一種活性乳酸菌素的制備方法及其在生物飼料中的應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種活性乳酸菌素的制備方法及其在生物飼料中的應用，制備方法包括：將鮮乳脫脂得到脫脂乳，調節(jié)pH至4～5，得到黃綠色透明乳清液；每升乳清液加蛋白胨5～15克，酵母膏2～5克，調節(jié)pH值至中性得培養(yǎng)液；培養(yǎng)液在100～120℃下滅菌10～20分鐘，冷卻至30～40℃后，添加化合物Heteroclitin I，再接入固定化嗜酸乳桿菌發(fā)酵培養(yǎng)18～24小時，控制pH值為6～7；發(fā)酵結束后，將發(fā)酵液離心后上清液與復合濃漿按照重量比1～3:1進行混合，混合均勻后在?30～?50℃下冷凍干燥得到活性乳酸菌素；其中，所述復合濃漿為葡萄糖和淀粉的復合溶液，葡萄糖的質量百分濃度為20～30％，淀粉的質量百分濃度為5～15％，滅菌后使用。本發(fā)明提供的活性乳酸菌素能夠顯著改善斷奶仔豬的生長性能。
【專利說明】
-種活性乳酸菌素的制備方法及其在生物飼料中的應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于生物飼料領域，設及抗菌膚，具體設及一種活性乳酸菌素的制備方法 及其在生物飼料中的應用。
【背景技術】
[0002] 乳酸菌素是由乳酸菌產生的一種具有活性的多膚或蛋白質。大部分細菌素對近緣 關系的細菌有抑制作用，少數(shù)細菌素抑菌譜很廣。乳酸菌素主要可分為熱穩(wěn)定的小分子膚， 熱敏感的大分子蛋白和羊毛硫抗生素。
[0003] 市面上銷售的乳酸菌素是一種純乳酸菌產生的制劑，是將脫脂乳經殺菌、真空濃 縮，再接種乳酸菌發(fā)酵后干燥而制成的乳酸菌體及其代謝產物的混合粉狀物，可作醫(yī)藥用 或食品添加劑，屬功能型乳制品。
[0004] 乳酸菌素性質穩(wěn)定，不受加工條件限制，所W應用范圍更為廣泛，可應用在包括發(fā) 酵制乳品、保健食品、化妝品及食品保鮮等領域。乳酸菌素的抗菌功能主要是利用其蛋白質 結構上的不同位點電荷數(shù)的不同，可造成目標菌細胞膜結構部分改變，具有類似清潔劑功 能。一般而言，其殺菌機制是先吸附在目標菌的細胞膜上、再侵入膜內而形成通透孔道，W 引起胞內重要物質，如ATP、r等之流失或生化反應障礙，而導致指標菌死亡。乳酸菌素的作 用類似抗生素，但作用機制不同，具專一性，完全不產生抗藥性及毒性，而且不易被小腸膜 蛋白酶破壞，可有效抑制病原菌的生長。
[0005] 乳酸菌素可W用于生物飼料的添加劑，可W提高牲畜的抗病菌能力，改善牲畜的 胃口，進而提高牲畜的生長性能。

【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種高活性的乳酸菌素，W用于生物飼料的添加劑， 顯著改善牲畜的生長性能；
[0007] 本發(fā)明的第二目的在于提供一種含有上述高活性乳酸菌素的生物飼料。
[000引本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術方案得W實現(xiàn)的：
[0009] -種活性乳酸菌素，通過如下步驟制備而成：
[0010] 步驟SI,先將鮮乳脫脂得到脫脂乳，調節(jié)脫脂乳的pH值至4~5,去除蛋白質，得到 黃綠色透明乳清液；
[0011] 步驟S2,調制培養(yǎng)液:每升乳清液加蛋白腺5~15克，酵母膏2~5克，調節(jié)pH值至中 性；
