專利名稱：尿苷磷酸化酶抑制劑的制藥應(yīng)用及含其的組合物的制作方法
本申請系申請日為1993年12月7日、申請?zhí)枮?3121700.8、發(fā)明名稱為“治療全身性炎癥和炎性肝炎的嘧啶核苷酸前體”的發(fā)明專利申請的分案申請。
本發(fā)明涉及尿苷磷酸化酶抑制劑在制備治療或預(yù)防膿毒癥、治療性細(xì)胞激活素或炎性刺激物在動物中的毒性、癌癥、炎性肝炎、接受全腸道外營養(yǎng)動物的肝臟損害以及接受肝臟移植動物的肝臟損害的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及含有尿苷磷酸化酶抑制劑的組合物。
膿毒癥(也稱為膿毒綜合癥)是由細(xì)菌、真菌或病毒引起的嚴(yán)重感染的后果。在美國，膿毒癥占每年死亡人數(shù)的好幾萬，是外科漸近性護(hù)理單位之病人死亡的主要原因。
膿毒癥是一種炎癥疾病，在該疾病過程中，生物體應(yīng)答炎性刺激如細(xì)菌內(nèi)毒素(革蘭氏陰性(G-)菌細(xì)菌壁的一種成分)所產(chǎn)生或釋放的內(nèi)源細(xì)胞激活素和其它生物活性分子導(dǎo)致多種癥狀，包括發(fā)熱、中性白細(xì)胞減少癥、凝血紊亂、低血壓、休克和臟器損害。
膿毒癥(或其重癥形式-膿毒癥休克)是稱為“全身性炎癥反應(yīng)綜合癥”(SIRS)這一廣泛性疾病類型中的一例，SIRS是機(jī)體對諸如內(nèi)毒素這樣的炎性刺激物的反應(yīng)(所說內(nèi)毒素可以存在于血液中而不伴有菌血癥，例如，由于G-細(xì)菌的內(nèi)毒素由局部感染或由腸道滲漏入血循環(huán)中)，也可由革蘭氏陽性(G+)細(xì)菌、真菌或病毒觸發(fā)，還可以是自身免疫紊亂或施用治療性炎性細(xì)菌激活素的結(jié)果。
目前對SIRS的治療包括循環(huán)和呼吸的支持療法，但沒有直接致力于改善組織對炎性刺激物(例如內(nèi)毒素)或炎性介質(zhì)的抵抗力。
有關(guān)能中和內(nèi)毒素或其生理作用的介質(zhì)之單克隆抗體正在開發(fā)研究中。然而，在內(nèi)毒素毒性癥狀發(fā)作前將抗體應(yīng)用于易感人群作為預(yù)防措施的代價(jià)是昂貴或不切實(shí)際的。而且，因?yàn)榕囵B(yǎng)和鑒定感染性病源所需的時(shí)間往往超過了進(jìn)行有效治療的時(shí)限，所以很難確定用抗體進(jìn)行治療可能會對哪些病人有益。在試圖應(yīng)用特異性炎性介質(zhì)(如IL-1)的受體拮抗劑時(shí)也遇到了類似的問題。
內(nèi)毒素的毒性一部分是由對內(nèi)毒素產(chǎn)生反應(yīng)的巨噬細(xì)胞、枯否氏細(xì)胞(肝臟中的固著巨噬細(xì)胞)和其它細(xì)胞類型釋放的內(nèi)源性細(xì)胞激活素和其它生物活性分子所介導(dǎo)。這些介質(zhì)中最重要的是腫瘤壞死因子(TNF)和白細(xì)胞介素-1(IL-1)。其它的介質(zhì)包括血小板激活因子(PAF)、IL-6和白三烯以及花生四烯酸衍生物。施用這些細(xì)胞激活素或介質(zhì)導(dǎo)致類似于至少一些由內(nèi)毒素引發(fā)的癥狀。除了細(xì)菌內(nèi)毒素外，藥劑或病理?xiàng)l件能夠引起TNF或IL-1的產(chǎn)生增加或活性(或?qū)烧叩拿舾行?增高，從而導(dǎo)致組織損害。所說的病例包括由G+菌、病毒或真菌引起的感染，或者是肝損害。炎性細(xì)胞激活素如果過量存在則能導(dǎo)致組織損害，但當(dāng)它們被適量誘生時(shí)，則在抵抗傳染性病源體或病毒方面起重要的作用。例如，TNF的抗體能夠減少所給用劑量的內(nèi)毒素的毒性(通過阻斷由內(nèi)毒素誘生的TNF的負(fù)性作用)，但在一些細(xì)菌感染的情況下TNF具有毒性作用，將感染的亞致死狀態(tài)轉(zhuǎn)變成為完全的致死性感染(Havell,J.Immunol.1987,139:4225-4231；Echtenacher et al.,J.Immunol.,1990 145:3762-3766)。因此，在利用直接滅活炎性細(xì)胞激活素的藥劑治療膿毒綜合癥或SIRS的策略上存在固有的問題。
肝臟是內(nèi)毒素(Farrar and Corwin,Ann.N.y.Acad.Sci.,1966 133:668-684)和象TNF這樣的炎性蛋白清除或解毒的主要部位，相反，肝臟易于受到內(nèi)毒素及其誘生的介質(zhì)的損害。有著多種起因(例如四氯化碳、膽堿缺乏、病毒感染、Reye′s綜合癥、酒精)的肝損害甚至在全身性膿毒癥癥狀還未出現(xiàn)時(shí)就部分地由細(xì)菌內(nèi)毒素誘生的介質(zhì)所介導(dǎo)(Nolan,Gastroenterology,1975,69:1346-1356；Nolan,Hepatology,1989,10:887-891)。在接受有意注射內(nèi)毒素以可能有效治療肝癌的病人中，肝毒性是劑量限制性的(Engelhardt et al.,Cancer Research,1991,51:2524-2530)。據(jù)報(bào)道，肝臟是膿毒癥休克中表現(xiàn)出病理性改變的頭等重要器官(Kang et al.,J.Histochem.Cytochem.,1988 36:665-678)。而且，肝臟功能不良發(fā)生于膿毒癥的早期，并可以引發(fā)相繼的器官衰竭(Wang et al.,Arch.Surg.,1 991,126:219-224)。
肝臟在調(diào)節(jié)動物對內(nèi)毒素的敏感性方面很重要。有損于肝功能或代謝的各種治療(例如乙酸鉛、放線菌酮、放線菌素D或半乳糖胺的毒害)能夠提高動物對內(nèi)毒素或TNF的敏感性，而且在某些情況下能夠很大程度地提高。
半乳糖胺誘導(dǎo)的肝損害的獨(dú)特之處在于它于細(xì)胞死亡發(fā)生之前的一段時(shí)間內(nèi)易于可塑性回復(fù)。通過將尿苷核苷酸固定為不能反轉(zhuǎn)成游離核苷酸的UDP-已糖胺，半乳糖胺因而選擇性地消耗肝尿苷核苷酸。如果尿苷核苷酸的消耗被足夠的延長的話，該過程將導(dǎo)致肝損害，因?yàn)镽NA和蛋白質(zhì)合成遭到了損害。由半乳糖胺誘導(dǎo)的生化缺陷易于通過施用尿苷而逆轉(zhuǎn)，它補(bǔ)充了被半乳糖胺困陷的尿苷核苷酸。因此，在施用半乳糖之前或后隨繼施用尿苷能減輕半乳糖胺誘導(dǎo)的肝損害，繼而朝著對內(nèi)毒素的正常敏感值恢復(fù)(Galanos et al.,PNAS,1979,76:5939-5943)。
與此相似，在有意用嚙齒動物內(nèi)毒素TCDD進(jìn)行處理的小鼠中，內(nèi)毒素的超敏性可通過施用尿苷而部分逆轉(zhuǎn)(Rosenthal et al.,Toxicology,1989,56:239-251)。
然而，與尿苷能部分地恢復(fù)在實(shí)驗(yàn)中降低的對內(nèi)毒素抵抗力的情況相反，有文獻(xiàn)報(bào)道尿苷在受內(nèi)毒素攻擊的正常小鼠中沒有保護(hù)作用(MarkleY at al.,J.Trauma 1970,10:598-607)，即，尿苷不能產(chǎn)生比正常高的內(nèi)毒素抵抗力。
已經(jīng)測試了尿苷、胞苷和乳清酸鹽在肝功能障礙患者和模型中對肝功能的影響，給出了混合的結(jié)果。據(jù)Shafer和Isselbacher報(bào)道(Gastroenterology,1961,40:782-784)，給肝硬化病人每天靜脈內(nèi)輸注25-100mg胞苷和尿苷共3-7天，對臨床狀態(tài)不產(chǎn)生影響。以1％的濃度在大鼠飼料中加入乳清酸引起大鼠肝臟的脂肪浸潤(Von Euler et al.,J.Biol Chem.,1963,238:2464-2469)，而通過腹膜內(nèi)注射給予乳清酸能減輕用四氯化碳、二氯乙烷、DDT和9,10-二甲基-1,2-苯并蒽處理大鼠所致的肝損害(Pates et al.,Farmakol Toksikol.,1968,31:717-719)。賴氨酸-乳清酸鹽可加強(qiáng)菌類植物鵝膏毒傘的肝毒性提取物的毒性，而乳清酸鈉和乳清酸對該菌屬提取物的毒性沒有影響(Halacheva et al.,Toxiconn,1988,26:571-576)。乳清酸已被臨床上用于治療人的新生兒高膽紅素血癥和改善心肌梗塞的痊愈(O′Sullivan,Aust.N.Z.J.Med.,1973,3:417-422)?？诜榍逅猁}后不能被很好地吸收，這部分是由于其不良的溶解性。
涉及施用尿苷的臨床試驗(yàn)(例如為了減輕抗腫瘤藥5-氟尿嘧啶的宿主毒性)由于尿苷本身的生物特性而變得復(fù)雜化。尿苷在口服后吸收不良，但腹瀉僅限于人類(Van Groeningen et al.,Proceedings of the AACR；1987,28:195)。非胃腸道施用尿苷需要利用中心靜脈導(dǎo)管(會引起不適和感染的危險(xiǎn))，但因?yàn)殪o脈炎是通過手臂靜脈導(dǎo)管施用尿苷的早期臨床試驗(yàn)中存在的問題(VanGroeningen et al.,Cancer Treat Rep.1986,70:745-50)。
施用尿苷和胞苷的?；苌锟梢钥朔诜坞x苷核酸吸收不良的問題，所說衍生物易于由腸吸收入血，然后在循環(huán)中被水解產(chǎn)生游離的尿苷或胞苷(美國專利申請順序號為438,493,115,929和903,107，這些專利文獻(xiàn)結(jié)合在本文中作為參考)。
本發(fā)明的主要目的是提供有效改善全身性炎性反應(yīng)綜合癥(包括膿毒癥)患者的存活狀態(tài)和有效防止因此而致的組織損害的治療劑和預(yù)防劑。
本發(fā)明的主要目的是提供一族能有效增強(qiáng)對全身性炎癥的抵抗力的化臺物。在與內(nèi)毒素或其它炎性刺激物接觸之前、之中或之后給動物施用上述化臺物以預(yù)防或治療全身性炎癥的影響。
本發(fā)明的目的還在于提供一族用于治療病因涉及炎性刺激物或炎性細(xì)胞激活素的各種紊亂的化合物。
本發(fā)明的目的還在于提供一族改善遭受內(nèi)毒素毒害或其它全身性炎性紊亂的動物之存活或生理功能的化合物。
本發(fā)明的目的還在于提供一族治療或預(yù)防炎性肝炎的化合物。
本發(fā)明的目的還在于提供能口服或胃腸道外用藥的化合物。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述及其它目的可以借助于嘧啶核苷酸的前體如乳清酸或其鹽、尿苷和胞苷，或者是它們的包括?；苌锘蛄姿狨サ脑幯苌?，它們能夠被施用于包括哺乳動物(例如人)在內(nèi)的動物。單獨(dú)或聯(lián)臺應(yīng)用這些化臺物適用于治療或預(yù)防全身性炎癥的后果。全身性炎癥是由細(xì)菌、真菌或病毒，構(gòu)成細(xì)菌、真菌或病毒的成分，如內(nèi)毒素、多糖或病毒蛋白分別感染所致，是由炎性介質(zhì)引起，或者是自身免疫紊亂的結(jié)果。
