一種提高谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶熱穩(wěn)定性的短肽及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶熱穩(wěn)定性的短肽,其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示;本發(fā)明還公開了一種熱穩(wěn)定性提高的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶,其特征在于C端含有上述短肽,氨基酸如SEQ?ID?NO.2所示。應用上述短肽能顯著提高谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的熱穩(wěn)定性,其50℃的半衰期由3.7min延長至9.1min,提高1.5倍;TG-tag1熔解溫度為76.4oC,與野生酶相比提高7.5℃。
【專利說明】一種提高谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶熱穩(wěn)定性的短肽及其應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種短肽及其應用,特別是一種提高谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶熱穩(wěn)定性的短肽及其應用。
【背景技術】
[0002]微生物谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶(蛋白質(zhì)-谷氨酸-谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶,MicrobialTransglutaminase, EC2.3.2.13簡稱MTG)能夠催化蛋白質(zhì)肽鏈中谷氨酰胺殘基的Y-羧酰胺基與賴氨酸ε-?;蚱渌;磻?,形成ε_( Y-谷氨?;?賴氨酸共價鍵。特殊的催化能力使TGase廣泛應用于食品工程、紡織與皮革加工、材料工程、生物醫(yī)藥等領域。但由于MTG異源表達分泌量低等缺陷,限制了 MTG的應用范圍。
[0003]在前期研究中,本研究室篩選出一株新的產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的菌株(Streptomyces hygroscopicus CCTCC M203062),通過基因克隆方法,得到了MTG基因序列及其上下游序列,含MTG自身的啟動子和終止子(Genebank:EU477523),并實現(xiàn)了 MTG和其酶原區(qū)在大腸桿菌中的高效表達(Liu S,Zhang D, Wang M, Cui W,Chen K, Liu Y, Du G, ChenJ,Zhou Z (2011)The pro-region of Streptomyces hygroscopicus transglutaminaseaffects its secretion by Escherichia col1.FEMS Microbiol Lett324(2):98-105)。
[0004]谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶具有重要的工業(yè)應用價值,但其熱穩(wěn)定性始終是一個不可逾越的障礙,為提高TGase酶的穩(wěn)定性,本發(fā)明選取該穩(wěn)定短肽融合至TGase酶C端,以期得到熱穩(wěn)定性提高的突變酶。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明所要解決的問題是提供一種提高的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶熱穩(wěn)定性的短肽,其氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。
[0006]SEQ ID N0.1:短肽氨基酸序列為:IGCIILT。
[0007]本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種熱穩(wěn)定性提高的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶,其C端含有上述短肽序列,氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。
[0008]SEQ ID N0.2:谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶C端加短肽序列為
【權(quán)利要求】
1.一種提高谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶熱穩(wěn)定性的短肽,其氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。
2.一種熱穩(wěn)定性提高的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶,其特征在于C端含有權(quán)利要求1所述的短肽,氨基酸如SEQ ID N0.2所示。
3.一種應用權(quán)利要求1所述短肽提高谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶熱穩(wěn)定性的方法,其特征在于在谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶C端插入權(quán)利要求1所述短肽序列。
4.權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于所述短肽通過PCR方法或化學全合成的方法插入谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶 C端。
【文檔編號】C12N9/10GK103554223SQ201310316129
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月25日
【發(fā)明者】陳堅, 王廣圣, 陳康康, 劉松, 堵國成 申請人:江南大學