[0012] 步驟S3,制備嗜酸乳桿菌固定化細胞：采用MARS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌至10' IOc化/mL,離屯、去上清液，下層菌泥加1:1質量比的0.9%生理鹽水混勻，制得嗜酸乳桿菌稀 釋液，每1體積嗜酸乳桿菌稀釋液加40~60體積2.5 %~3.5 %的海藻酸鋼溶液，38 °C水浴5 分鐘后吸入注射器，緩慢滴入200~300體積的3%氯化巧溶液中，形成2~3mm直徑小球，室 溫穩(wěn)定8~10小時。
[0013] 步驟S4,將步驟S2中制備的培養(yǎng)液在100~120°C下滅菌10~20分鐘，冷卻至30~ 40°C后，先添加化合物化teroclitin I，使其在培養(yǎng)液中的濃度為20~30iig/g，再按3~5% 的接種量接入步驟S3中制備的固定化嗜酸乳桿菌細胞發(fā)酵培養(yǎng)18~24小時，控制抑值為6 ~7;
[0014] 步驟S5,發(fā)酵結束后，將發(fā)酵液離屯、后上清液與復合濃漿按照重量比1~3:1進行 混合，混合均勻后在-30~-50°C下冷凍干燥得到活性乳酸菌素;其中，所述復合濃漿為葡萄 糖和淀粉的復合溶液，葡萄糖的質量百分濃度為20~30%，淀粉的質量百分濃度為5~ 15%，滅菌后使用。
[0015] 進一步地，所述的活性乳酸菌素通過如下步驟制備而成：
[0016] 步驟Sl，先將鮮乳脫脂得到脫脂乳，調節(jié)脫脂乳的抑值至4.5，去除蛋白質，得到黃 綠色透明乳清液；
[0017] 步驟S2,調制培養(yǎng)液:每升乳清液加蛋白腺10克，酵母膏3.5克，調節(jié)pH值至中性；
[0018] 步驟S3,制備嗜酸乳桿菌固定化細胞：采用MARS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌至10' IOc化/mL,離屯、去上清液，下層菌泥加1:1質量比的0.9%生理鹽水混勻，制得嗜酸乳桿菌稀 釋液，每1體積嗜酸乳桿菌稀釋液加40體積2.5 %的海藻酸鋼溶液，38 °C水浴5分鐘后吸入注 射器，緩慢滴入200體積的3%氯化巧溶液中，形成2mm直徑小球，室溫穩(wěn)定8小時。
[0019] 步驟S4,將步驟S2中制備的上述培養(yǎng)液在110°C下滅菌15分鐘，冷卻至35°C后，先 添加化合物化teroclitin I，使其在培養(yǎng)液中的濃度為25iig/g，再按4%的接種量接入步驟 S3中制備的固定化嗜酸乳桿菌細胞發(fā)酵培養(yǎng)21小時，控制pH值為6~7;
[0020] 步驟S5,發(fā)酵結束后，將發(fā)酵液離屯、后上清液與復合濃漿按照重量比2:1進行混 合，混合均勻后在-4(TC下冷凍干燥得到活性乳酸菌素;其中，所述復合濃漿為葡萄糖和淀 粉的復合溶液，葡萄糖的質量百分濃度為25%，淀粉的質量百分濃度為10%，滅菌后使用。
[0021] 進一步地，所述的活性乳酸菌素通過如下步驟制備而成：
[0022] 步驟SI,先將鮮乳脫脂得到脫脂乳，調節(jié)脫脂乳的pH值至4,去除蛋白質，得到黃綠 色透明乳清液；
[0023] 步驟S2,調制培養(yǎng)液:每升乳清液加蛋白腺5克，酵母膏2克，調節(jié)pH值至中性；
[0024] 步驟S3,制備嗜酸乳桿菌固定化細胞：采用MARS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌至10' IOc化/mL,離屯、去上清液，下層菌泥加1:1質量比的0.9%生理鹽水混勻，制得嗜酸乳桿菌稀 釋液，每1體積嗜酸乳桿菌稀釋液加50體積3 %的海藻酸鋼溶液，38 °C水浴5分鐘后吸入注射 器，緩慢滴入250體積的3%氯化巧溶液中，形成2.5mm直徑小球，室溫穩(wěn)定9小時。
