一種在動物飼料包埋乳酸菌的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物應用技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種在動物飼料包埋乳酸菌的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前養(yǎng)殖戶和飼料生產(chǎn)者常在動物飼料中添加抗生素作為抑菌促生產(chǎn)劑，雖然提 高了動物的生產(chǎn)性能，但由于抗生素具有殘留性、抗藥性、耐藥性及對人類健康危害性的弊 端，因而研發(fā)新的安全性抗生素替代品勢在必行。乳酸菌等有益微生物自古以來就被人類 作為食品微生物利用的一大類菌，廣泛應用于發(fā)酵乳制品、水果、蔬菜、黑麥粉制成的面包 和動物的飼料中。大量的研究表明，由乳酸菌等微生物產(chǎn)生的益生素在維持動物消化道微 生物區(qū)系的平衡、抑制有害菌的生長、減少腹瀉等消化道疾病的發(fā)生及促生產(chǎn)方面作用顯 著，但是乳酸菌為厭氧菌，培養(yǎng)增殖難度高、對外界抵抗力差，難以制備和長期保存，降低了 其在動物體內(nèi)的作用。目前在發(fā)酵、廢水處理等領(lǐng)域采用固定化微生物技術(shù)來提高微生物 穩(wěn)定性，該方法可保持微生物的活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種在動物飼料包埋乳酸菌的方法，優(yōu)選的方式是提供一種 提高乳酸菌存活能力的包埋方法。
[0004] 本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0005] 在動物飼料中添加動物飼料重量百分比0. 01-0. 5%的包埋乳酸菌。
[0006] 包埋乳酸菌的制備方法包括包埋步驟，包埋過程中添加蔗糖保護劑，包埋步驟完 成后設(shè)有冷凍干燥步驟。
[0007] 以海藻酸鈉為載體，制備包埋乳酸菌的具體步驟如下：將海藻酸鈉溶液、蔗糖溶液 及乳酸菌液混合均勻后，滴入CaCl 2溶液中浸泡硬化處理成凝膠珠，凝膠珠無菌水沖洗后冷 凍，冷凍好的凝膠珠真空冷凍干燥，待樣品呈白色疏。松狀態(tài)取出。
[0008] 以聚乙烯醇（PVA)為載體，制備包埋乳酸菌的具體步驟如下：PVA加熱溶解制成 PVA溶液，將乳酸菌液、PVA溶液、海藻酸鈉溶液、蔗糖溶液混合均勻后滴入飽和硼酸及CaCl 2 的混合溶液中，硬化成凝膠珠，用無菌水沖洗后冷凍，冷凍好的聚乙烯醇凝膠珠真空冷凍干 燥，待樣品呈白色疏松狀態(tài)取出。
[0009] 本發(fā)明分別以海藻酸鈉和聚乙烯醇為載體，對乳酸菌進行包埋固定，包埋法的原 理是通過聚合作用或者離子網(wǎng)絡(luò)形成，或通過沉淀作用，或改變?nèi)軇囟?、pH值將微生物 截流在凝膠聚合物孔隙的網(wǎng)絡(luò)空間中，載體材料聚乙烯醇（polyvinylalcohol簡稱PVA)的 突出優(yōu)點是抗微生物分解性能好，機械強度高，化學穩(wěn)定性能好。聚乙烯醇是一種新型的微 生物包埋固定化載體，它具有機械強度高，化學穩(wěn)定性好，抗微生物分解性能強，對微生物 無毒，價格低廉等一系列優(yōu)點，是一種具有實用潛力的包埋材料。在包埋時形成的凝膠小球 有一個均勻的球殼，其結(jié)構(gòu)為外密內(nèi)疏，內(nèi)部呈蜂窩狀結(jié)構(gòu)對乳酸菌形成很好的保護。