專利名稱：治療慢性阻塞性肺部疾病的二氮雜并吲哚的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及二氮雜并吲哚治療慢性阻塞性肺部疾病(下文稱COPD)的用途。
COPD是一種以氣流障礙為特征的慢性、緩慢進(jìn)行性疾病(與氣道炎癥和主要的中性白細(xì)胞含量有關(guān))。大多肺功能損害是永久性的(雖然透過支氣管擴(kuò)張劑治療可產(chǎn)生某些可能性)。這種疾病還被稱為COPD，然而在過去還單獨(dú)或聯(lián)合使用過多種臨床術(shù)語。這些術(shù)語包括肺氣腫、慢性支氣管炎、慢性氣流限制、慢性氣道阻塞、不可逆性阻塞性氣道疾病、慢性阻塞性氣道疾病和慢性阻塞性肺部疾病。
COPD的臨床表現(xiàn)以嚴(yán)重程度而不同，從非病殘的單純性慢性支氣管炎到慢性呼吸衰竭的嚴(yán)重病殘狀態(tài)。COPD患者的主要臨床特征為慢性支氣管炎和/或肺氣腫(與氣道嚴(yán)重和/或主要的中性白細(xì)胞含量有關(guān))。
雖然COPD目前不是十分流行，但可以確定在發(fā)達(dá)國家，尤其是美國，COPD是第四大導(dǎo)致死亡的原因。另外，預(yù)期在未來、在發(fā)達(dá)的西方國家和其它國家，COPD問題都將呈增長趨勢。預(yù)期在未來十年內(nèi)，在東亞國家該問題將增長3倍，因?yàn)檫@些國家中男性的吸煙比率較高。
因此，仍需要COPD的有效治療方法。
在過去的數(shù)年中，第二代選擇性磷酸二酯酶4抑制劑(PDE4抑制劑)被認(rèn)為是COPD的可能有效的治療方法。特別參見Doherty，當(dāng)代化學(xué)生物學(xué)觀點(diǎn)(Current Opinion in Chemical Biology)1999，3466-473；Mohammed等，抗炎和免疫調(diào)節(jié)研究藥物(Anti-inflammatory& Immunomodulatory Investigational Drugs)1999 1(1)21-28；Schmidt等，臨床和實(shí)驗(yàn)變態(tài)反應(yīng)(Clinical and ExperimentalAllergy)，29，增刊2，99-109。
Cilomilast(Ariflo)，一種口服的活性PDE4抑制劑，被認(rèn)為可用于COPD的治療。特別參見Nieman等，Am J Respir Crit Care Med1998，157A413；Underwood等，歐洲呼吸雜志(Eur Respir J)1998，1286s；Compton等，Am J Respir Crit Care Med 1999，159A522。還參見Compton在歐洲呼吸協(xié)會會議(European Respiratory SocietyMeeting，Madrid，October 12，1999)上的口頭發(fā)言，以及Torphy和Underwood在第四次世界炎癥會議(4th World Congress onInflammation，Paris，June 27-30，1999)的口頭發(fā)言。該化合物目前正處于COPD的III期臨床試驗(yàn)中。
但是，用于治療COPD的cilomilast存在某些缺點(diǎn)。據(jù)報(bào)告，當(dāng)cilomilast以20mg的單次劑量給藥時(shí)，產(chǎn)生相關(guān)的副作用，例如惡心和嘔吐。參見Murdoch等，Am J Respir Crit Care Med 1998，157A409。在如此低的劑量就表現(xiàn)出的副作用將使cilomilast的應(yīng)用受到限制，排除了每次單次劑量的形式，給患者帶來了不便。
本發(fā)明涉及一類已知作為PED4抑制劑的二氮雜并吲哚化合物用于治療COPD的用途。這些化合物不具有副作用，尤其是對心臟或消化系統(tǒng)不具有副作用(參見Burnouf等，醫(yī)藥化學(xué)雜志(Journal ofMedicinal Chemistry)(2000)，434850-4867)，并且在更低劑量時(shí)比cilomilast更有效。
本發(fā)明涉及式(I)的[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚或其可藥用鹽用于制備治療慢性阻塞性肺部疾病或COPD的藥物的應(yīng)用， 其中-A是芳基或含氮雜芳基，所述基團(tuán)各自可任選地被一至三個(gè)獨(dú)立地選自下列的基團(tuán)取代鹵素、低級烷基、低級鹵代烷基、低級烷氧基、環(huán)烷氧基、氨基和低級烷基羰基氨基或烷氧羰基氨基；-B是羥基或氨基，其本身可任選被取代。