因此，本發(fā)明的化合物單獨(dú)或聯(lián)合使用適合于治療和預(yù)防膿毒癥或炎性細(xì)胞激活素的毒性作用；適合于在有膿毒癥危險(xiǎn)的病人中作預(yù)防劑，所說的病人例如進(jìn)行了外科程序的病人，或是遭受嚴(yán)重?zé)齻騽?chuàng)傷的病人；還適臺于作為對癌癥或其它疾病進(jìn)行化療后的免疫保障。
本發(fā)明的一個(gè)重要方面是發(fā)現(xiàn)了嘧啶核苷酸前體(如乳清酸、尿苷或胞苷)及這類化合物的酰基衍生物具有意想不到的治療特性。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案及本發(fā)明的化合物和組合物在治療和預(yù)防因治療性施用炎性細(xì)胞激活素(例如治療癌癥)時(shí)所致毒性中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案涉及本發(fā)明的化合物和組合物在治療和預(yù)防炎性肝炎中的應(yīng)用。
本發(fā)明用于增強(qiáng)對炎性刺激物或炎性介質(zhì)抵抗力的化合物具有下列結(jié)構(gòu)除非有說明，在所有的情況下象征本發(fā)明化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)中各種取代基的字母和帶下標(biāo)的字母只適用于緊跟符號說明之前的結(jié)構(gòu)。
(1)具有下列通式的尿苷或胞苷的酰基衍生物或者藥用鹽 其中，R1、R2、R3和R4相同或不同，并且各自是氫或是代謝物的?；?br> (2)具有下列通式的胞苷或胞苷的?；苌锘蚴瞧渌幬锟山邮茺} 其中，R1、R2、R3和R4相同或不同，并各自是氫或是代謝物的?；?br> (3)具有下列通式的尿苷?；苌?其中，R1、R2和R3相同或不同，并各自為氫或是下列物質(zhì)的?；鶊F(tuán)a．具有C5-22的無支鏈脂肪酸，b．一種氨基酸，它選自甘氨酸、L-丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、備氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、肉堿和鳥氨酸，c．具有3-22個(gè)碳原子的二羧酸，d．選自下列的一種或多種的羧酸乙醇酸、丙酮酸、乳酸、烯醇丙酮酸、硫辛酸、泛酸、乙酰乙酸、對氨基苯甲酸、β-羥基丁酸、乳清酸和肌酸。
(4)具有下列通式的胞苷?；苌?其中R1、R2、R3和R4相同或不同，并各自為氫，或是下列物質(zhì)的?；鶊F(tuán)a．具有5至22個(gè)碳原子的無支鏈脂肪酸，b．一種氨基酸，它選自甘氨酸、L-苯丙氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、肉堿和鳥氨酸，c．具有3至22個(gè)碳原子的二羧酸，d．選自下列的一種或多種的羧酸乙醇酸、丙酮酸、乳酸、烯醇丙酮酸、硫辛酸、泛酸、乙酰乙酸、對氨基苯甲酸、β-羥基丁酸、乳清酸和肌酸。
(5)具有下列通式的尿苷?；苌?其中，R1、R2、或R3中的至少一個(gè)是含有2至26個(gè)碳原子的烴氧羰基部分，而其余的R取代基各自為烴氧羰基或烴羰基部分或是氫或磷酸根。
(6)具有下列通式的胞苷?；苌?其中，R1、R2、R3或R4中至少一種是含C2-28的烴氧羰基部分，而其余的R取代基各自是烴氧羰基或烴羰基部分，或是氫或磷酸根。
(7)乳清酸或其鹽 乳清酸的藥物用鹽包括那些其中的陽離子成分為鈉、鉀、堿性氨基酸如精氨酸或賴氨酸、甲基谷氨酸、膽堿或任何其它分子量小于約1000道爾頓的基本無毒水溶性陽離子的鹽。
(8)醇取代的乳清酸鹽衍生物 其中，R1是含有1至20個(gè)碳原子的醇的基團(tuán)，它們通過酯鍵與乳清酸相連。
本發(fā)明還包括上述化臺物的藥物可接受鹽。
本發(fā)明較好的化合物是尿苷或胞苷的短鏈脂肪酸酯。特別好的化合物是三乙酰尿苷、三乙酰胞苷或乳清酸鹽。尿苷磷酸化酶抑制劑作為上述嘧啶核苷酸前體的替換物或附屬物，下列化合物適用于本發(fā)明。這些化學(xué)劑通過抑制內(nèi)源或外源性尿苷的分解代謝而提高組織中的尿苷水平。將尿苷磷酸化酶抑制劑與嘧啶核苷酸前體共同施用能減少達(dá)到治療效果所需的核苷酸前體的用量。
尿苷磷酸化酶抑制劑的例子包括但不限于5-芐基巴比妥酸鹽或5-亞芐基巴比妥酸鹽衍生物，包括5-芐基巴比妥酸鹽、5-芐氧基苯甲基巴比妥酸鹽、5-芐氧基苯甲基-1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥酸鹽、5-芐氧基苯甲基乙?；?1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥酸鹽和5-甲氧基苯甲基乙酰無環(huán)巴比妥酸鹽、2,2’-脫水-5-乙基尿苷和無環(huán)尿苷化合物，特別是5-苯甲基取代的無環(huán)尿苷同系物，包括但不限于苯甲基無環(huán)尿苷、芐氧基苯甲基無環(huán)尿苷、氨甲基-苯甲基無環(huán)尿苷、氨甲基芐氧基苯甲基無環(huán)尿苷、羥甲基-苯甲基無環(huán)尿苷和羥甲基芐氧基苯甲基無環(huán)尿苷。可參見WO89/09603和WO91/16315，上述專利文獻(xiàn)并入本文作為參考。
本發(fā)明涉及包括胞苷、尿苷和乳清酸之?；苌锏泥奏ず塑账崆绑w，以及這些化合物和或尿苷磷酸化酶抑制劑在治療或預(yù)防動物(包括人)體內(nèi)的內(nèi)毒素和其它炎性刺激物或介質(zhì)的病理性后果中的應(yīng)用。
本文所公開的發(fā)明涉及增強(qiáng)動物對炎性刺激物和介質(zhì)抵抗力的方法。下文所示的實(shí)施例表明了對因內(nèi)毒素和其它炎性刺激物所致毒性的預(yù)防和治療作用，本發(fā)明的方法可以與治療或防止膿毒癥或全身性炎癥的其它方法結(jié)合應(yīng)用。A．定義本文所用術(shù)語“嘧啶核苷酸前體”指的是一種在被施用于動物后轉(zhuǎn)化為嘧啶核苷酸的化臺物。它特別包括胞苷、尿苷或乳清酸或這些化合物的前藥(包括?；苌?。
本文所用術(shù)語“?；苌铩币庵膏奏ず塑账岬难苌?，其中有一個(gè)基本無毒的來源于羧酸的有機(jī)?；〈砸粋€(gè)酯鍵附著于羥基嘌呤核苷的核糖部分的一個(gè)或多個(gè)游離羥基上，和/或該處所說取代基以一個(gè)酰胺鍵附著于胞苷嘌呤環(huán)的胺取代基上。所說的?；〈鶃碓从诎ǖ幌抻诘南铝恤人峄衔镏舅?、氨基酸、煙酸、二羧酸、乳酸、對氨基苯甲醇和乳清酸。有益的酰基取代基是以飲食成分或是作為中間代謝物正常存在于機(jī)體的化合物。
本文所用術(shù)語“藥用的鹽”意指該衍生物的藥物可按受的酸加成鹽的鹽，包括但不限于硫酸、鹽酸或磷酸。
術(shù)語“共同施用”意指至少有兩種本發(fā)明的化合物在藥理活性重疊的每個(gè)時(shí)期內(nèi)的時(shí)限中被施用。
本文所用術(shù)語“氨基酸”包括但不限于甘氨酸、L-丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、鳥氨酸、羥賴氨酸、肉堿以及其它天然存在的氨基酸。
本文所用術(shù)語“脂肪酸”意指含具有2至22個(gè)碳原子的脂肪族羧酸。所說的脂肪酸可以是飽和的、部分飽和的或多不飽和的。
本文所用術(shù)語“二羧酸”意指帶有第二個(gè)羧酸取代基的脂肪酸。
本文所用術(shù)語“治療有效量”指的是對于指定的疾病狀態(tài)和給藥方案提供治療效果的用量。
本文所用術(shù)語“膿毒癥”是一種全身性炎性紊亂，其中機(jī)體應(yīng)答炎性刺激如細(xì)菌內(nèi)毒性(G-菌細(xì)胞壁的一種成分)所產(chǎn)生或釋放的內(nèi)源性細(xì)胞激活素和其它生物活性分子引起各種癥狀，包括發(fā)熱、中性粒細(xì)胞減少癥、凝血紊亂、低血壓、休克和臟器損害。
本文所用術(shù)語“炎性刺激物”意指一種觸發(fā)動物體內(nèi)炎性反應(yīng)的外源性物質(zhì)。炎性刺激物的例子包括細(xì)菌、真菌、病毒、細(xì)菌或真菌或病毒的不能存活片段或成分(如內(nèi)毒素)或引起變態(tài)反應(yīng)或過敏反應(yīng)的物質(zhì)。在自身免疫紊亂的情況下，患體組織的內(nèi)源成分如特定的細(xì)胞蛋白起炎性刺激物的作用。
本文所用術(shù)語“介質(zhì)”意指典型地介導(dǎo)內(nèi)毒素或其它炎性刺激物(如真菌多糖)的生物作用的內(nèi)源或外源性(如重組多肽)生物活性化合物、蛋白質(zhì)或多肽。所說介質(zhì)的例子包括但不限于腫瘤壞死因子(TNF)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、血纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑(PAI)、白三烯、補(bǔ)體級聯(lián)系統(tǒng)中的成分、氧化氮或血小板激活因子。B．本發(fā)明的化合物本發(fā)明的主要特征是意外地發(fā)現(xiàn)尿苷和其它的嘧啶核苷酸前體確實(shí)能保護(hù)其它方面正常的動物(例如，在動物模型中機(jī)體還未接受象半乳糖胺或TCDD這種臨床上不相關(guān)的肝毒性敏化劑)免受因通過誘生內(nèi)源性炎性介質(zhì)產(chǎn)生組織損害的細(xì)菌內(nèi)毒素和其它炎性刺激物的毒害。
組織尿苷酸水平可通過施用數(shù)種核苷酸前體而提高。借助于發(fā)生在5’位上的磷酸化作用，尿苷和胞苷摻入到細(xì)胞的核苷酸庫中；胞苷核苷酸和尿苷核苷酸通過酶促胺化作用和脫胺反應(yīng)可相互轉(zhuǎn)化。乳清酸是嘧啶核苷酸再次生物合成中的關(guān)鍵中間體。乳清酸摻入到核苷酸庫中需要細(xì)胞的磷酸核糖焦磷酸(PRPP)。另外(或者是除了供給外源性核苷酸前體)，通過施用抑制尿苷磷酸化酶(尿苷降解途徑中的第一種酶)的化合物提高組織對尿苷的可利用性。用于增強(qiáng)對內(nèi)毒素或炎性介質(zhì)抵抗力的本發(fā)明化合物包括尿苷、胞苷、乳清酸鹽、這些嘧啶核苷酸前體的原藥形式，特別是?；苌锖土姿狨?，以及尿苷磷酸化酶的抑制劑。
除非有說明，否則在所有的情況下象征本發(fā)明化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)中各種取代基的字母和帶下標(biāo)的字母僅用于緊跟符號說明之前的結(jié)構(gòu)。
(1)具有下列通式的尿苷?；苌?其中R1、R2、R3和R4相同或不同，并且各自是氫或是代謝物的?；瑮l件是所說的R取代基至少一個(gè)不是氫，或者其藥物可按受鹽。
(2)具有下列通式的胞苷?；苌?其中R1、R2、R3和R4相同或不同，并且各自是氫或代謝物的?；?，條件是所說R取代基至少一個(gè)不是氫，或其藥物可接受鹽。
