專利名稱：具有il33n端結(jié)構(gòu)域缺失的鼠炎癥模型的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在IL-33基因的N端結(jié)構(gòu)域中具有缺陷的非人動物。本文還提供所述非人動物作為炎性疾病的體內(nèi)模型的用途，尤其是用在篩選抗炎化合物的方法中，和用于評估和優(yōu)化給定的抗炎化合物的藥理性質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
白細(xì)胞介素33 (IL-33)細(xì)胞因子是白細(xì)胞介素I (IL-1)家族的最新成員。由于其細(xì)胞核定位，它最初被描述為“來自毛細(xì)血管后微靜脈的核因子”。IL-33主要由成纖維細(xì)胞和上皮、內(nèi)皮和氣道平滑肌細(xì)胞表達(dá)。IL-33是IL-1受體相關(guān)蛋白質(zhì)ST2的配體。ST2受體在幾乎所有先天性免疫細(xì)胞(肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、自然殺傷(NK)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)中以及在NK T和T輔助(Th) 2細(xì)胞中表達(dá)。IL-33與靶細(xì)胞上的ST2的相互作用可以觸發(fā)促炎Thl、 Th2和Thl7細(xì)胞因子的表達(dá)和分泌、以及參與ThU Th2和先天性免疫效應(yīng)子功能的趨化因子的表達(dá)(公開的論文和Hicks等人正在準(zhǔn)備的手稿)。IL-33通過其促炎細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域與其特異性表面受體結(jié)合。此外，IL-33還具有N端結(jié)構(gòu)域，其含有典型的DNA結(jié)合性螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋基序。以其細(xì)胞核未切割形式，IL-33與異染色質(zhì)中的組蛋白2A和2B相互作用，促進(jìn)染色質(zhì)壓縮且充當(dāng)潛在的轉(zhuǎn)錄阻遏物。有證據(jù)強(qiáng)烈地支持IL-33類似于其他染色質(zhì)相關(guān)細(xì)胞因子(IL-1 a和HMGB1)，所述細(xì)胞因子看起來發(fā)揮雙重功能，即，在核中調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄阻遏、和經(jīng)由經(jīng)典受體發(fā)信號以用作有力的促炎細(xì)胞因子。因此，已提出，類似于HMGB1，IL-33可以充當(dāng)‘警報素(alarmin)’——屬于更大的損傷相關(guān)分子模式(DAMP)分子家族。

發(fā)明內(nèi)容
IL-33/ST2軸在人炎性疾病的病理生理學(xué)中起關(guān)鍵作用，這由其在患病組織中的高水平表達(dá)所證實。升高水平的IL-33和/或其可溶性受體ST2在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、炎性腸病(IBD)、牛皮癬和潰瘍性結(jié)腸炎、急性嗜酸性粒細(xì)胞肺炎、嚴(yán)重哮喘、特發(fā)性肺纖維化、肝纖維化疾病、特應(yīng)性皮炎、系統(tǒng)性硬化病、自身免疫和創(chuàng)傷患者中觀察到。類似于其在人中的作用，IL-33/ST2軸已顯示在鼠炎癥模型中是關(guān)鍵的。IL-33惡化膠原誘發(fā)性關(guān)節(jié)炎(CIA)、變應(yīng)性結(jié)膜炎和實驗性自身免疫性腦膜炎(EAE)。用抗體中斷IL-33/ST2信號傳導(dǎo)已顯示對于變應(yīng)性氣道炎癥和博來霉素誘發(fā)的肺損傷的消減是有利的。近來還已顯示IL-33在慢性腸炎癥的IBD小鼠模型中是上調(diào)的(Oboki等人，PNAS2010107 (43)18581-18586)。該非人動物可以是任何非人動物。優(yōu)選地，非人動物是哺乳動物，更優(yōu)選地嚙齒類動物例如大鼠或小鼠，最優(yōu)選地非人動物是小鼠。