一種飼料用霉菌毒素脫毒劑及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于添加劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體公開(kāi)了一種飼料用霉菌毒素脫毒劑及其制備方法與應(yīng)用。所述霉菌毒素脫毒劑含有蒙脫石、膨潤(rùn)土、芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物、滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物、酵母細(xì)胞壁多糖。本發(fā)明研制的霉菌毒素脫毒劑同時(shí)具有吸附和降解霉菌毒素的能力，能有效去除飼料中的霉菌毒素，減輕其對(duì)動(dòng)物的傷害，降低胃腸道等疾病發(fā)生率。霉菌毒素脫毒劑制備方法簡(jiǎn)單，材料來(lái)源廣泛，價(jià)格低廉，在飼料添加劑領(lǐng)域中具有廣闊的市場(chǎng)應(yīng)用價(jià)值。
【專利說(shuō)明】一種飼料用霉菌毒素脫毒劑及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于添加劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種飼料用霉菌毒素脫毒劑及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]霉菌毒素是一個(gè)全球性問(wèn)題，據(jù)糧農(nóng)組織估算，全世界每年有大約5?7%的糧食、飼料等農(nóng)產(chǎn)品受到霉菌的侵害，25%的谷物被已知霉菌毒素污染，并造成每年數(shù)千億美元的損失。20世紀(jì)90年代，加拿大飼料行業(yè)由霉菌毒素污染引起損失估計(jì)高于10億美元，而美國(guó)則高達(dá)25億美元，同時(shí)亞太地區(qū)生產(chǎn)的配合飼料受到霉菌毒素污染約為1.6億噸，每年造成全球高達(dá)百億美元的損失。
[0003]霉菌毒素是由一些真菌如曲霉菌、鐮刀菌、青霉菌等在生長(zhǎng)成熟后所產(chǎn)生的二級(jí)代謝產(chǎn)物，這些毒素在谷物的收獲、儲(chǔ)存、加工、運(yùn)輸?shù)榷鄠€(gè)環(huán)節(jié)均可產(chǎn)生。目前已知的霉菌毒素有400余種，主要包括黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素等。這些毒素耐高溫、耐加工過(guò)程中的各種處理，毒力強(qiáng)，對(duì)人和動(dòng)物危害極大。如黃曲霉毒素對(duì)人畜有強(qiáng)烈的致病性和致癌性，是目前毒性最強(qiáng)危害最嚴(yán)重的真菌毒素。玉米赤霉烯酮(ZEA)是一種生殖系統(tǒng)毒素，可引起雌性激素過(guò)多，導(dǎo)致動(dòng)物雌性化中毒，特別是對(duì)豬的作用尤為顯著，會(huì)導(dǎo)致陰部發(fā)生病變，乳腺腫脹，并有卵巢囊腫發(fā)生，還可導(dǎo)致小牛性早熟，奶牛陰道炎，發(fā)情期延長(zhǎng)等。嘔吐毒素與奶牛采食量下降和產(chǎn)奶量下降密切相關(guān)。嘔吐毒素具有免疫抑制作用，在奶牛體內(nèi)表現(xiàn)更明顯。
[0004]霉菌毒素在谷物、及谷物原料制成的飼料等產(chǎn)品中廣泛存在，如玉米、小麥、大米、花生、麥麩、畜禽飼料等。多雨潮濕的環(huán)境極易造成飼料中的霉菌毒素超標(biāo)。霉菌毒素的污染對(duì)畜禽類有嚴(yán)重的危害并導(dǎo)致動(dòng)物產(chǎn)量下降，生長(zhǎng)緩慢，免疫力低下，并導(dǎo)致各種疾病，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的損失。
[0005]目前國(guó)內(nèi)外霉菌毒素脫毒添加劑主要使用硅鋁酸鹽等多孔物理材料對(duì)霉菌毒素的吸附，雖然吸附率較高，但飼料中的營(yíng)養(yǎng)成分比如氨基酸、維生素等均能被吸收，從而降低了食品、飼料等產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
[0006]微生物細(xì)胞壁具有對(duì)霉菌毒素的吸附作用，研究表明酵母葡聚糖能夠有效的吸附霉菌毒素，有類似的作用還包括乳酸菌、芽孢桿菌細(xì)胞壁等。因上述微生物均為有益菌，因此既能保證吸附毒素的效果，又安全無(wú)毒?？蓽p少無(wú)機(jī)的硅鋁酸鹽的用量，降低霉菌毒素脫毒劑對(duì)食品和飼料中的維生素等營(yíng)養(yǎng)成分的吸附。專利號(hào)為201210530368.X的發(fā)明公開(kāi)一種新型霉菌毒素脫毒劑，脫毒劑由10?20份藻類提取物、20?50份酵母細(xì)胞壁、30?50份蒙脫石、25?40份枯草芽孢桿菌組成；該脫毒劑能有效去除畜禽飼料中的霉菌毒素，并提高畜禽的機(jī)體免疫力，但是該脫毒劑的缺點(diǎn)是所述脫毒劑僅僅能通過(guò)吸附作用來(lái)消除飼料中的毒素，其清除效果不徹底。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]本發(fā)明的目的為了克服現(xiàn)有技術(shù)中飼料用霉菌毒素脫毒劑存在的上述缺陷，提供一種飼料用霉菌毒素脫毒劑。本發(fā)明所述脫毒劑能有效去除飼料或谷物原料中的黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素等霉菌毒素，有效提高畜禽飼料的原料利用率，增強(qiáng)動(dòng)物免疫力，預(yù)防疾病，增加畜產(chǎn)品產(chǎn)量。
[0008]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種飼料用霉菌毒素脫毒劑的制備方法。