用于增強(qiáng)對內(nèi)毒素抵抗力的本發(fā)明化合物包括(3)具有下列通式的尿苷?；苌?其中，R1、R2和R3相同或不同，并且各自為氫或是下列化合物的?；鵤．含5至22個(gè)碳原子的無支鏈脂肪酸，
b．一種氨基酸，它選自苷氨酸、L-丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、肉堿和鳥氨酸，c．具有3至22個(gè)碳原子的二羧酸，d．選自下列一種或多種的羧酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、烯醇丙酮酸、硫辛酸、泛酸、乙酰乙酸、對氨基苯甲酸、β-羥丁酸、乳清酸和肌酸。
(4)具有下列通式的胞苷?；苌?其中，R1、R2、R3和R4相同或不同，并且各自是氫或是下列化臺物的?；鵤．含C5-22的無支鏈脂肪酸，b．一種氨基酸它選自甘氨酸、L-苯丙氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、肉堿和鳥氨酸，c．含3至22個(gè)碳原子的二羧酸，d．選自下列一種或多種的羧酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、烯醇丙酮酸、硫辛酸、泛酸、乙酰乙酸、對氨基苯甲酸、β-羥丁酸、乳清酸和肌酸。
(5)具有下列通式的尿苷?；苌?其中，R1、R2或R3中的至少一個(gè)是含2-26個(gè)碳原子烴氧羰基部分，而其余的R取代基各自是烴氧羰基或烴羰基部分或是氫或磷酸根。
(6)具有下列通式的胞苷?；苌?其中，R1、R2、和R3或R4中的至少一個(gè)是含2-26個(gè)碳原子烴氧羰基部分，而其余的R取代基各自是烴氧羰基或烴羰基部分或是氫或磷酸根。
(7)乳清酸或乳清酸鹽 乳清酸的藥用鹽包括的鹽是其中的陽離子成分為鈉、鉀、堿性氨基酸(如精氨酸或賴氨酸)、甲基葡糖胺、膽堿或分子量小于約1000道爾頓的任何其它基本無毒的水溶性陽離子。
(8)醇取代的乳清酸鹽衍生物； 其中的R1是含1-20個(gè)硫原子的醇的基團(tuán)，它通過酯鍵與乳清酸根連接。
本發(fā)明還包括上述化合物的藥用鹽。
本發(fā)明的優(yōu)勢化合物是胞苷或尿苷的短鏈脂肪酸酯。特別優(yōu)選的化合物是三乙酰尿苷或三乙酰胞苷。尿苷磷酸化酶抑制劑尿苷磷酸化酶抑制劑的例子包括但不限于5-芐基巴比妥酸鹽或5-亞芐基巴比妥酸鹽衍生物，包括5-芐基巴比妥酸鹽、5-芐氧基苯甲基巴比妥酸鹽、5-芐氧基苯甲基-1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥酸鹽、5-芐氧基苯甲基乙酰基-1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥酸鹽和5-甲氧基苯甲基乙酰無環(huán)巴比妥酸鹽、2,2’-脫水-5-乙基尿苷和無環(huán)尿苷化合物，特別是5-苯甲基取代的無環(huán)尿苷同系物，包括但不限于苯甲基無環(huán)尿苷、芐氧基苯甲基無環(huán)尿苷、氨甲基苯甲基無環(huán)尿苷、氨甲基芐氧基苯甲基無環(huán)尿苷、羥甲基苯甲基無環(huán)尿苷和羥甲基芐氧基苯甲基無環(huán)尿苷。也可參見WO89/09603和WO91/16315，上述專利文獻(xiàn)并入本文作為參考。本發(fā)明的組合物在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，新的藥物組合物包括作為活性成分的一種或多種嘧啶核苷酸前體及一種藥用可接受載體，所說的活性成分選自尿苷、胞苷或乳清酸或其鹽，以及這些嘧啶核苷酸前體的?；苌?。
根據(jù)藥物的用途及用藥途徑的不同，本發(fā)明的組合物可以制備成液體、懸液、片劑、膠囊、糖衣丸、注射液或栓劑等劑型(參見下文的配方討論部分)。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物含有至少一種嘧啶核苷酸前體和一種能抑制尿苷降解的成分，如尿苷磷酸化酶抑制劑。尿苷磷酸化酶抑制劑的例子包括但不限于5-芐基巴比妥酸鹽或5-亞芐基巴比妥酸鹽衍生物，包括5-芐基巴比妥酸鹽、5-芐氧基苯甲基巴比妥酸鹽、5-芐氧基苯甲基-1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥酸鹽、5-芐氧基苯甲基乙酰基-1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥酸鹽和5-甲氧基苯甲基乙酰無環(huán)巴比妥酸鹽、2,2’-脫水-5-乙基尿苷和無環(huán)尿苷化合物，特別是5-苯甲基取代的無環(huán)尿苷同系物，包括但不限于苯甲基無環(huán)尿苷、芐氧基苯甲基無環(huán)尿苷、氨甲基苯甲基無環(huán)尿苷、氨甲基芐氧基苯甲基無環(huán)尿苷、羥甲基苯甲基無環(huán)尿苷和羥甲基芐氧基苯甲基無環(huán)尿苷。也可參見US5,077,280和WO91/16315，上述文獻(xiàn)并入本文作為參考。而且，為了改善組織對內(nèi)毒素或炎性介質(zhì)的抵抗力單獨(dú)就用尿苷磷酸化酶抑制劑而不共同施用嘧啶核苷酸前體也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
在其它的實(shí)施例中，本發(fā)明的化合物除了包括一種或多種本發(fā)明的化合物外，至少還包括也用于治療內(nèi)毒素毒性或膿毒癥的下列化合物結(jié)合內(nèi)毒素、TNF或IL-1的抗體或其它蛋白質(zhì)；被結(jié)合到聚臺物載體基質(zhì)上的多粘菌素B(為了減少在利用多粘菌素B結(jié)合和滅活內(nèi)毒素的活力時(shí)的毒性)； IL-1或TNF受體拮抗劑；抗菌素；花生四烯酸級聯(lián)成分的抑制劑；精氨酸或鳥氨酸；皮質(zhì)甾類；葡萄糖；ATP；包括肌苷、腺苷或其?；苌锏泥堰屎塑账崆绑w；cAMP或其?；苌铩?br> 在本發(fā)明另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包括至于一種本發(fā)明的化臺物和一種抗菌素、抗真菌或抗病毒化合物。本發(fā)明的化合物和組合物的治療用途本發(fā)明的化合物、組合物和方法用于增強(qiáng)動物對內(nèi)毒素或其它炎性刺激物或介質(zhì)的抵抗力。所說化合物包括嘧啶核苷酸前體以及抑制尿苷被酶降解的化合物。
本發(fā)明的化合物用于治療人類，然而，本發(fā)明并不打算僅限于此，對通過施用本發(fā)明活性化臺物確實(shí)獲得益處的所有動物進(jìn)行治療也包括在本發(fā)明的研究考慮范圍內(nèi)。
本發(fā)明的主要特征是發(fā)現(xiàn)了施用尿苷核苷酸前體在體內(nèi)產(chǎn)生對內(nèi)毒素或其它炎性刺激物或介質(zhì)的毒性作用或致死性作用的超常抵抗力。
而且，本發(fā)明體現(xiàn)在為增強(qiáng)機(jī)體對內(nèi)毒素、其它炎性刺激物或其介質(zhì)的抵抗力，口服或全身應(yīng)用含有嘧啶核苷酸前體(或其藥物前體)和/或抑制尿苷分解代謝的化合物的藥物化合物或組合物。SIRS、膿毒癥和膿毒癥休克本發(fā)明的化合物、組合物和方法用于減輕由于細(xì)菌(G-和G+細(xì)菌)、病毒、真菌或寄生物(如瘧原蟲)觸發(fā)的全身性炎性反應(yīng)綜合癥(SIRS)(包括膿毒癥)所致的組織損害。所有上述類型的感染性病原刺激內(nèi)源性炎性介質(zhì)的形成或釋放，導(dǎo)致組織損害。
本發(fā)明化合物所施用的患者具有膿毒癥癥狀，例如發(fā)熱、中性粒細(xì)胞減少癥、低血壓等，或者是將化合物預(yù)防性地給予潛在膿毒癥危險(xiǎn)的患者，例如外科患者、嚴(yán)重?zé)齻騽?chuàng)傷的患者或泌尿道插管的患者。
本發(fā)明的化合物、組合物和方法比較理想地是與其它用于治療膿毒癥的藥劑結(jié)合應(yīng)用，所說的藥劑包括但不限于下列的一種或多種結(jié)合內(nèi)毒癥、TNF或IL-1的抗體或其它蛋白質(zhì)；結(jié)合到聚合物載體基質(zhì)上的多粘菌素B(為了減小利用多粘菌素B結(jié)合和滅活內(nèi)毒素的能力時(shí)的毒性)；IL-1或TNF受體的拮抗劑；抗菌素；花生四烯酸級聯(lián)成分的抑制劑；皮質(zhì)甾類；葡萄糖；ATP；肌苷；cAMP或其酰基衍生物。本發(fā)明的化合物可以在動物或病人接觸上述一種或多種其它藥劑之前、之后或之中給予。
為了治療或防止因膿毒癥所致的組織損害，根據(jù)治療反應(yīng)及病人的條件不同，本發(fā)明化合物的施用劑量范圍是約0.5-40克/天，較好的是3-30克/天。對于具有嚴(yán)重膿毒癥癥狀的病人，一般是通過鼻胃管以液體或懸液形式施用本發(fā)明的化合物，特別是當(dāng)病人已被放置了鼻胃管用以輸送營養(yǎng)液或其它腸道營養(yǎng)品時(shí)。病情不重的病人一般接受液體或膠囊或片劑形式的本發(fā)明化臺物。對不能耐受口服本發(fā)明化合物的病人(例如因胃腸道損傷而依靠全腸道外營養(yǎng)的病人)經(jīng)靜脈輸注給予具有足夠水溶性的本發(fā)明化合物，如尿苷。
在休克、外傷或膿毒癥之后的一段時(shí)期，病人進(jìn)入一種高代謝持續(xù)狀態(tài)從而導(dǎo)致通常首先為肝衰的多器官衰竭。所說的高代謝期是由于內(nèi)毒素及其介質(zhì)對代謝調(diào)節(jié)的影響(Cerra et al.,in Molecularand Cellular Mechanis ms of Septic Shock,265-277,AlanR.Liss,1989)。高代謝器官衰竭是外科漸近性護(hù)理病人中死亡的主要原因之一。如實(shí)施例所示，本發(fā)明的化合物能在遭受內(nèi)毒素或膿毒癥及器官衰竭的其它誘因攻擊的動物中有效地減輕組織損害和改善存活情況。本發(fā)明的化合物、組合物和方法用于治療處于高代謝性器官衰竭危險(xiǎn)之中的病人。
膿毒癥的一個(gè)嚴(yán)重后果是具有發(fā)展為凝血紊亂，特別是播散性血管內(nèi)凝血(DIC)的傾向。在DIC中，凝血和纖溶過程都被激活，以致于血凝因子被迅速消耗在循環(huán)中形成凝血酶聚集。DIC能引起出血，或引起血栓形成，或者兩者都引起。肝臟是合成凝血因子和從循環(huán)中清除凝血酶微聚物的主要部位。本發(fā)明化合物、組合物和方法的預(yù)防和治療作用減弱了膿毒癥誘發(fā)的凝血改變(參見實(shí)施例11)。減少治療性細(xì)胞激動素的毒性內(nèi)毒素和其它炎性刺激物的許多生物作用是通過靶細(xì)胞，尤其是巨噬細(xì)胞和枯否氏(Kupffer)細(xì)胞(肝臟固著的巨噬細(xì)胞)釋放的內(nèi)源性生物活性分子(介質(zhì))所介導(dǎo)的。上述結(jié)論的證據(jù)是小鼠C3H/HEJ品系的巨噬細(xì)胞對內(nèi)毒素通常是非反應(yīng)性的(根據(jù)在與內(nèi)毒素接觸時(shí)細(xì)胞激活素的釋放)，而且內(nèi)毒素在上述品系中是相對無毒的。然而，這些小鼠對巨噬細(xì)胞正常釋放的生物活性肽(如腫瘤壞死因子TNF)敏感，而LPS的毒性通過移植正常巨噬細(xì)胞而得以恢復(fù)。TNF通常充當(dāng)內(nèi)毒素毒性的初級介質(zhì)，但白細(xì)胞介素-1(IL-1)和其它介質(zhì)也參予內(nèi)毒素毒性和膿毒癥的表現(xiàn)。