在優(yōu)選實施方案中，所述非人動物是小鼠，并且IL-33基因的N端缺失包括在IL-33基因的N端的整個DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的缺失。優(yōu)選地，在該小鼠中所述IL-33基因N端缺失包括IL-33基因的表達(dá)產(chǎn)物的氨基酸1-67的缺失。就該N端IL-33缺失而言，該非人動物可以是雜合或純合的。優(yōu)選地，非人動物就N端IL-33缺失而目是雜合的。根據(jù)本發(fā)明在IL-33基因的N端具有缺陷的非人動物展示出炎性疾病的典型特征。例如，根據(jù)本發(fā)明的小鼠具有特征，如直至約3-4月齡前的正常出生率和生長，隨后在耳中的出血性損害和在胸腔中重復(fù)觀察到的大凝塊、較小的尺寸、和一般疾病狀況。在病理學(xué)檢查時，這些小鼠顯示出多器官炎癥，包括慢性、多病灶心肌炎；伴有腸壁擴(kuò)張的慢性、化膿性、強(qiáng)回腸炎；慢性輸尿管炎(utreteritis)伴顯著腎積水和腎萎縮、肺中的中等多病灶和血管周浸潤，脾增生以及免疫器官、肺和小腸中的嗜酸性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的強(qiáng)擴(kuò)張。因為根據(jù)本發(fā)明的非人動物顯示出炎癥表型，所以它作為體內(nèi)炎癥模型是有用的。具有N端IL-33缺失的非人動物可以用于在實踐上證明IL-33功能障礙和炎性病癥之間的因果關(guān)系、以及允許設(shè)計定向治療策略以旨在減少或消除患者中IL-33的異常過生產(chǎn)。因為IL-33的大量產(chǎn)生和分泌到細(xì)胞外區(qū)室內(nèi)是這種嚴(yán)重炎性狀況的原因，故這種新型和獨特的非人動物模型也可以用于評估IL-33藥物候選物的體內(nèi)功效和效力(如果確定與非人IL-33或其受體ST2的交叉反應(yīng)性)。因此，在本發(fā)明的第二個目的中，所述非人測試動物用作炎性疾病的體內(nèi)模型，尤其是就篩選抗炎化合物而言。在一個實施方案中，提供了用于篩選抗炎化合物的方法，其包括:給根據(jù)本發(fā)明的具有N端IL-33缺失的非人動物施用候選化合物。在一個實施方案中，所述方法包括a)提供具有N端IL-33缺失的非人動物，b)給所述非人動物施用候選化合物，c)比較所述非人動物的炎癥癥狀與未施用所述化合物的具有N端IL-33缺失的非人動物的炎癥癥狀；其中減輕所述炎癥癥狀的化合物被選擇作為抗炎化合物。候選化合物包括但不限于小分子、(多)肽、(糖)蛋白、抗體或抗體片段、(多)或(寡)核苷酸、核苷、脂質(zhì)、其組合、及其修飾的衍生物。待篩選的候選化合物的施用方法包括但不限于經(jīng)口施用和腸胃外施用(例如靜脈內(nèi)施用、腹膜內(nèi)施用和鼻內(nèi)施用)。在經(jīng)口施用的情況下，候選活性劑可以摻和在飼料中用于施用。`候選活性劑可以與醫(yī)學(xué)可接受的常規(guī)賦形劑(例如載體和稀釋劑)或添加劑組合施用。進(jìn)一步地，候選活性劑可以包封在、或結(jié)合(附著)于、脂質(zhì)體(例如帶正電荷的脂質(zhì)體)或納米粒中或上，以施用?？梢岳纾ㄟ^肉眼觀察、測量體重、組織病理學(xué)觀察(例如在組織染色后的顯微鏡觀察)和FACS分析(參見下文實施例)，使用炎癥癥狀的緩解或康復(fù)、體重的增加、自回腸(ileon)肥大的恢復(fù)等作為指標(biāo)，進(jìn)行評估。 通過使用具有N端IL-33缺失的主題動物或源自其的細(xì)胞，可以鑒定與細(xì)胞IL-33結(jié)合、調(diào)節(jié)細(xì)胞IL-33、拮抗細(xì)胞IL-33或激動(agonize)細(xì)胞IL-33的配體或底物。特別有意義的是有關(guān)對人細(xì)胞具有低毒性的抗炎化合物的篩選試驗。廣泛多樣的測定試驗可以用于這個目的，包括體內(nèi)研究、施用后藥物定位的確定、標(biāo)記的體外蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合測定試驗、蛋白質(zhì)-DNA結(jié)合測定試驗、電泳遷移率變動分析試驗、用于蛋白質(zhì)結(jié)合的免疫測定試驗等。取決于具體的測定試驗，可以使用全動物或源自其的細(xì)胞。細(xì)胞可以是從動物中新鮮分離的，或可以是在培養(yǎng)中的永生化細(xì)胞。