[0009]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種飼料用霉菌毒素脫毒劑的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn): 一種飼料用霉菌毒素脫毒劑，含有如下重量份數(shù)的各組分:蒙脫石30~80份、膨潤(rùn)土10~30份、芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物I~15份、滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物I~15份、酵母細(xì)胞壁10~45份。
[0011]更優(yōu)選地，所述脫毒劑含有如下重量份數(shù)的各組分:蒙脫石45份、膨潤(rùn)土 15份、芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物5份、滅活乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物10份、酵母細(xì)胞壁多糖25份。
[0012]優(yōu)選地，所述芽孢桿菌選自枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌的一種或一種以上；所述芽孢桿菌是農(nóng)業(yè)部飼料添加劑中允許添加的有益微生物。所述復(fù)合乳酸菌包括保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌和鼠李糖乳桿菌組成。
[0013]本發(fā)明的霉菌毒素脫毒劑原料來(lái)源廣泛，安全衛(wèi)生。含有較多種類的微生物細(xì)胞及多糖成分，如芽孢桿菌細(xì)胞、多種乳酸菌細(xì)胞、酵母細(xì)胞壁多糖。這些成分相互協(xié)調(diào)補(bǔ)充，能有效吸收玉米赤霉烯酮等多種毒素。本發(fā)明的霉菌毒素脫毒劑中含有的芽孢桿菌對(duì)多種霉菌毒素如黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素均有較好的吸附和降解作用，乳酸菌的代謝產(chǎn)物中的小分子物質(zhì)如有機(jī)酸、無(wú)蛋白菌質(zhì)、過(guò)氧化氫、蛋白質(zhì)成分、羥基脂肪酸、酚類化合物等可抑制霉菌的生長(zhǎng)，抑制霉菌毒素的產(chǎn)生以及具備降解霉菌毒素如黃曲霉毒素AFB1的功能。多種芽孢桿菌的發(fā)酵代謝產(chǎn)物中的熱敏成分，以及芽孢桿菌的某些胞內(nèi)酶對(duì)嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮起到降解作用。同時(shí)芽孢桿菌及乳酸菌細(xì)胞也具有一部分的吸附毒素的作用，這些活性成分及細(xì)胞壁共同協(xié)調(diào)，同時(shí)再加上酵母細(xì)胞壁對(duì)玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的吸附，增加了本發(fā)明對(duì)毒素的脫毒效果。因此本發(fā)明不單單是吸附作用，還能降解毒素而從根本上消除毒素，達(dá)到真正降低毒素的目的。
[0014]本發(fā)明所利用吸附和降解的雙重脫毒能力，一方面無(wú)機(jī)和有機(jī)吸附材料對(duì)霉菌毒素的吸附，能降低動(dòng)物毒素的攝入量，另一方面吸附材料中含有芽孢桿菌活性成分，可以降解玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素等，從而達(dá)到徹底降解毒素的目的。本發(fā)明中的蒙脫石、膨潤(rùn)土等對(duì)于黃曲霉毒素有很好的去除效果，能將黃曲霉毒素等降低至較低的水平。
[0015]脫毒劑制備方法如下:按照如上配方，將稱量好的蒙脫石和膨潤(rùn)土用粉碎機(jī)粉碎后過(guò)篩，得到混合物一，然后將酵母細(xì)胞壁與混合物一混合，得到混合物二，將混合物二與芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物、滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物混合，得到混合物三，混合物三經(jīng)干燥、研碎后過(guò)150~200目篩，得到狀產(chǎn)品，即為脫毒劑。
[0016]其中，所述芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括以下步驟:
51.將枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌的一種或一種以上進(jìn)行發(fā)酵培
養(yǎng);
52.發(fā)酵結(jié)束后，向發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1~0.5%的保護(hù)劑；
53.離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1%(W/V)的菌懸液；將枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌的的菌懸液按照0飛：(T3 :(T4 (三者不能同 時(shí)為零）的體積比混合得混合菌懸液；
54.50°C?70°C條件下，將步驟S3得到的上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上清液， 將枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌的濃縮上清液按照0飛：(T2 :(T4 (三者不 能同時(shí)為零）的體積比混合得混合濃縮上清液；
55.將混合菌懸液與混合濃縮上清液按照1:8?16的體積比混合得到芽孢桿菌及其發(fā) 酵濃縮物。
[0017]所述滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括以下步驟：
