專利名稱：一種用于藥物研究的小鼠模型的構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種小鼠模型的構(gòu)建方法，特別涉及一種用于藥物研究的小鼠模型的構(gòu)建方法，本發(fā)明尤其適用于帶有放射性標(biāo)記藥物研究的小鼠模型的構(gòu)建。
背景技術(shù)：
在現(xiàn)代的各種基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中，為了觀察藥物、新的化合物等的藥效毒理或在疾病發(fā)生的病因、病機(jī)以及病理的研究中，為了觀察動(dòng)物機(jī)體功能、代謝及形態(tài)的變化，通常都需要對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用一定的給藥方式，而目前使用最多的是對(duì)小鼠進(jìn)行注射的方法，常見的有小鼠腹腔注射、小鼠靜脈注射、皮下注射給藥、皮內(nèi)注射給藥、肌肉注射給藥等。其中，腹腔注射是常見的給藥方式，尤其是在麻醉時(shí)，其優(yōu)點(diǎn)是操作簡單，但藥物吸收較慢，易流失；皮下注射給藥、皮內(nèi)注射給藥藥物吸收速度相對(duì)腹腔注射慢，且注射時(shí)容易導(dǎo)致藥物外漏；小鼠血管內(nèi)藥物注射通常通過靜脈進(jìn)行，小鼠尾靜脈注射是靜脈注射經(jīng)常使用的一種手段，但尾靜脈較細(xì)，注射藥物往往會(huì)由于操作的原因不能進(jìn)入血管或從其中溢出，造成環(huán)境的污染，因此該方法對(duì)于操作者的技能程度、熟練程度均要求較高，操作繁瑣，而且尾靜脈屬末梢循環(huán)，循環(huán)較慢，藥物注射入動(dòng)物體內(nèi)后分散時(shí)間也較慢，不利于藥物的擴(kuò)散； 肌肉注射給藥的方法，由于小鼠體積小，肌肉較少，因此并不適于對(duì)小鼠的注射。另外，為了便于對(duì)藥效、毒理或病理的研究，觀察藥物作用的靶點(diǎn)，經(jīng)常采用放射性同位素對(duì)藥物進(jìn)行標(biāo)記后，再用于小鼠的注射。由于采用了放射性標(biāo)記的藥物，對(duì)于操作者來說，迫切需要找到一種方法，該方法操作簡便容易，藥物吸收快，且可有效防止藥物的外露，避免對(duì)操作者造成危害。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述技術(shù)問題，發(fā)明人在積累了大量的經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上，并結(jié)合創(chuàng)造性勞動(dòng)， 提出了一種用于藥物研究的小鼠模型的構(gòu)建方法，本發(fā)明的一種用于藥物研究的小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，在小鼠麻醉狀態(tài)下，采用小鼠體內(nèi)的下腔靜脈作為給藥部位， 30-60分鐘后，將小鼠斷頸處死，取得小鼠各組織器官稱重后，進(jìn)行藥物含量的檢測。具體的包括以下步驟(1)使用麻醉劑將小鼠麻醉；(2)將麻醉好的小鼠固定，沿小鼠腹中線，腹部下剪開表皮0. 5-0. 7公分的開口并向下剪開腹壁；(3)拉開切口并輕輕的將腹腔內(nèi)的腸道撥向兩側(cè)，暴露出脊柱及脊柱旁的下腔靜脈；(4)將所需注射的藥物吸入注射器中，用針頭刺破下腔靜脈緩慢將藥物注射進(jìn)入下腔靜脈中；(5) 30-60分鐘后，將小鼠斷頸處死，取得小鼠各組織器官稱重后，進(jìn)行藥物含量的檢測。