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述體內(nèi)模型用于評估藥理學(xué)效應(yīng)，例如IL-33藥物候選物的體內(nèi)功效和效力。因此，在本發(fā)明的另一個實施方案中，提供了用于評估IL-33藥物候選物的藥理學(xué)效應(yīng)的方法，所述方法包括:給根據(jù)本發(fā)明的具有N端IL-33缺失的非人動物施用所述IL-33藥物候選物。本發(fā)明還涉及本發(fā)明提供的具有N端IL-33缺失的非人動物的后代，其可以通過與相同或其它基因型繁育而獲得。優(yōu)選地，后代通過與相同基因型繁育而獲得。所述后代包含與上文描述的具有N端IL-33缺失的非人動物一樣的N端IL-33缺失。本發(fā)明的再一目的是所述后代作為炎性疾病的體內(nèi)模型的用途。在一個實施方案中，所述后代用作體內(nèi)模型用于篩選抗炎化合物。在另一個實施方案中，所述后代用作體內(nèi)模型用于評估抗炎化合物的藥理學(xué)效應(yīng)。此外，本發(fā)明涉及源自如上所述的具有N端IL-33缺失的非人動物或其后代的細(xì)胞系或原代細(xì)胞培養(yǎng)物。另外，本發(fā)明還提供了源自如上所述的具有N端IL-33缺失的非人動物或其后代的組織或器官外植塊或其培養(yǎng)物。本發(fā)明還提供了源自如上所述的具有N端IL-33缺失的非人動物或其后代的組織或細(xì)胞提取物。在本發(fā)明的另一個實施方案中，上文提及的源自具有N端IL-33缺失的非人動物或其后代的細(xì)胞系或原代細(xì)胞培養(yǎng)物、組織或器官外植塊或其培養(yǎng)物、組織或細(xì)胞提取物被用作炎性疾病的模型。在一個實施方案中，所述炎性疾病模型被用于篩選抗炎化合物，在另一個實施方案中，所述炎性疾病模型被用于評估抗炎化合物的藥理學(xué)效應(yīng)，如上文概述的。用于產(chǎn)生在基因例如IL-33基因的N端中具有缺失的非人動物的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。合適的方法例如在Hogan B等人中描述:Manipulating the mouse embryo, Alaboratory manual,第 2 版(1994), Cold Spring Harbor Laboratory Press。如本文使用的術(shù)語“IL-33基因”特別涉及白細(xì)胞介素33基因，也稱為DVS27 ；NF-HEV ；NFEHEV ；C9orf26 ；DKFZp586H0523 ；RP11-575C20.2 ;IL33、IL-1FlU9230117N10Rik、RGD1311155等。所述基因包含具有推定的DNA結(jié)合性螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋基序的N端結(jié)構(gòu)域和C端細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域。IL33基因在人、黑猩猩、犬、母牛、小鼠和大鼠中是保守的。作為例子，小鼠IL-33基因的DNA序列在SEQ ID.1中描述。術(shù)語“IL-33基因的表達(dá)產(chǎn)物”指IL-33基因的翻譯蛋白質(zhì)，即IL-33蛋白質(zhì)。如本文使用的，“N端IL-33缺失”意指IL-33基因的N端的全部或部分被修飾(例如取代、缺失、添加和/或插入)或破壞，由此IL-33基因的表達(dá)產(chǎn)物缺少該N端結(jié)構(gòu)域的全部或部分和/或不表現(xiàn)N端結(jié)構(gòu)域的功能。如本文使用的N端結(jié)構(gòu)域包含負(fù)責(zé)IL-33的DNA結(jié)合和核定位的推定螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋基序。在優(yōu)選實施方案中，非人動物是小鼠，并且該小鼠IL-33基因的表達(dá)產(chǎn)物(IL-33蛋白質(zhì))的氨基酸1-67被修飾或破壞。此非人動物在本文中描述為具有N端IL-33缺失的非人動物、或在IL-33基因的N端具有缺陷的非人動物、或N端IL-33基因敲除的非人動物等。