因此，本發(fā)明的化合物、組合物和方法用于改變炎性細(xì)胞激活素的生物作用，無論它們是內(nèi)源性的(特別是來自巨噬細(xì)胞)或是由體外來源引入機(jī)體(如利用重組DNA和發(fā)酵技術(shù)產(chǎn)生的多肽)。
各種炎性細(xì)胞激活素以及甚至是內(nèi)毒素本身都具有潛在的治療應(yīng)用價(jià)值。腫瘤壞死因子正如其名稱所反映的那樣，能夠破壞腫瘤并在抑制病毒感染方面與α-干擾素一起發(fā)揮協(xié)同作用。因此，TNF以及細(xì)菌內(nèi)毒素本身(誘導(dǎo)內(nèi)源TNF釋放)已被用于治療癌癥病人。既具有治療活性又具有限制其臨床應(yīng)用的炎性細(xì)胞激活素的類別包括TNF、白細(xì)胞介素和干擾素。本發(fā)明的化合物、組合物和方法用于防止和治療在治療性應(yīng)用上述細(xì)胞激動素以及炎性刺激物過程中所產(chǎn)生的毒性。
當(dāng)內(nèi)毒素通過靜脈輸注用于癌癥病人時(shí)，其肝毒性限制了所能施用的內(nèi)毒素劑量(Engelhardt R et al.,Cancer.Res.199151:2524-30)。在非肝癌患者中，避免肝臟遭受內(nèi)毒素毒性損害的保護(hù)作用使得可以施用較高劑量的內(nèi)毒素從而最大限度地發(fā)揮抗腫癌效力。內(nèi)毒素還具有免疫刺激特性。因此，本發(fā)明的化合物可用于改善內(nèi)毒素、內(nèi)毒素類似物或衍生物(如類脂A、類脂X、單磷酰基類脂A等)或其介質(zhì)的治療指標(biāo)。在有意給病人用TNF的過程中肝毒性也是劑量限制性的(KimUra et al.,Cancer Chemother.Pharmacol.1987,20:223-229)。酵母或真菌來源的炎性刺激物，如多糖葡聚糖或蘑菇多糖，作為免疫調(diào)節(jié)劑也被治療性地用于治療感染或癌癥(Seljel id,Scand.J,Immunol.1989,29:181-92；Bowers et al.,J.Surg.Res.1989,47:183-8)。雙鏈RNA(如多聚肌苷-多聚胞苷)作為炎性刺激物在治療癌癥或感染中也具有治療活性。
介導(dǎo)內(nèi)毒素的某些作用的炎性肽白細(xì)胞介素-1(IL-1)也類似地具有重要的治療潛力(如恢復(fù)因癌癥化療所致的血細(xì)胞生成受損)，但其應(yīng)用受到了其毒性副作用的限制，而利用本發(fā)明的化合物、組合物和方法可以減弱IL-1的毒副作用。
白細(xì)胞介質(zhì)-2(IL-2)在臨床上被用于治療多種癌癥，作為免疫調(diào)節(jié)劑它在治療各種感染和調(diào)節(jié)對疫苗的反應(yīng)方面也具有潛在活力。在接受治療的IL-2用于癌癥治療的病人中應(yīng)答IL-2所產(chǎn)生的肝毒性并不普遍(Viens et al.,J.Immunother,1992,11:218-24)。在通過給小鼠應(yīng)用伴刀豆球蛋白A所誘發(fā)的自身免疫性肝炎的動物模型中，據(jù)報(bào)道肝損害與內(nèi)源性IL-2產(chǎn)生增加相關(guān)(Tiegs et al.,J.Clin.Invest.1992 90:196-203)。如實(shí)施例10所示，本發(fā)明的化合物、組合物和方法在上述實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭心苡行У販p輕肝損害。當(dāng)本發(fā)明的化臺物、組合物和方法在與IL-2一起應(yīng)用時(shí)可減小副作用，而且，本發(fā)明的化合物、組合物和方法用于治療自身免疫性肝炎。
在改善血小板生成方面有治療潛力的白細(xì)胞介素-6誘導(dǎo)肝TNF受體，因而增加了組織對TNF的敏感性。因此，本發(fā)明的化合物、組合物和方法與IL-6或影響組織對TNF敏感性或產(chǎn)生TNF的類似介質(zhì)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)有益(Van Bladel et al.,Cytokine,19913:149-54)。
特定的治療性細(xì)胞激活素與一種嘧啶核苷酸前體和/或尿苷磷酸化酶抑制劑聯(lián)合使用對于治療已知所說的細(xì)胞激活素對之有效的功能障礙是有用的。例如，白細(xì)胞介素-2用于治療腎癌、克隆癌、黑癌、淋巴癌、自血病以及其它贅生物疾病。TNF對各種類型的癌癥具有抗腫瘤效力，但它在治療中的應(yīng)用卻受限于其毒性(Kimura et al.,Cancer.Chemother.Pharmacol.1987,20:223-9)。內(nèi)毒素已顯示出了重要的抗腫瘤效力(Engolhardt R et al.,Cancer.Res.1991,51:2524-30)。
為了預(yù)防或治療因施用治療性細(xì)胞激動素所引起的毒性，根據(jù)所用細(xì)胞激活素的療程不同，每天要用約0.5-40克的嘧啶核苷酸前體，總共一至數(shù)天。在應(yīng)用治療性細(xì)胞激動素之前、之中或之后給予嘧啶核苷酸前體。以特定劑量施用嘧啶核苷酸前體，并已建立起實(shí)驗(yàn)性和臨床治療各種類型癌癥的方案，除非當(dāng)本發(fā)明的嘧啶核苷酸前體被施用時(shí)增加細(xì)胞激動素的量可以被忍受，此時(shí)用簡單的劑量遞增研究確定每種細(xì)胞激活素或炎性刺激物的用量。炎性肝炎涉及內(nèi)毒素或介質(zhì)的肝功能障礙肝臟易于受到內(nèi)毒素或其介質(zhì)的損害，尤其是在肝功能被損害時(shí)。各種起因的肝損害(如膽堿缺乏、Reye′s綜合癥或酒精)或者提高了對內(nèi)毒素的敏感性，或者抑制了內(nèi)毒素的清除，它們部分是由細(xì)菌內(nèi)毒素(由于從腸向血流的小量滲漏而正常存在于門靜脈循環(huán)中)或內(nèi)毒素誘導(dǎo)的介質(zhì)所介導(dǎo)(Nolan,Gastroenterology,1975,69:1346-1356；Nolan,Hepatology 1989 10:887-91)。在接受故意注射內(nèi)毒素可能有效治療癌癥的病人中肝毒性是劑量限制性的(Engelhardt et al.,Cancer Research,1991 51:2524-2530)。
如下文的實(shí)施例所示，本發(fā)明的化合物、組合物和方法顯著地減輕由內(nèi)毒素和其它炎性刺激物和介質(zhì)引起的肝損害。本發(fā)明的化合物、組臺物和方法在治療、預(yù)防或減弱因內(nèi)毒素或其它炎性刺激物或介質(zhì)而使肝毒性成為其病因的大量病理狀況中的肝損害是有用的。涉及由內(nèi)毒素或其介質(zhì)(如TNF)所致的肝損害的病理狀況包括但不限于下列疾病狀態(tài)A．Reye綜合癥Reye綜合癥的特征在于快速的肝衰竭，并且絕大多數(shù)是作流感和其它病毒性感染的并發(fā)癥見于兒童，阿斯匹林是危險(xiǎn)因素。據(jù)信Reye綜合癥的病因涉及內(nèi)毒素或炎性介質(zhì)。內(nèi)毒素血癥見于大多數(shù)或所有Reye綜合癥患者，Reye綜合癥的動物模型包括用內(nèi)毒素和阿斯匹林聯(lián)合處理大鼠(Kilpatrick et al.,Metabolism,1989,38:73-7)。B．酒精性肝損害內(nèi)毒素和TNF在與接觸酒精相關(guān)的肝臟問題方面起作用。(Nalan JP,Hepatology 1989 10:887-91；Arai M,NakanoS.Okuno F,et al.,Hepatology 1989；9:846-851；McClainCJ and Cohen DA,Hepatology 1989,9:349-351)。C．暴發(fā)性肝炎暴發(fā)性肝炎的病因和進(jìn)程牽涉到腫瘤壞死因子，這種肝炎能迅速地導(dǎo)致肝衰竭和死亡(Aderka et al.,Med Hypotheses,198827:193-6)。D．病毒性肝炎內(nèi)毒素有助于在病毒性肝炎過程中發(fā)生肝細(xì)胞損害。病毒性肝炎降低動物模型中內(nèi)毒素的LD50，而從實(shí)驗(yàn)動物中排除內(nèi)源性內(nèi)毒素(通過結(jié)腸切除或通過利用無外來污染的嚙齒動物)減輕由病毒攻擊所致的肝損害(Gut et al.,J.Infect.Disease.,1984,149:621)。在一些肝炎病例中，由T淋巴細(xì)胞或巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的對肝病毒感染的免疫或炎性反應(yīng)有助于肝損害。在任一情況下，本發(fā)明的化合物、組臺物和方法用于治療與病毒感染相關(guān)的肝損害。E．寄生蟲感染在瘧疫感染過程中發(fā)生的肝損害和病態(tài)部分由TNF所介導(dǎo)(Clark et al.,Am.J.Pathol.1987,129:192-9)。F．全腸道外營養(yǎng)中的肝損害在接受全腸道外營養(yǎng)(TPN)和非潛伏性肝病的病人中普遍存在肝并發(fā)癥。Pappo等人(J.Surg.res.,1991,51:106-12)報(bào)道，內(nèi)毒素(LPS)或來自腸道G-菌的過渡生長在TPN相關(guān)的肝脂肪變性中起作用，并且ploymyxin B的腸道清除和特異的抗-LPS活性將減少TPN過程中的肝脂肪浸潤。結(jié)合和滅活LPS的polymyxin B對人有毒，但提供了在TPN過程中所觀察到的肝病實(shí)際上是部分由內(nèi)毒素或TNF介導(dǎo)的證明。因而，在TPN溶液中包含本發(fā)明的化合物對減小TPN誘導(dǎo)的肝損害是有益的。G．鉛中毒鉛中毒能明顯地增加對內(nèi)毒素的敏感性。鉛誘導(dǎo)的對肝代謝的干擾牽涉到鉛對內(nèi)毒素毒性的作用(Taki et al.,Eur.Surg.Res.,1985,17:140-9)。H．部分肝切除術(shù)繼部分肝切除術(shù)后(如去除癌組織)，肝衰竭的發(fā)病率和死亡率并非罕見。在部分肝切除后的動物中再生的肝組織對內(nèi)毒素和介質(zhì)的有害作用高度敏感(Shirai et al.,Acta Pathol.Jpn.,1987,37:1127-1134)。