專(zhuān)利名稱(chēng)：作為霉蠅堿受體拮抗劑的氮雜二環(huán)衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及毒蠅堿受體拮抗劑，除其它用途外，它還可被用于治療呼吸、泌尿和胃腸系統(tǒng)由毒蠅堿受體介導(dǎo)的各種疾病。特別地，本發(fā)明涉及氮雜二環(huán)化合物的衍生物，例如，包括6-取代的氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷、2，6-和4，6-二取代的衍生物以及2，4，6-三取代的衍生物。本發(fā)明還涉及含有該化合物的藥物組合物以及治療由毒蠅堿受體介導(dǎo)的疾病的方法。
背景技術(shù)：
毒蠅堿受體是G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)中的一員，它是由5種受體亞型(M1、M2、M3、M4和M5)構(gòu)成的，并被神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿活化。這些受體廣泛分布在多種器官和組織中，并臨界于維持中樞和外周膽堿能神經(jīng)傳遞。已經(jīng)記載了這些受體亞型在大腦和其它器官的區(qū)域分布。例如，M1亞型主要分布在大腦皮層和自主神經(jīng)節(jié)等的神經(jīng)組織中，M2亞型主要出現(xiàn)在心臟中，它在那里介導(dǎo)膽堿能介導(dǎo)的心動(dòng)過(guò)緩，同時(shí)M3亞型主要位于平滑肌和唾液腺(Nature，323，p.411(1986)；Science，237，p.527(1987))。
Eglen等在Current Opinions in Chemical Biology，3，p.426(1999)和Trendsin Pharmacological Sciences，22，第409頁(yè)(2001)中回顧了在阿爾茨海默病、疼痛、泌尿疾病、慢性梗阻性肺病等不同病癥中通過(guò)配體調(diào)節(jié)毒蠅堿受體亞型的生物學(xué)潛能。
Felder等在J.Med.Chem.，43，第4333頁(yè)(2000)中回顧了毒蠅堿受體在神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)行治療的可能性，并詳細(xì)描述了毒蠅堿受體的結(jié)構(gòu)和功能、藥理學(xué)及其治療用途。
毒蠅堿類(lèi)乙酰膽堿激動(dòng)劑和拮抗劑的藥理學(xué)和醫(yī)學(xué)方面的描述出現(xiàn)在Molecules，6，第142頁(yè)(2001)。
Birdsall等在Trends in Pharmacological Sciences，22，第215頁(yè)(2001)中總結(jié)了關(guān)于基因敲除小鼠的不同毒蠅堿受體對(duì)不同毒蠅堿受體亞型的作用方面的最新進(jìn)展。
毒蠅堿激動(dòng)劑如毒蠅堿和毛果云香堿以及拮抗劑如阿托品早在一個(gè)世紀(jì)前就已經(jīng)知道，但受體亞型選擇性化合物卻未被發(fā)現(xiàn)，這就使人們難以辨別各種受體的特定功能。盡管傳統(tǒng)的毒蠅堿拮抗劑如阿托品是有效的支氣管擴(kuò)張藥，但心動(dòng)過(guò)速，視力模糊，口干，便秘，癡呆等外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)副作用的高發(fā)病率限制了它們的臨床應(yīng)用。隨后的研究顯示，與腸道外給藥相比，阿托品的季銨鹽衍生物如異丙托溴銨可被較好耐受，但其中大多數(shù)不是理想的抗膽堿能支氣管擴(kuò)張藥，這是由于其缺乏對(duì)毒蠅堿受體亞型的選擇性，這導(dǎo)致了劑量限定副作用，如口渴、惡心、散瞳以及和心臟有關(guān)的副作用，如M2受體介導(dǎo)的心動(dòng)過(guò)速。
Annual Review of Pharmacological Toxicol.，41，p.691(2001)描述了下泌尿道感染的藥理學(xué)。盡管多年來(lái)非選擇性作用于毒蠅堿受體的抗-毒蠅堿試劑如奧昔布寧和托特羅定被用于治療膀胱活動(dòng)過(guò)度，但由于口干、視力模糊和便秘等副作用，這些試劑的臨床效果有限。通常認(rèn)為與奧昔布寧相比，托特羅定可被更好耐受。(Steers等，Curr.Opin.Invest.Drugs，2，268；Chapple等，Urology，55，33；Steers等，Adult and Pediatric Urology，Gillenwatter等編，1220-1325編，St.Louis，MO；Mosby.第三版(1996))。
仍舊需要開(kāi)發(fā)新的可與各種亞型發(fā)生反應(yīng)的高選擇性毒蠅堿拮抗劑，這樣可避免副作用的發(fā)生。
具有抗毒蠅堿受體拮抗活性的化合物已描述在日本專(zhuān)利申請(qǐng)待定公開(kāi)號(hào)92921/1994和135958/1994；WO 93/16048；美國(guó)專(zhuān)利No.3,176,019；GB 940,540；EP 0325 571；WO 98/29402；EP 0801067；EP 0388054；WO 9109013；美國(guó)專(zhuān)利No.5,281,601.Also，美國(guó)專(zhuān)利Nos.6,174,900，6,130,232和5,948,792；WO97/45414，它們涉及1，4-二取代的哌啶衍生物；WO 98/05641描述了氟化的1，4-二取代的哌啶衍生物；WO 93/16018和WO96/33973是其它的有關(guān)參考資料。
J.Med.Chem.，44，p.984(2002)的報(bào)告描述了作為區(qū)別抵抗其它受體亞型的M3選擇性拮抗劑的環(huán)己基甲基哌啶基三苯基丙酰胺衍生物。
發(fā)明概述一方面，提供了作為毒蠅堿受體拮抗劑的氮雜二環(huán)衍生物，例如，其中包括6-取代的氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷，2，6-和4，6-二取代的衍生物和2，4，6-三取代的衍生物，它們可被用作治療呼吸、泌尿和腸胃系統(tǒng)各種疾病的安全有效的治療劑或預(yù)防劑。還提供了合成這種化合物的方法。
另一方面，提供了含有這種化合物的藥物組合物以及可接受的載體、賦形劑或稀釋劑，它們可被用于治療呼吸、泌尿和腸胃系統(tǒng)各種疾病。
還提供了這些化合物的對(duì)映體，非對(duì)映體，N-氧化物，多晶型物，藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的溶劑合物以及具有相同活性的代謝物，還提供了藥物組合物，其中含有與藥學(xué)上可接受的載體組合的所述化合物、它們的代謝物，對(duì)映體，非對(duì)映體，N-氧化物，多晶型物，溶劑合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，并任選含有賦形劑。
其它方面將在下面的描述中介紹，其中一部分通過(guò)以下描述是顯而易見(jiàn)的，或者可通過(guò)實(shí)踐本發(fā)明而了解。
根據(jù)一個(gè)方面，提供了具有式I所示結(jié)構(gòu)的化合物 式I及其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物，代謝物，其中Ar代表芳基或含有1-2個(gè)雜原子的雜芳環(huán)，所述雜原子選自氧、硫和氮原子；所述芳環(huán)或雜芳環(huán)可以是未被取代的或被1-3個(gè)獨(dú)立選自低級(jí)烷基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷基(C1-C4)、氰基、羥基、硝基、低級(jí)烷氧基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷氧基(C1-C4)、未取代的氨基、N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基、氨基羰基或N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基羰基的取代基取代；R1代表氫、羥基、羥基甲基、取代或未取代的氨基、烷氧基、氨甲?；螓u素(例如，氟、氯、溴和碘)；R2代表烷基、C3-C7環(huán)烷基環(huán)、C3-C7環(huán)烯基環(huán)、芳基、有1-2個(gè)雜原子的雜環(huán)或雜芳環(huán)，所述雜原子選自氧、硫和氮原子；所述芳基、雜芳基、雜環(huán)或環(huán)烷基環(huán)可以是未被取代的或被1-3個(gè)獨(dú)立選自低級(jí)烷基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷基(C1-C4)、氰基、羥基、硝基、低級(jí)烷氧基羰基、鹵素、低級(jí)烷氧基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷氧基(C1-C4)、未取代的氨基、N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基、氨基羰基或N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基羰基的取代基取代；
W代表(CH2)p，其中，p代表0-1；X代表氧、硫、-NR或無(wú)原子，其中，R代表氫或(C1-6)烷基；Y代表CHR5CO或(CH2)q，其中，R5代表氫或甲基，q代表0-4；Z代表氧、硫或NR10，其中，R10代表氫或C1-6烷基；Q代表-(CH2)n-，其中，n代表0-4，CHR8，其中，R8代表H、OH、C1-6烷基、C1-6烯基或C1-6烷氧基，或Q代表CH2CHR9，其中，R9代表H、OH、低級(jí)烷基(C1-C4)或低級(jí)烷氧基(C1-C4)；和R6和R7獨(dú)立選自H、CH3、COOH、CONH2、NH2和CH2NH2。
根據(jù)第二方面，提供了具有式II(當(dāng)R6和R7＝H時(shí)的式I)所示結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物或代謝物，其中，Ar、R1、R2、W、X、Y、Z和Q如對(duì)式I的定義。
式II根據(jù)第三個(gè)方面，提供了具有式III(式I，其中W是(CH2)p，其中p＝0，X表示無(wú)原子，Y是(CH2)q，其中q＝0，R6＝H，R7＝H)所示結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物或代謝物，其中，Ar、R1、R2、Z和Q如對(duì)式I的定義。
式III根據(jù)第四個(gè)方面，提供了具有式IV(式I，其中，W是(CH2)p，其中p＝0，X表示無(wú)原子，Y是(CH2)q，其中q＝0，R6＝H，R7＝H， 所示結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物或代謝物，其中，Ar，R1，Z和Q如對(duì)式I的定義，r是1-4。
式IV根據(jù)第五個(gè)方面，提供了具有式V所示結(jié)構(gòu)的化合物(式I，其中，W是(CH2)p，其中p＝0，X表示無(wú)原子，Y是(CH2)q，其中q＝0，R6＝H，R7＝H， ，R1是羥基，Ar是苯基)及其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物或代謝物，其中，Z和Q與對(duì)式I的定義相同，s代表1或2。