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述IL-33基因的N端修飾通過DsRed盒的敲入來達(dá)到，從而造成IL-33基因的N端部分缺失。所述非人動物相應(yīng)地也稱為DsRed-1L-33/COOH非人動物。如本文使用的術(shù)語“野生型”指具有全長IL-33基因的非人動物。如本文描述的“ 非人動物”指不是人的任何動物。優(yōu)選地，非人動物是哺乳動物，更優(yōu)選地嚙齒類動物例如大鼠或小鼠，最優(yōu)選地非人動物是小鼠。如上所述具有N端IL-33缺失的非人動物可以用作炎性疾病治療的模型。它允許研究潛在的非炎性化合物在非人體內(nèi)模型中對炎性疾病的作用。因為轉(zhuǎn)基因動物對于轉(zhuǎn)基因人mAbll抗體是免疫耐受的，所以可以測定用治療性抗體例如Mabll進(jìn)行的長期治療的效果。此外，可以跟蹤對細(xì)胞外IL-33水平以及炎性疾病的進(jìn)程和動力學(xué)的影響。如本文使用的術(shù)語“炎性疾病”涉及特征在于炎癥的任何健康損害或異常功能狀況。特別地，如本文使用的術(shù)語“炎性疾病”涉及與IL-33的水平增加相關(guān)的疾病，例如但不限于炎性腸病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、蕁麻疹(urticuria)、動脈粥樣硬化血管疾病、牛皮癬結(jié)腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、急性嗜酸性粒細(xì)胞性肺炎、嚴(yán)重哮喘、特發(fā)性肺纖維化、肝纖維化疾病、特應(yīng)性皮炎、系統(tǒng)性硬化病、自身免疫疾病等。如本文使用的“抗炎化合物”意指具有減少炎癥反應(yīng)，詳細(xì)地，影響IL-33的生物作用的能力的任何分子。由此，“抗炎化合物”包括但不限于小分子、(多)肽、(糖)蛋白、抗體或抗體片段、(多)或(寡)核苷酸、核苷、脂質(zhì)、其組合及其修飾的衍生物。“抗炎化合物”還包括介導(dǎo)RNA干擾的分子，例如shRNA、微小RNA、siRNA、反義寡核苷酸、spiegelmers、LNA或PNA寡聚物、或其組合。如本文使用的推定的抗炎化合物也描述為“IL-33藥物候選物”或“候選化合物”。附圖簡述圖la:IL-33的靶向突變的示意圖。將DsRed盒插在起始密碼子處且在氨基酸位置68上與IL-33融合。

圖1b:靶向策略。RFP:紅色熒光蛋白質(zhì)；tml:靶向突變I ;wt:野生型；標(biāo)記:標(biāo)記X (Roche) ；kb:1千堿基對；EcoR1:限制性核酸內(nèi)切酶位點；NeoR:新霉素選擇盒；三角形:1x位點。 圖2:雜合DsRedIL-33/COOH敲入小鼠的表型。生長遲緩，毛發(fā)豎立。圖3:雜合DsRedIL-33/COOH敲入小鼠的表型。器官形態(tài)。圖4:雜合DsRedIL-33/COOH敲入小鼠的表型。與野生型小鼠相比較的器官形態(tài)。S1:小腸；He:心臟；Th:胸腺；Ki 腎；Lu:肺；Sp:脾；L1:肝。Co*:在胸腔中的血凝塊。圖5:雜合DsRedIL-33/COOH敲入小鼠的表型?；啬c(ileon)肥大。腸制備物縱向打開。圖6:經(jīng)由 FACS 分析的雜合 DsRedIL-33/COOH 敲入小鼠(DsRedIL-33/COOH-KI)的表型。用對于限定的表面標(biāo)記具有特異性的抗體染色所示器官的細(xì)胞懸液:CD45 (標(biāo)記的APC-Cy7)，總白細(xì)胞；CDllb (標(biāo)記的別藻藍(lán)蛋白，APC)，巨噬細(xì)胞；SiglecF (標(biāo)記的藻紅蛋白PE)，嗜酸性粒細(xì)胞；Grl (標(biāo)記的PE-Cy7)，粒細(xì)胞；F4/80 (標(biāo)記的Alexa488)，單核細(xì)胞。使用FACS Canto I裝置(BD Corp.)獲得染色的細(xì)胞且用FlowJo軟件分析。Y軸:SiglecF，X軸:F4/80。圖顯示不同細(xì)胞群體的疊加的染色，DsRedIL-33/C00H敲入小鼠具有嗜酸性粒細(xì)胞的增加，這通過SiglecF和F4/80的高表達(dá)而確定(參見標(biāo)記的群體，“Eos”=嗜酸性粒細(xì)胞)。圖7:雜合DsRedIL-33/COOH敲入小鼠的表型。血清IL-33水平。