固定化全細(xì)胞組合物催化合成(s)-n-叔丁氧羰基-3-羥基哌啶的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種固定化全細(xì)胞組合物催化合成(S)-N-叔丁氧羰基-3-羥基哌啶的方法，所述方法包括如下步驟：將固定化全細(xì)胞組合物、N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮、輔因子、緩沖液和葡萄糖按一定比例混合，在pH＝5～8、溫度為20～45℃下反應(yīng)，經(jīng)后處理得到所述產(chǎn)物。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所采用的方法具有成本低、操作方便和催化劑可回收利用的優(yōu)點(diǎn)，具有極大的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。
【專利說明】固定化全細(xì)胞組合物催化合成（s) -N-叔丁氧羰基-3-羥基 脈啶的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于制藥工業(yè)生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種固定化全細(xì)胞組合物合成 (S)-N-叔丁氧撰基-3-輕基哌陡的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] (S) -N-叔丁氧羰基-3-羥基哌啶是一個(gè)在醫(yī)藥領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價(jià)值的化合物， 被廣泛應(yīng)用于鎮(zhèn)痛、抗精神病和抗腫瘤等藥物的合成。（S)-N-叔丁氧羰基-3-羥基哌啶是 2013年上市的用于治療罕見淋巴瘤藥物依布魯替尼（Imbruvica)的關(guān)鍵中間體。
[0003] 目前文獻(xiàn)報(bào)道的制備（S)-N-叔丁氧羰基-3-羥基哌啶的方法主要有化學(xué)拆分法 和生物轉(zhuǎn)化法。
[0004] 化學(xué)拆分法，如式1所示，工藝路線是將外消旋3-羥基哌啶在手性有機(jī)酸的作用 下成鹽析出得到（S)-3-羥基哌啶的鹽，然后游離、上保護(hù)基得到（S)-N-叔丁氧羰基-3-羥 基哌啶。該方法存在拆分收率低、操作繁瑣及成本高昂的缺點(diǎn)。
[0005]

【權(quán)利要求】
1. 一種固定化全細(xì)胞組合物催化合成（S)-N-叔丁氧羰基-3-羥基哌啶的方法，其特征 在于：將固定化全細(xì)胞組合物、N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮、輔因子、緩沖液和葡萄糖按一定 比例混合，在pH = 5?8、溫度為20?45°C下反應(yīng)得到產(chǎn)物。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述固定化全細(xì)胞組合物為酮還原酶全細(xì) 胞和葡萄糖脫氫酶全細(xì)胞按一定比例混合并經(jīng)固定化處理后的組合物。
3. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述酮還原酶全細(xì)胞和所述葡萄糖脫氫酶 全細(xì)胞的組合比例為1 :〇. 1?1 :1，其中優(yōu)選為1 :〇. 2。
4. 如權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述酮還原酶全細(xì)胞和所述葡萄糖脫 氫酶全細(xì)胞由基因工程菌發(fā)酵得到，所述基因工程菌選自大腸桿菌或酵母菌，其中優(yōu)選為 大腸桿菌。
5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：反應(yīng)中所述固定化全細(xì)胞濃度為5?100克 /升、所述N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮的濃度10?250克/升、所述輔因子濃度為0. 001? 1克/升、所述緩沖液的濃度為1毫摩爾/升?1摩爾/升、所述的葡萄糖的濃度為10? 200克/升。
6. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述輔因子為選自NAD、NADH、NADP和NADPH 的任意一種或它們的組合，其中優(yōu)選為NADP。
7. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述緩沖液選自磷酸鹽緩沖液或三乙醇胺 緩沖液，其中優(yōu)選為磷酸鹽緩沖液。
8. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定化全細(xì)胞組合物的制備方法為：將 酮還原酶全細(xì)胞和葡萄糖脫氫酶全細(xì)胞按一定比例與固定劑混合、干燥成型。
9. 如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：所述酮還原酶全細(xì)胞和所述葡萄糖脫氫酶 全細(xì)胞與所述固定劑的比例為：1 :1?1 :2。
10. 如權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述固定劑為選自聚乙二醇、聚丙烯 酰胺、聚乙烯醇或海藻酸鈣的一種或它們的組合。
【文檔編號(hào)】C12P17/12GK104059952SQ201410309627
【公開日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2014年7月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月1日
【發(fā)明者】竺偉, 王波, 張啟鵬, 吳會(huì), 李兵豪 申請(qǐng)人:尚科生物醫(yī)藥（上海）有限公司