本發(fā)明涉及食品加工方法
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體而言，涉及一種發(fā)酵型大豆乳清飲料及其制備方法。
背景技術(shù)：
：大豆乳清是大豆蛋白加工過程副產(chǎn)物，其富含乳清蛋白、大豆低聚糖、無機鹽等，目前多以廢物直接排放，造成資源浪費，引起環(huán)境污染。大豆乳清中的大豆低聚糖是一種功能性糖類，其主要成分為蔗糖、水蘇糖和棉子糖，除蔗糖外，其余基本不被人體吸收，可直達腸道，促進腸道雙歧桿菌增殖，可抑制有害菌，增進有益菌，潤腸通便，清除毒素，提高腸道免疫功能。蔗糖是一種常見的雙糖，攝入過多容易引起肥胖、蛀牙，對糖尿病患者也極為不利。為除去蔗糖，提高功能性低聚糖純度，現(xiàn)有技術(shù)采用了很多方法，如專利201510899907.0公開了一種大豆深加工過程中低聚糖的提取方法，其對大豆乳清除雜預(yù)處理后，經(jīng)超濾、納濾、噴霧干燥得到高純度低聚糖，提高了大豆加工產(chǎn)業(yè)附加值；專利201210393907.X公開了一種以黃漿水為主要原料的保健飲料及其制作方法，其以大豆黃漿水為主要原料，添加蔗糖、果汁、酸味劑、食用香精以及豆渣發(fā)酵液制成保健飲料，該方法在保留大豆低聚糖基礎(chǔ)上，充分利用豆制品副產(chǎn)物，解決了黃漿水和豆渣的處理問題；然而現(xiàn)有技術(shù)方法的缺點較多，如專利201510899907.0提純方法低聚糖純度不高、過程繁瑣、不適宜大規(guī)模生產(chǎn)，而且能耗較高、成本較大，還不可避免的產(chǎn)生部分低聚糖成分的損失；按專利201210393907.X方法制作的產(chǎn)品中所含生物活性物質(zhì)，如大豆低聚糖含量偏低，效果有限。有鑒于此，特提出本發(fā)明。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的第一目的在于提供一種發(fā)酵型大豆乳清飲料的制備方法，所述的發(fā)酵型大豆乳清飲料的制備方法在高效利用大豆工業(yè)副產(chǎn)物的同時，既可保持發(fā)酵液中乳酸菌催化活性，又可在連續(xù)發(fā)酵反應(yīng)后回收利用固定化乳酸菌，工藝簡單，成本低廉；此外，有效去除大豆乳清中的蔗糖，充分保留水蘇糖、棉子糖等大豆低聚糖活性成分。本發(fā)明的第二目的在于提供一種采用上述的發(fā)酵型大豆乳清飲料的制備方法制備得到的發(fā)酵型大豆乳清飲料，所述的發(fā)酵型大豆乳清飲料中蔗糖含量低，水蘇糖、棉子糖等大豆低聚糖活性成分含量高，能有效促進人體腸道雙歧桿菌增殖，增加有益菌、抑制有害菌、潤腸通便、清除毒素、提高人體腸道免疫功能。為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：一種發(fā)酵型大豆乳清飲料的制備方法，以大豆乳清為原料，依次經(jīng)濃縮、復(fù)配后與固定化乳酸菌膠?；旌习l(fā)酵制得大豆乳清飲料。本發(fā)明發(fā)酵型大豆乳清飲料的制備方法有效克服了現(xiàn)有的大豆乳清中大豆低聚糖等活性成分提取技術(shù)落后，所得產(chǎn)品中大豆低聚糖等活性成分含量低，大豆乳清相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)過程能耗較高、成本較大、產(chǎn)品功效不明確等缺點或不足，本發(fā)明采用固定化乳酸菌膠進行發(fā)酵，在高效利用大豆工業(yè)副產(chǎn)物的同時，既可保持發(fā)酵液中乳酸菌催化活性，又可在連續(xù)發(fā)酵反應(yīng)后回收利用固定化乳酸菌，工藝簡單，成本低廉。