[0025] 步驟S4,將步驟S2中制備的上述培養(yǎng)液在100°C下滅菌20分鐘，冷卻至30°C后，先 添加化合物化teroclitin I，使其在培養(yǎng)液中的濃度為20iig/g，再按3%的接種量接入步驟 S3中制備的固定化嗜酸乳桿菌細胞發(fā)酵培養(yǎng)24小時，控制pH值為6~7;
[0026] 步驟S5，發(fā)酵結束后，將發(fā)酵液與復合濃漿按照重量比3:1進行混合，混合均勻后 在-3(TC下冷凍干燥得到活性乳酸菌素;其中，所述復合濃漿為葡萄糖和淀粉的復合溶液， 葡萄糖的質量百分濃度為20%，淀粉的質量百分濃度為5%，滅菌后使用。
[0027] 進一步地，所述的活性乳酸菌素通過如下步驟制備而成：
[0028] 步驟SI,先將鮮乳脫脂得到脫脂乳，調節(jié)脫脂乳的pH值至5,去除蛋白質，得到黃綠 色透明乳清液；
[0029] 步驟S2,調制培養(yǎng)液:每升乳清液加蛋白腺15克，酵母膏5克，調節(jié)pH值至中性；
[0030] 步驟S3,制備嗜酸乳桿菌固定化細胞：采用MARS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌至10' IOc化/mL,離屯、去上清液，下層菌泥加1:1質量比的0.9%生理鹽水混勻，制得嗜酸乳桿菌稀 釋液，每1體積嗜酸乳桿菌稀釋液加60體積3.5 %的海藻酸鋼溶液，38 °C水浴5分鐘后吸入注 射器，緩慢滴入300體積的3%氯化巧溶液中，形成3mm直徑小球，室溫穩(wěn)定10小時。
[0031] 步驟S4，將步驟S2中制備的上述培養(yǎng)液在120°C下滅菌10分鐘，冷卻至40°C后，先 添加化合物化teroclitin I，使其在培養(yǎng)液中的濃度為30iig/g，再按5%的接種量接入步驟 S3中制備的固定化嗜酸乳桿菌細胞發(fā)酵培養(yǎng)18小時，控制pH值為6~7;
[0032] 步驟S5,發(fā)酵結束后，將發(fā)酵液離屯、后上清液與復合濃漿按照重量比1:1進行混 合，混合均勻后在-5(TC下冷凍干燥得到活性乳酸菌素;其中，所述復合濃漿為葡萄糖和淀 粉的復合溶液，葡萄糖的質量百分濃度為30%，淀粉的質量百分濃度為15%，滅菌后使用。
[0033] 一種生物飼料，含有上述活性乳酸菌素，每IOOkg生物飼料中添加60~80g活性乳 酸菌素。
[0034] 上述活性乳酸菌素在提高牲畜生長性能方面的應用。
[0035] 上述生物飼料在提高牲畜生長性能方面的應用。
[0036] 本發(fā)明的優(yōu)點：
[0037] 本發(fā)明提供的活性乳酸菌素生物活性高，添加到飼料中后，可W顯著改善斷奶仔 豬生長性能。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【具體實施方式】
[0038] 下面結合實施例進一步說明本發(fā)明的實質性內容，但并不W此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可W對 本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的實質和范圍。
[0039] 本發(fā)明中，未做特別強調的試驗方法和試劑均為本領域常規(guī)試驗方法和試劑。嗜 酸乳桿菌選用嗜酸乳桿菌ATCC4356,其他亦可?；衔锘痶eroclitin I的制備方法參見文 南犬：Compounds from Kadsura heteroclita and related anti-HIV activity, Phytochemistry,69(2008)1266-1272O
[0040] 實施例1:活性乳酸菌素的制備
[0041 ]步驟SI，先將鮮乳脫脂得到脫脂乳，調節(jié)脫脂乳的pH值至4.5，去除蛋白質，得到黃 綠色透明乳清液；
