專利名稱：用沉子促進(jìn)熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，特指一種利用沉子促進(jìn)熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)使油脂中隔上下層的反應(yīng)溶液混合的方法。
目前在進(jìn)行核酸聚合酶連鎖反應(yīng)(簡稱PCR反應(yīng))或結(jié)合反轉(zhuǎn)錄酶反應(yīng)(簡稱RT反應(yīng))時，常在反應(yīng)管E中設(shè)置油脂中隔層B，參閱

圖1和圖2，中隔層B的油脂熔點(diǎn)為40-75℃(常用石蠟)，油脂中隔層B在反應(yīng)前為固相，將上、下層反應(yīng)溶液A和C隔開，當(dāng)開始進(jìn)行反應(yīng)時，由于溫度升高，固相的油脂中隔層13液化，由于油脂的比重小于水，液化的油脂層B應(yīng)浮于上表面，使上、下層的反應(yīng)溶液A和C混合進(jìn)行反應(yīng)，其存在問題在于實(shí)際應(yīng)用中，由于反應(yīng)溶液的重力作用以及反應(yīng)管E的管壁與液化油脂層B的吸附作用，使液化的油脂B即使比重小于水，也不能迅速浮于上表面，而仍滯留在中間位置，阻隔上、下層反應(yīng)溶液A和C的混合，使反應(yīng)無法進(jìn)行。
本發(fā)明的目的在于提供一種利用沉子促進(jìn)熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)使油脂中隔上、下層的反應(yīng)溶液混合的方法，克服現(xiàn)有技術(shù)的弊端，達(dá)到促進(jìn)反應(yīng)順利完成的目的。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種用沉子促進(jìn)熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)的方法，其特征在于該方法依次包括如下步驟先將下層反應(yīng)溶液置入反應(yīng)管底層；置入低熔點(diǎn)的液態(tài)油脂層，降溫使該液態(tài)油脂層轉(zhuǎn)變成固相油脂層；將上層反應(yīng)溶液置入該固相油脂層上；將比重2.5、直徑1.5-2.0mm的沉子置入該固相油脂層的上面；將上述反應(yīng)管置入加熱器內(nèi)升溫，使該固相油脂層熔化轉(zhuǎn)變成液態(tài)，在下沉的沉子的帶動下及液化油脂層內(nèi)聚力和反應(yīng)管壁吸附作用下，該液態(tài)油脂層凝聚在反應(yīng)管底，或上浮到反應(yīng)溶液的上表面，且形成火山口形態(tài)的缺口，使上、下層的反應(yīng)溶液混合，促進(jìn)熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)。
該沉子包括硅珠、硅粒。
本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)是利用比重2.5，直徑1.5-2.0mm的沉子(硅珠)置于固相油脂中隔層的上面，當(dāng)溫度上升固態(tài)油脂熔態(tài)時，由于沉子的重力使液態(tài)的油脂層產(chǎn)生下凹現(xiàn)象，由于反應(yīng)管壁為嗜油性(或疏水性)，與液態(tài)的油脂層保持良好的親和力，故液化的油脂層沿反應(yīng)管壁向下移動，當(dāng)沉子繼續(xù)下沉?xí)r，會出現(xiàn)下述兩種情況之一其一是沉子穿過液態(tài)的油脂層下沉到反應(yīng)管底，液態(tài)的油脂層內(nèi)聚力消失，油脂向反應(yīng)管壁附著，并因油脂比重小于水，上浮到上表面，且形成火山口狀的缺口，便于反應(yīng)完畢后從該缺口吸取反應(yīng)液；其二是沉子不穿過液態(tài)油脂層，而液態(tài)油脂層下凹部分碰觸吸附在管底壁，由于液態(tài)油脂本身的內(nèi)聚力和管壁的吸附作用，使油脂層凝聚在管底。上述兩種情況都能使反應(yīng)管內(nèi)上、下層的反應(yīng)溶液混合，促進(jìn)熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)或結(jié)合反轉(zhuǎn)錄酶反應(yīng)，本發(fā)明的方法解決了阻隔反應(yīng)管內(nèi)的上、下層反應(yīng)溶液混合的難題，且簡便、容易操作，適合廣泛應(yīng)用。