優(yōu)選地，所述濃縮包括將大豆乳清加熱加壓蒸發(fā)濃縮至大豆乳清濃度為10wt％-15wt％，優(yōu)選為12wt％-13wt％，進一步優(yōu)選為13wt％。優(yōu)選地，所述加熱溫度為50-70℃，優(yōu)選為55-65℃，進一步優(yōu)選為60℃。優(yōu)選地，所述加壓壓力為80-90kPa，優(yōu)選為83-87kPa，進一步優(yōu)選為85kPa。優(yōu)選地，所述復(fù)配包括：將濃縮后的大豆乳清與奶粉復(fù)配，經(jīng)滅菌得發(fā)酵初始原料，其中奶粉添加量為所得發(fā)酵初始原料質(zhì)量的5％-20％，優(yōu)選為10％-20％，進一步優(yōu)選為15％。優(yōu)選地，所述固定化乳酸菌膠粒的制備方法包括：將無菌海藻酸鈉加入選擇性利用蔗糖的乳酸菌懸液中，混勻后，將所得混合液加入CaCl2溶液中，靜置、無菌生理鹽水洗滌制得直徑為2-3mm，優(yōu)選為2.5-3mm，進一步優(yōu)選為2.5mm的固定化乳酸菌膠粒。優(yōu)選地，所述無菌海藻酸鈉的加入量為乳酸菌懸液質(zhì)量的2％-2.5％，優(yōu)選為2.3％-2.5％，進一步優(yōu)選為2.3％。優(yōu)選地，所述CaCl2溶液的濃度為2％-4％，優(yōu)選為3％-4％，進一步優(yōu)選為3％。優(yōu)選地，所述發(fā)酵包括：將固定化乳酸菌膠粒與待發(fā)酵原料混合，加入乙酸鈉，恒溫發(fā)酵，過濾，去除固定化乳酸菌膠粒，滅菌即得大豆乳清飲料。優(yōu)選地，所述固定化乳酸菌膠粒與待發(fā)酵原料的質(zhì)量比為1:3-4，優(yōu)選為1:3.5-4，進一步優(yōu)選為1:3.5。優(yōu)選地，所述乙酸鈉的加入量為待發(fā)酵原料質(zhì)量的0.2％-0.6％，優(yōu)選為0.3％-0.5％，進一步優(yōu)選為0.4％。優(yōu)選地，所述恒溫發(fā)酵的發(fā)酵溫度為37-42℃，優(yōu)選為38-40℃，進一步優(yōu)選為39℃；優(yōu)選地，所述恒溫發(fā)酵的發(fā)酵時間為24-48h，優(yōu)選為24-36h，進一步優(yōu)選為36h。優(yōu)選地，所述過濾后所得固定化乳酸菌膠粒經(jīng)無菌生理鹽水清洗，在低溫生理鹽水中保存，重復(fù)利用。采用上述的發(fā)酵型大豆乳清飲料的制備方法制備得到的一種發(fā)酵型大豆乳清飲料。本發(fā)明發(fā)酵型大豆乳清飲料中蔗糖含量低，水蘇糖、棉子糖等大豆低聚糖活性成分含量高，能有效促進人體腸道雙歧桿菌增殖，增加有益菌、抑制有害菌、潤腸通便、清除毒素、提高人體腸道免疫功能。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明發(fā)酵型大豆乳清飲料的制備方法有效克服了現(xiàn)有的大豆乳清中大豆低聚糖等活性成分提取技術(shù)落后，所得產(chǎn)品中大豆低聚糖等活性成分含量低，大豆乳清相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)過程能耗較高、成本較大、產(chǎn)品功效不明確等缺點或不足，本發(fā)明采用固定化乳酸菌膠進行發(fā)酵，在高效利用大豆工業(yè)副產(chǎn)物的同時，既可保持發(fā)酵液中乳酸菌催化活性，又可在連續(xù)發(fā)酵反應(yīng)后回收利用固定化乳酸菌，工藝簡單，成本低廉。