[0042] 步驟S2,調制培養(yǎng)液:每升乳清液加蛋白腺10克，酵母膏3.5克，調節(jié)pH值至中性；
[0043] 步驟S3,制備嗜酸乳桿菌固定化細胞：采用MARS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌至10' IOc化/mL,離屯、去上清液，下層菌泥加1:1質量比的0.9%生理鹽水混勻，制得嗜酸乳桿菌稀 釋液，每1體積嗜酸乳桿菌稀釋液加40體積2.5 %的海藻酸鋼溶液，38 °C水浴5分鐘后吸入注 射器，緩慢滴入200體積的3%氯化巧溶液中，形成2cm直徑小球，室溫穩(wěn)定8小時。
[0044] 步驟S4，將步驟S2中制備的上述培養(yǎng)液在11 (TC下滅菌15分鐘，冷卻至35 °C后，先 添加化合物化teroclitin I，使其在培養(yǎng)液中的濃度為25iig/g，再按4%的接種量接入步驟 S3中制備的固定化嗜酸乳桿菌細胞發(fā)酵培養(yǎng)21小時，控制pH值為6~7;
[0045] 步驟S5,發(fā)酵結束后，將發(fā)酵液離屯、后上清液與復合濃漿按照重量比2:1進行混 合，混合均勻后在-4(TC下冷凍干燥得到活性乳酸菌素;其中，所述復合濃漿為葡萄糖和淀 粉的復合溶液，葡萄糖的質量百分濃度為25%，淀粉的質量百分濃度為10%，滅菌后使用。
[0046] 實施例2:活性乳酸菌素的制備
[0047] 步驟Sl，先將鮮乳脫脂得到脫脂乳，調節(jié)脫脂乳的pH值至4，去除蛋白質，得到黃綠 色透明乳清液；
[0048] 步驟S2,調制培養(yǎng)液:每升乳清液加蛋白腺5克，酵母膏2克，調節(jié)pH值至中性；
[0049] 步驟S3,制備嗜酸乳桿菌固定化細胞：采用MARS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌至10' IOc化/mL,離屯、去上清液，下層菌泥加1:1質量比的0.9%生理鹽水混勻，制得嗜酸乳桿菌稀 釋液，每1體積嗜酸乳桿菌稀釋液加50體積3 %的海藻酸鋼溶液，38 °C水浴5分鐘后吸入注射 器，緩慢滴入250體積的3%氯化巧溶液中，形成2.5mm直徑小球，室溫穩(wěn)定9小時。
[0050] 步驟S4,將步驟S2中制備的上述培養(yǎng)液在100°C下滅菌20分鐘，冷卻至30°C后，先 添加化合物化teroclitin I，使其在培養(yǎng)液中的濃度為20iig/g，再按3%的接種量接入步驟 S3中制備的固定化嗜酸乳桿菌細胞發(fā)酵培養(yǎng)24小時，控制pH值為6~7;
[0051] 步驟S5,發(fā)酵結束后，將發(fā)酵液離屯、后上清液與復合濃漿按照重量比3:1進行混 合，混合均勻后在-3(TC下冷凍干燥得到活性乳酸菌素;其中，所述復合濃漿為葡萄糖和淀 粉的復合溶液，葡萄糖的質量百分濃度為20%，淀粉的質量百分濃度為5%，滅菌后使用。
[0052] 實施例3:活性乳酸菌素的制備
[0053] 步驟SI,先將鮮乳脫脂得到脫脂乳，調節(jié)脫脂乳的pH值至5,去除蛋白質，得到黃綠 色透明乳清液；
[0054] 步驟S2,調制培養(yǎng)液:每升乳清液加蛋白腺15克，酵母膏5克，調節(jié)pH值至中性；
[0055] 步驟S3,制備嗜酸乳桿菌固定化細胞：采用MARS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌至10' IOc化/mL,離屯、去上清液，下層菌泥加1:1質量比的0.9%生理鹽水混勻，制得嗜酸乳桿菌稀 釋液，每1體積嗜酸乳桿菌稀釋液加60體積3.5 %的海藻酸鋼溶液，38 °C水浴5分鐘后吸入注 射器，緩慢滴入300體積的3%氯化巧溶液中，形成3mm直徑小球，室溫穩(wěn)定10小時。