51.將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌和鼠李糖乳桿菌分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
52.發(fā)酵結(jié)束后，向各自的發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.ro. 5的保護(hù)劑；
53.將各發(fā)酵液滅活后，離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1% (W/V)的菌懸液；然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的菌懸液 按照體積比為廣2 ：T4 ：T3 ：T5的比例混合后得到混合菌懸液；
54.50°C?70°C條件下，將步驟S3得到的各菌的上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上 清液，然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的濃縮上清液按照 體積比為廣2 ：T3 ：T5 ：T5的比例混合后得到混合濃縮上清液；
55.將混合菌懸液與混合濃縮上清液按照1:8?16的體積比混合得到滅活復(fù)合乳酸菌 及其發(fā)酵濃縮物。
[0018]所述保護(hù)劑為海藻酸鈉和甘油的混合物或者脫脂牛奶。
[0019]所述滅活方法可以是冷凍滅活、熱滅活或者化學(xué)滅活。
[0020]如上所述霉菌毒素脫毒劑在飼料脫毒中的應(yīng)用。
[0021]所述脫毒劑在飼料中的添加量為1?5kg/t，同時(shí)飼料用水的添加量為0. 5?5g/ kg。
[0022]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
現(xiàn)有技術(shù)中也有使用芽孢桿菌作為霉菌毒素脫毒劑的有效成分，但是現(xiàn)有技術(shù)中的脫 毒劑含有的芽孢桿菌并未提及是否含有芽孢桿菌的發(fā)酵產(chǎn)物，且所述芽孢桿菌僅僅為一種 枯草芽孢桿菌。芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌的發(fā)酵產(chǎn)物含有降解玉米赤霉烯 酮和嘔吐毒素的活性物質(zhì)，多種芽孢桿菌混合使用，可相互協(xié)調(diào)補(bǔ)充，提高脫毒劑降解毒素 的性能。另外乳酸菌及發(fā)酵產(chǎn)物，乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)物能夠有效降解動(dòng)物體內(nèi)的內(nèi)毒素，對(duì)于提 高豬的免疫能力具有重要作用，同時(shí)乳酸菌細(xì)胞壁也具有良好的吸附毒素的效果，一般來(lái) 說(shuō)，不同菌吸附毒素的種類和吸附強(qiáng)度都不盡相同，利用乳酸菌和芽孢桿菌以及添加的酵 母細(xì)胞壁的互補(bǔ)作用，可以增加吸附霉菌毒素的范圍，提高脫毒劑的應(yīng)用效果。
[0023]本發(fā)明結(jié)合多種有益菌，提高產(chǎn)品對(duì)毒素的吸附效果和作用范圍。本發(fā)明富含多 種吸附和降解毒素的材料，能有效降低多種霉菌毒素如黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒 素等。本發(fā)明含有能降解霉菌毒素的芽孢桿菌活性成分，能夠有效去除霉菌毒素，而不是簡(jiǎn) 單的吸附。本發(fā)明使用多種微生物的細(xì)胞壁，相互補(bǔ)充提高了產(chǎn)品的吸附效率。本發(fā)明含 有較多微生物活性成分，能夠提高動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的吸收。本發(fā)明中用于食品中的霉菌毒素的 基本成分為食品級(jí)，使用的滅活乳酸菌均為有益菌，因此可用于食品添加劑領(lǐng)域。【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0024]圖1.實(shí)施例1所述五種霉菌毒素脫毒劑對(duì)黃曲霉毒素AFB1的去除效果。
[0025]圖2.實(shí)施例2所述五種霉菌毒素脫毒劑對(duì)黃曲霉毒素ZEA的去除效果。
[0026]圖3.實(shí)施例3所述五種霉菌毒素脫毒劑對(duì)黃曲霉毒素DON的去除效果。
【具體實(shí)施方式】
[0027]下面結(jié)合說(shuō)明書(shū)附圖和具體實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明采用的試劑、設(shè)備為本【技術(shù)領(lǐng)域】常規(guī)試劑和設(shè)備。
[0028]實(shí)施例1
所述脫毒劑含有如下重量份數(shù)的各組分:蒙脫石50份，膨潤(rùn)土 20份，滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物10份，芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物10份、酵母細(xì)胞壁多糖20份。
[0029]脫毒劑制備方法:按照如上配方，將稱量好的蒙脫石和膨潤(rùn)土用粉碎機(jī)粉碎后過(guò)篩，得到混合物一，然后將酵母細(xì)胞壁與混合物一混合，得到混合物二，將混合物二與芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物、滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物混合，得到混合物三，混合物三經(jīng)干燥、研碎后過(guò)150?200目篩,得到狀產(chǎn)品，即為脫毒劑。
[0030]其中，所述芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括以下步驟:
51.將納豆芽孢桿菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