本發(fā)明發(fā)酵型大豆乳清飲料中蔗糖含量低，水蘇糖、棉子糖等大豆低聚糖活性成分含量高，能有效促進人體腸道雙歧桿菌增殖，增加有益菌、抑制有害菌、潤腸通便、清除毒素、提高人體腸道免疫功能。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明具體實施方式或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對具體實施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實施方式，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。圖1為本發(fā)明一種具體實施方式提供的發(fā)酵型大豆乳清飲料的制備方法工藝流程圖。具體實施方式下面將結(jié)合附圖和具體實施方式對本發(fā)明的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列所描述的實施例是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例，僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。圖1為本發(fā)明一種具體實施方式提供的發(fā)酵型大豆乳清飲料的制備方法工藝流程圖。本發(fā)明提供了一種發(fā)酵型大豆乳清飲料的制備方法，以大豆乳清為原料，依次經(jīng)濃縮、復(fù)配后與固定化乳酸菌膠?；旌习l(fā)酵制得大豆乳清飲料。本發(fā)明發(fā)酵型大豆乳清飲料的制備方法有效克服了現(xiàn)有的大豆乳清中大豆低聚糖等活性成分提取技術(shù)落后，所得產(chǎn)品中大豆低聚糖等活性成分含量低，大豆乳清相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)過程能耗較高、成本較大、產(chǎn)品功效不明確等缺點或不足，本發(fā)明采用固定化乳酸菌膠進行發(fā)酵，在高效利用大豆工業(yè)副產(chǎn)物的同時，既可保持發(fā)酵液中乳酸菌催化活性，又可在連續(xù)發(fā)酵反應(yīng)后回收利用固定化乳酸菌，工藝簡單，成本低廉。優(yōu)選地，所述大豆乳清可根據(jù)原料取材難易程度，選擇源于工廠生產(chǎn)大豆分離蛋白時產(chǎn)生的大豆乳清副產(chǎn)物，或者以大豆豆粕為原料，采用傳統(tǒng)堿溶酸沉法，將大豆豆粕粉碎、篩分、堿溶、酸沉、離心后得大豆乳清。優(yōu)選地，所述濃縮包括將大豆乳清加熱加壓蒸發(fā)濃縮至大豆乳清濃度為10wt％-15wt％，優(yōu)選為12wt％-13wt％，進一步優(yōu)選為13wt％。在發(fā)酵前對大豆乳清進行適當濃縮，有助于提高后續(xù)發(fā)酵效率，促進蔗糖充分代謝，提高產(chǎn)品品質(zhì)。優(yōu)選地，所述加熱溫度為50-70℃，優(yōu)選為55-65℃，進一步優(yōu)選為60℃。優(yōu)選地，所述加壓壓力為80-90kPa，優(yōu)選為83-87kPa，進一步優(yōu)選為85kPa。采用特定溫度和壓力對大豆乳清進行蒸發(fā)濃縮，有助于提高濃縮效率。優(yōu)選地，所述蒸發(fā)濃縮采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進行。