經(jīng)過 包埋固定的乳酸菌在凍干后的存活率及耐熱性大于未包埋的乳酸菌，把包埋工藝和冷凍干 燥工藝偶聯(lián)在一起，既簡化了程序又提高了微生物的存活力，在包埋工藝中添加了蔗糖作 為保護劑，可有效提高包埋保護效果，包埋固定可以延長微生物的使用壽命及使其更有效 地發(fā)揮作用，并且聚乙烯醇的耐熱性明顯好的于用海藻酸鈉包埋的乳酸菌，在動物飼料中 添加包埋的乳酸菌對于抑制病源性微生物的侵害、降低死亡率和消化道疾病的發(fā)生率、提 高日采食量等方面具有明顯的作用。包埋的乳酸菌的高耐熱性，在其作為動物飼料添加劑 及制備顆粒飼料中可廣泛應用于豬、雞、鴨、牛、羊等家禽家畜的飼養(yǎng)。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1，包埋乳酸菌的制備：
[0011] 分別選用海藻酸鈉和聚乙烯醇作包埋劑，具體步驟如下：
[0012](一）乳酸菌的培養(yǎng)將〇? 1ml乳酸菌（干酪乳桿菌）接種于5ml去氧MRS培養(yǎng)基 中，置于37°C恒溫箱中培養(yǎng)18h。培養(yǎng)完畢，得到的菌濃度為1. 072X108個/ml。
[0013]MRS厭氧培養(yǎng)基：胰蛋白胨10g/l、牛肉膏10S/1、酵母浸出物59/1、葡萄糖20g/l、吐溫（80)11111/1、1^冊028/1、乙酸鈉58/1、檸檬酸三銨2 8/1、1%5040.28/111^040 . 058/1，在 120°C下高壓滅菌20min。
[0014](二）海藻酸鈉固定化小球的制備
[0015] 1、包埋材料
[0016] 海藻酸鈉，1 % CaCl2，無菌水，50 %蔗糖溶液；
[0017] 2、實驗方法
[0018] 首先，用電子天平準確稱取5g海藻酸鈉，加入到100ml的蒸餾水中，配成5 %的溶 液，然后取其l〇ml與10ml50%蔗糖溶液，與3ml的乳酸菌液混合均勻。
[0019] 將混合液用中號移液槍頭滴入1% CaCl2溶液中，并浸泡5min，進行硬化處理。撈 出凝膠珠，用無菌水沖洗三次，洗去凝膠珠表面的CaCl 2。最后，將凝膠珠裝入小瓶中，封口， 置于-20°C的冰箱內(nèi)，進行冷凍，供凍干使用。
[0020] (三）聚乙烯醇固定化小球的制備
[0021] 1、包埋材料
[0022] 聚乙烯醇PVA (平均聚合度1750-50)，5 %海藻酸鈉溶液，飽和硼酸溶液1% CaCl2 溶液，50 %蔗糖溶液。
[0023] 2、實驗方法
[0024] 首先，準確稱取10g PVA，加入50ml蒸餾水中，在88°C水浴鍋內(nèi)溶解，制
[0025] 成20 %的PVA溶液。然后，將飽和硼酸與1 % CaCl2以3 : 2 (體積比）配成混合 溶液。將3ml乳酸菌液，20 % PVA溶液10ml，5 %海藻酸鈉溶液10ml，50 %蔗糖溶液5ml混 合均勻。將上述混合物用中號移液槍滴入飽和硼酸及CaCl2的混合溶液中。靜置一段時間 后，取出凝膠珠，用無菌水沖洗。將凝膠珠裝入小瓶中，封口，置于-20°C的冰箱內(nèi)，進行冷 凍，供凍干使用。
[0026](四）無包埋菌種冷凍
[0027] 取乳酸菌0. 3ml，無菌水1ml，50%蔗糖溶液1ml混合均勻，放入_20°C的冰箱內(nèi)冷 凍，供凍干使用。
[0028](六）結(jié)果檢測：
