專利名稱：一種尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)試劑盒，尤其是涉及一種尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
伊立替康是DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，可誘導(dǎo)單鏈DNA損傷，引起DNA雙鏈的斷裂，造成細(xì)胞死亡。伊立替康主要用于治療成人晚期/轉(zhuǎn)移性大腸癌患者的治療，對(duì)小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌、宮頸癌和卵巢癌亦有療效。伊立替康最主要的毒副作用為嗜中性粒細(xì)胞減少癥及遲發(fā)性腹瀉，后者為劑量限制性毒副反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)可致命。臨床研究表明，40%以上接受伊立替康治療的患者可出現(xiàn)3 4級(jí)遲發(fā)性腹瀉，約10%患者可出現(xiàn)嗜中性粒細(xì)胞減 少，從而導(dǎo)致化療方案中止。伊立替康為前體藥物，在體內(nèi)經(jīng)過(guò)羧酸酯酶轉(zhuǎn)化為活性代謝物SN-38，SN-38經(jīng)肝臟尿苷二憐酸葡萄糖醒酸轉(zhuǎn)移酶(UDPglucuronosyltransferade lfamily, polypeptideALUGT1A1)滅活，從而保護(hù)健康細(xì)胞免受伊立替康毒性的影響。與野生型UGTlAl (6/6)相t匕，突變型雜合子UGTlAl (6/7)滅活SN-38的能力稍低，而突變純合子UGTlAl (7/7)滅活SN-38的能力則僅是野生型的35%，因此更容易產(chǎn)生毒副作用。野生型在接受伊立替康治療時(shí)產(chǎn)生毒副作用風(fēng)險(xiǎn)較低，而雜合子產(chǎn)生毒副作用的幾率為12.5%，突變型純合子則有50%產(chǎn)生毒副作用的可能性。目前臨床檢測(cè)UGTlAl基因多態(tài)性的檢測(cè)試劑原料需多方配備，實(shí)驗(yàn)過(guò)程分步進(jìn)行，耗時(shí)較長(zhǎng)，容易污染，準(zhǔn)確性不高，所以探索一種檢測(cè)UGTlAl基因多態(tài)性及測(cè)序快速可靠的方法已經(jīng)成為臨床實(shí)驗(yàn)研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。

實(shí)用新型內(nèi)容為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本實(shí)用新型提供一種尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒，包括盒體I、盒蓋2、固定座3、引物試劑瓶4、酶混合物試劑瓶5、去離子水試劑瓶6、固定座3上設(shè)置有PCR管7、加樣器吸頭8。進(jìn)一步地，一種尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒，所述固定座3還設(shè)置有孔9和隔板10。孔9設(shè)置用來(lái)分別將PCR管7、加樣器吸頭8固定，以防止遺撒?？?的形狀依據(jù)不同PCR管7、加樣器吸頭8的形狀和大小而設(shè)置。隔板10用來(lái)將引物試劑瓶4、酶混合物試劑瓶5、去離子水試劑瓶6隔開(kāi)并固定。所述引物的上游引物序列為5' -GATTTGAGTATGAAATTCCAGCCAG-3'，下游引物序列為 5' -CCAGTGGCTGCCATCCACT-3';引物濃度為 5umol/L。所述酶混合物包括濃度為O. 4mmol/L 的 dNTPs, 4mmol/L 的 Mg2+, 2xBuffer,I. 25U/25 μ I 的 HsTaq0本實(shí)用新型與現(xiàn)有產(chǎn)品相比，具有如下積極有益的效果本試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理、使用方便、制造容易、檢測(cè)過(guò)程不易受污染；本試劑盒在檢測(cè)一種尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測(cè)時(shí)具有準(zhǔn)確性高、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)。