優(yōu)選地，所述復(fù)配包括：將濃縮后的大豆乳清與奶粉復(fù)配，經(jīng)滅菌得發(fā)酵初始原料，其中奶粉添加量為所得發(fā)酵初始原料質(zhì)量的5％-20％，優(yōu)選為10％-20％，進一步優(yōu)選為15％。將濃縮后的大豆乳清與奶粉復(fù)配，一方面奶粉也提供了部分乳酸菌代謝原料，此外奶粉的加入，也可以提高所得發(fā)酵產(chǎn)品的營養(yǎng)價值，改善口感風(fēng)味。優(yōu)選地，所述奶粉包括牛奶粉和/或羊奶粉。優(yōu)選地，所述奶粉包括全脂奶粉和/或脫脂奶粉，優(yōu)選包括脫脂奶粉。優(yōu)選地，所述固定化乳酸菌膠粒的制備方法包括：將無菌海藻酸鈉加入選擇性利用蔗糖的乳酸菌懸液中，混勻后，將所得混合液加入CaCl2溶液中，靜置、無菌生理鹽水洗滌制得直徑為2-3mm，優(yōu)選為2.5-3mm，進一步優(yōu)選為2.5mm的固定化乳酸菌膠粒。本發(fā)明采用特定方法，制備得到特定粒徑大小的固定化乳酸菌膠粒，采用所得固定化乳酸菌膠進行發(fā)酵，在高效利用大豆工業(yè)副產(chǎn)物的同時，既可保持發(fā)酵液中乳酸菌催化活性，又可在連續(xù)發(fā)酵反應(yīng)后回收利用固定化乳酸菌。優(yōu)選地，所述無菌海藻酸鈉的加入量為乳酸菌懸液質(zhì)量的2％-2.5％，優(yōu)選為2.3％-2.5％，進一步優(yōu)選為2.3％。無菌海藻酸鈉可作為乳化穩(wěn)定劑和增稠劑。優(yōu)選地，所述CaCl2溶液的濃度為2％-4％，優(yōu)選為3％-4％，進一步優(yōu)選為3％。作為一種食品添加劑，氯化鈣可起到多價螯合劑和固化劑的作用。采用特定用量的無菌海藻酸鈉和氯化鈣，能夠得到具有特定粒徑尺寸的固定化乳酸菌膠粒。進一步優(yōu)選地，將無菌海藻酸鈉加入選擇性利用蔗糖的乳酸菌懸液中，混勻后，將所得混合液滴加入CaCl2溶液中。優(yōu)選地，所述乳酸菌懸液可采用自行培養(yǎng)、篩選、配置的方式得到。進一步優(yōu)選地，本發(fā)明具體實施方式所采用的乳酸菌懸液通過如下方法獲得：將蔗糖代替MRS培養(yǎng)基中葡萄糖，制成不含葡萄糖的1號MRS培養(yǎng)基。將蔗糖、大豆低聚糖以1:1混合，代替MRS培養(yǎng)基中葡萄糖，制成不含葡萄糖的2號MRS培養(yǎng)基。挑取凍干保藏的乳酸菌菌種，接種于不含葡萄糖的1號MRS瓊脂平板培養(yǎng)基上，厭氧培養(yǎng)后，挑取單菌落于5mL不含葡萄糖的2號MRS液體培養(yǎng)基中，厭氧培養(yǎng)后檢測蔗糖、大豆低聚糖殘?zhí)橇?。選擇蔗糖殘?zhí)锹蕿?％以下，大豆低聚糖殘?zhí)锹蕿?5％以上的乳酸菌，厭氧培養(yǎng)至生長對數(shù)期，取200μL菌液，移入無菌水中制成所需菌體濃度的活性乳酸菌懸液。優(yōu)選地，所述發(fā)酵包括：將固定化乳酸菌膠粒與待發(fā)酵原料(即上述的發(fā)酵初始原料)混合，加入乙酸鈉，恒溫發(fā)酵，過濾，去除固定化乳酸菌膠粒，滅菌即得大豆乳清飲料。本發(fā)明采用固定化乳酸菌膠進行發(fā)酵，在高效利用大豆工業(yè)副產(chǎn)物的同時，既可保持發(fā)酵液中乳酸菌催化活性，又可在連續(xù)發(fā)酵反應(yīng)后回收利用固定化乳酸菌。優(yōu)選地，所述固定化乳酸菌膠粒與待發(fā)酵原料的質(zhì)量比為1:3-4，優(yōu)選為1:3.5-4，進一步優(yōu)選為1:3.5。