一種檢測發(fā)酵乳中乳酸菌數(shù)的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及分析化學(xué)領(lǐng)域，公開了一種檢測發(fā)酵乳中乳酸菌數(shù)的方法。該方法將發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品用UHT乳稀釋5-20倍，然后加入刃天青反應(yīng)，用RGB顏色信息采集儀器記錄發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品終點R值與起始R值的R差值，并建立R差值X與乳酸菌菌落總數(shù)Y之間的標(biāo)準(zhǔn)方程；將發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品替換為發(fā)酵乳待測樣品，在相同的檢測環(huán)境下，記錄發(fā)酵乳待測樣品的R差值并代入獲得的標(biāo)準(zhǔn)方程中，檢測出發(fā)酵乳待測樣品中的乳酸菌數(shù)。本發(fā)明利用UHT乳對發(fā)酵乳樣品進(jìn)行稀釋調(diào)整，使樣品符合刃天青還原法的反應(yīng)條件和RGB顏色信息采集原理，同時保證了樣品間具有相同的稀釋倍數(shù)，與標(biāo)準(zhǔn)方法檢測結(jié)果無顯著差異，在快速檢測的基礎(chǔ)上極大的保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。
【專利說明】一種檢測發(fā)酵乳中乳酸菌數(shù)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及分析化學(xué)領(lǐng)域，更具體的說是涉及一種檢測發(fā)酵乳中乳酸菌數(shù)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]發(fā)酵乳在GB19302-2010中的定義為“以生牛(羊)乳或乳粉為原料，經(jīng)殺菌、發(fā)酵后制成的PH值降低的產(chǎn)品”，涵蓋了發(fā)酵乳、酸乳、風(fēng)味發(fā)酵乳、風(fēng)味酸乳等產(chǎn)品。由于食用時發(fā)酵乳及發(fā)酵乳飲料中的活菌數(shù)需達(dá)到一定數(shù)量才能起到保健作用，因此GB19302-2010中明確規(guī)定了發(fā)酵乳產(chǎn)品的乳酸菌限量:乳酸菌數(shù)≥lX106cfu/g(ml)。
[0003]乳酸菌總數(shù)為發(fā)酵乳產(chǎn)品出廠檢測的關(guān)鍵檢測項目，目前行業(yè)內(nèi)對發(fā)酵乳乳酸菌總數(shù)的檢測手段為GB4789.35方法，該方法不但需要專業(yè)人員操作，運(yùn)行成本較高，而最為重要的是該方法的檢驗周期為48小時，由于發(fā)酵乳為全冷鏈運(yùn)輸，且其銷售保質(zhì)期很短(15天)，漫長的出廠檢驗嚴(yán)重縮短了發(fā)酵乳產(chǎn)品原本就很短的貨架期，嚴(yán)重了影響企業(yè)的利潤。
[0004]為了縮短檢測時間，現(xiàn)有技術(shù)報道基于刃天青還原法，采用醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域的RGB顏色信息采集儀器，記錄檢測樣品顏色變化，而檢測樣品顏色變化和細(xì)菌總數(shù)相關(guān)，從而獲得細(xì)菌總數(shù)。但是，由于發(fā)酵乳產(chǎn)品的PH過低(市售的合格發(fā)酵乳pH值在4.0~4.5范圍)，不符合刃天青染料還原法的反應(yīng)條件。相關(guān)研究結(jié)果證明，應(yīng)用刃天青染料還原法檢測乳酸菌總數(shù)，PH值在6.5~7.0范圍內(nèi)檢測結(jié)果無顯著差異。因此需要將發(fā)酵乳樣品經(jīng)處理后使其PH值在6.5~7.0范圍內(nèi)，方可應(yīng)用刃天青染料還原法對其乳酸菌總數(shù)進(jìn)行檢測。
[0005]常規(guī)的pH值調(diào)節(jié)方法為對樣品添加pH值較高的緩沖液調(diào)節(jié)至所需pH值范圍，這一方法雖然用量較少，但由于發(fā)酵乳產(chǎn)品的PH值并不是固定值，因此應(yīng)用緩沖液調(diào)節(jié)至同一 PH值會使樣品的稀釋程度不同，從而導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。
[0006]如果加入中性純水或去離子水稀釋，可以使樣品pH值達(dá)到6.5-7.0范圍內(nèi)，但需要對發(fā)酵乳樣品進(jìn)行100倍以上的稀釋，因而大大的降低了檢測精度，更為重要的是，根據(jù)RGB顏色信息采集的原理，其為通過LED燈光對樣品的反射來采集顏色變化信息，如果將樣品稀釋近100倍，樣品稀釋液已經(jīng)幾乎完全透明，因樣品對光的反射大大降低，無法準(zhǔn)確采集顏色變化信息，無法進(jìn)行準(zhǔn)確的檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]有鑒于此，本發(fā)明提供一種檢測發(fā)酵乳中乳酸菌數(shù)的方法，使得所述方法能夠快速、準(zhǔn)確的檢測出發(fā)酵乳中的乳酸菌數(shù)。
[0008]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
[0009]一種檢測發(fā)酵乳中乳酸菌數(shù)的方法，包括如下步驟:
[0010]步驟1、將發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品用UHT乳稀釋5-20倍，然后向稀釋后的發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品中加入刃天青反應(yīng)，用RGB顏色信息采集儀器記錄發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品終點R值與起始R值的R差值，并建立R差值X與乳酸菌菌落總數(shù)Y之間的標(biāo)準(zhǔn)方程；
[0011]其中，所述終點R值為第1-15分鐘內(nèi)任意時間點的R值，所述起點R值為O分鐘的R值；
[0012]步驟2、將步驟I中發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品替換為發(fā)酵乳待測樣品，在相同的檢測環(huán)境下，記錄發(fā)酵乳待測樣品的R差值并代入步驟I中獲得的標(biāo)準(zhǔn)方程中，檢測出發(fā)酵乳待測樣品中的乳酸菌數(shù)。