[0056] 步驟S4，將步驟S2中制備的上述培養(yǎng)液在120°C下滅菌10分鐘，冷卻至40°C后，先 添加化合物化teroclitin I，使其在培養(yǎng)液中的濃度為30iig/g，再按5%的接種量接入步驟 S3中制備的固定化嗜酸乳桿菌細胞發(fā)酵培養(yǎng)18小時，控制pH值為6~7;
[0057] 步驟S5,發(fā)酵結束后，將發(fā)酵液離屯、后上清液與復合濃漿按照重量比1:1進行混 合，混合均勻后在-5(TC下冷凍干燥得到活性乳酸菌素;其中，所述復合濃漿為葡萄糖和淀 粉的復合溶液，葡萄糖的質量百分濃度為30%，淀粉的質量百分濃度為15%，滅菌后使用。 [0化引實施例4:實施例1的對比，不添加化合物化teroclitin I
[0059] 步驟Sl，先將鮮乳脫脂得到脫脂乳，調節(jié)脫脂乳的pH值至4.5，去除蛋白質，得到黃 綠色透明乳清液；
[0060] 步驟S2,調制培養(yǎng)液:每升乳清液加蛋白腺10克，酵母膏3.5克，調節(jié)pH值至中性；
[0061] 步驟S3,制備嗜酸乳桿菌固定化細胞：采用MARS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌至10' IOc化/mL,離屯、去上清液，下層菌泥加1:1質量比的0.9%生理鹽水混勻，制得嗜酸乳桿菌稀 釋液，每1體積嗜酸乳桿菌稀釋液加40體積2.5 %的海藻酸鋼溶液，38 °C水浴5分鐘后吸入注 射器，緩慢滴入200體積的3%氯化巧溶液中，形成2cm直徑小球，室溫穩(wěn)定8小時。
[0062] 步驟S4，將步驟S2中制備的上述培養(yǎng)液在110°C下滅菌15分鐘，冷卻至35°C后，按 4%的接種量接入步驟S3中制備的固定化嗜酸乳桿菌細胞發(fā)酵培養(yǎng)21小時，控制pH值為6~ 7；
[0063] 步驟S5,發(fā)酵結束后，將發(fā)酵液離屯、后上清液與復合濃漿按照重量比2:1進行混 合，混合均勻后在-4(TC下冷凍干燥得到活性乳酸菌素;其中，所述復合濃漿為葡萄糖和淀 粉的復合溶液，葡萄糖的質量百分濃度為25%，淀粉的質量百分濃度為10%，滅菌后使用。
[0064] 實施例5:效果實施例，對斷奶仔豬生長性能的影響 [00化]一、材料與方法
[0066] 1、材料:分別按實施例1~4方法制備活性乳酸菌素 1~4。
[0067] 2、方法
[0068] 2.1試驗動物及分組
[0069] 參照NRC(1998)配制基礎飼糧。選用100頭健康的（21 ±1)日齡斷奶杜長大S元雜 交仔豬，隨機分成5組，每組20頭，公母各半。對照組采用基礎飼糧飼喂。試驗組1~4分別在 基礎飼糧的基礎上分別添加活性乳酸菌素 1~4,每IOOkg飼料中添加 70g活性乳酸菌素。
[0070] 2.2飼養(yǎng)方法
[0071] 試驗周期30天。整個試驗期間采用常規(guī)飼養(yǎng)及免疫，自由采食、自由飲水。
[0072] 2.3測試指標和方法
[0073] 生長性能:統(tǒng)計初重、末重、日均增重和料重比。
[0074] 3、統(tǒng)計分析
[0075] 試驗數(shù)據采用SPSS20.0軟件進行方差分析，差異顯著性進行Duncans多重比較，表 中數(shù)值表示為Mean + SD。
[0076] 二、結果
[0077] 結果見表1。
[0078] 由表1可知，試驗組1~3的日均增重均高于對照組，料重比均低于對照組，與對照 組相比差異顯著(P<〇.05);試驗組4日均增重與對照組無顯著性差異(P>0.05)，料重比與 對照組無顯著性差異(P>〇. 05)。