采用特定用量比例的固定化乳酸菌膠粒與待發(fā)酵原料，有助于提高發(fā)酵效率，促進蔗糖充分代謝，提高產(chǎn)品品質(zhì)。優(yōu)選地，所述乙酸鈉的加入量為待發(fā)酵原料質(zhì)量的0.2％-0.6％，優(yōu)選為0.3％-0.5％，進一步優(yōu)選為0.4％。采用特定用量的乙酸鈉，能夠抑制其他雜菌的生長，保證乳酸菌的生長和增殖。優(yōu)選地，所述恒溫發(fā)酵的發(fā)酵溫度為37-42℃，優(yōu)選為38-40℃，進一步優(yōu)選為39℃。優(yōu)選地，所述恒溫發(fā)酵的發(fā)酵時間為24-48h，優(yōu)選為24-36h，進一步優(yōu)選為36h。采用特定發(fā)酵溫度和發(fā)酵時間，有助于提高發(fā)酵效率，促進蔗糖充分代謝，提高產(chǎn)品品質(zhì)。優(yōu)選地，所述過濾后所得固定化乳酸菌膠粒經(jīng)無菌生理鹽水清洗，在低溫生理鹽水中保存，重復(fù)利用。優(yōu)選地，所述低溫為10℃以下，優(yōu)選為5℃以下，進一步優(yōu)選為4℃。采用上述的發(fā)酵型大豆乳清飲料的制備方法制備得到的一種發(fā)酵型大豆乳清飲料。本發(fā)明發(fā)酵型大豆乳清飲料中蔗糖含量低，水蘇糖、棉子糖等大豆低聚糖活性成分含量高，能有效促進人體腸道雙歧桿菌增殖，增加有益菌、抑制有害菌、潤腸通便、清除毒素、提高人體腸道免疫功能。實施例1采用傳統(tǒng)堿溶酸沉法，將大豆豆粕粉碎、篩分后與去離子水以1:13混合，用NaOH溶液調(diào)pH至8.5，50℃恒溫、250r/min攪拌50min；用HCl溶液調(diào)pH至4.5，40℃恒溫、250r/min攪拌20min，離心，上清液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器50℃，80kPa壓力蒸發(fā)濃縮，保留乳清濃度為10％的濃縮型大豆乳清。將上述濃縮大豆乳清與牛奶粉復(fù)配，經(jīng)常溫高壓滅菌得發(fā)酵初始原料，牛奶粉添加量為發(fā)酵初始原料質(zhì)量的5％。將蔗糖代替MRS培養(yǎng)基中葡萄糖，制成不含葡萄糖的1號MRS培養(yǎng)基。將蔗糖、大豆低聚糖以1:1混合，代替MRS培養(yǎng)基中葡萄糖，制成不含葡萄糖的2號MRS培養(yǎng)基。挑取凍干保藏的乳酸菌菌種，接種于不含葡萄糖的1號MRS瓊脂平板培養(yǎng)基上，38℃厭氧培養(yǎng)24h后，挑取單菌落于5mL不含葡萄糖的2號MRS液體培養(yǎng)基中，38℃厭氧培養(yǎng)24h后檢測蔗糖、大豆低聚糖殘?zhí)橇俊＿x擇蔗糖殘?zhí)锹蕿?％以下，大豆低聚糖殘?zhí)锹蕿?5％以上的乳酸菌，38℃厭氧培養(yǎng)至生長對數(shù)期，取200μL菌液，移入無菌水中制成菌體濃度為0.5×1010cfumL-1的選擇性利用蔗糖的乳酸菌懸液。將無菌海藻酸鈉加入選擇性利用蔗糖的乳酸菌懸液中，無菌海藻酸鈉的用量為乳酸菌懸液質(zhì)量的2％，混勻后，將所得混合液滴入濃度為2％的CaCl2溶液中，靜置、無菌生理鹽水洗滌制得直徑為2mm的固定化乳酸菌膠粒。將固定化乳酸菌膠粒與發(fā)酵初始原料以1:3比例混合，加入占發(fā)酵初始原料0.2wt％無水乙酸鈉，38℃恒溫發(fā)酵24h后，過濾，去除固定化乳酸菌膠粒，并經(jīng)常溫高壓二次滅菌，制備得到大豆乳清飲料；過濾后的固定化乳酸菌膠粒，經(jīng)無菌生理鹽水洗清，4℃生理鹽水保存待用。