本發(fā)明現(xiàn)在通過實施例更詳細(xì)地描述，這些實施例不應(yīng)解釋為限制本發(fā)明的范圍。實施例實施例1:靶向載體的生成:祀向載體(SEQID.N0.2)使用 Gene Bridges GmbH, Heidelberg 提供的重組工程技術(shù)生成。它含有下述元件:1-70IL-33 外顯子 Ib71-3871 內(nèi)含子3872-3882 IL-33 外顯子 23883-4557 dsRed 單體 CDS4558-4579 IL-33 外顯子 34580-4590 內(nèi)含子序列4591-4626 1x 位點4625-6040新霉素選擇盒6041-6074 1x 位點6075-6571 內(nèi)含子序列6572-6682 IL-33 外顯子 46683-7285 內(nèi)含子7286-7603 pBluescript SKII+7604-8463 白喉(diphteria)毒素 a 選擇盒8464-10697 pBluescript SKII+靶向載體用于BALB/c ES細(xì)胞中的同源重組。使用PCR篩選策略(寡核苷酸的序列參見下文)，鑒定陽性克隆。在Cre表達(dá)質(zhì)粒電穿孔后，位點特異性重組導(dǎo)致在體外新霉素選擇盒的去除。在ES細(xì)胞克隆的胚泡注射后，培育嵌合動物，并且使用Fl和F2代的活檢組織的DNA制備物，使用PCR，證實靶向突變的身份以及基因分型(圖1b中的PCR AB,CD,EF 和 EFG) 。
寡核苷酸寡核苷酸A:TAG AAA GAG CCC AGT GTT AAG C (SEQ ID.N0.3)寡核苷酸B:GGC TTG CCC TCG CCC TCG (SEQ ID.N0.4)寡核苷酸C:CAC CTG CGA CTT CAA GAC C (SEQ ID.N0.5)寡核苷酸D:ACG ATT CCT TAG TGA TGG GGC (SEQ ID.N0.6)寡核苷酸E:GTT GCT TCT GAT GAC TTC AGG (SEQ ID.N0.7)寡核苷酸F:GCA ATA GCC CTT GCC AAG GC (SEQ ID.N0.8)寡核苷酸G:TGC TGT TCC AGC CTC TGT TGG (SEQ ID.N0.9)實施例2:N端IL-33敲除小鼠的生成生成在Balb/c背景中的兩個遺傳修飾的敲入小鼠模型。第一個突變體通過用熒光色素DsRd-單體進(jìn)行讀框內(nèi)置換(DsRed-1L33/C00H)，靶向N端細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子樣活性，而保持功能細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域完整(圖1)。第二個突變體通過在讀框內(nèi)敲入熒光色素DsRd，替換促炎細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域，而保持DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域完整(NH2/L33-DsRed)。實施例3:N端IL-33敲除小鼠的表征
出乎意料地，失去IL-33N端結(jié)構(gòu)域但維持細(xì)胞質(zhì)中的促炎細(xì)胞因子活性的遺傳改造的雜合突變型小鼠(DsRed-1L33/C00H)在約4月齡時死亡。它們在出生時看起來正常，在后來的4 - 5個月間病得越來越厲害并最后瀕臨死亡，具有估計約60%的表型滲透(phenotype penetration)。在3_4月齡時,這些突變體開始展示出耳中出血性損害和膨大的腹部。在尸檢時，重復(fù)觀察到大量脾腫大、回腸肥大(提示腸炎癥)、在胸腔中大凝塊的存在、和腎萎縮(圖2-5)。在FACS分析中對不同器官的更近檢查顯示，肺、脾、淋巴結(jié)、Payer斑和外周血中強(qiáng)的嗜酸性粒細(xì)胞增多(圖6)。血清IL-33水平在DsRed-1L33/C00H敲除小鼠中是升高的(圖7)。討論我們近來已發(fā)現(xiàn)，IL-33的鼻內(nèi)施用引起顯著肺炎癥，間質(zhì)中具有巨噬細(xì)胞起源的多核巨細(xì)胞(Hicks等人，備稿中)。通過組織病理學(xué)顯示，以相同方式，IL-33也引發(fā)骨髓增生伴隨大簇的髓樣細(xì)胞/粒細(xì)胞(Hicks等人，備稿中)。