I．麻醉后肝炎吸收麻醉(如鹵仿)能引起肝炎，尤其是如果肝血流也被破壞，麻醉后肝炎的病因牽涉到內(nèi)毒素(Lomanto et al.,Anesth.Analg.1972,51:264-270)。因此，本發(fā)明的化臺物用于吸收麻醉的病人以預(yù)防和治療肝炎。外傷本身可致麻醉后肝炎。而且，外傷常引起細(xì)菌和內(nèi)毒素通過血流從腸道位移至其它組織。外科病人是最易受內(nèi)毒素毒害(由于感染)中的成員。因此，用嘧啶核苷酸前體治療外科病人(在手術(shù)前、中或后)能明顯提高對內(nèi)毒素毒性的抵抗力。J．膽汁郁積性肝炎因膽道阻塞或肝內(nèi)膽汁郁積所致的肝損傷部分是由于腸道來源的內(nèi)毒素(Shibayama Y.1989,J.Pathol.159:335-9)。K．肝移植在接受肝移植的病人中，外科術(shù)前和無肝期未存在的高內(nèi)毒素水平與移植失敗及高死亡率相關(guān)。其移植物最初無功能的病人一般有嚴(yán)重的內(nèi)毒素血癥。內(nèi)毒素血癥是外科術(shù)前并發(fā)癥和移植物喪失的原因而非作用結(jié)果(Yokoyama et al.,1989,Transplant Proc.21:3833-41)。在臨床案例中，動物(如人)在進(jìn)行移植后通過腸道或胃腸外給予本發(fā)明的化合物的劑量范圍是約2-40克/天，最好分成1至約4次劑量。供體肝臟在移植至受體前或移植過程中也可以用本發(fā)明的化臺物進(jìn)行灌注，最好是用尿苷、胞苷、乳清酸或其鹽或其?；苌铩?br> 內(nèi)毒素和炎性介質(zhì)也涉及到其它的肝臟功能障礙，上文討論的具體實(shí)例的多樣性表明了本發(fā)明的化臺物、組合物和方法在治療或預(yù)防廣泛的肝病中的有用性。
為了治療炎性肝炎，每天應(yīng)用0.5-40克(最好是3-30克)的嘧啶核苷酸前體，最好是分成1至約4次劑量。療程依賴于臨床癥狀的改善情況，急性炎性肝功能障礙一般需要的療程比慢性變性性病理狀態(tài)短。其它功能障礙如實(shí)施例2、4-6和9所示，本發(fā)明的化臺物保護(hù)除肝臟外的組織(如肌肉)，正如由用內(nèi)毒素或真菌炎性介質(zhì)酵母多糖處理的動物中血清肌酸磷酸激酶(CPK)水平所反映的那樣。血清CPK活性的升高是作為骨骼肌或心肌受損的后果。
惡病質(zhì)(體重減輕的癥狀)、組織消耗和營養(yǎng)物濫用，是癌癥病人的共同并發(fā)癥。TNF關(guān)系到惡病質(zhì)狀態(tài)的發(fā)生和持續(xù)，“Cachectin”是TNF的象征性名稱。本發(fā)明的化合物、組合物和方法可用于治療惡病質(zhì)病人。獸醫(yī)學(xué)應(yīng)用在馬和其它大動物中，存在一種稱為蹄葉炎的常見的綜合癥，它是因內(nèi)毒素從腸道進(jìn)入全身循環(huán)的一種后果(通常是在動物過多進(jìn)食富含碳水化合物的食物后，改變了腸道內(nèi)的菌群)。因?yàn)楸景l(fā)明的化合物、組合物和方法能減輕因內(nèi)毒素所致的組織損傷，所以它們被用于治療或預(yù)防動物的蹄時(shí)炎和其它的內(nèi)毒素毒性作用。本發(fā)明化臺物和組合物的施用和配方根據(jù)待治療的病人病情和狀態(tài)不同，本發(fā)明的化合物和組合物可經(jīng)口服、胃腸外注射、靜脈內(nèi)輸注或其它途徑應(yīng)用。
根據(jù)需要，可以慢性、間歇性或急性應(yīng)用本發(fā)明的化合物和組合物。在包括內(nèi)毒素毒性或全身性炎性綜合癥的情況下，在所說情況發(fā)生前、發(fā)生中或發(fā)生后應(yīng)用本發(fā)明的化合物和組合物。
該藥用活性化臺物最好是與包括易使活性化臺物加工的賦形劑和助劑的適宜藥用載體相結(jié)臺。把它們作為片劑、糖衣丸、膠囊和栓劑加以應(yīng)用。例如，可以通過口服、直腸、陰道給藥應(yīng)用組合物或通過口腔憩室釋放組臺物，并可以以溶液的形式通過注射、口服或經(jīng)局部用藥而應(yīng)用。組合物含有活性化合物和賦形劑，活性化合物約0.1-99％，最好是約50-90％。
為了通過注射或靜脈輸注進(jìn)行非胃腸道給藥，活性化合物被懸浮或溶解于水性介質(zhì)中，如滅菌水或鹽溶液中。注射溶液或懸浮最好含有表面活性劑，如聚氧乙烯脫水山梨醇酯類、脫水山梨醇酯類、聚氧乙烯醚類，或增溶劑，如丙二醇或乙醇。溶液一般含1-25％的活性化合物。
適宜的賦形劑包括填充劑如糖，例如乳糖、蔗糖、甘露糖或山梨糖醇、纖維素制劑和/或磷酸鈣，如磷酸三鈣或磷酸氫鈣，以及結(jié)合劑如淀粉糊，例如用玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉或土豆淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮。
助劑包括流動調(diào)節(jié)劑和潤滑劑，如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其鹽，如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣和/或聚乙二醇。如果需要的話，以適宜的包衣提供給糖衣丸核心以抵抗胃酸。為此，應(yīng)用最好含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化肽、拋光溶液和適宜有機(jī)溶劑或溶劑混合物的濃縮糖溶液。為了形成抗胃液的包衣，應(yīng)用了適宜的纖維素制劑的溶液，如鄰苯二甲酸乙酰纖維素酯或鄰苯二甲酸羥丙甲基纖維素酯。最好在片劑或糖衣丸包衣中加入染料或著色劑，例如用于鑒別或?yàn)榱俗鳛椴煌衔飫┝康奶卣鳌?br> 本發(fā)明的藥物制劑用已知的方式制備，例如，借助于常規(guī)的混合、成粒、制糖衣丸、溶解或凍干的方法。因此，口服用的藥物制劑是通過將活性化臺物與固相賦形劑相結(jié)合而獲得，最好是在加入適宜助劑后碾碎所得混合物，并將混合物制粒，如果需要的話，制得片劑或糖衣丸核心。
用于口服釋放的其它藥物制劑包括由明膠制成的推進(jìn)固定(push-fit)膠囊以及由明膠和增塑劑，如甘油或山梨糖醇制成的軟封閉膠囊。推進(jìn)固定的膠囊含有顆粒狀的活性化合物，它們最好是與填充劑(如乳糖)、粘合劑(如淀粉)和/或潤滑劑(如滑石或硬脂酸鎂)以及最好還有穩(wěn)定劑一起混合。在軟膠囊中，活性化合物最好是被溶解或懸浮予適宜的液體如脂肪油類、液體石蠟或聚乙二醇中。此外，最好加入穩(wěn)定劑。其它的口服用制劑包括溶液、懸液或乳液。特別提及的是，適于通過腸內(nèi)導(dǎo)管，如鼻胃管給藥的液體形式是有利的，尤其是對于那些臥床不起或神志不清的病人。
經(jīng)直腸用藥的藥物制劑包括如由活性化合物與栓劑基質(zhì)聯(lián)合組成的栓劑。適宜的栓劑基質(zhì)例如有天然或合成的甘油三酯、鏈烷烴、聚乙二醇或高級鏈烷醇。此外，由活性化合物與基質(zhì)聯(lián)合組成的明膠直腸膠囊也是有用的?；|(zhì)物質(zhì)例如包括液體甘油三酯、聚乙二醇或鏈烷烴。
用于胃腸外給藥的適宜制劑包括水溶形式活性化合物的水溶液，如水溶性鹽。另外，可該活性化合物適于以懸浮液在油性注射懸液中給予。適宜的親油溶劑或載體包括脂肪油類(如麻油)、或合成的脂肪酸酯(如油酸乙酯或甘油三酯)。水性注射懸液最好包括提高懸液粘度的物質(zhì)，例如包括羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇和/或葡聚糖。懸液最好含有穩(wěn)定劑。本發(fā)明化臺物的合成借助嘧啶核苷酸或同種類同性質(zhì)的物質(zhì)與一種活性的羧酸反應(yīng)合成嘧啶核苷酸的?；苌?，所說的活性羧酸已用適當(dāng)試劑處理過，使其羧酸碳原子較原始狀態(tài)更易受親核性進(jìn)攻。用于合成本發(fā)明化臺物的活性羧酸的例子有?；?、酸酐、N-羥基琥珀酰亞胺酯或用BOP-DC活性的羧酸。也可用偶聯(lián)劑(如二環(huán)乙基碳二亞胺DCC)將羧酸連接到嘧啶核苷或同類物上。
在制備本發(fā)明的?；_物過程中，當(dāng)所需?；苌锏乃嵩淳哂懈蓴_?；磻?yīng)的基團(tuán)，如羥基或氨基時(shí)，那么在制備酐之前分別用保護(hù)基團(tuán)如叔丁基二甲基甲硅烷基醚或叔BOC基阻斷所說的干擾基。例如，乳酸與叔丁基二甲基氯硅烷一起轉(zhuǎn)化為2-叔丁基二甲基硅氧丙酸，繼而用堿的水溶液水解所得的甲硅烷基酯。通過被保護(hù)的酸與DCC反應(yīng)形成酐。用氨基酸，通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備N-叔-boc衍生物，然后用DCC轉(zhuǎn)化為酐。用含有不止一個(gè)羧酸基團(tuán)的酸(如琥珀酸、富馬酸或已二酸)將所需二羧酸的酸酐在吡啶或吡啶加二甲酰胺或二甲基乙酰胺中與嘧啶核苷反應(yīng)。
借助標(biāo)準(zhǔn)方法，利用DCC溶于適當(dāng)溶劑，特別是(ⅰ)二氯甲烷和(ⅱ )二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺的混臺物，將氨基酸偶聯(lián)到胞苷的外環(huán)氨基上，和偶聯(lián)到嘧啶核苷或同類物的醛糖部分的羥基上。
通過在無水條件下使核苷與溶于溶劑(如吡啶或吡啶加二甲基甲酰胺)中的適宜碳氯甲酸酯反應(yīng)來制備非甲基化嘧啶核苷的碳氧羰基衍生物。在真空下除去溶劑，用柱層析純化殘余留物。
可以用來制備本發(fā)明化合物的其它合成方法對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見的。
下面的實(shí)施例是說明而非限制本發(fā)明的方法和組合物。在臨床治療中正常遇到的對各種條件和參數(shù)的其它適當(dāng)變動和修改是本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的，包括在本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)。
實(shí)施例1三乙酰尿苷和尿苷提高用死的E.Coli處理的小鼠的存活數(shù)目的膿毒癥能夠由G-菌引發(fā)，甚至是在G-近不存活的情況下，因?yàn)橹饕挠|發(fā)因素是內(nèi)毒素(細(xì)菌細(xì)胞壁的一種成分)。本實(shí)施例研究的目的是為了檢測口服三乙酰尿苷和胃腸外給予尿苷對經(jīng)致死量的死的E.Coli處理的小鼠存活的影響。方法將18只雌性Balb/c小鼠(8周齡)分成每6只動物一組。所有的小鼠都給予500ug經(jīng)超聲處理懸浮于0.2ml鹽水中的E.Coli(血清型0111:B4)的丙酮粉。一個(gè)組的小鼠在給予E.Coli的前2個(gè)小時(shí)經(jīng)腹膜內(nèi)注射尿苷(溶于0.2ml鹽水中，2000mg/kg)。另一組小鼠經(jīng)喉頭插管給予三乙酰尿苷(6000mg/kg，溶于含2.5％Tween80的1∶1玉米油/水的載體中)。對存活情況監(jiān)測一周。
