專利名稱：兩頭尖提取物的制備工藝和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開(kāi)一種兩頭尖提取物的制備工藝和用途，涉及中藥有效成分的提取制備工藝技術(shù)和用途領(lǐng)域。
兩頭尖為毛茛科銀蓮花屬植物多被銀蓮花(Anemone raddeanaRegel)的干燥根莖，作為中藥在中醫(yī)臨床上具有“祛風(fēng)濕、消癰腫”的作用，用于“風(fēng)寒濕痹、四肢拘攣、骨節(jié)疼痛、癰腫潰爛”，現(xiàn)代藥學(xué)研究表明兩頭尖及其莖、葉、花、果中的總皂甙具有消炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抑菌等生物活性，特別是皂甙D的上述活性較強(qiáng)，目前，上述物質(zhì)的提取分離只局限于實(shí)驗(yàn)室研究階段，無(wú)法達(dá)到工業(yè)化生產(chǎn)和開(kāi)發(fā)新藥用途。
本發(fā)明提供一種兩頭尖提取物的制備工藝，目的旨在從兩頭尖中提取具有藥用價(jià)值的總皂甙及單體皂甙D，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明的另一目的是提供兩頭尖總皂甙及皂甙D制成的藥物，用于治療惡性腫瘤。
本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供上述提取物在制備治療惡性腫瘤的藥物方面的用途。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案包括以下步驟1、取兩頭尖及其莖、葉、花、果粉碎成20目左右粗粉；2、加5～9倍量的50～70％乙醇進(jìn)行提取，或用水煎醇沉法提取，過(guò)濾并回收乙醇；3、經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂吸附，除去色素、糖類等，再用水洗脫樹(shù)脂至無(wú)色，也可用堿溶液洗脫，柱中即為皂甙部分；4、用50％～70％的乙醇進(jìn)行洗脫，回收乙醇至無(wú)醇味，加入適量的明膠，過(guò)濾，上脫色大孔樹(shù)脂，用50％～70％乙醇洗脫，回收乙醇，濃縮干燥，獲得兩頭尖總皂甙；5、將兩頭尖總皂甙用甲醇溶解，上硅膠干柱層析分離，洗脫至柱底，洗脫液為氯仿∶甲醇∶水=75～55∶45～25∶20～1；6、收集柱中含皂甙D硅膠，用甲醇洗脫至無(wú)皂甙反應(yīng)，回收甲醇至干，通過(guò)醇重結(jié)晶，得到無(wú)色粉末狀結(jié)晶兩頭尖皂甙D。
取兩頭尖總皂甙干粉加適量淀粉，以70％乙醇制粒，干燥分裝制成口服膠囊。
稱取兩頭尖皂甙D10份、氯化鈉75份，加蒸餾水適量，用1～5％的氫氧化鈉溶液調(diào)PH7.5～8.5，加蒸餾水10000ml，經(jīng)過(guò)濾，在無(wú)菌條件下灌裝和冷凍干燥，制成注射用皂甙D粉針。
本發(fā)明的藥物含有治療有效量的提取物為活性成分，以及含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的提取物可用于制備治療癌癥，特別是肝癌、胃腺癌、肺癌、乳腺癌等癌癥的藥物。
上文的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括稀釋劑、賦形劑，填充劑，粘合劑，濕潤(rùn)劑，崩解劑，吸收促進(jìn)劑，表面活性劑，吸附載體等。
本發(fā)明可以組合物的形式通過(guò)口服、直腸、靜脈、肌肉注射或外用給藥方式施用于這種治療的患者。按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備各種劑型如片劑、顆粒劑、沖劑、膠囊、栓劑、噴霧劑、緩釋劑和注射劑等。也可使其活性成分與一種或多種載體或藥物混合，制成所需劑型。
本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選重量比為0.1％～99.5％活性成分。
本發(fā)明的施藥量可根據(jù)用藥途徑、患者年齡、體重、疾病類型和嚴(yán)重程度等變化，日劑量為0.01～20mg/kg。
兩頭尖活性成分的提取分離和鑒定，闡明了兩頭尖功能主治的物質(zhì)基礎(chǔ)，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)兩頭尖總皂甙具有極明顯的抗癌活性，對(duì)小鼠體內(nèi)Hep-A-22肝癌的抑瘤率為79％，對(duì)C57小鼠Lewis肺癌的抑瘤率為71％。體外能顯著抑制小鼠S180和腹水型肝細(xì)胞的DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成，其抑制率隨劑量的增多和時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。其抗癌機(jī)理主要是由于抑制癌細(xì)胞的DNA合成。
下面的實(shí)施例可使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更全面理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1兩頭尖總皂甙的制備取兩頭尖包括莖、葉、花、果10公斤，粉碎成20目粗粉，加50公斤的70％乙醇，回流提取3次，每次2小時(shí)，過(guò)濾提取液合并，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，經(jīng)噴霧干燥成干粉，加入70％的乙醇溶解，上D101大孔吸附樹(shù)脂柱，用水洗至無(wú)色后，用70％的乙醇洗脫至無(wú)皂甙反應(yīng)為止，將洗脫液用1％活性炭脫色30分鐘，趁熱過(guò)濾，回收乙醇至無(wú)醇味，噴霧干燥成細(xì)粉，得黃褐色粉末0.5公斤。
