本發(fā)明涉及一種黑老虎活性乳酸菌飲料，特別是一種黑老虎活性乳酸菌飲料的加工方法及由此方法制備的黑老虎活性乳酸菌飲料。
背景技術(shù)：
黑老虎，別名：冷飯團、臭飯團、酒飯團、過山龍?zhí)?、大鉆、萬丈紅、透地連珠、紫根藤、外紅消、紅過山、鉆骨風(fēng)、大葉南五味。拉丁文名：kadsuracoccinea，木蘭科、南五味子屬，藤本，全株無毛。葉革質(zhì)，長圓形至卵狀披針形，多生于江西、福建、湖南、廣東、廣西、四川、貴州、云南等地。黑老虎果實果形奇特，果實成熟后味甜，性溫，含有豐富的維生素、礦物質(zhì)、花色苷、木脂素、萜類物質(zhì)等，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明：黑老虎具有抗氧化、抗腫瘤、抗病毒等作用。目前，由于黑老虎果實屬于局部地區(qū)有食用食性水果，且黑老虎果實不耐貯藏，外界對黑老虎果實認(rèn)識、加工、利用不夠。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：針對現(xiàn)有技術(shù)不足，提供一種利用黑老虎果實為原料，加工制作成風(fēng)味好、具有益生健康作用的黑老虎活性乳酸菌飲料的加工方法及由此方法制備的黑老虎活性乳酸菌飲料。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所提供的一種黑老虎活性乳酸菌飲料的加工方法包括如下步驟：
a、選擇充分成熟的黑老虎果實，并清洗、破碎去籽；
b、按破碎去籽后黑老虎果實重添加0.05％-0.3％的檸檬酸、0.05‰-0.3‰d-異抗壞血酸鈉護色，打醬，得黑老虎果實原醬；
c、按cmc-na︰還原膠︰果膠＝1︰1︰1的比例制成復(fù)合穩(wěn)定劑；
d、按每1000ml飲料中添加20-150g黑老虎果實原醬、40-150g蔗糖，0.5-20g復(fù)合穩(wěn)定劑、0.5-2g檸檬酸，余量為水的標(biāo)準(zhǔn)調(diào)配飲料；
e、用膠體磨碾磨兩次調(diào)配好的飲料；
f、用均質(zhì)機均質(zhì)1－2次，均質(zhì)壓力15-30mpa；
g、用135℃超高溫瞬時滅菌1-2s，并冷卻至室溫；
h、按滅菌后飲料重添加1-5％植物乳桿菌lact.chili.6及植物乳桿菌lact.chili.8發(fā)酵液，該發(fā)酵液的制備方法為：將保藏號為cgmccno.3021的植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)lact.chili.6和保藏號為cgmccno.3022的植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)lact.chili.8分別接種于mrs固體培養(yǎng)基斜面上，37℃活化培養(yǎng)24h-48h后，轉(zhuǎn)移至脫脂乳黑老虎果實培養(yǎng)基中，擴大培養(yǎng)24h～48h，控制菌體濃度均為109cfu/ml，然后按體積比1:1混合，即得，其中脫脂乳黑老虎果實培養(yǎng)基的配方為：脫脂奶粉︰黑老虎汁︰水＝2︰10︰88；
i、混勻、裝罐、脫氣、密封，2-4℃貯藏，即得。
上述方案的進一步改進為，步驟a中的清洗是：將黑老虎果實浸泡在質(zhì)量濃度0.1％的檸檬酸溶液中進行。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了一種利用上述方法制備的黑老虎活性乳酸菌飲料。
本發(fā)明選用新鮮的黑老虎果實為原料，黑老虎果實營養(yǎng)與藥用價值高，集食用、觀賞、美化、綠化及藥用于一體，含有豐富的維生素、礦物質(zhì)、花色苷、木脂素、萜類物質(zhì)等，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明：黑老虎具有抗氧化、抗腫瘤、抗病毒等作用；另外，本發(fā)明加入3-5％植物乳桿菌lact.chili.6及植物乳桿菌lact.chili.8發(fā)酵濃縮液進行發(fā)酵，使得按本發(fā)明方法制得的黑老虎活性乳酸菌飲料具有取料新穎、風(fēng)味好、具有益生健康作用等優(yōu)點。