下面結(jié)合較佳實(shí)施例和附圖對本發(fā)明進(jìn)一步說明圖1為固相油脂中隔上、下反應(yīng)溶液的示意圖；圖2為液態(tài)油脂浮于反應(yīng)溶液上表面的示意圖；圖3為本發(fā)明的沉子置于固相油脂層上的示意圖；圖4為本發(fā)明的沉子在液態(tài)油脂層上往下沉的示意圖；圖5為本發(fā)明的沉子帶動液態(tài)油脂層沉入反應(yīng)管底的示意圖；圖6為本發(fā)明的沉子單獨(dú)沉入反應(yīng)管底的示意圖；參閱圖3-圖6，本發(fā)明的方法依次包括如下步驟(一)取30ul參加熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)的下層溶液C放入專用反應(yīng)管E內(nèi)。
(二)取20ul熔點(diǎn)50-60℃，比重0.9的液態(tài)油脂B放入下層溶液C的上面，降溫，使液態(tài)油脂B轉(zhuǎn)變成固態(tài)油脂層B’。
(三)取30ul參加熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)的上層溶液A放入固態(tài)油脂層B上，固態(tài)油脂層B’將上、下層反應(yīng)溶液A和C隔離如圖3所示。
(四)取比重2.5，直徑1.8mm的硅珠沉了D放到固態(tài)油指層B’上表面的中心位置。
(五)將反應(yīng)管E放入熱循環(huán)儀中加熱升溫，當(dāng)溫度升至高于固態(tài)油脂層B’的熔點(diǎn)時，固態(tài)油脂層B’轉(zhuǎn)變成液態(tài)油脂層B，沉子D由于重力作用，使液態(tài)油脂層B產(chǎn)生下凹現(xiàn)象如圖4所示。當(dāng)沉子D繼續(xù)下沉就出現(xiàn)兩種情況其一沉子不穿過液態(tài)油脂層B，但液態(tài)油脂層B的下凹部碰觸反應(yīng)管E的管底壁，由于液態(tài)油脂層B本身的內(nèi)聚力和管壁的吸附作用，使液態(tài)的油脂層B凝聚在反應(yīng)管的E底部，如圖5所示；其二，沉子D穿過液態(tài)的油脂層B下沉到反應(yīng)管E底部，液態(tài)的油脂層B內(nèi)聚力消失，由于油脂的比重小于水，上浮到上表面，中間形成火山口狀的缺口如圖6所示。上述兩種情況都使上、下層的反應(yīng)溶液A和C混合，達(dá)到促進(jìn)熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)的功效。本發(fā)明的方法還適用于結(jié)合反轉(zhuǎn)錄酶反應(yīng)，具有同樣的功效。
權(quán)利要求
1.一種用沉子促進(jìn)熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)的方法，其特征在于該方法依次包括如下步驟先將下層反應(yīng)溶液置入反應(yīng)管底層；置入低熔點(diǎn)的液態(tài)油脂層，降溫使該液態(tài)油脂層轉(zhuǎn)變成固相油脂層；將上層反應(yīng)溶液置入該固相油脂層上；將比重2.5、直徑1.5-2.0mm的沉子置入該固相油脂層的上面；將上述反應(yīng)管置入加熱器內(nèi)升溫，使該固相油脂層熔化轉(zhuǎn)變成液態(tài)，在下沉的沉子的帶動下及液化油脂層內(nèi)聚力和反應(yīng)管壁吸附作用下，該液態(tài)油脂層凝聚在反應(yīng)管底，或上浮到反應(yīng)溶液的上表面，且形成火山口形態(tài)的缺口，使上、下層的反應(yīng)溶液混合，促進(jìn)熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)。
2.如權(quán)利要求1所述的用沉子促進(jìn)熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)的方法，其特征在于該沉子包括硅珠、硅粒。
全文摘要
一種用沉子促進(jìn)熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)的方法，將比重2.5，直徑1.5—2.0mm的沉子(硅珠)置于固相油脂中隔層的上面，將反應(yīng)管置入加熱器內(nèi)升溫時，固相油脂層轉(zhuǎn)變成液態(tài)油脂層，沉子下沉至反應(yīng)管底部，液態(tài)油脂層凝聚在反應(yīng)管底，或上浮到反應(yīng)溶液的上表面，且形成火山口形狀的缺口。促進(jìn)上、下層的反應(yīng)溶液混合，促進(jìn)熱啟動核酸聚合酶連鎖反應(yīng)，具有使用方便，操作容易和適合廣泛應(yīng)用的功效。
文檔編號C12N15/10GK1237634SQ98101490
公開日1999年12月8日 申請日期1998年6月3日 優(yōu)先權(quán)日1998年6月3日
發(fā)明者戴子煌 申請人:細(xì)胞科技有限公司