實施例2采用傳統(tǒng)堿溶酸沉法，將大豆豆粕粉碎、篩分后與去離子水以1:11混合，用NaOH溶液調(diào)pH至8.5，50℃恒溫、250r/min攪拌50min；用HCl溶液調(diào)pH至4.5，40℃恒溫、250r/min攪拌20min，離心，上清液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器70℃，90kPa壓力蒸發(fā)濃縮，保留乳清濃度為12％的濃縮型大豆乳清。將上述濃縮大豆乳清與羊奶粉復(fù)配，經(jīng)常溫高壓滅菌得發(fā)酵初始原料，牛奶粉添加量為發(fā)酵初始原料質(zhì)量的10％。將蔗糖代替MRS培養(yǎng)基中葡萄糖，制成不含葡萄糖的1號MRS培養(yǎng)基。將蔗糖、大豆低聚糖以1:1混合，代替MRS培養(yǎng)基中葡萄糖，制成不含葡萄糖的2號MRS培養(yǎng)基。挑取凍干保藏的乳酸菌菌種，接種于不含葡萄糖的1號MRS瓊脂平板培養(yǎng)基上，37℃厭氧培養(yǎng)36h后，挑取單菌落于5mL不含葡萄糖的2號MRS液體培養(yǎng)基中，37℃厭氧培養(yǎng)36h后檢測蔗糖、大豆低聚糖殘?zhí)橇?。選擇蔗糖殘?zhí)锹蕿?％以下，大豆低聚糖殘?zhí)锹蕿?5％以上的乳酸菌，37℃厭氧培養(yǎng)至生長對數(shù)期，取200μL菌液，移入無菌水中制成菌體濃度為0.7×1010cfumL-1的選擇性利用蔗糖的乳酸菌懸液。將無菌海藻酸鈉加入選擇性利用蔗糖的乳酸菌懸液中，無菌海藻酸鈉的用量為乳酸菌懸液質(zhì)量的2％，混勻后，將所得混合液滴入濃度為3％的CaCl2溶液中，靜置、無菌生理鹽水洗滌制得直徑為2.5mm的固定化乳酸菌膠粒。將固定化乳酸菌膠粒與發(fā)酵初始原料以1:3比例混合，加入占發(fā)酵初始原料0.3wt％無水乙酸鈉，37℃恒溫發(fā)酵36h后，過濾，去除固定化乳酸菌膠粒，并經(jīng)常溫高壓二次滅菌，制備得到大豆乳清飲料；過濾后的固定化乳酸菌膠粒，經(jīng)無菌生理鹽水洗清，4℃生理鹽水保存待用。實施例3采用傳統(tǒng)堿溶酸沉法，將大豆豆粕粉碎、篩分后與去離子水以1:10混合，用NaOH溶液調(diào)pH至8.5，50℃恒溫、250r/min攪拌50min；用HCl溶液調(diào)pH至4.5，40℃恒溫、250r/min攪拌20min，離心，上清液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器55℃，83kPa壓力蒸發(fā)濃縮，保留乳清濃度為13％的濃縮型大豆乳清。將上述濃縮大豆乳清與牛奶粉復(fù)配，經(jīng)常溫高壓滅菌得發(fā)酵初始原料，羊奶粉添加量為發(fā)酵初始原料質(zhì)量的15％。將蔗糖代替MRS培養(yǎng)基中葡萄糖，制成不含葡萄糖的1號MRS培養(yǎng)基。將蔗糖、大豆低聚糖以1:1混合，代替MRS培養(yǎng)基中葡萄糖，制成不含葡萄糖的2號MRS培養(yǎng)基。挑取凍干保藏的乳酸菌菌種，接種于不含葡萄糖的1號MRS瓊脂平板培養(yǎng)基上，40℃厭氧培養(yǎng)48h后，挑取單菌落于5mL不含葡萄糖的2號MRS液體培養(yǎng)基中，40℃厭氧培養(yǎng)48h后檢測蔗糖、大豆低聚糖殘?zhí)橇?。選擇蔗糖殘?zhí)锹蕿?％以下，大豆低聚糖殘?zhí)锹蕿?5％以上的乳酸菌，40℃厭氧培養(yǎng)至生長對數(shù)期，取200μL菌液，移入無菌水中制成菌體濃度為0.99×1010cfumL-1的選擇性利用蔗糖的乳酸菌懸液。