本發(fā)明還提供治療COPD的方法，包括給需此治療的人施用有效量的式I的二氮雜并吲哚。
這些化合物作為PDE4抑制劑的用途和它們的制備方法公開于WO97/36905，該文獻(xiàn)內(nèi)容引入本文中，以供參考。在本發(fā)明中，這些二氮雜并吲哚被用作活性成分。
在下面的說明書中參照附圖，更詳細(xì)地公開了本發(fā)明，其中附

圖1顯示了在Wistar大鼠中，作為施用的(3R)N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫-[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基)-煙酰胺的量的函數(shù)的氣道(airway)中的中性白細(xì)胞數(shù)量和對LPS誘發(fā)的肺部中性白細(xì)胞增多癥的百分抑制。附圖2顯示了在Wistar大鼠中，作為施用的cilomilast(順-4-氰基-4-[3-(環(huán)戊氧基)-4-甲氧基苯基]環(huán)己烷羧酸)的量的函數(shù)的氣道中的中性白細(xì)胞數(shù)量和對LPS誘發(fā)的肺部中性白細(xì)胞增多癥的百分抑制。
本發(fā)明尤其涉及下式(I)的[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚類化合物、其外消旋體或異構(gòu)體形式，尤其是由二氮雜并吲哚-4-酮環(huán)的碳3決定的構(gòu)型的那些，及其可藥用衍生物用于治療COPD的用途， 其中-A是芳基或含氮雜芳基，所述基團(tuán)各自可任選地被一至三個(gè)獨(dú)立地選自下列的基團(tuán)取代鹵素、低級烷基、低級鹵代烷基、低級烷氧基、環(huán)烷氧基、氨基和低級烷羰基氨基或烷氧羰基氨基；-B是1)-OR1，R1是H或R4，2)-NR2R3，R2是-C(NH)NH2并且R3是-H，3)-NR2R3，R2是R4并且R3是-H，4)-NR2R3，R2和R3各自獨(dú)立地是-H或低級烷基，或5)-NR2R3，R2和R3與和它們相連的氮原子一起形成飽和的5至7元雜環(huán)，該雜環(huán)可包含不與氮原子直接相連的第二個(gè)雜原子氧、硫或氮；-R4是1)-CH2-CO2H，2)-CO-(CH2)p-CO2H，3)-CO-A，其中A定義如上，4)-CO-CH＝CH-CO2H，5)-CO-(CH2)n-CH3，n是等于或大于0且小于或等于18的整數(shù)，6)-CO-(CH2-O-CH2)p-CH2-O-CH3，7)-CO-(CH2-O-CH2)p-CO2H，8)-(CH2)P-NR5R6，R5和R6獨(dú)立地是-H或低級烷基，或9)-(CH2)p-NR5R6，R5和R6與和它們相連的氮原子一起形成飽和的5至7元雜環(huán)，該雜環(huán)可包含不與氮原子直接相連的第二個(gè)雜原子氧、硫或氮；-p是等于2、3或4的整數(shù)。
其中B是OR1或NR2R3，而R1、R2和R3表示氫的一組式(I)化合物是優(yōu)選的。
有利地優(yōu)選的另一組產(chǎn)物(I)包括那些化合物，其中A是被1-3個(gè)獨(dú)立選自下列的基團(tuán)取代的芳基鹵素、氨基、低級烷氧羰基氨基或烷氧基；以及一組產(chǎn)物(I)，其中A是含1-2個(gè)氮原子的單環(huán)雜芳基或含1-4個(gè)氮原子的雙環(huán)雜芳基。
更具體地說，特別令人感興趣的用于COPD的一組化合物包括式I化合物，其中B是NH2，A是被1-3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素和氨基的基團(tuán)取代的芳基或含1-2個(gè)氮原子的雜芳基。
在上下文中-芳基是指苯基或萘基；-含氮雜環(huán)是指含至少一個(gè)氮原子的不飽和單環(huán)或多環(huán)，優(yōu)選含1-4個(gè)氮原子的5或6元單雜環(huán)，或是指含1-4個(gè)氮原子的不飽和稠合雜環(huán)，所述環(huán)的正電性氮原子任選被甲基化或乙基化；-鹵素是指氟、氯、溴或碘；-對于含烷基的基團(tuán)，低級是指直鏈或支鏈的并且含1-4個(gè)碳原子的烷基，或者表示環(huán)丙基甲基；-環(huán)烷基是指環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基；-鹵代烷基是指一、二或三鹵代烷基。
用于本發(fā)明的化合物包括式I化合物的溶劑化物、水合物、可藥用鹽和其多晶型物(不同的晶格描述詞)，它們是其可藥用衍生物。