[0079] 表1對斷奶仔豬生長性能的影響 [00801
[0081] 結果表明，添加有本發(fā)明提供的活性乳酸菌素的飼料能夠顯著改善斷奶仔豬的生 長性能。
[0082] 上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質性內容，但并不W此限定本發(fā)明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可W對本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種活性乳酸菌素，其特征在于，通過如下步驟制備而成： 步驟Sl，先將鮮乳脫脂得到脫脂乳，調節(jié)脫脂乳的pH值至4~5，去除蛋白質，得到黃綠 色透明乳清液； 步驟S2,調制培養(yǎng)液:每升乳清液加蛋白胨5~15克，酵母膏2~5克，調節(jié)pH值至中性； 步驟S3,制備嗜酸乳桿菌固定化細胞:采用MARS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌至HT IOcfu/ mL，離心去上清液，下層菌泥加1:1質量比的0.9 %生理鹽水混勻，制得嗜酸乳桿菌稀釋液， 每1體積嗜酸乳桿菌稀釋液加40~60體積2.5 %~3.5 %的海藻酸鈉溶液，38 °C水浴5分鐘后 吸入注射器，緩慢滴入200~300體積的3%氯化鈣溶液中，形成2~3mm直徑小球，室溫穩(wěn)定8 ~10小時。 步驟S4,將步驟S2中制備的培養(yǎng)液在100~120°C下滅菌10~20分鐘，冷卻至30~40°C 后，先添加化合物Heteroclitin I，使其在培養(yǎng)液中的濃度為20~30yg/g，再按3~5%的接 種量接入步驟S3中制備的固定化嗜酸乳桿菌細胞發(fā)酵培養(yǎng)18~24小時，控制pH值為6~7; 步驟S5,發(fā)酵結束后，將發(fā)酵液離心后上清液與復合濃漿按照重量比1~3:1進行混合， 混合均勻后在-30~-50°C下冷凍干燥得到活性乳酸菌素;其中，所述復合濃漿為葡萄糖和 淀粉的復合溶液，葡萄糖的質量百分濃度為20~30%，淀粉的質量百分濃度為5~15%，滅 菌后使用。2. 根據權利要求1所述的活性乳酸菌素，其特征在于，通過如下步驟制備而成： 步驟Sl，先將鮮乳脫脂得到脫脂乳，調節(jié)脫脂乳的pH值至4.5，去除蛋白質，得到黃綠色 透明乳清液； 步驟S2，調制培養(yǎng)液:每升乳清液加蛋白胨10克，酵母膏3.5克，調節(jié)pH值至中性； 步驟S3,制備嗜酸乳桿菌固定化細胞:采用MARS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌至HT IOcfu/ mL，離心去上清液，下層菌泥加1:1質量比的0.9 %生理鹽水混勻，制得嗜酸乳桿菌稀釋液， 每1體積嗜酸乳桿菌稀釋液加40體積2.5 %的海藻酸鈉溶液，38 °C水浴5分鐘后吸入注射器， 緩慢滴入200體積的3%氯化鈣溶液中，形成2_直徑小球，室溫穩(wěn)定8小時。 步驟S4，將步驟S2中制備的上述培養(yǎng)液在110 °C下滅菌15分鐘，冷卻至35 °C后，先添加 化合物Heteroclitin I，使其在培養(yǎng)液中的濃度為25yg/g，再按4%的接種量接入步驟S3中 制備的固定化嗜酸乳桿菌細胞發(fā)酵培養(yǎng)21小時，控制pH值為6~7; 步驟S5,發(fā)酵結束后，將發(fā)酵液離心后上清液與復合濃漿按照重量比2:1進行混合，混 合均勻后在-40 °C下冷凍干燥得到活性乳酸菌素;其中，所述復合濃漿為葡萄糖和淀粉的復 合溶液，葡萄糖的質量百分濃度為25%，淀粉的質量百分濃度為10%，滅菌后使用。