A．n=6E.Coli (對照)B．n=6E.Coli (對照)+Urdi.p.
C．n=6E.Coli (對照)+TAUp.o.結(jié)果對照組的動物在給予E.Coli粉后18小時(shí)表現(xiàn)為休克和低熱。處理組的動物是活動的并維持體溫，盡管在頭48小時(shí)的整個(gè)觀察期間處理組動物的皮毛是邋遢的。存活48小時(shí)的動物完全恢復(fù)。所有只用E.Coli處理的小鼠在48小時(shí)內(nèi)全部死亡。所有用尿苷或三乙酰尿苷處理和給予死的E.Coli的小鼠全部存活。
實(shí)施例2尿苷在保護(hù)組織免受內(nèi)毒素?fù)p害中的劑量-反應(yīng)研究目的本研究的目的是為了確定尿苷在防止由內(nèi)毒素(LPS)所致的炎性組織損害中的劑量-反應(yīng)特征。方法將雌性Balb/c小鼠(8周齡)分成6組，每組6只動物。對一組動物不進(jìn)行處理以提供指示組織損害的血清化學(xué)基值。其余的五組小鼠經(jīng)腹膜內(nèi)注射給予在0.2ml鹽水中的100μg鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素。在給予內(nèi)毒素前2個(gè)小時(shí)，該五組小鼠分別經(jīng)腹膜內(nèi)注射給予0.500、1000、2000和4000mg/kg(在0.2ml鹽水中)的尿苷。給予內(nèi)毒素18小時(shí)后，收集血樣以測定組織損害的血清化學(xué)指示值。結(jié)果尿苷產(chǎn)生了對組織免受內(nèi)毒素?fù)p害的劑量依賴性保護(hù)作用。ALT、AST和SDH是肝損害的特異性指示物；CPK是肌肉損害的指示物，而LDH由肌肉和肝臟兩者釋放。在本實(shí)驗(yàn)中，尿苷對小鼠的最有效劑量是2000mg/kg。
表1尿苷減弱內(nèi)毒素誘導(dǎo)的組織損害ALT AST LDH CPK SDH基值(無LPS)198±124 137±26708±177906±211 49±2對照(LPS) 3768±482 4176±459 8406±850 11628±2398 1170±157尿苷5002568±678 3090±871 5988±1225 8832±1089 834±192尿苷1000 1338±401*1206±314*3101±860*4431±1529*404±95*尿苷2000 605±236*620±174*1990±642*4531±2139*125±45*尿苷4000 1120±970*744±457*3441±2378*8680±6746*135±75**=與對照組(LPSi.p.)的差異，P＜0.02ALT=丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST=天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶LDH=乳酸脫氫酶CPK=肌酸磷酸激酶SDH=山梨糖醇脫氫酶實(shí)施例3口服三乙酰尿苷提高經(jīng)致死量鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素處理的小鼠的存活數(shù)目的由G-細(xì)菌引起的膿毒癥綜合癥是通過細(xì)菌壁的脂多糖成分-內(nèi)毒素所介導(dǎo)的。本實(shí)驗(yàn)的目的是確定口服尿苷原藥(三乙酰尿苷；TAU)對用純化的鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素(LPS)經(jīng)致死量處理的小鼠存活的影響。方法將20只雌性Balb/c小鼠(8周齡)分成兩組，每組10只。給所有的小鼠經(jīng)腹膜內(nèi)注射100ug溶于0.2ml鹽水中的鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素。其中一組小鼠通過灌胃給予三乙酰尿苷(6000mg/kg，溶于含2.5％Tween80的1∶1玉米油/水的載體中)。對存活情況監(jiān)測一周。結(jié)果所有只給予內(nèi)毒素的10只動物在48小時(shí)內(nèi)全部死亡。10只口服TAU的小鼠中有9只在7天的觀察期間存活，并且表現(xiàn)為已完全恢復(fù)。
實(shí)施例4口服三乙酰尿苷降低由內(nèi)毒素所致的組織損害目的細(xì)菌內(nèi)毒素引起肝臟和其它器官的損害，其結(jié)果能夠通過測定表明組織完整性和功能的血清酶水平和其它標(biāo)志物來進(jìn)行評估和定性。本研究的目的是為了確定口服三乙酰尿苷(TAU)在減弱因內(nèi)毒素所致的組織損害方面的劑量-反應(yīng)特征。方法雌性Balb/c小鼠(8周齡)被分成6只一組。對其中的一組動物不進(jìn)行任何處理以提供表明組織損害的血清化學(xué)基值。其它四組小鼠經(jīng)腹膜內(nèi)注射給予100ug在0.2ml鹽水中的鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素。經(jīng)內(nèi)毒素處理的三組小鼠在給予內(nèi)毒素前24,6和2小時(shí)先后經(jīng)灌胃給予在0.4ml鹽水中的TAU2000、4000和6000mg/kg，另外一組小鼠在給予內(nèi)毒素前2小時(shí)只給予6000mg/kg單劑量的TAU。TAU配制成在水中含1％羧甲基纖維素的懸浮液。對照組經(jīng)口灌胃給予羧甲基纖維素載體。結(jié)果口服TAU降低了組織損害的血清化學(xué)指示物水平。防止內(nèi)毒素引發(fā)的器官損害的有利作用是劑量依賴性的。給予內(nèi)毒素2小時(shí)前的6000mg/kg單劑TAU提供了與給予內(nèi)毒素前24,6和2小時(shí)的三劑TAU大概相同的保護(hù)程度。
表2:.TAU減弱內(nèi)毒素誘發(fā)的組織損害ALTASTLDHCPK SDH基值(無LPS) 130±46148±32563±132 982±32941±5對照(LPS) 3679±703 4798±927 6998±1064 2263±247 1128±174TAU 20002632±915 3151±1085 5419±1561 1053±80 793±294TAU 40001463±382*1940±456*3878±672*2811±395*345±106*TAU 6000491±199*484±161*1448±334*1820±612*172±95*TAU 6000365±91*403±61*1221±181*1183±151*104±18*單劑量*=與對照組(LPSi.p.+載體p.o.)的差異，P＜0.02ALT=丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST=天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶LDH=乳酸脫氫酶CPK=肌酸磷酸激酶SDH=山梨糖醇脫氫酶實(shí)施例5在用鹿角菜糖作為內(nèi)毒素毒性的增強(qiáng)劑處理的小鼠中尿苷減輕組織損害鹿角菜糖(Carrageenan)是一種來自海藻的多糖，它提高巨噬細(xì)胞的活性并且是對內(nèi)毒素產(chǎn)生全身性炎性反應(yīng)的主要細(xì)胞介導(dǎo)物。巨噬細(xì)胞在應(yīng)答內(nèi)毒素時(shí)釋放炎性肽和其它化合物。用鹿角菜糖預(yù)處理敏化巨噬細(xì)胞，以使需要比正常時(shí)少得多的內(nèi)毒素用以誘發(fā)嚴(yán)重的全身性炎性反應(yīng)。而且，與單用內(nèi)毒素相比，鹿角菜糖加內(nèi)毒素的聯(lián)合毒性作用涉及稍微不同的炎性介質(zhì)譜(Frank s et al.,Infection and Immunity,59:2609-2614,1991)。該實(shí)驗(yàn)的目的是為了確定尿苷對鹿角菜糖和內(nèi)毒素聯(lián)合所致的組織損害的影響。方法雌性Balb/c小鼠(8周齡)被分成五組，每組6只。對其中一組動物不進(jìn)行處理以提供指示組織損害的血清化學(xué)基值。其它四組小鼠經(jīng)腹膜內(nèi)注射給予2mg在0.2ml鹽水中的λ鹿角菜糖，一小時(shí)后，這些動物中的三組還是經(jīng)腹膜內(nèi)注射給予2mg在0.2ml鹽水中的鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素。接受鹿角菜糖和內(nèi)毒素的兩組動物還給予尿苷(2000mg/kgi.p.溶于0.2ml鹽水中)，其中一組在給予內(nèi)毒素30分鐘后用尿苷處理，其余一組在給予內(nèi)毒素24,6和2小時(shí)前用尿苷進(jìn)行3次預(yù)處理(2000mg/kg/劑i.p.)。在給予內(nèi)毒素18小時(shí)后，收集血樣以測定組織損害指示物的血清化學(xué)值。結(jié)果正如由血清化學(xué)指標(biāo)所評估的，鹿角菜糖與低劑量內(nèi)毒素(2mg)的聯(lián)合導(dǎo)致了顯著的組織損害。在給予內(nèi)毒素前或之后用尿苷進(jìn)行處理能明顯減弱由于鹿角菜糖-內(nèi)毒素聯(lián)合所致的組織損害。數(shù)據(jù)如下所示。
表3尿苷減弱內(nèi)毒素在鹿角菜糖敏化的小鼠中誘發(fā)的組織損害ALT AST LDH CPK SDH基值(無LPS)223±77 141±35 700±145747±278 33±1對照(LPS) 1937±235 2072±149 7360±354 11612±1513 107±17尿苷 817±202*989±139*4385±454*5485±1638*80±12*尿苷 770±141*891±79*4416±283*5033±565*117±9后處理*與對照組的差異，P＜0.05ALT=丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST=天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶LDH=乳酸脫氫酶CPK=肌酸磷酸激酶SDH=山梨糖醇脫氫酶實(shí)施例6尿苷提高酵母多糖處理的小鼠的存活數(shù)目的酵母多糖是一種酵母成分，酵母的這種主要多糖成分可以誘導(dǎo)全身性炎癥和補(bǔ)體的活化。在一般的真菌感染中(包括但不限于酵母感染)，這類多糖參與誘導(dǎo)膿毒癥反應(yīng)。在嚙齒動物中給予酵母多糖被認(rèn)為是多器官衰竭綜合癥的適宜模型(Goris et al.,1986,Arch.Surg.121:897-901；Steinberg et al.,1989.Arch.Surg.124:1390-1395)。在用最小致死量酵母多糖時(shí)的死亡率部分是由于腸道損害導(dǎo)致細(xì)菌和細(xì)菌毒素從腸道移位至血流中(Deitch et al.,1992.J.Trauma 32:141-147)。方法；雌性Balb/c小鼠(8周齡)被分成5只一組1．酵母多糖15mg2．酵母多糖15mg+尿苷3．酵母多糖20mg4．酵母多糖20mg+尿苷5．基值酵母多糖A以50mg/ml的濃度懸于礦物油中，并經(jīng)腹膜內(nèi)注射給藥。在給予酵母多糖前2小時(shí)經(jīng)腹膜內(nèi)注射給予尿苷(2000mg/kg，溶于0.2ml中)。