具有堿性部分的式(I)化合物的可藥用鹽是指式(I)化合物的酸加成鹽，它們可由無毒的無機(jī)酸或有機(jī)酸形成，例如由氫溴酸、鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯甲酸、富馬酸、甲磺酸和羥乙磺酸等形成。本發(fā)明也包括衍生物(I)的各種季銨鹽。此外，具有酸性部分的式(I)化合物的可藥用是指可由無毒的無機(jī)堿或有機(jī)堿形成的常用鹽，例如堿金屬和堿土金屬的氫氧化物(鈉、鉀、鎂和鈣鹽)、胺(二芐基亞乙基二胺、三甲胺、哌啶、吡咯烷和芐胺等)或季銨氫氧化物，例如四甲基氫氧化銨(還可參見，Berge S.M.等，“藥用鹽”，1997，J.Pharm.Sci.661-19，本文中引述該文獻(xiàn)作為參考)。
本發(fā)明還包括式(I)化合物的前藥的用途，例如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所想到的(參見Bundgaard等，Acta Pharm.Suec.，1987；24233-246)。
根據(jù)Cahn-Ingold-Prelog規(guī)則，其中在相對于二氮雜環(huán)“3-酮”羰基的α位的非對稱碳原子具有(R)絕對構(gòu)型的式(I)的二氮雜并吲哚通常是優(yōu)選的。
更具體地是，下列化合物優(yōu)選用于制備治療COPD的藥物-(3R)-異喹啉-3-羧酸(9-羥基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；-(3R)-4-叔丁氧羰基氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]苯甲酰胺；-(3R)-4-氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]-3，5-二氯苯甲酰胺；-(3R)-4-氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]-5-氯-2-甲氧基苯甲酰胺；-(3R)-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]-異煙酰胺；-(3R)-3-叔丁氧羰基氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]異煙酰胺；-(3R)-異喹啉-3-羧酸(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；-(3R)-喹啉-3-羧酸(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；-(3R)-4，7-二甲基吡唑并[5，1-c][1，2，4]三嗪-3-羧酸(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；-(3R)-4-氨基-3，5-二氯-N-(9-二甲氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基)苯甲酰胺；-(3R)-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基)-2-苯并呋喃甲酰胺；-(3R)-4，7-二甲基吡唑并[5，1-c][1，2，4]三嗪-3-羧酸[4-氧代-1-苯基-9-(吡咯烷-1-基)-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；-吡啶-2-羧酸(3R)-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；
-吡嗪-2-羧酸(3R)-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；-(3R)-4-氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]苯甲酰胺；和-(3R)-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]煙酰胺。
最優(yōu)選的化合物是-(3R)-4-氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]-3，5-二氯苯甲酰胺；-(3R)-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]-異煙酰胺；-(3R)-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]-煙酰胺；和-(3R)-4-氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]苯甲酰胺。
