng)心肌組織中SOD的活性，降低MDA的含量；減輕心肌組織的病變程度，抑制心肌壞死的發(fā)生。
實(shí)驗(yàn)例5對血液流變性的影響(1)試驗(yàn)材料動(dòng)物wistar大鼠，體重200-250g，購自吉林省中醫(yī)中藥研究院動(dòng)物室。
藥物西洋參莖葉總皂苷；血塞通注射液，由昆明制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號980651-12。鹽酸腎上腺素Adr注射液由廣州明興制藥廠出品，批號961212-1。
(2)試驗(yàn)方法與結(jié)果取54只大鼠，隨機(jī)分為六組空白對照組，血瘀模型組，血塞通注射液40mg/kg劑量給藥組，西洋參莖葉總皂苷30、15、7.5mg/kg三個(gè)劑量組。每日腹腔注射給藥一次，連續(xù)四天。第一天給藥后0.5h空白對照組外，其余動(dòng)物均皮下注射0.1％的Adr 0.1ml/只，0.5h后將動(dòng)物置于1.5℃水中冰浴5min，24小時(shí)后重復(fù)一次，再隔24小時(shí)，即第三天給藥后0.5h再注射一次Adr，但不進(jìn)行冰浴。末次給藥后0.5h于動(dòng)物腹腔注射戊巴比妥鈉35mg/kg，將動(dòng)物麻醉，于腹靜脈采血，置血液血漿粘度計(jì)上測定全血比粘度(高切值、低切值)、血漿粘度、血沉及紅細(xì)胞壓積。結(jié)果見表。
表7 對血瘀大鼠血液流變性的影響(X±s)組別動(dòng) 全血比粘度(S) 血漿比粘度 血沉紅細(xì)胞壓積物(S) (mm/h) (％)數(shù) 高切 低切只空白對照組 95.15±0.5466.49±1.1401.62±0.066 0.94±0.726 36.11±1.764血瘀模型組 96.47±1.099**9.03±1.733**1.67±0.085 1.33±0.500 40.56±2.920***血塞通注射液 40mg/kg 95.31±1.3636.83±1.441#1.84±0.123 1.56±0.882 37.89±2.849西洋參莖葉總皂苷 30mg/kg 95.17±1.009#6.77±1.563#1.69±0.155 1.33±0.500 38.00±2.62615mg/kg 95.57±1.2167.41±2.2331.64±0.062 1.11±0.601 38.60±3.0467.5mg/kg 95.69±1.0087.67±2.0821.69±0.064 1.22±0.667 37.60±2.963注與空白對照組比**p＜0.01；與模型組比*p＜0.05
表7結(jié)果可見，動(dòng)物出現(xiàn)血瘀癥狀后，表現(xiàn)為血液粘度增高，血流變指標(biāo)發(fā)生異常改變。而動(dòng)物注射西洋參莖葉總皂苷后，全血比粘度降低，流變異常指標(biāo)得到改善。
實(shí)驗(yàn)例6毒性(1)急性毒性 因限于西洋參莖葉總皂苷給藥體積及給藥濃度，未能測出小鼠灌胃給藥的LD50，而測出其一日內(nèi)灌胃的最大給藥量為30g/kg，西洋參莖葉總皂苷給小鼠靜脈注射的LD50及95％的可信限為352.5±17.555mg/kg。
(2)長期毒性 西洋參莖葉總皂苷以1.5g-0.75g/kg劑量給大鼠灌胃，以2.0、1.0g/kg劑量給犬口服，連續(xù)60天，血液學(xué)及血液生化學(xué)各項(xiàng)檢查結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)有異常反應(yīng)。給藥組與空白對照組之間各組數(shù)據(jù)均無顯著性差異；其主要臟器也未見藥物引起的明顯的病理改變。
上述結(jié)果證明西洋參莖葉總皂苷及其藥物組合物均具有明顯的抗柯薩奇病毒等多種病毒的作用，同時(shí)西洋參莖葉總皂苷亦能抑制心律失常的發(fā)生，抑制心肌梗塞的發(fā)生，改善心肌組織病變，改善血瘀動(dòng)物的血液流變性等作用。這為臨床上西洋參單獨(dú)應(yīng)用及組方應(yīng)用治療病毒性心肌炎提供了理論依據(jù)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1膠囊劑西洋參莖葉總皂苷180g，淀粉20g，混勻，裝入2號膠囊，制成1000粒，規(guī)格0.2g/粒。成人口服，1粒/次，一日三次，一個(gè)月為一療程。
實(shí)施例2注射劑西洋參莖葉總皂苷200g，加水7000ml溶解，滅菌，干燥，無菌密封，制成1000支，規(guī)格200mg/支。成人靜脈滴注給藥，1支/次，溶于250ml生理鹽水中，一日一次，15天為一療程。
實(shí)施例3片劑西洋參莖葉總皂苷180g，淀粉20g混勻，制成1000片，規(guī)格0.2g/片；成人口服，1片/次，一日5次，一個(gè)月一個(gè)療程。
權(quán)利要求
1.西洋參莖葉總皂苷在制備治療心肌炎的藥物中的應(yīng)用。
2.含有如權(quán)利要求1所述的西洋參莖葉總皂苷的藥物組合物在制備治療心肌炎的藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的含有西洋參莖葉總皂苷的藥物組合物，該組合物可以是一種或多種天然或合成的化學(xué)成份，也可以是一種或多種中藥材或其有效組分。
全文摘要
本發(fā)明涉及西洋參莖葉總皂苷在制備治療心肌炎的藥物中的應(yīng)用，屬于中藥有效成分的醫(yī)藥用途領(lǐng)域。本項(xiàng)發(fā)明的目的就是應(yīng)用西洋參莖葉總皂苷制備治療心肌炎的藥物，制成的藥物不僅能改善心肌代謝、營養(yǎng)心肌、保護(hù)心臟細(xì)胞提高心肌的抗病能力，而且能直接殺傷病毒，減輕病毒對心肌的損傷，起到抗病毒及整體調(diào)節(jié)相結(jié)合的作用效果，減輕西藥長期應(yīng)用對人體產(chǎn)生的副作用，使其成為理想的用于治療心肌炎的藥物。也可制成含有西洋參莖葉總皂苷的藥物組合物。
文檔編號A61P31/00GK1539425SQ20031010996
公開日2004年10月27日 申請日期2003年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月3日
發(fā)明者孫曉波, 徐惠波, 丁濤, 溫富春, 張偉, 紀(jì)鳳蘭, 張殿文 申請人:孫曉波, 徐惠波