在給予酵母多糖18小時(shí)后，從接受20mg酵母多糖的動物組和基值組采集血樣，繼而檢測組織損害的血清化學(xué)指標(biāo)。結(jié)果A．48小時(shí)時(shí)的存活數(shù)實(shí)驗(yàn)組 存活數(shù)酵母多糖15mg/kg 0/5酵母多糖15mg/kg+尿苷5/5酵母多糖20mg/kg 0/5酵母多糖20mg/kg+尿苷3/5B．14天時(shí)的存活數(shù)(完全恢復(fù))酵母多糖15mg/kg 0/5酵母多糖15mg/kg+尿苷4/5
尿苷明顯提高經(jīng)酵母多糖處理的小鼠的存活時(shí)間和長期存活者的發(fā)生率。
C．組織損害的血清化學(xué)指標(biāo)表4尿苷減弱酵母多糖誘發(fā)的組織損害ALT AST LDH CPKSDH基值 50±2293±41 899±198532±73152±25酵母多糖 397±140 392±97 1974±392 2107±1172 81±15酵母多糖+尿苷120±126 273±131 1419±244 754±37058±22ALT=丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST=天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶LDH=乳酸脫氫酶CPK=肌酸磷酸激酶SDH=山梨糖醇脫氫酶實(shí)施例7精氨酸對內(nèi)毒素處理的小鼠存活影響與尿苷的比較目的據(jù)報(bào)道氨基酸精氨酸在膿毒癥綜臺癥中具有積極的作用(Leonet al.,J.Parenteral and Enteral Nutrition,1991,15:503-508)。本研究的目的是為了比較尿苷與精氨酸的效力。精氨酸在膿毒癥綜臺癥中輔助肝功能，并因此而在臨床中加以應(yīng)用。方法重25g的雌性Balb/c小鼠被分成五組，每組5或6只動物。經(jīng)腹膜內(nèi)注射給予5組小鼠125μg溶于0.2ml鹽水中的鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素(LPS)。給予內(nèi)毒素的前2個(gè)小時(shí)，5組小鼠接受下列注射1)鹽水 (對照)2)尿苷 2000mg/kg3)精氨酸25mg/kg4)精氨酸250mg/kg5)精氨酸1250mg/kg所有的藥物都在0.2ml的鹽水經(jīng)腹膜內(nèi)注射給予。在16.20和24小時(shí)時(shí)計(jì)算每組中存活小鼠數(shù)目。結(jié)果僅有一只對照小鼠在給予LPS后存活了16小時(shí)，相反，此時(shí)大部分用尿苷或精氨酸處理過的小鼠都存活。然而，給予內(nèi)毒素24小時(shí)后，只有用尿苷處理的小鼠存活。所有三種劑量的精氨酸的確提高了存活時(shí)間(但未出現(xiàn)長時(shí)間的幸存者)，并且最低劑量(25mg/kg)比最高劑量(1250mg/kg)更有效。很清楚，在促進(jìn)內(nèi)毒素處理的動物存活方面，尿苷比精氨酸更有效。
表5在給予LPS后尿苷相對精氨酸對存活情況的影響給予LPS后的時(shí)間組 16 20 241．對照 1/6 0/6 0/62．尿苷 5/5 5/5 5/53．Arg 25 5/5 3/5 0/54．Arg 250 4/5 2/5 0/55．Arg 1250 4/6 1/6 0/6實(shí)施例8乳清酸提高經(jīng)鼠傷寒沙門氏萄內(nèi)毒素處理的小鼠的存活數(shù)目的由G-細(xì)菌引起的膿毒癥綜合癥主要是通過細(xì)菌壁的多糖成分內(nèi)毒素介導(dǎo)的。本研究的目的是為了確定乳清酸鹽對經(jīng)致死量純化的鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素處理的小鼠的存活數(shù)的影響。方法20只雌性Balb/c小鼠(8周齡)被分成兩組，各10只。其中一組小鼠用賴氨酸乳清酸鹽處理4次(200mg/kg/劑；每天上午9點(diǎn)鐘和下午2點(diǎn)鐘各一次，連續(xù)2天)。賴氨酸乳清酸鹽是乳清酸的水溶性鹽，賴氨酸本身并不提高內(nèi)毒素處理小鼠的存活數(shù)。對照動物按照相同的處理日程接受0.2ml無菌水。所有的小鼠在用最后一劑賴氨酸乳清酸鹽處理后立即經(jīng)腹膜內(nèi)注射在0.2ml鹽水中的100ug鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素(LPS)。對存活數(shù)監(jiān)測一周。結(jié)果
對照組中的所有小鼠在48小時(shí)內(nèi)死亡。經(jīng)賴氨酸乳清酸鹽處理的10只小鼠中有9只在個(gè)72小時(shí)的觀察期中都存活，并且在給予LPS一周后仍然存活，且表現(xiàn)為完全恢復(fù)。
表6乳清酸鹽提高內(nèi)毒素處理小鼠的存活數(shù)內(nèi)毒素處理后的存活數(shù)給予LPS后的時(shí)間(hr)24262832 4872對照 6/10 4/10 3/10 2/10 0/10 0/10LOR 10/10 10/10 10/10 10/10 9/10 9/10實(shí)施例9乳清酸保護(hù)組織不受內(nèi)毒素?fù)p害目的本研究的目的是為了確定乳清酸在防止由內(nèi)毒素所致的炎性組織損害中的保護(hù)作用。方法雌性Balb/c小鼠(8周齡)被分成三組，每組6只。一組動物不經(jīng)任何處理以提供組織損害的血清化學(xué)指標(biāo)基值。其余兩組動物接受溶于0.2ml鹽水中的100ug鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素(LPS)的腹膜內(nèi)注射。在注射內(nèi)毒素前2小時(shí)，一組小鼠用相當(dāng)于100mg/kg游離乳清酸劑量的賴氨酸乳清酸鹽處理。給予內(nèi)毒素18小時(shí)后，采集血樣以測定組織損害指示物的血清化學(xué)含量。結(jié)果乳清酸鹽保護(hù)組織不受給予的內(nèi)毒素?fù)p害。
表7乳清酸鹽減弱內(nèi)毒素誘發(fā)的組織損害ALTAST LDH CPK SDH基值(無LPS) 132±14165±21 681±5521258±233 42±1對照(LPS)2827±413 2860±506 6833±1167 6820±365 680±142乳清酸鹽+LPS 252±99*415±77*1641±274*1040±283*89±7**=與對照組的差異(LPSi.p.),P＜0.02ALT=丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST=天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶LDH=乳酸脫氫酶CPK=肌酸磷酸激酶SDH=山梨糖醇脫氫酶實(shí)施例10尿苷和三乙酰尿苷減弱由伴刀豆球蛋白A引起肝損害目的白細(xì)胞介素-2(IL-2)在臨床上用于治療多種癌癥。在接受治療劑量的IL-2治療癌癥的病人中，應(yīng)答IL-2所產(chǎn)生的肝毒性并非罕見(Viens et al.,J.Immunother.1992 11:218-24)。據(jù)報(bào)道在通過給予小鼠伴刀豆球蛋白A(Con A)誘導(dǎo)的自身免疫性肝炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，肝損害與內(nèi)源性IL-2產(chǎn)生的增加有關(guān)(Tiegs et al.,J.Clin.Invest.1992 90:196-203)。本研究的目的在于證明本發(fā)明的化合物和方法在減弱由給予Con A所引發(fā)的肝損害方面的應(yīng)用。方法雌性Balb/c小鼠(8周齡)被分成四組，每組五只。其中一組小鼠不經(jīng)任何處理以提供組織損害的血清化學(xué)指標(biāo)基值。其余三組小鼠經(jīng)尾靜脈注射給予在0.2ml鹽水中的10mg/kg Con A。在注射Con A之前2小時(shí)，其中一組小鼠用尿苷處理(2000mg/kg,i.p.于0.2ml鹽水中)，而另一組用三乙酰尿苷處理(6000mg/kg口服，予含2.5％Tween 80的0.6ml1∶1玉米油/水乳液中)，剩下的Con A處理組(對照)在給予Con A前2小時(shí)經(jīng)腹膜內(nèi)注射0.2ml鹽水。給予Con A 20小時(shí)后，從所有的小鼠中采集血樣，以測定組織損害或代謝紊亂的各種指標(biāo)的血清水平。結(jié)果如由ALT、AST和SDH三種酶的血清水平所確定的，給予Con A對肝臟產(chǎn)生了重大的損害。Con A并不明顯升高肌酸磷酸激酶(CK)這種最主要見于肌肉中的酶的水平。在該模型中，由COn A引起的組織損害比由內(nèi)毒素引起的損害更加特異地定位于肝臟。尿苷和下AU兩者都減少由于給予Con A所致的肝損害，結(jié)果如下表8所示。
表8尿苷和三乙酰尿苷減弱由Con A所致的肝損害ALTASTLDHCPK SDH基值(無Con A)144±18 217±27790±902392±370 51±2Con A2652±847 2765±1030 4335±1385 2572±486 1114±318Con A+尿苷 289±115*394±114*973±202*1996±317 163±68*Con A+TAU575±286*613±221 1380±270 1951±435 283±143**=與對照組的差異(LPSi.p.),P＜0.02ALT=丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST=天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶
LDH=乳酸脫氫酶CPK=肌酸磷酸激酶SDH=山梨糖醇脫氫酶用于本研究的Con A模型中的肝損害與升高的IL-2水平相關(guān)，并且是通過T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的。因此，本發(fā)明的化臺物和方法可用于減少由于治療性給予IL-2所引起的副作用，而且，本發(fā)明的化合物和方法被用于治療自身免疫性肝炎。