尤其優(yōu)選的式(I)化合物是-(3R)-4-氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]苯甲酰胺；和-(3R)-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]-煙酰胺(化合物1)。
這些化合物相應(yīng)于WO97/36905的實(shí)施例11和3的化合物。
用于本發(fā)明的化合物可按照WO97/36905中公開的方法制備；本領(lǐng)域技術(shù)人員可參考該文獻(xiàn)制備本發(fā)明化合物。
本發(fā)明的產(chǎn)物以組合物形式給藥，所述給藥根據(jù)所治療的適應(yīng)癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度適當(dāng)進(jìn)行。對于人的每日劑量通常為2mg-1g產(chǎn)物，該劑量可一次或分次服用。將組合物制備成與期望給藥的途徑相順應(yīng)的形式，例如片劑、包衣片、膠囊、漱口劑、氣霧劑、吸入粉末、栓劑、凝膠劑或懸浮液。這些組合物可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的方法制備，它們含有0.5-60％(重量)的活性成分(式I化合物)和40-99.5％(重量)與活性成分及目的組合物的物理形式相適應(yīng)和相容的藥物賦形劑或載體。
對于急性COPD適應(yīng)癥的治療，劑量通常為每天約20mg-約500mg。優(yōu)選劑量為每天約50mg-約300mg(對于約70kg的成人而言)。
所述組合物優(yōu)選每日服用兩次。所述組合物更優(yōu)選每日服用一次。
當(dāng)考慮到慢性疾病，例如COPD的治療時(shí)，給藥頻度對于患者舒適性而言是重要的，因?yàn)檫@些患者將接受長期規(guī)律的治療。
cilomilast在人中的清除半衰期約為8小時(shí)(Torphy等，Pulmonary Pharmacology & Therapeutics(1999)12，131-135)。由于已知相對較短的半衰期，每日一次給藥cilomilast用于治療COPD似乎不可能實(shí)現(xiàn)在20mg劑量時(shí)表現(xiàn)出的副作用排除了高劑量單次給藥；因此可能優(yōu)選每日給藥兩次。
測定了化合物1在人中的半衰期給健康自愿者單次口服化合物1，劑量為1-25mg。出人意料地是，所有劑量下的平均末端半衰期都相近并且相當(dāng)?shù)亻L，為13.9-17.1小時(shí)(平均15.4小時(shí))。該半衰期表明了化合物1可每日給藥一次。
下面以舉例方式描述片劑組合物及其制備
將乳糖、微晶纖維素和羧甲基淀粉鈉與活性物質(zhì)混合。用適當(dāng)濃度的聚乙烯吡咯烷酮水或醇溶液潤濕并制粒。干燥并調(diào)至顆粒的粒徑分布。與硬脂酸鎂均勻混合。再壓制成每片200mg的片劑。
固體形式制劑包括粉末、片劑、分散顆粒、膠囊、扁囊劑和栓劑。固體載體可以是一種或多種物質(zhì)，它們可作為稀釋劑、芳香劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑或片劑崩解劑；也可以是包囊材料。粉末中，載體是固體細(xì)粉，它與活性成分細(xì)粉混合。片劑中，活性成分以適宜比例與具有所需粘合性質(zhì)的載體混合并壓制成所需的形狀和尺寸。對于栓劑的制備，首先熔融低熔點(diǎn)蠟，例如脂肪酸甘油酯與椰子油的混合物，然后通過，例如攪拌，使活性成分分散于其中。而后將熔融的均勻混合物傾入方便大小的模具中，使其冷卻并固化。粉末、片劑、扁囊劑或囊化形式的膠囊優(yōu)選含有5％-約70％的活性成分。適宜的載體是碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、乳糖、蔗糖、果膠、糊劑、淀粉、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點(diǎn)蠟和椰子油等。
片劑、粉末、扁囊劑和膠囊可用作適于口服的固體形式。藥物也可以噴霧劑形式(裝在安有適合閥門的壓力容器或安有計(jì)量閥門的非壓力容器中)傳遞。
液體形式制劑包括溶液、懸浮液和乳液。
作為適于非胃腸給藥的液體制劑實(shí)例，可例舉活性化合物的無菌的水溶液或水-丙二醇溶液。液體制劑也可配制成聚乙二醇水溶液的溶液。