式V根據(jù)第六個(gè)方面，提供了對(duì)患有呼吸、泌尿和腸胃系統(tǒng)疾病或病癥的動(dòng)物或人進(jìn)行治療或預(yù)防的方法，其中，所示疾病或病癥是由毒蠅堿受體介導(dǎo)的。所述方法包括施用至少一種具有式I所示結(jié)構(gòu)的化合物。
根據(jù)第七個(gè)方面，提供了對(duì)患有毒蠅堿受體相關(guān)疾病或病癥的動(dòng)物或人進(jìn)行治療或預(yù)防的方法，所述方法包括給予由此需要的患者有效量的上述毒蠅堿受體拮抗劑化合物。
根據(jù)第八個(gè)方面，提供了用上述化合物對(duì)患有呼吸系統(tǒng)疾病或病癥，如支氣管哮喘、慢性梗阻性肺病(COPD)、肺纖維化等；泌尿系統(tǒng)疾病或病癥，如尿失禁、下泌尿道癥狀(LUTS)等泌尿病癥；以及胃腸系統(tǒng)疾病或病癥如腸易激綜合征、肥胖癥、糖尿病和胃腸痙攣的動(dòng)物或人進(jìn)行治療或預(yù)防的方法，其中，所述疾病或病癥與毒蠅堿受體有關(guān)。
根據(jù)第九個(gè)方面，提供了制備上述化合物的方法。
這里所述的化合物具有顯著活性，這是通過(guò)體外受體結(jié)合和功能測(cè)定并用麻醉的兔子進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)測(cè)定的。對(duì)發(fā)現(xiàn)具有體外活性的化合物進(jìn)行體內(nèi)測(cè)試。一些化合物是有效的毒蠅堿受體拮抗劑，對(duì)M3受體具有高親和性。因此，提供了可治療毒蠅堿受體相關(guān)疾病或病癥的藥物組合物。此外，該化合物可通過(guò)口服或腸胃外途徑施用。
發(fā)明詳述這里出現(xiàn)的化合物可用以下反應(yīng)過(guò)程表示的方法來(lái)制備 式VIII 式I流程I例如，式I的化合物可通過(guò)流程I所示過(guò)程來(lái)制備。所示制備方法包括使式VII的化合物與式VI的化合物發(fā)生反應(yīng)，其中，Ar代表芳基或含有1-2個(gè)雜原子(如氧、硫或氮原子)的雜芳環(huán)，所述芳環(huán)或雜芳環(huán)可以是未被取代的或被1-3個(gè)獨(dú)立選自低級(jí)烷基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷基(C1-C4)、氰基、羥基、硝基、低級(jí)烷氧基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷氧基(C1-C4)、未取代的氨基、N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基、氨基羰基或N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基羰基的取代基取代；R1代表氫、羥基、羥基甲基、取代或未取代的氨基、烷氧基、氨甲?；螓u素(例如，氟、氯、溴和碘)；R2代表烷基、C3-C7環(huán)烷基環(huán)、C3-C7環(huán)烯基環(huán)、芳基、有1-2個(gè)雜原子的雜環(huán)或雜芳環(huán)；所述芳基、雜芳基、雜環(huán)或環(huán)烷基環(huán)可以是未被取代的或被1-3個(gè)獨(dú)立選自低級(jí)烷基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷基(C1-C4)、氰基、羥基、硝基、低級(jí)烷氧基羰基、鹵素、低級(jí)烷氧基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷氧基(C1-C4)、未取代的氨基、N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基、氨基羰基或N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基羰基的取代基取代；W代表(CH2)p，其中，p代表0-1；X代表氧、硫、-NR或無(wú)原子，其中，R代表氫或(C1-6)烷基；Y代表CHR5CO或(CH2)q，其中，R5代表氫或甲基，q代表0-4；Z代表氧、硫或NR10，其中，R10代表氫或C1-6烷基；Q代表-(CH2)n-，其中，n代表0-4；CHR8，其中，R8代表H、OH、C1-6烷基、C1-6烯基或C1-6烷氧基；或Q代表CH2CHR9，其中，R9代表H、OH、低級(jí)烷基(C1-C4)或低級(jí)烷氧基(C1-C4)；和R6和R7獨(dú)立選自H、CH3、COOH、CONH2、NH2和CH2NH2；和P是任何氨基保護(hù)基，例如芐基和t-丁氧羰基。
式VII的化合物和式VI的化合物之間的反應(yīng)是當(dāng)縮合劑(例如，鹽酸1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)或1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU))存在時(shí)，在溶劑(如N，N-二甲基甲酰胺，二甲基亞砜，甲苯或二甲苯，溫度為約0至約140℃)中進(jìn)行的，以得到受保護(hù)的式VIII的化合物，該化合物在有機(jī)溶劑(例如，甲醇，乙醇，四氫呋喃或乙腈，溫度為約10至約50℃)中當(dāng)去保護(hù)劑(例如，碳上的鈀，三氟乙酸(TFA)或鹽酸)存在時(shí)被去保護(hù)，得到未被保護(hù)的式I的化合物。
在上述流程中提到了特定的堿、縮合劑、保護(hù)基、去保護(hù)劑、溶劑、催化劑、溫度等，應(yīng)該理解為，精通此領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員已知的其它堿、縮合劑、保護(hù)基、去保護(hù)劑、溶劑、催化劑、溫度等也可采用。類(lèi)似地，可根據(jù)需要調(diào)節(jié)反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間。
制備了式I所表示的化合物的合適的鹽，以將該化合物溶于含水介質(zhì)進(jìn)行生物評(píng)價(jià)，以及與各種劑型相容和提高該化合物的生物利用度。這種鹽的例子包括藥學(xué)上可接受的鹽，如無(wú)機(jī)酸的鹽(例如，鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽和磷酸鹽)，有機(jī)酸的鹽(例如，乙酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、延胡索酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、甲苯磺酸鹽和甲磺酸鹽)。當(dāng)式I中含有羧基取代基時(shí)，它們可以堿或堿金屬鹽的形式出現(xiàn)(例如，鈉、鉀、鈣、鎂等)。這些鹽可用各種技術(shù)制備，例如在合適的溶劑中用適量的無(wú)機(jī)或有機(jī)酸或堿處理該化合物。
特定的化合物如下所示(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺(化合物1)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺鹽酸鹽(化合物2)；(2R)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基2-苯乙酰胺(化合物3)；(2R)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基2-苯乙酰胺鹽酸鹽(化合物4)；(2S)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基2-苯乙酰胺(化合物5)；(2S)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基2-苯乙酰胺鹽酸鹽(化合物6)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-甲氧基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺(化合物7)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)庚基-2-苯乙酰胺(化合物8)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)丁基-2-苯乙酰胺(化合物9)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)丁基-2-苯乙酰胺酒石酸鹽(化合物10)；(2R)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-二氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺(化合物11)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3-氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺(化合物12)；
(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺(化合物13)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-二氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺酒石酸鹽(化合物14)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2，2-二苯基醋酸鹽(化合物15)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2，2-二苯基乙酰胺(化合物16)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)己基-2-苯乙酰胺(化合物17)，和(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-6-基甲基)-2-環(huán)戊基-2-羥基-N-甲基-2-苯乙酰胺(化合物18)。
表I
式III(式I，其中，W＝(CH2)p，其中p＝0，X表示無(wú)原子，Y＝(CH2)q，其中q＝0，R6＝R7＝H)
由于它們有價(jià)值的藥物特性，這里所述的化合物可被用于動(dòng)物以口服或通過(guò)腸道外途徑進(jìn)行治療。這里所述的藥物組合物可以劑型單元的形式制造并用藥，每個(gè)單元含有一定量的至少一種這里所述的化合物和/或至少一種生理上可接受的它的加成鹽。劑量是可以多變的，只要該化合物在低劑量水平仍然有效并相對(duì)沒(méi)有毒性。所述化合物可以低摩爾濃度給藥，該濃度是有治療效果的，且劑量可根據(jù)需要增大到患者可耐受的最大劑量。
這里所述的化合物可被制造，并可被制成其對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物、溶劑合物和藥學(xué)上可接受的鹽，以及具有相同活性類(lèi)型的代謝物。也可制造藥物組合物，其中含有式I、II、III、IV和V的分子或其代謝物、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物、溶劑合物或藥學(xué)上可接受的鹽，它們與藥學(xué)上可接受的載體混合，并任選含有賦形劑。