將無菌海藻酸鈉加入選擇性利用蔗糖的乳酸菌懸液中，無菌海藻酸鈉的用量為乳酸菌懸液質(zhì)量的2.5％，混勻后，將所得混合液滴入濃度為4％的CaCl2溶液中，靜置、無菌生理鹽水洗滌制得直徑為3mm的固定化乳酸菌膠粒。將固定化乳酸菌膠粒與發(fā)酵初始原料以1:4比例混合，加入占發(fā)酵初始原料0.5wt％無水乙酸鈉，40℃恒溫發(fā)酵48h后，過濾，去除固定化乳酸菌膠粒，并經(jīng)常溫高壓二次滅菌，制備得到大豆乳清飲料；過濾后的固定化乳酸菌膠粒，經(jīng)無菌生理鹽水洗清，4℃生理鹽水保存待用。實施例4采用傳統(tǒng)堿溶酸沉法，將大豆豆粕粉碎、篩分后與去離子水以1:8混合，用NaOH溶液調(diào)pH至8.5，50℃恒溫、250r/min攪拌50min；用HCl溶液調(diào)pH至4.5，40℃恒溫、250r/min攪拌20min，離心，上清液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器65℃，87kPa壓力蒸發(fā)濃縮，保留乳清濃度為15％的濃縮型大豆乳清。將上述濃縮大豆乳清與羊奶粉復(fù)配，經(jīng)常溫高壓滅菌得發(fā)酵初始原料，羊奶粉添加量為發(fā)酵初始原料質(zhì)量的20％。將蔗糖代替MRS培養(yǎng)基中葡萄糖，制成不含葡萄糖的1號MRS培養(yǎng)基。將蔗糖、大豆低聚糖以1:1混合，代替MRS培養(yǎng)基中葡萄糖，制成不含葡萄糖的2號MRS培養(yǎng)基。挑取凍干保藏的乳酸菌菌種，接種于不含葡萄糖的1號MRS瓊脂平板培養(yǎng)基上，42℃厭氧培養(yǎng)24h后，挑取單菌落于5mL不含葡萄糖的2號MRS液體培養(yǎng)基中，42℃厭氧培養(yǎng)24h后檢測蔗糖、大豆低聚糖殘?zhí)橇?。選擇蔗糖殘?zhí)锹蕿?％以下，大豆低聚糖殘?zhí)锹蕿?5％以上的乳酸菌，42℃厭氧培養(yǎng)至生長對數(shù)期，取200μL菌液，移入無菌水中制成菌體濃度為1.1×1010cfumL-1的選擇性利用蔗糖的乳酸菌懸液。將無菌海藻酸鈉加入選擇性利用蔗糖的乳酸菌懸液中，無菌海藻酸鈉的用量為乳酸菌懸液質(zhì)量的2.5％，混勻后，將所得混合液滴入濃度為4％的CaCl2溶液中，靜置、無菌生理鹽水洗滌制得直徑為3mm的固定化乳酸菌膠粒。將固定化乳酸菌膠粒與發(fā)酵初始原料以1:4比例混合，加入占發(fā)酵初始原料0.6wt％無水乙酸鈉，42℃恒溫發(fā)酵24h后，過濾，去除固定化乳酸菌膠粒，并經(jīng)常溫高壓二次滅菌，制備得到大豆乳清飲料；過濾后的固定化乳酸菌膠粒，經(jīng)無菌生理鹽水洗清，4℃生理鹽水保存待用。實施例5采用傳統(tǒng)堿溶酸沉法，將大豆豆粕粉碎、篩分后與去離子水以1:10混合，用NaOH溶液調(diào)pH至8.5，50℃恒溫、250r/min攪拌50min；用HCl溶液調(diào)pH至4.5，40℃恒溫、250r/min攪拌20min，離心，上清液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器60℃，85kPa壓力蒸發(fā)濃縮，保留乳清濃度為13％的濃縮型大豆乳清。將上述濃縮大豆乳清與羊奶粉復(fù)配，經(jīng)常溫高壓滅菌得發(fā)酵初始原料，牛奶粉添加量為發(fā)酵初始原料質(zhì)量的15％。將蔗糖代替MRS培養(yǎng)基中葡萄糖，制成不含葡萄糖的1號MRS培養(yǎng)基。將蔗糖、大豆低聚糖以1:1混合，代替MRS培養(yǎng)基中葡萄糖，制成不含葡萄糖的2號MRS培養(yǎng)基。