口服水溶液可如下制備在水中溶解活性成分并按需加入適宜的著色劑、芳香劑、穩(wěn)定劑和增稠劑?？诜褂玫乃畱腋∫嚎扇缦轮苽鋵⒒钚猿煞旨?xì)粉與粘性物質(zhì)，例如天然合成的膠、樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉，和藥劑領(lǐng)域已知的其它懸浮劑一起分散到水中。
藥物制劑優(yōu)選是單位劑量形式。以單位劑量形式，制劑可分為含適宜量藥物的單位劑型。單位劑型可以是包裝制劑，包含獨(dú)立數(shù)量包裝制劑，例如包裝片劑、膠囊和小瓶或安瓿中的粉末。單位劑型也可以是膠囊、扁囊劑或片劑本身，或者它可以是適宜數(shù)量的其包裝形式。
下列實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行非限制性說明。
用于評價(jià)本發(fā)明化合物治療COPD有用性的模型是中性白細(xì)胞增多癥模型。通過使大鼠或小鼠與脂多糖(LPS)氣霧劑接觸誘發(fā)中性白細(xì)胞增多癥。實(shí)施例1用LPS氣霧劑誘發(fā)C57b1/6小鼠的中性白細(xì)胞增多癥1.1實(shí)驗(yàn)方案給藥化合物1在動物清醒時(shí)，通過口服途徑對動物施用化合物1。與LPS接觸給藥1小時(shí)后，將小鼠放入有機(jī)玻璃盒中(一盒至多25只小鼠)，以100μg/ml的量給予LPS氣霧劑(Escherichia coli，serotype055B5)1小時(shí)。對照小鼠不給予LPS氣霧劑。麻醉和氣管切開術(shù)與LPS接觸后24小時(shí)，以15ml/kg的速率腹膜內(nèi)注射0.6％戊巴比妥鈉麻醉動物。施行氣管切開術(shù)并插入氣管插管。支氣管肺泡的洗滌為回收氣道腔中存在的細(xì)胞，用1ml的注射器，用0.3ml體積的PBS溶液(37℃)連續(xù)洗滌6次。將如此回收的洗滌液貯存于4℃冰箱中。支氣管肺泡洗滌液的細(xì)胞組成測定用庫爾特粒度儀計(jì)數(shù)支氣管肺泡洗滌液中含有的細(xì)胞。先通過離心(Cytospin)使樣品沉著在顯微鏡載波片上，然后用MayGrunwald-Gismsa染料對樣品進(jìn)行染色。根據(jù)形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，在顯微鏡(×100)下區(qū)分計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)主要的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)是中性白細(xì)胞的數(shù)量/毫升支氣管肺泡洗滌液。以105(E+05)細(xì)胞/毫升表示。結(jié)果表達(dá)對每個(gè)實(shí)驗(yàn)組，計(jì)算支氣管肺泡洗滌液中中性白細(xì)胞數(shù)量的算術(shù)平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)。以下列方式計(jì)算百分抑制
陽性對照組中細(xì)胞濃度的算術(shù)平均，該值被認(rèn)為是0％抑制。
治療(或參考)組中細(xì)胞濃度的算術(shù)平均。
如果合適，用“δ(Delta)方法”或“Fieller方法”i，ii和iii(Armitage&al，1997；Feuerstein & al，1997；Hubert & al，1988)計(jì)算百分抑制率的90％置信區(qū)間。1.2結(jié)果這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明式I化合物，尤其是化合物1強(qiáng)烈地抑制LPS誘發(fā)的小鼠肺部的中性白細(xì)胞增多癥。實(shí)施例2用LPS氣霧劑誘發(fā)Wistar大鼠的中性白細(xì)胞增多癥2.1實(shí)驗(yàn)方案給藥治療物質(zhì)在動物清醒時(shí)，通過口服途徑對動物施用化合物1或cilomilast。與LPS接觸給藥1小時(shí)后，將小鼠放入有機(jī)玻璃盒中，以200μg/ml的量給予LPS氣霧劑(Escherichia coli，serotype 055B5)1小時(shí)。對照小鼠不給予LPS氣霧劑。在附圖1和2中對照組被稱為“假(sham)”。麻醉和氣管切開術(shù)與LPS接觸后2小時(shí)，以1ml/kg的速率腹膜內(nèi)注射6％戊巴比妥鈉麻醉動物。施行氣管切開術(shù)并插入氣管插管。支氣管肺泡的洗滌為回收氣道腔中存在的細(xì)胞，用5ml的注射器，用5ml體積的0.9％ M NaCl+EDTA溶液(37℃)連續(xù)洗滌3次。將如此回收的洗滌液貯存于4℃冰箱中。支氣管肺泡洗滌液的細(xì)胞組成測定參見實(shí)施例1。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參見實(shí)施例1。結(jié)果表達(dá)參見實(shí)施例12.2結(jié)果如附圖1所示，化合物1強(qiáng)烈地并顯著地抑制LPS誘發(fā)的Wistar大鼠肺部的中性白細(xì)胞增多癥，在10mg/kg劑量下的百分抑制率為74％。