例如，式I所述的化合物由合適的乙酸制得，與下面所述的特定實(shí)施例類(lèi)似。這種乙酸的制備是此領(lǐng)域的一般技術(shù)人員已知的，并可從下面給出的特定實(shí)施例中所引用的參考資料中了解。本發(fā)明范圍內(nèi)的其它化合物，如那些R6和/或R7為甲基、羧酸、酰胺、氨基或甲基氨基的化合物，按照與下面特定實(shí)施例中給出的特定方法相類(lèi)似的方法，用合適的氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷(用已知方法合成)也是容易制備的。本發(fā)明范圍內(nèi)的其它化合物，如那些X是氧、硫或仲胺或叔胺的化合物，按照與下面特定實(shí)施例中給出的特定方法相類(lèi)似的方法，用合適的酯、硫代化物或酰胺(可用此領(lǐng)域的一般技術(shù)人員已知的方法合成)也是容易制備的。類(lèi)似地，本發(fā)明范圍內(nèi)的其它化合物，如那些Y是CHR5CO，其中R5是氫或甲基的化合物，按照與下面特定實(shí)施例中給出的特定方法相類(lèi)似的方法，用合適的酸酐、酰亞胺或硫代酸酐(可用此領(lǐng)域的一般技術(shù)人員已知的方法合成)也是容易制備的。本發(fā)明范圍內(nèi)的其它化合物，如那些Z是氧、硫或仲胺或叔胺的化合物，按照與下面特定實(shí)施例中給出的特定方法相類(lèi)似的方法，用合適的起始物質(zhì)(可用此領(lǐng)域的一般技術(shù)人員已知的方法合成)也是容易制備的。
下面所述的實(shí)施例闡述了一般合成方法以及特定化合物的特定制備方法。這些實(shí)施例只是為了例證本發(fā)明的某些細(xì)節(jié)而不是要限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例按照文獻(xiàn)中所述的方法用各種干燥劑將各種溶劑，如丙酮、甲醇、吡啶、醚、四氫呋喃、己烷和二氯甲烷，干燥。在Perkin Elmer Paragon裝置上用石蠟糊(nujolmull)或干凈的薄膜(thin neat film)記錄IR譜，在Varian XL-300MHz裝置上用四甲基硅烷作為內(nèi)標(biāo)記錄核磁共振(NMR)。
實(shí)施例1(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺(化合物編號(hào)1)的制備步驟a(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺的合成在溶于二甲基甲酰胺(100ml)的(1α，5α，6α)-6-氨基甲基-3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷(按照EP 0413455 A2所述制備)(29.9mmol，6.05gm)溶液中加入2-(R，S)-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸(按照以下方法制備J.Amer Chem.Soc.，1953；752654)(27.2mmol，6.0gm)并冷卻至0℃。反應(yīng)混合物用羥基苯并三唑處理(29.9mol，4.04gm)，然后用N-甲基嗎啉(54.4mmol，5.2gm)處理，在0℃攪拌0.5小時(shí)。加入EDC鹽酸(1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺(29.9mmol，5.7g)并將反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時(shí)，再在室溫(RT)下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鈉干燥并減壓濃縮。殘余物通過(guò)柱層析(100-200目硅膠)純化，流出化合物的純度為93-95％。為得到高純度(約99％)化合物，將其與甲苯研磨并過(guò)濾。
步驟b(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺的制備在氮?dú)庀?，在溶于甲?25.0ml)的來(lái)自實(shí)施例1步驟a的(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-氨基甲基-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺(1.0g，2.48mmol)溶液中加入5％Pd-C(0.2g)(50％濕)。然后邊攪拌邊加入無(wú)水甲酸銨(0.8g，12.38mmol)并將反應(yīng)混合物在氮?dú)庀禄亓靼胄r(shí)。使混合物冷卻至室溫并通過(guò)硅藻土床過(guò)濾反應(yīng)混合物。硅藻土床用甲醇(75.0ml)、乙酸乙酯(25.0ml)和水(25.0ml)洗滌。濾液在真空中濃縮。殘余物用水稀釋?zhuān)⒂?N NaOH將所得溶液的pH調(diào)至約14。溶液用乙酸乙酯(2×50ml)萃取，乙酸乙酯層用水和鹽水溶液洗滌。該層用無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮以得到固體狀的標(biāo)題化合物，其收率為96.2％(0.75g，2.39mmol)，用HPLC測(cè)得其純度＞98％。
該化合物的熔點(diǎn)為149-151℃，且在3410，2951.5，2868.3和1652.5cm-1處有紅外吸收(KBr)。1HNMR(CDCl3)光譜數(shù)據(jù)如下δ7.59-7.62(m，2H)，7.23-7.36(m，3H)，6.56(brs，1H)，3.03-3.15(m，3H)，2.78-2.90(m，4H，包含OH)，1.51-1.71(m，8H)，1.19-1.27(m，4H)，0.70-0.72(m，1H)。質(zhì)譜峰的m/e值為315(MH+)，297(M-OH)。
實(shí)施例2(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺.鹽酸鹽(化合物編號(hào)2)的制備室溫下，在溶于二氯甲烷(4.0ml)的(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺(在實(shí)施例1中制得)(0.2g，0.637毫摩爾)溶液中加入乙醇鹽酸(1.45N，0.5ml，0.725mmol)并攪拌10分鐘。相同溫度下在反應(yīng)混合物中加入二乙醚(100ml)，攪拌5分鐘并無(wú)需加熱減壓濃縮。殘余物與醚一起研磨以得到固體物質(zhì)。將醚層倒出，固體減壓干燥以得到吸濕固體狀的標(biāo)題化合物，其收率為94％(0.21g，0.6毫摩爾)，用HPLC測(cè)得其純度＞98％。
實(shí)施例3(2R)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺(化合物編號(hào)3)的制備步驟a(2R)-(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺的合成該化合物是按照實(shí)施例1，步驟a的方法用(2R)-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸(按照以下文獻(xiàn)中所述的方法合成Grover等，J.Org.Chem.，2000；656283-6287)代替2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸合成的。
步驟b(2R)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺的合成該化合物是按照實(shí)施例1步驟b的方法用(2R)-(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺代替(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺合成的。對(duì)映體過(guò)量(ee)利用HPLC(Chinacel OD，流動(dòng)相為90％己烷/10％EtOH/0.1％TFA)通過(guò)觀察(S)和(R)異構(gòu)體來(lái)確定。(S)異構(gòu)體在約11.1分鐘流出。(R)異構(gòu)體在約11.81分鐘流出。光學(xué)純度＞99％。
該化合物的熔點(diǎn)為150.2℃。紅外光譜數(shù)據(jù)顯示(DCM)1653.8cm-1。1HNMR光譜數(shù)據(jù)顯示(CDCl3)δ7.61(d，J＝9Hz，2H)，7.30-7.38(m，2H)，6.70(s，1H)，3.61-3.68(m，2H)，3.08-3.28(m，5H)，1.49-1.68(m，10H)，1.11-1.26(m，2H)，0.75-0.85(m，1H)。
實(shí)施例4(2R)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-氨基甲基]-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺.鹽酸鹽(化合物編號(hào)4)的制備所述鹽酸鹽是按照實(shí)施例2所述相同的方法用(2R)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺代替(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺合成的。
實(shí)施例5(2S)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺(化合物編號(hào)5)的制備步驟a(2S)-(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺的合成該化合物是按照實(shí)施例1，步驟a的方法，用(2S)-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸(按照以下文獻(xiàn)中所述的方法合成Grover等，J.Org.Chem.，2000；656283-6287)代替2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸合成的。
步驟b(2S)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺的合成該化合物是按照實(shí)施例1，步驟b的方法，用(2S)-(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺代替(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺合成的。ee利用HPLC(Chinacel OD，流動(dòng)相為90％己烷/10％EtOH/0.1％TFA)通過(guò)觀察(S)和(R)異構(gòu)體來(lái)確定。(S)異構(gòu)體在約11.1分鐘流出。(R)異構(gòu)體在約11.81分鐘流出。光學(xué)純度＞99％。
該化合物的熔點(diǎn)為62.6-63.3℃。紅外光譜數(shù)據(jù)顯示(KBr)1653.7cm-1。1HNMR光譜數(shù)據(jù)顯示(CDCl3)δ7.59-7.62(m，2H)，7.29-7.37(m，3H)，3.58-3.65(m，2H)，3.02-3.24(m，4H)，1.11-1.34(m，11H)，0.75-0.95(m，1H)。
實(shí)施例6(2S)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-氨基甲基]-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺。鹽酸鹽(化合物編號(hào)6)的制備所述鹽酸鹽是按照實(shí)施例2所述相同的方法用(2S)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺代替(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺合成的，其收率為90％。