52.發(fā)酵結(jié)束后，向發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4%的脫脂奶粉；
53.離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1%(W/V)的菌懸液；
54.70°C條件下，將步驟S3得到的上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上清液，
55.將菌懸液與濃縮上清液按照1:9的體積比混合得到芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物。
[0031]所述滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括以下步驟:
51.將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌和鼠李糖乳桿菌分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
52.發(fā)酵結(jié)束后，向各自的發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4的脫脂奶粉；
53.將各發(fā)酵液熱滅活后，離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1% (W/V)的菌懸液；然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的菌懸液按照體積比為1:3:2:4的比例混合后得到混合菌懸液；
54.65°C條件下，將步驟S3得到的各菌的上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上清液，然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的濃縮上清液按照體積比為1:2:4:4的比例混合后得到混合濃縮上清液；
55.將混合菌懸液與混合濃縮上清液按照1:15的體積比混合得到滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物。
[0032]實(shí)施例2
所述脫毒劑含有如下重量份數(shù)的各組分:蒙脫石70份，膨潤(rùn)土 10份，滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物2份，芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物15份、酵母細(xì)胞壁多糖10份。
[0033]脫毒劑制備方法:同實(shí)施例1。
[0034]其中，所述芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括以下步驟:
51.將枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
52.發(fā)酵結(jié)束后，向各發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.3%的脫脂奶粉； 53.離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1%(W/V)的菌懸液；將枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的菌懸液按照體積比為4:2:3的比例混合后得到混合菌懸液；
54.70°C條件下，將步驟S3得到的上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上清液，將?？莶菅挎邨U菌、納豆芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的濃縮上清液按照體積比為4:1:3的比例混合后得到混合濃縮上清液；
55.將菌懸液與濃縮上清液按照1:9的體積比混合得到芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物。
[0035]所述滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括以下步驟:
51.將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌和鼠李糖乳桿菌分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
52.發(fā)酵結(jié)束后，向各自的發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的脫脂奶粉；
53.將各發(fā)酵液冷凍滅活后，離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1% (W/V)的菌懸液；然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的菌懸液按照體積比為1:3:2:4的比例混合后得到混合菌懸液；
54.60°C條件下，將步驟S3得到的各菌的上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上清液，然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的濃縮上清液按照體積比為1:2:4:4的比例混合后得到混合濃縮上清液；
55.將混合菌懸液與混合濃縮上清液按照1:15的體積比混合得到滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物。
[0036]實(shí)施例3
所述脫毒劑含有如下重量份數(shù)的各組分:蒙脫石45份，膨潤(rùn)土 15份，滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物10份，芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物5份，酵母細(xì)胞壁多糖25份。