將這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果與在相同模型中用cilomilast(Ariflo)獲得的結(jié)果(附圖2)進(jìn)行比較，表明在相同劑量下，化合物1(在30mg/kg劑量下的百分抑制率為80％)比cilomilast更有效。尤其是在10mg/kg的劑量下，化合物1的有效性比相同劑量的cilomilast高兩倍。換句話說，10mg/kg化合物1的活性(百分抑制率為74％)與30mg/kgcilomilast的相同(百分抑制率為74％)。實(shí)施例3COPD患者全血中LPS誘發(fā)的TNFα產(chǎn)生的體外抑制該研究的目的是比較三種選擇性PDE4抑制劑(化合物1、咯利普蘭(rolipram)(4-[3-(環(huán)戊氧基)-4-甲氧基-苯基]-2-吡咯烷酮)和cilomilast)在降低COPD患者的全血中脂多糖(LPS)誘發(fā)的TNFα釋放的活性。該研究包括按照ATS規(guī)則iv診斷的13名COPD患者，測定LPS對TNFα產(chǎn)生的的濃度-效應(yīng)(n＝6)及化合物、咯利普蘭和cilomilast的IC50值(n＝7)。3.1實(shí)驗(yàn)方案在肝素試管中收集血液(15ml/患者)并分配到96孔微滴板(250μl/孔)中。
在37℃培養(yǎng)30分鐘后，在不同的孔中，加入25μl濃度增高的試驗(yàn)或載體化合物。在37℃下使微滴板保溫30分鐘，然后以50μg/ml的量加入25μl LPS(E.coli)(刺激的孔)或25μl無菌鹽水(未刺激的孔)。使微滴板在37℃保溫22-24小時(shí)。
將125μl上清血漿輕輕地轉(zhuǎn)移到無菌96孔微滴板中并貯存于-80℃直至進(jìn)行TNFα分析。然后通過ELISA分析測定TNFα的產(chǎn)生。3.2結(jié)果與LPS保溫過夜后，在50μg/ml LPS下，全血TNFα水平以濃度依賴方式從檢測不到的基線水平增至8.1±2.0ng/ml的均值水平。與化合物1的預(yù)培養(yǎng)對TNFα釋放產(chǎn)生了劑量依賴性抑制作用，其IC50值為1.3±0.7μM?？├仗m的IC50值為2.8±0.9μM，cilomilast的IC50值大于10μM。這些數(shù)據(jù)表明式I化合物體外抑制LPS誘發(fā)的COPD患者中TNFα產(chǎn)生的作用優(yōu)于咯利普蘭和cilomilast，可用于該疾病中的抗炎治療。
文獻(xiàn)i. ARMITAGE P.& COLTON T.(1998).Fieller’s Theorem.生物統(tǒng)計(jì)學(xué)百科全書(Encyclopedia of Biostatistics)，Volume 2，pp.1515-1516.Wiley，New York.
ii. FEUERSTEIN T.J.，ROSSNER R.& SCHUMACHER M.(1997).如何以對照平均值的百分?jǐn)?shù)表示效應(yīng)平均值(How to Express an EffectMean as Percentage of a Control Mean.)藥理學(xué)和毒理學(xué)方法雜志(Journal of Pharmacology and Toxicology Methods)37，pp.187-190.
iii. HUBERT J.J.，BOHIDARD N.R.& PEACE K.E.(1988)。藥物開發(fā)的生物藥物統(tǒng)計(jì)學(xué)，評價(jià)藥理活性部分(BiopharmaceuticalStatistics for Drug Development，Assessment of PharmacologicalActivity section)，pp.83-148.Karl peace，New York.
iv. Am.J.Respir.Crit.Care Med.1995；152S77-S120.