挑取凍干保藏的乳酸菌菌種，接種于不含葡萄糖的1號MRS瓊脂平板培養(yǎng)基上，39℃厭氧培養(yǎng)36h后，挑取單菌落于5mL不含葡萄糖的2號MRS液體培養(yǎng)基中，39℃厭氧培養(yǎng)36h后檢測蔗糖、大豆低聚糖殘?zhí)橇?。選擇蔗糖殘?zhí)锹蕿?％以下，大豆低聚糖殘?zhí)锹蕿?5％以上的乳酸菌，39℃厭氧培養(yǎng)至生長對數(shù)期，取200μL菌液，移入無菌水中制成菌體濃度為1.05×1010cfumL-1的選擇性利用蔗糖的乳酸菌懸液。將無菌海藻酸鈉加入選擇性利用蔗糖的乳酸菌懸液中，無菌海藻酸鈉的用量為乳酸菌懸液質(zhì)量的2.3％，混勻后，將所得混合液滴入濃度為3％的CaCl2溶液中，靜置、無菌生理鹽水洗滌制得直徑為2.5mm的固定化乳酸菌膠粒。將固定化乳酸菌膠粒與發(fā)酵初始原料以1:3.5比例混合，加入占發(fā)酵初始原料0.4wt％無水乙酸鈉，39℃恒溫發(fā)酵36h后，過濾，去除固定化乳酸菌膠粒，并經(jīng)常溫高壓二次滅菌，制備得到大豆乳清飲料；過濾后的固定化乳酸菌膠粒，經(jīng)無菌生理鹽水洗清，4℃生理鹽水保存待用。采用HPLC測定所得大豆乳清飲料中的蔗糖和大豆低聚糖含量，結(jié)果如表1所示：表1本發(fā)明大豆乳清飲料中的蔗糖和大豆低聚糖含量實施例蔗糖含量wt％大豆低聚糖含量wt％實施例10.74.5實施例20.64.9實施例30.45.3實施例40.65.7實施例50.45.8通過表1可以看出，采用本發(fā)明方法制備得到的大豆乳清飲料中蔗糖含量為0.7wt％以下，而大豆低聚糖含量為4.5wt％以上，而專利201210393907.X所得保健飲料產(chǎn)品中大豆低聚糖的最高含量不超過1.1wt％，說明本發(fā)明方法有效去除了大豆乳清中蔗糖，保留了水蘇糖、棉子糖等大豆低聚糖活性成分；采用本發(fā)明方法制備得到的大豆乳清飲料能有效促進人體腸道雙歧桿菌增殖，增加有益菌、抑制有害菌、潤腸通便、清除毒素、提高人體腸道免疫功能。本發(fā)明所得固定化乳酸菌膠?？芍貜?fù)利用次數(shù)如表2所示：表2本發(fā)明固定化乳酸菌膠?？芍貜?fù)利用次數(shù)實施例可重復(fù)利用次數(shù)/次實施例110實施例212實施例315實施例415實施例515通過表2可以看出，本發(fā)明所得固定化乳酸菌膠?？芍貜?fù)利用10-15次，本發(fā)明采用微生物固定化發(fā)酵法，在高效利用大豆工業(yè)副產(chǎn)物的同時，既可保持發(fā)酵液中乳酸菌催化活性，又可在連續(xù)發(fā)酵反應(yīng)后回收利用固定化乳酸菌，工藝簡單，成本低廉。盡管已用具體實施例來說明和描述了本發(fā)明，然而應(yīng)意識到，以上各實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解：在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，可以對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進行修改，或者對其中部分或者全部技術(shù)特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實施例技術(shù)方案的范圍；因此，這意味著在所附權(quán)利要求中包括屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些替換和修改。當前第1頁1 2 3