實(shí)施例7(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-甲氧基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺(化合物7)的制備步驟a(2R，2S)2-甲氧基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸乙酯的制備0℃下，在冷的溶于二甲基甲酰胺的(2R，2S)2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸乙酯(按照以下方法合成J.Am.Chem.Soc.，1953；752654)(4.5mmol)溶液中分?jǐn)?shù)次加入氫化鈉(9.08mmol)，并在室溫下攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃并加入碘代甲烷(18.0mmol)。反應(yīng)混合物然后在室溫下攪拌2小時(shí)。TLC顯示沒(méi)有起始物質(zhì)。在用乙酸乙酯萃取的反應(yīng)混合物中加入水。有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮。粗制化合物通過(guò)柱層析純化并用2％EtOAc/己烷洗脫所需產(chǎn)物。
1H NMR(CDCl3)光譜數(shù)據(jù)如下δ7.47-7.36(5H，m)，4.31(2H，q)，3.26(3H，s)，2.43(1H，m)，1.66-1.46(11H，m)步驟b(2R，2S)2-甲氧基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸的合成在溶于甲醇的(2R，2S)2-甲氧基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸乙酯(1.8mmol)溶液中加入氫氧化鉀(KOH)(2.2mmol)并使反應(yīng)混合物回流7小時(shí)。TLC顯示存在起始物質(zhì)，然后加入3摩爾KOH并使反應(yīng)混合物回流3小時(shí)。TLC顯示沒(méi)有起始物質(zhì)。將反應(yīng)混合物濃縮，將殘余物置于水中，用濃鹽酸中和并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥并減壓濃縮以得到所需化合物。
1H NMR(CDCl3)光譜數(shù)據(jù)如下δ7.48-7.35(5H，m)，3.20(3H，s)，2.94-2.86(1H，m)，1.86-1.50(8H，m)步驟c(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-甲氧基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺的制備該化合物是按照實(shí)施例1，步驟‘a(chǎn)’的方法用2-甲氧基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸代替2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸制備的。
步驟d(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-甲氧基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺的制備該化合物是按照實(shí)施例1，步驟b的方法用(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-甲氧基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺代替(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺制備的。
1H NMR(CDCl3)光譜數(shù)據(jù)δ7.45-7.30(5H，m)，7.03(1H，m)，3.25-3.02(9H，m)，2.00-0.86(12H，m)。
實(shí)施例8(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)庚基-2-苯乙酰胺(化合物8)的制備步驟a(2R，2S)-(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)庚基-2-苯乙酰胺的合成該化合物是按照實(shí)施例1，步驟a的方法，用(2R，2S)-2-羥基-2-環(huán)庚基-2-苯乙酸(按照以下方法合成Grover等，J.Org.Chem，2000；656283-6287)代替2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸合成的。
步驟b(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)庚基-2-苯乙酰胺的合成該化合物是按照實(shí)施例1，步驟b的方法，用(2R，2S)-(1α-5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)庚基-2-苯乙酰胺代替(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[.1. 0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺合成的，其收率為90％。
化合物的1H NMR光譜數(shù)據(jù)顯示(CDCl3)δ7.59-7.61(m，2H)，7.13-7.36(m，3H)，6.76(brs，1H)，3.00-3.20(m，2H)，2.80-2.92(m，2H)，2.50-2.80(m，1H)，2.40(brs，2H)，1.28-1.73(m，12H)，1.00-1.20(m，2H)，0.80-0.90(m，1H)。
紅外吸收(DCM)在1655.7cm-1質(zhì)譜峰的m/e值為343(MH+)。
實(shí)施例9(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)丁基-2-苯乙酰胺(化合物9)的制備步驟a(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)丁基-2-苯乙酰胺的合成該化合物是按照實(shí)施例1，步驟a的方法，用(2R，2S)2-羥基-2-環(huán)丁基-2-苯乙酸(按照以下方法合成Saul B.Kadin和Joseph G.Cannon.，J.Org.Chem.，1962；27240-245)代替2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸合成的。
步驟b(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)丁基-2-苯乙酰胺的合成該化合物是按照實(shí)施例1，步驟b的方法，用(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)丁基-2-苯乙酰胺代替(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺合成的，通過(guò)HPLC測(cè)得所得標(biāo)題化合物的純度為90.6％。
1HNMR(CDCl3)光譜數(shù)據(jù)如下δ7.50(2H，m)，7.30(3H，m)，6.60(1H，m)，3.60-3.00(9H，m)，2.04(1H，m)，1.96-1.74(6H，m)，1.45(1H，m)，1.00(1H，m)。
實(shí)施例10(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)丁基-2-苯乙酰胺酒石酸鹽(化合物10)的制備在溶于乙醇的化合物編號(hào)9的溶液中加入固體酒石酸，并將溶液在室溫下攪拌1小時(shí)并蒸發(fā)去溶劑。在其中加入醚以沉淀該鹽。所得鹽用醚洗滌(4次)，潷去上清液，得到粉末狀的鹽，通過(guò)HPLC測(cè)得其純度為95.66％。
1H NMR(CDCl3)光譜數(shù)據(jù)如下δ7.45(2H，m)，7.21(3H，m)，4.36(2H，s)，3.42(2H，m)，3.20(3H，m)，3.05(2H，m)，1.97(1H，m)，1.90-1.60(7H，m)，1.10(1H，m)。
實(shí)施例11(2R)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-二氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺(化合物11)的制備步驟a(2R，5R)-2-叔-丁基-5-苯基-1，3-dioxalan-4-酮的制備該化合物是按照J(rèn).Org.Chem.，2000；656283-6287中所述的方法合成的。
步驟b(2R，5R)-2-叔-丁基-5-[(1R或1S)-3-氧雜環(huán)戊基]-5-苯基-1，3-dioxalan-4-酮的制備在-78℃下，在氮?dú)庀略谒臍溥秽?THF)(12ml)中的步驟a所得化合物的懸液(1.36mmol)中逐滴加入在THF(1.5mmol)中的二異丙基酰胺鋰(LDA)。將反應(yīng)混合物在相同溫度下攪拌2小時(shí)。在反應(yīng)混合物中逐滴加入在THF(2ml)中的2-環(huán)戊-1-酮(1.52mmol)溶液，再攪拌3小時(shí)。反應(yīng)混合物用飽和的氯化銨水溶液驟冷驟冷，并用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層干燥并將在真空下除去溶劑后得到的殘余物通過(guò)柱層析(100-200目硅膠)純化。產(chǎn)物用10％EtOAc-己烷混合物洗脫。
1HNMR(CDCl3)δ-值7.70-7.26(m，5Ar-H)，5.43-5.37(d，1H)，2.91-2.88(m，1H)，2.37-1.77(m，6H)，0.92(s，9H)IR(DCM)1791和1746cm-1步驟c(2R，5R)-2-叔-丁基-5-[(1R或1S)-3，3-二氟環(huán)戊基]-5-苯基-1，3-dioxalan-4-酮的制備0℃下，在氮?dú)庀拢谌苡诼确?15ml)的步驟b所得化合物的溶液中加入二乙基氨基硫三氟化物(DAST，diethylamino sulphurtrifluoride)(3.3mmol)。反應(yīng)混合物在相同溫度下攪拌30分鐘，然后在室溫下攪拌3天。冷卻至0℃后，小心加入水以將反應(yīng)混合物(RM)驟冷。分離有機(jī)層，用氯仿萃取含水層。將合并的有機(jī)層干燥并將除去溶劑后得到的殘余物通過(guò)柱層析(100-200目硅膠)純化。產(chǎn)物用5％EtOAc-己烷混合物洗脫。
1HNMR(CDCl3)δ-值7.73-7.35(m，5Ar-H)，5.49(s，1H)，2.86-2.82(m，1H)，2.27-1.80(m，6H)，0.98(s，H)IR(DCM)1793cm-1步驟d(2R)-[(1S或1R)-3，3-二氟環(huán)戊基]-2-羥基-2-苯基aceticacid的制備在溶于MeOH(10ml)的步驟c所得化合物的溶液(1mmol)中邊攪拌邊加入3N氫氧化鈉水溶液，在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物減壓濃縮。所得殘余物用水稀釋并用二氯甲烷萃取。含水層用濃鹽酸酸化并用EtOAc萃取。將有機(jī)層干燥并減壓濃縮以得到產(chǎn)物。
熔點(diǎn)123℃1HNMR(CDCl3)δ-值7.69-7.37(m，5Ar-H)，3.29-3.20(m，1H)，2.39-1.68(m，6H)步驟e(1α，5α，6α)-6-氨基甲基-3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷的制備該化合物是按照EP 0413455A2的方法合成的。