[0037]脫毒劑制備方法:同實(shí)施例1。
[0038]其中，所述芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括以下步驟:
51.將枯草芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
52.發(fā)酵結(jié)束后，向各發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.3%的海藻酸鈉和甘油的混合物；
53.離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1%(W/V)的菌懸液；將枯草芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌的菌懸液按照體積比為3:1的比例混合后得到混合菌懸液；
54.55°C條件下，將步驟S3得到的上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上清液，將枯草芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌的濃縮上清液按照體積比為4:1的比例混合后得到混合濃縮上清液；
55.將菌懸液與濃縮上清液按照1:9的體積比混合得到芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物。
[0039]所述滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括以下步驟:
51.將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌和鼠李糖乳桿菌分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
52.發(fā)酵結(jié)束后，向各自的發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.3%的海藻酸鈉和甘油的混合
物；
53.將各發(fā)酵液化學(xué)滅活后，離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1% (W/V)的菌懸液；然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的菌懸液按照體積比為1:3:2:4的比例混合后得到混合菌懸液；
54.70°C條件下，將步驟S3得到的各菌的上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上清液，然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的濃縮上清液按照體積比為1:2:4:4的比例混合后得到混合濃縮上清液；
S5.將混合菌懸液與混合濃縮上清液按照1:15的體積比混合得到滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物。
[0040]實(shí)施例4
所述脫毒劑含有如下重量份數(shù)的各組分:蒙脫石30份，膨潤(rùn)土 30份，滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物15份，芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物2份、酵母細(xì)胞壁多糖15份。
[0041]脫毒劑制備方法:同實(shí)施例1。
[0042]其中，所述芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括以下步驟:
51.將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
52.發(fā)酵結(jié)束后，向各發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的海藻酸鈉和甘油的混合物；
53.離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1%(W/V)的菌懸液；將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的菌懸液按照體積比為3:2的比例混合后得到混合菌懸液；
54.60°C條件下，將步驟S3得到的上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上清液，將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的濃縮上清液按照體積比為4:3的比例混合后得到混合濃縮上清液；
55.將菌懸液與濃縮上清液按照1:9的體積比混合得到芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物。
[0043]所述滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括以下步驟:
51.將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌和鼠李糖乳桿菌分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
52.發(fā)酵結(jié)束后，向各自的發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的脫脂牛奶；
53.將各發(fā)酵液熱滅活后，離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1% (W/V)的菌懸液；然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的菌懸液按照體積比為1:3:2:4的比例混合后得到混合菌懸液；