權(quán)利要求
1.下式(I)的二氮雜并吲哚類化合物、其外消旋體或異構(gòu)體形式，尤其是由二氮雜并吲哚-4-酮環(huán)的碳3決定的構(gòu)型的那些，及其可藥用衍生物在制備治療慢性阻塞性肺部疾病藥物中的應(yīng)用， 其中-A是芳基或含氮雜芳基，所述基團(tuán)各自可任選地被一至三個(gè)獨(dú)立地選自下列的基團(tuán)取代鹵素、低級烷基、低級鹵代烷基、低級烷氧基、環(huán)烷氧基、氨基和低級烷羰基氨基或烷氧羰基氨基；-B是1)-OR1，R1是H或R4，2)-NR2R3，R2是-C(NH)NH2并且R3是-H，3)-NR2R3，R2是R4并且R3是-H，4)-NR2R3，R2和R3各自獨(dú)立地是-H或低級烷基，或5)-NR2R3，R2和R3與和它們相連的氮原子一起形成飽和的5至7元雜環(huán)，該雜環(huán)可包含不與氮原子直接相連的第二個(gè)雜原子氧、硫或氮；-R4是1)-CH2-CO2H，2)-CO-(CH2)p-CO2H，3)-CO-A，其中A定義如上，4)-CO-CH＝CH-CO2H，5)-CO-(CH2)n-CH3，n是等于或大于0且小于或等于18的整數(shù)，6)-CO-(CH2-O-CH2)p-CH2-O-CH3，7)-CO-(CH2-O-CH2)p-CO2H，8)-(CH2)p-NR5R6，R5和R6獨(dú)立地是-H或低級烷基，或9)-(CH2)p-NR5R6，R5和R6與和它們相連的氮原子一起形成飽和的5至7元雜環(huán)，該雜環(huán)可包含不與氮原子直接相連的第二個(gè)雜原子氧、硫或氮；-p是等于2、3或4的整數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于考慮在相對于二氮雜環(huán)羰基的α位的非對稱碳原子，根據(jù)Cahn-Ingold-Prelog規(guī)則，式(I)的二氮雜并吲哚類化合物具有(R)絕對構(gòu)型。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的應(yīng)用，其特征在于在式(I)的二氮雜并吲哚中，B是OR1或NR2R3，其中R1、R2和R3是氫。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的應(yīng)用，其特征在于在式(I)的二氮雜并吲哚中，A是被1-3個(gè)獨(dú)立選自下列的基團(tuán)取代的芳基鹵素、氨基、低級烷氧羰基氨基或烷氧基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的應(yīng)用，其特征在于在式(I)的二氮雜并吲哚中，A是含1-2個(gè)氮原子的單環(huán)含氮雜芳基或含1-4個(gè)氮原子的雙環(huán)含氮雜芳基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的應(yīng)用，其特征在于雜芳基被氨基、低級烷基、低級烷氧羰基氨基或烷基羰基氨基取代。
7.根據(jù)權(quán)利要求4的應(yīng)用，其特征在于在式(I)的二氮雜并吲哚中，B是NH2，A是被1-3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素和氨基的取代基取代的芳基。
8.根據(jù)權(quán)利要求5的應(yīng)用，其特征在于在式(I)的二氮雜并吲哚中，B是NH2，A是含1-2個(gè)氮原子的單環(huán)雜芳基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的應(yīng)用，其特征在于式(I)的二氮雜并吲哚是下列化合物-(3R)-異喹啉-3-羧酸(9-羥基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；-(3R)-4-叔丁氧羰基氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]苯甲酰胺；-(3R)-4-氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]3，5-二氯苯甲酰胺；-(3R)-4-氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]-5-氯-2-甲氧基苯甲酰胺；-(3R)-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]-異煙酰胺；-(3R)-3-叔丁氧羰基氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]異煙酰胺；-(3R)-異喹啉-3-羧酸(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；-(3R)-喹啉-3-羧酸(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；-(3R)-4，7-二甲基吡唑并[5，1-c][1，2，4]三嗪-3-羧酸(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；-(3R)-4-氨基-3，5-二氯-N-(9-二甲氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基)苯甲酰胺；-(3R)-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基)-2-苯并呋喃甲酰胺；-(3R)-4，7-二甲基吡唑并[5，1-c][1，2，4]三嗪-3-羧酸[4-氧代-1-苯基-9-(吡咯烷-1-基)-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；-吡啶-2-羧酸(3R)-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；-吡嗪-2-羧酸(3R)-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]酰胺；-(3R)-4-氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]苯甲酰胺；和-(3R)-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]煙酰胺。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的應(yīng)用，其特征在于式(I)的二氮雜并吲哚是下列化合物-(3R)-4-氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]-3，5-二氯苯甲酰胺；-(3R)-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]-異煙酰胺；-(3R)-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]-煙酰胺；和-(3R)-4-氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]苯甲酰胺。
11.(3R)-4-氨基-N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]苯甲酰胺在制備治療慢性阻塞性肺部疾病藥物中的應(yīng)用。
12.(3R)N-(9-氨基-4-氧代-1-苯基-3，4，6，7-四氫[1，4]二氮雜并[6，7，1-hi]吲哚-3-基]-煙酰胺在制備治療慢性阻塞性肺部疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的二氮雜并吲哚在治療慢性阻塞性肺部疾病中的用途:其中A是芳基或含氮雜芳基,B是羥基或氨基。
文檔編號A61K31/551GK1345725SQ01120850
公開日2002年4月24日 申請日期2001年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月9日
發(fā)明者A·杜赫緹 申請人:沃尼爾·朗伯公司