其中，優(yōu)選的，在步驟(1)中采用腹腔注射的方法注射0. 戊巴比妥鈉0. 1毫升， 20分鐘后將小鼠麻醉；其中，優(yōu)選的，在步驟O)中沿小鼠腹中線，于腹部下1/3處剪開表皮；其中，優(yōu)選的，在步驟O)中剪開表皮0.6公分的開口 ；其中，優(yōu)選的，在步驟中每只小鼠注射藥物總量不超過0. 2毫升；其中，優(yōu)選的，在步驟中所述的藥物可為放射性標(biāo)記的藥物；使用本發(fā)明方法進(jìn)行注射40分鐘后，注射藥物便會(huì)分散至小鼠全身或要檢測的靶位點(diǎn)。按照以上所述的構(gòu)建方法得到的小鼠模型在藥物研究中的應(yīng)用。相較于現(xiàn)有方法，本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢有1、小鼠血管內(nèi)藥物注射通常通過尾靜脈進(jìn)行。但尾靜脈較細(xì)，難于操作，本發(fā)明方法采用小鼠腔靜脈進(jìn)行注射，相比尾靜脈注射，血管相對(duì)較粗，對(duì)操作者的操作技能要求相對(duì)降低，更容易將藥物注射入小鼠的體內(nèi)；2、小鼠尾靜脈注射需要對(duì)小鼠尾部反復(fù)揉搓或者用溫水浸泡使血管充盈，這樣不可避免的對(duì)小鼠造成應(yīng)激性刺激。本發(fā)明方法藥物注射在小鼠麻醉狀態(tài)下進(jìn)行，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物刺激小，能夠避免對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的應(yīng)激性刺激，以便于得到穩(wěn)定的結(jié)果；3、小鼠下腔靜脈血管較粗血流量較大，藥物注入后能夠更快的分布于全身各個(gè)臟器。傳統(tǒng)的尾靜脈注射末梢循環(huán)較慢，藥物注射入動(dòng)物體內(nèi)后分散時(shí)間也較慢；4、放射性藥物往往具有污染性，小鼠麻醉后下腔靜脈注射能夠保證藥物全部進(jìn)入血液，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)分布造成的環(huán)境污染小。傳統(tǒng)的尾靜脈注射由于血管較細(xì)，注射藥物往往會(huì)由于操作的原因不能進(jìn)入血管或從其中溢出，造成環(huán)境的污染。本發(fā)明通過采用上述方法向小鼠體內(nèi)注射氚標(biāo)記脫氧葡萄糖 [3H]-2-DeOXy-glUCOSe，進(jìn)一步說明了本發(fā)明方法的可行性，以及注射效果。氚標(biāo)記脫氧葡萄糖[3H]-2-DeOXy-gluCOSe，即應(yīng)用氚替代了脫氧葡萄糖2位點(diǎn)上的氫原子，從而使葡萄糖帶上標(biāo)記，在組織攝取葡萄糖合成糖原后氚標(biāo)記的葡萄糖就會(huì)留存于組織細(xì)胞當(dāng)中，分離細(xì)胞中的氚標(biāo)記物，并通過液體閃爍儀即可以檢測放射性物質(zhì)在單位組織中的含量。具體實(shí)施方法下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明，應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例僅用于例證的目的，決不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)材料試驗(yàn)用小鼠品系為ICR品系雌性小鼠，購自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；試驗(yàn)用戊巴比妥鈉為美國SIGMA公司產(chǎn)品，商品名PENTOBARBITAL SODIUM，貨號(hào) Cat. No. P3761，哈爾濱同城生物試劑公司協(xié)助購買；胰島素為生物合成胰島素注射液諾和靈R，購自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院；BD注射器由美國BD公司生產(chǎn)，是一種專門用于胰島素注射的注射器。BD胰島素注射器的特點(diǎn)1.針頭特別幼細(xì)；注射無痛，皮膚損傷小 2.直接讀數(shù)，刻度準(zhǔn)確；避免換算，劑量準(zhǔn)確3.固定針頭，沒有死腔，哈爾濱同城生物試劑公司協(xié)助購買；氚標(biāo)記脫氧葡萄糖由PerKin Elmer公司生產(chǎn)的1450型液體閃爍計(jì)數(shù)器進(jìn)行測定，貨號(hào)是NET 328A001MC,中國同位素公司協(xié)助購買。