[0013]乳酸菌在代謝過程中，由于生理需要產(chǎn)生氧化還原酶，該酶和與刃天青反應(yīng)使其由藍(lán)色變?yōu)榉凵?，而氧化還原酶的多少和乳酸菌數(shù)多少直接相關(guān)，進(jìn)而通過儀器記錄反應(yīng)的顏色變化(R值變化)，建立起和乳酸菌數(shù)相關(guān)的公式。
[0014]本發(fā)明所述UHT (Ultra High Temperature treated)乳為超高溫滅菌乳。超高溫瞬時滅菌，135-140°C，4-10秒，是鮮奶處理的一種滅菌工藝。本發(fā)明采用UHT乳對樣品進(jìn)行稀釋，第一，其不會帶入細(xì)菌影響檢測結(jié)果；第二，其不會改變?nèi)芤旱耐该鞫龋幚淼臉悠芬廊粸椴煌该鞯娜榘咨后w；第三，UHT乳為負(fù)電性膠體溶液，負(fù)電性膠粒將吸附氫離子，因此在稀釋用量相同的前提下，UHT乳稀釋的樣品pH值更高，因此使用UHT乳調(diào)節(jié)樣品pH值至6.5-7.0用量較純水更少。
[0015]本發(fā)明分別采用UHT乳稀釋發(fā)酵乳8倍、10倍和15倍，稀釋后的發(fā)酵乳pH值均處于6.5-6.9范圍內(nèi)。
[0016]在本發(fā)明技術(shù)方案中，優(yōu)選地，所述發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品個數(shù)為5個以上。
[0017]優(yōu)選地，所述刃天青濃度為0.0005-0.05g/mL。
[0018]優(yōu)選地，所述稀釋后的發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品和刃天青的體積比為9:1。
[0019]優(yōu)選地，所述稀釋倍數(shù)為8-15倍，更優(yōu)選地，所述稀釋倍數(shù)為10倍。
[0020]優(yōu)選地，所述終點R值為第5分鐘的R值。
[0021]采集12個市售發(fā)酵乳樣品，按照本發(fā)明所述方法進(jìn)行檢測，整個檢測過程只需要5min,且檢測結(jié)果和GB4789.35檢測結(jié)果進(jìn)行對比并進(jìn)行t檢驗，結(jié)果顯示和本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)檢測方法GB4789.35無顯著差異，表明本發(fā)明所述方法檢測的高度準(zhǔn)確性。
[0022]由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明利用UHT乳對發(fā)酵乳樣品進(jìn)行稀釋調(diào)整，使樣品符合刃天青還原法的反應(yīng)條件和RGB顏色信息采集原理，同時保證了樣品之間具有相同的稀釋倍數(shù)，與GB4789.35檢測結(jié)果無顯著差異，在快速檢測的基礎(chǔ)上極大的保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。
【具體實施方式】
[0023]本發(fā)明公開了一種檢測發(fā)酵乳中乳酸菌數(shù)的方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法已經(jīng)通過較佳實施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0024]下面結(jié)合實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
[0025] 實施例1:UHT乳稀釋發(fā)酵乳樣品[0026]取多個發(fā)酵乳樣品，分別用UHT乳對其稀釋8倍、10倍和15倍，各樣品pH值見表
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[0027]表1稀釋后發(fā)酵乳樣品pH值
[0028]
【權(quán)利要求】
1.一種檢測發(fā)酵乳中乳酸菌數(shù)的方法，其特征在于，包括如下步驟: 步驟1、將發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品用UHT乳稀釋5-20倍，然后向稀釋后的發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品中加入刃天青反應(yīng)，用RGB顏色信息采集儀器記錄發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品終點R值與起始R值的R差值，并建立R差值X與乳酸菌菌落總數(shù)Y之間的標(biāo)準(zhǔn)方程； 其中，所述終點R值為第1-15分鐘內(nèi)任意時間點的R值，所述起點R值為O分鐘的R值； 步驟2、將步驟I中發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品替換為發(fā)酵乳待測樣品，在相同的檢測環(huán)境下，記錄發(fā)酵乳待測樣品的R差值并代入步驟I中獲得的標(biāo)準(zhǔn)方程中，檢測出發(fā)酵乳待測樣品中的乳酸菌數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品個數(shù)為5個以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述刃天青濃度為0.0005-0.05g/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述稀釋倍數(shù)為8-15倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，其特征在于，所述稀釋倍數(shù)為10倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述終點R值為第5分鐘的R值。
7.根據(jù)權(quán)利要求 1所述方法，其特征在于，所述稀釋后的發(fā)酵乳標(biāo)準(zhǔn)品和刃天青的體積比為9:1。
【文檔編號】C12Q1/06GK104031976SQ201410267349
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年6月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月16日
【發(fā)明者】富鑫, 儲小軍, 華家才, 來燕 申請人:貝因美嬰童食品股份有限公司, 杭州貝因美母嬰營養(yǎng)品有限公司, 黑龍江貝因美乳業(yè)有限公司