步驟f(2R)-(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-[(1R或1S)-3，3-二氟環(huán)戊基]-2-羥基-2-苯基乙酰胺的制備該化合物是按照實(shí)施例1，步驟a的方法用步驟d中合成的酸代替2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸制備的。
步驟g(2R)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-二氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺的合成該化合物是按照實(shí)施例1，步驟b的方法用(2R)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-二氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺代替(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺制備的。其光學(xué)純度為87.27％(HPLC)。
1H NMR(CDCl3)光譜數(shù)據(jù)δ7.59-7.55(2H，m)，7.35-7.31(3H，m)，7.03(1H，m)，3.18-3.11(7H，m)，1.87-1.62(9H，m)。
實(shí)施例12(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3-氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺(化合物12)的制備步驟-a(2R，2S)-2-叔-丁基-5-[(1R或1S，3R或3S)-3-羥基環(huán)戊基]-5-苯基-1，3-dioxalan-4-酮的制備在冷卻至0℃的溶于甲醇(10ml)的(2R，2S，5R)-2-叔-丁基-5-[(1R或1S)-3-氧雜環(huán)戊基]-5-苯基-1，3-dioxalan-4-酮(1mmol)溶液中邊攪拌邊分小量加入硼氫化鈉(2mmol)。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時(shí)。將其減壓濃縮，殘余物用水稀釋并用EtOAc萃取。將有機(jī)層干燥并將除去溶劑后得到的殘余物通過(guò)柱層析(100-200目硅膠)純化，用20％EtOAc-己烷混合物洗脫化合物。
1HNMR(CDCl3)δ-值7.68-7.29(m，5H，ArH)，5.45(d，1H)，4.30(m，1H)，3.25(m，1H)，2.65-2.63(m，1H)，1.80-1.63(m，6H)，0.92(s，9H)IR(DCM)1789cm-1，3386cm-1步驟-b(2R，2S)-2-叔-丁基-5-[1R或1S，3R或3S]-3-氟環(huán)戊基]-5-苯基-1，3-二氧戊環(huán)-4-酮的制備氮?dú)庀?，將溶于氯?10ml)的步驟a所得化合物的溶液冷卻至0℃并逐滴加入二乙基氨基硫三氟化物(DAST)(1.5mmol)。反應(yīng)混合物在0℃下攪拌30分鐘，然后在室溫下攪拌3天。將反應(yīng)混合物冷卻并小心加入氯化銨水溶液以將其驟冷。分離有機(jī)層，用EtOAc萃取含水層。將合并的有機(jī)層干燥并將除去溶劑后得到的殘余物通過(guò)柱層析(100-200目硅膠)純化，化合物用5％EtOAc-己烷混合物洗脫。
1HNMR(CDCl3)δ-值7.68-7.28(m，5H，Ar-H)，5.46(d，1H)，5.39(m，1H)，2.90(m，1H)，1.98-1.25(m，6H)，0.93(s，9H)步驟-c(2R，2S)-[(1R或1S，3R或3S)-3-氟環(huán)戊基]-2-羥基-2-苯基乙酸的制備該化合物是按照實(shí)施例11步驟d的方法，用合成的(2R，2S，5R)-2-叔-丁基-5-[(1R或1S，3R或3S)-3-氟環(huán)戊基]-5-苯基-1，3-二氧戊環(huán)-4-酮代替(2R，5R)-2-叔-丁基-5-[(1R或1S)-3，3-二氟環(huán)戊基]-5-苯基-1，3-二氧戊環(huán)-4-酮。
1HNMR(CDCl3)δ7.66-7.27(m，5Ar-H)，5.30-5.00(m，H)，3.32-3.16(m，1H)，2.05-1.26(m，6H)。
IR(DCM)1710cm-1步驟-d(2R，2S)-(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-[1R或1S，3R或3S]-3-氟環(huán)戊基]-2-羥基-2-苯基乙酰胺的制備該化合物是按照實(shí)施例1，步驟a的方法，用在上述步驟c中合成的酸代替2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸合成的。
步驟-e(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3-氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺的制備該化合物是按照實(shí)施例1，步驟b的方法，用(2R，2S)-(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-[1R或1S，3R或3S]-3-氟環(huán)戊基]-2-羥基-2-苯基乙酰胺代替(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺合成的。其光學(xué)純度為87.27％(HPLC)。
1H NMR光譜數(shù)據(jù)顯示(CDCl3)δ7.56(2H，m)，7.35(3H，m)，6.08(1H，m)，5.30-5.03(1H，m)，3.27(1H，m)，3.11(2H，m)，2.91(4H，m)，2.04-1.48(9H，m)，0.71(1H，m)。
實(shí)施例13(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-二氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺(化合物13)的制備該化合物是按照實(shí)施例11的方法用(2R，2S)[(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-二氟環(huán)-戊基)-2-苯乙酰胺]代替實(shí)施例11步驟g的(2R)[(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-二氟環(huán)-戊基)-2-苯乙酰胺]制備的。
其光學(xué)純度為83.778％(HPLC)。
1HNMR光譜數(shù)據(jù)顯示(CDCl3)δ7.57-7.30(5H，m)，6.49-6.44(1H，m)，3.33(1H，m)，3.10(2H，m)，6.49-6.44(1H，m)，3.33(1H，m)，3.10(2H，m)，2.87(3H，m)，2.23-1.80(8H，m)，1.79-1.20(2H，m)IR(KBr)3410，1654cm-1實(shí)施例14(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-二氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺酒石酸鹽(化合物14)的制備在溶于乙醇的化合物編號(hào)13的溶液中加入酒石酸并將反應(yīng)混合物在60℃加熱1小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物減壓濃縮，加入二乙醚并出去有機(jī)層以得到淡棕色固體狀的所需化合物。其光學(xué)純度為98.14％(HPLC)1H NMR光譜數(shù)據(jù)顯示(CD3OD)δ7.50(2H，m)，7.20(3，m)，4.40(2H，s)，3.60-3.00(6H，m)，2.10-1.60(8H，m)，1.19(1H，m)，0.90(1H，m)。
IR(KBr)3407，1653cm-1
實(shí)施例15(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(甲基)-基]-2-羥基-2，2-二苯基醋酸鹽(化合物15)的制備步驟a(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(甲基)-基]-2-羥基-2，2-二苯基醋酸鹽的合成步驟(i)(1α，5α，6α)-3-芐基-6-羥基甲基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷的制備按照EP 0 413 455 A2所述方法合成。
步驟(ii)(1α，5α，6α)-3-芐基-6-(甲烷磺酰氧)甲基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷的制備將溶于乙酸乙酯(25ml)的合成步驟(i)的標(biāo)題化合物(0.203g；1mmol)和三乙胺(0.21g，2mmol)的溶液冷卻至-10℃并用甲烷磺酰氯(0.17g，1.5mmol)處理。在-10℃攪拌1小時(shí)后將反應(yīng)物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液。有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾并在真空下出去溶劑以得到黃色油狀的標(biāo)題化合物，無(wú)需進(jìn)-步純化即可將其用于下面的步驟。
1HNMR(CDCl3)δ-值7.45(m，5H，arom.)，4.29(s，2H)，3.81(m，2H)，3.13(m，4H)，2.84(s，3H)，1.38(m，3H)步驟(iii)(1α，5α，6α)-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(甲基)-基]-2-羥基-2，2-二苯基醋酸鹽的制備在溶于二甲苯的2-羥基-2，2-二苯乙酸(按照以下方法合成Vogel的課本“Practical Organic Chemistry，”第1046頁(yè)(第5版)；J.Am.Chem.Soc.，1953；752654和EP 613232)(1mmol，0.228g)溶液中加入(1α，5α，6α)-3-芐基-6-(甲烷磺酰氧1)甲基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷(0.28g，1mmol)，然后加入DBU(1，8-二氮雜二環(huán)[5，4，0]十-碳-7-烯(2mmol，0.305g)，并使反應(yīng)混合物回流6小時(shí)。然后用水和鹽水洗滌反應(yīng)混合物并用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)去溶劑，所得粗制化合物通過(guò)柱層析(100-200目硅膠)純化，化合物用20-80乙酸乙酯-己烷洗脫。
1H NMR(CDCl3)δ-值7.46-7.22(m，15H，arom)，4.24(s，1H)，4.11-4.09(d，2H)，3.56(s，2H)，2.91-2.89(d，2H)，2.31-2.29(d，2H)，1.67-1.62(m，1H)，1.3(s，2H)IR(DCM)1724cm-1步驟b(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(甲基)-基]-2-羥基-2，2-二苯基醋酸鹽的合成按照實(shí)施例1步驟b的方法進(jìn)行脫芐基化以得到標(biāo)題化合物，收率為60％。