其中，作為發(fā)酵劑的植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)lact.chili.6和植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)lact.chili.8已于2009年04月14日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心進行了保藏，保藏單位地址為：北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號分別為cgmccno.3021和cgmccno.3022。因此，本文中提到的植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)lact.chili.6和植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)lact.chili.8已為公開菌種，無需保藏。
本發(fā)明的植物乳桿菌lact.chili.6和植物乳桿菌lact.chili.8分離方法簡述如下：以風(fēng)味較好的各種發(fā)酵食品為分離源，于mrs瓊脂平板上劃線接種后，在37℃恒溫箱中培養(yǎng)48h-72h，待培養(yǎng)基上的菌落形成后，挑取單個疑似乳酸菌的菌落繼續(xù)在mrs瓊脂平板上劃線接種，培養(yǎng)，直到得到單一菌株，保存在試管斜面上。
其中：每1000mlmrs固體培養(yǎng)基中含：葡萄糖20g、蛋白胨10g、酵母提取物5g、牛肉膏10g、吐溫80lml、k2hpo42g、瓊脂20g。
lact.chili.6和lact.chili.8具有下述性質(zhì)：
1、形態(tài)特征：
在mrs瓊脂培養(yǎng)基上于37℃以厭氧發(fā)酵培養(yǎng)48h-72h后，在光學(xué)顯微鏡下觀察該兩菌株lact.chili.6和lact.chili.8的菌落，發(fā)現(xiàn)該二株菌株的菌落呈圓形，中央隆起，表面光滑、細密，邊緣整齊、白色、無色素。直徑均小于1.0mm。
在光學(xué)顯微鏡下觀察該兩菌株lact.chili.6和lact.chili.8的菌體，發(fā)現(xiàn)lact.chili.6的菌體呈短桿狀，單個排列，長約1.5μm，寬約0.3μm；lact.chili.8的菌體呈長桿狀，單個排列，長約2.0μm，寬約0.4μm。
2、生理生化特征和碳源利用狀況
本發(fā)明菌株lact.chili.6和lact.chili.8的生理生化反應(yīng)和碳源利用狀況見表1。
表1菌株lact.chili.6和lact.chili.8的生化特征和碳源利用狀況
3、lact.chili.6和lact.chili.8抑菌作用情況
lact.chili.6和lact.chili.8的抑菌試驗情況見表2：從表2可以看出lact.chili.6對金黃色葡萄球菌和李斯特氏菌有明顯的抑制作用，對大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌、蠟樣芽孢桿菌也有一定的抑制作用。
表2lact.chili.6和lact.chili.8的抑菌試驗結(jié)果
該植物乳桿菌lact.chili.6和lact.chili.8的抑菌作用物質(zhì)研究見表3：從表3可以初步斷定發(fā)酵濃縮液的抑菌成分是蛋白類物質(zhì)。
表3lact.chili.6和lact.chili.8的抑菌作用物質(zhì)研究結(jié)果
所述發(fā)酵液的制備方法為：將保藏號為cgmccno.3021的植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)lact.chili.6和保藏號為cgmccno.3022的植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)lact.chili.8分別接種于mrs固體培養(yǎng)基斜面上，37℃活化培養(yǎng)24h-48h后，轉(zhuǎn)移至脫脂乳黑老虎果實培養(yǎng)基中，擴大培養(yǎng)24h～48h，控制菌體濃度均為109cfu/ml，然后，按體積比1:1混合，即得。脫脂乳黑老虎果實培養(yǎng)基的配方為：脫脂奶粉︰黑老虎汁︰水＝2︰10︰88。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點：
(1)本發(fā)明采用的原料——黑老虎果實是一種集食用、觀賞、美化、綠化及藥用于一體的野生水果，含有豐富的維生素、礦物質(zhì)、花色苷、木脂素、萜類物質(zhì)等，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明：老虎具有抗氧化、抗腫瘤、抗病毒等作用，目前僅局部地區(qū)產(chǎn)黑老虎。