另外，在這些小鼠的外周血的血漿中發(fā)現(xiàn)高水平的可溶性IL-33，強(qiáng)烈暗示:在我們的DsRed-1L33/C00H突變動物中見到的免疫病理學(xué)效應(yīng)是完全活性的DsRed-1L33/C00H細(xì)胞因子在細(xì)胞質(zhì)中的連續(xù)存在及其向細(xì)胞外區(qū)室的可能釋放的結(jié)果，從而如已假設(shè)的那樣，作為有效的內(nèi)源DAMP信號起作用。敲除IL-33的N端的這種“警報素”樣作用因此類似于人免疫病理學(xué)狀況(其診斷仍是未知的)，在組織損傷、壞死或自身免疫后釋放強(qiáng)危險信號。因為在具有編碼IL-1RA的基因的純合突變或缺失的患者中嚴(yán)重的多器官炎癥的出現(xiàn)及其被mAbs的阻斷已證實IL-1a和IL-P在許多自身炎性疾病中的關(guān)鍵作用(Weber等人，Science signaling，3，2010)。IL-33的可能遺傳變異可能導(dǎo)致該可能的“危險”分子的過表達(dá)和/或分泌，并且它可以促成自身炎性或變應(yīng)性疾病的發(fā)病。準(zhǔn)確地，近來已顯示，在IL-33基因的多態(tài)性和較高的IL-33水平與日本雪松花粉病的易感性之間存在正相關(guān)(Sakashita等人Clin.Exp.Allergy Dec2008)。
權(quán)利要求
1.一種具有IL-33基因的N端缺失的非人動物。
2.權(quán)利要求1的非人動物，其中位于所述IL-33基因的N端的整個DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域是缺失的。
3.權(quán)利要求1或2的非人動物，其中所述非人動物是哺乳動物。
4.權(quán)利要求3的非人動物，其中所述非人動物是嚙齒類動物。
5.權(quán)利要求4的非人動物，其中所述非人動物是小鼠，并且其中所述IL-33基因的N端缺失包含所述IL-33基因的表達(dá)產(chǎn)物的氨基酸1-67的缺失。
6.權(quán)利要求1-5的非人動物的后代，其通過與相同或另一個基因型的動物繁育而獲得。
7.一種細(xì)胞系或原代細(xì)胞培養(yǎng)物，其源自權(quán)利要求1-5的非人動物或權(quán)利要求6的后代。
8.—種組織或器官外植塊或其培養(yǎng)物，其源自權(quán)利要求1-5的非人動物或權(quán)利要求6的后代。
9.權(quán)利要求1- 5中任一項的非人動物、權(quán)利要求6的后代、權(quán)利要求7的細(xì)胞系或原代細(xì)胞培養(yǎng)物、或權(quán)利要求8的組織或器官外植塊作為炎性疾病的模型的用途。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的炎性疾病的模型的用途，用于篩選抗炎化合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的炎性疾病的模型的用途，用于評估抗炎化合物的藥理學(xué)效應(yīng)。
12.—種用于篩選抗炎化合物的方法，其包括給權(quán)利要求1 - 5中任一項的非人動物或權(quán)利要求6的后代施用候選化合物。
13.一種用于評估抗炎化合物的藥理學(xué)效應(yīng)的方法，其包括給權(quán)利要求1 - 5中任一項的非人動物或權(quán)利要求6的后代施用所述抗炎化合物。
14.基本上如本文描述的非人動物、 用途和方法。
全文摘要
本發(fā)明涉及在IL-33基因的N端結(jié)構(gòu)域中具有缺陷的非人動物。本發(fā)明還提供所述非人動物作為炎性疾病的體內(nèi)模型的用途，尤其是與篩選抗炎化合物的方法相關(guān)，和用于評估和優(yōu)化給定的抗炎化合物的藥理學(xué)性質(zhì)的方法。
文檔編號C12N15/85GK103179851SQ201180051772
公開日2013年6月26日 申請日期2011年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月29日
發(fā)明者J·科特-斯?fàn)柪? A·伊格萊希亞斯, C·A·邁爾 申請人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司