[0029] 1、檢測凍干后樣品的存活率
[0030] 在無菌條件下，分別取三種樣品0. 0104±0. 0003g，接種于裝有5ml的MRS培養(yǎng)基 厭氧試管（A1，A:，A，）中，置于37°C恒溫箱中培養(yǎng)24h。將培養(yǎng)好的樣品分別取0.1ml再 分別接種于另外三支裝有5ml的MRS培養(yǎng)液的厭氧試管< Bl，B :，B ;i)中，培養(yǎng)20h后， 用平板計數(shù)法測定活菌數(shù)。其具體操作如下：取品l〇ul -加入到5ml生理鹽水中一再從中 取200ul，接種于MRS瓊脂厭氧管內(nèi)（每種樣品做三份），置于37°C恒溫箱中培養(yǎng)24h，培養(yǎng) 完畢計數(shù)。計算方法為：設(shè)厭氧管內(nèi)的菌落數(shù)為C(個），則原樣品，B，）中菌液濃 度為W (個/ml) :W = O 1X500/0. 2,所得實驗數(shù)據(jù)如下：
[0031] 表1不同載體凍干后的活菌數(shù)（1〇5個/ml) (n = 3)
【主權(quán)項】
1. 一種在動物飼料包埋乳酸菌的方法，其特征在于：在動物飼料中添加動物飼料重量 百分比0. 01-0. 5%的包埋乳酸菌。
2. 如權(quán)利要求1所述的在動物飼料包埋乳酸菌的方法，其特征在于：包埋乳酸菌的制 備包括包埋過程。
3. 如權(quán)利要求2所述的在動物飼料包埋乳酸菌的方法，其特征在于：包埋過程中添加 蔗糖保護劑，包埋步驟完成后設(shè)有冷凍干燥步驟。
4. 如權(quán)利要求1所述在動物飼料包埋乳酸菌的方法，其特征在于：以海藻酸鈉為載 體，包埋乳酸菌的制備步驟如下：將海藻酸鈉溶液、蔗糖溶液及乳酸菌液混合均勻后，滴入 CaCl2溶液中浸泡硬化處理成凝膠珠，凝膠珠無菌水沖洗后冷凍，冷凍好的凝膠珠真空冷凍 干燥，待樣品呈白色疏松狀態(tài)取出。
5. 如權(quán)利要求1所述的在動物飼料包埋乳酸菌的方法，其特征在于：以聚乙烯醇（PVA) 為載體，包埋乳酸菌的制備步驟如下：PVA加熱溶解制成PVA溶液，將乳酸菌液、PVA溶液、海 藻酸鈉溶液、蔗糖溶液混合均勻后滴入飽和硼酸及CaCl 2的混合溶液中，硬化成凝膠珠，用 無菌水沖洗后冷凍，冷凍好的聚乙烯醇凝膠珠真空冷凍干燥，待樣品呈白色疏松狀態(tài)取出。
【專利摘要】本發(fā)明屬于微生物應用技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種在動物飼料包埋乳酸菌的方法，在動物飼料中添加動物飼料重量百分比0.01-0.5％的包埋乳酸菌，包埋過程中添加蔗糖保護劑，包埋步驟完成后設(shè)有冷凍干燥步驟。經(jīng)過包埋固定的乳酸菌存活率及耐熱性高于未包埋的乳酸菌，延長了微生物的使用壽命，并能使其更有效地發(fā)揮作用，本發(fā)明在作為動物飼料添加劑及制備顆粒飼料中可廣泛應用于豬、雞、鴨、牛、羊等家禽或家畜的飼養(yǎng)。
【IPC分類】C12N11-10, C12N11-08, A23K1-16, C12N11-04, A23K1-00
【公開號】CN104664051
【申請?zhí)枴緾N201310642230
【發(fā)明人】不公告發(fā)明人
【申請人】青島碧水藍天生物技術(shù)有限公司
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2013年12月3日