(2)該方法制得的黑老虎果醬具有取料新穎、風(fēng)味好、具有益生健康作用等優(yōu)點，目前，市場上還未見黑老虎活性乳酸菌飲料。
(3)本發(fā)明使用的植物乳桿菌發(fā)酵液，所述植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)lact.chili.6和植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)lact.chili.8已于2009年04月14日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心進行了保藏，保藏單位地址為：北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號分別為cgmccno.3021和cgmccno.3022，lact.chili.6和lact.chili.8均能分泌乳酸菌素，具有廣譜抑菌作用，能抑制果醬中雜菌的生長，所生產(chǎn)出的黑老虎活性乳酸菌飲料具有安全、保質(zhì)期長、具有益生作用等特點。
具體實施方式
實施例1：
所述植物乳桿菌lact.chili.6及植物乳桿菌lact.chili.8發(fā)酵濃縮液的制備方法為：將保藏號為cgmccno.3021的植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)lact.chili.6和保藏號為cgmccno.3022的植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)lact.chili.8分別接種于mrs固體培養(yǎng)基斜面上，37℃活化培養(yǎng)24h-48h后，轉(zhuǎn)移至脫脂乳黑老虎果實培養(yǎng)基中，擴大培養(yǎng)24h～48h，控制菌體濃度均為109cfu/ml，然后，按體積比1:1混合，即得。脫脂乳黑老虎果實培養(yǎng)基的配方為：脫脂奶粉︰黑老虎汁︰水＝2︰10︰88。
選擇充分成熟的黑老虎果實，將其浸泡在0.1％的檸檬酸溶液中清洗后，破碎去籽，按破碎去籽后黑老虎果實重添加0.1％的檸檬酸、0.1‰d-異抗壞血酸鈉護色，打醬，得黑老虎果實原醬；按cmc-na︰還原膠︰果膠＝1︰1︰1的質(zhì)量比例制成復(fù)合穩(wěn)定劑，按每1000ml飲料中添加40g黑老虎果實原醬，80g蔗糖，3g復(fù)合穩(wěn)定劑，1g檸檬酸，混合，膠體磨碾磨兩次，20mpa均質(zhì)2次，135℃超高溫瞬時滅菌1-2s后，冷卻至室溫；按滅菌后飲料重添加3％植物乳桿菌lact.chili.6及植物乳桿菌lact.chili.8發(fā)酵濃縮液，混勻，灌裝，脫氣、密封，2-4℃貯藏，即得。
實施例2：
植物乳桿菌lact.chili.6及植物乳桿菌lact.chili.8發(fā)酵濃縮液的制備方法同實施實例1。
選擇充分成熟的黑老虎果實，將其浸泡在0.1％的檸檬酸溶液中清洗后，破碎去籽，按破碎去籽后黑老虎果實重添加0.15％的檸檬酸、0.2‰d-異抗壞血酸鈉護色，打醬，得黑老虎果實原醬；按cmc-na︰還原膠︰果膠＝1︰1︰1的質(zhì)量比例制成復(fù)合穩(wěn)定劑，按每1000ml飲料中添加50g黑老虎果實原醬，100g蔗糖，3g復(fù)合穩(wěn)定劑，1.2g檸檬酸，混合，膠體磨碾磨兩次，25mpa均質(zhì)1次，135℃超高溫瞬時滅菌1-2s后，冷卻至室溫；按滅菌后飲料重添加4％植物乳桿菌lact.chili.6及植物乳桿菌lact.chili.8發(fā)酵濃縮液，混勻，灌裝，脫氣、密封，2-4℃貯藏，即得。
實施例3：
植物乳桿菌lact.chili.6及植物乳桿菌lact.chili.8發(fā)酵濃縮液的制備方法同實施實例1。
選擇充分成熟的黑老虎果實，將其浸泡在0.1％的檸檬酸溶液中清洗后，破碎去籽，按破碎去籽后黑老虎果實重添加0.3％的檸檬酸、0.3‰d-異抗壞血酸鈉護色，打醬，得黑老虎果實原醬；按cmc-na︰還原膠︰果膠＝1︰1︰1的質(zhì)量比例制成復(fù)合穩(wěn)定劑，按每1000ml飲料中添加150g黑老虎果實原醬，150g蔗糖，20g復(fù)合穩(wěn)定劑，2g檸檬酸，混合，膠體磨碾磨兩次，30mpa均質(zhì)1次，135℃超高溫瞬時滅菌1-2s后，冷卻至室溫；按滅菌后飲料重添加5％植物乳桿菌lact.chili.6及植物乳桿菌lact.chili.8發(fā)酵濃縮液，混勻，灌裝，脫氣、密封，2-4℃貯藏，即得。