IR(KBr)1731.6cm-11H NMR(CDCl3)光譜數(shù)據(jù)δ7.33-7.47(m，10H)，4.17(d，2H，J＝6Hz)，2.72-2.92(m，4H)，0.94-0.99(m，2H)，0.88(t，1H)，質(zhì)譜峰的m/e值為324(M+1)實(shí)施例16(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2.2-二苯基乙酰胺(化合物16)的制備步驟a(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2，2-二苯基乙酰胺的制備該化合物是按照實(shí)施例1，步驟a的方法用2-羥基-2，2-二苯乙酸(按照以下方法合成Vogel的課本“Practical Organic Chemistry，”第1046頁(yè)(第5版)，J.Am.Chem.Soc.，1953；752654和EP 613232)代替2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸制備的。
步驟b(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-二氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺的制備該化合物是按照實(shí)施例1，步驟b的方法用(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2，2-二苯基乙酰胺代替(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺制備的，以得到標(biāo)題化合物，收率為70％。
IR(KBr)1658.0cm-11H NMR(CDCl3)光譜數(shù)據(jù)δ7.34-7.44(m，10H)，6.53(s，1H)，3.17-3.26(m，2H)，2.87-3.01(m，4H)，1.38(s，2H)，0.88(t，1H)。
質(zhì)譜峰的m/e值為323(M+1)，305(M-OH)。
實(shí)施例17(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)己基-2-苯乙酰胺(化合物17)的制備步驟a(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)己基-2-苯乙酰胺的合成所述化合物是按照實(shí)施例1，步驟a的方法用2-羥基-2-環(huán)己基-2-苯乙酸(按照以下方法合成J.Amer.Chem.Soc.，1953；752654)代替2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酸制備的。
步驟b(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-環(huán)己基-2-苯乙酰胺的制備該化合物是按照實(shí)施例1，步驟b的方法用(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)己基-2-苯乙酰胺代替(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-芐基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺制備的，以得到標(biāo)題化合物，其收率為80％。
IR(KBr)1654.7cm-11H NMR(CDCl3)光譜數(shù)據(jù)δ7.59-7.62(m，2H)，7.29-7.37(m，3H)，6.71(s，1H)，3.03-3.14(m，2H)，2.80-2.92(m，4H)，2.42(m，1H)，1.13-1.35(m，12H)，0.88(m，1H)質(zhì)譜峰的m/e值為329(M+1)，311(M-OH)。
實(shí)施例18(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-6-基甲基]-2-環(huán)戊基-2-羥基-N-甲基-2-苯乙酰胺(化合物18)的制備步驟a(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-叔-丁氧羰基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]-己基-6-基甲基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺的制備0℃下，在溶于(50.0mmol)的(1α，5α，6α)-3N-芐基-6-氨基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷(按照以下方法合成Braish T.F.等，Synlett，1996；1100)(2.5g，7.96摩爾)溶液中加入三乙胺(3.9ml，28mmol)和Boc酐(5.2g，23.9mmol)。反應(yīng)混合物在0℃攪拌30分鐘，并在室溫下攪拌12小時(shí)。用二氯甲烷(50ml)稀釋并用水和鹽水溶液洗滌。用無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮。殘余物用25％的在己烷中的乙酸乙酯進(jìn)行柱層析純化以得到固體狀的標(biāo)題化合物，其收率為86％(2.85g，6.9mmol)。該化合物的熔點(diǎn)為179.5-182.9℃。
步驟b(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-叔-丁氧羰基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-基甲基]-2-(3-甲硅烷基三甲氧基)-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺的制備在溶于二甲基甲酰胺(10.0ml)的Boc-衍生物(2.0g，4.8mmol)溶液中加入咪唑(1.2g，16.9mmol)和三甲基甲硅烷基氯化物(1.54ml，12.0mmol)，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。用水(50.0ml)稀釋并用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯層用水和鹽水溶液洗滌。干燥并濃縮。殘余物用15％的在己烷中的乙酸乙酯進(jìn)行柱層析純化以得到標(biāo)題化合物，其收率為85％(2.0g，4.1mmol)。
步驟c(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-叔-丁氧羰基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-6-基甲基]-2-環(huán)戊基-2-羥基-N-甲基-2-苯乙酰胺的制備0℃下，在溶于無(wú)水四氫呋喃(THF)(20.9ml)的三甲基甲硅烷基衍生物(2.0g，4.1mmol)和n-四丁銨碘化物(0.11gm，0.3mmol)的溶液中一次性加入氫化鈉(0.6g，12.3mmol)，所得溶液在0℃攪拌15分鐘，然后使其回復(fù)室溫并在室溫下攪拌1小時(shí)。再冷卻至0℃并逐滴加入在無(wú)水THF(2.0ml)中的甲基碘化物(2.3ml，36.8mmol)。在室溫下攪拌12小時(shí)。加入飽和的碳酸氫鈉水溶液(10.0ml)，分離有機(jī)層并用無(wú)水硫酸鈉干燥。濃縮，殘余物用15％的在己烷中的乙酸乙酯進(jìn)行柱層析純化以得到半固體狀的標(biāo)題化合物，其收率為61％(1.25g，2.49mmol)。
步驟d(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-6-基甲基]-2-環(huán)戊基-2-羥基-N-甲基-2-苯乙酰胺的制備在溶于乙醇(5.0ml)的以上步驟所得化合物(0.2g，0.4mmol)的溶液中逐滴加入濃HCl直到反應(yīng)混合物的pH為2。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。用飽和的碳酸氫鈉水溶液中和。減壓濃縮，將殘余物置于二氯甲烷(10.0ml)并用水和鹽水溶液洗滌。有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮以得到固體狀的標(biāo)題化合物，其收率為54％(0.07g，0.21mmol)。
熔點(diǎn)91.5℃1H NMR(CDCl3)光譜數(shù)據(jù)δ7.29-7.42(m，5H)，5.39(m，1H)，2.81-3.52(m，10H)，1.11-1.82(m，12H)IR(DCM)1621.9cm-1質(zhì)譜峰的m/e值為329(MH+)。
生物活性反射性配體結(jié)合測(cè)定如Moriya等所述(Life Sci.，1999；64(25)2351-2358)，分別用大鼠心臟和下頜下腺通過(guò)[3H]-N-甲基東良菪堿結(jié)合研究測(cè)定了被測(cè)化合物對(duì)M2和M3毒蠅堿受體亞型的親和力，進(jìn)行了以下較小修改。按以下修改進(jìn)行膜制備采用在4℃以500g進(jìn)行10分鐘的低速旋轉(zhuǎn)步驟；緩沖液是20mM HEPES，10mM EDTA，pH 7.4；在40,000g進(jìn)行高速旋轉(zhuǎn)，在任何旋轉(zhuǎn)之前都要使勻漿通過(guò)濾器。對(duì)測(cè)定條件進(jìn)行如下修改測(cè)定體積為250μL；培育時(shí)間為3小時(shí)；PE濃度為0.1％；所用濾器是Wallac的GF/B；所用閃爍體是Wallac的Supermix；閃爍體的量為500μL/孔；所用計(jì)數(shù)器是Wallac的1450 microbeta PLUS。
膜制備將下頜下腺和心臟分離并在處死后立即置于冰冷的均質(zhì)緩沖液(HEPES20mM，10mM EDTA，pH 7.4)。將組織均質(zhì)在10倍體積的均質(zhì)緩沖液中并通過(guò)兩層濕紗布過(guò)濾組織勻漿，將濾液在500g離心10分鐘。隨后將上清液在40,000g離心20分鐘。將所得濾出物重懸于同樣體積的測(cè)定緩沖液(HEPES 20mM，EDTA 5mM，pH 7.4)并于-70℃保存至測(cè)定。
配體結(jié)合測(cè)定將所述化合物溶解從稀釋于DMSO。將膜組織勻漿(150-250μg蛋白質(zhì))在250μl測(cè)定緩沖液(HEPES 20mM，pH 7.4)中于24-25℃培育3小時(shí)。在存在1μM阿托品時(shí)測(cè)定非特異性結(jié)合。通過(guò)在GF/B纖維濾器(Wallac)上真空過(guò)濾終止培育。然后用冰冷的50mM Tris HCl緩沖液(pH 7.4)洗滌濾器。將濾器干燥并計(jì)數(shù)保留在濾器上的結(jié)合放射活性。用G Pad Prism軟件通過(guò)非線性曲線擬合程序估算IC50和Kd。采用Cheng & Prusoff等式(Biochem Pharmacol，1973；223099-3108)從競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合研究計(jì)算抑制常數(shù)Ki的值，Ki＝IC50/(1+L/Kd)，其中，L是用于該試驗(yàn)的[3H]NMS的濃度。pKi＝-[log Ki]用分離的大鼠膀胱進(jìn)行功能試驗(yàn)方法用過(guò)量的烏拉坦將動(dòng)物安樂(lè)死，將整個(gè)膀胱分離，迅速切除并置于冰冷的Tyrode緩沖液，緩沖液的組成如下(mMol/L)NaCl 137；KCl 2.7；CaCl21.8；MgCl20.1；NaHCO311.9；NaH2PO40.4；葡萄糖5.55，同時(shí)在其中連續(xù)通入95％O2和5％CO2。