3. 根據權利要求1所述的活性乳酸菌素，其特征在于，通過如下步驟制備而成： 步驟Sl，先將鮮乳脫脂得到脫脂乳，調節(jié)脫脂乳的pH值至4,去除蛋白質，得到黃綠色透 明乳清液； 步驟S2，調制培養(yǎng)液:每升乳清液加蛋白胨5克，酵母膏2克，調節(jié)pH值至中性； 步驟S3,制備嗜酸乳桿菌固定化細胞:采用MARS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌至HT IOcfu/ mL，離心去上清液，下層菌泥加1:1質量比的0.9 %生理鹽水混勻，制得嗜酸乳桿菌稀釋液， 每1體積嗜酸乳桿菌稀釋液加50體積3%的海藻酸鈉溶液，38°C水浴5分鐘后吸入注射器，緩 慢滴入250體積的3%氯化鈣溶液中，形成2.5_直徑小球，室溫穩(wěn)定9小時。 步驟S4,將步驟S2中制備的上述培養(yǎng)液在100°C下滅菌20分鐘，冷卻至30°C后，先添加 化合物Heteroclitin I，使其在培養(yǎng)液中的濃度為20yg/g，再按3%的接種量接入步驟S3中 制備的固定化嗜酸乳桿菌細胞發(fā)酵培養(yǎng)24小時，控制pH值為6~7; 步驟S5,發(fā)酵結束后，將發(fā)酵液離心后上清液與復合濃漿按照重量比3:1進行混合，混 合均勻后在-30 °C下冷凍干燥得到活性乳酸菌素;其中，所述復合濃漿為葡萄糖和淀粉的復 合溶液，葡萄糖的質量百分濃度為20%，淀粉的質量百分濃度為5%，滅菌后使用。4. 根據權利要求1所述的活性乳酸菌素，其特征在于，通過如下步驟制備而成： 步驟Sl，先將鮮乳脫脂得到脫脂乳，調節(jié)脫脂乳的pH值至5,去除蛋白質，得到黃綠色透 明乳清液； 步驟S2，調制培養(yǎng)液:每升乳清液加蛋白胨15克，酵母膏5克，調節(jié)pH值至中性； 步驟S3,制備嗜酸乳桿菌固定化細胞:采用MARS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌至HT IOcfu/ mL，離心去上清液，下層菌泥加1:1質量比的0.9 %生理鹽水混勻，制得嗜酸乳桿菌稀釋液， 每1體積嗜酸乳桿菌稀釋液加60體積3.5 %的海藻酸鈉溶液，38 °C水浴5分鐘后吸入注射器， 緩慢滴入300體積的3%氯化鈣溶液中，形成3_直徑小球，室溫穩(wěn)定10小時。 步驟S4，將步驟S2中制備的上述培養(yǎng)液在120 °C下滅菌10分鐘，冷卻至40 °C后，先添加 化合物Heteroclitin I，使其在培養(yǎng)液中的濃度為30yg/g，再按5%的接種量接入步驟S3中 制備的固定化嗜酸乳桿菌細胞發(fā)酵培養(yǎng)18小時，控制pH值為6~7; 步驟S5,發(fā)酵結束后，將發(fā)酵液離心后上清液與復合濃漿按照重量比1:1進行混合，混 合均勻后在-50 °C下冷凍干燥得到活性乳酸菌素;其中，所述復合濃漿為葡萄糖和淀粉的復 合溶液，葡萄糖的質量百分濃度為30%，淀粉的質量百分濃度為15%，滅菌后使用。5. -種生物飼料，其特征在于:含有權利要求1~4任一所述的活性乳酸菌素，每IOOkg 生物飼料中添加60~80g活性乳酸菌素。6. 權利要求1~4任一所述的活性乳酸菌素在提高牲畜生長性能方面的應用。7. 權利要求5所述的生物飼料在提高牲畜生長性能方面的應用。
【文檔編號】C12R1/23GK105925645SQ201610299281
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年5月6日
【發(fā)明人】李世超, 方華, 季春源, 朱校適, 李旺軍, 夏佳吉
【申請人】江蘇鹽城源耀生物科技有限公司