實(shí)施例11尿苷減弱膿毒癥在血凝方面引起的改變目的播散性血管內(nèi)凝血(DIC)是膿毒癥的嚴(yán)重后果，其中凝血和纖溶系統(tǒng)都被激活，以致凝血因子被迅速消耗。DIC能引起出血和血栓形成。肝臟是合成凝血因子和從循環(huán)中清除凝血梅的微聚物的主要場所。本實(shí)驗(yàn)的目的在于確定嘧啶核苷酸前體對膿毒癥引起的凝血紊亂的影響。凝血激酶時(shí)間用作反映血凝系統(tǒng)狀態(tài)的一個(gè)指標(biāo)。方法30只雌性Balb/c小鼠(8周齡)被分成三組，每組10只。一組動物不經(jīng)任何處理而被用于確定部分凝血激酶時(shí)間的基值。兩組小鼠接受30mg/kg死的E.Coli(0111:B4株)。在給予E.Coli之前2小時(shí)，一組小鼠經(jīng)腹膜內(nèi)注射給予尿苷(2000mg/kg)。給予E.Coli 20小時(shí)后，從所有30只小鼠中收集血漿以確定部分凝血激酶時(shí)間(PTT)。經(jīng)眶后叢收集0.27ml血液置入含有0.03ml 3.5％檸檬酸鈉(pH4)的試管中。通過離心機(jī)分離血漿，并將100μl血漿移至清潔的1、5ml小離心管中，用商售試劑測定PTT。結(jié)果給予死的E.Col引起正常的部分凝血激酶時(shí)間延長。如表9所示，尿苷減弱了膿毒癥在凝血時(shí)間方面引起的改變。表9尿苷減小膿毒癥對部分凝血激酶時(shí)間所引起的變化部分凝血激酶時(shí)間組 PTT(秒)基值(正常)32.3±1.3E.Coli69.8+5.4E.Coli+尿苷 51.2±2.1**=與對照組(只有E.Coli)的差異，P＜0.05實(shí)施例12由于T細(xì)胞和內(nèi)毒素所致的聯(lián)合肝損害幾種重要形式的病毒性肝炎以及自身免疫性肝炎是由細(xì)胞毒性T細(xì)胞攻擊具有合適病毒抗原或其它抗原的肝細(xì)胞而引發(fā)的。因?yàn)閮?nèi)毒素參予由多種其它因素如四氯化碳、膽堿缺乏、酒精或膽汁郁積引發(fā)的肝損害，所以進(jìn)行研究以確定由T細(xì)胞引起的肝損害是否誘導(dǎo)對內(nèi)毒素的肝高敏性。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)，研究了TAU對于由T淋巴細(xì)胞和內(nèi)毒素兩者聯(lián)合引起的肝損害的影響。
實(shí)施例12ACon A增強(qiáng)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的組織損害向雌性Balb/c小鼠(8周齡)組(n=6)給予Con A(2.5mg/kg，靜脈注射)、內(nèi)毒素(鼠傷寒沙門氏菌，0.5mg/kg)或者聯(lián)合給予Con A和內(nèi)毒素。在給予內(nèi)毒素24小時(shí)前應(yīng)用Con A。在注射內(nèi)毒素(或者在沒有給予內(nèi)毒素的小鼠組中給予其載體)18小時(shí)后采集血樣?！盎怠毙∈蠼M只給予載體(鹽水)而不給Con A或內(nèi)毒素。
表1Con A增強(qiáng)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的組織損害ALTAST LDH CPK SDH基值 87±15 110±9656±41413±87 39±2Con A 2.5mg/kg 117±19170±16 915±46419±132 42±4LPS 0.5mg/kg 119±23256±22 881±10426±82 41±3Con A+LPS 1130±494 2119±910 4370±1303 1525±450 471±267ALT=丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST=天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶LDH=乳酸脫氫酶CPK=肌酸磷酸激酶SDH=山梨糖醇脫氫酶正如由血清酶水平(ALT、AST、LDH和SDH是肝損害的標(biāo)志物；CPK是肌肉損害的指示物)所確定的，僅內(nèi)毒素或Con A本身以本實(shí)驗(yàn)中所用劑量只對肝臟和肌肉產(chǎn)生很小的損害。然而，在用Con A和內(nèi)毒素聯(lián)合處理的小鼠中觀察到明顯是更大的損害。據(jù)信該模型中Con A的毒性與T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的肝損害明顯相關(guān)(Tiegs et al.,J.Clin.Invest.90:196-203,1992)。因此，這些結(jié)果支持了腸道來源的內(nèi)毒素參予歸結(jié)于細(xì)胞毒性T細(xì)胞的肝損害(即在病毒性和自身免疫性肝炎中)這一觀點(diǎn)，與已由包括四氯化碳、膽堿缺乏、D-半乳糖胺和病毒感染在內(nèi)引發(fā)肝損害的其它主要結(jié)果所證實(shí)的一樣。
實(shí)施例12BTAU減小由于細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和內(nèi)毒素聯(lián)臺引起的肝損害。
靜脈內(nèi)給予Con A引發(fā)的實(shí)驗(yàn)性肝炎是由細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的激活所介導(dǎo)的。在本模型中，肝損害明顯地提高了對細(xì)菌內(nèi)毒素毒性作用的敏感性。相繼給予Con A和內(nèi)毒素產(chǎn)生的肝損害比相加性肝損害(參見實(shí)施例12A)大。病毒性肝炎和自身免疫性肝炎中的肝損害涉及相似的機(jī)理，伴隨著由T細(xì)胞誘發(fā)和由腸道來源的內(nèi)毒素和其它炎性過程加劇的損害。
TAU保護(hù)實(shí)驗(yàn)動物的肝臟免受內(nèi)毒素或Con A誘發(fā)的損害。在本實(shí)驗(yàn)中，檢測TAU在因相繼給予Con A和內(nèi)毒素聯(lián)合引起肝損害的小鼠中所具有的肝保護(hù)作用。方法雌性Balb/c小鼠(8周齡)被分成三組，每組7只。一組小鼠不接受任何處理以提供組織損害的血清化學(xué)指標(biāo)基值。其余兩組小鼠經(jīng)靜脈(尾靜脈)注射給予在0.2ml鹽水中2mg/kg Con A，在此之后24小對，再給予鼠傷寒內(nèi)毒素(10ug，腹膜內(nèi)注射i.p.)。這其中的一組小鼠在給予Con A之前的2小時(shí)和給予內(nèi)毒素的前2小時(shí)分別口服TAU(6000mg/kg，溶于0.6ml 0.5％的甲基纖維素中)。其余的Con A/內(nèi)毒素處理組(對照)只接受載體(甲基纖維素)。給予內(nèi)毒素18小時(shí)后，從所有的小鼠中采集血樣，以確定組織損害或代謝紊亂的各種指標(biāo)的血清水平。結(jié)果相繼給予Con A和內(nèi)毒素產(chǎn)生明顯的肝損害，正如肝損害的血清化學(xué)指標(biāo)所確定的那樣?？诜AU顯著減弱這種聯(lián)合性肝損害。
口服TAU減弱由Con A+LPS所致的肝損害ALT AST LDH CPKSDH基值 118±33 162±14 522±80 1521±23556±3ConA/LPS 2295±309 3408±389 5696±5604684±1569 700±69ConA/LPS+TAU 285±67*451±87*1341±236*2098±465*122±19**=與對照組(LPSi.p.)的差異，P＜0.02ALT=丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST=天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶LDH=乳酸脫氫酶CPK=肌酸磷酸激酶SDH=山梨糖醇脫氫酶前文所述意在說明而非限制本發(fā)明。在不脫離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍的情況下，多種變化和修改是有效的。
權(quán)利要求
1．尿苷磷酸化酶抑制劑在制備用于治療或預(yù)防動物的膿毒癥的藥物中的應(yīng)用。
2．尿苷磷酸化酶抑制劑在制備用于減小治療性細(xì)胞激活素或炎性刺激物在動物中的毒性的藥物中的應(yīng)用。
3．根據(jù)權(quán)利要求2的用途，所說的細(xì)胞激活素或所說的刺激物選自白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-6、腫瘤壞死因子、內(nèi)毒素、真菌多糖和雙鏈RNA。
4．尿苷磷酸化酶抑制在制備用于治療動物癌癥的藥物中的應(yīng)用。
5．根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其中所說的細(xì)胞激活素或所說的刺激物選自白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-6、腫瘤壞死因子、內(nèi)毒素、真菌多糖和雙鏈RNA。
6．尿苷磷酸化酶抑制劑在制備用于治療或預(yù)防動物的炎性肝炎的藥物中的應(yīng)用。
7．尿苷磷酸化酶抑制劑在制備用于治療或預(yù)防接受全腸道外營養(yǎng)的動物中肝臟損害的藥物中的應(yīng)用。
8．尿苷磷酸化酶抑制劑在制備用于治療或預(yù)防接受肝臟移植的動物中肝臟損害的藥物中的應(yīng)用。
9．一種組合物，包括a)嘧啶核苷酸前體的酰基衍生物，和b)尿苷磷酸化酶的抑制劑。
10．一種組合物，包括a)嘧啶核苷酸前體的?；苌?，和b)嘌呤核苷酸前體。
11．如權(quán)利要求10的組合物，其中所說的嘧啶核苷酸前體是尿苷、胞苷、或乳清酸鹽。
12．如權(quán)利要求10的組合物，其中所說的嘌呤核苷酸前體是肌苷、腺苷或者是肌苷或腺苷的?；苌?。
全文摘要
本發(fā)明涉及尿苷磷酸化酶抑制劑在制備治療或預(yù)防膿毒癥、治療性細(xì)胞激活素或炎性刺激物在動物中的毒性、癌癥、炎性肝炎、接受全腸道外營養(yǎng)動物的肝臟損害以及接受肝臟移植動物的肝臟損害的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及含有尿苷磷酸化酶抑制劑的組合物。
文檔編號A61P43/00GK1309970SQ0013448
公開日2001年8月29日 申請日期2000年11月29日 優(yōu)先權(quán)日1992年12月8日
發(fā)明者R·W·馮波斯特爾, M·K·巴馬特, B·M·希爾特布蘭德 申請人:普羅神經(jīng)細(xì)胞有限公司