將膀胱切成縱向的條(3mm寬，5-6mm長(zhǎng))并放在10ml 30℃的器官浴槽中，其一端與組織夾的基底相連，另一半通過(guò)力位移探測(cè)換能器連接多道生理記錄儀。每個(gè)組織保持2g的恒定基礎(chǔ)張力并使其平衡1小時(shí)，期間每15分鐘更換一次PSS。在平衡期結(jié)束時(shí)用1μmol/L卡巴膽堿測(cè)定組織收縮反應(yīng)，連續(xù)測(cè)量2-3次。隨后可獲得對(duì)卡巴膽堿(10-9mol/L至3×10-5mol/L)的累積濃度反應(yīng)曲線。洗滌幾次后，一旦獲得基線，便可在NCE(在第二次CRC開(kāi)始前20分鐘加入NCE)存在時(shí)獲得累積濃度反應(yīng)曲線。
收縮結(jié)果表示為占對(duì)照E max的百分比。ED50值通過(guò)擬合非線性回歸曲線計(jì)算(Graph Pad Prism)。pKB值通過(guò)以下公式計(jì)算pKB＝-log[(拮抗劑的摩爾濃度/(劑量比-1))]，其中，劑量比＝拮抗劑存在時(shí)的ED50/拮抗劑不存在時(shí)的ED50。
用麻醉的兔子進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)研究了被測(cè)物質(zhì)對(duì)卡巴膽堿誘發(fā)的膀胱壓、心率和唾液分泌的變化的作用。用烏拉坦(1.5g/kg)麻醉重1.2-3kg的雄兔，并通過(guò)耳邊緣脈緩慢靜脈內(nèi)灌輸給藥。將導(dǎo)管插入以維持氣道開(kāi)放。用與Grass 7D型多道生理記錄儀相連的Statham P10 EZ壓力換能器由股動(dòng)脈記錄血壓。通過(guò)由血壓脈沖波引發(fā)的轉(zhuǎn)速記錄儀監(jiān)測(cè)心率。在另一側(cè)的股動(dòng)脈中插入導(dǎo)管以施用卡巴膽堿。通過(guò)股靜脈經(jīng)脈灌輸試驗(yàn)化合物和鹽水。
通過(guò)當(dāng)中剖腹術(shù)暴露膀胱并識(shí)別兩個(gè)輸尿管，小心分離并結(jié)扎。將輸尿管基向切開(kāi)以使尿液從腎臟自由流出。輕輕捏住膀胱頸以記錄輸尿管的走向并從鄰近組織分離。在膀胱中放入PE導(dǎo)管并結(jié)扎。將膀胱排干，隨后用15ml溫鹽水(37℃)充滿(mǎn)。使膀胱內(nèi)導(dǎo)管的另一頭通過(guò)Statham P10 EZ壓力換能器與Grass 7D型多道生理記錄儀相連以監(jiān)測(cè)膀胱壓。期間需進(jìn)行看護(hù)以保持暴露區(qū)域濕潤(rùn)和溫暖。保持30-60分鐘以使常數(shù)穩(wěn)定，隨后進(jìn)行手術(shù)。給予卡巴膽堿有將預(yù)稱(chēng)重的吸收棉紗在口腔內(nèi)放置2分鐘以估計(jì)唾液分泌反應(yīng)。
觀察了化合物對(duì)卡巴膽堿(1.5μg/kg，氣管內(nèi)給藥)誘導(dǎo)的血壓、心率和膀胱炎變化的作用。至少觀察了兩個(gè)穩(wěn)定的反應(yīng)。這些反應(yīng)被認(rèn)為是100％的。隨后研究了加大被測(cè)化合物或載體(i.v，12-15分鐘，在施用卡巴膽堿之前)劑量的影響。
膀胱壓、唾液分泌和激動(dòng)劑誘導(dǎo)的心動(dòng)過(guò)緩的變化表示為與預(yù)處理對(duì)照的變化百分比。用Graph Pad Prism軟件從非線性曲線擬合計(jì)算ID50值(抑制50％反應(yīng)所需的劑量)，得到S形劑量反應(yīng)曲線，該值以μg/kg表示。體外和體內(nèi)試驗(yàn)的結(jié)果列在表II和表III中。
表II
表III
權(quán)利要求
1.具有式I所示結(jié)構(gòu)的化合物 式I及其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物或代謝物，其中Ar代表芳基或含有1-2個(gè)雜原子的雜芳環(huán)，所述芳環(huán)或雜芳環(huán)可以是未被取代的或被1-3個(gè)獨(dú)立選自低級(jí)烷基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷基(C1-C4)、氰基、羥基、硝基、低級(jí)烷氧基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷氧基(C1-C4)、未取代的氨基、N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基、氨基羰基或N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基羰基的取代基取代；R1代表氫、羥基、羥基甲基、取代或未取代的氨基、烷氧基、氨甲?；螓u素；R2代表烷基、C3-C7環(huán)烷基環(huán)、C3-C7環(huán)烯基環(huán)、芳基、有1-2個(gè)雜原子的雜環(huán)或雜芳環(huán)；所述芳基、雜芳基、雜環(huán)或環(huán)烷基環(huán)可以是未被取代的或被1-3個(gè)獨(dú)立選自低級(jí)烷基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷基(C1-C4)、氰基、羥基、硝基、低級(jí)烷氧基羰基、鹵素、低級(jí)烷氧基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷氧基(C1-C4)、未取代的氨基、N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基、氨基羰基或N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基羰基的取代基取代；W代表(CH2)p，其中，p代表0-1；X代表氧、硫、-NR或無(wú)原子，其中，R代表氫或(C1-6)烷基；Y代表CHR5CO或(CH2)q，其中，R5代表氫或甲基，q代表0-4；Z代表氧、硫或NR10，其中，R10代表氫或C1-6烷基；Q代表-(CH2)n-，其中，n代表0-4，CHR8，其中，R8代表H、OH、C1-6烷基，C1-6烯基或C1-6烷氧基或Q代表CH2CHR9，其中，R9代表H、OH、低級(jí)烷基(C1-C4)或低級(jí)烷氧基(C1-C4)；和R6和R7獨(dú)立選自H、CH3、COOH、CONH2、NH2和CH2NH2。
2.如權(quán)利要求1所述的具有式II所示結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物或代謝物。 式II
3.如權(quán)利要求1所述的具有式III所示結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物或代謝物。 式III
4.如權(quán)利要求1所述的具有式IV所示結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物或代謝物，其中，r是1-4。 式IV
5.如權(quán)利要求1所述的具有式V所示結(jié)構(gòu)的化合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、對(duì)映體、N-氧化物或代謝物；其中，s代表1-2。 式V
6.選自以下物質(zhì)的化合物(2R，2S)(1α，5 ，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺(化合物1)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺鹽酸鹽(化合物2)；(2R)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基2-苯乙酰胺(化合物3)；(2R)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基2-苯乙酰胺鹽酸鹽(化合物4)；(2S)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基2-苯乙酰胺(化合物5)；(2S)-(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)戊基2-苯乙酰胺鹽酸鹽(化合物6)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-甲氧基-2-環(huán)戊基-2-苯乙酰胺(化合物7)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)庚基-2-苯乙酰胺(化合物8)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)丁基-2-苯乙酰胺(化合物9)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)丁基-2-苯乙酰胺酒石酸鹽(化合物10)；(2R)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-二氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺(化合物11)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3-氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺(化合物12)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-二氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺(化合物13)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-(3，3-二氟環(huán)戊基)-2-苯乙酰胺酒石酸鹽(化合物14)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2，2-二苯基醋酸鹽(化合物15)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2，2-二苯基乙酰胺(化合物16)；(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基-6-(氨基甲基)-基]-2-羥基-2-環(huán)己基-2-苯乙酰胺(化合物17)；和(2R，2S)(1α，5α，6α)-N-[3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-6-基甲基]-2-環(huán)戊基-2-羥基-N-甲基-2-苯乙酰胺(化合物18)。
7.一種藥物組合物，其包含治療有效量的如權(quán)利要求1、2、3、4、5或6所述的化合物以及藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