實(shí)施例2兩頭尖總皂甙的制備取兩頭尖10公斤，粉碎成20目粗粉，加100公斤的水煎煮三次，每次2小時(shí)，合并煎液，過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.18～1.20(80℃～85℃熱測(cè))，加乙醇，使乙醇含量達(dá)70％，靜止24小時(shí)，過(guò)濾，回收乙醇，至小體積，加乙醇使醇含量達(dá)90％，靜止24小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，噴霧干燥，得黃褐色粉末。
實(shí)施例3兩頭尖皂甙D的制備取兩頭尖粗粉100克，加70％乙醇500ml滲漉至無(wú)皂甙反應(yīng)，回收乙醇至無(wú)醇味，經(jīng)減壓干燥并粉碎成干膏粉，加入甲醇溶解，拌如入5倍量的硅膠，上硅膠柱，樣品∶硅膠=1∶150進(jìn)行干柱層析，用氯仿∶甲醇∶水=65∶25∶5配成的洗脫液洗脫至柱底，取硅膠切割成段，用甲醇洗脫，薄層析鑒定，收集皂甙D部分，繼續(xù)用甲醇洗脫至無(wú)皂甙反應(yīng)，減壓回收甲醇至干，用乙醇重結(jié)晶，得無(wú)色粉末狀晶體。
實(shí)施例4膠囊兩頭尖總皂甙 2500克玉米淀粉 500克制備方法將兩頭尖總皂甙與玉米淀粉混合攪拌均勻，加入適量70％乙醇濕潤(rùn)制粒，干燥裝入膠囊中，制成膠囊1000粒，每個(gè)膠囊0.3克。
實(shí)施例5注射用粉針劑兩頭尖皂甙D 15克氯化納75克注射用水 10000ml制備過(guò)程將兩頭尖皂甙D、氯化鈉溶解于適量的注射用蒸餾水中，用1～5％的氫氧化鈉溶液調(diào)PH8.0，加注射用水至10000ml，通過(guò)0.2μm的微孔濾膜過(guò)濾所得溶液，在無(wú)菌條件下裝入安瓶，冷凍干燥。
實(shí)施例6實(shí)施例1提取物的抑瘤作用總皂甙制成的膠囊經(jīng)藥效學(xué)研究，能明顯抑制肉瘤S180，肝癌、宮頸癌，其抑癌率分別為49％,54％,84％，對(duì)離體細(xì)胞株增殖的影響試驗(yàn)表明，在藥物的直接作用下，對(duì)肝癌細(xì)胞株，肺腺癌細(xì)胞株，胃腺癌細(xì)胞株，乳腺癌細(xì)胞株的增殖均有抑制作用，其抑制率分別在75％,76％,73％,84％以上。
實(shí)施例7兩頭尖皂甙D制成的注射用粉針以5-氟尿嘧啶為對(duì)照藥，對(duì)小鼠體內(nèi)Hep-A-22肝癌的抑瘤率為74％。對(duì)C57小鼠Lewis肺癌的抑瘤率為71％。對(duì)Bre-04人體乳腺癌，C01-06人體腸癌的抑瘤率在54～41范圍。體外100μg/ml對(duì)人體肝、肺、乳腺及腸癌細(xì)胞毒試驗(yàn)IC50結(jié)果均表明具有20μg/ml的細(xì)胞毒作用，對(duì)乳腺癌細(xì)胞更敏感，體外對(duì)人體肝癌、人胃腺癌、人肺癌、乳腺癌的抑制率分別為75％、76％、53％、58％。本注射液能抑制前身物(DNA)摻入體外培養(yǎng)的AH細(xì)胞，特別是對(duì)S180細(xì)胞3H-TdR摻入DNA合成有顯著的抑制作用。
權(quán)利要求
1.一種兩頭尖提取物的制備工藝，包括以下工藝步驟1)、取兩頭尖及其莖、葉、花、果粉碎成20目左右粗粉；2)、加5～9倍量的50～70％乙醇進(jìn)行提取，或用水煎醇沉法提取，過(guò)濾并回收乙醇；3)、經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂吸附，除去色素、糖類等，再用水洗脫樹(shù)脂至無(wú)色，也可用堿溶液洗脫，柱中即為皂甙部分；4)、用50％～70％的乙醇進(jìn)行洗脫，回收乙醇至無(wú)醇味，加入適量的明膠，過(guò)濾，上脫色大孔樹(shù)脂柱，用50％～70％乙醇洗脫，回收乙醇，濃縮干燥，獲得兩頭尖總皂甙；5)、將兩頭尖總皂甙用甲醇溶解，上硅膠干柱層析分離，洗脫至柱底，洗脫液為氯仿∶甲醇∶水=75～55∶45～25∶20～1；6)、收集柱中硅膠，用甲醇洗脫至無(wú)皂甙反應(yīng)，回收甲醇至干，通過(guò)醇重結(jié)晶，得到無(wú)色粉末狀結(jié)晶兩頭尖皂甙D。
2.用于治療癌癥的藥物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1提取物和藥學(xué)上可接受的載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所得提取物制備治療肝癌、胃腺癌、肺癌、乳腺癌的藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3所得提取物制備醫(yī)藥學(xué)上任何劑型藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種兩頭尖提取物的制備工藝和用途,從兩頭尖及其莖、葉、花、果中提取具有藥用價(jià)值的總皂甙及單體皂甙D,適用于工業(yè)化生產(chǎn),并制成藥物,用于治療惡性腫瘤疾病。兩頭尖活性成分的提取分離和鑒定,闡明了兩頭尖功能主治的物質(zhì)基礎(chǔ),兩頭尖總皂甙具有極明顯的抗癌活性,對(duì)小鼠體內(nèi)Hep－A－22肝癌的抑瘤率為79%,對(duì)C
文檔編號(hào)A61K31/4745GK1312253SQ0110608
公開(kāi)日2001年9月12日 申請(qǐng)日期2001年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2001年1月16日
發(fā)明者劉大有, 劉大同, 邱金文, 張大方, 李紅科, 劉藝峰 申請(qǐng)人:長(zhǎng)春中醫(yī)學(xué)院