構(gòu)建方法小鼠腹腔注射0. 戊巴比妥鈉0. 1毫升，20分鐘后動(dòng)物麻醉。將麻醉好的小鼠固定于操作臺(tái)上。用眼科剪刀，沿小鼠腹中線，腹部下1/3處剪開表皮約0.6公分開口并向下剪開腹壁。用解剖鑷?yán)_切口并輕輕的將腹腔內(nèi)的腸道撥向兩側(cè)，暴露出脊柱及脊柱旁的下腔靜脈。將15uCi氚標(biāo)記脫氧葡萄糖([3H]-2-DeOXy-glUCOSe)約15微升， 2IU胰島素體積50微升，兩種藥物混合后加生理鹽水稀釋至100微升，用BD注射器針頭刺破下腔靜脈緩慢將藥物注射進(jìn)入下腔靜脈中。40分鐘后，將小鼠斷頸處死，取得小鼠各組織器官稱重后，進(jìn)行放射性標(biāo)記物含量的檢測。各組織器官葡萄糖攝取量檢測結(jié)果，如表1所示，DPMI值為放射性葡萄糖檢測值， 其余為儀器數(shù)據(jù)。檢測結(jié)果說明，放射性葡萄糖注射后在不同小鼠的各個(gè)組織器官中都能夠檢測到，說明此構(gòu)建方法可行。表1小鼠各個(gè)器官組織的放射性葡萄糖檢測值
權(quán)利要求
1.一種用于藥物研究的小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，在小鼠麻醉狀態(tài)下，采用小鼠的下腔靜脈作為給藥部位，30-60分鐘后，將小鼠斷頸處死，取得小鼠各組織器官稱重后， 進(jìn)行藥物含量的檢測。
2.按照權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，具體的包括以下步驟(1)使用麻醉劑將小鼠麻醉；(2)將麻醉好的小鼠固定，沿小鼠腹中線，腹部下剪開表皮0.5-0. 7公分的開口并向下剪開腹壁；(3)拉開切口并輕輕的將腹腔內(nèi)的腸道撥向兩側(cè)，暴露出脊柱及脊柱旁的下腔靜脈；(4)將所需注射的藥物吸入注射器中，用針頭刺破下腔靜脈緩慢將藥物注射進(jìn)入下腔靜脈中；(5)30-60分鐘后，將小鼠斷頸處死，取得小鼠各組織器官稱重后，進(jìn)行藥物含量的檢測。
3.按照權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于步驟(1)中采用腹腔注射的方法注射0. 戊巴比妥鈉0. 1毫升，20分鐘后將小鼠麻醉。
4.按照權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于步驟O)中沿小鼠腹中線，于腹部下 1/3處剪開表皮。
5.按照權(quán)利要求2或4所述的構(gòu)建方法，其特征在于步驟O)中剪開表皮0.6公分的開口。
6.按照權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于步驟中每只小鼠注射藥物總量不超過0.2毫升。
7.按照權(quán)利要求2或6所述的構(gòu)建方法，其特征在于步驟(4)所述的藥物為放射性標(biāo)記的藥物。
8.按照權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于40分鐘后，將小鼠斷頸處死，取得小鼠各組織器官稱重后，進(jìn)行藥物含量的檢測。
9.按照1-9任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的構(gòu)建方法得到的小鼠模型在藥物研究中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于藥物研究的小鼠模型的構(gòu)建方法，本發(fā)明尤其適用于帶有放射性標(biāo)記藥物研究的小鼠模型的構(gòu)建。本發(fā)明的構(gòu)建方法，其特征在于，在小鼠麻醉狀態(tài)下，采用小鼠下腔靜脈作為給藥部位。本發(fā)明的方法具有操作簡便容易，藥物吸收快，可有效防止藥物外露等優(yōu)點(diǎn)，且給藥30min-60min后，藥物便會(huì)分散至小鼠全身或要檢測的靶位點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N23/00GK102346155SQ20111019745
公開日2012年2月8日 申請(qǐng)日期2011年7月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月14日
發(fā)明者吳效科, 李威 申請(qǐng)人:吳效科