8.一種對(duì)患有呼吸、泌尿和胃腸系統(tǒng)疾病或病癥的動(dòng)物或人進(jìn)行治療或預(yù)防的方法，其中，所述疾病或病癥由毒蠅堿受體介導(dǎo)，所述方法包括給予所述動(dòng)物或人治療有效量的具有式I所示結(jié)構(gòu)的化合物， 式I其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物或代謝物，其中Ar代表芳基或含有1-2個(gè)雜原子的雜芳環(huán)，所述芳環(huán)或雜芳環(huán)可以是未被取代的或被1-3個(gè)獨(dú)立選自低級(jí)烷基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷基(C1-C4)、氰基、羥基、硝基、低級(jí)烷氧基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷氧基(C1-C4)、未取代的氨基、N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基、氨基羰基或N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基羰基的取代基取代；R1代表氫、羥基、羥基甲基、取代或未取代的氨基、烷氧基、氨甲?；螓u素；R2代表烷基、C3-C7環(huán)烷基環(huán)、C3-C7環(huán)烯基環(huán)、芳基、有1-2個(gè)雜原子的雜環(huán)或雜芳環(huán)；所述芳基、雜芳基、雜環(huán)或環(huán)烷基環(huán)可以是未被取代的或被1-3個(gè)獨(dú)立選自低級(jí)烷基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷基(C1-C4)、氰基、羥基、硝基、低級(jí)烷氧基羰基、鹵素、低級(jí)烷氧基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷氧基(C1-C4)、未取代的氨基、N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基、氨基羰基或N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基羰基的取代基取代；W代表(CH2)p，其中，p代表0-1；X代表氧、硫、-NR或無(wú)原子，其中，R代表氫或(C1-6)烷基；Y代表CHR5CO或(CH2)q，其中，R5代表氫或甲基，q代表0-4；Z代表氧、硫或NR10，其中，R10代表氫或C1-6烷基；Q代表-(CH2)n-，其中，n代表0-4，CHR8，其中，R8代表H、OH、C1-6烷基、C1-6烯基或C1-6烷氧基或Q代表CH2CHR9，其中，R9代表H、OH、低級(jí)烷基(C1-C4)或低級(jí)烷氧基(C1-C4)；和R6和R7獨(dú)立選自H、CH3、COOH、CONH2、NH2和CH2NH2。
9.如權(quán)利要求8所述的對(duì)患有呼吸、泌尿和胃腸系統(tǒng)疾病或病癥的動(dòng)物或人進(jìn)行治療或預(yù)防的方法，其中，所述疾病或病癥由毒蠅堿受體介導(dǎo)，所述方法包括給予所述動(dòng)物或人治療有效量的具有式II所示結(jié)構(gòu)的化合物，其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物或代謝物。 式II
10.如權(quán)利要求8所述的對(duì)患有呼吸、泌尿和胃腸系統(tǒng)疾病或病癥的動(dòng)物或人進(jìn)行治療或預(yù)防的方法，其中，所述疾病或病癥由毒蠅堿受體介導(dǎo)，所述方法包括給予所述動(dòng)物或人治療有效量的具有式III所示結(jié)構(gòu)的化合物，其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物、前藥或代謝物。 式III
11.如權(quán)利要求8所述的對(duì)患有呼吸、泌尿和胃腸系統(tǒng)疾病或病癥的動(dòng)物或人進(jìn)行治療或預(yù)防的方法，其中，所述疾病或病癥由毒蠅堿受體介導(dǎo)，所述方法包括給予所述動(dòng)物或人治療有效量的具有式IV所示結(jié)構(gòu)的化合物，其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物、前藥或代謝物，其中，r是1-4。 式IV
12.如權(quán)利要求8所述的對(duì)患有呼吸、泌尿和胃腸系統(tǒng)疾病或病癥的動(dòng)物或人進(jìn)行治療或預(yù)防的方法，其中，所述疾病或病癥由毒蠅堿受體介導(dǎo)，所述方法包括給予所述動(dòng)物或人至少一種治療有效量的具有式V所示結(jié)構(gòu)的化合物，其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物或代謝物，其中，s代表1-2。 式V
13.如權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述疾病或病癥是尿失禁、下泌尿道癥狀(LUTS)、支氣管哮喘、慢性梗阻性肺病(COPD)、肺纖維化、腸易激綜合征、肥胖癥、糖尿病或胃腸痙攣。
14.如權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述疾病或病癥是尿失禁、下泌尿道癥狀(LUTS)、支氣管哮喘、慢性梗阻性肺病(COPD)、肺纖維化、腸易激綜合征、肥胖癥、糖尿病或胃腸痙攣。
15.如權(quán)利要求10所述的方法，其中，所述疾病或病癥是尿失禁、下泌尿道癥狀(LUTS)、支氣管哮喘、慢性梗阻性肺病(COPD)、肺纖維化、腸易激綜合征、肥胖癥、糖尿病或胃腸痙攣。
16.如權(quán)利要求11所述的方法，其中，所述疾病或病癥是尿失禁、下泌尿道癥狀(LUTS)、支氣管哮喘、慢性梗阻性肺病(COPD)、肺纖維化、腸易激綜合征、肥胖癥、糖尿病或胃腸痙攣。
17.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述疾病或病癥是尿失禁、下泌尿道癥狀(LUTS)、支氣管哮喘、慢性梗阻性肺病(COPD)、肺纖維化、腸易激綜合征、肥胖癥、糖尿病或胃腸疾病。
18.對(duì)患有呼吸、泌尿和胃腸系統(tǒng)疾病或病癥的動(dòng)物或人進(jìn)行治療或預(yù)防的方法，其中，所述疾病或病癥由毒蠅堿受體介導(dǎo)，所述方法包括給予所述動(dòng)物或人治療有效量的如權(quán)利要求7所述的藥物組合物。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中，所述疾病或病癥是尿失禁、下泌尿道癥狀(LUTS)、支氣管哮喘、慢性梗阻性肺病(COPD)、肺纖維化、腸易激綜合征、肥胖癥、糖尿病或胃腸疾病。
20.一種制備式I的化合物 式I即其藥學(xué)上可接受的鹽、藥學(xué)上可接受的溶劑合物、酯、對(duì)映體、非對(duì)映體、N-氧化物、多晶型物或代謝物的方法，其中Ar代表芳基或含有1-2個(gè)雜原子的雜芳環(huán)，所述芳環(huán)或雜芳環(huán)可以是未被取代的或被1-3個(gè)獨(dú)立選自低級(jí)烷基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷基(C1-C4)、氰基、羥基、硝基、低級(jí)烷氧基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷氧基(C1-C4)、未取代的氨基、N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基、氨基羰基或N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基羰基的取代基取代；R1代表氫、羥基、羥基甲基、取代或未取代的氨基、烷氧基、氨甲酰基或鹵素；R2代表烷基、C3-C7環(huán)烷基環(huán)、C3-C7環(huán)烯基環(huán)、芳基、有1-2個(gè)雜原子的雜環(huán)或雜芳環(huán)；所述芳基、雜芳基、雜環(huán)或環(huán)烷基環(huán)可以是未被取代的或被1-3個(gè)獨(dú)立選自低級(jí)烷基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷基(C1-C4)、氰基、羥基、硝基、低級(jí)烷氧基羰基、鹵素、低級(jí)烷氧基(C1-C4)、低級(jí)全鹵烷氧基(C1-C4)、未取代的氨基、N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基、氨基羰基或N-低級(jí)烷基(C1-C4)或-芳基氨基羰基的取代基取代；W代表(CH2)p，其中，p代表0-1；X代表氧、硫、-NR或無(wú)原子，其中，R代表氫或(C1-6)烷基；Y代表CHR5CO或(CH2)q，其中，R5代表氫或甲基，q代表0-4；Z代表氧、硫或NR10，其中，R10代表氫或C1-6烷基；Q代表-(CH2)n-，其中，n代表0-4；CHR8，其中，R8代表H、OH、C1-6烷基、C1-6烯基或C1-6烷氧基；或Q代表CH2CHR9，其中，R9代表H、OH、低級(jí)烷基(C1-C4)或低級(jí)烷氧基(C1-C4)；和R6和R7獨(dú)立選自H、CH3、COOH、CONH2、NH2或CH2NH2；所述方法包括(a)使式VII的化合物與式VI的化合物反應(yīng) 式VII 式VI以得到受保護(hù)的式VIII的化合物，其中，Ar、R1、R2、W、X、Y、Z和Q如上定義，P是氨基保護(hù)基 式VIII(b)在去保護(hù)劑存在時(shí)將式VIII的化合物去保護(hù)以得到式I的化合物，其中，Ar、R1、R2、W、X、Y、Z和Q如上定義， 式I
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中，P是任何氨基保護(hù)基，其選自芐基和t-丁氧羰基。
22.如權(quán)利要求20所述的方法，其中，式VI的化合物和式VII的化合物反應(yīng)得到式VIII的化合物是在選自1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸(EDC)和1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)的縮合劑存在時(shí)進(jìn)行的。
23.如權(quán)利要求20所述的方法，其中，式VI的化合物與式VII的化合物的反應(yīng)是在合適的選自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、甲苯和二甲苯的極性的非質(zhì)子溶劑中進(jìn)行的。
24.如權(quán)利要求20所述的方法，其中，式VI的化合物與式VII的化合物的反應(yīng)在0-140℃下進(jìn)行。
25.如權(quán)利要求20所述的方法，其中，式VIII的化合物的去保護(hù)是用選自碳上的鈀，三氟乙酸(TFA)和鹽酸的去保護(hù)劑進(jìn)行的。
26.如權(quán)利要求20所述的方法，其中，將式VIII的化合物去保護(hù)得到式I的化合物是在合適的選自甲醇，乙醇，四氫呋喃和乙腈的有機(jī)溶劑中進(jìn)行的。
全文摘要
本發(fā)明一般涉及毒蠅堿受體拮抗劑，除其它用途外，它還可被用于治療呼吸、泌尿和胃腸系統(tǒng)由毒蠅堿受體介導(dǎo)的各種疾病。特別地，本發(fā)明涉及氮雜二環(huán)化合物的衍生物，例如，包括6－取代的氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷和2，4，6－三取代的衍生物。本發(fā)明還涉及含有該化合物的藥物組合物以及治療由毒蠅堿受體介導(dǎo)的疾病的方法。
文檔編號(hào)A61P1/14GK1681784SQ03821130
公開(kāi)日2005年10月12日 申請(qǐng)日期2003年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月8日
發(fā)明者M·沙爾曼, A·邁和塔, P·K·S·薩爾馬, S·J·謝提, S·德哈馬拉筒, N·庫(kù)馬, A·V·西拉姆科提, A·庫(kù)格 申請(qǐng)人:蘭貝克賽實(shí)驗(yàn)室有限公司