圖I為本實(shí)用新型的整體結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明。如圖I所示，本實(shí)用新型的一個(gè)實(shí)施例為一種尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒，包括盒體I、盒蓋2、固定座3、引物試劑瓶4、酶混合物試劑瓶5、去離子水試劑瓶6、固定座3上設(shè)置有PCR管7、加樣器吸頭8。固定座3還設(shè)置有孔9和隔板10?？?設(shè)置用來(lái)分別將PCR管7、加樣器吸頭8固定，以防止遺撒?？?的形狀依據(jù)不同PCR 管7、加樣器吸頭8的形狀和大小而設(shè)置。隔板10用來(lái)將引物試劑瓶4、酶混合物試劑瓶5、去尚子水試劑瓶6隔開(kāi)并固定。所述引物的上游引物序列為V -GATTTGAGTATGAAATTCCAGCCAG-3 '，下游引物序列為Y -CCAGTGGCTGCCATCCACT-3';引物濃度為5umol/L。所述酶混合物包括濃度為O. 4mmol/L 的 dNTPs，4mmol/L 的 Mg2+，2xBuffer, I. 25U/25 μ I 的 HsTaq。操作方法I)取模板 DNA取病人全血lml，常規(guī)提取DNA，取Iul DNA作為模板。2)反應(yīng)體系將各反應(yīng)物質(zhì)按照如下反應(yīng)體系進(jìn)行配比
模板DNAI ul上下游引物各I ul
酶混合物12.5 Ul
去離子水 10. 5 ul 總體積25 ul3)反應(yīng)將反應(yīng)體系中各物質(zhì)在中混合，按照如下程序反應(yīng)95°C 5min, I 個(gè)循環(huán)，950C 30sec —62°C 40sec — 72°C 40sec，35 個(gè)循環(huán)，72 °C 7min，l 個(gè)循環(huán)。4°C 保溫。2%瓊脂糖電泳，EB染色分析，目的帶為330bp。4) PCR產(chǎn)物純化使用PCR產(chǎn)物純化試劑盒進(jìn)行PCR產(chǎn)物純化。5) PCR產(chǎn)物測(cè)序反應(yīng)[0032]使用ABI公司試劑進(jìn)行測(cè)序反應(yīng)。6)測(cè)序產(chǎn)物純化每管加入2ul 3M的NaAC至PCR管底；每管加入50ul 100%酒精，震蕩混勻，室溫避光放置15min ；12，OOOXg 4°C離心30min，用移液槍吸盡上清；每管加入70ul 70%酒精，12，OOOXg 4°C離心15min，用移液槍吸盡上清；室溫?fù)]發(fā)凈酒精，加入10 μ L Hi-DiFormamide溶解DNA ；溶解后的樣品需要在95°C變性4min，迅速置冰中冷卻4min后，上樣電泳。7)結(jié)果判斷使用ABI3500自帶軟件進(jìn)行分析。綜上所述，本實(shí)用新型所述的實(shí)施方式僅提供一種最佳的實(shí)施方式，本實(shí)用新型的技術(shù)內(nèi)容及技術(shù)特點(diǎn)已揭示如上，然而熟悉本項(xiàng)技術(shù)的人士仍可能基于本實(shí)用新型所揭示的內(nèi)容而作各種不背離本發(fā)明創(chuàng)作精神的替換及修飾；因此，本實(shí)用新型的保護(hù)范圍不限于實(shí)施例所揭示的技術(shù)內(nèi)容，故凡依本實(shí)用新型的形狀、構(gòu)造及原理所做的等效變化，均涵蓋在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求1.一種尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括盒體(I)、盒蓋(2)、固定座(3)、引物試劑瓶(4)、酶混合物試劑瓶(5)、去離子水試劑瓶(6)、固定座(3)上設(shè)置有PCR管(7)、加樣器吸頭(8)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)組I基因表達(dá)檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述固定座(3)還設(shè)置有孔(9)和隔板(10)。
專利摘要本實(shí)用新型公開(kāi)一種尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒，包括盒體1、盒蓋2、固定座3、引物試劑瓶4、酶混合物試劑瓶5、去離子水試劑瓶6、固定座3上設(shè)置有PCR管9、測(cè)序管10、加樣器吸頭11、孔12、擋板13。本試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理、使用方便、制造容易、檢測(cè)過(guò)程不易受污染；本試劑盒在檢測(cè)尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性檢測(cè)時(shí)具有敏感性高、特異性強(qiáng)、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK202519265SQ2012201646
公開(kāi)日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2012年4月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月17日
發(fā)明者井昶雯, 馮繼鋒, 吳建中, 唐金海, 路平 申請(qǐng)人:井昶雯, 馮繼鋒, 吳建中, 唐金海, 路平