54.60°C條件下，將步驟S3得到的各菌的上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上清液，然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的濃縮上清液按照體積比為1:2:4:4的比例混合后得到混合濃縮上清液；
55.將混合菌懸液與混合濃縮上清液按照1:15的體積比混合得到滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物。
[0044]實(shí)施例5
所述脫毒劑含有如下重量份數(shù)的各組分:蒙脫石50份，膨潤(rùn)土 15份，滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物5份，芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物8份、酵母細(xì)胞壁多糖30份。
[0045]脫毒劑制備方法:同實(shí)施例1。
[0046]其中，所述芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括以下步驟:
51.將地衣芽孢桿菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
52.發(fā)酵結(jié)束后，向各發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的脫脂牛奶；
53.離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1%(W/V)的菌懸液；
54.50°C條件下，將步驟S3得到的上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上清液；
55.將菌懸液與濃縮上清液按照1:9的體積比混合得到芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物。
[0047]所述滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括以下步驟:51.將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌和鼠李糖乳桿菌分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
52.發(fā)酵結(jié)束后，向各自的發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的脫脂牛奶；
53.將各發(fā)酵液熱滅活后，離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1% (W/V)的菌懸液；然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的菌懸液按照體積比為1:3:2:4的比例混合后得到混合菌懸液；
54.55°C條件下，將步驟S3得到的各菌的上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上清液，然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的濃縮上清液按照體積比為1:2:4:4的比例混合后得到混合濃縮上清液；
55.將混合菌懸液與混合濃縮上清液按照1:15的體積比混合得到滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物。
[0048]試驗(yàn)例I
取實(shí)施例1~5中所述的霉菌毒素脫毒劑0.005g加入到0.5g飼料(加入有AFB1 50ng)中，將上述飼料與脫毒劑混合均勻后，加入IOmL的蒸餾水，至于30°C，200r/min的條件下震蕩Ih后，3000r/min的高速離心機(jī)離心，取上清液測(cè)定黃曲霉毒素的含量。
[0049]試驗(yàn)例2
取實(shí)施例1~5中所述的霉菌毒素脫毒劑0.005g加入到0.5g飼料(加入有玉米赤霉烯酮30ng)中，將上述飼料與脫毒劑混合均勻后,加入IOmL的蒸懼水,至于30°C, 200r/min的條件下震蕩Ih后，3000r/min的高速離心機(jī)離心,取上清液測(cè)定玉米赤霉烯酮的含量。
[0050]試驗(yàn)例3
取實(shí)施例1~5中所述的霉菌毒素脫毒劑0.005g加入到0.5g飼料(加入有嘔吐毒素IOOng)中，將上述飼料與脫毒劑混合均勻后，加入IOmL的蒸餾水，至于30°C，200r/min的條件下震蕩Ih后，3000r/min的高速離心機(jī)離心，取上清液測(cè)定嘔吐毒素的含量。
[0051]試驗(yàn)例I~3的結(jié)果如圖1~3所示。實(shí)施例1、2、3、4、5中制備的脫毒劑分別為脫毒劑1、2、3、4、5。由圖1~3結(jié)果可以看到霉菌毒素脫毒劑5對(duì)AFB1均具有脫毒效果，其中對(duì)AFBi的脫毒效果最高達(dá)到96%以上，其中對(duì)ZEA和DON的脫毒效率率也均達(dá)到60%以上。其中圖1與圖2中所示，脫毒劑3對(duì)AFBl和DON的毒素的吸附脫毒效率均為各組最高，從圖2可知，脫毒劑3對(duì)于毒素ZEA的去除效率也高達(dá)64.3%，位于各組較高水平。因此本發(fā)明的各組脫毒劑對(duì)霉菌毒素尤其是黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素具有較好的脫毒效果，其中總體來(lái)說(shuō)脫毒劑3去毒效果最好。`
[0052]試驗(yàn)例4
選取35±1日齡的30頭健康小豬，平均體重為10.4±1.3 kg，將他們隨機(jī)分成兩組。一組為試驗(yàn)組，一組為對(duì)照組。試驗(yàn)組為:在豬飼料中加入2%。的實(shí)施例1所述的霉菌毒素脫毒劑，加入的比例為2 kg/t。每天測(cè)定小豬體重。觀察小豬的健康狀況并做出記錄，連續(xù)監(jiān)測(cè)20天。對(duì)照組為:該組飼喂基礎(chǔ)日糧不添加脫毒劑。同樣每天測(cè)定小豬體重。觀察小豬的健康狀況并做出記錄，連續(xù)監(jiān)測(cè)20天。結(jié)果見(jiàn)表1.表1霉菌毒素對(duì)小豬生長(zhǎng)性能和致病率等影響
【權(quán)利要求】
1.一種飼料用霉菌毒素脫毒劑，其特征在于，含有如下重量份數(shù)的各組分:蒙脫石30~80份、膨潤(rùn)土 10~30份、芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物I~15份、滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物I~15份、酵母細(xì)胞壁10~45份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述霉菌毒素脫毒劑，其特征在于，所述脫毒劑含有如下重量份數(shù)的各組分:蒙脫石45份、膨潤(rùn)土 15份、芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物5份、滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物10份、酵母細(xì)胞壁多糖25份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述霉菌毒素脫毒劑，其特征在于，所述芽孢桿菌選自枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌的一種或一種以上；所述復(fù)合乳酸菌包括保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌和鼠李糖乳桿菌。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述霉菌毒素脫毒劑，其特征在于，所述芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括如下步驟: S1.將枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌的一種或一種以上進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng); S2.發(fā)酵結(jié)束后，向發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1-0.5%的保護(hù)劑； S3.離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1%(W/V)的菌懸液；將枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌的的菌懸液按照0-5:0-3:0-4的體積比混合得混合菌懸液，三者的體積比不能同時(shí)為零； S4.上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上清液，將枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌的濃縮上清液按照0-5:0-2:0-4的體積比混合得混合濃縮上清液，三者的體積比不能同時(shí)為零； S5.將混合菌懸液與混合濃縮上清液按照1:8~16的體積比混合得到芽孢桿菌及其發(fā)酵濃縮物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述霉菌毒素脫毒劑，其特征在于，所述滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物的制備方法包括如下步驟: S1.將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌和鼠李糖乳桿菌分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)； S2.發(fā)酵結(jié)束后，向各自的發(fā)酵液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1-0.5的保護(hù)劑； S3.將各發(fā)酵液滅活后，離心收集菌體，同時(shí)得到上清液，用生理鹽水將菌體稀釋成1%(W/V)的菌懸液；然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的菌懸液按照體積比為廣2:1-4:1-3:1-5的比例混合后得到混合菌懸液； S4.將步驟S3得到的各菌的上清液濃縮至原體積的1/10，得濃縮上清液，然后將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的濃縮上清液按照體積比為廣2:1-3:1-5:1-5的比例混合后得到混合濃縮上清液； S5.將混合菌懸液與混合濃縮上清液按照1:8~16的體積比混合得到滅活復(fù)合乳酸菌及其發(fā)酵濃縮物。
6.權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述霉菌毒素脫毒劑在飼料脫毒中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述應(yīng)用，其特征在于，所述脫毒劑在飼料中的添加量為I~5kg/t，同時(shí)飼料用水的添加量為0.5~5g/kg。
【文檔編號(hào)】A23L1/015GK103859165SQ201410080031
【公開(kāi)日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2014年3月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月6日
【發(fā)明者】胡文鋒, 胡學(xué)生, 龐旭, 潘海朋, 楊淑儀, 王丹鳳, 何婷先, 胡學(xué)鋒, 胡學(xué)華 申請(qǐng)人:蘇州萬(wàn)生源生物科技有限公司